Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
Filipa Rocha Alves dos Santos
Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
Universidade Fernando Pessoa Faculdade de Cincias da Sade Porto 2011 Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Filipa Rocha Alves dos Santos
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Universidade Fernando Pessoa Faculdade de Cincias da Sade Porto 2011 Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Filipa Rocha Alves dos Santos
Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
Monografia apresentada Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obteno do grau de Mestre em Cincias Farmacuticas. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Resumo As emulses mltiplas so sistemas complexos e polidispersos desenvolvidos recentemente na rea da tecnologia. Trata-se de sistemas constitudos simultaneamente por emulses A/O e O/A, sendo estabilizados por tensioactivos de diferente polaridade. A quantidade e tipo de tensioactivo essencial para a formao de uma emulso estvel. Os tipos de emulses mltiplas abordadas nesta reviso dizem respeito s emulses A/O/A e s O/A/O. Embora as vantagens neste tipo de sistemas sejam bastantes, como a proteco das molculas, possibilidade de controlar a libertao de frmacos, maior biodisponibilidade oral, melhoria das caractersticas organolpticas e sensoriais de certos produtos, entre outras, possuem tambm algumas condicionantes devido sua instabilidade termodinmica. Assim, as emulses mltiplas necessitam de uma caracterizao completa, atravs de estudos complexos, para que dessa forma seja possvel obter uma formulao estvel. As aplicaes deste tipo de sistemas so vrias e abrangem muitas reas, como a farmacutica, a alimentar, a mdica e a biotecnolgica como iremos constatar. Abstract Multiple emulsions are complex and polydisperse systems developed recently in the area of technology. These systems are formed simultaneously by emulsion W/O and O/W, being stabilized by surfactants of different polarity. The amount and type of surfactant is essential for the production of a stable emulsion. The types of multiple emulsions discussed in this review concern the W/O/W and O/W/O emulsions. Some of the advantages in this type of systems are the protection of molecules, the ability to control drug delivery, higher oral bioavailability, improved organoleptic and sensory characteristics of certain products, among others, but it also have some limitations due to its thermodynamic instability. Thus, the emulsion need complete characterization by means of complex studies, to be possible to obtain a stable formulation. The applications of such systems are varied and cover many areas such as pharmaceuticals, food, medical and biotechnology like we will discussed in this review. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Agradecimentos A terminar esta tese de mestrado resta-me registar os meus sinceros agradecimentos s pessoas que de vrias formas contriburam para que este se tornasse numa realidade. Primeira mente, gostaria de agradecer aos meus pais, Ins e Artur Santos, a possibilidade que me concederam de frequentar este curso que tanto prazer me deu concluir. Gostaria tambm de agradecer aos restantes membros da minha famlia, e em especial minha irm Ins e minha sobrinha Gabriela, todo o apoio nos momentos menos fceis e todos os momentos de lazer que me proporcionaram. Agradeo tambm aos finalistas de Cincias Farmacuticas 2006/2011 pelos bons momentos partilhados durante os 5 anos. Tenho a certeza que deste grande convvio e companheirismo nasceram grandes amizades que iram perdurar por toda a vida. No posso deixar tambm de agradecer ao grupo de docentes da Universidade Fernando Pessoa que me acompanhou ao longo de 5 anos e onde cada um, sua maneira, transmitiu os seus conhecimentos no s a nvel acadmico mas tambm a nvel humano. Por fim, gostaria de agradecer minha orientadora da tese, Professora Rita Oliveira, a disponibilidade e as criticas construtivas que sempre realizou, sendo essas essenciais na execuo da tese. Assim, aqui deixo o meu profundo e sentido agradecimento a todas as pessoas que contriburam para a concretizao da minha tese, estimulando-me intelectual e emocionalmente.
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ndice RESUMO ........................................................................................................................................................ 5 ABSTRACT .................................................................................................................................................... 5 AGRADECIMENTOS ................................................................................................................................... 6 ABREVIATURAS: ......................................................................................................................................... 9 1. INTRODUO .........................................................................................................................................11 2. TEORIAS DA EMULSIFICAO...........................................................................................................13 3. COMPONENTES DAS EMULSES .......................................................................................................14 3.1. AGENTES EMULSIVOS ............................................................................................................................14 3.1.1. Equilbrio hidrfilo-lipfilo (EHL) .................................................................................................14 3.1.2. Tensioactivos .................................................................................................................................17 3.1.3. Materiais de origem natural e seus derivados.................................................................................20 3.1.4. Slidos finamente divididos ............................................................................................................21 3.1.5. Fase oleosa ...................................................................................................................................21 3.1.6. Fase aquosa ..................................................................................................................................22 4. DESENVOLVIMENTO DA FORMULAO .........................................................................................22 4.1.TCNICAS DE PREPARAO .....................................................................................................................23 4.1.1. Mtodo da dupla emulsificao ......................................................................................................23 4.1.2 Mtodo da etapa nica ...................................................................................................................23 4.1.3 Mtodo de emulsificao por membrana .........................................................................................24 4.2. EQUIPAMENTOS USADOS NA EMULSIFICAO .........................................................................................25 4.3. TCNICAS DE CARACTERIZAO E CONTROLO DE EMULSES ...................................................................26 4.3.1 Agitao .........................................................................................................................................27 4.3.2 Temperatura ...................................................................................................................................28 4.3.3 Reologia .........................................................................................................................................29 4.4. CARACTERIZAO IN VITRO....................................................................................................................31 4.4.1 Exame macroscpico ......................................................................................................................31 4.4.2 Exame microscpico / tamanho da gotcula.....................................................................................31 4.4.3. Nmero de glbulos .......................................................................................................................33 4.4.4. Determinao da velocidade de formao de creme ou de sedimentao por centrifugao ............33 4.4.5. Determinao do pH......................................................................................................................34 4.4.6. Determinao do sinal da emulso.................................................................................................34 4.4.7. Eficincia de encapsulao / percentagem de frmaco encapsulado / rendimento da emulso .........35 4.4.8. Potencial zeta ................................................................................................................................36 5. ESTABILIDADE .......................................................................................................................................37 5.1 ESTABILIDADE FSICA .............................................................................................................................37 5.1.1 Coalescncia: .................................................................................................................................38 5.1.2 Agregao ......................................................................................................................................39 5.1.3 Cremao .......................................................................................................................................39 5.1.4. Inverso de fases ...........................................................................................................................41 5.1.5. Difuso molecular .........................................................................................................................41 5.1.6 Relao entre o volume das fases ....................................................................................................42 5.2. ESTABILIDADE QUMICA ........................................................................................................................43 Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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5.3 ESTABILIDADE MICROBIANA ...................................................................................................................44 5.4 ESTABILIZAO DE EMULSES ................................................................................................................45 5.4.1 Estabilizao atravs da formao de gel polimrico ......................................................................45 5.4.2 Aditivos para a fase aquosa interna ................................................................................................46 5.4.3 Estabilizao termodinmica: reduo da tenso interfacial ...........................................................46 5.4.4 Formao do filme interfacial .........................................................................................................47 5.4.6 Estabilizao electroesttica e estrica ...........................................................................................48 5.5 ESTUDOS DA ESTABILIDADE ACELERADA .................................................................................................49 6. TIPOS DE ADMINISTRAO ................................................................................................................50 6.1. ADMINISTRAO ORAL ..........................................................................................................................51 6.2 ADMINISTRAO PARENTERAL: ..............................................................................................................51 6.3. ADMINISTRAO TPICA .......................................................................................................................53 7. ESTADO DA ARTE: APLICAES ACTUALIZADAS DAS EMULSES .........................................54 7.1. SUBSTITUTO DE OXIGNIO .....................................................................................................................54 7.2. DIRECCIONAMENTO DE FRMACOS.........................................................................................................55 7.3. MASCARAR SABORES .............................................................................................................................55 7.4. TRATAMENTO DA SOBREDOSAGEM / DESINTOXICAO: ..........................................................................56 7.5. APLICAO EM COSMTICA ...................................................................................................................56 7.6. NUTRACUTICOS ...................................................................................................................................57 7.7. OUTRAS UTILIZAES ............................................................................................................................58 8. CONCLUSO ...........................................................................................................................................59 9. BIBLIOGRAFIA...................................................................................................................................60
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Abreviaturas: A/O Emulso simples gua-leo A/O/A Emulso mltipla gua-leo-gua cm Centmetros CO 2 Dixido de carbono C Graus Centigrados dm 2 Decmetros quadrados EHL Equilbrio hidrfilo-lipfilo EPI Epirrubicina HPC - 1 octanol hidroxil propil celulose i.m. Intra-muscular i.p. - Intra-peritoneal i.v. Intra-venosa m - Metros mm 3 Milmetros cbicos NaCl Cloreto de sdio nm nanometros O/A Emulso simples leo-gua O/A/O Emulso mltipla leo-gua-leo O 2 - Oxignio PEG Polietilenoglicol Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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PFCs Perfluroqumicos rpm Rotaes por minuto s.c. Subcutnea TAE Terapia de embolizao percutnea TIF Temperatura de inverso de fases U.V. Ultra-violeta Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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1. Introduo A cincia dos colides est relacionada com o estudo dos sistemas nos quais pelo menos um dos componentes da mistura apresenta uma dimenso no intervalo de 1 a 1000 nanmetros (1 nm =10 -9 m). As disperses coloidais constituem grande parte das formas farmacuticas lquidas, sendo administradas pelas vias oral, tpica e parenteral. So sistemas particularmente interessantes na terapia de pacientes peditricos e geritricos e capazes de solucionar numerosos problemas farmacotcnicos, desde a baixa solubilidade de certos frmacos at a melhoria de sua biodisponibilidade (Jafelicci, 1999, Consiglieri, 2002). As emulses so disperses coloidais formadas por uma fase dividida designada de interna, dispersa ou descontnua, e por uma fase que rodeia as gotculas, designada de externa, dispersante ou contnua. Para alm destes dois componentes existe um terceiro designado de agente emulsivo, o qual contribui para tornar a emulso mais estvel, pois interpe-se entre a fase dispersa e dispersante, retardando assim a sua separao, e que constitui a interfase. Desta forma, tratam-se de sistemas termodinamicamente instveis sendo necessrio um considervel aporte de energia para obt-las, geralmente energia mecnica (Prista et al., 1995, Lachman, 2001, Martina, 2005). De acordo com a hidrofilia ou lipofilia da fase dispersante, estes sistemas classificam-se em leo em gua (O/A) ou gua em leo (A/O). tambm possvel preparar emulses mltiplas do tipo A/O/A ou O/A/O (Prista et al., 1995).
Figura 1: Diferentes tipos de emulses. Adaptado de (Salager, 1999) Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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As emulses mltiplas so sistemas complexos e heterogneos em que ambos os tipos de emulses simples (O/A e A/O) coexistem simultaneamente, na presena de dois agentes emulsionantes, um hidroflico e outro lipoflico. Este tipo de emulses tm aplicaes como veculos de frmacos, cosmticos e alimentares devido sua capacidade de reter e libertar lentamente diferentes agentes associada capacidade de mascarar e proteger os produtos veiculados. No entanto, o seu uso foi restringido devido sua instabilidade intrnseca e estrutura complexa. Consequentemente, necessria uma investigao sistemtica dos efeitos de diferentes processos e parmetros de composio, tais como: o tipo de fase oleosa, o tipo de agentes emulsivos, a relao do volume de fase, a relao hidroflica/lipoflica do agente emulsivo, as variveis do processo (por exemplo, a temperatura de emulsificao e velocidade de agitao) sobre a formao e estabilidade da emulso (Morais et al., 2009, Bonnet et al., 2010b). Embora a formulao de emulses mltiplas seja relativamente complexa e propensa a vrias vias de degradao fsica, ainda assim, existem algumas vantagens relativamente s emulses simples. Como j foi referido, as emulses mltiplas tma excelente capacidade de libertao controlada de compostos activos aprisionados como tambm tm a capacidade de proteger as espcies encapsuladas da degradao (Bonnet et al., 2010c, Khan et al., 2006). Outras vantagens incluem(Khan et al., 2006, Bonnet et al., 2010b): Notvel biocompatibilidade; Completamente biodegradvel e pouca produo de compostos txicos decorrentes da degradao do veculo; Diminuio da resposta imune indesejada substncia activa encapsulada; Capacidade de incorporar substncias activas com polaridades diferentes; Proteco do composto veiculado contra a inactivao ou degradao por factores endgenos; Diminuio da flutuao da concentrao da substncia activa no estado-estacionrio; Possibilidade de direccionamento de frmacos; Possibilidade de serem usados aditivos para disfarar as caractersticas organolpticas dos frmacos.
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2. Teorias da emulsificao Algumas teorias tm sido propostas na tentativa de explicar como os agentes emulsivos promovem a emulsificao e mantm a estabilidade da emulso. Entre as teorias mais prevalentes esto as da tenso superficial, da cunha orientada e do filme interfacial (Ansel, 2007). Os lquidos tm a tendncia de assumir a forma que produza menos rea superficial exposta, sendo essa a forma de uma esfera. Quando o lquido estiver em contacto com um outro lquido no qual insolvel e imiscvel, a fora que faz com que cada um deles resista fragmentao em partculas menores chamada de tenso interfacial. Substncias como os tensioactivos ou agentes molhantes reduzem essa resistncia e facilitam a fragmentao em gotas ou partculas menores pois reduzem a tenso interfacial entre dois lquidos imiscveis, reduzindo a fora repelente e a atraco entre as suas prprias molculas (Ansel, 2007). A teoria da cunha orientada est baseada no pressuposto de que determinados emulgentes se orientam na superfcie e no interior do lquido, de modo que a sua solubilidade seja reflectida nesse lquido em particular. Num sistema contendo dois lquidos imiscveis, o emulgente preferencialmente solvel em uma das fases e penetra com maior profundidade e tenacidade nessa fase do que na outra. Dependendo da forma e do tamanho das molculas, das suas caractersticas de solubilidade e, portanto, da sua orientao, o arranjo em cunha concebido para elas faz com que circundem os glbulos de leo ou de gua. A fase na qual o emulgente mais solvel vai-se tornar a fase externa da emulso, ou seja emulgente com caractersticas mais hidrfilas do que hidrfobas promover a formao de uma emulso O/A pois penetra mais na fase aquosa que se curvar envolvendo a fase oleosa e vice-versa (Ansel, 2007, Prista et al., 1995). A teoria do filme interfacial descreve que o emulgente se encontra na interface entre o leo e gua como uma fina camada de um filme adsorvido na superfcie das mesmas. O filme evita o contacto e a coalescncia da fase dispersa; quanto mais resistente e flexvel este for, maior a estabilidade da emulso. Naturalmente, preciso que haja quantidade suficiente do material formador de filme para cobrir toda a superfcie de cada uma das gotas da fase interna. Assim, Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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a formao da emulso depende da solubilidade do emulgente, sendo que aqueles solveis em gua formam emulses O/A e aqueles solveis em leo o inverso (Ansel, 2007). Na realidade, improvvel que uma nica teoria de emulsificao possa explicar o modo pelo qual os muitos e diversos emulgentes promovem a formao da emulso e a sua estabilidade. mais provvel que mesmo numa s emulso mais de uma dessas teorias seja aplicvel (Ansel, 2007). 3. Componentes das emulses 3.1. Agentes emulsivos Um emulgente actua como um estabilizante da forma da gotcula da fase interna, podendo ser descrito como molcula que possui duas partes distintas: uma parte hidroflica e uma hidrofbica. Por esta razo, este grupo de compostos conhecido normalmente por anfiflico, ou seja, com apetncia para gua e leo (Lachman, 2001). possvel distinguir trs grandes grupos de agentes emulsionantes: os tensioactivos, os materiais de origem natural e os slidos finamente divididos. Todos eles possuem como caracterstica comum formar uma pelcula de adsoro em redor das gotas dispersas que previnem a coagulao e coalescncia podendo actuar por vrios mecanismos em simultneo, o que por vezes torna difcil a previso da estabilidade da emulso (Jato, 1997). 3.1.1. Equilbrio hidrfilo-lipfilo (EHL) S em 1948 Griffin introduziu a noo de Equilbrio Hidrfilo-Lipfilo (EHL), estabelecendo assim, e pela primeira vez, um sistema para classificar, numericamente (numa escala de 1 a 50), um composto segundo as suas caractersticas de hidrofilia e lipofilia. Este conceito de EHL baseia-se, como alis j era anteriormente admitido, no reconhecimento de que todas as substncias tensioactivas so constitudas por uma parte hidrossolvel e outra lipossolvel, dependendo a sua solubilidade final da proporo em que elas esto associadas numa mesma molcula (Prista et al., 1995). Deste modo, a noo vaga que anteriormente andava associada hidro ou lipossolubilidade de um determinado composto passou a ser substituda por um critrio mais preciso, no qual cada Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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produto assinalado por um nmero que automaticamente o inclui num grupo especial, cujas aplicaes prticas figuram na prpria escala de Griffin, como podemos verificar na tabela 1 (Prista et al., 1995). Tabela 1: Escala de Griffin (Schulz, 2005, Prista et al., 1995)
De facto, conforme se pode ver na tabela 1 as substncias de EHL muito baixo, portanto acentuadamente lipfilas, so agentes anti-espuma. Aquelas cujo valor de EHL vai de 3 a 9, possuindo ainda caractersticas de lipofilia, constituem os agentes emulsivos A/O, mas a partir de 8 os tensioactivos comeam a apresentar propriedades hidrfilas. Assim o grupo de substncias cujo EHL vai desde 8 a 16 engloba os agentes emulsivos O/A, situando-se os agentes solubilizantes na zona compreendida entre 16 e 18. Estes ltimos utilizam-se para Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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obter disperses muito perfeitas de leos e essncias em gua e, desde que se empregue uma grande quantidade de fase dispersante em relao fase dispersa o produto obtido comporta- se como uma pseudo-soluo (Prista et al., 1995). Apesar dos limites de valores de EHL que na escala de Griffin definem as emulses A/O e O/A serem um tanto dilatados, acontece que cada emulso em particular tem um valor de EHL que se pode considerar especifico para cada caso. Este valor depender do leo ou leos presentes, das respectivas propores, e ainda, da circunstncia de o leo constituir a fase interna ou externa da emulso. Para cada frmula, o valor de EHL corresponde ao seu ptimo de estabilidade, sendo que esse ptimo de estabilidade tem um tempo de vida (Prista et al., 1995, Pays, 2002). Muitas vezes, contudo, o emulgente constitudo por uma mistura de uma ou mais substncias, no sendo raro que uma seja um agente emulsivo A/O e a outra, um agente emulsivo O/A. Do ponto de vista terico, o uso de uma mistura de agentes emulsivos do origem a emulses muito mais estveis pois actuam de uma maneira complexa, podendo exercer uma ou vrias das seguintes aces: originar um equilbrio hidrfilo-lipfilo mais perfeito; estabelecer uma pelcula interfacial mais estvel; dar emulso uma consistncia mais conveniente (Prista et al., 1995). Na preparao de uma emulso mltipla normal a utilizao de dois tensioactivos de natureza oposta no sistema. Um tensioactivo estabiliza a emulso A/O (lipoflico), enquanto o outro estabiliza a emulso O/A (hidrofilico). Os complexos interfaciais formados para utilizao dos dois tensioactivos contribuem para a estabilizao de uma emulso porque diminuem a tenso superficial mais acentuadamente do que quando se emprega um s agente emulsivo, para alm de originarem uma pelcula compacta, mas flexvel, na interfase (Khan et al., 2006, Prista et al., 1995). Para emulses A/O/A no possvel seleccionar um emulsificante puramente com base no seu valor de EHL sendo necessrio a determinao do valor de EHL da fase de oleosa numa emulso simples O/A. Desta forma, depois de alguns estudos concluiu-se que a concentrao do agente emulsivo secundrio geralmente inferior a 1/5 da concentrao do agente Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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emulsivo primrio. importante que o tipo de agente tensioactivo e a sua concentrao seja optimizada para que assim se obtenha uma emulso estvel (Khan et al., 2006, Schmidts et al., 2009). Embora haja vantagens na utilizao de uma mistura de emulgentes na preparao das emulses, deve ter-se em conta, porm, que alguns agentes emulsivos so incompatveis e no podem ser associados na mesma formulao. Certos agentes emulsivos do mesmo tipo podem ser incompatveis entre si, como, por exemplo, as substncias de natureza coloidal possuindo carga elctrica de sinal contrrio, que, uma vez misturadas, coagulam. Tambm os agentes aninicos e catinicos, apesar de ambos poderem favorecer a formao de emulses O/A, no devem ser utilizados juntamente porque reagem entre si, anulando-se, assim, as suas propriedades emulsivas. Porm, existem associaes completamente funcionais e com larga aplicao (Prista et al., 1995). 3.1.2. Tensioactivos Os tensioactivos constituemum grupo muito numeroso. A classificao deste grupo feita tendo em conta as caractersticas da poro polar da molcula. Um dos grupos o formado pelos que possuem uma cabea polar que se pode ionizar, e que por sua vez se classificam em aninicos, catinicos e anfotricos. O segundo grande grupo constitudo por aqueles cuja poro polar no se pode ionizar, e que se denominam tensioactivos no inicos (Jato, 1997). 3.1.2.1. Tensioactivos aninicos Os tensioactivos aninicos so aqueles, cuja poro polar apresenta carga negativa. Apesar de serem econmicos, o seu uso esta limitado devido sua toxicidade. Desta forma, utilizam-se apenas em formulaes de aplicao externa (Jato, 1997, Lachman, 2001). Os principais grupos de agentes tensioactivos aninicos so os sabes e compostos sulfonados e sulfatados. Os sabes sdicos, potssicos e amnicos permitem obter emulses O/A estveis, embora por vezes seja necessria a presena de um cotensioactivo no inico para formar uma pelcula interfacial eficaz. Os sabes de clcio permitem unicamente obter emulses A/O (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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No segundo grande grupo de tensioactivos aninicos esto incluidos os alquil sulfatos e sulfonados. O representante mais conhecido deste grupo o lauril sulfato de sdio, sendo utlizado frequentemente na obteno de emulses O/A. Possui uma elevada hidrosolubilidade e para alm disso no capaz de formar pelculas interfaciais condensadas na interfase gua- leo. Por este motivo, utiliza-se sempre combinado com outro tensioactivo no inico (por exemplo, lcool cetoestearlico) com o objectivo de formar uma pelcula complexa e densa (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . 3.1.2.2. Tensioactivos catinicos Os tensioactivos catinicos so compostos cuja fraco polar se ioniza, adquirindo carga positiva. Os tpicos representantes so os sais de amnio quaternrio e de piridinio. Necessitam da presena de um agente emulsivo no inico para formar emulses estveis O/A (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . Possuem propriedades desinfectantes e conservantes, mas tambm so bastante txicos e por esta razo, o seu uso limita-se a formulaes de cremes antispticos. Os componentes deste grupo so a cetrimida e o cloreto de benzalcnio (Jato, 1997). 3.1.2.3. Tensioactivos no inicos O grupo dos tensioactivos no inicos o mais importante por diversas razes. Em primeiro lugar, a sua baixa toxicidade permite a sua utilizao por via tpica, via oral e inclusivamente parental. Para alm da baixa toxicidade, apresenta menos problemas de compatibilidade e menos sensvel a mudanas de pH ou adio de electrlitos. Trata-se de um grupo bastante numeroso e integra compostos tanto hidrossolveis como lipossolveis, o que permite obter emulses A/O ou O/A. possvel utilizar uma combinao de ambos com o objectivo de obter uma pelcula interfacial densa. Como principal desvantagem podemos referir o seu maior custo (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . Entre os principais tipos de tensioactivos no inicos, destacam-se os steres de glicol e de glicerol, os steres de sorbitano, os polissorbatos, os teres de lcoois gordos e poliglicois, os steres de cidos gordos e poliglicois e alguns lcoois gordos (Jato, 1997). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Os steres de sorbitano tambm conhecidos como a serie Span, nome com o qual so comercializados, so de carcter lipoflico, e por esse motivo formam emulses A/O. Na prtica, o mais frequente utiliza-los em combinao com polissorbatos para obter emulses O/A e A/O. Os polissorbatos so derivados dos steres do sorbitano e do polietilenoglicol correspondendo comercialmente serie dos Tween. Estes compostos do melhor estabilidade emulso, assegurando melhor encapsulamento e libertao controlada da espcie encapsulada quando comparados com os tensioactivos de menor peso molecular (Jato, 1997, Bonnet et al., 2010b). Os polissorbatos, para alm de apresentarem baixa toxicidade, so compatveis com praticamente todos os outros tipos de tensioactivos, sendo tambm solveis em gua. Possuem, por outro lado, um pH neutro e so estveis ao calor, s variaes de pH e s elevadas concentraes de electrlitos. Como principais desvantagens apresentam um sabor desagradvel e a possibilidade de inactivar alguns conservantes com os quais podem formar complexos (Jato, 1997, Prista et al., 1995). Os teres de poliglicol e lcoois gordos obtm-se por condensao do polietilenoglicol com lcoois gordos (cetlico e cetoestearlico). Um representante deste grupo muito utilizado o cetomacrogol1000. Este de carcter hidrossolvel e forma emulses O/A, requerendo a presena de um segundo emulsificante lipfilo. Outros teres de macrogol de carcter lipfilo, que formam emulses A/O pertencem serie comercial dos Brij(J ato, 1997, Prista et al., 1995). Noutro grupo de tensioactivos esto includos os steres de cidos gordos com poliglicois, entre os quais os steres de estearato que so os mais utilizados. Um grupo muito numeroso o formado pelos polioxialcoois, que so copolmeros do polioxietileno com o polioxipropileno. Alguns dos membros deste grupo podem-se utilizar por via endovenosa (Jato, 1997). Por ltimo, outro grupo de agentes emulsionantes auxiliares, so os lcoois gordos tipo cetlico, estearlico e cetoestearlico. Estes componentes aumentam a viscosidade, pelo que Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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retardam a formao de cremes e tambm podem participar na formao de pelculas interfaciais complexas e densas (Jato, 1997). 3.1.2.4. Tensioactivos anfotricos Os tensioactivos anfotricos so aqueles cuja poro polar se pode ionizar positiva ou negativamente consoante o pH do meio seja cido ou bsico, comportando-se como bases aminadas em meio cido e como cido em meios alcalinos, no sendo ionizados em meio neutro. Embora no se utilizemmuito como emulsionantes, dever destacar-se a lecitina utilizada em emulses parenterais e tambm o miranol (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . 3.1.3. Materiais de origem natural e seus derivados O uso de materiais de origem natural normalmente limita a formulao de preparaes extemporneas. Esse facto deriva de duas razes: da dificuldade em obter um produto homogneo que apresente uma mnima variabilidade entre diferentes lotes e do facto de os materiais naturais constiturem um local propcio ao crescimento microbiano. Por esse motivo, para a formulao de emulses, que requerem uma estabilidade prolongada, so preferveis os derivados sintticos. Podemos considerar dois grupos: os derivados do esterol e os coloides hidroflicos (Jato, 1997, Prista et al., 1995) . Dentro dos derivados do esterol podemos encontrar a cera de abelha de utilizao frequente na cosmtica, a lanolina anidra e os lcoois de l. A lanolina anidra no se aplica com muita frequncia porque requer a presena de antioxidantes e pelas possveis reaces alrgicas que pode causar. J foram obtidos alguns derivados da lanolina que melhoram as suas caractersticas; estes so de carcter inico, emulsionantes O/A e emolientes. Os lcoois de l, os esteris e o colesterol presente na lanolina possuem tambm propriedades emulsivas A/O (Jato, 1997). No segundo grande grupo esto includos os coloides hidrfilos, que se tratam de polmeros usados principalmente como agentes emulsionantes auxiliares e espessantes. No geral, estes hidrocoloides favorecem a formao de emulses O/A, devido formao da barreira hidroflica forte entre as fases. Segundo a sua origem, podem classificar-se nos provenientes de exsudados de rvores (goma arbica ou accia, goma karaya e tragacanta), de algas (agar, Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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carragenatos e alginatos) e de extractos de sementes (goma guar e sementes de marmeleiro). De todos os compostos referidos, o que mais se destaca a goma de accia, que estabiliza emulses O/A, pois retarda a coalescncia mediante a formao de uma pelcula interfacial forte (Jato, 1997, Prista et al., 1995). Dentre os polissacardeos semi-sintticos destacam-se os derivados da celulose, por exemplo a metil celulose e a carboximetilcelulose. Com estes derivados as variaes entre os lotes diminuem relativamente s observadas com produtos naturais (Jato, 1997, Prista et al., 1995). 3.1.4. Slidos finamente divididos Os slidos finamente divididos que possuam a capacidade de se adsorverem na interfase das emulses podem estabiliza-las. Entre os compostos utilizados encontram-se hidrxidos de metais pesados, argilas e pigmentos. Algumas argilas (bentonite e silicato de alumnio e magnsio) e o dixido de slica coloidal so usados para estabilizar emulses de aplicao externa. Por via oral so preferveis os hidrxidos de alumnio e de magnsio. No geral, podem usar-se em combinao com outros tensioactivos ou com macromoleculas que aumentem a viscosidade do sistema (Jato, 1997, Prista et al., 1995). 3.1.5. Fase oleosa Os leos utilizados na preparao de emulses farmacuticas so de diferentes tipos qumicos, incluindo steres simples, leos volteis, hidrocarbonetos e derivados terpenoides. O leo em si pode ser a substancia activa, ou pode funcionar como transportador, ou mesmo fazer parte de uma mistura de emulsificantes. Os leos mais utilizados em preparaes orais so os leos minerais no-biodegradveis, os leos de rcino (que proporcionam um efeito laxante local), os leos de fgado de peixe e os leos de origem vegetal (por exemplo, amendoim, algodo, e leos de milho) como suplementos nutricionais. Os leos minerais proporcionam um rendimento muito superior ao dos leos vegetais (Khan et al., 2006). Num estudo realizado com duas emulses semelhantes a nvel de tamanho da gotcula e do tipo de agentes estabilizantes, foi testado o efeito da alterao da fase oleosa na evoluo da libertao do composto desejado. Numa das emulses a fase oleosa era constituda por dodecano (alcano), sendo que a fase oleosa da outra emulso era constituda por leo de girassol (leo vegetal). Na fase final da experiencia concluram que a cintica da libertao comparvel, ou seja, a Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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associao dos polmeros utilizados para a estabilizao, que determinou o perfil de libertao e no a fase oleosa ( Pays, 2002). Outro factor que vai influenciar a estabilidade a natureza do leo, pois no s controla a reologia das emulses mltiplas, mas tambm a permeabilidade da membrana, ou seja, influencia a difuso do soluto atravs da membrana oleosa. Os leos de diferentes densidades e viscosidades podem ser usados para alterar as caractersticas de libertao da substancia activa. O volume da fase oleosa vai afectar as propriedades oclusivas da formulao e consequentemente as caractersticas hidratantes da emulso (Khan et al., 2006, Erdal, 2006). 3.1.6. Fase aquosa A fase aquosa das emulses serve essencialmente para dissolver aditivos e estabilizantes necessrios emulso, assim como tambm pode veicular frmacos hidrofilicos. Os aditivos mais comummente usados so os antioxidantes, os antimicrobianos e alguns corantes. Quando a emulso aplicada na pele, a gua tem tambm como funo manter a elasticidade e a juventude da epiderme, mantendo a pele hidratada (Lachman, 2001). 4. Desenvolvimento da formulao As emulses so sistemas termodinamicamente instveis e portanto, utilizam-se agentes emulsionantes, como os tensioactivos, polmeros, etc, para fornecer estabilidade cintica e manter a sua estrutura durante um perodo relativamente longo. Na preparao de uma emulso mltipla normal introduzir dois tensioactivos de natureza oposta ao sistema. Um tensioactivo estabiliza a emulso A/O (lipoflico), enquanto o outro estabiliza a emulso O/A (hidroflica). A utilizao de diagramas de fase pode ajudar na produo de emulses mltiplas usando apenas um tensioactivo para estabilizar tanto a emulso primria e secundria. Isto , a presena de uma fase lquida cristalina no sistema ternrio constituda por gua-leo-emulsionante, onde a soluo aquosa micelar do agente emulsivo e a soluo oleosa do agente emulsivo esto em equilbrio com a outra, tem mostrado que melhora a estabilidade de emulses (Khan et al., 2006). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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4.1.Tcnicas de preparao 4.1.1. Mtodo da dupla emulsificao o mtodo mais comum para a preparao de emulses mltiplas, pois fcil de executar e produz um elevado rendimento, sendo facilmente reprodutvel, conseguindo dar origem a emulses com sistema de libertao controlada. A primeira etapa envolve, obteno de uma emulso primria A/O ou O/A que em seguida re-emulsificada com um excesso de fase aquosa ou de fase oleosa, na presena do segundo agente emulsionante para obter emulses mltiplas do tipo A/O/A ou O/A/O, respectivamente. O efeito da relao do tensioactivo hidrofbico e o tensioactivo hidroflico influencia as propriedades fsicas das formulaes (Morais et al., 2009, Khan et al., 2006, Liu et al., 2011). A segunda etapa da emulsificao muito importante, pois pode levar a fractura de glbulos internos formando emulses simples do tipo A/O ou O/A (dependendo de vrios outros factores). Em pesquisas recentes, uma verso modificada da tcnica de emulsificao em duas etapas est a ser utilizada, pelo que cada passo foi dividido em duas sub-etapas (pr- emulsificao por sonicao e posterior agitao) levando a um mtodo de emulsificao duas etapas 2x2. Este mtodo modificado proporciona alta produtividade e estabilidade emulso. A segunda etapa envolve a temperatura e a presso como parmetros de produo pois influenciam o tamanho das gotculas de leo. Alguns estudos realizados revelaram que, para fazer uma emulso estvel A/O/A o tamanho dos poros da membrana para a segunda etapa de emulsificao deve ser inferior a duas vezes o dimetro do mercado interno gotas. Outros estudos tm sido feitos para tornar este processo industrial (Morais et al., 2009, Khan et al., 2006, Vladisavljevic e Williams, 2005). 4.1.2 Mtodo da etapa nica O desenvolvimento de sistemas A/O/A foi relatado pela primeira vez durante a inverso de fases de uma emulso A/O concentrada para uma emulso O/A. A emulso A/O/A foi elaborada atravs da sua extruso por uma membrana de policarbonato que possui poros de 3 a 8 m de dimetro. Esta emulso mltipla aps a extruso tornou-se semi-slida, e alterou-se para uma emulso A/O. Esta emulso resultante foi facilmente re-dispersa em soluo aquosa de emulsificante hidroflico para formar uma emulso do tipo A/O/A, tendo um tamanho de gotculas menor e mais homogneo do que a emulso mltipla original. O mecanismo de Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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inverso de fase pode ser descrito como: emulso O/A formao da estrutura lamelar micela invertida emulso A/O redisperso para formular emulses A/O/A homogneas. A inverso de fase de emulses A/O/A ocorre se o total EHL dos emulsionantes no sistema se aproximar do EHL requerido do leo (Morais et al., 2009, Khan et al., 2006). A tcnica de inverso de fase tem uma ampla distribuio de tamanho das gotculas e nmero indefinido de compartimentos encapsulados. por isso que esta tcnica no usada para a preparao de emulses mltiplas de tamanho uniforme (Khan et al., 2006). O processo de emulsificao de etapa nica para a preparao de emulses mltiplas pela introduo de dois tensioactivos e dois polmeros consiste da adio da fase aquosa, contendo polietilenoglicol (PEG) e tween 20, fase oleosa, que contm1-octanol hidroxil propil celulose (HPC) e span 80, por agitao com um agitador magntico. Este mtodo considerado mais eficiente comparativamente com o mtodo de emulsificao em duas fases, pela utilizao dos dois polmeros, que melhoram a estabilidade da emulso. A temperatura de emulsificao, a ordem de adio de fases e de tensioactivos e a razo entre o volume das duas fases so parmetros cruciais para a produo de emulses mltiplas estveis atravs deste mtodo (Morais et al., 2009, Khan et al., 2006). 4.1.3 Mtodo de emulsificao por membrana Esta uma tcnica recente e mais til onde uma membrana de vidro microporoso, com um tamanho de poro definido pode ser utilizada como ferramenta de emulsificao. Esta tcnica baseada no princpio da disperso duma fase imiscvel (fase dispersa) noutra fase (fase contnua) atravs da aplicao de presso. Outros mtodos de preparao do origem a elevada variabilidade no tamanho das gotculas, mas esta tcnica d emulso o tamanho de gotcula desejado, devido possibilidade de escolher o tamanho do poro da membrana. O tamanho da partcula da emulso A/O/A pode ser controlada com a seleco adequada da membrana porosa de vidro e a relao entre o tamanho dos poros da membrana e o tamanho da partcula da emulso apresenta boa correlao, tal como descrito pela frmula 1 (Lachman, 2001): =5,03x +0,19 (1)
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y =tomono mcJio Jos gotculos prcporoJos por csto tcnico x =tomono Jo poro Esta tcnica foi utilizada na preparao de emulses O/A e A/O/A estveis. Essas emulses foram encapsuladas de forma eficaz e a sua libertao controlada foi conseguida (Khan et al., 2006). 4.2. Equipamentos usados na emulsificao Quase todos os mtodos usados para dividir a fase interna em gotculas dependem da energia, necessitando de algum tipo de agitao. Quando um lquido injectado no seio de outro lquido, o jacto produzido em forma cilndrica, quebrado em pequenas pores. Os factores que influenciam a diviso do jacto do lquido injectado so: o dimetro do bico, a velocidade com que o lquido injectado, a densidade e a viscosidade do lquido injectado e, evidentemente, a tenso interfacial entre os dois lquidos. De forma semelhante, obtm se gotculas quando um lquido vertido num segundo lquido sob agitao vigorosa. Uma vez ocorrida uma quebra inicial das gotculas, estas continuam a ser sujeitas a foras adicionais devido turbulncia que leva deformao da gotcula com a diviso desta em gotculas mais pequenas (Lachman, 2001, Prista et al., 1995). Encontram-se no mercado vrios tipos de equipamentos que permitem produzir emulses a uma escala laboratorial ou industrial. Independentemente do tamanho ou, de pequenas variaes, esses equipamentos podem ser agrupados em quatro categorias principais (Lachman, 2001, Prista et al., 1995): - Agitadores mecnicos; - Homogeneizadores; - Ultra-sonicadores; - Moinhos coloidais. O factor mais importante envolvido na produo de uma emulso o grau de corte e turbulncia necessrios para se obter grau determinado da disperso de gotculas lquidas. O Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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grau de agitao necessrio depende do volume total de lquido a ser agitado, da viscosidade do sistema e da tenso interfacial na interface leo-gua. Os dois ltimos factores so determinados pelo tipo de emulso a produzir, pela razo entre as duas fases e pelo tipo e concentrao dos emulgentes. Por esta razo, no existe um nico mtodo de disperso que possa ser usado para a preparao de qualquer emulso (Lachman, 2001). Durante a agitao ou durante a transferncia de uma emulso para outro contentor, pode-se formar espuma. A formao de espuma ocorre porque o tensioactivo, solvel em gua, necessrio para a emulsificao tambm reduz a tenso interfacial entre o ar e a gua, o que leva incorporao de ar pela emulso. Para minimizar a formao de espuma a emulsificao pode ser efectuada em sistemas fechados, com um mnimo de espao ou sob vcuo. Para alm disso, a agitao mecnica, particularmente durante o arrefecimento de uma emulso recm preparada, pode ser regulada para que o ar suba at ao topo da preparao. Se estas precaues no forem suficientes para eliminar ou reduzir a formao de espuma, pode ser necessria a adio de agentes anti-espuma preparao. No entanto, o uso destas substncias deve ser evitado completamente uma vez que podem ser incompatveis com outros materiais. Os agentes anti-espuma mais eficazes so os lcoois de cadeia longa e os derivados de silicone, que se encontram disponveis comercialmente. Estas substncias actuam ao espalharem-se facilmente na interface ar-gua formando filmes insolveis (Lachman, 2001). 4.3. Tcnicas de caracterizao e controlo de emulses Entre as numerosas tcnicas de caracterizao e controlo de emulses, podem distinguir-se 3 grupos. Num grupo, aquelas que so prprias das emulses, entre as quais, a medida do tamanho da gotcula, a determinao do sinal da emulso, a temperatura de inverso de fases e a velocidade de formao de creme ou de sedimentao por centrifugao. Noutro tipo de controlo esto includos os ensaios comuns a todo o tipo de formulaes semi-slidas e pastosas, tratando-se essencialmente da caracterizao das propriedades reolgicas, o teste da extruso e a determinao do ponto da gotcula. Num terceiro grupo encontram-se os ensaios destinados a estabelecer a estabilidade da emulso formulada. Nestes ensaios submete-se a emulso a condies drsticas de temperatura, ciclos de temperatura, centrifugao ou agitao forte. Estes ensaios tm como finalidade avaliar a estabilidade do sistema e com eles se comprova se haver separao de fases, modificao do tamanho da gotcula ou Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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modificao da viscosidade. Existem por ltimo, outros ensaios, como os microbiolgicos, organolpticos, de contedo do princpio activo, controlo de embalagem, etc., que so muito comuns s formulaes farmacuticas em geral (Jato, 1997, Lachman, 2001). 4.3.1 Agitao A durao de agitao tal como a variao da temperatura tem uma influncia profunda e complexa sobre o processo de emulsificao. Durante o perodo de agitao inicial requerida para emulsificao formam-se gotculas, no entanto, medida que a agitao continua, a probabilidade de coliso das gotculas aumenta e a coalescncia pode ocorrer e, para alm disso, pode diminuir a viscosidade de uma emulso com propriedades tixotrpicas. Segundo O termo tixotropia usado para descrever uma transio estrutural reversvel a qual associada a um aumento na tenso de cisalhamento, seguida de uma reduo at ao valor original, ou seja, para um fluido ser definido como tixotrpico, este deve regenerar totalmente a sua estrutura quando deixado em repouso, aps cisalhado. O cisalhamento est relacionado com a aplicao de uma fora na estrutura das partculas da emulso, que vai produzir a reduo do seu tamanho e portanto, reduz a viscosidade aparente do produto (Jato, 1997, Lachman, 2001, Branco, 2003). Foi demonstrado que a melhor maneira de formar uma emulso consiste em utilizar uma agitao intermitente. Existe ainda uma relao entre a temperatura e a durao da agitao, isto , o ciclo de arrefecimento/aquecimento. Por rotina preparam-se emulses a temperaturas elevadas. A velocidade de arrefecimento da emulso formada tambm tem influncia nas caractersticas da emulso. Infelizmente, no possvel prever para uma determinada emulso se desejvel um ciclo de arrefecimento lento ou rpido (Lachman, 2001). No que diz respeito s emulses mltiplas, uma elevada taxa de cisalhamento interrompe uma maior percentagem de gotculas mltiplas oleosas e, portanto, resulta na instabilidade do sistema devido a um grande aumento na rea superficial efectiva. Por isso, com um aumento do tempo de homogeneizao, o rendimento do sistema diminui rapidamente. Geralmente, nas emulses mltiplas utiliza-se uma elevada velocidade de agitao para a emulsificao primria e uma velocidade mais baixa utilizada para a emulsificao secundria. Taxas de cisalhamento muito altas ou muito baixas afectam drasticamente a estabilidade do sistema, Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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portanto, o tempo de cisalhamento/agitao dever ser optimizado. Uma maior tenso de cisalhamento causa a incorporao de ar e consequentemente h formao excessiva de espuma resultando em perda de tensioactivo na interface ar-gua, enquanto uma menor tenso de cisalhamento reduz o tamanho dos glbulos, ou seja, necessrio encontrar um equilbrio (Khan et al., 2006). 4.3.2 Temperatura Na prtica, a emulsificao conseguida pelo calor, ou melhor, por diversas formas de alterao da temperatura. As interaces so complexas sendo praticamente impossvel prever se um aumento da temperatura ir favorecer a emulsificao ou a coalescncia (Lachman, 2001). Um aumento da temperatura diminui a tenso interfacial bem como a viscosidade, logo, poder-se- prever, o que normalmente verdade, que a emulsificao favorecida por um aumento de temperatura. Ao mesmo tempo, no entanto, um aumento da temperatura aumenta a energia cintica das gotculas e assim facilita a sua coalescncia. Alteraes da temperatura alteram a distribuio dos coeficientes de partilha dos emulgentes entre as duas fases, provocando migrao do emulgente em funo da temperatura. Isto no pode ser correlacionado directamente com a formao ou com a estabilidade de uma emulso, uma vez que ocorrem simultaneamente alteraes na tenso superficial e na viscosidade (Lachman, 2001). A influncia mais importante que a temperatura tem sobre uma emulso provavelmente sobre a sua inverso. A temperatura a que a inverso ocorre depende da concentrao do emulgente e conhecida como temperatura de inverso de fases (TIF). Este fenmeno pode ocorrer durante a formao de emulses, uma vez que estas so normalmente preparadas a temperaturas relativamente elevadas e, em seguida, arrefecidas temperatura ambiente. As emulses formadas por uma tcnica de inverso de fases so consideradas bastante estveis e as gotculas da fase interna encontram-se finamente dispersas. A temperatura de inverso de fases considerada, normalmente, como a temperatura qual as propriedades hidroflicas e lipofilcas do emulgente se equilibram, sendo tambm conhecida como a temperatura de EHL (Lachman, 2001). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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No que diz respeito as emulses mltiplas, o aumento da temperatura vai aumentar tambm o carcter lipoflico dos tensioactivos hidroflicos, o que vai aumentar a tendncia para este precipitar. Desta forma, comum que para a formulao da emulso primria a temperatura mantida em 70C, enquanto para a preparao de emulses mltiplas mantida a 10C. Grandes variaes de temperatura durante a fabricao, transporte, armazenagem e utilizao leva a modificaes drsticas nas emulses (Khan et al., 2006). 4.3.3 Reologia A medio das propriedades reolgicas das emulses tem interesse por vrias razes. Por um lado, necessria consistncia, de forma que se mantenham no local de aplicao durante o tempo necessrio; por outro lado, tambm necessrio que consigam fluir em determinadas circunstncias, (para facilitar a agitao durante a preparao, para propiciar a sua extenso sobre uma superfcie ou fluir sem dificuldade por uma agulha hipodrmica). Como tambm, a consistncia e textura da emulso farmacutica ou cosmtica pode ser um factor crtico relativamente sua aceitao por parte do paciente. Para a realizao dos controlos reolgicos do produto aconselhvel esperar umas horas (24-48h) j que uma emulso recm preparada demora um determinado tempo a atingir a viscosidade que lhe corresponde (Jato, 1997, Lachman, 2001). Embora a viscosidade das emulses possa variar amplamente, possvel fazer algumas consideraes gerais sobre o comportamento das mesmas. Como tal, existe uma relao proporcional entre a fraco volmica da fase interna e a viscosidade aparente. A concentraes menores que 74%, as gotas da emulso no esto em contacto e no interferem no seu movimento. Ao aumentar a concentrao, vo-se produzir maiores interferncias entre as gotas, pelo que o fluxo mais difcil. Um empacotamento elevado de gotas dificulta seriamente o fluxo e consequentemente isso traduz-se num aumento da viscosidade, o que vai requerer grandes foras de cisalhamento para vencer a resistncia ao fluxo que se ope a essa estrutura to densa. Se se continuar a adicionar fase interna, como ocorre frequentemente, produz-se uma inverso da emulso, e observa-se uma reduo brusca da viscosidade; por exemplo, podemos passar de uma consistncia tipo pomada para creme fino, o que se traduz num ajuste das taxas de cisalhamento. Quando a viscosidade for alta as taxas de cisalhamento Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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tero de ser baixas e vice-versa, de forma a manter a estabilidade. Assim, o produto obtido poder fluir sem requerer um grande aporte de energia (Jato, 1997). Desta forma, para emulses combaixo volume de fase interna, a consistncia geralmente semelhante da fase contnua; assim, emulses O/A/O so geralmente mais espessas do que emulses A/O/A. A consistncia dum sistema A/O/A pode ser aumentada atravs da adio de gomas, argilas, e outros agentes de espessantes que transmitam propriedades de fluxo plstico ou pseudoplstico, embora a adio destes agentes esteja condicionada a que a reologia do sistema resultante seja aceitvel para a sua aplicao (Khan et al., 2006, Jato, 1997). possvel aumentar a viscosidade de uma emulso ao diminuir o tamanho da gotcula; quando a proporo da fase interna elevada, uma diminuio do tamanho do glbulo produz um aumento da viscosidade, a qual incide sobre a viscosidade do sistema. Por outro lado, se as gotculas possuem um tamanho uniforme fcil que se produza um empacotamento ordenado e compacto; uma grande disperso de tamanhos dificulta o ordenamento e, portanto, dificulta o empacotamento, o qual facilita o movimento das gotculas. Consequentemente, uma emulso homognea possui uma maior viscosidade relativamente a uma muito heterognea. Quanto ao ponto de semi-ruptura, este proporcional tenso interfacial existente no sistema e inversamente proporcional ao raio da gotcula e traduz-se no tempo necessrio para que o valor da interfase especifica se reduza a metade. A interfase especfica o coeficiente entre a rea interfacial (em dm 2 ) e a quantidade da fase interna (Jato, 1997). A medio da viscosidade um parmetro importante para estudos de caracterizao e estabilidade de emulses mltiplas. No caso de uma emulso instvel, a camada oleosa pode sofrer rupturas internas e as gotculas aquosas fundem-se com a fase aquosa contnua e desaparecem instantaneamente diminuindo a viscosidade do sistema (Khan et al., 2006). A anlise reolgica das emulses mltiplas muito importante pois determina a estabilidade da emulso in vitro e o desempenho clnico in vivo. Os viscosmetros de Brookfield so amplamente utilizados para determinao da viscosidade das emulses mltiplas. Trs diferentes tipos de testes foram propostos para simular as condies in vivo, tais como ensaio Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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oscilatrio, testes de fluxo no estado estacionrio e testes de choque e turbulncia. A fora do filme interfacial, isto , a elasticidade dos componentes (A/O) e (O/A) da emulso mltipla (A/O/A) foi avaliada por medio reologica interfacial na interface leo/gua usando um remetro de superfcie oscilatria. Um fluxo tixotrpico negativo de emulses A/O/A foi observada quando a taxa de cisalhamento se encontrava baixa, sendo mais pronunciada quando a taxa de cisalhamento aumentava, ou quando se aumentava o tempo da operao (Khan et al., 2006). A viscosidade das emulses tende a aumentar com o tempo de armazenamento; por exemplo, se durante o tempo de armazenamento ocorrer floculao do sistema pode-se observar um aumento da viscosidade. Este fenmeno designado de envelhecimento (Jato, 1997). 4.4. Caracterizao in vitro A avaliao in vitro de emulses mltiplas um importante passo no desenvolvimento de um sistema com suporte estvel e eficaz de frmacos, o que leva previso da correlao in-vitro in-vivo. Mudanas significativas nos parmetros que se seguem durante a preparao, armazenamento ou transporte so indicadores de pouca estabilidade na emulso (Khan et al., 2006). 4.4.1 Exame macroscpico O exame macroscpico e das caractersticas organolpticas, no que diz respeito s emulses, realiza-se sobre a formulao recm preparada e aps o seu armazenamento mediante condies drsticas. Este tipo de exame baseia-se em observaes primrias como colorao, consistncia e homogeneidade, caractersticas usadas frequentemente para garantir a formao da emulso. Para alm das possveis consequncias teraputicas, por exemplo, uma m dosificao devida formao de creme, as caractersticas organolpticas adequadas so indispensveis para atingir a aceitao e seguimento do tratamento por parte do paciente (Jato, 1997, Khan et al., 2006). 4.4.2 Exame microscpico / tamanho da gotcula A determinao do tamanho da gotcula realiza-se sobre o produto acabado e depois do seu armazenamento. Um aumento do tamanho da gotcula indica a existncia de processos de Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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coalescncia, crescimento dos glbulos e, portanto, a instabilidade da emulso ao longo do tempo. Assim, determinando a evoluo do tamanho da gotcula e a partir deste, a rea da interfase, possvel avaliar a estabilidade da emulso ao longo do tempo. Para a determinao do tamanho da gotcula podem utilizar-se vrias tcnicas. A microscopia de luz ou electrnica so mtodos directos que proporcionam a distribuio dos tamanhos e, portanto, o valor da rea interfacial. As emulses mltiplas tambm tm sido estudadas atravs de vdeos de microscopia feitos no interior de microcapilares. Diferentes tcnicas de filmagem (Time- lapse, cinemicrografia contnua e de alta velocidade, fotomicrografia) foram utilizadas para caracterizao(Lachman, 2001, Khan et al., 2006). O exame microscpico da emulso sem diluio coloca em evidncia os processos de recristalizao do princpio activo e aditivos. O inconveniente desta tcnica a possibilidade de se sobrestimar o tamanho da gotcula. O exame microscpico pode tambm ser realizado sobre uma amostra diluda, sendo a diluio realizada de forma standardizada. O problema desta tcnica o nmero elevado de gotas cujo tamanho se tem que medir para se estabelecer correctamente a distribuio do tamanho (mais de 600). Quando se observam emulses mltiplas esto inerentes mais duas desvantagens (Khan et al., 2006, Lachman, 2001): 1. Pequenas gotas passam a formar grandes gotas, o que d uma falsa impresso de natureza mltipla 2. Se as gotas internas forem muito pequenas estas podem no ser visualizadas devido reflexo da luz na superfcie das gotculas de leo. Com as emulses de fase externa aquosa podem utilizar-se outras tcnicas mais sofisticadas, como o exemplo dos contadores de Coulter. O inconveniente deste mtodo reside na necessidade de diluir a amostra num electrlito, portanto, no se trata a emulso original. Embora tenha sido demonstrado que na maioria dos casos as modificaes de tamanho originadas pela diluio so pouco importantes e reprodutveis (Jato, 1997). Outros sistemas utilizados para a medio do tamanho da gotcula so os baseados na difraco de luz laser ou nas emulses multiplas. Estes so utilizados, principalmente, quando as emulses possuem um tamanho de gotcula no visvel ao microscpio, por exemplo, como Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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o caso das emulses preparadas por inverso de fase. Estes mtodos normalmente requerem a diluio da amostra, o que leva considerao da possibilidade de causar instabilidade da mesma como tambm a mudana das propriedades iniciais. Sempre que seja possvel, melhor utilizar a mesma fase externa como dissolvente (Jato, 1997). 4.4.3. Nmero de glbulos O nmero de glbulos tambm um parmetro importante para a caracterizao de emulses mltiplas. Um nmero elevado de glbulos mltiplos sugere uma emulso boa e estvel aps o armazenamento. O nmero de glbulos por milmetro cbico (mm 3 ) pode ser medida utilizando hemocitometria celular aps diluio adequada da emulso. Os glbulos so contados em cinco grupos de 16 pequenos quadrados (total 80 quadrados) e o nmero total de glbulos por milmetro cbico pode ser calculado atravs da seguinte frmula (2) (Khan et al., 2006): Nr Jc 0lbulos / mm 3 = N dc gIbuIos Iuo 4000 N dc quududos pcqucnos contudos (2) 4.4.4. Determinao da velocidade de formao de creme ou de sedimentao por centrifugao Sabe-se que a armazenagem sob condies normais pode ser prevista rapidamente, por observao da separao da fase dispersa quando a emulso exposta a centrifugao. A equao de Stokes, abaixo referida, na frmula 3, mostra que a cremagem uma funo da gravidade e que um aumento desta acelera a separao, embora no seja possvel fazer uma previso quantitativa (Lachman, 2001). dx dt = 2 2 (p 2 -p)g 9q (3) Jx Jt :clociJoJc Jc ormoo Jc crcmcs r roio Jos gotculos p 2 JcnsiJoJc Jo osc Jispcrso p JcnsiJoJc Jo mcio p :iscosiJoJc Jo mcio Jc Jispcrso Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Foram estabelecidas condies standard de realizao deste ensaio. Considera-se uma emulso estvel quando depois de centrifugada no se observam separaes de fases. Assim, por exemplo, considera-se que a centrifugao a 3750 rpm durante 5 horas, numa centrfuga com 10 cm de raio, equivalente aco da gravidade durante um ano. Por vezes, o processo de centrifugao mantido durante o tempo necessrio para que ocorra a separao das fases. A separao pode conduzir a trs fases: uma de leo, uma intermdia e uma aquosa. Este ensaio utiliza-se principalmente para avaliar a estabilidade das emulses durante a etapa de pr-formulao, embora tambm se possa utilizar para detectar alteraes durante o armazenamento (Jato, 1997). 4.4.5. Determinao do pH Esta determinao para alm de ser de interesse geral, no caso das emulses importante para determinar se ocorrem alteraes de pH com o tempo. Estas alteraes podem, por um lado, levar a um pH pouco adequado ao local de aplicao, instabilidade de algum componente da formulao ou do prprio sistema. Por exemplo, os emulsificantes no inicos podem conter em alguns casos impurezas de sabes alcalinos que podero originar problemas se ocorrer uma acidificao durante o armazenamento. Dependendo da viscosidade da emulso, vai ser necessrio um tipo ou outro de elctrodo para a realizao da medio (Jato, 1997). 4.4.6. Determinao do sinal da emulso Para determinar o sinal de uma emulso o mais simples comprovar se um volume pequeno da mesma se mistura facilmente com a gua; se assim for, a fase externa aquosa e vice- versa. No entanto, as emulses muito concentradas e muito viscosas podem no se misturar com a gua mesmo tendo a fase externa aquosa, o que dificulta a determinao do sinal correcto. Outra tcnica que pode ser utilizada a da incorporao de um corante, quer hidrossolvel ou lipossolvel, e com o auxlio do microscpio observar qual das fases, contnua ou dispersa, incorpora o corante (Jato, 1997).
A fluorescncia outra das tcnicas que poder ser usada j que os leos apresentam fluorescncia quando expostos aos raios UV. Como tal, as emulses O/A apresentam um aspecto ponteado enquanto as emulses A/O fluorescem uniformemente. Este tipo de tcnica no sempre aplicvel (Lachman, 2001). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Por ltimo, a medida da condutividade elctrica das emulses tambm serve para determinar o seu sinal. Se a contribuio da condutividade interfacial significativa, a condutividade elctrica da emulso ir variar com o tamanho e a distribuio do tamanho da gotcula; servindo ento, para detectar modificaes neste sentido. No entanto, a maioria das emulses possui uma condutividade independente do tamanho da gotcula, que se pode tratar mediante a teoria elctrica simples. Nos casos em que no necessrio considerar os efeitos da interfase, pode-se utilizar para o clculo da condutividade especfica elctrica a seguinte expresso (Jato, 1997): I = L 1 [2L 1 +L 2 -2(L 1 -L 2 )v] [2L 1 +L 2 +(L 1 -L 2 )v] (4) I 1 conJuti:iJoJc cspcciico Jo osc cxtcrno I 2 conJuti:iJoJc cspcciico Jo osc intcrno I roco Jc :olumc Jo osc intcrno 4.4.7. Eficincia de encapsulao / percentagem de frmaco encapsulado / rendimento da emulso Os parmetros existentes para avaliar a qualidade das emulses mltiplas so a formao de emulso e o seu rendimento. A relao entre o tensioactivo lipoflico na fase de oleosa relativamente ao tensioactivo hidroflico na fase contnua, afectam o rendimento da emulso A/O/A. Esta relao dever ser superior a 10 para alcanar 90% ou mais do rendimento das emulses. Outro dos parmetros que influencia a eficincia da encapsulao o stress que a emulso sofre durante a sua preparao (Khan et al., 2006, Vladisavljevic e Williams, 2005). Existem dois mtodos, utilizados para avaliar a produo de gotculas na produo de emulses mltiplas, a anlise granulomtrica e da tcnica do traador interno. A anlise da distribuio granulomtrica de gotculas simples e mltiplas do sistema pode ser estimada atravs do rendimento da emulso. O segundo mtodo baseia-se no uso do traador interno e estabelece a eficincia de encapsulao; neste mtodo um marcador molecular impermevel adicionado primeira fase aquosa da emulso, ou seja, basicamente envolve a determinao da substncia activa no encapsulada atravs do uso de marcadores. O rendimento da emulso Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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pode ser medido pela dissoluo dum composto marcador na fase interna da fase aquosa e medindo a concentrao do marcador na fase aquosa exterior. O rendimento pode ser determinado subtraindo-se o montante remanescente do marcador a partir do valor original. A dilise, centrifugao, filtrao e condutividade so os quatro mtodos geralmente utilizados para determinao da eficcia de encapsulao por esta tcnica. Diversos marcadores tm sido utilizados como a glicose, ies de hidrognio, electrlitos, frmacos inicos (efedrina, cido clordrico), corantes (politartarazina), marcadores radioactivos (gua tritiada), etc (Khan et al., 2006). O rendimento das emulses A/O/A melhorou atravs da adio de vrios aditivos na fase interna aquosa como alquilsulfonato de sdio, alquilcarbonato de sdio, tweens, carbonato de sdio e sorbitol. Este aumento foi atribudo diminuio da tenso interfacial entre a fase interna aquosa e fase oleosa da emulso. Resultados semelhantes no encapsulamento do frmaco foram relatados aps a adio de cloreto de sdio na fase interna aquosa em emulses A/O/A contendo triptofano como frmaco modelo. O encapsulamento do frmaco aprisionado diminuiu quando o cloreto de sdio foi adicionado fase aquosa externa (Khan et al., 2006). Um estudo realizado por Bonnet et al, demonstrou que o aumento da fraco dos glbulos foi um mtodo eficiente para melhorar a reteno das espcies encapsuladas nas gotculas aquosas internas. (Bonnet et al., 2010c). 4.4.8. Potencial zeta O potencial zeta das emulses pode ser medido com a ajuda do mtodo da camada mvel ou, mais rpida e directamente, pela observao do movimento das partculas sobre a influncia de uma corrente elctrica. O potencial zeta bastante til para a avaliao da floculao, uma vez que cargas elctricas sobre as partculas influenciam a velocidade de floculao. Se a instabilidade for devida a coalescncia, a determinao das cargas de superfcie das partculas pode no ser importante na previso da sua estabilidade (Lachman, 2001). A medio da condutividade elctrica tem sido considerada como uma ferramenta til para a avaliao da estabilidade da emulso imediatamente aps a sua preparao, como tambm pode ser utilizada para determinar a carga da superfcie das emulses mltiplas. No que diz respeito condutividade elctrica de emulses simples, esta determinada com a ajuda de Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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elctrodos de platina por microamperometria para produzir uma corrente de cerca de 15 a 50 LiA. As medies so feitas temperatura ambiente ou a 37 C, em emulses armazenadas por perodos de tempo reduzidos (Lachman, 2001, Khan et al., 2006). A condutividade depende tambm do grau de disperso. As preparaes O/A com partculas pequenas apresentam resistncia reduzida: um aumento da resistncia revela agregao de gotculas de leo e consequentemente revela instabilidade. Uma emulso fina de gua num produto A/O no conduz a corrente at que se verifique coalescncia das gotculas, isto , quando se torna instvel (Lachman, 2001). 5. Estabilidade A estabilidade das emulses constitui o seu ponto mais crtico. Do ponto de vista termodinmico, s se considera uma emulso estvel no caso de o nmero e o tamanho das gotculas da fase interna, por unidade de volume de fase contnua, se mantiverem constantes ao longo do tempo. Isso indicaria que no se produzem modificaes no valor energtico do sistema nem na sua rea interfacial (Jato, 1997, Khan et al., 2006). No entanto, do ponto de vista farmacutico, no necessrio que uma emulso seja termodinamicamente estvel. Na realidade, uma estabilidade cintica suficiente, ou seja, considera-se uma emulso estvel quando as gotculas mantm o seu tamanho e forma iniciais e permanecem uniformemente distribudos na fase contnua por um perodo razovel de tempo (suficiente para seu armazenamento e uso), ou seja no dever ocorrer nenhuma mudana de fase ou contaminao microbiana no armazenamento, e a emulso dever manter a elegncia no que diz respeito ao odor, cor e consistncia (Jato, 1997, Khan et al., 2006). 5.1 Estabilidade fsica Existem vrios processos fsicos que contribuem para o fim da estabilidade de uma emulso, entre os quais a cremao, a agregao, coalescncia das gotculas, a inverso de fases, a difuso molecular e a relao do volume das fases. De seguida, apresentado um esquema que caracteriza esses processos de instabilidade (Jato, 1997). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Figura 2: Esquema dos diversos processos que conduzem instabilidade de uma emulso Adaptado de (J ato, 1997). 5.1.1 Coalescncia: A coalescncia envolve a ruptura do filme interfacial e pode ocorrer a vrios nveis: entre as pequenas gotculas aquosas internas; entre os grandes glbulos de leo e entre os glbulos e as pequenas gotculas dispersas no seu interior. Ento, o fenmeno da coalescncia ocorre quando a tenso interfacial diminui na superfcie de separao de fases, provocando agregao das partculas. Essa agregao forma partculas mais grossas, produzindo assim uma maior separao das fases (Prista et al., 1995, Bonnet et al., 2010a). Quando este fenmeno ocorre, uma nova agitao incapaz de voltar a dispersar as fases uma na outra, o que s possvel se adicionarmos mistura mais agente emulsivo. Este comportamento parece sugerir que a coalescncia dos glbulos est directamente relacionada com o agente emulsivo, admitindo-se hoje que o ritmo de coalescncia depende, alm de outros factores, muito principalmente das caractersticas fsicas da pelcula formada pelo emulgente (Prista et al., 1995). Para evitar este inconveniente, necessrio construir uma capa interfacial mais rgida proporcionando mais resistncia s deformaes. Para consegui-lo, utilizam-se tensioactivos orientados para a interfase, para que estes estabeleam unio entre a fase externa e a fase interna, tornando mais difcil a coalescncia. (Martina, 2005). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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5.1.2 Agregao Como o nome indica, a agregao um processo de desestabilizao de uma emulso relacionado com a unio das gotculas da fase dispersa de forma a originar agregados. Embora a identidade das gotculas seja mantida, cada agregado comporta-se como uma unidade. Este fenmeno influenciado pelas alteraes da superfcie dos glbulos emulsionados. Na ausncia de uma barreira mecnica (protectora) na interface, e, se uma quantidade insuficiente de um emulgente est presente, as gotculas da emulso agregam-se e coalescem rapidamente. A agregao difere da coalescncia sobretudo pelo facto de o filme interfacial e as partculas individuais permanecerem intactas (Jato, 1997, Lachman, 2001). As partculas presentes na emulso esto carregadas electricamente positiva ou negativamente, em funo da sua natureza qumica e dos fenmenos de frico, polarizao e solvatao a que esto submetidos. O valor do potencial zeta dever ser suficientemente elevado para manter as partculas dispersas e separadas umas das outras. Quando as cargas so muito numerosas, a diferena de potencial com o meio que as rodeia importante pois as partculas repelem-se entre si. Quando as cargas esto total ou parcialmente neutralizadas, as partculas dispersas agregam-se, ocorrendo o fenmeno da floculao. Quando h um aumento da fora inica, devido ao aumento da concentrao de electrlitos ou um aumento da concentrao do emulgente tende tambm a promover a floculao. Embora os electrlitos possam ser usados para levar instabilidade das emulses, uma quantidade reduzida de um electrlito contribui para a estabilizao das emulses (Martina, 2005, Lachman, 2001). A floculao ento um fenmeno teoricamente reversvel por agitao, mas denota uma estabilidade precria da emulso, que poder transformar-se em coalescncia quando o filme interfacial no suficientemente slido. Para alm da floculao existe outro tipo de agregao designada de coagulados cuja redisperso bastante mais difcil e que, portanto, provocam problemas mais graves de estabilidade (Jato, 1997, Martina, 2005). 5.1.3 Cremao Muitas emulses tm tendncia a formar creme quando so deixados em repouso. Este fenmeno consequncia da aco da gravidade sobre a fase dispersa e da diferena de Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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densidade entre as fases que constituem a emulso. Trata-se de um processo de sedimentao (Jato, 1997, Prista et al., 1995). Se a densidade das gotculas superior da fase externa estas tero a tendncia de sedimentar na emulso, mas se a densidade das gotculas for inferior estas iro agrupar-se na parte superior da emulso. Assim, formar-se-o zonas mais ou menos concentradas dependendo do local onde as gotculas se acumulem(J ato, 1997). A ocorrncia de cremao no implica necessariamente a coalescncia nem a agregao das gotculas e um processo reversvel. Desta forma, quando a cremao o nico processo de desestabilizao de uma emulso, este poder ser resolvido mediante agitao. No entanto, do ponto de vista farmacutico um processo que se deve evitar, j que pode originar uma dosificao errnea, causar mau aspecto e tambm, devido maior proximidade das gotculas, facilitar a coalescncia e agregao (Jato, 1997, Prista et al, 1995). A cremao, em essncia, um processo de sedimentao, e por isso possvel aplicar-se a equao de Stokes (formula 3) para estud-la. A aplicao da lei de Stokes supe que as gotculas so esfricas e que se encontram to separadas que o movimento de umas no modifica o movimento das outras. Na realidade, no o que acontece, j que muitas vezes as gotculas das emulses no se encontram homogeneamente dispersas, interferindo assim umas com as outras no seu movimento. Alm disso, se num sistema existe floculao, a esfericidade das gotculas perdida (Jato, 1997). Apesar de todas estas limitaes, a equao de Stokes constitui uma boa aproximao qualitativa da realidade, como tambm serve para observar os factores que controlam a formao de creme. Em primeiro lugar, a velocidade da formao de creme proporcional ao quadrado do raio dos glbulos, portanto, o processo mais rpido medida que o tamanho da gotcula da emulso aumenta. Para alm disso, nos sistemas em que tenha ocorrido coalescncia e/ou agregao tambm se acelera o processo de cremao. Uma forma de reduzir a velocidade de cremao obter um menor tamanho de gotcula na emulso, atravs da melhora do sistema de obteno e da seleco de um bom agente emulsionante. Em segundo lugar, a equao de Stokes prev que no ocorrer formao de creme se a densidade Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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da fase interna e externa da emulso forem iguais, mas formular emulses cujas fases possuam a mesma densidade muito difcil a nvel prtico, j que essa igualdade s se produz num intervalo estreito de temperatura (Jato, 1997). Por ltimo, um aumento da viscosidade do meio externo tambm reduz a velocidade de formao de creme e constitui outra forma de aumentar a estabilidade da emulso, pois previne a difuso da gua e dos seus compostos solveis para as fases exteriores. Muitos agentes emulsionantes incluem esta propriedade como parte da sua aco estabilizante. Por exemplo, a adio de metilcelulose reduz a mobilidade das gotculas da emulso O/A, e a parafina, nas emulses A/O. Outro composto que ajuda a estabilizar a emulso a presena de cloreto de sdio (NaCl) na fase interna da emulso (Jato, 1997, Schmidts et al., 2009, Lutza, 2009). 5.1.4. Inverso de fases Este fenmeno pode ocorrer em emulses cuja concentrao na fase dispersa elevada sendo esse resultado derivado da adio de compostos ou da alterao da temperatura. No entanto, necessrio indicar que se trata de um processo pouco frequente durante o armazenamento, excepto no caso de sistemas muito sensveis a mudanas de temperatura ou alguma interaco com algum componente da formulao (Jato, 1997). A temperatura de inverso de fases (TIF) aquela na qual a emulso muda de sinal; o seu valor depende da natureza da fase oleosa, dos tensioactivos e da concentrao dos tensioactivos e outros adjuvantes. Para muitos tensioactivos no inicos, a TIF aumenta com o valor de EHL. A inverso de fases pode ser provocada voluntariamente com o fim de obter espontaneamente emulses com um tamanho reduzido de gotculas, sendo por isso mais finas e homogneas devido a alteraes na viscosidade e condutividade elctrica da emulso, ou pode ser provocada involuntariamente. Quando a inverso involuntria traduz-se numa instabilidade que obriga modificao da formulao (Martina, 2005, Jato, 1997). 5.1.5. Difuso molecular A difuso molecular ou crescimento de Ostwald o processo pelo qual as gotculas mais pequenas se solubilizam nas maiores, provocando um aumento do tamanho. Este processo Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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ocorre em emulses cujo tamanho de gotcula pequeno, essencialmente os de dimenses coloidais. por isso que emulses que contenham apenas algumas gotas pequenas se tornam mais estveis do que as que contmalgumas gotas ou muitas gotas menores (Jato, 1997, Lieberman, 1996). Este processo diz respeito a uma verdadeira instabilidade pois trata-se de uma modificao na textura de emulso, sendo mais proeminente em emulses grosseiras e heterogneas (Martina, 2005). A difuso molecular poder ser representada atravs da equao de Kelvin (Jato, 1997): RI ln S r S c = 2yv m
(6) S
solubiliJoJc Jo osc Jispcrso com gotculo com roio "r"
r roio Jo gotculo S o solubiliJoJc Jo osc Jispcrso com gotculo com tomono ininito y tcnso intcrociol I m :olumc molor Esta equao indica que as gotculas de menor tamanho so mais solveis que as maiores, pelo que tendem a dissolver-se com mais facilidade. As gotculas maiores so mais insolveis, e por isso tendem a aumentar de tamanho. Para evitar este processo, deve-se tentar obter uma distribuio homognea do tamanho da partcula (Jato, 1997). 5.1.6 Relao entre o volume das fases A relao entre o volume das fases, isto , os volumes relativos de gua e de leo que figurem numa emulso pode, igualmente, exercer uma certa influencia na estabilidade da formulao. De facto, se se tentar incorporar mais de 74% de leo numa emulso do tipo O/A, os glbulos de leo coalescem na maioria das vezes, desfazendo a emulso. Este valor, denominado ponto crtico, representa a concentrao da fase interna para alm da qual um agente emulsivo incapaz de originar uma emulso estvel do tipo pretendido (Prista et al., 1995). Acontece, no entanto, ser possvel obter-se emulses estveis em que a fase interna superior a 74% do total da emulso, mas tal facto deve-se circunstncia de nesses casos as partculas Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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dispersas se apresentarem com formas e dimenses irregulares, s assim h um aumento do ponto crtico, pois este, foi calculado partindo da permissa de que todos os glbulos dispersos so esfricos (Prista et al., 1995). A relao entre a proporo da fase interna relativamente fase externa tambm influenciada pela solubilidade do frmaco que necessita estar presente numa quantidade farmacologicamente activa. Se a solubilidade no apresentar um problema, ento, a razo entre as fases determinada normalmente pela consistncia desejada do produto. Geralmente, as emulses mais estveis correspondem a uma relao de volume das fases de 1:1, tendo sido essa proporo descoberta empiricamente (Prista et al., 1995, Lachman, 2001). No que diz respeito s emulses mltiplas, o volume da fase primria no tem efeito significativo sobre o rendimento de emulses A/O/A, portanto, uma vasta gama de volumes de fase primria podem ser usados para a formulao de emulses mltiplas. Um volume ptimo de fase interna (25-50%) pode ser utilizado para a formulao da emulso. O volume da fase secundria influencia o rendimento da formao de gotculas mas apenas em fraces de volume baixas. igualmente muito importante ter uma ordem da adio de fases adequada, como tambm importante que a adio da fase dispersa seja feita de forma lenta e continua na fase continua (Khan et al., 2006). 5.2. Estabilidade qumica As emulses tambm podem sofrer processos de instabilidade qumica. Em primeiro lugar encontram-se as incompatibilidades entre os diferentes componentes; por exemplo, os tensioactivos de carga oposta. Tambm se ter de ter em conta que os agentes emulsivos podem precipitar com a adio de alguns compostos em que estes so insolveis; por exemplo, os coloides hidrfilos podem precipitar ao adicionar lcool. Outra das situaes que pode causar instabilidade qumica relaciona-se com a alterao da hidratao dos tensioactivos devido presena de electrlitos, pois estes podem originar precipitao, ou em outros casos inverso de fase (Jato, 1997, Lachman, 2001). As alteraes de pH podem tambm causar instabilidade na emulso. Assim, os sabes sdicos podem reagir com compostos cidos, dando origem a um cido gordo livre e o sal Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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sdico do cido, o que faz com que as formulaes que contm estes tensioactivos so normalmente estabilizadas a pH alcalino (Jato, 1997). As reaces de oxidao so um grupo de reaces qumicas que tambm possui importncia neste tipo de instabilidade. Quando se utiliza gorduras de origem animal ou vegetal as emulses, estas podem sofrer processos de rano. Estes processos consistem em reaces de oxidao causadas pelo oxignio atmosfrico ou por aco de microrganismos. Os produtos de degradao tm muitas vezes um odor desagradvel. Para evitar o rano podem-se utilizar conservantes de aco anti-microbiana, agentes redutores ou anti-oxidantes (Jato, 1997). Deste modo, a inrcia qumica um requisito absoluto e bvio, sendo importante que a natureza qumica dos constituintes de uma emulso seja entendida antes da sua seleco para ser includa numa dada preparao (Lachman, 2001). 5.3 Estabilidade microbiana As emulses tambm podem desestabilizar-se em consequncia de uma contaminao microbiana. Existem muitos fungos e bactrias que podem contaminar a fase aquosa, j que conseguemproliferar temperatura ambiente e em intervalos amplos de pH (Jato, 1997). Em alguns casos, uma elevada contaminao pode no se manifestar no aspecto da emulso, o que pode representar um risco para o paciente, se os microrganismos em causa forem patognicos. Em outros casos, a contaminao microbiana manifesta-se em mudanas de pH, odor e cor, produo de gs e hidrlise das gorduras presentes (Jato, 1997). O crescimento microbiano favorecido quando algum dos componentes da emulso constitui um meio nutritivo adequado, ou quando o componente em si a fonte de contaminao, como pode ser o caso da gua. Assim, de uma forma geral, as emulses A/O so menos sensveis a contaminaes do que as O/A porque quanto menor a proporo de fase aquosa, menor a probabilidade de se produzir uma proliferao microbiana, como tambm a fase oleosa (contnua) vai actuar como barreira contaminao e assim esta no difunde por toda a emulso (Jato, 1997). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Para evitar este tipo de instabilidade normal incluir na formulao um agente antimicrobiano, e realiza-se um controlo microbiolgico das matrias-primas (Jato, 1997). 5.4 Estabilizao de emulses Os principais mecanismos pelos quais a instabilidade ocorre em emulses do tipo A/O/A so essencialmente os seguintes (Khan et al., 2006): 1. Agregao das gotculas internas da emulso mltipla. 2. Quebra ou ruptura da camada oleosa na superfcie interna das gotculas. 3. Escoamento do contedo do interior da gotcula para a fase externa. 4. Retraco e inchao das gotas internas. 5. Separao de fases. Desta forma, a instabilidade inerente a emulses mltiplas um grande desafio para este sistema de libertao. Uma srie de abordagens foram tentadas para melhorar a estabilidade da emulso mltipla e muitos tm sido sugeridos para futuras investigaes (Khan et al., 2006). 5.4.1 Estabilizao atravs da formao de gel polimrico A gelificao da fase interna, externa ou mesmo da membrana interfacial tem sido utilizada em vrios estudos para estabilizar emulses. Este mtodo baseado no reforo da viscosidade da fase aquosa melhorando, desta forma, a estabilidade das gotculas da emulso (Khan et al., 2006, Schmidts et al., 2009). Esta estabilizao pode ser utilizada em formulaes onde a libertao do frmaco feita de forma sustentada como antitranspirantes ou produtos de higiene pessoal, como tambm em engenharia alimentar e em engenharia qumica. A adio de carbmeros para alm de estabilizar a emulso, tambm vai tornar a formulao mais agradvel ao toque (Khan et al., 2006, Lieberman, 1996). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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5.4.2 Aditivos para a fase aquosa interna Diferentes aditivos, tm diferente influncia na estabilidade da emulso. Um estudo realizado por Schmidts et al, demonstrou que aditivos influenciam fortemente a estabilidade e as propriedades das emulses mltiplas, pois atravs do aumento da concentrao dos ingredientes osmoticamente activos, menores gotculas mltiplas so formadas sendo a viscosidade do sistema significativamente aumentada. Relativamente aos agentes de espessamento a estabilidade ligeiramente melhorada . Por exemplo, foi estudada a influncia de vrios compostos na estabilidade do sistema, sendo esses compostos a glucose, sacarose, cido actico, cido ctrico, cido ascrbico, cloreto de sdio e acetato de sdio e observou-se que a glucose e a sacarose podem aumentar a viscosidade, o que leva a um aumento da estabilidade do sistema. A adio de aditivos na fase interna aquosa torna-a hipertnica, e esse fenmeno estabiliza o sistema (Khan et al., 2006, Lieberman, 1996). Um estudo microscpico realizado em tais emulses indicou que a concentrao de dextrose (quando varia entre 0 e 2,5%), na fase aquosa interna da emulso aumentou a estabilidade verificada em termos de grau de coalescncia de gotculas internas e em relao taxa de ruptura da camada oleosa interfacial ( Schmidts et al., 2010). 5.4.3 Estabilizao termodinmica: reduo da tenso interfacial Foi comprovado que outros factores, como a consistncia da pelcula interfacial, so tanto ou mais decisivos na estabilidade de uma emulso do que a diminuio da tenso interfacial. Isso explica o facto dos compostos com escassa actividade superficial possam estabilizar emulses que outros tensioactivos mais potentes so incapazes de estabilizar. Assim, fala-se de tensioactivos que formam pelculas interfaciais gasosas, como o dodecil sulfato de sdio, ou condensadas, como o oleato de sdio (Jato, 1997, Lachman, 2001). Imaginando o caso de uma emulso O/A: quando duas gotas se aproximam produz-se a repulso das cabeas inicas das molculas de tensioactivo. Numa pelcula tipo gasosa, as molculas desta encontram-se bastante separadas e possuem uma certa mobilidade; assim, em consequncia da repulso das molculas estas deslocam-se. Em seguida, deixam zonas livres na interfase da emulso que derivam da interaco e coalescncia das gotculas. No entanto, no caso de uma pelcula interfacial do tipo condensada as molculas de tensioactivo no se podem mover, o que faz com que a repulso entre elas tambm origine uma repulso entre as gotculas e consequentemente uma maior estabilidade (Jato, 1997). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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No que diz respeito s emulses mltiplas, utilizam-se misturas de emulsionantes para dar mais fora ao filme interfacial, sendo a relao dos tensioactivos hidroflicos e hidrofbicos muito importante na optimizao de emulses mltiplas estveis. Emulses mltiplas A/O/A foram produzidas com uma estabilidade a longo prazo atravs da modulao das concentraes de span 83 e tween 80 (Khan et al., 2006). Aps a realizao de um estudo, foi verificado que a concentrao ideal, relativamente aos tensioactivos, que d origem a uma emulso mltipla A/O/A estvel a longo prazo 20% (peso/volume) de Span 83 na fase oleosa e 0,1% (peso/volume) de Tween 80 na fase contnua. Uma maior concentrao de Tween 80 tem um efeito destrutivo sobre a estabilidade das emulses A/O/A. Essa concluso foi tirada atravs da observao da diminuio da fora do filme interfacial na interface leo/gua quando a concentrao de Tween 80 aumentava. Uma elevada concentrao de Span 83 aumentou os valores do mdulo de armazenamento, tornando-a mais elstica (solidlike) e, portanto, a estabilidade da emulso mltipla reforada. No entanto, quando 30% de Span 83 foi incorporada, a viscosidade da emulso primria aumentou consideravelmente e as gotculas da emulso perderam a sua forma (J iao e Burgess, 2003). 5.4.4 Formao do filme interfacial aceite que os agentes tensioactivos tendem a concentrar-se nas interfaces e que os emulgentes so adsorvidos nas interfaces leo-gua como filmes monomoleculares. Se a concentrao do emulsificador for suficientemente elevada, forma um filme rgido entre as fases imiscveis que actua como uma pelcula quer na adeso quer na coalescncia das gotculas da emulso (Lachman, 2001, Jato, 1997). As medies da rea ocupada por uma nica molcula de agente tensioactivo na interface das gotculas da emulso mostraram que, para emulses estveis, as molculas dos agentes tensioactivos encontram-se de facto num empacotamento apertado formando um filme interfacial forte. Este conceito baseado em consideraes espaciais que tm sido usadas para explicar um facto bastante conhecido: as misturas de emulgentes so, mais eficazes por se empacotarem de forma mais densa, contribuindo para a resistncia do filme e, assim, para a estabilidade da emulso (Lachman, 2001). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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Assim, emulses estveis apresentam camadas de cristais lquidos na interface das gotculas emulsificadas com a fase contnua. Atravs de microscopia ptica (luz polarizada), electrnica e difractometria de raios-X de ngulo reduzido, possvel demonstrar que misturas de emulgentes podem interagir com a gua para formarem estruturas associadas em trs dimenses. Consequentemente, o conceito clssico de emulses como sistemas bifsicos com uma camada monomolecular de um emulgente na interface tem que ser revisto, pois com estas evidncias, as emulses devem ser encaradas como sistemas de trs componentes compreendendo um leo, gua e cristais lquidos dispostos em lamelas, sendo estes constitudos por camadas consecutivas de gua-emulgente-leo-gua (Lachman, 2001). Relativamente s emulses A/O/A, a membrana interfacial polimerizada demonstrou ser mais eficaz do que mtodos anteriores porque a membrana resultante restringe a migrao de tensioactivo duma interface para outra, sendo essa uma das causas de instabilidade destas emulses. Este modo de estabilizao poder ser executada atravs da polimerizao in situ na interface ou atravs da interaco interfacial entre um polmero e um tensioactivo. Durante a procura de emulses A/O/A estveis para utilizar como veculo para um processo de libertao sustentado, inmeros pesquisadores tm recorrido complexao interfacial entre tensioactivos no inicos e macromolculas. Assim, devido a um estudo com poloxamero 403 (tensioactivo hidrofilico de elevado peso molecular) autores concluram que a estrutura metaestvel da emulso e a sua estabilidade a longo prazo dependente da presso osmtica no interior das gotculas (Khan et al., 2006). 5.4.6 Estabilizao electroesttica e estrica As foras elctricas repulsivas existentes em gotculas que se aproximam devem-se existncia de uma camada dupla que advm de grupos elctricos orientados sobre a superfcie de glbulos emulsificados (provenientes das molculas anfiflicas). O potencial elctrico produzido pela dupla camada cria um efeito repulsivo entre as gotculas do leo evitando a sua coalescncia (Lachman, 2001, Khan et al., 2006). Embora o potencial elctrico de repulso, existente na interface da emulso possa ser calculado, no pode ser medido directamente nem permite a comparao com os pressupostos tericos. O potencial responsvel pela repulso entre duas gotculas carregadas inclui o Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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potencial elctrico de repulso e uma srie de outras interaces conhecidas como foras de Van der Waals e interaces de London. O potencial de repulso para grandes distncias reduzido, aumentando rapidamente com a diminuio da distncia entre as gotculas. Admite- se que as fases constitudas pelos cristais lquidos rodeiam as gotculas emulsificadas e, se estas fases aderirem fortemente, de esperar uma alterao do potencial de Van der Waals. A distncia para a qual esta alterao ocorre depende, no s do raio da gotcula, mas tambm da fase lquida cristalina da compressibilidade e da reologia deste conjunto (Lachman, 2001). A presena de tensioactivos inicos na interfase das emulses contribui para a modificao da carga superficial e, consequentemente, da dupla camada elctrica, aumentando as foras de repulso existentes entre as gotas e, deste modo, a estabilidade. A adio de um tensioactivo inico no o nico factor que pode modificar a magnitude do potencial zeta, sendo outro factor decisivo nos valores do potencial zeta a concentrao do electrlito presente. A adio de electrlitos a uma emulso pode, como j foi referido, favorecer a sua tendncia para a agregao (Jato, 1997, Khan et al., 2006). A estabilizao estrica deve-se capacidade da nuvem estrica impedir a instabilidade das emulses, podendo ser conseguida atravs da adsoro ou enxertia de polmeros naturais, como tambm, usando tensioactivos polimricos ou enxertos de polmeros lipdicos. As emulses mltiplas podero tambm ser estabilizadas se as revestirmos com polissacardeos hidrofobizados (Khan et al., 2006). 5.5 Estudos da estabilidade acelerada No com facilidade que se determina a instabilidade de uma emulso, por isso necessrio esperar perodos, mais ou menos prolongados, antes que apaream sinais de instabilidade numa emulso. Para acelerar os testes de estabilidade o formulador submete frequentemente a emulso a condies de stress. Alternativamente, pode-se procurar um teste ou parmetro da emulso que permita detectar mais facilmente a sua instabilidade, do que basear a anlise em meras observaes macroscpicas. Ambas as concepes no so perfeitas (Lachman, 2001). Para prever a estabilidade de uma emulso durante o armazenamento, podem-se utilizar alguns ensaios efectuados em condies drsticas. Para isso, armazenam-se as emulses Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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durante diferentes perodos de tempo e a temperaturas geralmente maiores que as habituais. Na seleco das temperaturas necessrio ter em considerao que uma emulso pode ser perfeitamente estvel durante grandes perodos a 40-50 o C; embora, temperaturas superiores a 55 o C j no sejam toleradas mesmo por pouco tempo. Desta forma, necessrio ser cuidadoso na interpretao dos resultados destes estudos. No recomendvel utilizar temperaturas superiores a 50 o C, excepto no caso de emulses que iro ser submetidas a essas mesmas temperaturas (por exemplo, emulses parenterais) (Jato, 1997). Num tipo de estudo com mais interesse incluem-se os ensaios cclicos. Nestes estudos, submete-se uma emulso a ciclos de temperatura, onde esta varia desde 4 a 45 o C. Noutros casos, armazena-se a emulso a 4 o C e posteriormente submete-se a mesma a ciclos em que a temperatura varia de -20 a +25 o C. Assim, a emulso fica exposta s distintas temperaturas em que se poder encontrar durante o seu armazenamento. Este estudo tem interesse pois, de acordo com o tipo de emulso considerada, podero ser tanto as altas como as baixas temperaturas as mais prejudiciais no que refere estabilidade. Por um lado, as altas temperaturas favorecem a coalescncia, a formao de cremes e diminuem a viscosidade. Por outro lado, as emulses ficam mais viscosas quando arrefecem at temperatura ambiente. As mudanas de temperatura podem tambm modificar a solubilidade dos agentes emulsionantes e a velocidade de cristalizao dos componentes. Desta forma, com a realizao destes estudos possvel obter uma melhor informao sobre a estabilidade da emulso na prtica (Jato, 1997). Aps o armazenamento, avalia-se a emulso de forma a verificar se ocorreu separao de fases, mudana de viscosidade, condutividade elctrica, distribuio do tamanho, caractersticas organolpticas ou alteraes do tipo qumico (Jato, 1997, Lachman, 2001). 6. Tipos de administrao Nos ltimos 20 anos, tem havido uma revoluo na tecnologia das emulses, sendo estes sistemas investigados para vrios processos industriais e como sistemas de libertao de frmacos. Este tipo de emulses so utilizadas como transportadores de frmacos polares e apolares estando dependentes da inteno da aplicao, via de administrao e da viabilidade da formulao. As emulses mltiplas podem ser administradas por via oral, parenteral (i.v, Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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i.p, s.c, i.m) e tpica dependendo do fim teraputico. O destino in vivo das emulses mltiplas diferem de outros sistemas de entrega em termos de estabilidade, perspectivas farmacocinticas e farmacodinmicas (Khan et al., 2006). 6.1. Administrao oral Aps a administrao oral, a emulso digerida e absorvida pelo sistema linftico e, em seguida, transportada para o sangue. Assim, em primeiro lugar, os lipidos, so hidrolisados no estmago e no intestino delgado, dando origem a cidos gordos e monoglicerdeos, que posteriormente so absorvidos pelos entercitos, sendo re-esterificados em triglicridos e armazenados em lipoprotenas intestinais como tambm podem tambm ser absorvidos directamente pelos macrfagos intestinais. Estes so finalmente secretados na linfa mesentrica, chegando de seguida circulao sistmica atravs do ducto linftico torcico. Desta forma, o transporte do frmaco atravs dos vasos linfticos intestinais pode ser utilizado (Khan et al., 2006, Maiti et al., 2009a, Maiti et al., 2009b): 1. Na modulao da taxa de absoro do frmaco; 2. No aumento a biodisponibilidade pela diminuio do efeito de primeira passagem; 3. Na segmentao de frmacos para vasos linfticos. O potencial das emulses mltiplas para contornar o efeito de primeira passagem e o severo ambiente gastrointestinal, bem como, a capacidade de serem absorvidos atravs do sistema linftico colocaram-nas numa posio vantajosa no que diz respeito administrao por via oral de agentes bioactivos, como a insulina e a vancomicina, ou outro tipo de protenas, os quais normalmente no so absorvidos por esta via (Cui et al., 2005, Degim e Celebi, 2007, Gallarateet al., 2009, Onuki et al., 2004, Okochi e Nakano, 2000, Pays, 2002, Khan et al., 2006,). 6.2 Administrao parenteral: A administrao parenteral de emulses mltiplas pode ser realizada atravs de uma multiplicidade de vias como intra-muscular (i.m), intra-venosa (i.v), intraperitonial (i.p) ou sub-cutnea (s.c). O mecanismo realmente importante, no que diz respeito aos sistemas parenterais, est relacionado com a rpida libertao dos macrfagos do sistema Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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reticuloendotelial na circulao sistmica (mecanismo de defesa no especfico) (Khan et al., 2006). Aps a administrao i.v., as emulses ficam envoltas com os macrfagos circulatrios e so transportadas para a linfa e fgado para dar inicio ao metabolismo da gordura, enquanto para outras rotas parenterais, a emulso tem acesso aos espaos intersticiais dos vasos linfticos, ficando assim prxima dos ndulos linfticos (em contraste com os compostos de baixo peso molecular solveis em gua, que so absorvidos no sangue) que so relativamente porosos em relao aos capilares sanguneos. As emulses mltiplas tm caractersticas intrnsecas de linfotrpismo, portanto, esto a ser investigadas para o tratamento de infeces bacterianas, de metstases de cancro mas tambm como preveno em vacinas e alimentao parenteral essencialmente quando a camada oleosa existente entre as duas aquosas actua como uma membrana, controlando a libertao do soluto (Khan et al., 2006, Lieberman, 1996, Bozkir e Hayta, 2004, Guidetti et al., 2008). Ensaios clnicos demonstraram que uma emulso contendo na fase aquosa epirrubicina (frmaco antineoplsico), e na fase oleosa, leo de semente de papoila iodado usando o polioxietileno (40) hidrogenado como tensioactivo hidrofbo, quando administrada directamente no fgado atravs a artria heptica, contrai eficazmente o tecido cancergeno. Neste tipo de terapia essencial um bom controlo no tamanho da gotcula para que desta forma estas fiquem acumuladas nos pequenos vasos do tumor, em vez de nem l chegarem, se forem demasiado grandes, ou passarem por l sem parar, se forem demasiado pequenas (Vladisavljevic e Williams, 2005, Liu et al., 2011, Khopade, 2000). As emulses mltiplas tm tambm atrado interesse na terapia da embolizao percutnea (TAE), devido sua baixa viscosidade e alta capacidade de encapsulamento. Emulses mltiplas contendo epirrubicina (EPI) foram utilizadas para a terapia TAE. Esta emulso apresentou uma baixa hemlise, em comparao com emulso simples, devido ao encapsulamento do frmaco na camada oleosa. Os estudos de toxicidade aguda destas emulses aps a administrao intravenosa foram inferiores s da emulso simples. Aps a administrao arterial heptica, toxicidade do frmaco no fgado foi tambm reduzida (Khan et al., 2006). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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6.3. Administrao tpica Quando um medicamento aplicado na pele duas consequncias fsicas ocorrem constituindo uma limitao permeao cutnea: libertao do composto activo do veculo e a penetrao do composto atravs da barreira cutnea. Estes dois processos esto intimamente relacionados, e ambos so dependentes das propriedades fsicas do frmaco, do veculo e da barreira (Laugel et al., 2000, Dehghanyar et al., 2004). Ferreira e colaboradores desenvolveram uma emulso mltipla A/O/A que continha na sua constituio metronidazol e glucose, comparando a sua libertao percutnea com a de emulses simples A/O e O/A. A absoro do metronidazol foi semelhante no que diz respeito s emulses A/O/A e s O/A sendo menor na emulso A/O. Relativamente absoro da glucose a ordem obtida foi a seguinte: O/A >A/O/A >A/O (Ferreira et al, 1995). As emulses A/O/A podem ainda ser aplicadas na cavidade ocular podendo ter na sua constituio frmacos para o tratamento, por exemplo, do glaucoma. Neste tipo de emulses, o modo de preparao ter de ser mais rigoroso devido administrao num local to sensvel e susceptvel a infeces (Khan et al., 2006, Karatas et al., 2009). Neste caso, as emulses O/A/O podem ser usadas como uma forma potencial de libertao do frmaco, pois o seu uso tpico tende a diminuir o efeito sistmico, j que eles permanecem retidos na epiderme e na derme. Neste caso a viscosidade um parmetro a ter em ateno pois influencia fortemente a penetrao do frmaco na pele, durante o fenmeno de ocluso. Existem ainda poucos estudos sobre a administrao tpica de emulses mltiplas. (Laugel et al., 2000, Khan et al., 2006, Pianovski, 2008). Este tipo de administrao poder tambm ser relacionado com a aplicao vaginal. Estudos observaram que, especialmente em meio alcalino h uma elevada libertao das substncias activas, tratando-se de uma vantagem nas infeces vaginais com origem na alterao do pH para mais alcalino. Assim as emulses A/O/A foram localmente eficazes quando aplicadas localmente na vagina podendo tambm ser introduzidas como um novo sistema de transportador de drogas para o parto vaginal (Gupta et al., 2011, Ozer, 2007 ). Um dos principais compostos activos que se pode incorporar neste tipo de sistemas diz respeito aos Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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anti-spticos devido s suas caractersticas antimicrobianas. Neste caso, possvel fazer associaes de anti-spticos pois podemos incorpor-los nas duas fases aquosas que constituem o sistema ( Tedajoa, 2005, Tedajo, 2002, Bozkir e Hayta, 2004). No que diz respeito formulao as emulses mltiplas neste caso podem tambm apresentar algumas vantagens como facilitar a aplicao, evitar a irritao e ardor na regio vulvovaginal como tambm originar formulaes com textura leve, no gordurosa e no pegajosa (Ozer, 2007 ). 7. Estado da arte: aplicaes actualizadas das emulses 7.1. Substituto de oxignio Uma emulso mltipla estvel de hemoglobina (Hb /O/A) foi preparada para simular as propriedades dos glbulos vermelhos do sangue. As emulses mltiplas servem de membrana lquida atravs da qual os gases (O 2 e CO 2 ) so trocados com a hemoglobina incorporada na fase aquosa interna. Desta forma, esta abordagem poder ainda ser utilizada no futuro, utilizando emulses mltiplas como substituto do sangue (Khan et al., 2006, Kocian, 2005, Pape e Habler, 2007). Outros materiais esto ser utilizados para o mesmo efeito, sendo esses materiais derivados sintticos e fluorados da hemoglobina, inertes com compostos orgnicos e designados de perfluroqumicos (PFCs). Os PFCs dissolvem grandes volumes de oxignio e outros gases, no reagindo com o corpo, e sendo excretados principalmente como um vapor de exalao. So lquidos imiscveis com sangue e outros fluidos corporais, mas podem ser injectados na corrente sangunea de forma segura como emulses. Estudos bsicos e clnicos tm demonstrado que este tipo de emulses podem manter adequadamente e de forma eficaz a oxigenao dos tecidos durante a perda aguda de sangue sem alteraes anormais a nvel hemodinmico. Este tipo de sistema pode tambm ser utilizado em casos de anemia normovolmica aguda (Lowe, 2003, Kocian, 2005, Cabrales e Briceno, 2011, Barbosa, 2009, Riess, 2006, Pape e Habler, 2007). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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7.2. Direccionamento de frmacos A especificidade do frmaco um pr-requisito muito importante para qualquer terapia farmacolgica. A abordagem ideal para um sistema de entrega de frmacos faz-lo somente no tecido/rgo doente e no afectando os outros tecidos que no esto doentes (targeting ou direccionamento de frmacos). O targeting de frmacos est intimamente relacionado com o tamanho das gotculas e a dimenso da distribuio. Quando as dimenses so reduzidas para alm de conseguirem passar atravs de finos capilares, tm um maior tempo em circulao, maior capacidade de ligao e acumulao no local desejado, provocando assim uma menor reaco inflamatria e resposta imune. Se as dimenses das gotculas forem homogneas (monodispersas) vai permitir que haja um maior controlo sobre a libertao da dose do frmaco encapsulado assim como uma melhor biocompatibilidade (Khan et al., 2006, Liu et al., 2011, Constantinides, 2008, Wang et al., 2009, Piacentini et al., 2011). Este sistema tem particular interesse, como j foi referido, para os frmacos citotxicos devido baixa toxicidade para tecido no-doente mas tambm podem ser utilizados em problemas cardiovasculares, em formas de administrao de anti-inflamatrios (de forma a evitar sobredosagens e a direccionar o frmaco) ou como agentes de contraste para imagiologia molecular (nas ressonncias magnticas) (Khan et al., 2006, Liu et al., 2011, Constantinides, 2008, Wang et al., 2009, Kaneda e Wickline, 2009, Talegaonkar, 2005, Vasiljevic, 2006). 7.3. Mascarar sabores Emulses mltiplas foram tambm investigadas para mascarar o gosto dos frmacos amargos. Frmacos amargos e solveis em gua podero ser incorporados na fase aquosa interna da emulso A/O/A, que esta cercado por uma camada oleosa, levando a que o sabor amargo do frmaco fique mascarado. Vrios leos biocompatveis/comestveis foram utilizados para mascarar sabor de muitos frmacos como a cloroquina. A cloroquina um antimalrico conhecido pelo seu sabor amargo e pode ser administrado atravs de uma emulso mltipla, facilitando a adeso ao tratamento (Khan et al., 2006, Vaziri e Warburton, 1994, Musabayane et al., 2003). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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7.4. Tratamento da sobredosagem / desintoxicao: As emulses mltiplas podem ser utilizadas para o tratamento de sobredosagem de substncias cidas como barbitricos ou salicilatos. No caso dos barbitricos, quando a emulso administrada por via oral, o pH cido do estmago transfere-se para a fase externa aquosa, onde este existe principalmente na forma no ionizada, o que vai facilitar a transferncia deste, mediante o gradiente de concentrao, atravs da fase oleosa at fase aquosa interna. A presena de um tampo na fase interna ioniza o barbitrico e impede seu transporte no sentido inverso. Assim, o aprisionamento do frmaco em excesso na emulso mltipla trata a sobredosagem (Lieberman, 1996, Khan et al., 2006, Pays, 2002). No que diz respeito aos salicilatos, quando estes se encontram no tracto gastrointestinal so capturados para o interior da emulso na sua forma no ionizada. Depois de passarem a membrana oleosa, os salicilatos so convertidos na fase interna da emulso em anies insolveis em leo, evitando assim a sada do anio para o meio exterior. Em condies favorveis a taxa de remoo do barbitrico ronda os 95% em 5 minutos, e os salicilatos ainda so extrados mais rpido (Lieberman, 1996). 7.5. Aplicao em cosmtica As emulses so agentes muito teis em cosmticos e em produtos de higiene pessoal, onde a maioria das formulaes tm como base tanto emulses O/A como emulses A/O. Vrias formulaes, como protectores solares, creme para as mos, cremes de barbear, perfumes etc so preparados com fins nutritivos, hidratantes e protectores na cincia dos cosmticos, sendo baseados nos sistemas de emulses mltiplas. Tensioactivos no-inicos de aplicao cutnea so usados para a preparao de emulses mltiplas utilizadas em cosmticos devido sua baixa toxicidade. A produo de emulses estveis a longo prazo, tem sido o objectivo proposto para aplicaes cosmticas (Khan et al., 2006, Nonomura et al., 2011, Akhtar et al., 2008). As emulses mltiplas tm um grande potencial como sistemas de libertao controlada dos compostos activos usados em cosmtica como o exemplo da vitamina C usado para o rejuvenescimento cutneo como tambm o acido gliclico usado para realizar peelings qumicos (Akhtar e Yazan, 2008, Farahmand, 2006, Yener e Baitokova, 2006, Rozman e Gasperlin, 2007). Possuem por isso uma elevada capacidade de aprisionamento em Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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comparao com outros sistemas, apresentam uma proteco de substncias frgeis e ainda a possibilidade de combinar substncias incompatveis num produto. Recentemente, emulses O/A/O tm sido utilizadas com mais frequncia neste tipo de sistemas devido sua maior oclusividade, durabilidade na pele, aceitabilidade e maior capacidade de reteno da substancia activa na epiderme comparativamente com as emulses A/O (Degim e Celebi, 2007, Boonme, 2007, Laugel et al., 2000, Myung-Han Lee, 2001). 7.6. Nutracuticos Actualmente, existe uma grande procura de veculos comestveis com a capacidade de encapsular, proteger e libertar lpidos bioactivos e outros compostos como vitaminas, antioxidantes, pptidos bioactivos, aromas, cores, minerais e conservantes, sendo as emulses A/O/A um dos mais estudados. Existem vrias indstrias interessadas nestes sistemas, como a farmacutica, a alimentar e mesmo a mdica. Os lpidos bioactivos que na indstria alimentar so incorporados nestes sistemas incluem os cidos gordos -3, carotenoides e fitoesterois (McClements et al., 2007, McClements 2009, McClements e Li, 2010, Li et al., 2010, Miyanoshita et al., 2011, Nonomuraet al., 2011, Guidetti et al., 2008). Um veculo que seja comestvel deve cumprir diversos requisitos. Primeiro, deve encapsular uma quantidade aprecivel do componente funcional de uma forma que seja facilmente incorporado nos sistemas alimentares; segundo, o veculo pode ter de proteger o componente funcional de degradao qumica (oxidao ou hidrlise por exemplo) para que este permanea em seu estado activo; terceiro, o veculo pode ter que libertar o componente funcional num determinado local de aco, a uma taxa controlada e/ou em resposta a um ambiente especfico (por exemplo pH, fora inica ou temperatura); quarto, o veculo deve ser compatvel com o alimento especfico matriz que a rodeia, em quinto, o veculo deve ser resistente aos vrios tipos de condies ambientais que um alimento esta sujeito durante sua produo, armazenamento, consumo e transporte (McClements 2009, McClements e Li, 2010). O facto de estes veculos serem comestveis causa restries acerca do tipo de ingredientes e operaes de tratamento que podem ser usados para criar a emulso, e apesar do potencial destes sistemas h poucos exemplos de emulses mltiplas a serem usadas em produtos Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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alimentares no presente. A principal razo para isso a grande susceptibilidade das emulses mltiplas degradao durante o armazenamento ou quando expostas a tenses ambientais comummente utilizadas na indstria de alimentos, tais como foras mecnicas, o processamento trmico, refrigerao, congelao e desidratao (McClements et al., 2007, Li et al., 2010). 7.7. Outras utilizaes Recentemente, as emulses mltiplas foram utilizadas para biblioteca de genes, onde emulses A/O foram utilizadas para compartimentar e para seleccionar as bibliotecas de genes de grande porte. A funo das gotculas aquosas da emulso A/O a de formar compartimentos semelhantes a clulas em cada um dos quais um nico gene transcrito e traduzido dando origem a mltiplas cpias da protena (por exemplo, uma enzima). Enquanto a compartimentao garante que o gene e a protena que ele codifica e os produtos da actividade dessa protena permaneam ligados, no garante uma forma de seleccionar a actividade desejada. (Khan et al., 2006, Bernath et al., 2004). Nos ltimos anos, as emulses mltiplas tornaram-se tambm uma nova ferramenta no campo da biotecnologia, no que diz respeito imobilizao de enzimas, protenas, aminocidos, etc. (Khan et al., 2006, Sun et al., 2006). Emulses O/A/O que actuem como membranas lquidas tm sido usadas para separar hidrocarbonetos, onde a fase aquosa serve de membrana e um solvente como fase externa ou como sistema de encapsulao de compostos pouco solveis em gua como as microsferas de retinol em slica. (Lieberman, 1996, Myung-Han Lee, 2001). Outra das mais recentes utilizaes de emulses mltiplas diz respeito sua aplicao em sprays secos, ou seja, um spray seco produzido a partir de uma emulso A/O/A contendo os frmacos a incorporar nas diferentes fases. Assim, este tipo de sistema pode ser utilizado em pacientes com problemas respiratrios sendo a veiculao das substncias no pulmo feita de forma sustentada e directamente no local desejado, oferecendo benefcios potenciais para os pacientes (Learoyd et al., 2010, Chaw et al., 2003). Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
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8. Concluso Como podemos constatar pela reviso efectuada, as emulses mltiplas so veculos com inmeras vantagens perante tantas outras formulaes. So sistemas que possibilitam a administrao por vrias vias (como a parentrica, tpica e oral), possuem a capacidade de encapsular compostos com diferente polaridade e ainda se conseguem adaptar a diferentes modos de libertao dos frmacos (libertao de forma sustentada, direccionamento de frmacos, etc). Embora as emulses mltiplas sejam sistemas de libertao de frmacos com muitas vantagens, so tambm, como foi possvel verificar, sistemas altamente instveis, o que vai dificultar a sua preparao e conservao. Formas de instabilidade como a cremao, coalescncia, inverso de fases, entre outras, so cada vez mais estudados para assim, ser mais fcil a produo e posterior armazenamento do produto final. Desta forma, o impacto das emulses mltiplas como veculos de administrao de frmacos de elevada importncia, devido sua ampla aplicabilidade em diferentes reas da sade e biotecnologia como tambm devido diversidade das formas de administrao.
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60
9. Bibliografia Akhtar, N., Ahmad, M., Masood, M. e Aleem, M. (2008). Formulation and in vitro evaluation of a cosmetic emulsion from almond oil. Pak J Pharm Sci, 21, 430-7. Akhtar, N. e Yazan, Y. (2008). Formulation and in-vivo evaluation of a cosmetic multiple emulsion containing vitamin C and wheat protein. Pak J Pharm Sci, 21, 45-50. Ansel, H., Popovich, N., Allen, L. (2007). Formas Farmacuticas e Sistemas de Liberao de Frmacos, So Paulo, artmed. Barbosa, F. T., Juca, M. J., Castro, A. A., Duarte, J. L., Barbosa, L. T. (2009). Artificial oxygen carriers as a possible alternative to red cells in clinical practice. Sao Paulo Medical Journal, 127, 97-100. Bernath, K., Hai, M., Mastrobattista, E., Griffiths, A., Magdassi, S. e Tawfik, D. (2004). In vitro compartmentalization by double emulsions: sorting and gene enrichment by fluorescence activated cell sorting. Anal Biochem, 325, 151-7. Bonnet, M., Cansell, M., Placin, F., Anton, M. e Leal-Calderon, F. (2010a). Impact of sodium caseinate concentration and location on magnesium release from multiple W/O/W emulsions. Langmuir, 26, 9250-60. Bonnet, M., Cansell, M., Placin, F., David-Briand, E., Anton, M. e Leal-Calderon, F. (2010b). Influence of ionic complexation on release rate profiles from multiple water-in-oil-in- water (W/O/W) emulsions. J Agric Food Chem, 58, 7762-9. Bonnet, M., Cansell, M., Placin, F., Monteil, J ., Anton, M. e Leal-Calderon, F.(2010c). Influence of the oil globule fraction on the release rate profiles from multiple W/O/W emulsions. Colloids Surf B Biointerfaces, 78, 44-52. Boonme, P. (2007). Applications of microemulsions in cosmetics. J Cosmet Dermatol, 6, 223- 8. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
61
Bozkir, A. e Hayta, G. (2004). Preparation and evaluation of multiple emulsions water-in-oil- in-water (w/o/w) as delivery system for influenza virus antigens. J Drug Target, 12, 157-64. Branco, I. G., Gasparetto, C. A. (2003). Comportamento reolgico de suco de laranja concentrado congelado. Revista Brasileira de Produtos Agroindustriais, V 5 p.173- 178. Cabrales, P. e Briceno, C. (2011). Delaying blood transfusion in experimental acute anemia with a perfluorocarbon emulsion. Anesthesiology, 114, 901-11. Chaw, C. S., Yang, Y. Y., Lim, I. J. e Phan, T. T. (2003). Water-soluble betamethasone- loaded poly(lactide-co-glycolide) hollow microparticles as a sustained release dosage form. J Microencapsul, 20, 349-59. Consiglieri, V. O. (2002). Farmacotcnica. Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas.V 38, N. 4. Constantinides, P. P. , C. M. V., Shorr, R. (2008). Advances in lipid nanodispersions for parenteral drug delivery and targeting. Advanced Drug Delivery Reviews, 60, 757 767. Cui, F., Cun, D., Tao, A., Yang, M., Shi, K., Zhao, M. e Guan, Y. (2005). Preparation and characterization of melittin-loaded poly (DL-lactic acid) or poly (DL-lactic-co- glycolic acid) microspheres made by the double emulsion method. J Control Release, 107, 310-9. Degim, I. T. e Celebi, N. (2007). Controlled delivery of peptides and proteins. Curr Pharm Des, 13, 99-117. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
62
Dehghanyar, P., Mayer, B. X., Namiranian, K., Mascher, H., Muller, M. e Brunner, M. (2004). Topical skin penetration of diclofenac after single- and multiple-dose application. Int J Clin Pharmacol Ther, 42, 353-9. Erdal, M. S., A. A. (2006). Development and evaluation of multiple emulsions systems containing cholesterol and squalene Turkish Journal Pharmacy Science, V3, 105-121. Farahmand, S., Tajerzadeh, H. e Farboud, E. S. (2006). Formulation and Evaluation of a Vitamin C Multiple Emulsion. Pharmaceutical Development and Technology, 11, 255261. Ferreira, L.A.M.; Doucet, J.; Seiller, M.; Grossiord, J.L.; Marty, J.P.; Wepierre, J. (1995). In vitro percutaneous absorption of metronidazole and glucose: Comparison of o/w, w/o/w and w/o systems. Int. J. Pharm., 121, 169. Gallarate, M., Trotta, M., Battaglia, L. e Chirio, D. (2009). Preparation of solid lipid nanoparticles from W/O/W emulsions: preliminary studies on insulin encapsulation. J Microencapsul, 26, 394-402. Guidetti, M., Sforzini, A., Bersani, G., Corsini, C., Grossi, G., Zolezzi, C., Fasano, C. e Pironi, L. (2008). Vitamin A and vitamin E isoforms stability and peroxidation potential of all-in-one admixtures for parenteral nutrition. Int J Vitam Nutr Res, 78, 156-66. Gupta, S., Gabrani, R., Ali, J. e Dang, S. (2011). Exploring novel approaches to vaginal drug delivery. Recent Pat Drug Deliv Formul, 5, 82-94. Lieberman, H., Banker, G. (1996). Pharmaceutical dosage forms-- disperse systems Jato, J. (1997). Aspectos fundamentales de los sistemas farmacuticos y operaes bsicas, Madrid, Editorial Sintesis. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
63
J iao, J. e Burguess, D. (2003). Rheology and stability of water-in-oil-in-water multiple emulsions containing Span 83 and Tween 80. AAPS PharmSci, 5, E7. Kaneda, M. M., Caruthers S., Lanza G. M. e Wickline. (2009). Perfluorocarbon Nanoemulsions for Quantitative Molecular Imaging and Targeted Therapeutics. Ann Biomed Eng., 37, 19221933. Karatas, A., Sonakin, O., Kilicarslan, M. e Baykara, T. (2009). Poly (epsilon-caprolactone) microparticles containing Levobunolol HCl prepared by a multiple emulsion (W/O/W) solvent evaporation technique: effects of some formulation parameters on microparticle characteristics. J Microencapsul, 26, 63-74. Khan, A. Y., Talegaonkar, S., Iqbal, Z., Ahmed, F. J. e Khar, R. K. (2006). Multiple emulsions: an overview. Curr Drug Deliv, 3, 429-43. Khopade, A. J. e Jain, N. K. (2000). Concanavalin-A Conjugated Fine-Multiple Emulsion Loaded with 6-Mercaptopurine. Drug Delivery 7, 105112. Kocian, R. e Spahn, D. R. (2005). Artificial O2 Carriers: Status in 2005. Current Pharmaceutical Design,, 11, 4099-4114. Laugel, C., Rafidison, P., Potard, G., Aguadisch, L. e Baillet, A. (2000). Modulated release of triterpenic compounds from a O/W/O multiple emulsion formulated with dimethicones: infrared spectrophotometric and differential calorimetric approaches. J Control Release, 63, 7-17. Learoyd, T. P., Burrows, J. L., French, E. e Seville, P. C. (2010). Sustained delivery of salbutamol and beclometasone from spray-dried double emulsions. J Microencapsul, 27, 162-70. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
64
Lachman, L., Liederman, H. A. e Kanig, J. L. (2001). The theory and practice of industrial pharmacy, Lisboa, Fundao Calouste Gulbenkian. Li, Y., Hu, M., Xiao, H., Du, Y., Decker, E. A. e Mcclements, D. J. (2010). Controlling the functional performance of emulsion-based delivery systems using multi-component biopolymer coatings. Eur J Pharm Biopharm, 76, 38-47. Liu, W., Yang, X. L. e Ho, W. S. (2011). Preparation of uniform-sized multiple emulsions and micro/nano particulates for drug delivery by membrane emulsification. J Pharm Sci, 100, 75-93. Lowe, K. C. (2003). Engineering blood: synthetic substitutes from fluorinated compounds. Tissue Eng, 9, 389-99. Lutza, R., Aserina, A., Wickerb, L. e Gartia, N. (2009). Release of electrolytes from W/O/W double emulsions stabilized by a soluble complex of modified pectin and whey protein isolate. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 74, 178185. Maiti, K., Mukherjee, K., Murugan, V., Saha, B. P. e Mukherjee, P. K. (2009a). Exploring the effect of Hesperetin-HSPC complex--a novel drug delivery system on the in vitro release, therapeutic efficacy and pharmacokinetics. AAPS PharmSciTech, 10, 943-50. Maiti, S., Dey, P., Kaity, S., Ray, S., Maji, S. e Sa, B. (2009b). Investigation on processing variables for the preparation of fluconazole-loaded ethyl cellulose microspheres by modified multiple emulsion technique. AAPS PharmSciTech, 10, 703-15. Martina, M.C. (2005). Introduccin a la dermofarmcia y a la cosmetologia, Zaragoza, Editorial Acribia, S.A. Mcclements, D. J., Decker, E. A. e Weiss, J. (2007). Emulsion-based delivery systems for lipophilic bioactive components. J Food Sci, 72, R109-24. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
65
Mcclements , D. J., Decker, E. A., Park, Y. e Weiss, J. (2009). Structural Design Principles for Delivery of Bioactive Components in Nutraceuticals and Functional Foods. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 49, 577606. Mcclements, D. J. e Li, Y. (2010). Structured emulsion-based delivery systems: controlling the digestion and release of lipophilic food components. Adv Colloid Interface Sci, 159, 213-28. Miyanoshita, M., Hashida, C., Ikeda, S. e Gohtani, S. (2011). Development of low-energy methods for preparing food Nano-emulsions. J Oleo Sci, 60, 355-62. Morais, J. M., Rocha-Filho, P. A. e Burgess, D. J. (2009). Influence of phase inversion on the formation and stability of one-step multiple emulsions. Langmuir, 25, 7954-61. Musabayane, C. T., Munjeri, O. e Matavire, T. P. (2003). Transdermal delivery of chloroquine by amidated pectin hydrogel matrix patch in the rat. Ren Fail, 25, 525-34. Myung-Han Lee, Seong-Geun Oh, Sei-Ki Moon, e Seong-Youl Baey (2001). Preparation of Silica Particles Encapsulating Retinol Using O/W/O Multiple Emulsions. Journal of Colloid and Interface Science, 240, 83-89. Nogueira Prista C. A., Morgado, R. (1995). Tecnologia Farmacutica, Porto, Fundao Calouste Gulbenkian. Nonomura, Y., Kobayashi, N. e Nakagawa, N. (2011). Multiple pickering emulsions stabilized by microbowls. Langmuir, 27, 4557-62. Okochi, H. e Nakano, M. (2000). Preparation and evaluation of w/o/w type emulsions containing vancomycin. Adv Drug Deliv Rev, 45, 5-26. Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
66
Onuki, Y., Morishita, M. e Takayama, K. (2004). Formulation optimization of water-in-oil- water multiple emulsion for intestinal insulin delivery. J Control Release, 97, 91-9. Ozer, O., Ozyazici, M., Tedajo, M., Taner, M. e Koseoglu, K. (2007). W/O/W Multiple Emulsions Containing Nitroimidazole Derivates for Vaginal Delivery. Drug Delivery, 14, 139145. Pape, A. e Habler, O. (2007). Alternatives to allogeneic blood transfusions. Best Pract Res Clin Anaesthesiol, 21, 221-39. Pays, K., Giermanska-Kahna, J., Poulignya, B., Bibetteb, J. e Leal-Calderona, F., (2002). Double emulsions: how does release occur? Journal of Controlled Release 79, 193 205. Piacentini, E., Drioli, E. e Giorno, L. (2011). Preparation of stimulus responsive multiple emulsions by membrane emulsification using con a as biochemical sensor. Biotechnol Bioeng, 108, 913-23. Pianovski, A., Vilela, A., Lima, C., Silva, K., Carvalho, V., Musis, C., Machado, S. e Ferrari, M. (2008). Desenvolvimento e avaliao da estabilidade de emulses mltiplas O/A/O com leo de pequi (Caryocar brasiliense). Revista Brasileira de Farmcia 89, 155- 159. Riess, J. G. (2006). Perfluorocarbon-based Oxygen Delivery. Artificial Cells, Blood Substitutes, and Biotechnology,, 34, 567580,. Rozman, B. e Gasperlin, M. (2007). Stability of vitamins C and E in topical microemulsions for combined antioxidant therapy. Drug Deliv, 14, 235-45. Salager, J. L. (1999). Formulacin, composicin y fabricacin de emulsiones para obtener las propiedades deseadas. Estado del Arte. Parte B. Propiedades de las emusliones y su Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
67
madicin. In: FIRP, L., Quimica, E. D. I., Andes, U. D. L. e Venezuela, M. (eds.). Mrida-Venezuela. Schmidts, T., Dobler, D., Nissing, C. e Runkel, F. (2009). Influence of hydrophilic surfactants on the properties of multiple W/O/W emulsions. J Colloid Interface Sci, 338, 184-92. Schmidts, T., Dobler, D., Schlupp, P., Nissing, C., Garn, H. e Runkel, F. (2010). Development of multiple W/O/W emulsions as dermal carrier system for oligonucleotides: Effect of additives on emulsion stability. Int J Pharm, 398, 107-13. Schulz, C. K. (2005). Tratamento de efluentes oleosos utilizando processos de separao por membranas. Doutoramento, UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO. Sun, J., Zhang, H., Tian, R., Ma, D., Bao, X., Su, D. S. e Zou, H. (2006). Ultrafast enzyme immobilization over large-pore nanoscale mesoporous silica particles. Chem Commun (Camb), 1322-4. Talegaonkar, S. e Vyas, P. (2005). Inverse targeting of diclofenac sodium to reticuloendothelial system-rich organs by sphere-in-oil-in-water (s/o/w) multiple emulsion containing poloxamer 403. Journal of Drug Targeting, 13, 173178. Tedajo, G.M., Bouttier, S., Grossiord, J. L., Marty, J. P., Seiller, M., e Fourniat, J. (2002). In vitro microbicidal activity of W/O/W multiple emulsion for vaginal administration. International Journal of Antimicrobial Agents 20, 50/56. Tedajo, G. M., Bouttier, S., Fourniat, J., Grossiord, J., Marty, J.P. e Seiller, M. (2005). Release of antiseptics from the aqueous compartments of a w/o/w multiple emulsion. International Journal of Pharmaceutics, 288, 6372. Vasiljevic, D., Parojcic, J., Primorac, M. e Vuleta, G. (2006). An investigation into the characteristics and drug release properties of multiple W/O/W emulsion systems Emulses mltiplas: formulao, caracterizao, estabilidade e aplicaes
68
containing low concentration of lipophilic polymeric emulsifier. International Journal of Pharmaceutics 309, 171177. Vaziri, A. e Warburton, B. (1994). Slow release of chloroquine phosphate from multiple taste- masked W/O/W multiple emulsions. J Microencapsul, 11, 641-8. Vladisavljevic, G. T. e Williams, R. A. (2005). Recent developments in manufacturing emulsions and particulate products using membranes. Adv Colloid Interface Sci, 113, 1-20. Wang, S., Yang, R., Yao, H., Zhou, G., Zhang, Y., Yang, B., Ng, L. e Yan, M. (2009). In vivo lymphatic targeting of methylene blue with microemulsion and multiple microemulsion. Drug Deliv, 16, 371-7. Yener, G. e Baitokova, A. (2006). Development of a w/o/w emulsion for chemical peeling applications containing glycolic acid. J Cosmet Sci, 57, 487-94.