Revista Sistemas Ambientales, Vol. 4, No 2, 2011, p.

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APLICACIONES BIOTECNOLGICAS DE MICROORGANISMOS HALFILOS

Laura Castillo-Carvajal, Blanca E. Barragn-Huerta, B*.
Laboratorio de Residuos Peligrosos. Departamento de Ingeniera en Sistemas Ambientales. Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas. Instituto Politcnico Nacional. Av. Wilfrido Massieu s/n, Unidad Profesional Adolfo Lpez Mateos. CP 07738. DF. Mxico e-mail: bbarraganh@ipn.mx

RESUMEN Los microorganismos tienen mltiples aplicaciones industriales; en el caso de los microorganismos halfilos su uso biotecnolgico se ve orientada a diferentes campos, por ejemplo en la industria alimentaria en donde se requiere preservar y conservar las caractersticas sensoriales de los alimentos, en la industria de plsticos en la que se busca generar nuevas tecnologas amigables con el ambiente y en la industria farmacutica con la incorporacin de principios activos que originan nuevos productos. Se ha demostrado que los microorganismos halfilos presentan una alta capacidad de bioremediacin, ya que pueden ser empleados como catalizadores en diversos procesos en donde se requieren condiciones extremas para poder recuperar eficientemente un ambiente contaminado. Palabras clave: Halfilas, Biotecnologa, Bioremediacin. ABSTRACT Microorganisms have several industrial applications; in case of halophilic microorganisms their biotechnological use is oriented to different fields, for example in food industry where it needs to preserve and maintain the sensory characteristics of the food, in the plastics industry which looks for new friendly environmental technologies and in the pharmaceutical industry with the incorporation of active principles that are the base of new products. It has shown that the halophilic microorganisms have a high capability of bioremediation, due to they can be used as catalysts in different process in which need extreme conditions to recuperate efficiently polluted environments. Key words: Halophilic, Biotechnology, Bioremediation.

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INTRODUCCIN
Los ambientes hipersalinos acuticos en los que la concentracin de sal supera la del agua de mar (3.5% de sales totales) pueden ser de origen natural, pero tambin pueden ser de origen artificial como las salinas construidas por el hombre para la obtencin de sal. Por otra parte, la mayora de las salinas estn ubicadas en la costa, ya que la sal se obtiene por la evaporacin del agua de mar, tal es el caso de las salinas de Bras del Port en Santa Pola, Alicante (Espaa); existen tambin salinas terrestres en las que las salmueras o aguas saladas proceden ros o lagos, un ejemplo de este tipo son las salinas de Maras de la provincia de Urubamba, Cusco (Per), las cuales son denominadas estanque mltiple, debido a que las salmueras se distribuyen en un conjunto de balas de evaporacin. Este tipo de salinas son tiles para realizar estudios sobre la diversidad de los microorganismos halfilos, ya que en ellas se encuentran multitud de ambientes con distintos grados de salinidad (Meseguer-Soria, 2004). El salar de Uyuni en Bolivia y el de Atacama en Chile son ejemplos muy conocidos por su gran extensin y alto contenido de litio. En Mxico existen algunas salinas que han sido utilizadas desde tiempos prehispnicos para la obtencin de sal (Figura 1). Estos ambientes son ricos en microorganismos halfilos con gran potencial biotecnolgico poco explorado. Las aplicaciones biotecnolgicas de los microorganismos extremfilos halfilos son diversas entre las cuales se pueden citar: produccin de alimentos fermentados, produccin de salsa de soya, colorantes, extremozimas resistentes a altas concentraciones de sal (amilasas, proteasas, etc.), aditivos utilizados en cosmticos, plsticos biodegradables y produccin de agentes gelificantes como exopolisacridos (EPS). (http://cbt.fcyt.umss.edu.bo/trabajo/verarticulo.ph p?cod_art=5

Figura 1. Ambientes Salinos. Salar de Atacama, Chile (A). Zapotitln de las Salinas, Mxico (B). En la actualidad est creciendo el inters por conocer mejor la diversidad de microorganismos halfilos y cada vez es mayor el nmero de investigaciones relacionadas con el tema ya que estos organismos producen una amplia variedad de metabolitos secundarios estables que pueden tener aplicaciones prcticas (Gonzlez-Hernndez y Pea, 2002; Podar y Reysenbach, 2006). Generalidades de los Microor-ganismos Halfilos Los microorganismos pertenecientes a la familia Halobacteriaceae abundan en salinas y lagos hipersalinos, ambientes bajo los cuales muy pocos seres vivos pueden crecer. Una caracterstica fundamental de los miembros de esta familia es que son halfilos obligados, necesitando concentraciones de NaCl mayores de 1.5 M para crecer, adems, toleran bastante bien las temperaturas elevadas, ya que los ambientes que habitan, por la posicin geogrfica y por tratarse de aguas estancadas, suelen ser lugares muy clidos con temperaturas que pueden llegar a mas de 50C (http://www.lluisvives.com/servlet/SirveObras/01 593741546702713008813/012969_2.pdf). Algunos estudios han demostrado que los microorganismos halfilos cuentan con estrategias que les permiten enfrentar el estrs osmtico manteniendo altas concentraciones intracelulares de sal y sinte-

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tizando solutos compatibles que les permiten balancear su presin osmtica (GonzlezHernndez y Pea, 2002).Las arqueas halfilas son bsicamente hetertrofas aerobias, muchas de estas especies pueden crecer en medios inorgnicos con un solo compuesto orgnico como fuente de carbono. Debido a las altas concentraciones de sal y a las elevadas temperaturas de las salinas, la solubilidad de oxgeno es muy baja convirtindose TABLA 1. MICROORGANISMOS HALFILOS Dominio Arquea

en un factor limitante para el desarrollo de estos microorganismos. Un detalle importante que se debe resaltar es que aunque los halfilos son organismos quimiohetertrofos, se han descrito casos de fijacin de CO2 (Oren, 2002). En la tabla 1 se presentan algunos de los gneros de los microorganismos considerados como halfilos.

Bacteria

Gnero Halobacterium sp. Methanohalobium sp. Methanohalophilus sp. Acetohalobium sp. Halorhodospira sp. Actinopolyspora sp. Salinibacter sp. Halanaerobium sp. Halothermothrix sp. Halocella sp. Halobacteroides sp. Haloanaerobacter sp. Salibacillus sp. Halobacillus sp. Marinococcus sp. Salinococcus sp. Tetragenococcus sp. Halomonas sp. Chromohalobacter sp. Salipiger sp. Palleronia sp.

Referencia Oren, 1999 Zhilina y Zavarin, 1987 Paterek y Smith, 1988 Zhilina y Zavarin, 1990 Imhoff y Sling, 1996 Skerman et al., 1980 Antn et al., 2002 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Rainey et al., 1995 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Mota et al., 1997 Vreeland et al., 1980 Ventosa et al., 1989 Martnez-Cnovas et al., 2004 Martnez-Checa et al., 2005

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Produccin de Enzimas Los biotecnlogos han explotado a los extremfilos como fuente de enzimas denominadas extremoenzimas (Hendry, 2006), las cuales ofrecen nuevas oportunidades para biocatlisis y biotransformaciones como resultado de su extrema estabilidad (Hough y Danson, 1999). Las bacterias halfilas moderadas crecen ptimamente en un rango de salinidad de 0.5 a 2.5 M; adems producen una serie de enzimas hidrolticas extracelulares tales como: amilasas, proteasas, lipasas, nucleasas y esterasas (Margesin and Schinner, 2001; Ventosa et al., 2005). En los ltimos aos, el inters por el estudio de estas enzimas se ha incrementado debido a sus propiedades catalticas y potencial de aplicacin industrial en la formulacin de detergentes, elaboracin de productos dietticos, procesamiento de cuero, papel y alimentos crnicos, as como tambin en la sntesis de enantimeros puros de frmacos, biodegradacin de residuos txicos y contaminantes industriales, entre otros (Ventosa et al., 2005; Snchez-Porro et al., 2003). Aunque el potencial de las halobacterias para catalizar reacciones bajo condiciones extremas de sal es bien conocido, hasta ahora no hay muchos reportes de su aplicacin en forma inmovilizada, debido a que estas clulas son muy frgiles y se lisan con la disminucin de sal en el medio externo; sin embargo, se ha observado que la produccin de -amilasa por parte de microorganismos halfilos se ha logrado mantener durante 45 das, inmovilizando los microorganismos en perlas de alginato y pelculas de alcohol polivinlico (Bagai and Madamwar, 1996). Las hidrolasas producidas por microorganismos halfilos han sido usadas en la industria farmacutica para la elaboracin de algunos medicamentos como antibiticos, hormonas y pesticidas (Joshi et al., 2000: Sudge et al., 1998), tambin han sido usadas para el tratamiento de superficies marinas contaminadas con petrleo (Stosz et al., 1995). Algunas celulasas haloestables han sido aisladas de Salinovibrio sp. (Wang, et al, 2009). Por otro lado, se han caracterizado isomerasas termoestables que permiten que la manipulacin del DNA sea ms conveniente y eficiente; la Peptidil prolil cis-trans isomerasa (PPIasa) ha sido usada para la

regeneracin de protenas desnaturalizadas, para la estabilizacin de protenas, para la produccin de protenas recombinantes y para la produccin de importantes sustancias inmunosupresoras y fisiolgicamente activas (Margesin and Schinner, 2001). Produccin de Biopolmeros Los microorganismos halfilos tienen la capacidad de producir biopolmeros de diferentes clases ente los cuales encontramos: exopolisacridos, biosurfactantes, liposomas, lectinas y bioplsticos. Los exopolisacridos (EPS) son biopolmeros producidos extracelularmente por bacterias halfilas, teniendo aplicaciones en la industria alimentaria, farmacutica y en procesos de biodegradacin (http://cbt.fcyt.umss.edu.bo/trabajo/verarticulo.ph p?cod_art=5). Los exopolisacridos sulfatados son poco frecuentes entre los exopolisacridos de origen microbiano, sin embargo, algunos microorganismos halfilos estudiados sintetizan polmeros en cuya composicin se detectan grupos sulfato. Una de las ventajas de estos exopolisacridos es que tienen actividad moduladora de la proliferacin de distintos tipos celulares, entre ellos clulas tumorales y bloquea la entrada de clulas virales en clulas hospederas, adems, los exopolisacridos le dan la capacidad a las clulas bacterianas de formar biofilms permitindoles la adhesin a diferentes superficies. Otras de las ventajas que le conceden los exopolisacridos a las bacterias halfilas es la capacidad de captar metales pesados, su actividad viscozante y emulgente, adicionalmente algunos exopolisacridos pueden ser fuentes de oligosacridos ricos en fucosa, presentando potenciales aplicaciones en cosmtica y medicina (Mata-Gmez, 2006). El exopolmero poli(-D-cido glutmico) (PGA) puede ser usado como un espesante, humectante, material de liberacin sostenida, o portador de medicamentos biodegradable en la industria farmacutica o alimentaria (Kunioka, 1997). Los biosurfactantes mejoran la remediacin de suelo y agua contaminados con aceite, disminuyen la tensin superficial, incrementan la solubilidad y movilidad de hidrocarburos hidrofbicos, promo-

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viendo la degradacin (Figura 2). Los microorganismos halfilos o halotolerantes productores de biosurfactantes podran jugar un papel importante en la acelerada remediacin de medios ambientes salinos contaminados con aceite (Margesin and Schinner, 2001).

Biotecnologa Alimentaria Los microorganismos halfilos juegan un importante papel en los procesos de fermentacin que ocurren en presencia de sal; estos microorganismos catalizan la fermentacin y generan los compuestos encargados de dar caractersticas de sabor, consistencia y aroma a los productos resultantes, adicionalmente los microorganismos halfilos producen compuestos que pueden servir como control de microorganismos no deseados (Margesin and Schinner, 2001). Los microorganismos halfilos han sido usados para la produccin de suplementos alimenticios y colorantes para alimentos; una alternativa promisoria para la produccin de cidos grasos poliinsaturados de cadena larga, son las bacterias marinas, las cuales permiten procesos de purificacin convencionales, rpidos rangos de produccin y buena consistencia del producto y rendimiento. En el caso de los colorantes, los -carotenos son usados en la industria de alimentos como colorantes naturales, como precursores de la vitamina A, como aditivos en cosmticos, preparaciones multivitamnicas, y productos saludables. Se ha reportado que las bacterias halfilas extremas tienen un ptimo crecimiento y un buen rendimiento en la produccin de carotenoides en presencia de 25% de NaCl (Margesin and Schinner, 2001).

Figura 2. Produccin de emulsificantes del petrleo por bacterias halfilas aisladas en el Departamento de ISA-ENCB (Foto: Mnica Bentez) Se ha aplicado la gelificacin de exopolisacridos bajo condiciones alcalinas para remover colorantes de efluentes textiles (Margesin and Schinner, 2001). Los liposomas son usados en medicina y cosmticos para el transporte de compuestos a sitios especficos en el cuerpo. Lpidos vinculados al ter de arqueas halfilas tienen una alta estabilidad qumica y resistencia contra las esterasas y por lo tanto ms alto rango de supervivencia que los liposomas basados en derivados de cidos grasos (Margesin and Schinner, 2001). Las lectinas, protenas selectivas unidas a azcar, son herramientas tiles para la investigacin de la superficie celular y marcadores celular. Son usadas como marcadores de las modificaciones de la superficie celular para la deteccin de clulas malignas (Margesin and Schinner, 2001). Las bacterias halfilas tambin han sido usadas para la produccin de bioplsticos, los polihidroxialcanoatos (PHA) son compuestos bacterianos acumulados intracelularmente. Como plsticos biodegradables podran reemplazar termoplsticos derivados del aceite en algunos campos (Margesin and Schinner, 2001).

Figura 3. Pigmentos naturales en los alimentos Bioremediacin

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La presencia de sodio y condiciones salinas en los suelos, interfiere en el crecimiento adecuado de la mayora de los cultivos y por lo tanto constituye uno de los problemas ms serios que enfrenta la agricultura sostenible en todo el planeta. La FAO y la UNESCO calculan que el rea total de suelos salinos en el mundo es de 397 millones de hectreas y los suelos sdicos corresponden a 434 millones de hectreas (Oldeman, 1991; Brandt and Thornes, 1996; FAO, 2000; FAO, 2002). La recuperacin de los suelos sdicos se ha hecho principalmente cambiando el sodio en complejo coloidal por otro catin, aplicando principalmente sales solubles de calcio sales de calcio con baja solubilidad (cal agrcola), siendo esta una opcin costosa, Snchez-Leal y Arguello- Arias, (2006) proponen una alternativa en la cual algunas bacterias halfilas son capaces de capturar sodio in vitro y pueden ser posiblemente utilizadas en un biorreactor para la bioremediacin de suelos sdicos y salinos, formando un consorcio entre bacterias autctonas y bacterias a las cuales se les ha comprobado su capacidad de capturar sodio. Se han aprovechado la habilidad de microorganismos halfilos/ halotolerantes de utilizar aminas aromticas como una fuente de carbono y energa ( Li et al, 2010) y se ha comprobado que crecen sobre compuestos aromticos (Cuadros- Orellana et al, 2006; Arulazhagan and Vasudevan, 2009; Li et al 2006; Peyton et al, 2006 ). Asimismo se han desarrollado procesos para el tratamiento biolgico eficiente de ecosistemas contaminados con productos del petrleo en presencia de sal (Betancur-Galvis et al, 2006). Existen algunos reportes sobre la capacidad de los microorganismos halfilos para degradar colorantes textiles (Kolekar et al, 2008). En el Laboratorio de Residuos Peligrosos hemos realizado el aislamiento de microorganismos halfilos a partir de ambientes salinos ubicados en Chile y Mxico (Figura 4).

Figura 4. Degradacin de Naranja II por halfilos aislados en el Departamento de ISA-ENCB (Foto: Laura Castillo). Se han aislado bacterias halfilas capaces de degradar compuestos orgnicos halogenados como tricloroetileno, los cuales son de gran importancia debido a su persistencia y toxicidad (Fuse, 1998). Algunos autores han aislado bacterias halfilas capaces de degradar lindano, DDT y 2,4-D (Oesterhelt et al., 1998; Maltseva et al., 1996). Conclusiones. Los microorganismos halfilos presentan un gran potencial de aplicacin en diferentes campos de la biotecnologa, el uso de microorganismos para la degradacin de contaminantes es un campo de investigacin en desarrollo. El uso de microorganismo para la obtencin de metabolitos o enzimas presenta ventajas biotecnolgicas debido a que las condiciones extremas requeridas para su crecimiento impiden los problemas de contaminacin inherentes a los procesos fermentativos. Agradecimientos. Este trabajo forma parte de las actividades enmarcadas en el proyecto SIP 20110775 del Instituto Politcnico Nacional.

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