Espécies Reativas de Oxigênio

ORS

Prof. Dr. Ademir Neves

Laboratório de Bioinorgânica e
Cristalografia - LABINC
Departamento de Química – UFSC
E-mail: ademir@qmc.ufsc.br
 Oxigênio – O2- a molécula
mágica
• Exceto para organismos anaeróbicos, todos os animais e
plantas necessitam de O2 para uma produção eficiente de
energia. clorofila

CO2 + H2O + energia Metabolismo animal Carboidratos + O2

• O2 livre surgiu na atmosfera terrestre há aproximadamente
• 2 x 109 anos, provavelmente devido a evolução dos
organismos fotossintéticos.
• % de O2 presente no ar seco = 21 % com PO2 = 159 mmHg
ao nível do mar – Ptotal = 760 mmHg.
• Solubilidade do O2 = 0.284 mmol/l a 10 oC
Solubilidade do O2 = 0.212 mmol/l a 25 oC
No sangue venoso: 40 mmHg (53 µmol/l de O2)
 Conceito de radicais livres e espécies
reativas de oxigênio
O elemento oxigênio e a molécula mágica de O2

• Elemento do grupo VIA

• No. Atômico Z = 8
• Ocorrência na natureza:
16
O (99.759%), 17O (0.0374%), 18O (0.2039%)
1s2, 2s2, 2p4
1s2, 2s2, 2px2, 2py1, 2pz1 (6 e- de valência)
 Quais os efeitos tóxicos do
oxigênio
• Oxigênio inibe enzimas celulares.
• Em 1954 – R. Gershman e L. Gilbert propõe que a
maioria dos efeitos danosos causados pelo
oxigênio devam ser atribuídos à formação de
radicais livres de oxigênio.
• Stress oxidativo: Formação aumentada de radicais
livres que acabam por causar a lesão celular.
• Importante estudar: ligação covalente,
Princípio de Pauli, Orbitais atômicos e
moleculares, Regra de Hund,
Estruturas de Lewis para
O2
e seus derivados.

1s2, 2s2, 2px2, 2py1, 2pz1

A molécula de O2 segundo a teoria dos orbitais moleculares
Combinação de orbitais atômicos s,p,d,f ⇔ orbitais
moleculares σ, π, δ
σ*u

π*g

2p

πu Paramagnético
σg Radical
σ*u

2s

σg
σu*

1s

σg
OA O2 OB
 σ*
u σ*
u σ*
u

π*
g π*
g π*
g

πu πu πu

σg σg σg
Estado Fundamental 1
∆O2 .
O2-
3 singlete
ΕO2 Superóxido

σ*
u σ*
u

π*
g π*
g

πu πu

σg σg

peróxido O22- singlete 1E O2

Multiplicidade de spin =( 2S + 1)
S = spin total
 Ordem de ligação:
O.L. = ½ (nb - na)

nb = no. de elétrons ligantes

na = no. de elétrons anti-ligantes

• Molécula O.L. d(O-O Å)

O2 2 1,21
O2-. 3/2 1,33
O22- 1 1,49
 σ*u σ*u σ*u σ*u

π*g π*g π*g

22.4 kcal

πu πu πu

σg σg σg
Estado triplete 1
∆O2
3 singlete singlete 1E O2
Ε O2

37.5 kcal

Para as formas singlete, a restrição de spin é removida e assim o poder

oxidante é significativamente aumentado – não são radicais
NAD+ + 2H+ + e- → NADH + H+ E0 = -0.320 V vs NHE
 . Propriedades vibracionais e
geométricas das espécies dioxigênio
(O2).

• Espécie ν(O-O) (cm-1) d(O-O) (Å)

O2+ 1905 1,12

O2 1580 1,21
O2- 1097 1,33
O22- 802 1,49
 Potenciais Redox selecionados para reações
relevantes em sistemas biológicos

• Espécie Eo (V) • Espécie Eo (V)

• O2(g) + e- → O2-. -0.33

• Cu 2+
+ e → Cu
- +
+0.153
• O2(g) + H+ + e- → HO2 -0.13
• Fe 3+
+ e → Fe
- 2+
+0.771
• O2(g) + 2H+ + 2e- → H2O2 +0.281
• Mn + e → Mn
3+ - 2+
+1.51
• O2(g) + 4H+ + 4e- → 2H2O +0.815
• Co 3+
+ e → Co
- 2+
+1.842
• O2-. + e- + 2H+ → H2O2 +0.89
• Em meio ácido
• OH. + H+ + e- → H2O +2.31

• pH = 7 a 25oC E0 versus NHE

• 2H+ + 2e- → H2 0.00

 Óxido Nítrico - NO
• N - Elemento do grupo VA NO. é um radical e NO+
•No. Atômico Z = 7 é
• 1s2, 2s2, 2px1, 2py1, 2pz1 diamagnético
σ*
u

*
πg

2p

πu

σg
σ*
u

2s

σg
σ*
u

1s

σg
N NO O
Reação importante – Formação de
Peróxinitrito – ONOO-
Reação:
O2.- + NO. → ONOO-
Reação controlada por difusão

Normalmente: Em tecidos inflamados,

macrófagos e enzimas podem gerar
ONOO- pela co-produção de O2.- e NO.
OH. e ONOO- são extremamente tóxicos e
provavelmente sejam os principais mediadores
de danos celulares oxidativos.
 Metais de Transição
Muitos metais de transição desempenham papéis
fundamentais nos sistemas vivos

Metal Importância Bioquímica

Cobre Essencial na dieta humana. Necessário
para Enzimas como SOD, Citocromo
oxidase, tirosinase. 80 mg no corpo
humano adulto (fígado e cérebro).

Ferro Essencial na dieta humana. Deficiência

causa anemia. Elemento mais
abundante em humanos; no soro
sanguíneo - 0.127 mg/100 ml na sua
maioria ligado a transferrina.
necessário para hemoglobina,
mioglobina, citocromos e outras
enzimas não-heme (hidrolases)

Outros metais importantes: Mn, Co, Zn, V, Cr, Mo, Tc, Ga, In, Ni,
 Teoria da Ligação de Valência - VB
Aplicada a Complexos

A primeira aplicação bem sucedida da teoria de ligação

de valência em compostos de coordenação foi feita pôr
Linnus Pauling. A teoria está relacionada com a
hibridização de orbitais de forma similar aquela utilizada
em compostos simples.
Do ponto de vista da VB, a formação de um complexo é a
reação entre uma base de Lewis (ligante) e um ácido de
Lewis (metal ou íon metálico) com a formação de uma
ligação covalente dativa entre o metal e o ligante.
Exemplos para VB usando [Fe(OH2)6]3+ e [Fe(CN)6]3-
Fe 3d6 4s2 4p0 4d0

Fe3+ 3d5 4s0 4p0 4d0

[Fe(OH2)6] 3+
Doado pelos ligantes

3-
[Fe(CN)6]

Experimentalmente, encontra-se que [Fe(OH2)6]3+ e

[Fe(CN)6]3- possuem respectivamente, 5 e 1 elétrons
desemparelhados.
 Exemplos para VB usando [Cu(OH2)6]2+ e Cu+
Cu 3d10 4s1 4p0 4d0

Cu+ 3d10 4s0 4p0 4d0

Doado pelos ligantes

Cu2+

Experimentalmente, encontra-se que [Cu(OH2)6]2+ e

[CuL]+ possuem respectivamente, 1 e 0 elétrons
desemparelhados.
 O que é um radical?
• Se tivermos uma molécula do tipo AB e
ocorrer uma cisão homolítica:
A-B → A. + B.
Se for a molécula de água teremos:
H2O ⇔ H. + OH.
A e B são radicais porque possuem 1e- livre
Radicais livres, como por ex. superóxido e outras ROS
são gerados por uma variedade de células no
organismo, através da ação de oxidases e
peroxidases, quando realizam suas funções
bioquímicas.
No entanto, situações acompanhadas de estados de
enfermidade podem levar a um aumento significativo
de radicais, acima dos níveis necessários do
metabolismo normal. Assim, a disponibilidade de
excesso de ROS tais como O2-, HO2- em estados
patológicos, pode produzir espécies potencialmente
citotóxicas.
ROS podem causar danos na
estrutura celular da qual fazem
parte.
A ação de radicais livres sobre
a cadeia lateral dos ácidos
graxos de lipídeos, nas
membranas da célula,
especialmente membranas do
mitocondrias - as quais estão
diretamente expostas aos
ânions O2-. produzidos durante a
respiração celular
Como o organismo combate o excesso de
radicais livres?

1) Defesa enzimática, isto é, feita pelas

próprias enzimas do organismo (catalisadores
das reações químicas das células)

2) Através de antioxidantes, entre eles a

vitamina E e MSM os quais neutralizam a ação
dos radicais livres.
 Teoricamente, os compostos orgânicos
do corpo humano deveriam explodir na
presença de ar, porém a restrição de
spin e outros fatores, de forma feliz,
fazem com que isto aconteça de uma
forma adequada para a vida.
Exemplo:
H-H + H-H + O2 →H-O-H + H-O-H

S =1 S= 0
 Dismutação
Superóxido dismutase - SOD:
Enzima responsável pelo
desproporcionamento do íon super-óxido,
de acordo com a eq. abaixo:
Reação de desproporcionamento
2O2-. + 2H+ ⇔ H2O2 + o2
O2-. + e- + 2H+ ⇔ H2O2
O2-. ⇔ O2 + e-
--------------------------------------------------------

2O2-. + 2H+ ⇔ H2O2 + O2

 σ *u σ *u σ *u

π *g π *g π *g

-e +e

πu πu πu

σg σg σg
.
O2 O2- O22-

Reação de desproporcionamento do íon superóxido–

um radical
SODZnIICuII – isolada a partir de eritrócitos, fígado e outros
órgãos.

Estrutura do Sítio ativo da SODZnIICuII

a partir de eritrócitos de bovinos
 Mecanismo “ping-pong” proposto para
SOD de ZnIICuII

• EZnIICuII + O2-. ⇔ EZnIICuI + O2

• EZnIICuI + O2-. ⇔ EZnIICuII + H2O2

Scavenger: Composto que remove um componente traço ou intermediário

O2 + e- ⇔ O2-. Eo = -0.33 V
O2-. + e- ⇔ H2O2 Eo = +0.89 V
Reação não catalisada: k = 4 x 105 M-1s-1
 Formas comuns de ligação de O2 em
metaloproteinas ou metaloenzimas
H O
O O O
O M M
M O M M
O

Nome: end-on : η1 side-on ponte: η2 side-on: η1

Ex. Hemoglobina hemocianina hemeretrina

Fe
OO
C C O
H
O O O
Fe
O
Conceito de radicais livres e espécies
reativas de oxigênio

• A molécula de oxigênio – transporte

realizado por metaloproteínas: respiração
 Hemoglobina (Hb) e
Mioglobina (Mb)

Mb armazena O2 no tecido celular enquanto que a

Hb transporta O2 no plasma sanguíneo. Mb e Hb
ligam O2 no estado reduzido (FeII) e os termos oxi-
e deoxi-Mb e Hb se referem a proteína no estado
 Galactose oxidase

•(GAO) é uma metaloenzima mononuclear de

cobre, secretada por alguns fungos, como o
Dactyllium dendroids e o Polyporus circinatus,
que catalisa a oxidação de vários álcoois
primários aos correspondentes aldeídos com a
redução acoplada do oxigênio molecular a
peróxido de hidrogênio
•A função fisiológica precisa da GAO até o
momento não é bem clara, porém tem sido
sugerido que o H2O2 produzido é aparentemente
RCH2OH+O2→RCHO+H2O2 (1)
usado no processo de degradação de lignina.
RCHO + H2O + O2→RCO2H+H2O2 (2)
Estrutura obtida através de raios-X da GAO
- pH 7.0 (água)
 Mecanismo molecular proposto paraaGAO
Tir-495

Cis-228

S RCH2OH H2O
O O S

N O Tir-272 N O
His-581
Cu II (i) Cu II
H
N O H N O CHR
His-496
H H

H2O2 (ii)
(v)
O2

OH S
OH S
N HO
N O
CuI
N O CuII
H
C R N O CHR
H
(iv)
(iii)

OH S

N HO
II
Cu
N O R
C
H
 A Reação de Fenton
Fenton - 1894
Fe2+ + H2O2 →Interm. →Fe3+ + OH. + OH-

Mistura reage facilmente com moléculas orgânicas devido ao radical OH.

Traços de Fe3+ também podem reagir lentamente com H2O2 sob
condições de pH fisiológico.
Fe3+ + H2O2 → Fe2+ + O2-. + 2H+
Outras reações são possíveis:

OH. + H2O2 → H2O + H+ + O2-.

O2-. + Fe3+ → Fe2+ + O2

OH. + Fe2+ → Fe3+ + OH-

—————————————————
2H2O2 → O2 + 2H2O - catalase
A presença de Cu2+ ⇔ Cu+ também permite a sua
participação em reações de radicais

Cu2+ + O2-. → Cu+ + O2

Cu+ O2-. → Cu2+ + O22-
O22- + 2H+ → H2O2
————————————————

O2-. + O2-. + 2H+ → H2O2 + O2

O íon cobre está atuando como um catalisador -SOD

Sais de Cu+ reagem com H2O2 para formar OH.

+ 2+ . -
 A Química de ORS e velocidade de reações

• Lei de velocidade e ordem de reação:

• A→B -d[A]/dt = k[A]n n = 1 → 1a. Ordem

• k = constante de velocidade

• A + B → Produtos ; -d[A]/dt = k[A]n.[B]m

Reação de 1a. Ordem em A e 1a. Ordem em B
Ordem total = 2

Unidades de k: 1a. Ordem – s-1 ; 2a. Ordem – M-1.s-1

Exemplo: Formação de OH. A partir de H2O2, Fe2+ ou Cu+

Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH. + OH- k = 76 M-1.s-1

Cu+ + H2O2 → Cu2+ + OH. + OH- k = 4.7 x 103 M-1.s-1

kCobre/kFerro = 61.8
Para misturas iguais de [H2O2] e [Fe2+] ou [Cu+]

Valores de k podem ser utilizados para verificar o

quanto rápido reações podem ocorrer sob condições
fisiológicas.
As [H2O2] e [Fe2+] nas células do fígado por ex., são da
ordem de 10-6 moles/l ou menos
Quanto teremos formado de radicais OH. quando 1µmol/l
de H2O2 e 1µmol/l de Fe2+ entram em contato?

A Lei de velocidade é:

R = k[H2O2].[Fe2+] = 76.(10-6).(10-6) = 7.6 x 10-11 mol/l.s

Na verdade, isso parece muito pouco, mas devemos

lembrar que 1 mol de substância contém 6.023 x 1023
moléculas. Dessa forma, o no. de radicais hidroxila
formados/litro.segundo é de 4.58 x 1013.
Se o volume da célula for de ~10-12 – 10-11 litros (em
média), isto implica em 46 a 460 radicais OH.
formados / célula . segundo.
Exemplos de “Radicais Scavengers”

β-caroteno Catechin

hidróxiflavona MnTPorf
 Basic Structure of Vitamin E
as α - Tocopherol

CH3

OH

CH2

CH3 O CH3 CH3 CH3

CH3

Uma dieta de vitamina E é necessária pois não pode ser sintetizada.

Anti-oxidante envolvido na manutenção da integridade da
membrana celular. Várias são as fontes da nossa dieta, incluindo
óleos vegetais, germe de trigo, nozes, cereais em grão, etc.
 MSM – Metil-sulfonil-metano
ou dimetil-sulfona

É um nutriente de ocorrência natural,

encontrado na dieta humana. Encontrado em
frutas, vegetais e leite. Fonte de S na
formação do colágeno, queratina e dos
amino-ácidos metionina e cisteína.
Toxicidade: Similar a da água

Me O
Fonte: http://optimalhealth.cia.com.au/msml.html
S
Me O