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UNIVERSIDADE FEDERAL DE CAMPINA GRANDE CENTRO DE SADE E TECNOLOGIA RURAL UNIDADE ACADMICA DE CINCIAS BIOLGICAS CURSO DE ODONTOLOGIA MONITORIA

DE BIOFSICA ESTUDO DIRIGIDO II ALUNO: _________________________________________________

1- Quais so as caractersticas da eletroforese? Mantm as caractersticas fsicas e qumicas; Usa pequenas quantidades de amostras; Tcnica relativamente simples, rpida e de alto valor informativo quanti e qualitativo(Evidenciao de protenas taxonomia, fisiologia e bioqumica dos seres vivos; Ferramenta indispensvel para caracterizar os cidos nuclicos.)

2- Cite trs amostras que podem servir para a eletroforese?

Sangue, carboidrato e protenas.

3- Defina eletroforese:

a tcnica que utiliza princpios ou leis elementares da eletricidade definida pela migrao de espcies qumicas ionizadas, de acordo com suas cargas e massas molares em campo eltrico.

4- Sabe-se que a eletroforese uma tcnica que utiliza princpios ou leis elementares da eletricidade. Cite todas as leias e suas frmulas.

Lei de Coulomb:

; Lei de Cooper: F = Vq/d; Lei de Stokes:f = 6..r.n.v

(questo 4)

5- Cite a frmula de Stokes com a frmula de Cooper.

Questo repetida( questo 4)

6- Na eletroforese quais so as caractersticas eltricas necessrias para seu andamento?

Voltagem constate; Corrente constante; Potncia constante; E na eletroforese em gel de poliacrilamida a temperatura acaba desnaturando as protenas.

7- Cite todos os meios de suporte na eletroforese, tanto qumico quanto fsico.

Qumico e fsico: Papel de filtro; Gel de Agar; Acetato de celulose; Gel de amido; Gel de poliacrilamida.

8- Cite exemplos de quatro tipos de cuba de eletroforese e descreva a que foi utilizada na aula prtica (laboratrio).

Cuba de eletroforese vertical, cuba de eletroforese horizontal, sistema eletroblotting completo e cuba de sequenciamento. Na sala de aula foi utilizada a cuba de eletroforese vertical composta por placa de slica, placa de vidro, separador, gel de corrida, gel de concentrao, pente e a fonte eltrica.

9- Quais os componentes de uma cuba de eletroforese vertical?

Resposta na questo oito

10- Descreva os processos da eletroforese em cuba vertical, bidimensional, e a focalizao isoeltrica de protena em gel de SDS (dodecilsulfato de sdio) tridimensional.( ESSA QUESTO PARA ENTENDIMENTO DO ASSUNTO. J HOUVE QUESTES EM PROVAS QUE O PROFESSOR PEDIU A ELETROFORESE 2D)
mecanismo da eletroforese vertical. 1 a amostra contendo as macromolculas devidamente desnaturadas e reduzidas distribuda ao nos poos ou cavidades do gel de suporte; 2 aps a distribuio o equipamento fechado e o campo eltrico aplicado no gel, atravs de um dispositivo diferencial de energia eltrica e as macromolculas vo sendo distribudas pela extenso do gel e so separadas em funo de sua massa e tamanho molecular que so os principais fatores que determinam a mobilidade eletrofortica de acordo com o esquema: No topo do gel existe uma mistura de macromolculas de variados tamanhos e massas moleculares de modo que quando o campo eltrico aplicado as molculas menores migram primeiro, pela malha formada pelo gel. Ao passo que durante a distribuio o gel funciona como uma peneira molecular e as molculas com massa molecular mais elevada vo sendo retidas ao longo do processo pelas malhas gel o que permite que as macromolculas sejam analisadas pela sua massa molecular.

No final do processo quando todas as macromolculas esto ditribuidas o gel mergulhado em uma soluo corante.
Para protenas so usadas soluo de nitrato de prata que detecta protenas mesmo que a concentrao seja muito baixa. Ou o gel mergulhado em uma soluo cida e alcolica de corante azul de coomassie. Um perodo de tempo aguardo e em seguida observa-se o eletroforetograma que nada mais do que o gel corado. Para analise de cidos nuclicos (DNA e RNA) so usados corantes como brometo de etidio, laranja de acridina e profalvina que so corantes com estrutura aromtica, quando sob a luz utravioleta apresentam fluorescncia. mecanismo da eletroforese bidimensional ou 2D Essa tcnica oferece uma resoluo melhor, ou seja, um grau maior de detalhes no eletroforetograma final por que combina a focalizao isoeltrica e a eletroforese em gel SDS. Na eletroforese bidimensional o gel da focalizao isoeltrica colocado horizontalmente sobre um gel de sds, o campo eltrico aplicado e as macromolculas proticas so separadas de acrodo com o ponto isoeltrico e em funo de sua massa molecular, fornecendo um eletroforetograma que possibilita a visualizao e identificao de vrias protenas de uma s vez. Focalizao Isoeltricade protenas em Gel de SDS Uma tcnica muito poderosa para analise de protenas que proporciona alta resoluo chamada Focalizao Isoeltrica onde as protenas so separadas, atravs de seu ponto isoeltrico. A focalizao isoeltrica consiste na neutralizao das cargas das protenas onde um gel contendo anflitos (ons que se comportam como cido e base ao mesmo tempo), submetido a um campo eltrico de modo que no momento em que os anflitos migram em direo aos plos negativos e positivos de acordo com sua carga eltrica e distribuem-se pelo gel cilndrico, estabelecendo assim um gradiente de pH estvel onde as protenas iro migrar para um local onde seu ponto isoeltrico seja igual o do anflito.

No primeiro gel os anflitos adicionados so distribudos com a aplicao do campo eltrico. No segundo gel adicionada a soluo de protenas. No terceiro gel aplicado o campo novamente e as protenas migram em direo a seu ponto isoeltrico.

O processo de migrao termina por que as cargas se igualam, ou seja, pI = pH as cargas se anulam de modo que na equao inicial Z=0, e a protena focalizada ou seja ela para exatamente no ponto conhecido.

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