KAREN MARTINS LEO

TCNICAS DE INSEMINAO ARTIFICIAL

BOTUCATU 2003

KAREN MARTINS LEO

TCNICAS DE INSEMINAO ARTIFICIAL

Monografia realizada durante a disciplina Seminrios II do Programa de Ps-

graduao em Medicina Veterinria, rea de concentrao em Reproduo Animal da Faculdade de Medicina Veterinria e Zootecnia da Universidade Estadual

Paulista (UNESP), Campus de Botucatu.

Responsveis pela disciplina: Profa. Adj. Dra. Maria Denise Lopes Prof. Adj. Dr. Sony Dimas Bicudo

BOTUCATU 2003

LISTA DE ABREVIATURAS

HCG gonadotrofina corinica humana mL mililitros (s) L microlitro (s) eCG gonadotrofina corinica eqina GnRH hormnio liberador de gonadotrofinas PGF2 - prostaglandina F 2 alfa CIDR Controlled internal drug release dispenser mg miligrama (s) JUT juno tero tubrica ng nanograma (s) IAIV inseminao artificial intravaginal IAIU inseminao artificial intrauterina

SUMRIO

1. Introduo........................................................................................................4 2. Reviso de Literatura.......................................................................................5 2.1 Inseminao Artificial em Eqinos.................................................................7 2.2 Inseminao Artificial em Bovinos...............................................................10 2.3 Inseminao Artificial em Bubalinos............................................................12 2.4 Inseminao Artificial em Ovinos.................................................................14 2.5 Inseminao Artificial em Caprinos..............................................................17 2.6 Inseminao Artificial em Sunos.................................................................18 2.7 Inseminao Artificial em Felinos ................................................................21 2.8 Inseminao Artificial em Caninos................................................................23 3. Consideraes Finais......................................................................................26 4. Referncias Bibliogrficas...............................................................................26

1. INTRODUO

A inseminao artificial a biotcnica da reproduo mais importante e mais utilizada para o melhoramento gentico das espcies, devido a poucos machos selecionados produzirem espermatozides para a inseminao de centenas de fmeas por ano. Em contraste, poucos produtos podem ser obtidos de cada fmeas por ano, mesmo com o advento de novas biotcnicas como a transferncia de embries e fertilizao in vitro (AX et al., 2000). O primeiro cientista a investigar e realizar inseminao artificial em mamferos foi Lazzaro Spallanzani em 1780, que inseminou uma cadela, da qual nasceram trs filhotes vivos e normais. Alguns anos depois, cientistas russos demonstraram que a fecundao era possvel mesmo quando o plasma seminal era substitudo por um meio artificial antes da inseminao (MIES FILHO, 1987). O uso da inseminao artificial acelera o melhoramento gentico, viabiliza a obteno de produtos de reprodutores alojados em outros pases ou at mesmo que j morreram, evita a transmisso de doenas venreas, facilita a realizao de testes de prognie alm de possibilitar que machos subfrteis produzam filhos. Entretanto, para que se obtenha sucesso em programas de inseminao artificial, so necessrios alguns cuidados como a utilizao de machos de boa qualidade, um bom controle sanitrio e mo de obra especializada (MIES FILHO, 1987). Em bovinos e eqinos a inseminao artificial amplamente utilizada e a aplicao desta biotcnica vem crescendo em diversas espcies como sunos, ovinos, caprinos, bubalinos e at mesmo caninos, apresentando resultados satisfatrios. Quando utilizada em animais de produo, a inseminao artificial tem como objetivo o aumento da produtividade por conseqncia do melhoramento gentico, mas a inseminao tambm pode ser utilizada objetivando a obteno de DESCENDENTES de animais com incapacidade de realizar cobertura e/ ou com problemas de subfertilidade, como ocorre em humanos e animais de estimao. Nas espcies que se tem o domnio da tcnica de inseminao artificial, como nos bovinos, ela amplamente utilizada e apresenta BONS resultados. Entretanto, na maioria das outras espcies muito ainda tem que ser estudado para se conseguir

melhores

resultados,

viabilizando

assim

implantao

de

programas

de

inseminao artificial. 2. REVISO DE LITERATURA

Diferente das fmeas, que liberam poucos ou um ocito a cada ciclo estral, os machos liberam milhes de espermatozides a cada cpula. O tempo de sobrevivncia, tanto do ocito quanto dos espermatozides, relativamente curto e a fertilizao depende primariamente de um transporte sincronizado de gametas no trato reprodutivo feminino (AX et al., 2000). Com a monta natural ou inseminao artificial, os espermatozides tem que migrarem pelo tero at o oviduto, local onde ocorre a fertilizao e devido a este fato, importante que o smen apresente boa motilidade, principalmente para passarem pela crvix e juno tero-tubrica (HUNTER, 1999). Em ovelhas e vacas cobertas durante o estro, so necessrias de seis a oito horas para que uma quantidade suficiente de espermatozides alcancem o oviduto uterina e de dez a doze horas para penetrarem na tuba uterina, sendo que nas ovelhas a passagem dos espermatozides para o interior da tuba mais rpida quando a monta realizada prximo ao momento da ovulao (HUNTER & WILMUT, 1982). Em eqinos, o transporte espermtico completo quatro horas aps a inseminao (BRINSKO et al., 1991). Os espermatozides penetram na

tuba uterina de porcas entre 15 e 30 minutos aps a inseminao ou monta natural e aps uma hora, uma quantidade de espermatozides suficiente para fertilizar 90% dos ocitos j penetraram na tuba (HUNTER, 1984). Foi demonstrado que a habilidade dos espermatozides, provenientes de smen congelado, de atingirem o oviduto, particularmente a regio da ampola, menor do que de smen fresco e esta dificuldade no transporte espermtico do smen congelado, pode ser devido alteraes bioqumicas e fsicas na clula espermtica (BARDER, 1982). Scott et al. (1995) observaram uma diferena no transporte espermtico entre animais frteis e subfrteis, mostrando que o transporte e sobrevivncia dos

espermatozides no trato reprodutivo feminino melhor quando se utiliza smen de garanhes frteis do que subfrteis e quando se trabalha com guas sem problemas reprodutivos. Vrios fatores contribuem para um perfeito transporte espermtico, incluindo a contrao uterina que ocorre no momento da cobertura ou inseminao, devido presena de prostaglandina no smen e a liberao de ocitocina pela hipfise (HUNTER, 1999). Ao atingirem o oviduto, os espermatozides interagem com as clulas epiteliais, formando um reservatrio de gametas funcionais na poro caudal do stimo, onde os espermatozides que se aderiram ao oviduto reduzem seu metabolismo e mantm a motilidade e capacidade fertilizante por um tempo mais prolongado (POLLARD et al., 1991). Hunter et al. (1991) avaliaram a morfologia dos espermatozides presentes no stimo, por microscopia eletrnica, e no foi encontrada nenhuma clula com anormalidade morfolgica, indicando que ocorre uma seleo de espermatozides no trato reprodutivo feminino. O momento da ativao e liberao dos espermatozides ocorre pouco tempo antes da ovulao e esta importante transferncia de informaes entre o folculo pr ovulatrio e o tecido do stimo ocorre devido a um mecanismo de contra corrente vascular do pedculo ovariano (STEFANCZYK -KRZYMOWSKA et al., 1994). Existe entre as espcies uma diferena no local de deposio do smen no trato reprodutivo feminino durante a monta natural. Em ovelhas e vacas o pequeno volume de smen ejaculado na poro cranial da vagina e em eqinos e sunos, que o ejaculado possui um grande volume, a ejaculao intra-uterina (AX et al., 2000). O local de deposio do smen no momento da inseminao artificial um fator bastante estudado em todas as espcies, pois de suma importncia para obteno de bons resultados de fertilidade. Algumas tcnicas de inseminao ultrapassam etapas do transporte espermtico pelo tero (GINTHER, 1992).

2.1 INSEMINAO ARTIFICIAL EM EQINOS

A maioria das associaes de criadores, permitem a utilizao da inseminao artificial, para aplicao de smen fresco e refrigerado. Entretanto, algumas destas associaes no permitem a aplicao de smen congelado (SQUIRES et al., 1999). Para deteco das guas em cio necessrio a rufiao e quando no possvel executar esta prtica, faz-se necessrio a realizao de uma avaliao ginecolgica por palpao retal para identificar a presena ou no de folculos e a consistncia do tero, a fim de determinar em que fase do ciclo estral se encontra o animal (BRISKO & VARNER, 1992). O cio da gua dura de 5 a 7 dias e a ovulao ocorre no final deste perodo, sendo que a inseminao deve ser realizada o mais prximo possvel da ovulao (MIES, 1987). O ideal que se faa controle folicular com acompanhamento ultrasonogrfico em programas de inseminao de eqinos, a fim de prever a ovulao e decidir o melhor momento para inseminao, limitando assim o nmero de inseminaes (BRISKO & VARNER, 1992). A inseminao convencional em guas por via vaginal, na qual a mo enluvada do inseminador, guia uma pipeta at a passagem da crvix e o smen depositado no corpo do tero (MIES, 1997). As inseminaes com smen fresco e refrigerado, so bastante difundidas e a maioria dos criatrios de eqinos utiliza destas tcnicas, obtendo resultados satisfatrios. Entretanto, a utilizao do smen congelado ainda restrita, pois alm de exigir um melhor controle do momento da ovulao, os resultados so inferiores aos obtidos com smen fresco e refrigerado (SQUIRES et al., 1999). Quando se utiliza smen fresco de garanhes sem problemas reprodutivos, as inseminaes podem ser realizadas a cada 48 horas, at a deteco da ovulao com 250 a 500x106 espermatozides viveis, sendo os resultados semelhantes aos obtidos com a monta natural (BRISKO & VARNER, 1992). Sabe-se que o momento de se realizar as inseminaes com smen refrigerado, mais crtico do que com smen fresco. Os melhores resultados com

smen refrigerado so obtidos quando as inseminaes so realizadas em um intervalo de zero a 24 horas antes da ovulao, com 500 milhes a um bilho de espermatozides. As taxas de concepo para os garanhes que possuem boa qualidade de smen aps 24 horas de refrigerao, aproximadamente 10% menor do que as taxas obtidas com smen o fresco (SQUIRES et al., 1999). A porcentagem de prenhez com a utilizao do smen congelado baixa e bastante variada, sendo que esta variao se deve: a diferentes protocolos de congelao; efeito do garanho; diferena na fertilidade das guas e diferentes protocolos de inseminao (BRISKO & VARNER, 1992). J foi demonstrado que o smen congelado eqino no tem a mesma habilidade de interagir-se com as clulas epiteliais do oviduto do que o smen fresco, mantendo assim, sua viabilidade por um menor tempo (SCOTT, 2000). Indica-se que a inseminao com smen congelado, seja realizada de zero a 24 horas antes da ovulao, ou at 6 horas aps (SQUIRES et al., 1999) Para determinar o momento que ocorrer a ovulao, pode-se induzir a ovulao com a aplicao de hormnios, sendo o hCG o mais indicado. Com a aplicao de 2500 UI de hCG, aproximadamente 80% das guas ovulam de 36 a 48 horas aps a induo (BRISTOL, 1992). Com o objetivo de melhorar os ndices de fertilidade de indivduos subfrteis, maximizar o aproveitamento de animais frteis de alto potencial e conseguir melhores resultados com a aplicao do smen congelado, alguns autores tm estudado a possibilidade do uso da inseminao histeroscpica em eqinos, na qual faz-se a deposio do smen sobre a juno tero-tubrica com auxlio de um endoscpio. Morris et al. (2000a) obtiveram um ndice de prenhez de 60%, inseminando 15 guas com 10x106 espermatozides provenientes de smen fresco, os quais foram depositados sobre a papila tubrica com auxlio de um endoscpio. Vazquez et al. (1998), empregando tcnica similar, utilizando aproximadamente 3,8 x 106 espermatozides com motilidade progressiva, obtiveram 30% de prenhez. Buchanan et al. (2000) compararam as taxas de prenhez de grupos de guas inseminadas com 500x106 espermatozides em 20 mL no corpo do tero, 25x106 em 1,0 mL, 5x106 em 1,0 mL e 5x106 em 0,2 mL depositados na ponta do corno por

desvio da pipeta. Os resultados foram respectivamente de 90%, 57%, 30% e 40%, concluindo que a deposio de smen no corno uterino, pode maximizar a fertilidade quando utiliza-se um baixo nmero de espermatozides em um pequeno volume. Papa & DellAqua Jnior (2001) avaliaram o efeito do local de deposio do smen e a concentrao da dose inseminante e obtiveram 20% de prenhez com a deposio de 50x106 espermatozides pr ovulao no corpo do tero e nenhuma prenhez com a deposio do mesmo nmero de gametas na extremidade do corno. Com a deposio de 150x106 espermatozides pr e 150x106 ps ovulao obtiveram 40% de prenhez quando o smen foi depositado no corpo do tero e 50% quando o smen foi depositado na extremidade do corno, no sendo observada diferena estatstica entre os grupos com diferentes locais de deposio do smen. Manning et al. (1998) utilizando a tcnica de histeroscopia na tentativa de canulao do oviduto de guas para deposio do smen no interior da tuba uterina, obtiveram 33% de fertilidade inseminando com 1x106 espermatozides. Squires et al. (2000) avaliaram o local de deposio do smen e o nmero de espermatozides utilizados e observaram que a inseminao histeroscpica resultou em uma maior taxa de prenhez com a aplicao de 5x106 de espermatozides com motilidade progressiva (50%), do que com o desvio da pipeta para a extremidade do corno uterino (30%). Morris et al. (2000a) desenvolveram um experimento objetivando avaliar o ndice de fertilidade de guas inseminadas com baixo nmero de espermatozides sobre a papila tubrica, por histeroscopia. O smen era coletado 4 horas antes da inseminao, diludo e centrifugado em Percoll (45 e 90%) a 200g por 5 minutos. As guas nos grupos 1, 2, 3, 4, 5 e 6 foram inseminadas uma vez com respectivamente 10x106, 1x106, 0,5x106, 0,1x106, 0,001x106 espermatozides mveis selecionados em Percoll. As taxas de prenhez foram respectivamente de 60%, 75%, 64%, 29%, 22% e 10%, concluindo que a inseminao de guas com um nmero reduzido de espermatozides selecionados em Percoll, pode resultar em altas taxas de fertilidade, e observaram que so necessrios pelo menos 1x106 clulas para se obter uma taxa de concepo adequada. Visando comparar os resultados obtidos atravs da inseminao convencional

e histeroscpica, utilizando um baixo nmero de espermatozides, oriundos de smen fresco, Leo et al. (2002) desenvolveram um experimento onde os animais foram inseminados com 10x106 espermatozides mveis sobre a juno terotubrica, 10x106 espermatozides mveis no corpo do tero e 400x106

espermatozides mveis no corpo do tero e as taxas de prenhez foram de 41,67%, 16,67% e 50% respectivamente, mostrando que a inseminao histeroscpica proporciona bons resultados, mesmo utilizando apenas 2,5% da dose convencional. A taxa de concepo ao primeiro ciclo de guas inseminadas com smen congelado de 30 a 60%, quando se faz avaliaes ultrasonogrficas para controle do desenvolvimento folicular freqentemente e a inseminao realizada com um mnimo de 200x106 espermatozides mveis, com no mximo 6 horas da ovulao (Squires et al., 2000). Morris et al. (2000b) inseminaram guas por histeroscopia com baixo nmero de espermatozides provenientes de smen congelado, sendo a inseminao realizada por tempo fixo aps a aplicao de hCG. A aplicao de hCG era realizada nas guas que apresentavam folculos maiores que 35 mm de dimetro e fazia-se a inseminao entre 32 e 34 horas aps a aplicao de hCG com 25x106 de espermatozides mveis provenientes do ejaculado em 500 l, 5x106 espermatozides do ejaculado em 100 l, 300x106 espermatozides provenientes do epiddimo em 500 l e 5x106 espermatozides do epiddimo em 100 l. As taxas de prenhez foram respectivamente de 64%, 79%, 16% e 0%, concluindo que a inseminao histeroscpica com a deposio de 1% da dose convencional para smen congelado proveniente do ejaculado de garanhes eficiente.

2.2 INSEMINAO ARTIFICIAL EM BOVINOS

A indstria da inseminao artificial em bovinos existe a mais de 50 anos e utilizada na maioria dos pases, apresentando resultados satisfatrios. Um dos fatores que se deve a grande utilizao desta tcnica em bovinos, o bom resultado obtido com o smen congelado e facilidade de aplicao desta tcnica (THIBIER & GUERIN, 2000).

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A observao adequada do estro de suma importncia para se obter boas taxas de concepo em programas de inseminao, que no utilizam de protocolos de inseminao por tempo fixo, que realizado com a aplicao de hormnios para induo da ovulao (AX et al., 2000). A ovulao nos bovinos ocorre aproximadamente 30 horas aps o incio do cio, 24 horas aps o pico pr-ovulatrio de LH e 12 horas aps o final do estro. Uma vez que a inseminao artificial objetiva a fertilizao do ocito, essencial que ela deva ser realizada de maneira a melhor favorecer o seu encontro com os espermatozides. Um mtodo prtico de alcanar o melhor perodo de se realizar a inseminao, que a partir da metade final do estro, utilizando o esquema de Triemberger, no qual as fmeas que foram observadas em estro pela manh so inseminadas tarde e as fmeas que foram observadas em estro tarde so inseminadas na manh do dia seguinte (MIES FILHO, 1987). A tcnica de inseminao retrovaginal, na qual uma das mos do inseminador conduz uma pipeta que contm uma palheta de smen, que introduzida na vagina e com a outra mo, que est no reto, o inseminador fixa a crvix e passa a pipeta pelos anis cervicais, fazendo a deposio do smen no corpo do tero (AX et al., 2000). Para a inseminao convencional de vacas, em que o smen depositado no corpo do tero, utiliza-se uma palheta de smen congelado contendo de 6 a 10x106 espermatozides mveis (FONSECA et al.,1991) De acordo com Seidel et al. (2000) a deposio do smen mais prximo do stio de fertilizao, em vacas, permitiu a utilizao de um nmero reduzido de espermatozides sem afetar a fertilidade. Senger et al. (1988) observaram que a taxa de prenhez das vacas inseminadas no corpo do tero foi de 43%, enquanto que nos animais inseminados no corno ipsilateral ao foliculo pr-ovulatrio a taxa foi de 65%. Entretanto, McKenna et al. (1990) no constataram vantagens em utilizar esta tcnica. Hylan et al. (2002) desenvolveram um experimento para avaliar a taxa de fertilizao e qualidade dos embries recuperados de vacas superovuladas inseminadas com smen congelado, atravs da deposio do smen prximo ao stio de fertilizao por um guia ultra-sonogrfico intravaginal, com um baixo nmero

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de espermatozides e concluram que esta tcnica no eficiente para produo de embries de vacas superovuladas. Lpez-Gatius (1995) realizou inseminao intraperitoneal em vacas de leite com problemas de fertilidade, as quais j tinham sido inseminadas no mnimo seis vezes e possuam mais de 250 dias de paridas e no observaram diferena estatstica entre as porcentagens de prenhez da inseminao intraperitoneal (14,6%) e intrauterina (20,6%), utilizando smen congelado. A injeo do smen na cavidade peritoneal era realizada por perfurao do fornix vaginal, e a deposio era sobre o ovrio ipsilateral a ovulao. Inmeros tratamentos hormonais para induo da ovulao em bovinos, tm sido estudados nos ltimos anos, com objetivo de se realizar a inseminao com tempo fixo (momento pr determinado), sem a necessidade de observao do estro nas vacas (BASTOS et al., 2002). O perodo para inseminao em relao ao incio do estro e ao perodo de ovulao um fator que afeta as taxas de concepo, obtidas em qualquer programa de inseminao artificial (WILTBANK, 2000). Bastos et al. (2002) demonstraram que protocolos de induo da ovulao utilizando progestgenos, benzoato de estradiol, eCG e GnRH aumentaram significantemente a taxa de prenhez de vacas com estresse nutricional. O protocolo Ovsynch (GnRH no D0, PGF2 no D7, GnRH no D9 e inseminao 24 horas aps a segunda aplicao de GnRH) tem se mostrado eficiente para inseminao com tempo fixo em vacas. Muitos estudos buscam analisar novos mtodos de sincronizao que utilizam vrias combinaes de progestgenos, estradiol, GnRH e prostaglandina, pois ainda se desconhece o protocolo ideal para realizao da inseminao artificial com tempo fixo (WILTBANK, 2000). 2.3 INSEMINAO ARTIFICIAL EM BUBALINOS

A inseminao artificial na espcie bubalina tem demonstrado ser vivel e de fundamental importncia para melhoria da produtividade do rebanho. Com a adequao do manejo na deteco do estro e na determinao do momento de se

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inseminar a fmea bubalina, o uso da inseminao nesta espcie tem se mostrado to eficiente quanto nos bovinos (OHASHI, 2001). Um dos principais problemas para a inseminao artificial em bubalinos a dificuldade na deteco visual do estro e na determinao do melhor momento para se realizar a inseminao, tendo em vista que o comportamento de estro da bfala mais discreto que na vaca bovina (SOUSA, et al.,1999). A bfala apresenta uma grande variabilidade na durao do estro, dificultando a determinao de um horrio padronizado para a realizao da IA, como se faz em bovinos. Preconiza-se a realizao da inseminao da bfala aps o trmino do estro, quando o animal no estiver aceitando mais a monta do rufio, uma vez que a ovulao ocorrer em mdia 16 horas aps o trmino do estro (BARILE et al., 2001). Devido dificuldade na deteco do estro e momento certo de se realizar a inseminao nas bfalas, algumas tcnicas de sincronizao da ovulao esto sendo estudadas, para que as inseminaes sejam realizadas em momentos pr determinados (SOUSA, et al., 1999). Baruselli et al. (1999) adaptaram a metodologia ovsynch de sincronizao de ovulao em vacas para a espcie bubalina, utilizando GnRH e PGF 2 e obtiveram bons resultados. Barile et al. (2001) tambm obtiveram boa taxa de concepo utilizando um protocolo de sincronizao com eCG, PGF 2 e progesterona na forma de esponja intravaginal. Berber et al. (2002) obtiveram uma taxa de concepo de 56,5% quando realizaram uma aplicao de GnRH (D0), PGF 2 (D7) e GnRH (D9) e uma taxa de 64,2% com a aplicao de GnRH (D0), PGF 2 (D7) e LH (D9). Neste experimento tambm observaram que em ambos os grupos, as fmeas multparas apresentaram melhores taxas de concepo do que as primparas. A inseminao em bfalas realizada via retrovaginal, pela passagem de uma pipeta atravs da crvix, com a deposio do smen no corpo do tero, como em bovinos. A novilha bubalina apresenta o dimetro da crvix bastante reduzido, o que dificulta a passagem da pipeta durante o ato da inseminao. Devido a este fato, deve-se no incio de um programa de inseminao, dar preferncia para animais que j pariram por terem a crvix mais desenvolvida (OHASHI, 2001).

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2.4 INSEMINAO ARTIFICIAL EM OVINOS

Em ovinos existe uma crescente utilizao da tcnica de inseminao artificial. Entretanto, existem algumas limitaes, que dificultam uma maior difuso desta tcnica entre os produtores, como por exemplo os baixos ndices de fertilidade obtidos com a aplicao do smen congelado, utilizando as tcnicas de inseminao vaginal e cervical (NAQVI et al., 1998). A via natural de acesso ao tero, que seria a via transcervical difcil, devido a crvix constituir um dos maiores obstculos passagem de instrumentos, por ser de difcil dilatao, ter estrutura rgida, ser longa e bastante fechada (CROY et al., 1999). Para deteco do estro em ovelhas, necessrio a utilizao de rufies. A observao do estro deve ser realizada duas vezes ao dia com intervalo de 12 horas, sendo que a inseminao somente ter sucesso, se for realizada na metade final do estro (AX, 2000). A inseminao deve ser realizada 12 horas aps a deteco do estro. As ovelhas que forem observadas em cio pela manh sero inseminadas tarde e os animais observados em cio tarde sero inseminados na manh seguinte (MIES, 1987). Podem ser realizadas duas inseminaes no mesmo animal, sendo a primeira no momento da deteco do estro e a segunda 12 horas mais tarde, mas de acordo com Mies (1987), os resultados desta metodologia no so superiores ao da inseminao nica. Entretanto, Ax (2000) relata que a realizao de duas inseminaes resulta em uma melhora de 5 a 10% na taxa de concepo. A sincronizao do estro em ovelhas permite um maior aproveitamento destes animais, reduzindo o intervalo entre partos (SOUZA, 2002). Existem dois protocolos de sincronizao mais utilizados, sendo a progesterona seguido de uma aplicao de eCG e a aplicao de prostaglandina. O tratamento com progesterona realizado com implantes intravaginais por 12 a 14 dias, seguido de uma aplicao de eCG para uma maior sincronizao e aumento da taxa de ovulao. Hill et al. (1998) obtiveram uma maior taxa de gestao com o uso de esponjas intravaginais contendo fluorogesterona (74,7%) do que medroxiprogesterona (64,6%). O protocolo

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de sincronizao com prostaglandina depende da presena de um corpo lteo funcional, podendo ser utilizada somente na estao reprodutiva (AX, 2000). Godfrey et al. (1999) realizaram trs diferentes tipos de sincronizao em ovelhas e observaram que todas as ovelhas tratadas com CIDR por 12 dias e 94,4% das ovelhas tratadas com esponja contendo 500 mg de progesterona, apresentaram estro 36 horas aps o trmino do tratamento e apenas 72,2% das ovelhas tratadas com prostaglandina apresentaram estro neste intervalo de tempo. Com a utilizao de rufies consegue-se realizar uma sincronizao natural do estro, pois ferormnios produzidos pelo macho estimulam o incio da estao reprodutiva e sincronizam as ovelhas (AX, 2000). Em ovinos existem diferentes tcnicas de inseminao, a mais simples delas a vaginal, na qual o smen depositado na vagina por uma pipeta. Embora seja uma tcnica de fcil aplicao, somente apresenta bons resultados com a utilizao de 200 a 400x106 espermatozides oriundos de smen fresco, ficando a taxa de concepo entre 40 e 65% (AX, 2000). Na inseminao cervical as fmeas so contidas com o posterior elevado e o smen depositado na poro inicial da crvix, com auxlio de um espculo e uma fonte de luz. A taxa de concepo de 60 a 70% utilizando smen fresco ou refrigerado com uma dose inseminante de 100 a 200x106 clulas espermticas e a aplicao de 450x106 espermatozides oriundos de smen congelado pode resultar de 30 a 35 % de taxa de concepo (AX, 2000). Souza (2000) realizando inseminao cervical com tempo fixo em ovelhas sincronizadas, com aproximadamente 200x106 espermatozides, obteve uma taxa de gestao de 41,9% utilizando smen fresco e 21,5% utilizando smen refrigerado em Equitainer por 24 horas. Neste mesmo trabalho, quando as inseminaes foram realizadas em ovelhas com estro natural, a taxa de concepo com smen fresco foi de 78,6% e com smen refrigerado de 71,4%, no sendo observada diferena estatstica. Devido anatomia da crvix da ovelha, que possui pregas dispostas em diferentes planos e posies (NAQVI et al., 1998), a transposio da crvix complicada, dificultando a realizao da inseminao transcervical, a qual tenta-se

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transpor a crvix com uma pipeta, para deposio do smen no corpo do tero. Esta tcnica permite que um menor nmero de espermatozides seja utilizado. Com a utilizao de smen fresco e refrigerado a taxa de concepo satisfatria, contudo quando se utiliza smen congelado esta taxa de 22 a 51% (AX, 2000). Campbell et al. (1996) observaram leses na crvix de ovelhas, aps a tentativa de passagem de pipeta pela mesma. Alguns compostos qumicos tm sido utilizados com o objetivo de provocar o relaxamento da crvix ovina, tais como a relaxina, cocana, ocitocina, prostaglandinas e interleucinas, para facilitar a passagem da crvix e realizao da inseminao intracervical (SAYRE & LEWIS, 1997). Wulster-Radcliffe & Lewis (2002) desenvolveram uma pipeta para

inseminao transcervical, mas no observaram diferena nos resultados obtidos com a pipeta desenvolvida e a tradicionalmente utilizada. A inseminao laparoscpica um procedimento cirrgico, exige a utilizao de um laparoscpico e um veterinrio bem treinado. Nesta tcnica o smen depositado no lmen dos dois cornos uterino, permitindo assim a utilizao de um menor nmero de espermatozides. A laparoscopia viabiliza a aplicao do smen congelado, apresentando uma taxa de concepo de 65 a 80% (AX, 2000). Ghalsasi & Nimbkar (1996) obtiveram uma taxa de concepo de 72% utilizando smen fresco e inseminao laparoscpica em ovelhas com estro sincronizado, 69% utilizando smen fresco e inseminao cervical em estro natural e 83% com monta natural em estro natural. Devido a ocitocina promover relaxamento cervical Sayre & Lewis (1997) compararam a eficincia da inseminao laparoscpica com a transcervical associada com a aplicao de ocitocina e concluram que a ocitocina exgena no reduz a taxa de fertilizao, mas no melhora os resultados de fertilidade da inseminao transcervical. Moses et al. (1997) concluram que a inseminao laparoscpica pode ser empregada em larga escala com sucesso, sem a necessidade de deteco do estro, realizando as inseminaes 60 horas aps a remoo da esponja contendo 60 mg de acetato de medroxiprogesterona, a qual foi mantida por 14 dias e aplicao de 200 UI de eCG.

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Novas tcnicas de inseminao artificial tambm tm sido estudadas em ovelhas, visando a obteno de melhores resultados com a aplicao do smen congelado. Pau et al. (2002) compararam a inseminao por laparoscopia com a transcervical, sendo ambas cirrgicas e concluram que a eficincia das tcnicas foram similares, mas a inseminao transcervical causa menos estresse para o animal. 2.5 INSEMINAO ARTIFICIAL EM CAPRINOS

Na prtica da inseminao artificial caprina, indispensvel que se faa uma precisa identificao do cio e correta aplicao do smen. A identificao do estro se baseia na modificao de comportamento do animal e facilitada pela utilizao de um bode vasectomizado (FOOT, 1982). A durao do cio de aproximadamente 40 horas e a ovulao ocorre de 30 a 36 horas aps o incio do cio. Recomenda-se que a inseminao seja realizada no tero final do estro e no caso do smen congelado, aconselha-se duas inseminaes com intervalo de 12 horas (MIES, 1987). Foot (1982) relata que as cabras devem ser inseminadas 12 horas aps o incio do cio e devero ser inseminadas novamente, no dia seguinte se ainda estiverem em cio. A inseminao artificial nas cabras realizada pela deposio do smen, o mais profundo possvel, na crvix, que mede cerca de 4 cm de comprimento e diferentemente da ovelha, apresenta menor complexidade, assemelhando-se mais com a crvix de bovino, que contm 4 ou 5 aneis que podem ser passados mediante manobras adequadas (MIES, 1987). Para a inseminao artificial em caprinos, o smen pode ser fresco, refrigerado a 4 oC, ou ainda congelado (NUNES, 2001). A dose de smen utilizada em cada inseminao de aproximadamente 125x106 espermatozides em 0,4 a 0,5 mL. Devido as condies prprias do smen de caprinos, que de boa qualidade e possui boa resistncia refrigerao e congelao, bons resultados de fertilidade so obtidos com a aplicao tanto de smen fresco, refrigerado e congelado (MIES, 1987).

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Tratamentos

hormonais

so

utilizados

em

cabras,

para

induo

sincronizao do estro. A utilizao de esponja vaginal contendo de 40 a 45 mg de acetato de fluogesterona por 11 dias, com aplicao de 400 a 500 UI de eCG 48 horas antes da retirada da esponja e aplicao de prostaglandina juntamente com o eCG, um protocolo eficiente para sincronizao de estro em cabras (LEBOEUF et al.,1998). A pseudogestao pode afetar de 3 a 4 % das fmeas que so tratadas com hormnios para sincronizao do estro, sendo esta freqncia bastante variada entre os rebanhos, podendo atingir at 20% das fmeas em alguns casos. O tratamento com luteoltico tem se mostrado eficiente, revertendo os casos em 94% das vezes (LEBOEUF et al., 1998). Corteel et al. (1988) inseminaram cabras 45 horas aps a remoo da esponja, com 100x106 espermatozides oriundos de smen congelado em 0,2 mL e conseguiram uma taxa de prenhez de 63%. 2.6 INSEMINAO ARTIFICIAL EM SUNOS

A utilizao da inseminao artificial em sunos tem crescido drasticamente nos ltimos anos. Estimativas mostram que o aumento da aplicao desta tcnica, passou de menos de 5% em 1986, para 30% em 1996 e aproximadamente 50% em 1998, no rebanho mundial. Este aumento se deve ao aumento no nmero de sunos confinados, cuidados com a introduo de doenas nos rebanhos e interesse na produo de animais geneticamente superiores (LAMBERSON & SAFRANSKI, 2000). O sucesso dos programas de inseminao em sunos depende de m uitos cuidados no manejo, para obteno de excelentes taxas de concepo e nascimento. Uma das falhas mais acometidas nestes programas a deteco inadequada do momento da inseminao (LAMBERSON & SAFRANSKI, 2000). A ovulao em porcas ocorre de 38 a 42 horas aps o incio do cio e este processo requer 3,8 horas. Indica-se que as inseminaes devem ser realizadas no segundo e terceiro dia de cio, a cada 12 horas, nas porcas que apresentarem cio

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logo depois da desmama, nas porcas que apresentarem cio no momento usual depois da desmama deve-se inseminar 24 e 36 horas aps a deteco e nas porcas que apresentarem o estro tardiamente aps a desmama as inseminaes devero ser realizadas logo aps a deteco do estro (AX, 2000). Em um estudo realizado por Soede et al. (1995) observou-se que os resultados de fertilidade foram bons, quando as inseminaes foram realizadas dentro de 24 horas antes da ovulao, sendo que os melhores resultados foram de 8 a 12 horas antes. Entretanto, Nissen et al. (1997) observaram que o intervalo entre a inseminao e ovulao pode ser extendido por at 28 horas. Com a aplicao do smen congelado, os resultados so melhores quando as inseminaes so realizadas de 4 a zero horas antes da ovulao (WABERSKI et al., 1994). A prtica de se usar mltiplas inseminaes, com 2,5 a 3,0 bilhes de espermatozides, uma estratgia designada para garantir que pelo menos uma inseminao ser realizada no momento adequado, resultando em alta fertilidade e ninhadas grandes (KEMP et al., 1998). Embora as mltiplas inseminaes serem bem sucedidas, na maioria das vezes, existe relato de que inseminaes extras no final do estro, podem causar uma reduo no tamanho da ninhada (ROBZEBOOM et al., 1997). Lamberson & Safranski (2000) compararam o retorno econmico de diferentes manejos de inseminao e observaram que a deteco do estro duas vezes ao dia com a realizao das inseminaes 12, 24 e 36 horas aps a deteco do estro, resultou em melhores resultados. Em sunos pode-se realizar inseminaes transcervicais (pipeta encaixar-se na crvix) e intrauterina (cirrgica ou fibroendoscpio), com smen fresco, refrigerado e congelado. A taxa de pario de 70 a 85% para a inseminao transcervical com smen fresco e refrigerado e de 40 a 70% com smen congelado. Entretanto, com a inseminao intrauterina cirrgica, tanto com smen fresco, refrigerado e congelado, o ndice reduz para 30 a 55% (AX, 2000). A dose inseminante convencional utilizada em sunos muito elevada, sendo de 2,0 a 3,0x109 espermatozides mveis, em um volume tambm elevado (AX, 2000).

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Rath et al. (2000) trabalharam com inseminao artificial intrauterina em sunos, com objetivo de se conhecer o nmero mnimo de espermatozides que pode ser depositado na ponta do corno uterino, para obteno de bons ndices de fertilidade. As inseminaes foram realizadas por via cirrgica e com concentraes de 1x109, 2x108, 2x107, 1x107, 2x106 espermatozides por animal em um volume de 0,5 mL. No houve diferena nas taxas de fertilizao dos quatro primeiros grupos respectivamente, porm uma reduo de 50% na taxa de fertilizao foi observada com quantidades menores de espermatozides. Recentemente foi desenvolvida uma tcnica de inseminao no cirrgica, que permite a deposio de espermatozides na juno tero tubrica de porcas, com auxlio de uma pipeta de inseminao modificada e um fibroendoscpio flexvel, sendo que com esta tcnica possvel passar o canal cervical e alcanar a papila entre trs e sete minutos em 90% dos animais. Com esta tcnica foram realizadas inseminaes com doses de 1000, 200 e 50x106 espermatozides diludos em cinco mL e as taxas de prenhez (tamanho das ninhadas) foram respectivamente de 86,6% (9,6), 88,9% (9,75) e 92,3% (9,4), no havendo diferena significativa na percentagem de prenhez e tamanho da ninhada entre as diferentes concentraes de espermatozides utilizadas. (MARTINEZ et al., 2000). Roca et al. (2002) avaliaram a eficincia da inseminao com fibroendoscpio flexvel, utilizando um baixo nmero de espermatozides provenientes de smen congelado de sunos e obtiveram uma taxa de prenhez de 70% com 9,2 leites em mdia, sendo que no grupo controle, em que foi utilizado smen fresco, a taxa de prenhez foi de 84,21% e a mdia de leites foi de 9,2, no havendo diferena significativa entre os grupos, mostrando que a deposio do smen sobre a juno tero tubrica eficiente. Em um estudo realizado por Wolken et al. (2002) observou-se que a deposio de um nmero reduzido de espermatozides, na parte distal do corno uterino de porcas, atravs de pipeta especial, uma tcnica eficiente, pois obtiveram 65,2% e 77,3% de prenhez utilizando 100x106 e 500x106 espermatozides respectivamente. Utilizando uma tcnica no cirrgica de inseminao artificial em sunos, onde o smen depositado na regio anterior do corno uterino, Vazquez et

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al (2002) verificaram a taxa de prenhez e tamanho da leitegada utilizando smen sexado e obtiveram os seguintes resultados, 43,8% de prenhez e 8,2 leites em mdia utilizando 50x106 espermatozides sexados, 76,2% de prenhez e 9,6 leites com 50x106 espermatozides no sexados, 57,5% de prenhez e 9,1 leites com 100x106 espermatozides sexados e 81,1% de prenhez e 9,4 leites utilizando 100x106 espermatozides no sexados. 2.7 INSEMINAO ARTIFICIAL EM FELINOS

A inseminao artificial em gatos domsticos tem sido mais utilizada em pesquisas, nas quais os gatos servem como modelo experimental. As tcnicas para inseminao e estocagem de smen tambm podem ser utilizadas para programas de reproduo assistida em gatos. Em muitas raas existe um nmero limitado de animais em reproduo e este problema acentuado pelo fato de que muitos machos so castrados, devido ao seu comportamento (FARSTAD, 2000). Devido ausncia do estmulo da ovulao pela cobertura quando se realiza inseminao artificial em gatas, necessrio que se faa a induo da ovulao, com aplicao de hormnio (hCG) e esta induo hormonal mais eficiente quando realizada no terceiro dia de cio. A maioria das gatas ovulam de 26 a 29 horas aps recebem 100 UI de hCG intramuscular, no terceiro dia de cio (AXNER, 1998). Tem sido demonstrado que, com a utilizao de smen fresco, tanto a inseminao vaginal como a intrauterina resultam em gestao. Quando o smen depositado na vagina, no dia da aplicao do hCG e 24 horas depois, a taxa de gestao maior do que quando apenas uma inseminao realizada no dia da aplicao do hCG. A inseminao intrauterina (cirrgica) tem melhores resultados quando realizada de 31 a 50 horas aps a administrao do hCG, pois a fertilizao ocorre depois de 49 horas da induo da ovulao (AXNER, 1998). Na inseminao laparoscpica o smen depositado no tero cranial de cada corno uterino com auxlio de um cateter (FELDMAN & NELSON, 1996). As gatas domsticas possuem o vestbulo de 1 a 2 cm de comprimento e uma vagina bem estreita com 2,5 a 3,0 cm de comprimento. Para a inseminao

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intravaginal utiliza-se um cateter francs, que introduzido aproximadamente 4,5 a 5,0 cm na vagina, onde faz-se a deposio do smen. Aps a inseminao a gata deve ser mantida com os membros posteriores elevados por aproximadamente 10 minutos (WATSON & GLOVER, 1993). Quando se utiliza smen fresco, uma dose inseminante de 5x106 suficiente para inseminao intravaginal (AXNER, 1998). Entretanto, a dose inseminante para uma inseminao intravaginal, com smen fresco, em gatas para Johnston et al. (2001) de 50x106 espermatozides em um volume de 100 l. O processo de refrigerao de smen de gatos tem se mostrado eficiente. O smen diludo em volume igual, com o meio citrato-gema de ovo a 37oC e mantido a 4oC por 3 dias, pode ser utilizado para fertilizar ocitos in vivo (JOHNSTON et al., 2001). Howard et al. (1992) obtiveram uma taxa de gestao de 50% (9/18), com um a quatro filhotes por ninhada, em gatas que foram anestesiadas entre 31 e 50 horas aps a administrao de hCG e inseminadas por laparoscopia nos cornos uterino com 6,2x106 espermatozides oriundos de smen fresco. Neste mesmo experimento apenas 14,3% das cadelas inseminadas da mesma forma, aps 25 a 33 horas da aplicao de hCG se tornaram gestantes, sugerindo que a anestesia ou laparoscopia comprometem a ovulao. A taxa de gestao obtida com a aplicao do smen congelado, com inseminao vaginal em gatas de aproximadamente 10% e esta baixa fertilidade pode ser devido a danos no acrossoma, pois o smen apresenta boa motilidade aps a descongelao (POPE et al., 1991). Com a inseminao intrauterina, por laparoscopia a taxa de concepo de aproximadamente 50% (HOWARD et al., 1997). O momento da inseminao e o local de deposio do smen so fatores importantes. Da mesma forma que o smen fresco, a inseminao intrauterina com smen congelado proporciona melhores resultados de prenhez do que a inseminao vaginal (AXNER, 1998).

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2.8 INSEMINAO ARTIFICIAL EM CANINOS

A inseminao na espcie canina tambm pode ser utilizada como uma alternativa para animais impossibilitados de realizar monta natural por problemas anatmicos e comportamentais, bem como para preveno de transmisso de agentes infecciosos e uso de smen refrigerado e congelado (FELDMAN & NELSON, 1996). A primeira inseminao com smen canino refrigerado a 4oC que se obteve sucesso foi realizada em 1954 por Harrop e foi em 1969 que Seager conseguiu a primeira gestao utilizando smen congelado em cadelas (SILVA et al., 2001). A aplicao de smen fresco ou refrigerado no momento da inseminao tem apresentado bons resultados, aproximando-se dos ndices obtidos com a monta natural. Entretanto, os resultados conseguidos com o uso do smen congelado no so muito satisfatrios (LINDE-FORSBERG & FORSBERG, 1989). Para inseminao artificial intravaginal com smen fresco, faz-se necessria a expanso da frao espermtica com a adio de lquido prosttico ou diluidores, tais como o tris, gua de coco, soluo de citrato de sdio (2,9%), soluo fisiolgica de cloreto de sdio e outros (SILVA et al., 2001). A temperatura de manuteno do smen refrigerado varia entre 4 e 5oC (ENGLAND & PONZIO, 1996). Iguer-ouada & Verstegen (2001) conseguiram manter a viabilidade espermtica de 13 a 21 dias in vitro. Pinto et al. (1999) compararam a taxa de gestao e tamanho da ninhada de cadelas inseminadas com smen fresco e smen refrigerado em Equitainner por 24 horas e observaram uma taxa de prenhez e tamanho da ninhada de 94%/ 7.2 com smen fresco e 95%/ 7.1 com o smen refrigerado. O smen congelado o que oferece maior flexibilidade de uso, porm o que sofre as mudanas mais drsticas quanto sua qualidade aps a descongelao (SILVA et al., 2001). As taxas de gestao com smen congelado variam muito e ficam abaixo dos resultados obtidos com smen fresco. Entretanto, Silva & Verstegen (1995) obtiveram bons resultados realizando inseminao artificial intrauterina em cadelas utilizando smen congelado.

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Para o sucesso da Inseminao artificial, imprescindvel que se faa o correto acompanhamento do estro da cadela a ser inseminada. A determinao do momento da inseminao muito importante, principalmente quando se utiliza smen refrigerado e congelado, pois a viabilidade espermtica reduzida (SILVA et al., 2001). O smen fresco tem uma viabilidade que pode chegar at 11 dias no trato reprodutivo da cadela, ao passo que o smen congelado apresenta uma viabilidade de aproximadamente 24 horas (SILVA et al., 2001). A inseminao artificial intravaginal deve ser realizada num perodo mximo de at seis dias aps o pico de LH, pois Silva & Verstegen (1995) demonstraram que a crvix da cadela em estro fecha-se, em mdia, 6,7 dias aps este pico. As ovulaes parecem ocorrer de 36 a 50 horas aps o pico de LH e os ocitos somente estaro maduros (metfase II) cerca de 2 a 3 dias aps as ovulaes (CONCANNON, et al., 1989). Para o acompanhamento da cadela, a forma mais prtica e usual atravs do seu comportamento sexual associado citologia vaginal. A inseminao artificial deve ser realizada quando a fmea est receptiva ao macho e apresenta uma citologia com pelo menos 70% de clulas superficiais (SILVA et al., 2001). A vaginoscopia tambm pode ser utilizada para determinar o momento da inseminao, que quando se observa a mucosa vaginal plida e pregueada. A dosagem hormonal a tcnica mais eficaz para determinao do momento timo para a realizao da inseminao, que quando a progesterona est em torno de 7,5 ng/mL, que corresponde a aproximadamente dois dias aps a ovulao (CONCANNON et al., 1989). Outro recurso que tem sido estudado para determinar o momento da inseminao em cadelas a ultra-sonografia, mas esta tcnica no tem se mostrado eficiente (HASE et al., 2000). Para inseminao artificial via intravaginal (IAIV) pode-se utilizar uma sonda rgida, com a deposio do smen ao longo da vagina da cadela ou a sonda de Osris que uma sonda flexvel, provida de um pequeno balo inflvel na sua extremidade cranial, imitando o papel do bulbo cavernoso do pnis, fazendo-se a deposio do smen na poro cranial da vagina (SILVA et al., 1996). Quando se utiliza estas sondas, necessrio que a cadela fique com os membros posteriores

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elevados durante 15 minutos, visando prevenir o refluxo de smen (SILVA et al., 2001). Entretanto, Pinto et al. (1998) observaram que a reduo no tempo de elevao dos membros posteriores de 10 para 1 minuto, no comprometeu a fertilidade, nem a prolificidade das cadelas, utilizando smen fresco, onde obteve 91% (29/32) de prenhez de mdia entre os dois grupos e uma ninhada de 7,35 filhotes por gestao. A inseminao artificial intrauterina (IAIU), onde o smen depositado dentro do tero, a tcnica escolhida em casos particulares, onde a via vaginal poderia comprometer os resultados da inseminao, como por exemplo, na utilizao de um smen congelado com baixa qualidade ps-descongelao (SILVA et al., 2001). A deposio do smen dentro do tero pode ser realizada utilizando-se cateter (transcervical), ou laparoscopia (SILVA et al., 1995; LINDE-FORSBERG et al., 1999). A IAIU via laparoscopia tem o inconveniente de ser u m procedimento cirrgico, entretanto a via transcervical uma tcnica difcil de ser executada devido anatomia particular da crvix e presena da prega mdio-dorsal da vagina da cadela, requerendo muita prtica do inseminador, bem como colaborao por parte da cadela (SILVA et al., 2001). As IAIV e IAIU apresentam resultados semelhantes quando se utiliza smen fresco. Silva et al. (1995) utilizando smen fresco em inseminaes intrauterinas obtiveram resultados semelhantes monta natural. Quando se utiliza smen congelado os resultados so variados. Linde-Forsberg et al. (1999) compararam a fertilidade da IAIU e IAIV utilizando smen congelado e obtiveram uma taxa de gestao / tamanho da ninhada de 84,4% / 5,4 quando realizaram IAIU utilizando cateter transcervical, 57,9% / 6,0 com a IAIU utilizando endoscpio e 58,9% / 4,0 com a IAIV, mostrando que uma boa tcnica de congelao de smen associada com a IAIU transcervical (no cirrgica), pode levar a taxas de gestao e tamanho de ninhadas semelhante as da monta natural. Uma dose inseminante contendo de 150 a 200x106 espermatozides com duas ou trs inseminaes proporciona uma taxa de concepo e tamanho de ninhada adequados. O nmero mnimo de espermatozides oriundos de smen congelado ainda no est bem estabelecido. No entanto, boa fertilidade foi obtida

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com doses inseminantes de 35x106 espermatozides mveis por IAIU e 50x106 espermatozides mveis por IAIV (WILSON, 1993). 3. CONSIDERAES FINAIS

A inseminao artificial a tcnica mais importante para o melhoramento gentico dos animais e a mais utilizada em todas as espcies. Vrios fatores podem contribuir para o sucesso dos programas de inseminao artificial nas diferentes espcies. Os principais fatores que determinam os ndices de fertilidade, obtidos com a inseminao artificial so: a fertilidade dos reprodutores, a maneira com que o smen colhido e manipulado, a habilidade do inseminador, o manejo das fmeas (momento da inseminao), o tipo de smen empregado (fresco, refrigerado e congelado), a dose inseminante e a tcnica de inseminao empregada. Mesmo nas espcies que j se consegue resultados semelhantes aos da monta natural com a inseminao artificial, valido o desenvolvimento de mais pesquisas, com intuito de aprimorar a tcnica e facilitar a execuo da mesma. Para as espcies que ainda no se tem o domnio desta biotcnica, muitos estudos so necessrios com objetivo de se alcanar melhores resultados. 4. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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