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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

INFORME DE LABORATORIO Nº 2 BIOQUÍMICA 2

TEMA:

_________Extracción

de ADN_____

INTEGRANTES:

CÓDIGO

APELLIDOS Y NOMBRES

CORREO ELECTRÓNICO

2008015460

Peña Moran María Isabel

maritza_crazy168@hotmail.com

2008015683

Salome Ordoñes Vanessa

vanessalome@hotmail.com

2008003532

Salvatierra Ccachulli Amys Celestina

syma_0210@hotmail.com

2008235371

Serrano Yarleque Soraida Brigitte

brigitte_1415@hotmail.com

2008013626

Zambrano Sayas Linda Lady

adriana_2330@hotmail.com

DOCENTE:

Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez

Semestre 2009 – II

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II

I.

INTRODUCCIÓN

ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

Por eso que en este informe de laboratorio mostramos, su definición y algunos conceptos y conocimientos que debemos tener y están relacionados a este tema; y también contiene la práctica de laboratorio que realizamos y los cálculos correspondientes.

II.

MARCO TEÓRICO

ÁCIDOS NUCLEÍDOS

Son moléculas constituidas por C, H, O, N y P. Relacionados con la conservación, constituye el material genético de los organismos. Es el componente químico primario de los cromosomas y el material del que los genes están formados. Se componen de un pequeño grupo de unidades monomericas denominadas nucleótidos, unidos mediante enlaces covalentes fosfodiester.

Tenemos:

ARN

ADN

El ADN:

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II I. INTRODUCCIÓN ADN es la abreviatura

Esta formado por dos cadenas de polinucleotidos complementarios y dispuestos en doble hélices sus bases nitrogenadas son adenina, timina, citosina, guanina; carecen de uracilo.

La complementación de bases se debe a la formación de enlaces tipo puente de hidrogeno.

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La extracción de ADN de una muestra celular:

Se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula.

Para esto tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ La extracción de ADN de

III.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y REACTIVOS:

Para la siguiente determinación se utilizo lo siguiente:

  • 3.1 Materiales

Gradilla

Colador o Centrífuga

Rallador

mortero

  • 3.2 Muestra

Cebolla

Ajos

Tomate

Leche

  • 3.3 Material de vidrio

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ La extracción de ADN de

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Tubos de ensayo

Varillas de vidrio

Vasos de precipitado de 150 – 250 ml (12 unidades)

Pipetas

3. 4 Reactivos

Agua (destilada o mineral)

Sal de mesa

Bicarbonato sódico

Detergente líquido o champú

Alcohol isoamílico a 0ºC.

3.5 Equipos

Nevera

Balanza analítica

METODOLOGìA:

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ Tubos de ensayo ∑ Varillas

La extracción de ADN requiere una serie de métodos básicos. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.

IV.

DESCRIPCIÓN DE LA PRÁCTICA

Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado: 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo. 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura. 5 g de bicarbonato sódico. 5 ml de detergente líquido o champú.

AGUA DESTILADA:

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120ml

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SAL DE MESA:

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II SAL DE MESA: BICARBONATO DE SODIO:

BICARBONATO DE SODIO:

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1,5g

  • 5g

CHAMPU:

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5ml

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II SAL DE MESA: BICARBONATO DE SODIO:
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II SAL DE MESA: BICARBONATO DE SODIO:
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II SAL DE MESA: BICARBONATO DE SODIO:

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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II La solución ∑ Elegir la muestra
La solución
La
solución

Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda haber (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II La solución ∑ Elegir la muestra

Tomate

cebolla
cebolla
ajos
ajos
leche
leche

Triturar la muestra con un mortero. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.

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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ Mezclar en un recipiente limpio
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ Mezclar en un recipiente limpio
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ Mezclar en un recipiente limpio
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II ∑ Mezclar en un recipiente limpio

Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.

Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.

ALCOHOL ISOAMÍLICO:

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AJOS:

Se añade 10ml de alcohol isoamílico a 0ºC a cada caldo molecular…
Se añade 10ml de
alcohol isoamílico a
0ºC a cada caldo
molecular…
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol

TOMATE:

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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol

LECHE:

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Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol
Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II AJOS: Se añade 10ml de alcohol

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CEBOLLA:

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II CEBOLLA: ∑ Se introduce la punta

Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.

Ajo

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II CEBOLLA: ∑ Se introduce la punta

Leche

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II CEBOLLA: ∑ Se introduce la punta

Tomate

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II CEBOLLA: ∑ Se introduce la punta

Cebolla

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II CEBOLLA: ∑ Se introduce la punta

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  • V. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Describir lo encontrado en la experiencia realizada

  • 1. Tubo de ensayo ( Cebolla) : la coloración que presenta es blanquecina se pequeñas muestras de ADN

  • 2. Tubo de ensayo ( ajos): la coloración que presenta amarillento pálido donde también podemos apreciar pequeñas muestras de ADN

  • 3. Tubo de ensayo (Tomate): la coloración presenta rojiza, fragmentos de ADN en la parte Central.

  • 4. Tubo de ensayo (leche): la coloración de tipo cremosa, mayor conglomeración de fragmentos de ADN. Resultados finales de la Practica de la Extracción de ADN

Informe de Laboratorio Nº _2_ BIOQUÍMICA 2 – Semestre 2009-II V. RESULTADOS Y DISCUSIONES Describir lo
 
VI. C ONCLUS IONES ∑ A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado
VI. C ONCLUS IONES ∑ A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado
VI. C ONCLUS IONES ∑ A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado
VI. C ONCLUS IONES ∑ A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado
 

VI.

C

VI. C ONCLUS
VI. C ONCLUS
VI. C ONCLUS
VI. C ONCLUS

ONCLUS

IONES

A modo de conclusión podemos decir que este informe ha dado a conocer aspectos de la vida natural perceptible como imperceptible a muestras sentidos, es decir, explica aquello que podemos ver a simple vista como lo que no lo podemos ver tan fácilmente.

El método utilizado para la extracción de DNA, permite purificar en un grado relativamente alto (porque depende con la precisión de la toma de muestras y

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de procedimiento su éxito) y pudimos determinar que es factible utilizarlo en posteriores ocasiones ya que es muy fácil de utilizar y se presta para varias aplicaciones.

VII.

BIBLIOGRAFÍA

AUTOR

Julián Esteban Londoño