LAPORAN RESMI PRAKTIKUM MIROBIOLOGI INDUSTRI

MATERI ALKOHOL

Disusun Oleh:

Fatikhatul K. Ika S. Oei Stefanny Yuliana Satria Arief W.B.

NIM : 21030111120001 NIM : 21030111130062 NIM : 21030111130066

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK UNIVERSITAS DIPONEORO SEMARANG 2012

ALKOHOL HALAMAN PENGESAHAN

Kelompok Nama

: 13 / selasa : Fatikhatul K. Ika S. Oei Stefanny Yuliana Satria Arief W. B. 21030111120001 21030111130062 21030111130066

Materi

: Alkohol

Semarang, 5 Desember 2012

Asisten Pembimbing

Laboran

Puspita Firsty L. NIM. L2C009126

Jufriyah, S.T NIP. 19700109 199703 2 001

Dosen Pembimbing

Dr. Widayat ST, MT NIP. 19720609 199803 1 001

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ii

ALKOHOL RINGKASAN

Alkohol sangat diperlukan oleh manusia untuk obat-obatan, kosmetik, dan sebagainya. Alkohol dibuat dari bahan yang mengandung gula. Alkohol adalah senyawa yang memiliki gugus R-OH dan dapat dibut dalam berbagai macam cara, salah satunya dengan fermentasi. Karena pentingnya alkohol maka industry yang membuat alkohol semaikn banyak dijumpai, khususnya di negara maju. Fermentasi berasal dari kata fermence yang berarti mendidih. Hal ini terjadi pada gejala fermentasi yang terlihat gelembung udara yang merupakan akibat katabolisme aerobik menghasilkan CO2. Mulanya fermentasi digunakan untuk menunjukan proses perubahan gula menjadi alkohol yang berlangsung anaerob. Kemudian berkembang menjadi seluruh perombakan senyawa organik yang dilakukan mikroorganisme yang melibatkan enzim yang dihasilkan. Dalam percobaan kami menggunakan sari mangga untuk fermentasi menghasilkan alkohol. Langkah pertama yang dilakukan adalah pembuatan starter dengan sari buah mangga yang dicampur fermipan; 0,02 gr MgSO4; 0,2 gr KH2PO4; 0,1 gr urea. Aerasi starter dilakukan selama 3 hari. Setelah itu fermentasi dengan penambahkan starter 25%v, 30%v, 35%v. fermentasi dilakukan 5 hari dengan mencatat kadar glukosa sisa dan densitas hasil. Dari data yang diperoleh, densitas, jumlah koloni mengalami kenaikan pada proses pembuatan starter. Kadar glukosa sisa selama proses fermentasi mengalami penurunan karena aktivitas Saccharomyces cereviceae yang mengkonversi sebagian gula mnejadi etanol. Semakin banyak volume starter yang ditambahkan juga menyebabkan semakin berkurangnya kadar glukosa sisa. Karena semakin banyak Saccharomyces cereviceae yang mengkonsumsi dan mengubah gula mnejaid etanol. Dapat disimpulkan semakin besar volume starter yang ditambahkan dan semakin lama waktu fermentasi menyebabkan penurunan kadar glukosa sisa. Saran dalam percobaan ini adalah pada pembuatan starter, yeast dimasukkan saat media sudah dingin, waktu optimum fermentasi sebaiknya 4 hari, dan harus teliti pada analisa kadar glukosa sisa.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

iii

ALKOHOL SUMMARY

Alcohol is needed by humans for medicines, cosmetics, and so forth. Alcohol is made from materials that contain sugar. Alcohol is a substance that has the R-OH group and can dibut in a variety of ways, one with fermentation. Because of the importance of the alcohol industry, which makes alcohol semaikn prevalent, particularly in developed countries. Fermentation fermence derived from the word which means to boil. This occurs in the visible symptoms of fermentation air bubbles are a result of aerobic catabolism produces CO2. Originally used to refer to the process of fermentation of sugar into alcohol changes that lasted anaerobe. Later developed into entire overhaul of organic compounds that do microorganisms involving enzymes produced. In our experiments using mango juice for fermentation produces alcohol. The first step is the creation starter with mango juice mixed fermipan; 0.02 g MgSO4; 0.2 g KH2PO4; 0.1 g of urea. Aeration starter made for 3 days. After that fermentation with the addition of starter 25% v 30% v 35% v. fermentation carried out 5 days with record levels of residual glucose and density results. From the data obtained, the density, the number of colonies has increased in the process of making a starter. Residual glucose levels decreased during the fermentation process because cereviceae Saccharomyces activity that converts the sugar mnejadi ethanol. The more volume the added starter also leads to the reduction in residual glucose. As more and more consuming and Saccharomyces cereviceae mnejaid convert sugar ethanol. It can be concluded that the greater the volume of starter added and the longer fermentation causes a decrease in blood glucose residue. Suggestions in this experiment is the manufacture of starter, yeast is added when the medium has cooled, the optimum fermentation time should be 4 days, and to be thorough in the analysis of residual glucose.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

iv

ALKOHOL PRAKATA

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala limpahan rahmat, karunia dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan Laporan Resmi Praktikum Mikrobiologi Industri dengan materi Alkohol. Dalam laporan ini penulis meyakini sepenuhnya bahwa tidaklah mungkin menyelesaikan makalah ini tanpa doa, bantuan dan dukungan baik secara langsung maupun tidak langsung. Pada kesempatan ini penulis ingin memberikan rasa terima kasih kepada : 1. Asisten Laboratorium Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro. 2. Kedua orang tua atas doa, kesabaran, limpahan kasih sayang, dukungan, dan pengorbanan yang telah diberikan. 3. Teman-teman angkatan 2011 Teknik Kimia Universitas Diponegoro. Penulis menyakini bahwa laporan ini jauh dari kesempurnaan. Mohon maaf apabila terdapat kekurangan bahkan kesalahan. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak berkaitan dengan laporan ini. Akhir kata, semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi semua pihak dan dapat berguna sebagai bahan penambah ilmu pengetahuan.

Semarang, 5 Desember 2012

Penulis

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL DAFTAR ISI

HALAMAN PENGESAHAN..... ..................................................................... ii RINGKASAN .. ............................................................................................... iii SUMMARY... .. ............................................................................................... iv PRAKATA........... ............................................................................................ v DAFTAR ISI........... ......................................................................................... vi DAFTAR TABEL ............................................................................................ viii DAFTAR GAMBAR.......... ............................................................................. ix BAB I PENDAHULUAN.... ............................................................................ 1 1.1 Latar Belakang ................................................................................. 1 1.2 Tujuan Percobaan .............................................................................. 1 1.3 Manfaat Percobaan ............................................................................ 2 BAB II TINJAUAN PUSTAKA...................................................................... 3 2.1. Landasan Teori yang Mendukung .................................................... 3 1. Pengertian Umum Alkohol. ..................................................... 3 2. Pembuatan Starter .................................................................... 3 3. Teori Fermentasi. ..................................................................... 4 4. Penyiapan Bersih ......................................................................... 4 5. Mekanisme Fermentasi Alkohol .................................................. 5 6. Langkah Fermentasi Alkohol ...................................................... 6 7. Komposisi Utama Proses Fermentasi .......................................... 6 8. Fungsi Aerasi pada Pertumbuhan Bakteri ................................... 6 9. Hal-hal yang Mempengaruhi Fermentasi .................................... 7 10. Fungsi Reagen ........................................................................... 7 11. Manfaat Alkohol ........................................................................ 8 2.2. Penelitian Terdahulu ........................................................................ 8 BAB III METODOLOGI PERCOBAAN ........................................................ 10 3.1 Bahan dan Alat yang Digunakan....................................................... 10 3.2 Gambar Alat dan Keterangan ............................................................ 10 3.3 Variabel Percobaan ........................................................................... 11 Laboratorium Mikrobiologi Industri vi

ALKOHOL 3.4 Cara Kerja.... ..................................................................................... 12 BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN ................................ 15 4.1 Hasil Percobaan ................................................................................. 15 4.2 Pembahasan ....................................................................................... 15 1. 2. 3. Fenomena Fermentasi Ethanol dari Sari Mangga ....................... 15 Pengaruh Waktu Fermentasi Terhadap %SB .............................. 18 Pengaruh %Volume Starter Terhadap %SB ............................... 19

BAB V PENUTUP ........................................................................................... 21 5.1 Kesimpulan ....................................................................................... 21 5.2 Saran .................................................................................................. 21 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 22 LEMBAR PERHITUNGAN ............................................................................ A-1 LAPORAN SEMENTARA ............................................................................. B-1 LEMBAR KUANTITAS REAGEN ................................................................ C-1 REFERENSI LEMBAR ASISTENSI

Laboratorium Mikrobiologi Industri

vii

ALKOHOL DAFTAR TABEL

Tabel IV.1 Tabel %SB variabel 1 sampai 6 dari hari ke 1 sampai ke 6............ 15 Tabel IV.2 Tabel Densitas Starter I dan II.. ...................................................... 15 Tabel IV.3 Tabel Jumlah Koloni Pada Hari Pertama Pembuatan Starter.. ....... 16 Tabel IV.4 Tabel Jumlah Koloni Pada Hari Ketiga Pembuatan Starter.. .......... 16

Laboratorium Mikrobiologi Industri

viii

ALKOHOL DAFTAR GAMBAR

Gambar III.1 Rangkaian Alat.. ......................................................................... 10 Gambar IV.1 Grafik Waktu vs % SB Pada Fermentasi Sari Buah Mangga .... 18 Gambar IV.2 Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB dari hari 1 s.d. 2 ...... 19

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ix

ALKOHOL BAB I PENDAHULUAN

I.1.

Latar Belakang Seiring dengan berkembangnya teknologi dan bertambahnya penduduk, energi sebagai kebutuhan manusia cenderung meningkat. Bahan bakar fosil yang saat ini digunakan tidak akan bertahan dalam jangka waktu lama. Apabila tidak ditemukan cadangan energi terbaharui, minyak bumi diperkirakan akan habis dalam waktu kurang dari 10 tahun, gas bumi 30 tahun dan batubara akan habis sekitar 50 tahun. Oleh sebab itu diperlukan sumber energi alternatif baru yang mampu mencukupi atau menghemat penggunaan enrgi dari bahan bakar fosil. Bioethanol merupakan salah satu sumber energi alternatif yang terbaharui. Bioethanol mudah terbakar dan memiliki kalor bakar yang besar, yaitu kira kira 2/3 dari reaktor bakar netto bensin.bioethanol dapat dibuat dari zat pati/ amilum (C6H10O5)n yang dihidrolisa menjadi glukosa kemudian difermentasi dengan mikroorganisme Saccharomyces cereviceae pada suhu kamar (2730oC). Hasil fermentasi kemudian didestilasi sehingga dihasilkan ethanol dengan Kadar 95, 6%. Pada percobaan kali ini digunakan bahan baku sari mangga sebagai media fermentasi alkohol. Sari mangga dipilih karena karbohidratnya yang lumayan tinggi, yaitu sekitar 15 gram dalam 100 gram sari buah (USA Nat. Nutrient Database, 2010) Tingginya kadar glukosa meningkatkan konversi ethanol.

I.2.

Tujuan Percobaan 1. Mengetahui % glukosa sisa pada proses fermentasi ethanol dengan bahan baku sari mangga pada berbagai konsentrasi substrat dan presentase % volume starter yang bervariasi. 2. Mengetahui konversi volume ethanol yang dihasilkan pada berbagai konsentrasi substrat dan penambahan % volume starter yang berbeda.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL I.3. Manfaat Percobaan 1. 2. 3. Mampu membuat starter untuk pembuatan alkohol. Mampu mengetahui proses pembuatan alkohol dengan fermentasi. Dapat melakukan percobaan sesuai prosedur.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL BAB II TINJAUAN PUSTAKA

II.1. Landasan Teori yang Mendukung 1. Pengertian Umum Alkohol Alkohol adalah senyawa yang memiliki rumus molkul R-OH gugus alkil tersubstitusi. Gugus ini bisa alkohol primer, sekunder, tersier bisa juga rantai terbuka. Ikatan rangkap ataupun rantai tertutup atau siklis yang berikatan dengan gugus aromatis. (Organic Chemistry 3th hal 492-493). Alkohol dapat dibuat dari bahan yang mengandung gula atau dari bahan yang dapat dijadikan gula. Bagi bahan bergula pembuatan alkohol lebih sederhana. Untuk bahan yang dapat dijadikan gula diperlukan proses pendahuluan sacharifikasi : 1. Sacharifikasi secara kimia Contohnya hidrolisa secar kimia dengan katalisator asam, misalnya hidrolisa pati dengan katalisator HCl ataupun H2SO4. 2. Sacharifikasi secara biokimia Yaitu dengan aktivitas enzim misalnya amilase dan selulosa, misalnya sacharifikasi pati secara biochemist dengan amilase. yang disebut sacharifikasi, macam-macam proses

2.

Pembuatan Starter Tujuan pembuatan starter untuk memperbanyak yeast dan untuk melatih yeast tersebut pada kondisi yang akan difermentasi. Syarat yeast yang dapat dipakai dalam proses fermentasi : a. Mempunyai kemampuan tumbuh dan berkembang biak dengan cepat dalam membuat struktur yang sesuai. b. Dapat menghasilkan enzim dengan cepat untuk mengubah gula menjadi alkohol. c. Mempunyai daya fermentasi yang tinggi terhadap glukosa, fruktosa, galaktosa dan maltosa.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL d. Tahan terhadap mikroba lain.

3.

Teori Fermentasi Fermentasi berasal dari kata fervere yang berarti mendidih. Hal ini tejadi pada gejala fermentasi yang terlihat gelembung udara yang merupakan akibat katabolisme anaerob yang menghasilkan CO2. Mulanya fermentasi digunakan untuk menunjukan proses perubahan glukosa menjadi alkohol yang berlangsung anaerob, kemudian berkembang menjadi seluruh perombakan senyawa organik yang dilakukan

mikroorganisme yang melibatkan enzim yang dihasilkannya. Produk fementasi dapat digolongkan menjadi 4 jenis yaitu produk biomassa, produk enzim sintesis, produk metabolit primer serta produk transformasi. ( Diktat Mata Kuliah Mikrobiologi Industri hal 1-2 )

4.

Penyiapan Bersih Yeast yang digunakan sebagai starter harus murni, volume untuk pemasukan harus agak besar dengan Aceptac Perth yang telah steril dimasukan dalam media pembiakan. Ditulari dengan yeast murni, lalu dimasukan ke dalam tabung yeast. Dalam tabung ini ditambahkan asam sulfat dan ammonium sulfat sehingga pH 4-5 dan suhu diatur 25-80oC. Hasil dari tabung yeast dimasukan ke dalam ruang fermentasi. Pada mulanya yeast memerlukan O2 untuk pertumbuhannya maka pada larutan anaerob diberikan O2. Setelah terjadi CO2 dan reaksi menjadi anaerob, pemberian O2 dihentikan dan diusahakan tidak ada O2 yang masuk pada ruang fermentasi. Suhu selama fermentasi harus dijaga pada kondisi optimum antara 20-30oC, waktu fermentasi biasanya 30-70 jam. Tergantung pada suhu fermentasi, konsentrasi gula dan faktor lain. ( Buku Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Industri )

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL 5. Mekanisme Fermentasi Alkohol

jalurHDP glukosa 2 piruvat

2NAD,2NaOH etanol 2 Asetaldehid

dihidrogen asi, Asetaldehid NADH CH3 CO KOA NADH CH CHO KOA 3

Piruvat,dekarboksi lase CH COCOH CH CHO CO 3 3 2

Piruvat,dekarboksi lase CH NADH CH CH OH NAD 3 2 3 2

Fermentasi alkohol dapat menggunakan bakteri lajur peruraian glukosa melalui jalur HDEP, namun demikian dapat dengan bakteri yang melalui jalur HDP seperti Sarcins Ventricoli.

ATP Glukosa ADP Glukosa 6 phospat NAD,NADH 6 Phospat glukonat H2O (KDOP) Phospoglukonat dehidrase 2 Keto 3 deoksiglukonat 6 phospat Heksokinase

NAD NADH 2 piruvat 2 ADP, 2 ATP Acetaldehid Gliseraldehid 3 phospat + CO2

NADH, NAD Ethanol

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL Proses fermentasi diatas termasuk fermentasi heterolaktat. Fermentasi 1 mol glukosa menghasilkan masing-masing 1 mol asam laktat, ethanol dan karbondioksida melalui jalur fosfoketolase (thean dan lues, 2011). Glukosa 1 mol dikonversi menjadi glukosa 6 phospat dengan bantuan molekul ATP dan enzim heksokinase. Glukosa 6 phospat yang tinggi akan mengkonversi sendiri fruktosa 6 phospat menjadi 6 phospat glukonat. Phospat 6 glukonat bereaksi dengan air dan dengan bantuan enzim phospoglukonat dehidrase menghasilkan 2 keto 3 deoksiglukonat 6 phospat. Kemudian dipecah menjadi acetaldehide dan gliseraldehide 3 phospat. Acetaldehide dengan bantuan NADH dan NAD akan dikonversi menjaid etanol, sedangkan gliseraldehide 3 phospat akan dikonversi lebih lanjut menjadi asam laktat. (jurnal sciencedirect Factors Affecting Ethanol Fermentation Using Saccharomyces cereviceae BY4742, www.sciencedirect.com )

6.

Langkah Fermentasi Alkohol 1. 2. 3. 4. 5. Persiapan Inokulum Persiapan Media Fermentasi Analisa Ethanol Analisa Glukosa

7.

Komposisi Utama Proses Fermentasi 1. 2. 3. 4. Fermentasi media. Sterilisasi media, fermentasi dan peralatan. Produk starter yang aktif, murni untuk inokulasi skala tangki industri. Pemeliharaan, pertumbuhan mikroorganisme pada aktivitas yang optimum untuk pembentukan produk. 5. Pemindahan dan pemurnian.

8.

Fungsi Aerasi pada Pertumbuhan Yeast. 1. Mencegah terjadinya fermentasi dan menaikkan respirasi. 6

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL 2. 3. 4. Memberikan pengadukan terhadap medium. Mengeluarkan bahan-bahan beracun. Merangsang sel vegetatif untuk tumbuh.

9.

Hal-hal yang Mempengaruhi Fermentasi 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Kadar gula pH Waktu Suhu Nutrien Volume Starter Pemilihan Yeast O2 : 10-18% : 4-4,5 : 7 hari : 80oF : mengandung unsur makro dan mikro nutrient : 5%V : sesuai dengan syarat yang sudah ditentukan : tidak diperlukan

10. Fungsi Reagen 1. 2. Glukosa KH2PO4 : Bahan yang akan difermentasikan : Sebagai sumber nutrient untuk mempercepat pertumbuhan mikroba 3. MgSO4.7H2O : Sebagai sumber nutrient untuk mempercepat pertumbuhan mikroba 4. NaOH 5. H2SO4 6. Indikator MB : Pengaturan pH (menetralkan pH) : Pengaturan pH : Untuk titrasi saat menganalisa kadar glukosa sebelum dan sesudah fermentasi 7. Aquadest 8. Ragi : Untuk pengenceran : Sebagai sumber mikroorganisme (Saccaromycaes cereviceae) 9. Fehling A+B : Untuk titrasi atau penentuan TAT

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL 11. Manfaat Alkohol Bahan obat-obatan 1. Industri farmasi 2. Pembuatan minuman 3. Pemberi aroma 4. Zat pembunuh kuman 5. Bahan baker 6. Pelarut 7. Reagensia 8. Bahan baku sintesa

II.2. Penelitian Terdahulu Teknologi produksi bioetanol berikut ini diasumsikan menggunakan jagung sebagai bahan baku, tetapi tidak menutup kemungkinan digunakannya biomassa lain. Secara umum, produksi bioetanol ini mencakup 5 rangkaian proses yaitu : 1. Persiapan Bahan Baku Bahan baku untuk produksi bioetanol bisa didapatkan dari berbagai tanaman baik secara langsung yang menghasilkan gula sederhana ataupun dari tepung jagung, singkong, dan lainnya. Tebu dan gandum digiling untuk mengekstrak gula, tepung, dan material selulosa dihancurkan. Tepung dikonversi menjadi gula dan sacharifikasi dengan penambahan air, enzim, dan panas. 2. Tahapan Liquifaction Pencampuran dengan air secara merata hingga menjadi bubur, lalu pH diatur dan enzim dipanaskan. Pemanasan bubur 800C-900C, dimana tepung yang bebas akan mengalami gelatinasi. 3. Tahap Sacharifikasi (Pemecahan Gula Kompleks Menjadi Gula

Sederhana) Pendinginan bubur sampai suhu optimum, Pengaturan pH, Penambahan enzim, 8

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL 4. Mempertahankan pH dan suhu 500C-600C. Fermentasi Melibatkan penambahan enzim yang diletakkan pada ragi agar dapat bekerja pada suhu optimum. Proses ini menghasilkan etanol dan CO2. Bubur lalu dialirkan kedalam tangki fermentasi dan didinginkan pada suhu optimum 270C-320C. dilakukan pada kondisi bebas kontaminasi. Selanjutnya, ragi menghasilkan etanol 8%-12%. 5. Destilasi Destilasi dilakukan untuk memisahkan etanol dari etanol cair tersebut dengan memanaskan larutan tersebut pada suhu 780C-1100C akan mengakibatkan sebagian besar etanol menguap dan akan dihasilkan 95%V. ( Hidayat, N. Achmad, 2006 )

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL BAB III METODOLOGI PERCOBAAN

III.1 Alat dan Bahan yang Digunakan A. Bahan 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. B. Alat 1. 2. 3. 4. : 8. 9. Ragi roti Fehling A+B secukupnya

Glukosa KH2PO4 MgSO4 NaOH secukupnya H2SO4 encer secukupnya Indikator MB secukupnya Aquadest secukupnya : Erlenmeyer Buret, Statif, Klem Gelas ukur Pippet tetes

10. Sari buah mangga 11. Urea 12. Sukrosa

5. 6. 7. 8.

Beaker glass Pengaduk Autoclave Kompor listrik

III.2 Gambar Alat dan Keterangan 1. 3.

4.

. 2 5.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

10

ALKOHOL 6. 7.

Keterangan : 1. Buret, Statif, Klem, Erlenmeyer 2. Gelas Ukur 3. Pippet Tetes 4. Beaker Glass III.3 Variabel Percobaan Variabel tetap: 1. pembuatan Starter Volume : 100 ml MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr fermentasi %v starter = 25%v, 30%v, 35%v var1 : 60ml starter 1 var2 : 60ml starter 2 var3 : 70ml starter 1 var4 : 70ml starter 2 var5 : 80ml starter 1 var6 : 80ml starter 2 KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan: 0,4 gr pH waktu 2.Fermentasi Volume : 200 ml MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan : 0,4 gr Laboratorium Mikrobiologi Industri 11 :4 : 3 hari variabel berubah starter1 : 75ml sari mangga + 25ml lar gula starter2 : 25ml sari mannga +75ml lar gula 5. Pengaduk 6. Autoclave 7. Kompor Listrik

ALKOHOL waktu III.4 Cara Kerja A. Pembuatan Starter 1. Buat larutan glukosa dan sari mangga dengan basis 100 ml dan tambahkan masing-masing (seperti KH2PO4, MgSO4, atau urea sesuai variabel) sebagai nutrient. 2. 3. 4. 5. Larutan tersebut disterilkan dengan cara dididihkan. Dinginkan pada suhu kamar. Atur pHnya 4. Tambahkan 0,4 gram ragi (fermipan) ke dalam masing-masing larutan glukosa. 6. Menghitung jumlah koloni dengan alat Hemositometer - Ambil 1 ml starter kemudian diencerkan sampai 10 ml. - Ambil 1 ml larutan tersebut diencerkan lagi menjadi 10 ml. - Letakan beberapa tetes larutan tersebut pada kaca preparat kemudian amati dengan Hemositometer. - Hitung jumlah koloni dengan rumus : : 7 hari

7.

Larutan lalu diaerasi selama 3 hari.

B. Fermentasi Media 1. Analisa Glukosa Standar a. b. c. Pembuatan glukosa standar. Larutkan 1,25 gram glukosa anhidrit sampai 500 ml. Standarisasi kadar glukosa : Ambil 5 ml glukosa standar, encerkan sampai 100 ml, ambil 5 ml, netralkan pHnya. Tambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Titrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 600C-700C sampai warna biru hampir hilang lalu tambahkan 2 tetes MB. Laboratorium Mikrobiologi Industri 12

ALKOHOL Titrasi lagi dengan glukosa standar sampai warna biru menjadi merah bata. 2. Catat kebutuhan titran.

Persiapan Sari Buah a. b. c. Siapkan sari buah yang telah bebas dari ampas sesuai variabel. Sari buah disterilkan dengan cara didihkan. Dinginkan sampai suhu kamar, lalu atur pH 4,5.

3.

Mengukur Kadar Glukosa Sari Buah a. b. c. Ukur densitas sari buah. Cari M (lihat langkah kerja terakhir). Ukur kadar glukosa sari buah dengan rumus berikut : ( )

4.

Penentuan Kadar Glukosa Substrat a. b. Atur kadar glukosa substrat sebelum fermentasi sebesar 15 %W. % SB < 15%, maka perlu ditambah sukrosa : ( ( ) )

Berat sukrosa = X mol . 342 gr/mol = Y gram Y gram dilarutkan ke dalam substrat tersebut. 5. Fermentasi media sari buah a. b. c. d. Ambil substrat yang telah diatur kadar glukosanya. Tambahkan starter sesuai variabel. Ukur densitas dan volume konstan sebelum fermentasi. Fermentasi anaerob selama 7 hari.

C. Analisa Hasil 1. 2. 3. Ukur volume total dan densitas setelah fermentasi. Cari F dan M. Analisa kadar glukosa hasil fermentasi dengan rumus :
( )

4.

Menghitung volume alkohol 13

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL a. Kadar alkohol terfermentasikan (%gf)

b.

Mol glukosa terfermentasi

c.

Volume alkohol

D. Cara Penentuan M (M = Volume titran) 1. 2. 3. Ambil 5 ml sari buah, encerkan hingga 100 ml, ambil 5 ml. Tambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Titrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 600C-700C, sampai warna biru hampir hilang, lalu tambahkan 2 tetes MB. 4. Titrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan sampai warna biru menjadi merah bata. 5. Catat kebutuhan titran.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

14

ALKOHOL BAB IV HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil Percobaan Berikut adalah hasil fermentasi ethanol dari sari buah mangga yang kami lakukan. Analisis kadar glukosa dilakukan dengan metode titrasi

menggunakan titran Glukosa Anhidrit dengan indikator MB. Hari 1 2 3 4 5 Var 1 %SB 10.02 8.36 8.99 5.1 3.45 Hari 1 2 3 4 5 Var 2 %SB 11.66 11.11 8.276 2.77 2.65 Hari 1 2 3 4 5 Var 3 %SB 11.66 9.31 8.643 8.387 1.56

Var 4 Hari %SB 1 5.6 2 6.511 3 4.746 4 7.84 5 0.02

Hari 1 2 3 4 5

Var 5 %SB 11.21 7.425 7.706 2.39 1.86

Hari 1 2 3 4 5

Var 6 %SB 10.472 3.7 3.25 1.86 2.94

Tabel IV.1 %SB variabel 1 sampai 6 dari hari ke 1 sampai ke 6

IV. 2 Pembahasan 1. Fenomena Fermentasi Ethanol dari Buah Mangga a. Keberhasilan Pembuatan Starter Berikut adalah data densitas variabel I dan II pada hari ke-2 dan ke-3 pembuatan starter:

Variabel/Hari I II

2 1,0592 1,0588

3 1,095 1,076

Tabel IV.2. Densitas Starter I dan II dalam Satuan g/ml Laboratorium Mikrobiologi Industri 15

ALKOHOL Jika dilihat dari densitasnya, baik starter I maupun starter II mengalami kenaikan densitas seiring dengan waktu. Fenomena ini menunjukkan bahwa starter yang dimasukkan kedalam media berhasil tumbuh dan berkembang, karena seiring dengan naiknya jumlah Saccharomyces cereviceae, maka densitas akan naik juga. Hal ini dikarenakan bertambahnya jumlah S.cereviceae juga akan menambah massa dari starter. Dengan menggunakan hemocytometer dengan pengenceran 100ml, didapatkan koloni yang ada pada hari pertama pembutan starter adalah sebagai berikut:

Starter I II

Jumlah Koloni 1,65 x 1029 1,65 x 1031 dalam Satuan (yeast sample-1)

Tabel IV.3. Jumlah Koloni Pada Hari Pertama Pembuatan Starter

Sedangkan dengan metode dan volume pengenceran yang sama, didapatkan koloni yang ada pada hari ketiga pembuata starter adalah sebagai berikut: Starter I II Jumlah Koloni 1.12 x 1040 1.23 x 1044 dalam Satuan (yeast sample-1)

Tabel IV.4. Jumlah Koloni Pada Hari Ketiga Pembuatan Starter

b. Dari Tabel 2 dan Tabel 3 terlihat jelas bahwa terjadi kenaikan jumlah koloni yang sangat signifikan. Hal ini menunjukkan sangat bahwa pesat,

Saccharomyces

cereviceae

berkembang

dengan

menunjukkan bahwa media sangat cocok untuk

pertumbuhan dan

metabolisme Saccharomyces cereviceae. Sehingga dapat disimpulkan pembuatan starter untuk pembuatan ethanol berhasil dilakukan. Keberhasilan Fermentasi Laboratorium Mikrobiologi Industri 16

ALKOHOL Pada percobaan yang kami lakukan, pH larutan awal sebelum percobaan adalah 4. Pada hari pertama dan kedua pH ke-6 variabel tetap berada angka 4. Namun, untuk hari ketiga sampai kelima pH berubah menjadi 3. Penurunan pH ini disebabkan ethanol yang mulai terakumulasi pada treatment-treatment yang ada. Ethanol yang terakumulasi ini dapat menurunkan pH pada treatment karena ethanol bersifat asam (pKa = 15.9). Penurunan pH ini menunjukkan adanya ethanol yang terbentuk dan ini menunjukkan juga keberhasilan fermentasi yang kami lakukan. Densitas pada seluruh treatment per harinya cenderung fluktuatif, namun trend nya cenderung naik. Hal ini diakibatkan tumbuh dan berkembangnya S.cereviceae yang ada. Trend densitas yang cenderung naik ini menunjukkan adanya aktivitas S.cereviceae dalam berkembang dan tumbuh, termasuk didalamnya memfermentasikan glukosa menjadi ethanol, sehingga menunjukkan berhasilnya fermentasi yang kami lakukan. Ditinjau dari %SB (Glukosa), fermentasi yang kami lakukan juga dapat dikatakan berhasil, karena per harinya kadar glukosa cenderung menurun, mengindikasikan adanya konsumsi gula dari S.cereviceae untuk dijadikan ethanol. Berikut adalah reaksinya: C6H12O6 2 CH3CH2OH + 2 CO2 (Ballinger, P.; Long, F. A. 1960. Acid Ionization Constant of Methanol and some other Related Compounds. Journal of the American Chemical Society 82) (Morais PB, Rosa CA, Linardi VR, Carazza F, Nonato EA. 1996. Production of fuel alcohol by Saccharomyces strains from tropical habitats. Biotechnology Letters 18)

2. Pengaruh Waktu Fermentasi Terhadap %SB Berikut adalah grafik waktu vs % SB pada fermentasi sari buah mangga: Laboratorium Mikrobiologi Industri 17

ALKOHOL

Grafik Waktu vs. %SB Pada Fermentasi Sari Buah Mangga

15 %SB 10 5 0 0 1 2 3 Waktu (Hari) 4 5 6 Variabel I Variabel 2 Variabel 3 Variabel 4 Variabel 5 Variabel 6

Gambar 4.2.1. Grafik Waktu vs %SB Pada Fermentasi Sari Buah Mangga

Grafik diatas menunjukkan %SB cenderung menurun seiring dengan waktu, meskipun pada beberapa titik sempat mengalami kenaikan. Hal ini diakibatkan oleh aktivitas S.cereviceae yang ada pada treatment,

mengonsumsi glukosa menjadi ethanol. Berikut adalah reaksinya: C6H12O6 2 CH3CH2OH + 2 CO2 (Morais PB, Rosa CA, Linardi VR, Carazza F, Nonato EA. 1996. Production of fuel alcohol by Saccharomyces strains from tropical habitats. Biotechnology Letters 18)

3. Pengaruh %Volume Starter Terhadap %SB Laboratorium Mikrobiologi Industri 18

ALKOHOL

Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB pada Hari Pertama Fermentasi

15 10 Starter 1 5 0 0 50 Starter 2 12 10 8 6 4 2 0

Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB pada Hari Kedua Fermentasi

Starter 1 Starter 2

50

Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB pada Hari Ketiga Fermentasi

10 8 6 4 2 0 0 50 Starter 1 Starter 2 10 8 6 4 2 0

Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB pada Hari Keempat Fermentasi

Starter 1 Starter 2

50

Grafik Perbandingan %V Starter vs %SB pada Hari Kelima Fermentasi

4 3 2 1 0 0 50

Starter 1 Starter 2

Gambar 4.2.2. Grafik Perbandingan %V Starter vs. %SB dari Hari 1 s.d. 2

Pada Grafik hari ke-2 dan hari ke-3, trend %SB menurun seiring dengan naiknya %V yang ada di treatment. Hal ini sesuai dengan fenomena yang Laboratorium Mikrobiologi Industri 19

ALKOHOL seharusnya, dimana semakin banyak starter yang dimasukkan ke dalam treatment, laju konversi ethanol seharusnya semakin tinggi karena agen pengonversinya juga bertambah. Akan tetapi, pada grafik hari pertama, keempat dan kelima, fenomena yang terjadi tidak demikian. Hal ini dikarenakan distribusi S.cereviceae dalam starter yang tidak merata. Sehingga dalam 25%, 30% dan 35%V belum tentu ada sejumlah S.cereviceae dalam persen yang sama. Hal ini menyebabkan pada 25% bisa saja memiliki lebih banyak S.cereviceae yang ada dalam starter dibandingkan 30% atau 35%V.

BAB V Laboratorium Mikrobiologi Industri 20

ALKOHOL PENUTUP

V.1 KESIMPULAN 1. Fenomena fermentasi sari mangga ethanol dapat dilihat dari fenomena penurunan kadar glukosa dan penurunan densitas serta konversi % glukosa menjadi ethanol. 2. Penurunan densitas starter disebabkan karena mulai terjadi fermentasi akibat tidak adanya aerasi starter dan kenaikan densitas terjadi karena bertambahnya massa larutan. 3. Semakin banyak %v starter jumlah Saccharomyces cereviceae semakin banyak. 4. Penurunan % glukosa, semakin lama waktu fermentasinya semakin turun.

V.2 SARAN 1. 2. 3. Fermentasi harus dilakukan pada media yang terisolasi sempurna Untuk menaikan kadar gula pereduksi sebaiknya ditambahkan glukosa. Sebaiknya dilakukan aerasi starter agar fermentasi berjalan baik.

DAFTAR PUSTAKA Laboratorium Mikrobiologi Industri 21

ALKOHOL Villen, Rahael Almund, Walfer Bazani, Antonio Sacco Netto. Influence up the Accumulation of phospate and Mg ions in the yeast cells on the ethanol Productivity in batch. Ethanol fermentation. Brazillian archivas of Biology and technology (2009).

Watanabe, Masaroni. Bioethanol production from rice washing drainage and rice Bran. Journal of bioscience and bioengineering vol 108 no 6, 524-526 (2009).

Laboratorium Mikrobiologi Industri

22

ALKOHOL LEMBAR PERHITUNGAN

Pembuatan Starter 1. menghitung starter Hari I starter 1= 1,078 gr/ml starter 2 = 1,0754 gr/ml Hari II starter 1 = 1,095 gr/ml starter 2 = 1,076 gr/ml Hari III starter 1 = 1,059 gr/ml starter 2 = 1,0588 gr/ml

2. menghitung jumlah koloni Hari I 1. 2. Hari II 1. 2. yeast/sample yeast/sample yeast/sample yeast/sample

Fermentasi (menghitung %SB kadar glukosa) 1. Starter 1 25% : 30% : 35% : = 11,6%

Laboratorium Mikrobiologi Industri

A-1

ALKOHOL Starter 2 25% : 30% : 35% : 2. Starter 1 25% : 30% : 35% : Starter 2 25% : 30% : 35% : = 7,425% = 11,11% = 11,21%

3.

Starter 1 25% : 30% : 35% : Starter 2 25% : 30% : 35% : = 7,706% = 8,276%

Laboratorium Mikrobiologi Industri

A-2

ALKOHOL 4. Starter 1 25% : 30% : 35% : Starter 2 25% : 30% : 35% : = 2,39% = 2,77%

5.

Starter 1 25% : 30% : 35% : Starter 2 25% : 30% : 35% : = 1,86% = 2,65%

Laboratorium Mikrobiologi Industri

A-3

ALKOHOL

LAPORAN SEMENTARA PRAKTIKUM MIROBIOLOGI INDUSTRI

MATERI ALKOHOL

Disusun Oleh :

Kelompok Nama

: 13 / Selasa : 1. Fatikhatul K. Ika S. 2. Oei Stefanny Yuliana 3. Satria Arief W.B. 21030111120001 21030111130062 21030111130066

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI JURUSAN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK UNIVERSITAS DIPONEORO SEMARANG 2012

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-1

ALKOHOL I. Tujuan Percobaan 1. 2. Membuat alkohol dari sari buah mangga dengan cara fermentasi. Membandingkan hasil alkohol dari fermentasi dengan variabel tertentu.

II. Percobaan II.1 Bahan yang Digunakan : 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Glukosa KH2PO4 MgSO4 NaOH secukupnya H2SO4 encer secukupnya Indikator MB secukupnya Aquadest secukupnya 8. 9. Ragi roti Fehling A+B secukupnya

10. Sari buah mangga 11. Urea 12. Sukrosa

II.2 Alat yang Dipakai : 1. 2. 3. 4. Erlenmeyer Buret, Statif, Klem Gelas ukur Pippet tetes 5. 6. 7. 8. Beaker glass Pengaduk Autoclave Kompor listrik

II.3 Variabel Percobaan : Variabel tetap: 1. pembuatan Starter Volume : 100 ml MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr fermentasi %v starter = 25%v, 30%v, 35%v var1 : 60ml starter 1 var2 : 60ml starter 2 var3 : 70ml starter 1 var4 : 70ml starter 2 B-2 KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan: 0,4 gr pH waktu 2.Fermentasi Laboratorium Mikrobiologi Industri :4 : 3 hari variabel berubah starter1 : 75ml sari mangga +25ml lar gula starter2 : 25ml sari mannga +75ml lar gula

ALKOHOL Volume : 200 ml MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan : 0,4 gr waktu : 7 hari var5 : 80ml starter 1 var6 : 80ml starter 2

II.4 Prosedur Percobaan : A. Pembuatan Starter 1. Buat larutan glukosa 2%W dan larutan madu 5%V basis 250 ml dan tambahkan masing-masing (seperti KH2PO4, MgSO4, atau urea sesuai variabel) sebagai nutrient. 2. 3. 4. 5. Larutan tersebut disterilkan dengan cara dididihkan. Dinginkan pada suhu kamar. Atur pHnya 4. Tambahkan 0,4 gram ragi roti ke dalam masing-masing larutan glukosa dan madu. 6. Menghitung jumlah koloni dengan alat Hemositometer - Ambil 1 ml starter kemudian diencerkan sampai 10 ml. - Ambil 1 ml larutan tersebut diencerkan lagi menjadi 10 ml. - Letakan beberapa tetes larutan tersebut pada kaca preparat kemudian amati dengan Hemositometer. - Hitung jumlah koloni dengan rumus :

7.

Larutan lalu diaerasi selama 3 hari.

B. Fermentasi Media 1. Analisa Glukosa Standar a. b. c. Pembuatan glukosa standar. Larutkan 1,25 gram glukosa anhidrit sampai 500 ml. Standarisasi kadar glukosa : B-3

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL Ambil 5 ml glukosa standar, encerkan sampai 100 ml, ambil 5 ml, netralkan pHnya. Tambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. Titrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 600C700C sampai warna biru hampir hilang lalu tambahkan 2 tetes MB. Titrasi lagi dengan glukosa standar sampai warna biru menjadi merah bata. Catat kebutuhan titran.

F = Volume titran + 5 ml glukosa standar.

2. Persiapan Sari Buah a. Siapkan sari buah yang telah bebas dari ampas sesuai variabel. b. c. Sari buah disterilkan dengan cara didihkan. Dinginkan sampai suhu kamar, lalu atur pH 4

3. Mengukur Kadar Glukosa Sari Buah a. b. Ukur densitas sari buah. Cari M (lihat langkah kerja terakhir).

c. Ukur kadar glukosa sari buah dengan rumus berikut : ( )

4. Penentuan Kadar Glukosa Substrat a. Atur kadar glukosa substrat sebelum fermentasi sebesar 15%W. b. %SB < 15%, perlu ditambah sukrosa : ( ( ) )

Berat sukrosa = X mol . 342 gr/mol = Y gram Y gram dilarutkan ke dalam substrat tersebut. 5. Fermentasi media sari buah a. Ambil substrat yang telah diatur kadar glukosanya. B-4

Laboratorium Mikrobiologi Industri

ALKOHOL b. c. d. Tambahkan starter sesuai variabel. Ukur densitas dan volume konstan sebelum fermentasi. Fermentasi anaerob selama 7 hari.

C. Analisa Hasil 1. Ukur volume total dan densitas setelah fermentasi. 2. Cari F dan M. 3. Analisa kadar glukosa hasil fermentasi dengan rumus :
( )

4. Menghitung volume alkohol a. Kadar alkohol terfermentasikan (%gf)

b.

Mol glukosa terfermentasi

c.

Volume alkohol

D. Cara Penentuan M (M = Volume titran) 1. Ambil 5 ml sari buah, encerkan hingga 100 ml, ambil 5 ml. 2. Tambahkan 5 ml fehling A dan 5 ml fehling B. 3. Titrasi dengan glukosa standar sambil dipanaskan 600C-700C, sampai warna biru hampir hilang, lalu tambahkan 2 tetes MB. 4. Titrasi lagi dengan glukosa standar sambil dipanaskan sampai warna biru menjadi merah bata. Catat kebutuhan titran.

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-5

ALKOHOL II.5 Hasil Percobaan F = 21,3 ml Var 1 2 3 4 5 6 Ph 3 3 3 3 3 3 M 10,5 12,4 12 15,3 12,9 10 1,077 1,0754 1,076 1,073 1,090 1,079 %SB 10,02 8,276 8,643 5,6 7,706 10,472

F = 23 ml Var 1 2 3 4 5 6 pH 4 4 4 4 4 4 M 17,5 20 12 16 15 19 1,077 1,08 1,074 1,075 1,0774 1,0806 %SB 5,10 2,77 9,31 6,51 7,42 3,7

F= 25,5 ml Var 1 2 3 4 5 6 pH 4 4 4 4 4 4 M 16,5 13 13 23 13,5 22 1,076 1,072 1,075 1,07 1,0704 1,0758 %SB 8,36 11,6 11,6 0,62 11,21 3,25

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-6

ALKOHOL F=22 ml Var 1 2 3 4 5 6 pH 4 4 4 4 4 4 M 12,3 16 13 13,5 20 18,5 1,078 1,080 1,073 1,083 1,070 1,069 %SB 8,99 11,11 8,38 7,84 1,86 3,27

F=25,5 ml Var 1 2 3 4 5 6 pH 4 4 4 4 4 4 M 18,8 22,3 23,5 20 20,6 22 1,0854 1,0928 1,0856 1,0954 1,086 1,0864 %SB 3,45 2,65 1,56 4,746 2,39 2,94

Mengetahui, Asisten

Puspita Firsty L. NIM. L2C009126

Laboratorium Mikrobiologi Industri

B-7

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI TEKNIK KIMIA UNIVERSITAS DIPONEGORO

Praktikum ke Materi Hari/Tanggal Kelompok Nama : III : Alkohol : Selasa : 13 : 1. Fatikhatul K. Ika S. 2. Oei Stefanny Yuliana 3. Satria Arief Wicaksono B. Asisten VARIABEL : Puspita Firsty L. :
variabel berubah starter1 : 75ml sari mangga + 25ml lar gula starter2 : 25ml sari mannga +

Variabel tetap: 1. pembuatan Starter Volume : 100 ml 75ml lar gula MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan : 0,4 gr pH :4 waktu : 3 hari 2.Fermentasi Volume : 200 ml MgSO4 : 0,02 gr Urea : 0,1 gr KH2PO4 : 0,2 gr Fermipan : 0,4 gr waktu : 7 hari

fermentasi %v starter = 25%v, 30%v, 35%v var1 : 60ml starter 1 var2 : 60ml starter 2 var3 : 70ml starter 1 var4 : 70ml starter 2 var5 : 80ml starter 1 var6 : 80ml starter 2

Tugas Tambahan :

Semarang, 29 September 2011 Asisten

Puspita Firsty L. L2C009126 Laboratorium Mikrobiologi Industri C-1

REFERENSI

DIPERIKSA KETERANGAN NO. 1. TANGGAL 3 Desember 2012 Perbaikan I Cek font header Cek penulisan kata Lengkapi bab V, daftar pustaka dan lembar perhitungan Benarkan lambing mikrobiologi TANDA TANGAN

2.

4 Desember 2012

Perbaikan II Perbaiki header Judul BAB I, II, III dst dibold Bab III sesuaikan dengan praktikum

5 Desember 2012 ACC