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Gentica Animal Noes de Biotecnologia

NOES DE BIOTECNOLOGIA
Biotecnologia: Conjunto de tcnicas que permite a manipulao do DNA recombinante. Conhecida como engenharia gentica ou tecnologia do DNA recombinante, ela permite a modificao do genoma de um organismo vivo pela insero e expresso de um gene de interesse. A manipulao deste DNA recombinante pode ser utilizada para fins de pesquisa cientfica, industriais e teraputicos. Nos ltimos a nos, diversas substncias como a insulina e o hormnio do crescimento, tm sido produzidas atravs dessas tcnicas. Alm disso, a engenharia gentica empregada no desenvolvimento de vacinas e na produo de alimentos transgnicos. - Como a biotecnologia realizada? I) Isolamento e identificao dos genes responsveis em conferir a caracterstica desejada. II) Amplificao da seqncia de DNA de interesse utilizando vetores (plasmdeos ou vrus) atravs da tcnica de clonagem molecular (PCR). PCR (Polymerase Chain Reaction): Adiciona-se em um tubo uma quantidade muito pequena de DNA genmico, mais os 4 nucleotdeos, a enzima DNA polimerase, os oligonucleotdeos que serviro de primer e a soluo tampo, que oferecer condies de pH e salinidade para que a sntese se processe. O tubo levado ao termociclador e submetido a uma alta temperatura (geralmente 94C) para provocar o rompimento das pontes de hidrognio entre as cadeias de DNA, causando desnaturao da molcula. A temperatura reduzida (30 - 65C) quando, ento, os primers anelam-se s suas seqncias complementares no DNA genmico (Fase de anelamento). Finalmente, a temperatura elevada para cerca de 72C, a temperatura ideal para que a DNA polimerase atue, dirigindo a sntese de novas cadeias (Fase de sntese). O nmero de cpias cresce de modo exponencial a cada ciclo. III) Amplificao da expresso do gene de interesse preferencialmente em sistemas que permitam fcil recuperao e purificao do referido fragmento de DNA.

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- Organismos Geneticamente Modificados (OGMs): Aqueles que tiverem uma seqncia de DNA exgena introduzida ao seu genoma atravs da engenharia gentica. A caracterstica incorporada passa a ser hereditria. - Animais transgnicos: 1) Modelos animais so criados com intuito de se estudar as doenas humanas, tendo em vista a terapia gnica. 2) Animais domsticos so melhorados com introduo ou incremento de determinada caracterstica. 3) Os animais passam a produzir protenas raras e valiosas, principalmente com finalidade teraputica. Condies: O organismo a ser utilizado deve ter capacidade de produzir altas doses da protena desejada sem comprometer o funcionamento normal de suas clulas. O organismo deve ter capacidade de passar a caracterstica para geraes futuras. No caso de organismos multicelulares, deve possuir a capacidade de produzir a protena exgena em um rgo definido. - Mtodos de transferncia de genes em animais: 1) Eletroporao: Nesse mtodo, as clulas alvo so misturadas ao DNA a ser transferido. O conjunto colocado em uma cmara e submetido a um breve pulso eltrico, o qual provoca abertura dos poros da membrana celular, permitindo a entrada do DNA. Esta tcnica resulta em , ao menos, 1% das clulas viveis mostrando expresso estvel de um gene marcador, o qual utilizado na seleo das clulas que receberam o DNA. 2) Lipossomos: Consistem em vesculas de fosfolipdios sintetizados artificialmente contendo o DNA de interesse. Essas vesculas fundem-se com a membrana celular e depositam o DNA diretamente no interior da clula.

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3) Transferncia de genes para ovos fertilizados: Inicialmente, o gene isolado e clonado. Os ovos so fertilizados in vitro, obtendo-se dois pr-ncleos. Com auxilio de microscpio e microagulha, introduz-se centenas de cpias do gene dentro dos pr-ncleos, que se fundem, originando o ncleo do embrio. Este transferido para uma fmea. De modo geral, cerca de 40% dos embries sobreviventes apresentam entre 1 e 100 cpias do gene de interesse integrado de forma estvel ao genoma. A expresso do gene no animal transgnico pode ser comprovada por PCR ou pela tcnica de Southern Blotting. 4) Transferncia de genes para clulas embrionrias pluripotentes: Para esta clula so utilizados embries de 3,5 dias. O blastocisto isolado e cultivado em placas de Petri. Clulas pluripotentes so obtidas por dissociao do embrio. Elas recebem o gene de interesse e so introduzidas em novos blastocistos, que so transferidos para fmeas pseudogrvidas, onde completam o desenvolvimento. O animal que resulta desse embrio denominado quimera, pois possui em sua constituio clulas com e sem o transgene. Uma vez que as clulas com o transgene podem estar em qualquer tecido, inclusive nas clulas da linhagem germinativa, o cruzamento entre indivduos quimricos poder gerar descendentes homozigticos para o gene de interesse. 5) Mtodo do bombardeamento por microcanho (ou biobalstico): O gene de interesse econmico acoplado superfcie de uma micropartcula de metal (ouro ou tungstnio), que disparada por um microcanho contra as clulas e os tecidos vivos. Com uma velocidade superior a 1500 km/h, as micropartculas atravessam a parede celular e/ou a membrana celular e alojam-se no citoplasma, no ncleo ou nas organelas da clula. O gene separa-se da micropartcula pela ao dos lquidos celulares e incorporado ao DNA da clula, que se torna transgnica.

Referncias bibliogrficas:

Gentica Animal Noes de Biotecnologia

DNA Segredos & Mistrios Solange Bento Farah Editora Sarvier 1997 Biologia de olho no mundo do trabalho Sdio Machado Editora Scipione 2003 www.scielo.br www.libertaria.pro.br

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