REACTORES ENZIMATICOS

REACTORES ENZIMATICOS

En la actualidad la industria biotecnologica relacionada con las enzimas puede dividirse en 2 areas a) La que emplea enzimas producidas en grandes cantidades y bajo costo como es el caso de las enzimas proteolicas, empleadas en la elaboracion de detergentes biologicos

 B) la de biocatalizadores

Un biocatalizador reduce o aumenta la energa de activacin de una reaccin qumica, haciendo que sta sea ms rpida o ms lenta.

 Generalmente son enzimas procesadas para emplearse

de manera racional, generalmente inmovilizadas.

La inmovilizacin de enzimas permite una mejora

significativa de su estabilidad, lo que hace posible su empleo en la produccin industrial de productos qumicos, farmaceticos, alimentos; en el tratamiento de residuos; en el diagnstico y tratamiento de enfermedades, y otras muchas aplicaciones. En esta revisin se analizan los diferentes mtodos de inmovilizacin de enzimas, y el efecto sobre las propiedades catalticas y la estabilidad de los biocatalizadores obtenidos.

VENTAJAS

1. El aumento de la estabilidad de la enzima; 2. La posible reutilizacin del derivado, por lo que disminuyen los costes del proceso. 3. La posibilidad de disear un reactor enzimtico de fcil manejo y control, adaptado a la aplicacin de la enzima inmovilizada.

DESVENTAJAS
1. La alteracin de la

conformacin de la enzima respecto de su estado nativo. 2. La gran heterogeneidad del sistema enzima-soporte donde pueden existir distintas fracciones de protenas inmovilizadas 3. Siempre suele haber una prdida de actividad de la enzima durante la movilizacin. 4. El biocatalizador es ms caro que la enzima nativa.

SIGNIFICADO E IMPORTANCIA DE LOS DATOS ENZIMAS

CINETICOS DE LAS

Es indispensable definir la velocidad a la que

se lleva acabo y el volumen de equipo requerido para una produccion determinada. Generalmente los datos de velocidad y concentracion se grafican en algunas de las graficicas de Michaelis Menten

REPRESENTACION DE LINEWEAVER BURK

Factores fsico-qumicos que pueden modificar la actividad enzimtica

Temperatura: las enzimas son sensibles a la

temperatura pudiendo verse modificada su actividad por este factor. Los rangos de temperaturas ptimos pueden llegar a variar sustancialmente de unas enzimas a otras. Normalmente, a medida que aumente la temperatura, una enzima ver incrementada su actividad hasta el momento en que comience la desnaturalizacin pH: el rango de pH ptimo tambin es muy variable entre diferentes enzimas. Si el pH del medio se aleja del ptimo de la enzima, esta ver modificada y por tanto la actividad enzimtica.

REACTOR DE ENZIMA INMOVILIZADA EN LECHOS FIJOS

Involucran una o mas fases fluidas (liquido-liquido o gas-liquido) En un lecho empacado el transporte de masa se dar por la combinacin de dos mecanismos:
La conveccin originada por el movimiento del fluido debido a una diferencia de presiones La dispersin producida por gradientes de concentracin y el retromezclado del fluido debido a la presencia del empaque slido.

SOPORTES POROSOS DONDE SE INMOVILIZA UNA ENZIMA

En el sistema enzimtico inmovilizado se reconocen a las enzimas como catalizadores biolgicos altamente selectivos

Las enzimas pueden estar inmovilizadas en geles hidroflicos como agar, agarosa, alginato, en matrices polimricas semipermeables o en celulosa.
La seleccin del soporte depende de la naturaleza de la enzima:

El tamao de la partcula
El rea superficial La relacin molar de grupos hidroflicos a hidrfobos La composicin qumica

El proceso a realizar

Por ejemplo, la enzima inmovilizada puede ser usada como un adsorbente selectivo para la separacin y purificacin de otra enzima o de algn producto de un proceso fermentativo, por lo que su desempeo ser como el de un reactor cromatogrfico (por afinidad) y el mecanismo de reaccin podra ser expresado en trminos de la cintica de adsorcin tipo Langmuir
El proceso podra ser el de una reaccin enzimtica como:

Oxido-reduccin Transferencia de grupo Hidrlisis Isomerizaciones

Las cuales son descritas en trminos de la cintica de Michaelis-Menten

En el caso de las enzimas inmovilizadas, es importante destacar el tamao relativo de esta respecto a la estructura porosa del soporte, y su distribucion al interior y/o exterior de la particula. Los modelos que describen la fase solida son de dos tipo:

Seudo-homogeneo- considera que la difucion y la reaccion enzimatica se lleva a cabo en la fase fluida contenida dentro de los poros de la particula Seudo-heterogeneo formda por poros llenos de fluido que interacciona con la superficie solida donde se encuentra la enzima inmovilizada y sus sitios activos.

BALANCE DE MOMENTO,DISPERSION DE MASA EINESTABILIDAD EN EL FLUJO

La dispersin axial, la inestabilidad del flujo y una mala distribucin del mismo ocurren frecuentemente en muchas aplicaciones industriales con lechos fijos. La canalizacin es promovida por la presencia de gradientes de viscosidad, donde la inestabilidad en el desplazamiento del flujo causa uniformes e irregulares llamados dedos. La ausencia de los dedos viscosos y la presencia del mezclado causado solo por procesos de dispersin implica estabilidad del flujo.

En muchos sistemas, la transferencia de masa del solido hacia el fluido causa gradientes de densidad y viscosidad en la solucin. Ejemplo: En un estudio del desplazamiento de licores de azcar por columnas empacadas, Hill (1952) desarrollo una ecuacin para la velocidad critica Vc, de la cual ocurre la formacin de dedos.

g=gravedad Kp=permeabilidad del lecho P1 y p2= densidad del fluido de arriba y abajo U2 y u2= viscosidad

BIORREACTORES ENZIMATICOS DE MEMBRANA

Un reactor de membrana se basa en la separacin de la enzima y el producto (o sustrato) por una membrana semi-permeable que crea una barrera selectiva. Las membranas tambin pueden ser exclusivamente utilizadas como matriz para inmovilizar la enzima en el reactor sin ninguna intencin de separacin. Para la seleccin de una membrana debe tomarse en consideracin el tamao de la enzima, del sustrato y del producto as como la naturaleza de las especies en solucin y de la membrana misma

COMO FUNCIONA
Primero se retiene completamente la enzima, de esta manera, la enzima es confinada a una regin definida del reactor de membrana, donde la reaccin con el sustrato ocurre.
El producto resultante de la catlisis debe permear a travs de los poros de la membrana ya sea por difusin o por conveccin. .

De este modo se mantiene la separacin continua del producto.

VENTAJAS DE LOS REACTORES DE MEMBRANA

La posibilidad de un uso continuo e intensivo de enzimas lo cual contribuye a un incremento en la productividad y posiblemente en la viabilidad econmica del proceso. Continua separacin selectiva de productos de la reaccin, de tal manera que en donde el equilibrio qumico afecta el rendimiento de las reacciones, una separacin selectiva de los productos, (sustratos retenidos en un alto grado en comparacin con los productos) puede contribuir favoreciendo un cambio hacia el lado de los productos. Bajo costo.

DESVENTAJAS DE LOS REACTORES DE MEMBRANA

La estabilidad cintica operacional de la(s) enzima(s) en un reactor de membrana pueden ser afectadas por varios factores aparte de la inactivacin trmica de las enzimas. El tipo de material de la membrana puede influenciar en la estabilidad de la enzima.

Clasificacin de reactores de membrana basada en el mecanismo por el cual la enzima y el sustrato establecen contacto

Contacto directo
Recirculacin Dead-end Dilisis

Contacto por difusin

Paso nico Paso nico/recirculacin Doble recirculacin

Contacto interfacial
Doble paso nico Paso nico/recirculacin Doble recirculacin

Aplicaciones generales de los reactores de membrana Grupo de aplicaciones Hidrlisis de macromolculas Reacciones de regeneracin de cofactores Hidrlisis y sntesis catalizadas por lipasas Catlisis en micelas inversas Otros Membrana/Unidad UF Fibras huecas Canal delgado Celdas de ultrafiltracin Membrana tubular Membrana plana, espiral, nylon

Reactores de membrana del tipo dead-end

Incluyen celdas de ultrafiltracin. En este caso, la separacin y la reaccin ocurren en la misma seccin y el medio de reaccin es presurizado contra la membrana y forzado a fluir a travs de los microporos, la permeacion de los solutos se logra por una filtracin convencional a travs de una membrana plana dispuesta de manera perpendicular al fondo del reactor. Este tipo de reactores son ampliamente utilizados en estudios de escalamiento en laboratorios para investigar los mecanismos de accin de enzimas y pruebas de operacin, seguramente por la simplicidad de su operacin.

Reactor de membrana de contacto directo: del tipo dead-end, o:enzima, S:sustrato P:producto

Hidrlisis de macromolculas
Hidrlisis de protenas, pptidos, pectinas y carbohidratos.

La separacin de los productos de bajo peso molecular y mas importante la retencin de los sustratos macromoleculares es el principal objetivo a alcanzar en este tipo de reactores.
Estos requisitos solo pueden encontrarse en los reactores de membrana que promueven un contacto directo entre la enzima y el sustrato.

DISEO DE REACTORES ENZIMTICOS BAJO CONDICIONES DE INACTIVACIN TRMICA

Dentro de las aplicaciones de las enzimas, su empleo como biocatalizadores de proceso es el ms relevante, representando ms del 80% del valor del mercado. La mayor limitante tecnolgica para el desarrollo de la biocatalisis radica en la inherente labilidad de las enzimas bajo condiciones de proceso, siendo el estudio de la estabilidad y estabilizacin de enzimas un aspecto clave para su desarrollo. La inactivacin trmica de las enzimas representa la principal causa de prdida de capacidad cataltica durante la operacin de un reactor. La inactivacin trmica es un fenmeno consustancial a la operacin de un reactor enzimtico. El fenmeno de inactivacin se manifiesta tanto durante el desarrollo del lote en un proceso por lotes con enzima soluble, como durante la operacin continua prolongada o por lotes sucesivos en el caso de enzimas inmovilizadas.

Esquema de diseo y evaluacin de comportamiento de reactores enzimticos.

Los componentes esenciales en el esquema son el balance de materia, que cuantifica la magnitud y refleja la modalidad de la tarea de proceso, y el modelo cintico, que cuantifica el fenmeno cataltico.

Diseo bsico de reactores enzimticos

Se considera el diseo basico de reactores por lotes y continuos. Se emplea una expresion

cinetica generalizada, que considera lo modelos posibles que involucran al sustrato.

Donde S es el sustrato limitante (potencialmente inhibidor acompetitivo); P1 es el producto inhibidor competitivo y P2 es el producto inhibidor no-competitivo. Esta expresin permitir generar la gran mayora de las situaciones.

Esquema de la cintica de reaccin.

 Considerando el esquema y haciendo un anlisis

se obtiene: