EL MICROSCOPIO PTICO Fundamento del microscopio ptico

Para comprender el fundamento del microscopio, es necesario tener una idea sobre las propiedades de la luz. La luz es una forma de energa que emiten determinados cuerpos. Despus de reflejarse sobre otros cuerpos, la luz llega a nuestros ojos, donde es capaz de estimular a unas clulas especializadas y enviar al cerebro unos impulsos elctricos que nos permiten ver la imagen que tenemos delante. La luz se puede considerar una onda, como el sonido o las olas en el agua. Como todas las ondas, la luz se caracteriza por la longitud de onda, que es la distancia entre dos crestas sucesivas, y la amplitud, o altura de las crestas. La longitud de onda se relaciona con el color de la luz a cada color, le corresponde una longitud de onda. !stas longitudes son muy peque"as, entre #$% y #$& micras', para los colores violeta y rojo respectivamente.

La luz puede viajar por el vaco y a travs de algunas sustancias llamadas (transparentes). Cuando la luz pasa de un medio a otro, su trayectoria se (dobla). *i se pule un trozo de vidrio con una forma adecuada +lente,, se puede conseguir que todos los rayos que provengan de un determinado punto converjan en un -nico punto al otro lado de la lente. !n este caso la lente se llama convergente y sus dos caras son conve.as. !l otro tipo de lentes, las divergentes, tambin tienen sus aplicaciones. La fabricaci/n de lentes es un proceso lento y costoso. Con una lente convergente se puede formar una imagen ntida de un objeto sobre una pantalla, siempre

que las distancias objeto0lente0pantalla sean las adecuadas. !sto es lo que sucede en un proyector de diapositivas o de transparencias.

1uestro ojo tiene una lente convergente, el cristalino, que 2ace converger los rayos de luz en la retina. 3odava no 2a conseguido el 2ombre construir una lente tan perfecta como el cristalino, ya que es capaz de cambiar su grosor para poder enfocar la imagen. *in embargo, con la edad el cristalino se endurece y va perdiendo su capacidad de adaptaci/n, enfermedad que se denomina vista cansada.

!l aparato m4s sencillo para observar el mundo microsc/pico es la lupa, que es simplemente una lente convergente con un mango. !l n-mero de aumentos que se pueden obtener con una sola lente est4 limitado. *i se quiere obtener una imagen m4s aumentada, se necesita combinar dos lentes. 5na de las lentes +el objeti o, produce una imagen aumentada, y esta imagen es aumentada de nuevo antes de llegar al ojo mediante otra lente +el ocular,. De este modo, el n-mero de aumentos del microscopio es el producto de los aumentos de las dos lentes. *in embargo, el n-mero de aumentos que puede conseguirse con un microscopio tambin est4 limitado por un fen/meno llamado difracci/n, que consiste en que la luz se dispersa al atravesar objetos del tama"o de la longitud de onda, esto es, del orden de una micra.

5n microscopio lleva un ocular .'# y un objetivo .%#. 6Con cu4ntos aumentos se observa la imagen7

Las partes del microscopio

!l microscopio original constaba de dos lentes el ocular +cerca del ojo, y el objeti o +cerca del objeto,. !stas lentes se montan en el tubo /ptico, el cual va sujeto al soporte.

8dem4s, si en lugar de luz natural se utiliza una l4mpara, se debe introducir una lente llamada condensador, que concentra la luz sobre el objeto. !ste condensador va unido a un dia!ra"ma que regula el tama"o del 2az de luz que llega al condensador.

La mayora de los microscopios tienen varios objetivos insertos en un tambor giratorio o re l er. !stos objetivos est4n colocados de manera que, si uno de ellos se encuentra a la distancia adecuada del objeto para producir una imagen enfocada, los dem4s tambin lo est4n +en teora, aunque en la pr4ctica 2ay que realizar peque"os retoques al cambiar de objetivo,.

Por otro lado, el microscopio necesita un mecanismo para enfocar la imagen, apro.imando o alejando la lente objetivo y el objeto. 9ste va colocado sobre una superficie 2orizontal llamada platina que, en la mayora de los microscopios, es la parte m/vil del microscopio, mientras que el tubo /ptico permanece fijo. Para subir y bajar la platina se accionan dos mandos el tornillo macrom#trico y el microm#trico. !l primero se utiliza para movimientos m4s amplios y el segundo para ajuste fino. !sta es una de las partes m4s delicadas del microscopio, puesto que debe estar siempre bien engrasada y no tener 2olgura. :tros mandos permiten mover la platina 2acia los lados para cambiar el lugar observado.

Para la buena conservaci/n del microscopio debemos observar las siguientes normas

*ujetar siempre el microscopio por el brazo del soporte. ;over la platina usando los mandos, nunca forzarla con la mano. 5sar para los movimientos amplios siempre el tornillo macromtrico, puesto que el micromtrico puede pasarse de rosca. 8cercar la lente objetivo al objeto mirando desde el e.terior, no por el ocular, para evitar que la lente c2oque contra el objeto que se observa.

*e debe evitar en lo posible mover el microscopio, movindose preferentemente los observadores, para evitarle golpes y vibraciones. 1o tocar las lentes con los dedos. Cuando se termine, cubrir el microscopio con la funda para protegerlo del polvo.

$so del microscopio%

*i disponemos de microscopios con cabezales binoculares, en primer lugar, debemos ajustar la distancia interpupilar, es decir, la distancia entre las pupilas, que es diferente de una persona a otra. Para ello, se mira por el ocular mientras se ajusta la distancia, 2asta que las im4genes percibidas por cada ojo se funden en una sola. !s conveniente anotar la distancia interpupilar, para ganar tiempo en futuras observaciones.

Las personas que usan gafas deben quit4rselas para observar por el microscopio, ya que al enfocar se corrije tambin el posible defecto en la vista del observador. *i los dos ojos no tienen el mismo defecto, se enfoca primero con un ojo y luego se gira el otro ocular 2asta que tambin se obtiene una visi/n ntida.

!s conveniente iniciar la observaci/n con el objetivo de menos aumentos. !ste objetivo es el m4s corto y no 2ay peligro de colisi/n con el objeto observado. *e debe comenzar acercando el objetivo al objeto observado, y luego ir alejando con el tornillo macromtrico 2asta que aparezca alguna imagen. !ntonces ajustarla utilizando el tornillo micromtrico.Con este objetivo de pocos aumentos, se observa una visi/n panor4mica de la muestra, lo que permite elegir las zonas de mayor inters. !ntonces se cambia de objetivo. 1ormalmente, s/lo ser4 necesario realizar un retoque en el enfoque con el tornillo micromtrico.

!l objetivo de . '## no se puede utilizar directamente, sino que necesita una tcnica especial que se denomina (inmersin en aceite). *e trata simplemente de a"adir una gota de un aceite especial sobre la preparaci/n y poner al objetivo en contacto con este aceite. !l enfoque debe realizarse e.clusivamente con el tornillo micromtrico.

;ide la anc2ura del campo visual con cada uno de los tres objetivos. Para ello, observa al microscopio una regla transparente e indica cu4ntos milmetros de anc2ura tiene el campo visual. Con cualquier preparaci/n, mueve la platina 2acia la derec2a. 6<acia d/nde se mueve la imagen7

Realizacin de preparaciones
Los objetos observados con el microscopio son atravesados por la luz, por lo que deben ser lo suficientemente finos como para dejarla pasar. 5n objeto finamente cortado no se puede sostener, por lo que siempre se coloca sobre un trozo rectangular de vidrio llamado portaobjetos +porta,. =recuentemente el objeto es cubierto por un vidrio cuadrado muy fino, llamado cubreobjetos +cubre,, por ejemplo para evitar que se ensucie la lente objetivo. !l cubreobjetos, aunque es m4s peque"o, es bastante m4s caro que el portaobjetos por ser tan delgado. *e debe manejar con cuidado de que no se rompa y reutilizarlo siempre que sea posible, lav4ndolo con agua y jab/n. Para evitar que queden marcas de las gotas, se debe secar con un papel suave y limpio.

Las preparaciones m4s f4ciles de realizar son las de lquidos +como agua de un estanque,. *e deposita una gota en el centro de un porta y se coloca un cubre con cuidado de que no queden burbujas de aire. Para ello, la mejor forma es apoyarlo sobre un lado y abatirlo sobre la gota. !stas preparaciones duran poco tiempo, porque acaban sec4ndose. Para determinados lquidos espesos +sangre,, es necesario realizar un !rotis se coloca una gota a ' cm del borde derec2o de un porta y se sujeta otro porta, apoy4ndolo sobre la gota formando un 4ngulo de unos %>? / @#?. !l lquido se e.tiende por capilaridadA luego se desliza el segundo porta 2acia la direcci/n opuesta a la gota, arrastrando a sta por capilaridad con un movimiento uniforme.

Las preparaciones de objetos secos +como alas de insectos, polen o polvo, se pueden fijar con goma ar4biga para evitar que se muevan. Para e.aminar tejidos de plantas o animales es necesario obtener un corte muy fino, para lo que se utiliza un aparato llamado microtomo, o bien una navaja muy afilada.

8 veces no se observan bien determinadas estructuras porque son e.cesivamente transparentes. !ntonces es necesario recurrir a la tincin. !.isten diversos colorantes, cada uno de los cuales es apropiado para determinadas observaciones. <abitualmente se vierten unas gotas de colorante sobre el porta, se deja actuar unos minutos y luego se enjuaga con agua para eliminar el colorante sobrante. 8ntes de observarlo, se debe esperar a que la preparaci/n est seca. *i se trata de un frotis, previamente a la tinci/n es necesario realizar una fijaci/n, para evitar que se vea arrastrado por el colorante. 5n fijador corriente es el alco2ol metlico basta sumergir el frotis durante un minuto en el fijador. :tro fijador es el calor de una llama durante unos segundos, sin que llegue a quemarse la preparaci/n.

EL MICROSCOPIO ESTEREOSCPICO O L$P& 'I(OC$L&R

!s un microscopio dise"ado para obtener una imagen en tres dimensiones. Consiste en dos microscopios de poco aumento, uno para cada ojo, los cuales apuntan al objeto con un 4ngulo ligeramente diferente. !s un microscopio adecuado para la disecci/n, ya que la imagen obtenida es derec2a. Bracias a su poco aumento +apro.imadamente . C#,, no se necesita una distancia muy e.acta para obtener una imagen enfocada, de modo que s/lo constan de un tornillo de enfoque r4pido.

*i el objeto no es transparente, se ilumina lateralmente gracias a un peque"o fle.o. *i el objeto es transparente puede iluminarse desde abajo con un espejo.

*e coloca el cuerpo de la lupa a > o @ cm del objeto. *e enfoca suavemente mirando con un solo ojo. *i la visi/n con el otro ojo no es correcta, se puede ajustar con el anillo corrector. Luego, con los dos ojos, se ajusta la distancia interpupilar 2asta que se vea una imagen en relieve.

PR)CTIC&S Todas las pr*cticas se realizar*n si"uiendo las indicaciones si"uientes% En el laboratorio + ,en sucio- deber*s .acer dibujos de todo lo obser ado indicando los aumentos + anotar todo lo importante de la pr*ctica /material utilizado0 incidencias0 estructuras obser ables%%%1% &l !inal de cada trimestre se entre"ar* un trabajo con las pr*cticas realizadas%

2Obser acin del a"ua de un estan3ue

*e puede recoger agua de un estanque o zanja que 2aya contenido agua durante cierto tiempo, un c2arco con 2ojas podridas o agua de varios das de un jarr/n con flores. !s especialmente interesante recoger algunas porciones de 2ierbas acu4ticas o de 2ojas podridas, ya que numerosos organismos viven asociados a ellas. !l agua se guarda en un

tarro grande, con un poco de lodo en el fondo. Los microorganismos necesitan aire, as que tapa el bote con un trapo y sujtalo con una goma el4stica. Col/calo cerca de una fuente de calor si 2ace demasiado fro. 8 simple vista pueden observarse algunos puntitos nadando. Cuando se encuentre agua de otra procedencia puede a"adirse al mismo tarro, cultivando al mismo tiempo varias clases de microorganismos. !n el agua estancada podemos encontrar

Algas ya sean aisladas +!uglena, que se desplaza r4pidamente,, en colonias +Dolvo., o en filamentos +*pirogyra,. Protozoos son microorganismos unicelulares que se alimentan de restos org4nicos, ya que no realizan la fotosntesis. 5nos se desplazan lentamente, cambiando de forma +8meba,. :tros est4n recubiertos de cilios apenas visibles y se desplazan con rapidez +Paramecio,. !n su interior se observan org4nulos. Gusanos 2ay gran variedad de gusanos que viven en el lodo, como los nematodos. 8 diferencia de las orugas, que son el estado larvario de otros insectos m4s desarrollados, estos gusanos nacen ya con la forma adulta. Crustceos

Coloca unas gotas en el porta y a"ade unas fibras de algod/n para evitar un e.cesivo desplazamiento por la preparaci/nA despus se pone encima el cubre con cuidado de que no queden burbujas.

2Obser acin de las c#lulas del epitelio bucal%

!n nuestra boca se desprenden continuamente las clulas epiteliales.

Easpa la superficie interior de la cara con un palillo y deposita el raspado en un portaobjetos. ;zclalo con una gota de agua y e.tiende la muestra. Calienta suavemente 2asta la desecaci/n de la e.tensi/n. 8"ade una gota de azul de metileno, y despus de unos minutos lava el e.ceso de colorante con agua 2asta que no desti"a m4s. Coloca el cubreobjetos y realiza la observaci/n.

2 Obser acin del tejido epid#rmico de la cebolla

3oma un trozo de cebolla y e.trae con las pinzas una fina l4mina del tejido epidrmico que recubre la parte c/ncava. Coloca el trozo sobre un portaobjetos y e.tindelo 8"ade una gota de azul de metileno, y despus de unos minutos lava el e.ceso de colorante con agua 2asta que no desti"a m4s +sujtalo el trozo con las pinzas, Coloca el cubreobjetos y realiza la observaci/n.

2Obser acin de las bacterias del +o"ur%

Las bacterias pueden ser de diversos tipos

Cocos +esfricos, pueden estar agrupados +estafilococos, o formando cadenas +estreptococos, Facilos +alargados y rectos, Dibrios +en forma de coma, !spirilos +en espiral,

Deposita un poco de yogur en un portaobjetos y dil-yelo con una gota de agua. !.tendindolo con ayuda de una aguja enmangada. Calienta suavemente la preparaci/n 2asta que la e.tensi/n est seca. 8"ade una gota de azul de metileno, y despus de unos minutos lava el e.ceso de colorante con agua 2asta que no desti"a m4s. Coloca el cubreobjetos y realiza la observaci/n. 3rata de identificar los dos tipos de bacterias del yogur Streptococcus y Lactobacillus.

2Frotis de san"re

!n la sangre se pueden observar los siguientes tipos de clulas

!ritrocitos o gl/bulos rojos clulas sin n-cleo en forma de disco aplanado en el centro. 8parecen de color rosado debido al colorante. Leucocitos o gl/bulos blancos son de diversas formas y tama"os. *us n-cleos se ti"en de violeta oscuro o p-rpura y el citoplasma de rosa o azul claro. 8 veces el n-cleo tiene forma de ri"/n o est4 dividido en l/bulos.

Plaquetas son clulas muy peque"as, sin n-cleo. 8parecen de color violeta o p-rpura oscuro rodeadas de un 2alo azul claro.

5no de los compa"eros se pinc2ar4 un dedo con un alfiler esterilizado con calor para obtener una gota de sangre.

*e realiza un frotis de sangre de manera que se consiga una capa de sangre lo m4s fina posible. *e a"aden las gotas necesarias de metanol 2asta que se cubra totalmente la preparaci/n durante > minutos. Luego se vuelca el metanol sobrante. !sto es la fijaci/n. *e cubre la muestra con colorante Biemsa diluido ' C# +' gota de colorante y 'G de agua destilada,, durante C# o H# minutos. *e lava el e.ceso de colorante con agua destilada y se limpia la parte inferior con papel. *e deja secar al aire. *e coloca el cubreobjetos para realizar la observaci/n.

2Obser acin de amiloplastos de la patata + el arroz

Los amiloplastos son org4nulos que provienen de la acumulaci/n de almid/n +sustancia de reserva alimenticia de los vegetales,. *e pueden observar en la patata, legumbres, cereales... y en cada caso tienen formas diferentes.

3oma una porci/n de patata cruda y r4spala con la aguja enmangada. Deposita el raspado sobre un portaobjetos. 8"ade una gota de agua y otra de lugol. Coloca el cubreobjetos y observa la preparaci/n. <az lo mismo mac2acando y raspando unos granos de arroz.

2Culti o + obser acin de le aduras

Las levaduras son 2ongos unicelulares que poseen una especial importancia para el ser 2umano, ya que gracias a ellas elaboramos el pan, vino, cerveza...+ fermentaci/n alco2/lica,

*on peque"as clulas aisladas que tienen reproducci/n ase.ual por gemaci/n, emitiendo yemas que una vez separados vuelven a brotar de nuevo.

Prepara dos cultivos de levadura en C tubos de ensayo, mezclando agua tibia con un poco de levadura +de una panadera,A a"ade a uno de ellos un poco de az-car. 3oma una gota con el cuentagotas y depostala en un portaobjetos. Coloca el cubreobjetos. :bsrvalas en vivo. !n el caso de que no se observen bien, fjalas con calor y a"ade unas gotas de azul de metileno, lavando con agua. 3apa el envase y djalo en un lugar caliente dos das. Eepite la observaci/n y compara los resultados de los C tubos de ensayo

2Culti o + obser acin del mo.o del pan

Los mo2os son 2ongos de muy peque"o tama"o que se desarrollan sobre la materia org4nica en descomposici/n. !l mo2o del pan pertenece a la especie Rhizopus stolonifer. !st4 formado por una mara"a de 2ifas sin

tabicar que llamamos rizoides, con unas prolongaciones que terminan en unos abultamientos oscuros, los esporangios, que est4n llenos de esporas que pueden regenerar las 2ifas de nuevo.

Corta una rebanadita de pan, 2umedcela y p4sala por un lugar polvoriento para recoger las semillas del mo2o. Col/calo en una cajita, donde 2abr4s puesto un papel 2-medo como fondo, con la parte sucia del pan 2acia arriba. Bu4rdalo en un sitio templado y oscuro. 8l cabo de varios das aparece cubierto por un polvillo blanco y despus el mo2o se ennegrece. 3oma un trozo y obsrvalo balo la lupa binocular. Con la aguja enmangada coge un poco y col/calo sobre un portaobjetos. 8"ade una gota de agua, t4palo con el cubreobjetos y obsrvalo al microscopio.

2Obser acin de los estomas del "eranio

Los estomas son unos poros e.istentes en la epidermis de los /rganos verdes de las plantas que sirven para el intercambio de gases y para la transpiraci/n vegetal. Constan de una abertura llamada ostiolo y de un par de clulas con forma arri"onada, llamadas clulas oclusivas.

Con el bistur desprende una parte de la epidermis del envs de la 2oja de un geranio. Col/cala sobre un portaobjetos, a"ade una gota de agua y t4pala con el cubreobjetos. Eepite la e.periencia con una parte del 2az de la 2oja. :bserva las preparaciones al microscopio.

2Obser acin de la mitosis en c#lulas de la ra4z de la cebolla

La mitosis es un proceso de divisi/n celular mediante la cu4l, a partir de una clula madre, aparecen dos clulas 2ijas con idntica dotaci/n cromos/mica que la progenitora. !n la mitosis 2ay % fases, profase, metafase, anafase y telofase.

Coge una cebolla, sujtala con varios palillos y col/cala en un vaso con agua que moje s/lo las races. Bu4rdala en oscuridad varios das 2asta que las races tengan H cm de longitud. Corta con las tijeras los C mm finales de las raicillas. =jalo con alco2ol actico 2asta el da siguiente. Coloca el trozo en un vidrio de reloj con ' cmH de 4cido clor2drico +en proporci/n G ', y H gotas de orcena +al C I, Coloca el vidrio sobre la rejilla difusora del mec2ero y calienta la preparaci/n suavemente evitando que 2ierva. Cuando empiece a desprender vapores la retiramos. Dejamos enfriar 2asta que no moleste el dorso de la mano. Pon el corte sobre un portaobjetos y a"ade C gotas de orcena +al 'I,. 34palo con el cubreobjetos y repiquetea suavemente con un mango para conseguir separar las clulas. :bsrvalo al microscopio e intenta observar las diferentes fases de la mitosis.

2Obser acin de los pelos e"etales5

:E3JB8 !n las 2ojas de la ortiga 2ay unas gl4ndulas segregadoras de 4cido f/rmico. Cuando la 2oja toca la piel, penetra un conducto que se rompe y libera el lquido responsable del picor.

Coge una 2oja de ortiga con las pinzas. *epara un pelo urticante y m/ntalo en una preparaci/n con una gota de agua. :bserva al microscopio la gl4ndula segregadora del 4cido f/rmico en la base del pelo. Parte el pelo para comprobar la e.istencia del 4cido.

:LJD: !n las 2ojas del olivo 2ay pelos escamosos con aspecto estrellado que est4n formados por numerosas escamas que parten radicalmente del eje del pelo como si fuesen las varillas de un abanico.

Easpa el envs de la 2oja con el bistur y monta el raspado en una preparaci/n con una gota de agua.

B!E81J: Las 2ojas del geranio presentan dos tipos de pelos, unos largos y delgados y otros secretores.

Coge una 2oja de geranio con peciolo y con un bistur realiza una incisi/n transversal de la zona epidrmica +lo m4s fino posible,. Coloca el trozo con una gota de agua y a"ade unas gotitas de azul de metileno. !spera C minutos y l4valo con agua. Coloca el cubreobjetos y observa los dos tipos de pelos. Los pelos secretores tienen forma de columna que acaban en una bolita donde se encuentran los productos secretores.