ESCOLA MUNICIPAL GOVERNADOR ISRAEL PINHEIRO Avenida Luzia Brando Fraga de Souza, n 201, Loanda - Joo Monlevade Minas

Gerais - CEP: 35.931-023

CURSO TCNICO DE QUMICA

Qumica Clnica

Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira

Trabalho de Concluso de Curso apresentado Escola Municipal Governador Israel Pinheiro para obteno do ttulo de Tcnico em Qumica. Supervisor: Fernanda G. Ribeiro Orientador: Prof. Me. Huita do Couto Matozo

Joo Monlevade/MG 2013

ESCOLA MUNICIPAL GOVERNADOR ISRAEL PINHEIRO Avenida Luzia Brando Fraga de Souza, n 201, Loanda - Joo Monlevade Minas Gerais - CEP: 35.931-023

CURSO TCNICO DE QUMICA Laboratrio de Anlises Clnicas

Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira

Qumica Clnica

Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira Av. Gustave Peffer n 751 Bairro: Louis Ensch Tel.: (31) 9522-8095 E-mail: leandro.yukiroyt@hotmail.com

Joo Monlevade/MG 2013

ESCOLA MUNICIPAL GOVERNADOR ISRAEL PINHEIRO Avenida Luzia Brando Fraga de Souza, n 201, Loanda - Joo Monlevade Minas Gerais - CEP: 35.931-023

Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira

Qumica Clnica
Trabalho de Concluso de Curso (TCC) rea de Concentrao: Qumica

________________________________________ Farmacutica/Bioqumica Fernanda G. Ribeiro Supervisora de Estgio - RT

_______________________________________ Professor Me. Huita do Couto Matozo Orientador de Estgio _______________________________________ Mnica Faria da Silva Parente Diretora da Instituio de Ensino EMIP

_______________________________________ Leandro Jos Dias G. de Oliveira Estagirio de Qumica

Joo Monlevade - Fevereiro de 2013

4 AUTORIZO A REPRODUO E DIVULGAO TOTAL OU PARCIAL DESTE TRABALHO POR QUALQUER MEIO CONVENCIONAL OU ELETRNICO, PARA FINS DE ESTUDO E PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE.

Oliveira, Leandro Jos Dias Gonalves de. Qumica Clnica / Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira; Orientador Huita do Couto Matozo; Secretaria Municipal de Sade e Meio Ambiente: Fernanda G. Ribeiro Rio Piracicaba, 2013. 123 p. Relatrio de Estgio (Tcnico Disciplina de Estgio Supervisionado rea de Concentrao: Qumica) Escola EMIP QUMICA. 1. Anlises Clnicas. 2. Qumica. 3. Bioqumica. 4. Exames.

5 H um tempo em que preciso abandonar as roupas usadas, j que tm a forma do nosso corpo, e esquecer os nossos caminhos, que nos levam sempre aos mesmos lugares. o tempo da travessia e, se no ousarmos faz-la, teremos ficado, para sempre, s margens de ns mesmos. Fernando Pessoa

AGRADECIMENTOS

Agradeo a Deus, sempre presente em minha vida. Aos meus familiares e amigos, que juntos torceram pela minha vitria. minha av materna Efignia (in memorian), cuja presena espiritual sempre me ajudou a progredir com afinco nos estudos. Aos meus professores, que me guiaram durante toda minha jornada. Aos colegas de trabalho do laboratrio da secretaria de sade, pela oportunidade que me deram de mostrar meu conhecimento, possibilitando meu desenvolvimento profissional.

6 OLIVEIRA, L. J. D. G. Qumica Clnica, 2013 123 p. Relatrio Tcnico Supervisionado de Concluso do Curso Tcnico de Qumica EMIP Escola Municipal Governador Israel Pinheiro; Joo Monlevade MG, 2013.

O laboratrio do Centro de Sade Dr. Gentil Alves Costa tem como objetivo a anlise de materiais biolgicos (sangue, fezes e urina) cujo estudo visa apresentar laudos sobre a sade do paciente. As reas nas quais os tcnicos atuam so: coleta, hematologia, bioqumica, imunologia, urinlise e parasitologia. As atividades realizadas esto em conformidades com as recomendaes e exigncias pelo Conselho Regional de Farmcia e da Vigilncia Sanitria Estadual de Minas Gerais. No laboratrio no se pensa apenas nos procedimentos e nos resultados obtidos, mas tambm na tica profissional. H, tambm, zelo pelos materiais de trabalho e mais, pelo meio ambiente. No presente relatrio constam as atividades desenvolvidas durante o estgio supervisionado na rea de anlises clnicas. Apresenta aplicaes vistas durante o curso tcnico de qumica e, tambm, a programao de estgio. As atividades esto interligadas, e funcionam harmonicamente desde a entrada do paciente (cadastro) at a entrega do resultado.

Palavras-Chave: Anlises Clnicas; Bioqumica; Qumica; Exames.

7 Sumrio Pg.

1. Introduo ............................................................................................................................. 2. Objetivos ............................................................................................................................... 2.1. Objetivo Geral ............................................................................................................... 2.2. Objetivo Especfico ....................................................................................................... 3. Recursos para o Trabalho Laboratorial ................................................................................. 3.1. Materiais, Reagentes e Equipamentos ........................................................................... 3.1.1. Materiais .............................................................................................................. 3.1.2. Reagentes Analticos ........................................................................................... 3.1.3. Equipamentos e Acessrios ................................................................................. 4. Metodologia Cientfica ......................................................................................................... 5. Assepsia e Coleta de Material Biolgico .............................................................................. 5.1. Assepsia ......................................................................................................................... 5.2. Coleta ............................................................................................................................. 5.2.1. Sangue ..................................................................................................................... 5.2.2. Urina (de rotina) ..................................................................................................... 5.2.3. Fezes ....................................................................................................................... 5.2.3.1. Fezes sem MIF............................................................................................ 5.2.3.2. Fezes com MIF .......................................................................................... 6. Hematologia .......................................................................................................................... 6.1. Hemograma (Hc) ........................................................................................................... 6.1.1. Eritrograma ........................................................................................................... 6.1.2. Leucograma .......................................................................................................... 6.1.3. Plaquetograma ...................................................................................................... 6.2. Elementos do Sangue .................................................................................................... 6.2.1. Eritrcitos (Hemcias/RBC) ................................................................................. 6.2.2. Hemoglobina (HGB) ............................................................................................ 6.2.3. Hematcrito (HCT) ............................................................................................... 6.2.4. Leuccitos (WBC) ................................................................................................ 6.2.5. Linfcitos (LYN) .................................................................................................. 6.2.6. Moncitos .............................................................................................................

10 11 11 11 12 12 12 13 15 16 16 16 17 17 21 21 21 21 23 24 24 25 25 29 29 31 32 32 32 33

8 6.2.7. Neutrfilos ............................................................................................................ 6.2.8. Neutrfilos ............................................................................................................ 6.2.9. Mielcitos ............................................................................................................. 6.2.10. Metamielcitos ................................................................................................... 6.2.11. Basfilos ............................................................................................................ 6.2.12. Bastonetes ........................................................................................................... 6.2.13. Segmentados ....................................................................................................... 6.2.14. Trombcitos ........................................................................................................ 6.3. Preparo de Lminas ...................................................................................................... 6.4. Contagem Diferencial de Clulas Leucocitrias ........................................................... 6.5. Grupos Sanguneos + Fator Rh (GS + Rh) ................................................................... 6.6. Velocidade de Hemossedimentao (VHS) ................................................................. 6.7. Coagulograma (COAG) ................................................................................................ 6.7.1. Tempo de Protombina (TP) .................................................................................. 6.7.2. Atividade de Protombina (AP) ............................................................................. 6.7.3. Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA) ............................................ 6.7.4. Relao Normalizada Internacional (RNI) ........................................................... 7. Bioqumica ............................................................................................................................ 7.1. Glicose (GLIC) .............................................................................................................. 7.1.1. Glicose (GLIC-J) ................................................................................................. 7.1.2. Glicose (GLIC-PP) .............................................................................................. 7.2. Colesterol Total (COL) .................................................................................................. 7.2.1. Fraes do Colesterol .......................................................................................... 7.2.1.1. HDL ......................................................................................................... 7.2.1.2. LDL ......................................................................................................... 7.2.1.3. VLDL ...................................................................................................... 7.2.1.4. Triglicrides (TRIG) ................................................................................ 7.3. Uria (UR) .................................................................................................................... 7.4. cido rico (AUR) ...................................................................................................... 7.5. Fosfatase Alcalina (FAL/ALP) ..................................................................................... 7.6 Protenas Totais (PROT) ................................................................................................ 7.7. Albumina (ALB) ........................................................................................................... 7.8. Creatinina (CR) ............................................................................................................. 33 34 34 34 35 35 36 36 37 40 43 45 46 47 47 48 48 49 52 52 54 54 56 56 58 59 59 61 64 67 69 69 71

9 7.9. Mucoprotenas (MUC) .................................................................................................. 7.9.1. Desproteinizao .................................................................................................. 7.9.2. Precipitao .......................................................................................................... 7.10.3. Colorimetria ....................................................................................................... 7.10. Transaminase Glutmica Oxalactica (TGO) ............................................................. 7.11. Transaminase Glutmica Oxalactica (TGP) ............................................................. 8. Imunologia (Sorologia) ......................................................................................................... 8.1. HIV-1/2 .......................................................................................................................... 8.2. VDRL ............................................................................................................................ 8.3. Antiestreptolisina O (ASO/ASLO/AEO) ...................................................................... 8.4. Protena C Reativa (PCR) .............................................................................................. 8.5. Fator Reumatoide (FR) ................................................................................................. 9. Parasitologia ......................................................................................................................... 9.1. Exame Parasitolgico de Fezes (EPF) ........................................................................... 9.1.1. Mtodo de Hoffman-Pons-Janes (HPJ) ................................................................ 9.1.2. Pesquisa de Controle de Esquistossomose (PCE) Mtodo Kato-Katz (KK) ..... 10. Urinlise .............................................................................................................................. 10.1. Anlise Fsico-Qumica .............................................................................................. 10.2. Anlise Bioqumica .................................................................................................... 10.3. Sedimenstoscopia (EAS Elementos Anormais do Sedimento) ............................... 11. Biossegurana ..................................................................................................................... 11.1. Procedimentos Operacionais Padro (POP) ............................................................... 11.2. EPIs e EPCs ............................................................................................................. 11.3. Boas Prticas Laboratoriais ........................................................................................ 12. Lavagem de Material, Descarte de Resduos e Esterilizao ............................................. 13. Consideraes Finais .......................................................................................................... 14. Concluso ........................................................................................................................... 15. Referncias ......................................................................................................................... 16. Anexos ................................................................................................................................ 73 74 75 76 77 78 81 82 83 87 88 89 91 92 92 94 96 96 98 99 102 102 102 103 103 104 105 106 116

10 1. Introduo

Em cumprimento ao que regulamenta a Lei n 11.788, de 25/09/2008, o aluno Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira, do Curso Tcnico de Qumica, da Escola Municipal Governador Israel Pinheiro EMIP, localizada em Joo Monlevade, elaborou o seu Trabalho de Concluso de Curso, referente ao estgio curricular no laboratrio do Centro de Sade Dr. Gentil Alves Costa, Qumica Clnica, em Rio Piracicaba, MG. Teve-se por base as atividades exercidas rotineiramente em laboratrio de anlises clnicas, realizado no perodo de 01/06/12 a 30/11/12, sob orientao da farmacutica/bioqumica RT, Fernanda Ribeiro.

A anlise clnica o ramo de conhecimento que trabalha com o estudo de alguma substncia de forma a coletar dados e apontar diagnsticos a respeito da sade do paciente. Essas anlises ocorrem a partir de um exame feito a pedido de um mdico e so entregues em laboratrios prprios para realizao desses exames. A hematologia a subrea especializada em observar os elementos do sangue: hemcias, leuccitos, plaquetas e outras clulas. A bioqumica a parte que se encarrega das dosagens de elementos diversos (glicose, colesterol, protenas etc) utilizando o soro ou o plasma como material. A imunologia o estudo das caractersticas do sistema imunolgico, tambm utilizando o soro. A urinlise a parte responsvel pela observao dos elementos que compe o sedimento urinrio, avaliando possveis anormalidades. A parasitologia a parte que trata da observao dos sedimentos fecais visando deteco de verminoses e outras anormalidades.

Nos procedimentos laboratoriais fundamental o conhecimento terico e saber interpretar os resultados encontrados nas dosagens realizadas. Atualmente os processos so semiautomatizados, mas mesmo assim o analista deve ter um conhecimento prvio, para que os servios sejam executados de maneira correta e eficiente, pois erros de qualquer natureza devem ser evitados.

11 2. Objetivos 2.1. Objetivo Geral Concluir o estgio supervisionado de qumica demonstrando os conhecimentos obtidos durante o mesmo.

2.2. Objetivo Especfico Detalhar minuciosamente todos os procedimentos realizados no laboratrio de anlises clnicas, de maneira a obter o ttulo de tcnico em qumica pela apresentao deste TCC ao corpo docente da EMIP.

12 3. Recursos para o Trabalho Laboratorial Os procedimentos realizados no laboratrio so voltados para a anlise de material biolgico humano: sangue, fezes e urina. Todo procedimento tem mtodos diferenciados, bem como a maneira de execuo e interpretao dos mesmos. Os recursos de trabalho so os materiais, reagentes e equipamentos.

3.1. Materiais, Reagentes e Equipamentos 3.1.1. Materiais Agulha 0,70 x 25 mm Agulha 0,80 x 25 mm Balo Volumtrico Bandagem Anticptica Bandeja Inox Basto de Vidro Bquer de Vidro Braadeira de Coleta Canudo de Plstico Coletor de Urina/Fezes Coletor para Perfurocortantes Compressa de Gaze Hidroflica 7,5x7x7,5 cm Cronmetro Manual Cuba Rim Inox Cubeta para Coagulmetro Detergente Escova para Tubos de Ensaio Esponja Dupla-Face Antibactrias Estande para tubos de Ensaio Frasco conta gotas Funil de Polipropileno Garrote Impressora Matricial Jaleco Branco Lminas sem Borda Fosca

13 Lpis Dermatogrfico Luvas de Procedimento Descartveis Macropipetadores Micropipetadores de Volume Fixo Micropipetadores de Volumes Variados Papel Filtro Qualitaivo Papel Matricial Branco de 1 via Pra de Borracha Pincel Retroprojetor Pipeta Graduada Pipeta de Westergreen Placa de Kline Placa para reao imuno-ltex Ponteiras para Micropipetadores Proveta de 50,0 mL Seringa de 3,0 mL Seringa de 5,0 mL Seringa de 10,0 mL Seringa de 20,0 mL Suporte para Micropipetadores Suporte de Westergreen Suporte para Micropipetas Monocanais Automticas e Semiautomticas Tampa para Tubos de Ensaio Tiras Reagentes de Urinlise Tiras Reagentes de -hcg Tubo de Cnico Graduado Tubo de Ensaio de Plstico Tubo de Ensaio de Vidro Tubo para Bomba Peristltica do Analisador Bioqumico BIOPLUS 2000 3.1.2. Reagentes Analticos cido rico gua Deionizada Albumina

14 lcool cido de Ziehl Neelsen 3% Anticoagulante Citrato Anticoagulante EDTA Anticoagulante Flureto Anticorpos Monoclonais Murinos para Classificao ABO Soroclone Anti-A Anticorpos Monoclonais Murinos para Classificao ABO Soroclone Anti-B Anticorpos Monoclonais Murinos para Classificao ABO Soroclone Anti-D Antiestreptolisina O Ltex Azul de Metileno Colesterol HDL Colesterol Total Controle de Plasma Abnormal Controle de Plasma Normal Corantes Rpidos de Hematologia Creatinina Etanol a 70% Etanol a 99,8% Fator Reumatide Ltex Fosfatase Alcalina Fucsina Fenicada Glicose Hipoclorito de Sdio a 1% HIV - 1/2 Mucoprotenas leo de Imerso Protena C Reativa Ltex Protenas Totais Soluo de Calibrao HC-Diluent (Contador Hematolgico Human Count Plus) Soluo de Calibrao HC-Lyse (Contador Hematolgico Human Count Plus) Soluo de Limpeza HC-Cleaner (Contador Hematolgico Human Count Plus) Soluo de Limpeza para Analisador Bioqumico BioPlus 2000 Soro de Coombs BSA Tempo de Protombina

15 Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada Transaminase Glutmico Pirvica Transaminase Glutmico Oxalactica Triglicerdeos Ureia 3.1.3. Equipamentos Analisador Bioqumico BioPlus 2000 Analisador Hematolgico Human Count Plus Banho-Maria Quimis Centrguga Celm Combate Coagulmetro ptico Monocanal Human Clot Jr. Computador e Impressora Matricial Contador Diferencial de Clulas Benfer CC 900 Deionizador de Coluna Quimis Estufa de Esterilizao e Secagem Odontobrs Geladeira Electrolux Homogeneizador de Sangue Quimis Microscpio Binocular Nikkon Eclipse

16 4. Metodologia Cientfica A metodologia (no presente relatrio) a parte da produo do TCC que trata dos procedimentos e mtodos realizados dentro do local de estgio. de suma importncia o detalhamento das atividades, pois facilita o entendimento tcnico e prtico dos mesmos. De acordo com EITERER (2006), o mtodo cientfico compreende basicamente um conjunto de dados iniciais e um sistema de operaes ordenadas adequado para a formulao de concluses, de acordo com certos objetivos predeterminados. A rotina laboratorial no leve e, por isso, demanda uma rigorosa ateno na realizao dos procedimentos. A metodologia aplicada como a maneira de se reproduzir todos os ensaios laboratoriais de maneira correta, eficaz e segura. A elaborao e execuo das anlises necessitam, para que seus resultados sejam satisfatrios, estarem baseadas em planejamento cuidadoso, reflexes conceituais slidas e alicerados em conhecimentos j existentes. Na elaborao do TCC de Qumica de grande importncia, tambm, alm de demonstrar mtodos e etapas de procedimentos, apresentar frmulas qumicas, reaes e interaes moleculares, bem como os nomes dos reagentes, produtos, e outros agentes participantes, para que haja um enriquecimento do mesmo.

5. Assepsia e Coleta de Material Biolgico 5.1. Assepsia Assepsia ou desinfeco o conjunto de medidas que permitem manter um ser vivo ou meio inerte de microrganismos. Os antisspticos utilizados no laboratrio so o etanol a 70% (que coagulam protenas e lipdios das membranas dos microrganismos) e o Hipoclorito de Sdio a 1% (que inibem a atividade das protenas e a sntese de DNA dos microrganismos). Chegandose ao laboratrio, pega-se uma compressa de gaze, limpa, e umedecida com etanol 70%, e limpa-se as bancadas, mas sempre em um nico sentido (ou vertical ou horizontal), para evitar a recontaminao. A assepsia feita como demonstrado no grupo de figuras 01 abaixo:

17

Fig.01 Quatro maneiras de executar assepsia em bancada.

A realizao desse procedimento indispensvel num laboratrio de anlises clinicas. Segundo SENA, et.al (2011) a principal causa das infeces na rea da sade a deficincia no processo de assepsia. A assepsia tambm deve ser feita nas mos. Deve-se lav-las bem com sabonete lquido neutro e depois passar lcool 70%.

5.2. Coleta 5.2.1. Sangue A coleta de sangue para anlise realizada por uma auxiliar de enfermagem ou por uma tcnica em patologia clnica. Para realizar a coleta, o paciente chega com a solicitao mdica dos exames. O pedido mdico mandado ao laboratrio, onde o paciente cadastrado no sistema, e recebe um nmero de entrada em sua ficha. Feito isso, o sangue coletado. Os demais materiais (urina e fezes so entregues no prprio laboratrio). O paciente se senta, coloca o brao sobre uma braadeira de coleta revestida por compressa cirrgica de gaze 45x50 cm; o local da puno no brao

limpo com lcool a 70% INPM e, em seguida, garroteado. A pessoa que far a coleta procura sentir onde a veia do paciente est mais superficial, para que evite ter de aprofundar demais a agulha, machucando-o. O bisel (agulha) deve ser injetado com o orifcio para cima, para que facilite a entrada do sangue. Deve-se colocar o sangue colhido nos respectivos tubos com ateno. Feita a coleta, colocada uma bandagem antissptica no local da puno. (Informar ao paciente para no dobrar o brao evitando, assim, hematomas.) Aps ser coletado, o sangue do paciente colocado em tubos que contenham ou no anticoagulante; e que anteriormente foram identificados com as iniciais do nome do paciente e o nmero de cadastro. Quando o tubo possui anticoagulante, deve-se observar a cor da tampa do tubo. A quantidade de sangue colhida depende dos exames solicitados. Quando o sangue coletado e colocado nos tubos deve-se adicionar, quando necessrio, substncias denominadas anticoagulantes. Essas substncias qumicas so inibidoras da

18 coagulao do sangue. Elas iram impedir, obviamente, que o sangue permanea maior tempo sem coagular em temperatura ambiente. O sangue deve ser colhido em jejum, e quando houver preparos, devero ser seguidos. O anticoagulante deve ser especfico para os exames que se deseja realizar. No laboratrio h trs anticoagulantes utilizados. O EDTA o anticoagulante utilizado em sangue que sero utilizados nos exames da rea da hematologia (exceto coagulograma). Sua nomenclatura, segundo IUPAC (2001), cido etilenodiaminotetractico.

Fig. 02 Frmula estrutural do EDTA. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/EDTA

Ele forma complexos muito estveis com diversos ons metlicos. O tubo, de vidro, que receber o anticoagulante EDTA deve ser de tampa roxa. Ele reage atravs de seus dois radicais cidos com o clcio plasmtico, formando um quelato, tornado-se insolvel. O quelato um composto qumico formado por um on metlico ligado por vrias ligaes covalentes a uma estrutura heterocclica de compostos orgnicos. Como no caso da molcula abaixo, pela qumica de coordenao, iro se juntar aos tomos de oxignio, os metais que reagirem com o anticoagulante. O EDTA um lquido de cor alaranjada.

Fig. 03 Complexo formado pela ao do EDTA.

Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Titula%C3%A7%C3%A3o_de_complexa%C3%A7%C3%A3o

19 O Fluoreto de Sdio, cuja frmula qumica NaF, o anticoagulante utilizado apenas para alguns exames bioqumicos. interessante citar que este anticoagulante tambm contm uma frao mnima de EDTA. O tubo, de plstico, deve conter uma gota do anticoagulante, e a tampa deve ser de cinza. O fluoreto de sdio possui uma cor azulada.

O Citrato trissdico o anticoagulante utilizado quando so realizados os exames de coagulograma, pois envolvem laudos que servem de base para que o mdico analise as condies do paciente de ser submetido a cirurgias. O sangue deve ser colhido sem que o garrote esteja muito apertado, e uma gota do anticoagulante deve ser colocada no tubo, de vidro, somente na hora que o sangue tiver sido colhido, ao contrrio dos outros dois, que podem ser colocados no tubo horas antes e at mesmo permanecer neles de um dia para outro. As tampas dos tubos que contm o sangue para realizar COAG (coagulograma) so de cor azul. O citrato possui uma colorao azul cintilante. O nome IUPAC dessa substncia trissdio-2hidroxipropan-1,2,3-tricarboxilato.

Fig. 04 Frmula estrutural do citrato trissdico. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Citrato_de_s%C3%B3dio

Os exames que necessitam utilizar o soro sanguneo no utilizam anticoagulantes. Depois de colhido o sangue, o mesmo incubado em banho-maria a 37C por alguns minutos. Aps isso, centrifugado at que haja separao entre a parte lquida e a parte slida do sangue. Vrias dosagens bioqumicas e imunolgicas so realizadas no soro (obtido a partir do sangue sem anticoagulante) ou no plasma (obtido no sangue com anticoagulantes). A diferena entre soro e plasma que o soro no contm fibrinognio, o qual participou da formao do cogulo (fibrina).

Para um maior entendimento e organizao das informaes sobre os exames, montou-se a seguinte tabela:

20 Tabela 01: Diferenciao dos tubos de coleta de sangue Exame cido rico Albumina Antiestreptolisina O Atividade de Protombina Colesterol HDL Colesterol Total Creatinina Fator Reumatide Fosfatase Alcalina Glicose Glicose Ps-Prandial Grupos Sanguneos (ABO + Rh) Material Soro Soro Soro Plasma Soro Soro Soro/Plasma* Soro Soro Soro/Plasma* Soro/Plasma* Sangue no centrifugado com anticoag. Sangue no centrifugado com anticoag. Soro Soro Soro Soro Plasma Plasma Plasma Soro Soro Anticoag. Citrato Fluoreto* Fluoreto* Fluoreto* EDTA Tampa Azul Cinza* Cinza* Cinza* Roxa rea Bioqumica Bioqumica Hematologia Hematologia Bioqumica Bioqumica Bioqumica Hematologia Bioqumica Bioqumica Bioqumica Hematologia

Hemograma

EDTA

Roxa

Hematologia

HIV 1/2 Mucoprotenas Protena C Reativa Protenas Totais RNI Tempo de Protombina Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada TGO TGP

Citrato Citrato Citrato -

Azul Azul Azul -

Imunologia Bioqumica Hematologia Bioqumica Hematologia Hematologia Hematologia Bioqumica Bioqumica

21 Triglicerdeos Uria VDRL Velocidade Hemossedimentao de Soro Soro/Plasma* Soro Sangue no centrifugado Fluoreto* EDTA Cinza* Roxa Bioqumica Bioqumica Imunologia Hematologia

* as informaes utilizadas ficam a critrio do laboratrio, podendo variar de um para outro.

5.2.2. Urina (de rotina) O paciente deve higienizar os rgos genitais, utilizando gua e sabo. Depois, sec-los com gaze estril ou uma toalha seca e bem limpa. A urina deve ser colhida no frasco coletor, logo pela manh, pelo menos 12 mL. Porm, o primeiro jato deve ser desprezado, sendo colhido, para o exame, o jato mdio. O frasco deve ser levado em no mximo 30 minutos ao laboratrio. Caso no seja cumprido o prazo, a urina deve estar acondicionada em uma geladeira ou caixa de isopor com gelo reutilizvel, desde que se tome cuidado para que a gua do gelo no entre em contato com a amostra.

5.2.3. Fezes 5.2.3.1. Fezes sem MIF Deve-se utilizar um frasco coletor seco e limpo. Coletar mais ou menos cinco pazinhas, sendo que sempre deve-se retirar um pouco de cada extremidade e um pouco do meio da amostra. Deve ser levada ao laboratrio no mesmo dia, identificado com nome, estando previamente acondicionada em uma geladeira. No h necessidade de levar grandes quantidades de amostra.

5.2.3.2. Fezes com MIF O MIF (merthiolate-iodo-formol) o lquido avermelhado utilizado na conservao das amostras pedidas para a realizao dos exames parasitolgicos de fezes. O paciente deve coletar a amostra em um fraco coletor contendo o MIF, comprado na farmcia, onde recolher 9 pazinhas de fezes (3 por dia). Deve-se retirar um pedao de cada extremidade e do meio da amostra, e ir acondicionando em geladeira, at o dia de entregar ao laboratrio, identificado com nome. (No precisa haver excesso de amostra)

22 6. Hematologia A hematologia a parte dos ensaios laboratoriais voltados para a observao das clulas sanguneas, sua contagem, caractersticas e anormalidades. O aparelho que realizam este exame traz grficos, curvas de concentrao e valores de concentrao relacionados a cada clula do sangue. Antes de comear o hemograma, colocam-se os sangues de controle para homogeneizar, j que ficam na geladeira e precisam de algum tempo pra se estabilizar. Quando se passa o sangue de controle (L-baixo, N-normal e/ou H-alto) e os resultados conferem com o padro, podem-se iniciar os exames.

Fig. 05 Sangues de controle hematolgico.

O contador hematolgico HUMAN COUNT PLUS o equipamento utilizado para essa finalidade. O mesmo mostrado na figura abaixo.

Fig. 06 Contador hematolgico HUMAN COUNT PLUS. Fonte: http://www.medville.com.br/infiniti/files/produto-arquivo/HumacountPlus.pdf

23 O contador hematolgico semi-automatizado para diagnstico in vitro. A sua interface permite o envio de resultados para uma impressora matricial acoplada. Ele capaz de acessar at 60 amostras por hora com exatido e reprodutibilidade. capaz de gerar histogramas de hemcias e leuccitos e, ainda, determinar 18 parmetros utilizando 25L de sangue, apenas. Esses parmetros so: WBC, LYM, MID, GRA, LYM%, MID%, GRA%, HGB, RCB, HCT, MCV, RDW, MCH, MCHC, PLT, MPV, PCT e PDW. Aps a coleta de sangue, deve-se deixar os tubos com sangue no homogeneizador por alguns minutos. No aparelho, deve ajustar o sexo e o nmero de cadastro do paciente. Aps isso, deve-se mergulhar a agulha de suco no tubo, para que aspire o sangue e faa a leitura dos parmetros indicados. Aps a suco do sangue os resultados so visualizados. O analisador de sangue utiliza trs reagentes de funcionamento. So eles: HC-CLEANER soluo de limpeza utilizada no contnuo processo de limpeza do sistema fludico do equipamento. Ele composto por sulfato de sdio a 0,8% (Na2SO4), fosfato de sdio a 0,5% (Na3PO4), cloreto de sdio a 0,3% (NaCl), enzimas proteolticas a 0,8%, corante Sky blue a 0,002% e conservantes a 0,1%. HC-DILUENT reagente utilizado na calibrao e manuseio do equipamento. uma soluo isotnica usada para diluir amostras de sangue total. composto por sulfato de sdio a 1% (Na2SO4), fosfato inorgnico tamponado <0,6%, cloreto de sdio a 0,3% (NaCl) e estabilizantes. HC-LYSE reagente utilizado na calibrao e manuseio do equipamento. livre de cianeto, usado para preparar sangue lisado para as medidas de leuccitos e hemoglobina. composto por sais de amnio quartenrios a 3,5% e surfactantes <0,05%.

Como se sabe, a hematologia a parte das anlises clnicas destinada observao e quantificao dos elementos sanguneos. No laboratrio os exames que se realizam nessa rea so: hemograma, grupo sanguneo, coagulograma e velocidade de hemossedimentao.

24 6.1. Hemograma (HC) O hemograma o exame clnico que quantifica as mais variadas clulas sanguneas. Quando o equipamento apresenta flags (erros) ou mostra valores alterados para mais ou para menos, fazse a lmina do paciente. O sangue deve ser homogeneizado bem antes de ser passado no aparelho.

homogeneizador

tem

um

movimento

contnuo, do tipo thundeler-burgger, para frente e para trs, sendo capaz de

homogeneizar o sangue de maneira uniforme pelo tempo que for necessrio.

Fig. 07 Homogeneizador de sangue.

O hemograma dividido basicamente em trs partes: eritrograma, leucograma e plaquetograma.

6.1.1. Eritrograma a parte do hemograma que visa observao e quantificao das clulas vermelhas do sangue (hemcias). De acordo com VIVAS (2010), constitui o estudo das clulas da srie vermelha, revelando tipos essenciais de alteraes patolgicas. Os parmetros observados no eritrograma so: o nmero de eritrcitos (hemcias) em cada 1,0 L de sangue; quantidade de hemoglobina em cada 1,0 dL de sangue; porcentagem de hematcrito; tamanho mdio dos hematcritos em fL (fenolitros); quantidade mdia de hemoglobina em cada hematcrito em pc (picogramas); concentrao mdia de hemoglobina em 100 mL de eritrcitos em g/dL; ndice de variao do tamanho dos eritrcitos, que quantificado, quanto ocorrncia, em (+), (++) ou (+++).

25 6.1.2. Leucograma Sendo o estudo das clulas da srie branca, compreende a contagem global e especfica dos leuccitos, alm do estudo qualitativo. Os parmetros observados no leucograma so: o nmero de leuccitos em cada 1,0 L de sangue; quantificao de vrias clulas brancas: linfcito, moncito, neutrfilo (segmentado), eosinfilo, metamielcitos, basfilos e bastonetes (segmentados jovens) etc.

6.1.3. Plaquetograma Determina-se o nmero de plaquetas em cada 1,0 L de sangue. H ndices como plaquetcritos, por exemplo, que so apenas diagnosticados por equipamentos muito sofisticados. Depois de homogeneizado, o analista programa o sexo e o nmero do paciente. Feito isso, coloca o sangue para ser aspirado por uma haste metlica que sai do interior do aparelho. Comea a anlise, que dura em torno de 2 minutos para cada amostra. Quando a anlise da amostra termina o aparelho mostra uma interface semelhante mostrada abaixo.

Fig. 08 Resultado de hemograma no contador hematolgico.

26 baseado nos dados mostrados na tela do aparelho e em alguns clculos que os tcnicos podem lanar os resultados e tirar concluses sobre os valores reais e suas alteraes (quando houver). De acordo o que mostra a figura, h grficos com o pico de concentrao plasmtica de leuccitos (WBC) e de hemcias (RBC), ao lado esquerdo. Do lado direito h o cdigo do paciente (3584), o sexo (fem (adulto)), a data do exame (04/10/2012) e a hora em que o hemograma foi feito (10:17). Ainda do lado direito, na parte inferior, h as quantificaes, as quais esto transcritas na tabela abaixo, para melhor visualizao dos valores. essas quantificaes d-se o nome de parmetros. Os mesmos foram transcritos para a tabela abaixo para melhor visualizao.

Tabela 02: Parmetros e ndices hematimtricos (baseados na figura 08) WBC RBC HGB HCT MCV RDWc 6,94 5,13+ 14,5 37.9 7412,0 MCH MCHC PLT LY% MI% GR% 28,3 38,2+ 11431,0 6,1 62,9

sabido que, quando h sinais (+) e/ou (-) no hemograma h alguma anormalidade no parmetro. Deve-e repetir o hemograma, adicionando um ponto ao fim do nmero do paciente para identificar a repetio. (Ex.: 3584.). Alguns parmetros podem ser calculados pelo analista; isso possibilita que ele tenha previamente um valor que permite dizer se os resultados mostrados no aparelho esto realmente corretos. Isso muito til quando no se tem uma tabela de referncias no local no momento. Os valores encontrados para MCV, MCH e MCHC podem ser determinados por clculos. Deve-se observar que sempre haver uma margem de erro entre o aparelho e o clculo do tcnico. Esses parmetros so chamados de ndices hematimtricos.

Clculo do VCM VCM = (HCT : HEM) x 10

Pela frmula, o volume corpuscular mdio da hemcia dado pela razo entre o valor de hematcrito e o das hemcias multiplicado por 10. Voltando tabela, viu-se que o VCM da paciente deu 74-. Pelo clculo tm-se:

27 VCM = (37,9 : 5,13) x 10 VCM = 73 fL

O valor do clculo foi bem prximo do valor do equipamento. Como o parmetro est diminudo, o equipamento mostra o sinal negativo.

Clculo do HCM HCM = (HGB : HEM) x 10

Pela frmula, o volume corpuscular mdio de hemoglobina dado pela razo entre o valor de hemoglobina e o das hemcias multiplicado por 10). O valor de HCM da paciente foi 28,2+ pg. Pelo clculo tm-se: HCM = (14,5 : HEM) x 10 HCM = 28 pg

O valor foi bem prximo do valor do aparelho, que gera o sinal (+) pelo parmetro estar aumentado. Clculo do MCHC MCHC = (HGB : HCT) x 100

A concentrao de hemoglobina corpuscular mdia da paciente foi 38,2+ g / dL. O valor dado pela razo entre a quantidade de hemoglobina e a quantidade de hematcrito multiplicada por 100. Pela frmula, tm-se:

MCHC = (14,5 : 37,9) x 100 MCHC = 38,2 g / dL

O valor encontrado foi igual ao mostrado pelo aparelho. O sinal positivo indica que o valor est aumentado.

Para que se possam comparar valores quando no se dispe de frmulas, deve-se ter em mos uma tabela de referncias.

28 Tabela 03: Valores de referncia de hemograma para crianas At 1 ms Leuccitos Eritrcitos Hemoglobina Hematcrito MCV MCH MCHC PLT Metamielcitos Bastonetes Segmentados Neutrfilos Eosinfilos Basfilos Linfcitos Moncitos
4300 19300/L 2,7 5,8 milhes/L 10 18 g/dL 27,7 58,4% 86 120 fL 31 37 pg 30,8 36 g/dL 250 000 500 000 mm 0 193/L 129 1158/L 1032 13703/L 1161 15054/L 0 772/L 0 193/L 645 12545/L 86 1544/L

1 ms a 1 ano
6000 17500/L 3,1 5,6 milhes/ L 10 14 g/dL 27,8 41,4% 74 89 fL 25 32 pg 33,8 36 g/dL 200 000 500 000 mm 0 175/L 180 1050/L 1140 5075/L 1320 6300/L 60 700/L 0 175/L 3420 11725/L 240 1400/L

2 a 4 anos
5500 16000/L 3,3 5,6 milhes/L 10,5 14,5 g/dL 29,5 41,3% 74 90 fL 26 32 pg 33,8 36 g/dL 200 000 500 000 mm 0 160/L 165 960/L 1430 5760/L 1595 6680/L 55 650/L 0 160/L 2695 9760/L 220 1280/L

5 a 10 anos
4500 13500/L 3,8 5,8 milhes/L 12 15 g/dL 34,1 43,8% 6 91 fL 26 32 pg 33,8 36 g/dL 140 000 400 000 mm 0 135/L 135 810/L 1935 7155/L 2070 8100/L 45 450/L 0 135/L 1440 5940/L 180 1080/L

*fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p.27 portal da educao. Tabela 04: Valores de referncia de hemograma para adolescentes e adultos 11 a 15 anos Leuccitos Eritrcitos Hemoglobina Hematcrito MCV MCH MCHC PLT
4500 13500/L 3,9 5,9 milhes/L 12 16 g/dL 35,6 48,6% 82 92 fL 27 31 pc 32,9 36 g/dL 150 000 400 000 mm

Homens
5000 - 10000/L 4,5 6,7 milhes/L 13 18 g/dL 41,5 54,7% 82 92 fL 27 31 pc 32,9 36 g/dL 150 000 400 000 mm

Mulheres
5000 - 10000/L 3,9 5,9 milhes/L 12 16 g/dL 35,6 48,6% 82 92 fL 27 31 pc 32,9 36 g/dL 150 000 400 000 mm

29 Metamielcitos Bastonetes Segmentados Neutrfilos Eosinfilos Basfilos Linfcitos Moncitos

0 135/L 135 - 810/L 1935 -7155 2070 8100/L 45 - 540/L 0 - 135/L 1440 - 1080/L 180 - 1080/L 0 - 100/L 150 - 600/L 2750 - 6500/L 2900 - 7200/L 55 - 220/L 0 - 100/L 1000 - 3200/L 200 - 800/L 0 - 100/L 150 - 600/L 2750 - 6500/L 2900 - 7200/L 55 - 220/L 0 - 100/L 1000 - 3200/L 200 - 800/L

*fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p.27 portal da educao.

6.2. Elementos do Sangue Como j foi mencionado, o sangue basicamente formado por clulas vermelhas, clulas brancas e plaquetas. As hemcias so responsveis pelo transporte de oxignio para os rgos e tecidos. Os leuccitos so responsveis pela defesa imunolgica do organismo. As plaquetas so responsveis pela coagulao do sangue (em outras palavras, pelas cicatrizaes e regeneraes).

6.2.1. Eritrcitos (Hemcias / RBC) Hemcias so clulas anucleadas e com formato de disco bicncavo, com cor variando entre rosada e vermelha, dependendo da concentrao de hemoglobina. As clulas vermelhas, quando no apresentam alteraes nem quanto forma nem quanto pigmentao recebem o nome de hemcias normocticas e normocrmicas. Quando esto em quantidade alm do normal indica ocorrncia de eritrocitose (ou policitemia). Quando esto abaixo do normal caracteriza uma eritroblastemia. As hemcias variam quanto ao tamanho, o que medido pelo valor de VCM (Volume Corpuscular Mdio). Quando a hemcia est muito grande chamada macroctica. E, quando est muito pequena, microctica. As hemcias variam quanto pigmentao caracterstica. A concentrao de hemoglobina que determina a colorao da hemcia. Essa caracterstica depende do valor de CHCM (Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia). Quando a hemcia est com colorao muito intensa chamada hipercrmica. Quando sua colorao est muito clara, chamada hipocrmica. Pode at

30 mesmo serem indcios de uma anemia aguda. Deve-se lembrar de que os valores de VCM e HCM iro variar com a idade do paciente. Abaixo, encontram-se imagens ilustrativas dos eritrcitos em algumas das condies mencionadas acima.

Fig. 09 Hemcias normocticas e normocrmicas. Fonte: http://heloisagallo.site.med.br/index.asp?PageName=Sangue

Fig. 10 Hemcias macrocticas e hipocrmicas. Fonte: http://www.icb.usp.br/mol/10-2-sangue2.html

Fig. 11 Hemcias macrocticas e hipercmicas. Fonte: http://www.ciencianews.com.br/doencaeritro/Principais%20Alt.%20Morf%20eritr.%20%206/althemog.htm

31 6.2.2. Hemoglobina (HGB) A hemoglobina uma protena presente no interior dos eritrcitos e eventualmente ligada a outras protenas plasmticas (quando h destruio dos eritrcitos). responsvel por 97% da composio da hemcia (desconsiderando a gua) e 35% (considerando a gua). o pigmento responsvel pela colorao das mesmas, e forma um complexo qumico conjugado cuja substncia central a Heme. A Heme tem o ferro (II), Fe2+, como tomo principal, em seu centro (cuja carncia acarreta anemia). Est ligado a cadeias peptdicas chamas globinas. Essa substncia mostrada abaixo, na figura 12.

Fig. 12 Grupo Heme. Fonte: http://en.wikipedia.org/wiki/File:Heme_b.png

Quando h a unio de quatro grupos Heme e quatro cadeias de globina resulta na formao de uma molcula de hemoglobina. Quando o paciente possui a taxa de hemoglobina baixa h grandes de chances de ter adquirido uma anemia, que se torna tanto mais agudo quanto mais baixo for o nvel da protena, acarretando at mesmo uma leucemia. Conforme citado, quando h carncia de hemoglobina as hemcias se tornam cada vez mais hipocmicas.

interessante ressaltar que a bilirrubina o principal produto do metabolismo da Heme na hemoglobina. Cerca de 80% da bilirrubina so provenientes da destruio de eritrcitos velhos ou defeituosos.

32

Fig. 13 Estrutura qumica da bilirrubina. Fonte: http://www.infoescola.com/bioquimica/bilirrubina/

6.2.3. Hematcrito (HCT) Conforme j mencionado, o hematcrito corresponde poro slida do sangue, ou seja, eritrcitos, leuccitos e trombcitos. Sua quantificao expressa em porcentagem.

6.2.4*. Leuccitos (WBC) Chamamos de leuccitos todas as clulas da srie branca, aquela responsvel pela defesa imunolgica do organismo. Quando tm-se valores aumentados de leuccitos h uma leucocitose. Alguns casos do aumento dos leuccitos so: recm-nascidos, puberdade, gravidez, infeces, partos etc. Quando o nvel de leuccitos est muito baixo h uma leucopenia. Algumas das causas da leucopenia so: depresso, molstias parasitrias, alterao na distribuio dos leuccitos etc. Vrios so os leuccitos:

6.2.5. Linfcitos (LYN) So leuccitos que podem ser classificados como grandes ou pequenos. Seu citoplasma no apresenta granulaes e, por isso, so chamados de agranulcitos. Seu ncleo ocupa quase toda a poro do citoplasma, e representam cerca de 20 a 30% das clulas brancas do sangue.

Fig. 14 Linfcito. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 162 portal da educao.

33 6.2.6. Moncitos So os maiores leuccitos do sangue. Assim como os linfcitos, so agranulcitos. Possuem citoplasma azul-acinzentado. Seu ncleo grande e sem segmentao.

Fig. 15 Moncito. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 162 portal da educao.

6.2.7. Neutrfilos So os leuccitos mais numerosos na circulao sangunea, sendo que correspondem a mais de 60%. Possuem ncleo segmentado e, em seu citoplasma, so observadas pequenas granulaes de colorao avermelhada. Ele e os demais leuccitos (salvo linfcitos e moncitos) so granulcitos.

Fig. 14 Neutrfilo. Fonte: http://www.infoescola.com/citologia/neutrofilos/

34 6.2.8. Eosinfilos So um pouco maiores que os neutrfilos. Seu ncleo segmentado e possui granulaes no citoplasma, esfricas e de contorno ntido. As granulaes so alaranjadas ou avermelhadas.

Fig. 16 Eosinfilo. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 161 portal da educao.

6.2.9. Mielcitos Possui um ncleo frequentemente excntrico, onde a cromatina se evidencia; h uma aglomerao de nuclolos.

Fig. 17 Mielcito. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 160 portal da educao.

35 6.2.10. Metamielcitos O ncleo possui cromatina disposta em grossos aglomerados. As granulaes so maiores e mais visveis.

Fig. 18 Metamielcito. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 160 portal da educao.

6.2.11. Basfilos So os leuccitos mais raros. Apresentam ncleo segmentado e citoplasma com granulaes especficas, que se tornam violetas quando coradas.

Fig. 19 Basfilo. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 161 portal da educao.

6.2.12. Bastonetes Possui ncleo alongado como uma salsicha ou recurvado. A cromatina intensamente aglomerada. O citoplasma roxo e possui finas granulaes.

36

Fig. 20 Bastonete. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 161 portal da educao.

6.2.13. Segmentados Parecem ter o ncleo totalmente granulado. Possuem aglomeraes grossas e especficas.

Fig. 21 Segmentado. Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 161 portal da educao.

6.2.14. Trombcitos So as plaquetas, responsveis pela coagulao sangunea. Est presente no sangue que formado na medula ssea. A sua principal funo a formao de cogulos. Uma pessoa normal tem entre 150.000 e 400.000 plaquetas por milmetro cbico de sangue. Sua diminuio ou disfuno pode levar a sangramentos, assim como seu aumento pode aumentar o risco de trombose. Trombocitopenia (ou plaquetopenia) a diminuio do

37 nmero de plaquetas no sangue. Trombocitose (ou plaquetose) o aumento do nmero de plaquetas no sangue.

Fig. 22 Plaquetas normais (pontos pequenos). Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 172 portal da educao.

Fig. 23 Plaquetas gigantes (VPM alto) (pontos pequenos). Fonte: guia de interpretao de exames, vol.lll; p. 172 portal da educao.

6.3. Preparo de Lminas Quando o aparelho mostra alteraes ou quando a clnica do paciente no condiz com o resultado apresentado, faz-se a lmina, para observaes e verificaes. A contagem passa, ento, a ser manual. Inicialmente homogeneza-se novamente o sangue do paciente. Em seguida, coloca-se uma gota do sangue sobre uma lmina previamente limpa com gaze hidroflica (quanto menor a quantidade de sangue melhor ser a visualizao). Deve-se iniciar o procedimento para espalhar o sangue sobre a lmina: o esfregao. O sangue empurrado sobre a lmina com o auxlio de uma lmina mais grossa de bordas chanfradas, a extensora.

38 Deve-se manter a extensora a 45 e realizar o esfregao rapidamente, conforme ilustrado na figura abaixo:

Fig. 24/25 Exemplificao da execuo do esfregao. Fonte: http://biomedicoscopia.blogspot.com.br/2012/06/um-bom-estiraco-sanguineo.html

Aps a confeco do esfregao escreve-se o cdigo do paciente na parte superior da lmina utilizando um lpis dermatogrfico azul. A lmina fica secando por alguns minutos, at o momento de ser corada. Os corantes hematolgicos, na verdade, recebem o nome de quem os desenvolveu atravs de pesquisas. Eles so preparados utilizando o metanol como solvente. O procedimento de preparo da lmina divido em trs partes: fixao, colorao e lavagem. Atualmente mesclou-se a metodologia dos corantes em apenas uma. Esse mtodo o Leishman (ou May-Grunwald-Giemsa), que o mesmo utilizado no laboratrio onde se procedeu ao estgio. Quando o esfregao seca as lminas so colocadas dentro de um frasco com ranhuras internas, contendo solues denominadas corantes rpidos de hematologia. A lmina deve ficar no mnimo 40 segundos dentro do corante, para que o mesmo se fixe s clulas de maneira eficiente. As lminas so colocadas no corante intitulado rpido 1 (azul), depois so retiradas e colocadas no corante rpido 2 (alaranjado) e, por ltimo, no corante rpido 3 (roxo). Somente aps serem retiradas do corante 3 as lminas so lavadas sob gua corrente. Depois so postas para secar em um local apropriado at a hora da observao.

Fig. 26 Corantes hematolgicos.

39 Conforme foi dito, as lminas coradas so postas para secar antes da observao. Elas so colocadas com inclinao de 45 num suporte apropriado de madeira, conforme ilustra a figura 27, abaixo. Se acontecer de o esfregao sair errado, a lmina deve ser desprezada em um recipiente com gua e hipoclorito, que fica na bancada.

Fig. 27 Lminas coradas.

Os corantes de hematologia so solues qumicas alcolicas que permitem uma colorao rpida sendo, portanto, chamados de panticos. Sua composio dada abaixo. Rpido 1: uma soluo azulada de trifenilmetano. Tambm chamada tritano. Sua nomenclatura oficial 1,1,1 trifenilmetano.

Fig. 28 Estrutura qumica do corante rpido 1. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Trifenilmetano

40 Rpido 2: uma soluo alaranjada de xanteno. Seu nome IUPAC 9-H-xanteno, 10H-9-oxaantraceno.

Fig. 29 Estrutura qumica do corante rpido 2. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Xanteno Rpido 3: uma soluo roxo-azulada de fenotiazina. oficialmente conhecida como tiodifenilamina ou dibenzoparatiazina.

Fig. 30 Estrutura qumica do corante rpido 3. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Fenotiazina

Os corantes no podem ficar abertos tempo demais, apenas o necessrio, pois so volteis, mesmo que lentamente. Terminado o procedimento de corar lmina, e passado pelo menos 01 hora de secagem, pode-se iniciar a fase de contagem das clulas.

6.4. Contagem Diferencial de Clulas Leucocitrias Vrias das clulas citadas anteriormente (antigamente contada sobre cmara de Newbauer) atualmente so contadas ao microscpio, e usa-se um contador diferencial de clulas. No laboratrio a contagem diferencial feita de maneira semiautomtica. A contagem global e diferencial, segundo alguns autores, a principal informao fornecida na anlise da srie branca e, a mesma deve ser feita com o auxlio de um bom microscpio.

de grande importncia o conhecimento das partes do microscpio e suas funes, pois ele largamente utilizado durante a rotina de anlises em um laboratrio.

41

O microscpio binocular utilizado tanto na hematologia quanto na urinlise, mas deve haver um para cada rea. Na hematologia ele utilizado em conjunto com o contador diferencial de clulas, que l oito parmetros de clulas brancas. A visualizao feita na ltima objetiva (branca), utilizando leo de imerso. O leo facilita a visualizao e condensao das clulas

previamente coradas em lminas. Para chegar objetiva branca deve-se comear na menor (vermelha) e ir localizando o foco em cada uma. Fig. 31 Microscpio binocular.

muito importante saber utilizar o microscpio, pois uma ferramenta de potencial e indispensvel contagem celular na hematologia. Deve-se conhecer seus elementos e como ajustar o foco de suas lentes para o trabalho. Abaixo, as partes do microscpio binocular ptico.

A Oculares: so os canais por onde observamos as lminas. So formados por 6 a 8 lentes

sobrepostas. B Revlver: pea giratria que sustenta objetivas. C Brao: serve de suporte ao canho (ou tubo), que sustenta o revlver. Fig. 32 Partes do microscpio. Fonte:
http://dc261.4shared.com/doc/9UBT_sUS/pr eview.html

as

lentes

chamadas

42 D Charriot: movimenta a lmina de um lado para o outro, tanto em sentido longitudinal quanto transversal. E Parafuso Macromtrico: responsvel pelos movimentos verticais da platina, rpidos e com grande amplitude. F Parafuso Micromtrico: responsvel pelos movimentos verticais da platina, pequenos e de pequena amplitude, permitindo aperfeioar o foco. G Liga/ Desliga: permite ligar e desligar a luz. H Base: d apoio a todos as partes do microscpio. I Espelho ou lmpada: Permite a passagem de luz. J Condensador: promove uma iluminao uniforme. K Regulador do Charriot: fuso que permite o deslocamento da lmina para frente e para trs, para a direita e para a esquerda. L Platina: onde se apoia a lmina quer ser observada. M Objetivas: so as lentes que se prendem ao revlver. So compostas por 4 a 6 lente sobrepostas. O maior desafio antes da observao ao microscpio a focalizao das objetivas. Deve-se iniciar pela objetiva menor e ir para a de maior aumento, sempre aps encontrar o foco da anterior. As objetivas, em ordem crescente de aumento, so: vermelha 4x/0.10 amarela 10x/0.25 azul 40x/0.65 branca 100x/1.25 Quando se atinge a objetiva que aumenta 100 vezes mais, usa-se o leo de imerso, que facilita e torna mais translcida a visualizao das clulas. No necessrio o uso de lamnulas. Ajustado o foco, deve-se ligar o contador diferencial de clulas. medida que as clulas forem sendo vistas nos campos da lmina, o analista deve ir apertando o boto do aparelho que

43 corresponde quela clula. Quando houver sido atingido o total de 100 clulas contadas o aparelho ir emitir um sinal sonoro, finalizando a contagem.

Fig. 33 Contador diferencial de clulas BENFER CC900.

O contador diferencial capaz de realizar a contagem de 8 tipos diferentes de clulas: basfilos, eosinfilos, metamielcitos, bastonetes, granulcitos, linfcitos, moncitos e mielcitos. Cada vez que visualizada uma clula de srie branca ao microscpio, deve-se apertar a tecla correspondente clula o nmero de vezes que ela aparecer no mesmo campo.

6.5. Grupos Sanguneos e Fator Rh (GS + Rh) Quando o clnico solicita esse exame, tem o objetivo de identificar qual o tipo sanguneo do paciente. O exame de grupo sanguneo feito com o sangue no centrifugado, contendo EDTA. Devem-se separar duas lminas. Primeiramente elas devem ser limpas com gaze hidroflica. Em seguida deve-se utilizar uma micropipeta com volume 50 L da amostra de sangue, e disp-las nas placas conforme a ilustrao abaixo.

Fig. 34 Preparo de lmina para teste de Gs + Rh.

44 Na figura acima, o poo A representa o grupo sanguneo A; o poo B representa o grupo sanguneo B. J o poo D o que indicar o fator Rh, ou seja, se o grupo A, B ou AB ser (+) ou (). Para realizar o exame basta adicionar uma gota do reagente especfico em cada poo. (*os reagentes devem ser acondicionados na geladeira).

Fig. 35 Reagentes para determinao de grupo sanguneo + fator Rh.

Os reagentes para a determinao so antgenos, ou seja, iro aglutinar a amostra de sangue que contiver os mesmos antgenos, revelando assim o grupo sanguneo. Essas substncias de determinao so chamadas anticorpos monoclonais murinos. O sistema ABO, segundo os fabricantes dos soroclones murinos, o mais importante sistema de classificao sangunea existente. A determinao feita atravs da identificao de antgenos na membrana eritrocitria. Quando h aglutinao do poo de sangue pelo reagente usado significa que o paciente tem aquele grupo sanguneo. Caso no haja aglutinao significa que ele no tem aqueles antgenos. Deve-se pingar 1 gota do reagente A sobre o poo A, 1 gota de B sobre o poo B e 1 gota de D sobre o poo D. Homogeneizar. Se aglutinar em A o paciente tipo A; se aglutinar em B o paciente tipo B; se aglutinar em A e B o paciente tipo AB; caso no haja aglutinao em nenhum dos dois, o pacientes tipo O. Se houver aglutinao em D o paciente tem fator Rh (+); se no houver aglutinao em D o paciente tem fator Rh (). Quando acontece de o paciente ter fator Rh negativo deve-se realizar a pesquisa do fator Du. O fator Du serve para a confirmao do fator Rh negativo (uma vez que sangues do tipo negativo (-) so raros).

45 Pesquisa de Du Primeiramente, deve-se preparar uma suspenso de hemcias a 5%. Para isso, devem-se seguir os seguintes passos: centrifugar o sangue; desprezar o plasma; lavar hemcias com soluo salina (cloreto de sdio NaCl 0,9%) 3 vezes; centrifugar por 5 minutos; desprezar o sobrenadante; colocar em um tubo com 1000 L (1 mL) de salina; pipetar 50 L da suspenso de hemcias; Depois de feita a suspenso: num tubo, colocar 200 L da suspenso e adicionar 2 gotas do reagente Anti-D; incubar em banho-maria a 37C por 30 minutos; retirar do banho-maria e adicionar 2 gotas de Soro Coombs; centrifugar por 5 minutos. Aps essa srie de procedimentos deve-se observar o tubo. Se houver aglutinao tm-se Du + e se no houver aglutinao, Du . Se o fator der negativo comprova o teste de Rh realizado anteriormente.

6.6. Velocidade de Hemossedimentao (VHS) A hemossedimentao, segundo um dos manuais de hematologia do laboratrio, consiste na medida da velocidade com que as hemcias se sedimentam dentro da pipeta de Westergreen. De acordo com alguns guias de interpretao de exames, a VHS reflete os resultados entre as foras envolvidas no movimento de sedimentao das hemcias e os mecanismos oponentes exercidos por substncias plasmticas, principalmente o fibrinognio. A presena de processos inflamatrios favorece a hemossedimentao. A tcnica consiste em pipetar o sangue do tubo de ensaio com sangue no centrifugado e previamente homogeneizado. Aps a pipetagem (com pra de borracha), devem-se limpar as bordas da pipeta e encaix-la no suporte de Westergreen. A pipeta graduada em milmetros, e a leitura feita aps 1 hora. Abaixo, um exemplo da realizao da VHS (mtodo Westergreen)

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O suporte ao lado, que est com duas pipetas, ainda comporta mais oito amostras para a realizao do exame. Segundo alguns autores a referncia da VHS para homens entre 17 e 50 anos de 1 a 7 mm. Para homens acima de 50 anos de 2 a 10 mm. No caso das mulheres, de 13 a 50 anos 3 a 9 mm e para mulheres acima de 50 anos 5 a 15 mm. A VHS aumenta com o aumento da idade.

Fig. 36 Exame de VHS.

Valores elevados da VHS podem significar infeces bacterianas, hepatites agudas, processos inflamatrios agudos, artrite reumatoide, anemias graves, leucemias, disfuno da tireoide etc. J valores muito baixos da VHS podem significar leses hepticas graves, insuficincia cardaca, microcitose, hemoglobinopatia, policetemia etc.

6.7. Coagulograma (COAG) O aparelho utilizado no coagulograma um coagulmetro ptico monocanal para a determinao dos parmetros da hemostasia (cascata de coagulao) em plasma citratado.

Fig. 37 Coagulmetro HUMAN CLOT Jr.

47 O mtodo utilizado o coagulomtrico (Quick Automatizado). O coagulograma o conjunto de exames que requer a maior preciso e ateno dentro do laboratrio, na rea de hematologia, pois seus resultados serviro de parmetros para avaliao mdica em procedimentos properatrios. Os exames de coagulograma iro fornecer dados sobre a hemostasia, ou seja, a capacidade de parar o sangramento e iniciar o reparo tecidual, logo, esto relacionados s caractersticas fisiolgicas de coagulao do sangue. O material utilizado o plasma citratado, previamente centrifugado. H quatro exames principais que so solicitados: TP, AP, TTPA e RNI (juntos ou individualmente). Mas h mtodos que foram se tornando obsoletos, porm, ainda so utilizados em alguns laboratrios rudimentares, como a Contagem de Plaquetas (Mtodo de Brecher-Cronkite), pois j fornecida a quantidade no hemograma, Prova do Lao (Mtodo de Rumpel-Leed), o Tempo de Sangria (Mtodo de Duke) e o Tempo de Coagulao (Mtodo de Lee-White).

6.7.1. Tempo de Protombina (TP) / Tempo de Atividade Protombina (TAP) O tempo de protombina consiste na determinao do tempo (em segundos) de coagulao de um plasma citratado. Ao plasma descalcificado (retirada de clcio) adicionado um excesso de tromboplastina. Considerando que a protombina se converte em trombina em um tempo uniforme, a recalcificao (promovida pelo reagente de CaCl2) produz a coagulao do plasma. O valor dado corresponde ao TP. O Tempo de Protombina considerado normal est entre 10 e 14 segundos.

* Importante: a coleta do sangue para exames de COAG deve ser feita no brao levemente garroteado. Quando se aproximar o fim da coleta deve-se retirar o garrote. O anticoagulante citrato deve ser pingado no tubo (usar tubo de vidro) no momento da coleta e, o sangue da seringa deve ter o final desprezado em local adequado. O material deve ser centrifugado at que o plasma esteja visivelmente separado da parte celular.

6.7.2. Atividade de Protombina (AP) A atividade de protombina ir medir o percentual de ao da coagulao baseando-se na concentrao de protombina. Valores considerados bons para AP esto entre 70 e 120%.

48 6.7.3. Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (TTPA) O teste de TTPA consiste na determinao do tempo (em segundos) de coagulao do plasma citratado aps a adio dos reagentes que contm um ativador plasmtico (cido elgico) e fosfolipdeos, que iro atuar como substituintes das plaquetas. Valores considerados bons esto entre 20 e 30 segundos (pessoas sadias) e 24 e 45 segundos (pessoas que utilizam medicao anticoagulante)*. *H anticoagulantes que so medicamentos, com finalidade de impedir a trombose. Ex.: Enoxaparina (Clexane), Varfarina (Marevan), Heparina, entre outros.

6.7.4. Relao Normalizada Internacional (RNI) A RNI uma derivada do TP. solicitado, portanto, junto ao TP quando pacientes utilizam anticoagulantes orais. A RNI um exame que visa padronizar os resultados do TP, pois pode haver variaes inerentes ao mtodo e ao reagente utilizado neste ltimo exame. Pacientes que fazem uso de anticoagulantes orais devem fazer o exame de TP juntamente com a RNI de forma peridica (o ideal que seja pelo menos mensal). Os valores podem se elevar nas seguintes situaes (alm do uso dos anticoagulantes): deficincia da vitamina K (em casos de anorexia, m absoro intestinal, destruio da flora bacteriana intestinal por antibiticos), insuficincia heptica, elevaes graves do colesterol etc. Os valores podem estar reduzidos com o uso de drogas de inibem os anticoagulantes (anticidos, corticoides e diurticos) ou em pacientes com uma dieta rica em vitamina K. Os valores de RNI ideais variam de acordo com a situao: entre 1,0 e 1,3 (pacientes sadios) e entre 2,0 e 3,0 (pacientes em uso de medicao anticoagulante). Para a realizao dos exames TP (TAP), AP, e RNI, colocam-se as cuvetas nas cmaras do fotmetro. Cada uma das cuvetas menores (existem 08) deve conter 25 L de soro do paciente. Nas cuvetas maiores (existem 02) devem haver 50 L de reagente. Ajusta-se o aparelho para anlise de TP e programam-se 180 segundos. Coloca-se a cuveta com amostra no canal de leitura (situado entre as cmaras de reagentes) e, quando o aparelho emitir um sinal sonoro, deve-se despejar o reagente. Deve-se aguardar a leitura dos trs exames, que fornecida simultaneamente.

Tabela 05: Exames TP (TAP), AP e RNI Amostra 25 L

Reagente (Formador de Cogulo, CaCl2) 50 L

49 Para a realizao do exame TTPA o procedimento o mesmo, diferindo apenas nos reagentes e suas dosagens.

Tabela 06: Exame TTPA Amostra Reagente n 1 (Ativador) 25 L 25 L

Reagente n 2 (Formador de Cogulo, CaCl2) 25 L

Abaixo, uma sntese dos valores de referncia para o coagulograma completo: TP: 10 14 s AP: 70 120% RNI: 1,0 3,0 s (pessoas sadias) / 2,0 3,0 s (uso de anticoagulantes orais) TTPA: 20 30 s (pessoas sadias) / 24 45 s (uso de anticoagulantes orais)

7. Bioqumica A bioqumica parte mais extensa e trabalhosa (e mais interessante) das anlises clnicas, pois compreende a maior parte dos exames que so realizados em qualquer laboratrio. As prticas de bioqumica requerem muita ateno, pois h detalhes que podem por os resultados a desejar caso as etapas no sejam rigorosamente obedecidas. Esta rea estuda mais intimamente a qumica do metabolismo humano atravs de mtodos especficos (os quais esto descritos nas bulas dos reagentes). O foco da bioqumica, ento, so as biomolculas: carboidratos (acares), lipdios (leos e gorduras), cidos nucleicos (DNA e RNA) e aminocidos (protenas).

No laboratrio onde se realizou o estgio os exames realizados so: glicose (jejum e psprandial), colesterol total e suas fraes (HDL e Triglicrides sendo que VLDL e LDL so determinados por clculos), ureia, cido rico, fosfatase alcalina, protenas totais, albumina, TGO, TGP, creatinina e mucoprotenas. Na anlise bioqumica uma coisa igual para todos os procedimentos: o paciente, em jejum, ir colher o sangue conforme os procedimentos citados anteriormente. Os tubos da bancada so identificados com o nmero do paciente, mas o tubo que contiver o soro ou plasma deve ser identificado com iniciais do nome e o nmero. O sangue pr-aquecido em banho-maria (36-37C) antes de ser centrifugado.

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Fig. 38 Sangue sendo colocado em banho.

A parte lquida sempre pipetada e separada da parte celular que sedimentou durante a centrifugao, e colocada em tubos de plstico, identificados, numa estante diferente. Costuma-se dizer que o sangue foi sorado.

Fig. 39 Material sorado (soro/plasma)

Todos os exames bioqumicos so dosados no analisador bioqumico BIOPLUS 2000. Ele um fotmetro com leitura monocromtica e bicromtica com banda de 6 a 10 nm (nanmetros) e

51 luz espria de 0,01% T (transmitncia), equipado com leitura de cuveta quadrada e capaz de trabalhar com apenas 32 L de amostra.

Fig. 40 Analisador bioqumico BIOPLUS 2000. Quase todas as dosagens possuem uma amostra chamada branco, a qual deve ser sempre lida antes da amostra. O branco (B) corresponde a um tubo de ensaio apenas com o reagente. O padro usado para o controle de linearidade dos resultados, e tem valores especficos para cada dosagem. O tubo do padro (P) deve conter apenas padro + reagente. J os tubos onde foram utilizados soro ou plasma dever conter reagente de trabalho + amostra do material. Antes de utilizar o aparelho ele deve aquecer, e inicialmente ser lavado 10 vezes com gua deionizada pelo seu sistema de aspirao. Feito isso, ele deve ser reprogramado a cada mudana do tipo de dosagem. importante dizer que as dosagens bioqumicas, em sua maioria, dependem de aquecimento em banho-maria para serem realizadas.

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Fig. 41 Banho-maria sendo aquecido.

Aquecido o analisador bioqumico e preparadas as amostras, deve-se iniciar a formao das matrizes bioqumicas, que sero dosadas quantitativamente.

7.1. Glicose (GLIC) A Glicose (C6H12O6) um importante carboidrato no metabolismo dos seres vivos. Os kits de glicose contm um frasco com o reagente de trabalho e outro com o padro de calibrao, e devem ser acondicionados em geladeiras entre 2C e 8C. O reagente n 1 aquele que contm as enzimas: formado por um tampo (pH=7,0) a 36 mmol L-1, fenol a 10 mmol L-1, 4aminoantipirina a 0,03 mmol L-1, azida sdica a 7,7 mmol L-1, glicose oxidase > 100,0 mg dL-1 e peroxidase > 700 U L-1. O reagente n 2 o padro, e formado por glicose a 100,0 mg dL-1 (5,56 mmol L-1) e conservantes.

7.1.1. Glicose em Jejum (GLIC-J) Quando houver ps-prandial deve-se colocar J no tubo de glicose em jejum e PP ou POS no outro tubo. O sangue ser colocado em tubos de plstico (com tampa cinza) contendo o anticoagulante fluoreto. A amostra, depois de homogeneizada ser centrifugada at que a

53 mxima quantidade de plasma seja separada. Realiza-se a glicemia sempre em duplicata, para uma maior confiabilidade dos resultados. Tabela 07: Exame Glicose Mtodo: Enzimtico-Colorimtrico GOD-PAP Reagente n 1 (enzimas) Reagente n 2 (padro) Amostra Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL 10 L Tubo Teste 1,0 mL 10 L

Os tubos devem ser homogeneizados e incubados em banho-maria a 37C durante 10 min. Aparecer uma colorao estvel por 30 minutos.

Fig. 42 Exames de glicose sendo realizado.

Nesse teste a glicose oxidada enzimaticamente pela glicose-oxidase (GOD) de acordo com a reao: glicose + O2 + H2O cido glucnico + H2O2 Na segunda etapa da reao, o perxido de hidrognio, em presena da enzima peroxidase (PAP), reage com a 4-aminoantipirina e fenol, formando um cromgeno vermelho cereja, cuja intensidade da cor proporcional concentrao de glicose. Essa colorao a mesma

54 mostrada na figura acima. Aps retirar a glicose do banho, deve-se programar o aparelho para sua dosagem. A cada intervalo entre as leituras das amostras deve-se lavar o equipamento, para evitar contaminao da prxima amostra e/ou entupimento da via de suco. Aps a dosagem, o fotmetro imprime os resultados mostrados em seu visor. O limite de referncia para a glicose dosada no sangue 70 110 mg dL-1. A sua dosagem um dos exames mais solicitados pelos mdicos, e serve para diagnosticar distrbios nesse acar, que leva hipoglicemia (glicose diminuda) ou hiperglicemia (glicose elevada). Um dos problemas mais frequentes envolvendo os carboidratos o diabetes mellitus, que pode ser descrito como um grupo de doenas metablicas capazes de comprometer o sistema vascular e neural, levando rgos importantes a graves leses.

7.1.2. Glicose Ps-Prandial (GLIC-PP) A glicose ps-prandial aquela colhida aps a glicose jejum, porm, aps a primeira coleta, o paciente deve fazer um lanche reforado, e ficar em repouso (sentado ou deitado) por 02 horas. Aps esse tempo ele retorna para colher o sangue novamente. O sangue centrifugado e o procedimento repetido da mesma maneira que no exame de glicemia em jejum.

7.2. Colesterol Total (COL) O colesterol um dos lipdios encontrados nos tecidos animais, e desempenha funes fisiolgicas importantes, como a sntese de cidos biliares, vitamina D e hormnios. Os kits de colesterol devem ser armazenados em geladeiras, entre 2C e 8C. Eles contm o reagente n 1, que composto por um tampo (pH=7) a 75 mmol L-1, fenol a 4,5 mmol L-1, 4aminoantipirina a 0,3 mmol L-1, colesterol oxidase > 200 U L-1, lipoprotena lpase > 700 U L-1, peroxidase > 300 U L-1, azida sdica 14,6 mmol L-1, estabilizantes e surfactantes. O reagente n 2 o padro, que formado por colesterol a 200,0 mg dL-1, estabilizantes e solubilizantes. O paciente tem o sangue coletado (sem anticoagulante), o qual incubado em banho-maria a 37C por alguns minutos. Em seguida levado centrfuga at que a maior poro do soro se separe do sangue.

55 Tabela 08: Exame Colesterol Total Mtodo: Enzimtico-Colorimtrico COD-PAP Reagente n 1 (enzimas) Reagente n 2 (padro) Amostra Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL 10 L Tubo Teste 1,0 mL 10 L

Os tubos devem ser homogeneizados e incubados em banho-maria a 37C durante 10 min. Aparecer uma colorao estvel por 60 minutos, conforme mostrado na figura abaixo.

Fig. 43 Exame colesterol total sendo realizado.

Na primeira fase reacional os steres de colesterol so catalisados pela enzima lpase, conforme a reao: steres de colesterol colesterol + cidos graxos

Na segunda etapa o catalisador a enzima colesterol oxidase: colesterol + O2 colesterol-3-ona + H2O2 Na ltima etapa, a enzima peroxidase a catalisadora, conforme mostrado abaixo: 2 H2O2 + fenol + 4-aminoantipirina cromgeno vermelho cereja + 4 H2O

56 A intensidade da colorao proporcional concentrao de colesterol na amostra. Quando o colesterol total encontra-se < 200 mg dL-1 est timo; quando est entre 200 e 239 est no limite tolervel; se for > 240 mg dL-1 est alto. A concentrao de colesterol plasmtico influenciada por caracteres hereditrios, funo endcrina, nutrio e integridade dos rgos vitais como fgado e rins. O colesterol muito elevado pode levar obstruo das vias coronrias e outros vasos sanguneos (aterosclerose), dificultando a circulao do sangue. O colesterol encontra-se aumentado em pacientes com diabetes, cirrose biliar, hipotiroidismo e hiperlipoproteinemias. Encontra-se diminudo em pacientes com hepatites virais, pneumonia, hipertiroidismo, anemia e desnutrio.

*Obs.: O cromgeno avermelhado formado nas reaes devido presena de uma substncia chamada quinoneimina, cuja nomenclatura sistemtica IUPAC-2001 2,6dicloroquinona-4-cloroimida.

Fig. 44 Estrutura qumica da quinoneimina. Fonte: http://chemeo.com/cid/33-757-5

7.2.1. Fraes do Colesterol 7.2.1.1. HDL O HDL (High Density Lipoprotein), lipoprotenas de alta densidade, o chamado bom colesterol. As HDL so pequenas partculas constitudas de cerca de 50% de protenas, 30% de triglicerdeos e 20% de colesterol. Sua funo a de levar colesterol at o fgado, contribuindo para a diminuio do mesmo na corrente sangunea ou nas clulas. Para o ensaio bioqumico das HDL realizam-se duas etapas: a primeira a precipitao e a segunda dosagem da lipoprotena. O reagente n 1 o padro, soro liofilizado de HDL. O reagente n 2 o precipitante enzimtico, composto de tampo a 100 mmol L-1 (pH = 7,0), DSBT a 24 mmol L1

, colesterol oxidase < 300 U L-1, peroxidase < 1000 U L-1 e detergente.

57 Para um tubo de plstico, previamente numerado com o cdigo do paciente, pipetar volumes conforme a tabela abaixo: Tabela 09: Exame Colesterol HDL precipitao Mtodo: Enzimtico Reagente n 2 (enzima) Amostra Tubo Branco Tubo Padro Tubo Teste 250 L 250 L

A seguir, agitar manualmente ou em vrtex por 3 minutos at que se forme uma densa espuma por cima da fase lquida. Levar para centrifugar por 15 minutos. Aps isso, pipetar o sobrenadante, tomando cuidado para no dispersar o corpo de fundo. Deve-se utilizar tubos de vidro para a segunda etapa. Tabela 10: Exame Colesterol HDL dosagem Mtodo: Enzimtico Sobrenadante Reagente n 1 (padro) Reagente* (enzima COL) Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 50 L 1,0 mL Tubo Teste 50 L 1,0 mL

* usar o mesmo reagente de determinao do Colesterol Total.

A primeira etapa da reao ocorre em presena da enzima colesterol estrease: colesterol esterificado + H2O Colesterol + cido graxo A segunda etapa ocorre em presena da enzima colesterol oxidase: colesterol esterificado + H2O + O2 colestenona + H2O2 A ltima etapa ocorre em presena da enzima peroxidase: 2 H2O2 + 4-aminoantipirina + DSBmT* quinoneimina + 4 H2O
* DSBmT = N,N-bis (4-sulfobutil)-m-toluidina

58 Deve-se homogeneizar e levar em banho-maria por 5 minutos, a 37C. A colorao ser estvel por 30 minutos.

Fig. 45 Exame HDL.

Na interpretao das HDL para: Mulheres > 65 mg/dL desejvel; 45 65 mg/dL representa mdio risco; < 45 mg/dL representa alto risco;

Homens > 55 mg/dL desejvel; 35 55 mg/dL representa mdio risco; < 35 mg/dL representa alto risco;

7.2.1.2. LDL uma frao do colesterol que pode ser determinada via clculos. As LDL (Low Density Lipoprotein), lipoprotenas de baixa densidade. Representa aproximadamente 50% em massa das lipoprotenas que circulam pelo corpo. O colesterol representa cerca de metade da massa de LDL, sendo a lipoprotena que mais carrega molculas de colesterol. Tambm chamado de mal colesterol. Uma vez que LDL transporta colesterol para as artrias, nveis maiores esto

59 associados com aterosclerose, infarto do miocrdio, ataque cardaco e doena vascular. O clculo do LDL feito atravs da Frmula de Friedwald:

Pela frmula, as LDL podem ser calculadas pela unio dos valores de colesterol total, H DL

da quinta parte do valor dos triglicrides. Segundo a American Heart Association, os valores de
referncia para LDL so:

< 100 mg/dL est timo, sendo que o risco de doena cardaca menor. 100 129 est toleravelmente prximo do nvel timo. 130 189 est limtrofe alto, ou seja, j no mais to aceitvel. 160 189 est alto. > 190 est muito alto, sendo que o risco de doena cardaca alto.

A atualizao de 2004 das recomendaes da "American Heart Association", para pessoas com doenas de ateroscleroses para um nvel de LDL menor que 70 md/dL. 7.2.1.3. VLDL As VLDL so as lipoprotenas de muito baixa densidade (Very Low Density Lipoprotein). VLDL tambm uma frao do colesterol total, sendo tambm uma transportadora de lipoprotenas. Os nveis de VLDL tm sido relacionados com taxa aceleradas de aterosclerose e elevao na quantidade de doenas e estados metablicos. No interessante que as taxas de LDL e VLDL sejam elevadas. Segundo o laboratrio HERMES PARDINI, a taxa de VLDL no deve exceder a 40 mg/dL. avaliado a partir da concentrao de triglicrides. Ainda pela relao de Friedwald, o clculo feito TRIG / 5, ou seja, a quinta parte do valor das triglicrides.

7.2.1.4. Triglicrides (TRIG) As triglicrides so tambm uma frao do colesterol total. So provenientes da alimentao e do fgado. Esses lipdios so steres de cidos graxos de glicerol, e representam a maior poro da gordura de nossos corpos. As dosagens desses lipdeos servem para diagnosticar hiperlipidemias, ou seja, presena de nveis elevados ou anormais de lipdeos no sangue. O kit de triglicrides composto por um reagente e um padro, que devem ser conservados entre 2 e

60 8C. O reagente enzimtico, e contm tampo (pH 7,0) a 100 mmol L-1, 4-clorofenol a 5 mmol L-1, lpase lipoproteica 2500 U L-1, glicerol quinase > 1500 U L-1, peroxidase > 1000 U L-1, 4-aminoantipirina a 0,9 mmol L-1, ATP a 1,5 mmol L-1, glicerol-3-fosfato oxidase > 4000 U L-1, conservante, ativante e estabilizante. O padro contm triglicrides a 100 mg dL-1 (1,13 mmol L-1) e conservante.

A tcnica para dosagem das triglicrides dada na tabela abaixo:

Tabela 11: Exame Triglicrides Mtodo: Enzimtico-Colorimtrico Reagente n 1 (enzimas) Reagente n 2 (padro) Amostra Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL 10 L Tubo Teste 1,0 mL 10 L

Aps a mistura do reagente de trabalho e o soro, deve-se homogeneizar bem e incubar em banho-maria, 37C, por 10 minutos. A colorao ser estvel por cerca de 60 minutos.

Fig. 46 Exame triglicrides sendo realizado.

61 A primeira reao do processo ocorre em presena da enzima lpase: Triglicrides + H2O Glicerol + cidos Graxos A segunda etapa dada em presena do catalisador glicerol quinase e ons Mg2+ do soro. Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP

O produto da segunda etapa ir interagir com O2, em presena de oxidase dihidroxiacetanona, conforme a reao abaixo: Glicerol-3-fosfato + O2

+ H2O2

O fosfato formado na terceira etapa reage da seguinte maneira: 2 H2O2 + 4-aminoantipirina + p-clorofenol quinoneimina (cromgeno cereja) + 4 H2O A colorao cereja aparece em presena da enzima peroxidase, cuja intensidade da cor proporcional concentrao de triglicrides. Quanto interpretao dos valores de referncia, tem-se que: < 150 mg/dL desejvel 150 199 mg/dL limtrofe 200 499 elevado > 500 mg/dL muito elevado

7.3. Ureia (UR) A ureia um produto do metabolismo de aminocidos e protenas. Gerada no fgado, a principal fonte de excreo de nitrognio do organismo, em sua maior parte na urina.

Fig. 47 Estrutura qumica da ureia. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Ureia

62 No organismo, o metabolismo das protenas libera amnia, que convertida em ureia pelo fgado. Segundo USBERCO et. al (2001), a ureia antes s era obtida a partir da urina, sendo um composto orgnico, mas hoje sabe-se que pode ser encontrada tambm no sangue. Um

aumento da taxa de ureia pode ser observado em dietas ricas em protenas, insuficincia cardaca, deficincia renal aguda e hemorragias internas. A diminuio da produo da ureia est relacionada com doenas hepticas graves, reduo do metabolismo de protenas e dietas com poucas protenas. Conforme diz SILVA et. al. (2008), a ureia excretada na urina, embora 40 a 70% seja reabsorvida por difuso nos tbulos renais. O nvel de ureia no soro afetado pela funo renal, contedo proteico da dieta e teor de catabolismo proteico, estado de hidratao do paciente e presena de sangramento intestinal.

Os reagentes de ureia so um pouco mais complexos, pois h momentos em que se deve prepar-los. O reagente n 1 um tampo tris (pH = 7,6) a 100 mmol L-1, ADP a 0,7 mmol L-1, -cetoglutarato 9 mmol L-1, azida sdica 15,38 mmol L-1, urase > 6500 U L-1 e glutamato desidrogenase > 1100 U L-1. Tris a abreviao de tris-hidroximetilaminometano, cujo nome IUPAC 2-amino-2-hidroximetilpropan-1,3-diol.

Fig. 48 Frmula estrutural Tris. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Tris

O reagente n 2 uma coenzima, tambm chamada de tampo estoque, de NADH a 0,32 mmol L-1. O reagente n 3 o padro, a ureia a 70 mg/dL. H um dado reagente n 4, que o oxidante de trabalho. O tampo, que o reagente n1, feito misturando-se 100 mL do reagente n 2 com 400 mL de H2O deionizada. Deve-se homogeneizar e estocar em frasco mbar; ele ser estvel por 12 meses se mantido entre 2 e 8C. O reagente de trabalho, que o que contm a ureia na concentrao adequada para dosagem, feito misturando-se 1,0 mL do reagente n 2 com 20 mL do tampo. Deve-se homogeneizar e acondicionar em frasco mbar;

63 ele ser estvel por 20 dias (entre 2 e 8C). O oxidante de trabalho deve ser preparado adicionando-se o reagente n 4 em 450 mL de gua deionizada. Deve-se homogeneizar e acondicionar em frasco de plstico escuro; o mesmo ser estvel por 12 meses (2 a 8C). Tabela 12: Exame Ureia parte 1 Mtodo: Colorimtrico Reagente de Trabalho (Reagentes n 1 + Reagente n 2) Reagente n 3 (padro) Amostra Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL 10 L Tubo Teste 1,0 mL 10 L

Aps as misturas das matrizes conforme a tabela 10 deve-se homogeneizar-se o material dos tubos levemente e incubar em banho-maria, a 37C, por 5 minutos. Quando o cronmetro apontar o vencimento dos 5 minutos, deve-se proceder segunda parte do procedimento: Tabela 13: Exame Ureia parte 2 Mtodo: Colorimtrico Reagente n 4 (oxidante) Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL Tubo Teste 1,0 mL

De acordo com a tabela acima, deve-se acrescentar 1,0 mL do oxidante de trabalho em cada um dos tubos que esto no banho. Aps isso, homogeneizar levemente, e deixar no banho por mais 5 minutos. Aparecer uma colorao estvel por 60 minutos.

Fig. 49 Oxidante de trabalho.

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Fig. 50 Exame ureia sendo realizado.

A primeira etapa da reao ocorre em presena da enzima urease, que catalisa a hidrlise da ureia. (NH2)2CO + H2O 2 NH3 + CO2 Na segunda fase da reao a GLDH (glutamato desidrogenase), na presena de NH3 e cetoglutarato, oxida o NADH para NAD+. 2 NH3 + 2 NADH + 2 -cetoglutarato 2 L-glutamato + 2 NAD+ + 2 H2O A oxidao de NADH a NAD+, medida pela diminuio de absorbncia, proporcional concentrao de ureia na amostra. O valor de referncia deste produto no soro varia de 15 a 40 mg/dL.

7.4. cido rico (AUR) O cido rico o maior produto do metabolismo das purinas (bases nitrogenadas). Segundo FRAZO (2007), o cido rico uma substncia formada naturalmente pelo organismo, mas, quando se encontra elevado pode gerar sintomas como inflamao e dor nas articulaes, especialmente dos membros inferiores.

65 De acordo com os estudos do Dr. DRUZIO VARELLA, o depsito de cristais de urato (sais de cido rico) nas articulaes, em geral, provoca surtos dolorosos de artrite aguda nos membros inferiores, mas pode comprometer qualquer articulao. O kit de cido rico contm o reagente n 1, um tampo fosfato (pH = 7,5) a 100 mmol L-1 e cido dihidroxibenzenosulfnico (DHBS) a 4 mmol L-1, o reagente n 2, enzimtico, contm um tampo (pH = 7,5) a 100 mmol L-1, 4-aminoantipirina a 2 mmol L-1, azida sdica a 7,69 mmol L-1, peroxidase > 18000 U L-1 e uricase > 3000 U L-1, e o reagente n 3, padro, contm cido rico a 6,0 mg/dL.

Tabela 14: Exame cido rico Mtodo: Enzimtico-Colorimtrico UOD-PAP Reagente de Trabalho (Reagente n 1 + Reagente n 2) Reagente n 3 (padro) Amostra Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL 25 L Tubo Teste 1,0 mL 25 L

Deve-se misturar 20 partes do reagente n 1 com 1 parte do reagente n 2 (ex.: 20 mL + 1 mL). Ele ser estvel por 20 dias entre 2 e 8C (fora do alcance de luz). Aps colocar as misturas nos tubos de ensaio, levar em banho-maria (37C) por 5 minutos. A colorao ser estvel por 30 minutos. As reaes ocorridas so: O cido rico sendo hidrolisado em presena da enzima uricase (UOD): cido rico + 2 H2O Alantona + CO2 + H2O2 A alantona, formada na primeira como produto principal da primeira reao, resultante da degradao hidroltica do cido rico.

Fig. 51 Estrutura qumica da alantona. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/Alanto%C3%ADna

66 Seu nome IUPAC 2,5-dioxo-4-imidazolidinilureia (como o nome da ureia segundo a IUPAC diaminometanal, o nome correto para a alantona 2,5-dioxo-4-

imidazolidinildiaminometanal). A alantona um metablito gerado pela degradao do cido rico por uma enzima chamada rasburicase. No txica, e ligeiramente solvel em gua. uma das outras formas de os seres vivos excretarem nitrognio.

Fig. 52 Exame cido rico sendo realizado.

A segunda fase da reao dada em presena da peroxidase (PAP). 2 H2O2 + DCHBS* + 4-aminoantipirina cromgeno cereja + 4 H2O
* DCHBS = cido 3,5-dicloro-2-hidrxibenzenossulfnico

A intensidade da colorao diretamente proporcional concentrao de cido rico na amostra. Em crianas do sexo feminino valores aceitveis esto entre 0,5 e 5,0 mg/dL e entre 1,5 e 6,0 mg/dL em crianas do sexo masculino. Em adultos do sexo feminino valores aceitveis esto entre 1,5 e 6,0 mg/dL e entre 2,5 e 7,0 mg/dL em adultos do sexo masculino.

67 7.5. Fosfatase Alcalina (FAL/ALP) Fosfatase alcalina uma enzima presente em quase todos os tecidos do organismo, especialmente nas membranas nas clulas dos tbulos renais, ossos, placenta, intestino e fgado. Sua funo est relacionada com o transporte de lipdios no intestino e os processos de calcificao ssea. H coisas interessantes de se notar, como: a fosfatase alcalina ssea e a heptica partilham protenas estruturais codificadas por um mesmo gene e, a fosfatase intestinal, s se expressa em indivduos com grupos sanguneos O e B. Um kit de fosfatase alcalina formado por um tampo dietanolamina (pH = 9,9) a 0,3 mol L-1 e citrato de sdio a 10 mmol L-1, surfactante e ativador (reagente n 1), por um substrato, p-NFF (pnitrofenilfosfato) a 10 mmol L-1 e azida sdica a 15 mmol L-1 (reagente n 2), por um reagente de cor, composto de carbonato de sdio (CaCO3) a 150 mmol L-1 e hidrxido de sdio (NaOH) a 100 mmol L-1 (reagente n 3), e por um padro formado de timolfitalena a 0,4 mmol L-1 e solubilizante (reagente n 4). *Importante: os reagentes devem ser conservados em temperatura ambiente. Porm, o padro e o tampo devem ser colocados em geladeia (2 a 8 C) aps abertos. Todos so muito volteis e, portanto, devem estar bem fechados.

O preparo das matrizes para anlise no BIOPLUS 2000 feita conforme a tabela abaixo: Tabela 15: Exame Fosfatase Alcalina parte 1 Mtodo: Timolfitalena (Roy modificado) Reagente n 1 (tampo) Reagente n 2 (substrato) Reagente n 4 (padro) Tubo Branco 250 L 25 L Tubo Padro 25 L 25 L 25 L Tubo Teste 250 L 25 L -

Incubar em banho-maria, a 37C, por 2 minutos. Aps esse tempo, adicionar 1,0 mL do reagente n 3 em todos os tubos, conforme tabela abaixo. Tabela 16: Exame Fosfatase Alcalina parte 2 Mtodo: Timolfitalena (Roy modificado) Reagente n 3 (reagente de cor) Tubo Branco 1,0 mL Tubo Padro 1,0 mL Tubo Teste 1,0 mL

68 A fosfatase alcalina hidrolisa o p-nitrofenilfosfato, que incolor, produzindo fosfato e pnitrofenol, em pH = 9,0. A velocidade de apario do nion p-nitrofenolato (amarelo), a 405 nm, proporcional atividade enzimtica da amostra. A dietanolamina (DEA), alm de regular o pH da reao, intervm na mesma, atuando como receptor de fosfato liberado pela enzima. p-NFF + DEA p-nitrofenol + DEA-fosfato

Fig. 53 Exame fosfatase alcalina sendo realizado.

A determinao laboratorial da fosfatase alcalina se aplica muito bem para o diagnstico de doenas do fgado e dos ossos. Valores elevados podem ser vistos em casos de cirrose, obstruo biliar, tumor primrio do fgado ou ossos e doena de Paget (distrbios no metabolismo sseo). Valores muito baixos podem ser causados por hipertireoidismo, desnutrio e hipofosfatemia. Consideram-se valores de referncia de 75 a 390 U/L para crianas e adolescentes e 27 a 100 U/L para adultos.

69 7.6. Protenas Totais (PROT) As protenas do sangue so basicamente compostas por fraes, a albumina e as globulinas, alm de uma pequena poro de fibrinognio e outras protenas menores. A dosagem das protenas totais utilizada na avaliao do estado nutricional. Aumentos so encontrados em desidratao, doenas hepticas, neoplasias, hansenase e outras enfermidades. Valores baixos so vistos em gravidez, cirrose, neoplasias, queimaduras etc. O kit de protenas totais composto de um reagente n 1, biureto : hidrxido de sdio 0,2 mol L-1, tartarato de potssio e sdio a 32 mmol L-1, iodeto de potssio 6 mmol L-1 e sulfato de cobre 12 mmol L-1, e de um reagente n 2, o padro, de albumina a 4,0 g dL-1 e azida sdica 15,38 mmol L-1.

Tabela 17: Exame Protenas Totais Mtodo: Biureto-Colorimtrico Reagente n 1 (biureto) Reagente n 2 (padro) Amostra Tubo Branco 2,5 mL Tubo Padro 2,5 mL 50 L Tubo Teste 2,5 mL 50 L

Os tubos devem ser homogeneizados e levados ao banho (37C) por 10 minutos. A colorao ser estvel por 60 minutos. Na reao, as ligaes peptdicas das protenas ( - COONH - ) reagem com os ons Cu2+, formando um complexo violeta, que proporcional concentrao de protenas no meio. A presena do tartarato de sdio e potssio estabiliza o reagente (meio alcalino do biureto) e a concentrao adequada de iodeto de potssio previne a sua autorreduo. A dosagem isolada das protenas totais tem pouco valor clnico, pois a alterao em uma das fraes pode ser compensada por uma alterao em outra frao, como nas doenas crnicas, onde h diminuio da albumina e aumento da gamaglobulina. Valores normais de protenas no soro esto entre 6,4 e 8,3 g/dL.

7.7. Albumina (ALB) A albumina a protena mais abundante no soro. sintetizada no fgado, por clulas chamadas hepatcitos. Nveis elevados podem ocorrer na desidratao aguda. Nveis baixos podem ser vistos em casos de cirrose, infeces agudas, queimaduras e doenas inflamatrias intestinais. O kit de albumina contm o reagente n 1: verde de bromocresol a 01, mmol L-1, tampo

70 citrato a 20 mmol L-1 (pH = 3,6), preservativos e surfactantes e o reagente n 2: padro de albumina a 3,8 mg/dL e azida sdica 15,38 mmol L-1. Para o teste, procede-se desta forma:

Tabela 18: Exame Albumina Mtodo: Verde de Bromocresol (VBC) Reagente n 1 (VBC) Reagente n 2 (padro) Amostra Tubo Branco 2,5 mL Tubo Padro 2,5 mL 10 L Tubo Teste 2,5 mL 10 L

A dosagem utiliza o que se chama de erro proteico dos indicadores. Em presena da albumina, o verde de bromocresol forma um complexo corado, que exibe um espectro de absoro diferente do corante no seu estado livre, permitindo a dosagem. Valores normais de albumina no soro esto entre 3,5 a 5,5 g/dL e o de globulinas, de 1,4 a 3,2 g/dL. Abaixo, a figura 54 mostra a primeira etapa da realizao do exame de protenas totais, que feito ao mesmo tempo que o de albumina. De azul, as solues de protenas e, de amarelo, as solues de albumina.

Fig. 54 Reagentes protenas totais (azul) e albumina (amarelo).

Os testes com protenas totais e albumina no precisam ser aquecidos em banho. Aps adicionar a amostra deve-se homogeneizar os tubos e deixar sob repouso por 10 minutos. A colorao azul-arroxeada aparecer no teste de protenas e a colorao esverdeada aparecer no teste de albumina. Os tubos do branco permanecero com a mesma colorao incial.

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Fig. 55 Reaes de colorao protenas totais / albumina.

7.8. Creatinina (CR) A creatinina um produto da degradao da fosfocreatina (depsito de energia nos msculos esquelticos). Seu nome IUPAC 2-amino-1-metil-5-H-imidazol-4-ona.

Fig. 56 Frmula estrutural da creatinina. Fonte: http://dredisondacreatinina.com.br/mandato/pronunciamentos/saude/creatinina-2/ O kit de creatinina possui 3 reagentes. O reagente n 1, tampo, contm NaOH 110 mmol L-1 e CaCO3 a 75 mmol L-1. O reagente n 2, contm cido pcrico ( 2,4,6-trinitrofenol) a 60 mmol L-1, cuja estrutura mostrada na figura abaixo.

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Fig. 57 Estrutura qumica do cido pcrico. Fonte: http://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_p%C3%ADcrico

O reagente n 3, padro, contm creatinina a 3,0 mg/dL. A creatinina reage com o picrato alcalino em meio tamponado, formando um cromgeno, cuja absorbncia proporcional concentrao de creatinina na amostra. Valores aumentados de creatinina podem ocorrer em funo de doenas renais e valores mais baixos podem ocorrer em funo de perda de massa muscular.

Tabela 19: Exame Creatinina Mtodo: Cintico-Colorimtrico Reagente n 1 (tampo) Reagente n 2 (cido pcrico) Reagente n 3 (padro) Amostra Tubo Branco 800 L 200 L 100 L Tubo Teste 800 L 200 L 100 L

No exame creatinina no existe um tubo apenas para o padro. Nesse ensaio bioqumico ele colocado no mesmo tubo do branco. Aps adicionar os reagentes no tubo deve-se ajustar o BIOPLUS 2000 para o teste de creatinina. Apenas no momento da leitura a amostra ser agregada ao tubo de leitura.

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Fig. 74 Exame creatinina sendo realizado.

Em mulheres, valores considerados normais esto entre 0,5 e 1,0 mg/dL e, em homens, entre 0,7 e 1,2 mg/dL.

7.9. Mucoprotenas (MUC) As mucoprotenas so conhecidas como protenas de fase aguda e so um importante ndice da atividade reumtica. Sua concentrao aumenta ou diminui em resposta a processos inflamatrios. O kit de ensaio bioqumico das mucoprotenas composto da seguinte forma: reagente n 1: cido perclrico (HClO4) a 2,0 mol L-1; reagente n 2: cido fosfotngstico (H3PW12O40) a 15 mmol L-1; reagente n 3: carbonato de sdio (Na2CO3) a 1,8 mol L-1; reagente n 4: Reagente de Folin: tungstato de sdio (Na2WO4) a 300 mmol L-1, molibidato de sdio (Na2MoO4) a 100 mmol L-1, cido fosfrico (H3PO4) a 500 mmol L-1, cido clordrico (HCl) a 1,0 mol L-1 e sulfato de ltio (Li2SO4) a 1,2 mol L-1; reagente n 5: padro de tirosina a 40 mg dL-1 (5 mg dL-1 de mucoprotenas). A tirosina um dos componentes das protenas nos seres vivos.

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Fig. 59 Frmula estrutural da tirosina. Fonte: http://www.tradegopt.com/product-pharmaceutical/l-tyrosine-789285.html

Para a anlise das mucoprotenas, quando necessrio, deve-se preparar o reagente n 3, chamado de tambm de reagente carbonato ou CAR. Para prepar-lo deve-se colocar 50 mL do reagente e completar para 250 mL de soluo com gua deionizada (soluo estvel por 6 meses). O teste das mucoprotenas divido em trs partes: desproteinizao, precipitao e colorimetria.

7.9.1. Desproteinizao o processo pelo qual as protenas sero isoladas como analito de interesse. Para esse passo deve-se proceder da seguinte maneira: Tabela 20: Exame Mucoprotenas desproteinizao Mtodo: Colorimtrico (Winzler-modificado) NaCl 0,9% Reagente n 1 (HClO4) Amostra Tubo Teste 3,0 mL 1,5 mL 0,5 mL

Perfazendo 5,0 mL em cada tubo de anlise, agitar manualmente ou em vrtex por 2 minutos at observar a formao de uma densa espuma. Deixa filtrar em papel de filtro qualitativo, at que todo o filtrado seja obtido. O mesmo deve ser lmpido.

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Fig. 60 Etapa de desproteinizao das mucoprotenas.

7.9.2. Precipitao As protenas sricas so precipitadas pelo HClO4, permanecendo as mucoprotenas no sobrenadante. A precipitao das mucoprotenas (filtrado) acontece na presena de H3PW12O40, posteriormente dissolvidas e dosadas em nveis de tirosina pelo Reagente de Folin. Tabela 21: Exame Mucoprotenas precipitao Mtodo: Colorimtrico (Winzler-modificado) Filtrado Reagente n 2 (H3PW12O40) Tubo Teste 2,0 mL 0,8 mL

Feito o segundo passo, conforme a tabela acima, deve-se agitar os tubos de teste e deix-los sob repouso por 10 minutos. Depois de passado esse tempo, centrifugar por 5 minutos. Desprezar o sobrenadante e deixa os tubos de cabea para baixo sobre papel absorvente. Deixar repousar por mais 10 minutos para retirar o excesso de lquido.

76 7.9.3. Colorimetria a ltima etapa do procedimento. Devem-se seguir os passos da tabela, conforme mostrado abaixo: Tabela 22: Exame Mucoprotenas colorimetria Mtodo: Colorimtrico (Winzler-modificado) Reagente n 5 (Padro) Reagente n 3 (Na2CO3) Tubo Branco 2,5 mL Tubo Padro 2,5 mL 2,5 mL Tubo Teste 2,5 mL

Agitar fortemente at que o precipitado se dissolva. Aps isso, adicionar o Reagente de Folin (FOL) em todos os tubos. Reagente n 4 (Reagente de Folin) 100 L 100 L 100 L

Agitar fortemente e incubar em banho-maria, 37C, por 15 minutos.

Realizada a ltima etapa, ser vista uma colorao azul-arroxeada, estvel por 120 minutos, cuja intensidade proporcional concentrao de tirosina na amostra.

Fig. 61 Teste de mucoprotenas.

77 As mucoprotenas so uma frao heterognea de glicoprotenas solveis que podem ser separadas por eletroforese em subfraes, conhecidas como protenas da fase aguda. Existem aproximadamente 30 dessas fraes. Durante o processo inflamatrio alguns eventos costumam acontecer e, muitas vezes, servem como elementos ou sinais de alerta.

Segundo SZJUBOK (2013), esses eventos, geralmente descritos como eventos da fase aguda, podem acompanhar tantos os processos inflamatrios agudos como os crnicos. Dentre eles podem ser citados: febre, leucocitose, protelise muscular, alteraes endcrinas etc. Valores aumentados nos resultados das mucoprotenas podem ser observados em casos de tuberculose (TBC), doenas do colgeno, diabetes mellitus, gota e neoplasias.

Valores muito baixos so observados em nefroses e insuficincias hepticas e hipofisrias. Os valores de referncia em funo de tirosina so 1,9 a 4,9 mg/dL. Para converter o valor de tirosina em mucopotena, multiplica-se o mesmo por 23,8. Assim, o valor de referncia passa a ser de 45,22 a 116,62, que pode ser simplificado para 45 a 117 mg/dL.

7.10. Transaminase Glutmica Oxalactica (TGO) A enzima AST (aspartato aminotransferase), tambm conhecida por TGO, encontrada em diversos rgos e tecidos, como o fgado e corao, e em clulas, como os eritrcitos. Valores altos de TGO podem ser decorrentes de hepatites (virais ou txicas), hepatites por drogas, mononucleose, cirrose e pancreatite. O kit de TGO possui quatro reagentes: o reagente n 1 um substrato, formado por: LDH (lactato desidrogenase) + MDH (malato desidrogenase), cido L-asprtico a 100 mmol L-1, azida sdica a 15,4 mmol L-1, -cetoglutarato a 2,0 mmol L-1, tampo tris pH = 7,8 e estabilizante; o reagente n 2 uma coenzima, formada por NADH, azida sdica e estabilizantes. Para o ensaio procede-se da seguinte forma:

78 No h tubos de branco e padro neste exame. Assim, no mesmo tubo, deve-se misturar 9 partes do reagente n 1 com 1 parte do reagente n 2, ou seja, 900 L com 100 L.

Tabela 23: Exame TGO Mtodo: Cintico UV Reagente n 1 (substrato) Reagente n 2 (coenzima) Tubo Branco Tubo Padro Tubo Teste 900 L 100 L

Incubar em banho-maria, 37C, por 1 minuto. Adicionar a amostra na hora de fazer leitura no fotmetro. Amostra 100 L

A primeira fase da reao ocorre em presena da TGO. cido L-asprtico + -cetoglutarato Oxalacetato + NADH+ + L-glutamato

A segunda fase da reao catalisada pela enzima MDH (malato desidrogenase): Oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+ A TGO catalisa a transferncia de grupos amina do aspartato para o -cetoglutarato levando formao de glutamato e oxalacetato que, por sua vez, em presena de MDH, reage com NADH, reduzindo-se a malato e o NADH oxida-se a NAD+. A velocidade da oxidao proporcional atividade da TGO na amostra. Valores desejados para TGO variam de 10 a 37 U/L para mulheres e 11 a 39 U/L para homens. *Obs.: como os mtodos das Transaminases so cinticos o contedo nos tubos fica incolor.

7.11. Transaminase Glutmica Pirvica (TGP) A enzima ALT (alanina aminotransferase), tambm conhecida como TGP encontrada abundantemente no fgado, moderadamente nos rins e em quantidades pequenas no corao. O aumento da atividade da TGP reflete alteraes nos tecidos. A maior atividade desta enzima acontece no tecido heptico, estando aumentada em virtude de hepatites (virais ou txicas). O kit de TGP composto por dois reagentes: o reagente n 1 um substrato, formado por

79 tampo Hepes (pH = 7,8), cido -cetoglutrio a 2,0 mmol L-1, LDH > 2300 U/L, azida sdica (NaN3) a 15,4 mmol L-1 e L-alanina a 100 mmol L-1 e estabilizante. Hepes o nome dado ao tampo bioqumico formado por cido 2-[4-(2-hidrxietil)piperazin-1-il]-etanossulfnico.

Fig. 62 Frmula qumica do Hepes. Fonte: http://en.wikipedia.org/wiki/File:HEPES.png O reagente n 2 uma coenzima, contendo NADH a 1,13 mmol L-1, azida sdica a 14,6 mmol L-1 e estabilizante. O ensaio de determinao da TGP semelhante ao da TGO, mudando apenas na quantidade de reagentes utilizada. Assim, no h tubos de branco e padro neste exame. E, misturar 8 partes do reagente n 1 com 2 partes do reagente n 2, ou seja, 900 L com 100 L.

Tabela 24: Exame TGP Mtodo: Cintico UV Reagente n 1 (substrato) Reagente n 2 (coenzima) Tubo Branco Tubo Padro Tubo Teste 800 L 200 L

Incubar em banho-maria, 37C, por 1 minuto. Adicionar a amostra na hora de fazer leitura no fotmetro. Amostra 100 L

A primeira etapa da reao catalisada pela TGP: L-alanina + cido -cetoglutrico Piruvato + L-glutamato

A segunda parte da reao ocorre em presena da LDH: Piruvato + NADH + H+ L-lactato + NAD+

80 A TGP catalisa a transferncia de grupos amina da alanina para o -cetoglutarato levando formao de glutamato e piruvato que, por sua vez, em presena de LDH, reage com NADH, reduzindo-se a lactato e o NADH oxida-se a NAD+. A velocidade da oxidao proporcional atividade da TGP na amostra. Valores desejados para TGP variam de 10 a 37 U/L para mulheres e 11 a 45 U/L para homens.

Todo o resduo gerado das anlises feitas no BIOPLUS 2000 vo para frascos com um funil, conectados a bombas peristlticas. Aps as anlises so descartados adequadamente.

Fig. 63 Descarte de bioqumica.

As ponteiras e pipetas de vidro usadas na anlise so desprezadas em recipientes separados, contendo gua deionizada e hipoclorito de sdio a 1%.

Quando as dosagens realizadas no BIOPLUS 2000 terminam, deve-se fazer com que o aparelho aspire uma soluo de limpeza (uma espcie de sabo), que ir limpar as vias de succo, impedindo entupimento. O sabo feito utilizando-se 10 gotas da soluo de limpeza com 10 mL de H2O deionizada. * deve ficar claro que os reagentes (concentraes, quantidades e marcas) variam entre os laboratrios, bem como os mtodos utilizados.

81 8. Imunologia (Sorologia) a parte das anlises clnicas que visa a compreender os mecanismos de defesa do corpo (sistema imunolgico). Os rgos ligados ao sistema imunolgico so: amgdalas (ou tonsilas), linfonodos, timo, medula ssea e bao. O corpo humano tem trs barreiras de defesa: a primeira formada pela pele, mucosas, ceras e clios. A segunda formada por clulas e substncias qumicas que no diferenciam os invasores. A terceira formada por clulas especficas para cada tipo de invasor. O funcionamento do sistema de defesa baseia-se em especificidade e memria. Segundo LOPES & ROSSO (2008), a especificidade refere-se capacidade do sistema de reconhecer e combater certos microrganismos ou substncias estranhas ao corpo. Esse ato de defesa estimulado pelos antgenos (protena ou polissacardeo) que podem estar em vrus, bactrias e outras substncias. Os antgenos induzem que as clulas brancas, como os linfcitos, a reconheam e produzam protenas especficas chamadas anticorpos, para combat-los. Na rea clnica chamamos os anticorpos de Imunoglobulinas (Ig). Cada anticorpo especfico para um antgeno. A memria refere-se capacidade do sistema de reconhecer novamente um mesmo antgeno e produzir os mesmos anticorpos especficos. Basicamente o sistema imunolgico formado por uma hierarquia de clulas brancas. As clulas que podemos denominar principais so os fagcitos e os linfcitos. Fagcitos: so as clulas brancas com funo de fagocitar (digerir) os organismos estanhos ao corpo. Essas clulas so: moncitos, mastcitos, basfilos e eosinfilos. Linfcitos: so um tipo de leuccito, produzidos na medula ssea vermelha. Podem ser do tipo T ou B. Os linfcitos T ora atuam estimulando os linfcitos B a produzirem anticorpos, ora atuam como prprios destruidores de corpos estranhos no organismo. Os linfcitos T podem ser de vrios tipos, sendo que os principais so: a) CD8 (T-citotxicos ou linfcitos matadores): unem-se a clulas infectadas para destru-las. Eles no tm atividade fagoctica, por isso, atacam as clulas do corpo que foram infectadas e no o invasor. So capazes de reconhecer clulas cancergenas e destru-las antes de formarem um tumor maligno. b) CD4 (T-auxiliares): ativam os linfcitos T e estimulam os linfcitos B a produzirem imunoglobulinas.

Durante o estgio realizou-se alguns ensaios imunolgicos, os quais detalham-se a seguir.

82 8.1. Vrus da Imunodeficincia Humana (HIV-1/2) O HIV (vrus da imunodeficincia humana) o retrovrus causador da AIDS, frequentemente transmitido por contato sexual, transfuso de sangue, durante o parto, e at mesmo na lactao. Segundo CANINI et.al (2004), o HIV causa no organismo disfuno imunolgica crnica e progressiva devido ao declnio dos nveis de linfcitos CD4, sendo que quanto mais baixo for o ndice desses, maior o risco do indivduo desenvolver AIDS. como se o vrus ficasse latente. Do ponto de vista de SARAIVA et. al. (2010), o vrus impede que o sistema imunolgico proteja o organismo contra agentes agressores, como outros vrus, bactrias, protozorios, clulas cancergenas etc. O kit de HIV contm placas de teste (popularmente chamadas de sabonete) e o reagente chamado diluente. Deve-se escrever o nmero do paciente na placa de teste e, em seguida proceder anlise. Tabela 25: Exame HIV-1/2 Mtodo: Imunocromatogrfico Amostra Reagente (Diluente) 10 L 04 gotas

O sangue colhido deve ser o mesmo utilizado na bioqumica. Deve-se pipetar 10 L de soro e despejar na cmara de teste. Depois, adicionar 04 gotas do diluente na mesma cmara. Aps alguns segundos, na coluna cromatogrfica a fase estacionria (soro diludo) e a fase de arraste (diluente) iro determinar o resultado dependendo de onde a colorao da linha roxa parar. Porm, importante que a fase de arraste cruze a linha vermelha que, nos ensaios cromatogrficos, chamamos linha de chegada. Linha C: HIV Linha C + Linha 1: HIV+ (tipo 1) Linha C + Linha 2: HIV+ (tipo 2) Linha C + Linha 1 + Linha 2: HIV+ (tipos 1 e 2)

Na figura abaixo, mostra-se o resultado grfico do resultado. Caso a linha C no aparea, devese repetir o teste.

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Fig. 64 Esquema da visualizao dos resultados HIV-1/2. Fonte: bula Hexagon-HIV

Fig. 65 Teste HIV-1/2 sendo iniciado.

8.2. VDRL O teste de VDRL, tambm solicitado pelos mdicos como Sorologia para LUES, utilizado no diagnstico da sfilis, causada pela bactria Treponema pallidum. De acordo com os dizeres de SANTOS et. al. (2009), pode ocorrer contaminao por contato com leses mucocutneas ricas em treponemas, transfuso de sangue, via placentria e relao sexual. Um teste negativo quase sempre significa que a pessoa nunca teve contato com a sfilis, ou que teve e o tratamento foi eficaz ao ponto de torn-lo negativo. Entretanto, num estado avanado da sfilis e numa

84 pessoa a quem nunca tenha sido diagnosticada a doena e recebido tratamento adequado, o VDRL poder dar resultado negativo. Isto chamado de resultado falso negativo e acontece devido ao elevado nmero de anticorpos produzidos pelo organismo durante o estado latente ou tercirio da doena. Estando o mdico na suspeita de um paciente encontrar-se nesta fase crucial a realizao de um exame comprovativo, por norma o FTA-ABS. Por outro lado, o VDRL s vezes positivo na ausncia da sfilis. Chama-se de resultado falso positivo. Como exemplo, h: mononucleose infecciosa, lpus, hepatite A, hansenase, malria e,

ocasionalmente, at na gravidez podem ser encontrados pequenos ttulos que no significam a presena de sfilis.

O kit de teste apresenta apenas dois reagentes. O reagente n 1 um antgeno da sfilis. Ele deve ficar na geladeira, entre 2 e 8C; deve ser homogeneizado bem antes de usar. composto de cardiolipina a 0,44 mol L-1, lecitina 3,12 a mol L-1, colesterol 23,3 a mol L-1 e tampo (pH = 6,0) fosfato com cloreto de colina e EDTA a 10 mmol L-1. A cardiolipina um lipdio da membrana mitocondrial da bactria da sfilis. Seu nome IUPAC 1,3-bis-3fosfatidilglicerol.

Fig. 66 Cadeia orgnica de cardiolipina. Fonte: http://es.wikipedia.org/wiki/Cardiolipina.

A lecitina um tipo de gordura essencial em todos os tecidos orgnicos. Seu nome IUPAC 1hexadecil-2-oleilfosfatidil-2-hidrxieiltrimeillamnio (ou, mais facilmente, 1-palmitil-2oleilfosfatidilcolina). uma mistura de glicolipdios, triglicrides e fosofolipdios. Essa substncia capaz de reduzir a taxa de colesterol do sangue, reduzindo o risco sade causado por vrias doenas provenientes do colesterol alto, principalmente LDL e VLDL.

85 O reagente n 2 o controle positivo e o reagente n 3 o controle negativo.

Fig. 68 Reagentes VDRL. O reagente de tampa vermelha o controle positivo, o reagente de tampa branca o antgeno e o reagente de tampa preta o controle negativo. Fig. 67 Cadeia qumica da lecitina. Fonte: http://engenhariadealimentosufc.blogspot.com.br/2009/11/o-que-e-lecitina.html Para iniciar o teste deve-se pipetar 50L de soro e colocar em uma das escavaes da Placa de Kline de vidro (mostrada abaixo). Junto do soro, adicionar 20 L do reagente. Homogeneizar de maneira circular sobre a bancada durante 5 minutos.

Tabela 26: Exame VDRL Mtodo: Floculao Amostra 50 L

Reagente n 1 (antgeno) 20 L

Fig. 69 Placa de Kline para VDRL. Fonte: http://www.hexasystens.com.br/produto/placade-kline-moldada-em-vidro-12-pocos-gk-12-glasscyto.aspx Aps a homogeneizao, observar a placa ao microscpio na objetiva amarela (10x/0.25). Se forem observados grumos, o resultado ser positivo.

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Fig. 70 Observao da placa ao microscpio. Fonte: Bula reagente VDRL

Ao microscpio sero observados resultados semelhantes ao da figura acima, onde o primeiro SNR (soro no-reativo), o segundo e o terceito so SR (soro reativo). Quando o resultado positivo deve-se efetuar a diluio da amostra nos outros campos da placa (utilizar soluo salina: NaCl 0,9%). Diluio

Pegando uma placa de Kline limpa, escolher uma das 12 escavaes para ser a primeira (podese marcar com um pincel a borda da primeira para evitar confuses). Depois, seguir os passos abaixo: 1 escavao: 50 L de soro + 50 L de salina 2 escavao: 50 L da 1 escavao + 50 L de salina 3 escavao: 50 L da 2 escavao + 50 L de salina e assim por diante...

Aps a diluio seriada, adicionar em 20 L do reagente em cada escavao. Agitar novamente por 5 minutos. Observar a microscpio na mesma objetiva. O resultado deve ser dado em funo da ltima diluio, assim:

Tabela 27: Diluio VDRL positivo N da escavao Diluio 1 2 3 4 5 6

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64

87 8.3. Antiestreptolisina O (ASO/ASLO/AEO) O teste de ASO indicado para diagnosticar infeces causadas por bactrias do tipo estreptococo, que provoca febres reumticas e glomerulonefrite aguda. A reao ocorrida consiste em aglutinar partculas de ltex revestidas com anticorpos ASO presente nessa bactria. O kit de diagnstico contm o reagente n 1: partculas de ltex em suspenso, sensibilizadas com antiestreptolisina O; reagente n 2: controle positivo (soluo aglutinante de ltex) e reagente n 3: controle negativo (soluo salina de NaCl a 0,9%).

Tabela 28: Exame ASO Mtodo: Ltex Amostra 20 L

Reagente n 1 (partculas) 20 L

Fig. 71 Reagentes ASO.

Na realizao do teste, deve-se colocar 20 L de soro em um dos crculos da placa e, em seguida, adicionar 20 L do reagente. Vale saber que apenas o VDRL feito na placa de Kline. Homogeneizar com um palito de plstico (acompanha o kit). Logo em seguida, homogeneizar a placa nas mos de maneira thundeler-burgger, semelhante ao do homogeneizador de sangue. Observar se houve aglutinao.

Se no houver, o resultado transcrito na planilha como < 200 UI/mL. Em caso de aglutinao, deve-se proceder diluio. Diluio

Pegando uma placa de teste limpa, escolher um dos poos para ser o primeiro. Semelhante ao procedimento para VDRL, deve-se efetuar a diluio seriada. 1 poo: 20 L de soro + 20 L de salina 2 poo: 20 L do 1 poo+ 20 L de salina 3 poo: 20 L do 2 poo+ 20 L de salina e assim por diante...

88 Aps a diluio seriada, adicionar em 20 L do reagente em cada escavao. Homogeneizar da mesma forma. O resultado ser dado em funo do nmero de diluies.

Tabela 29: Diluio ASO N do poo 1 2 3 4 5 Amostra Sem diluio 1:2 1:4 1:8 1:16 Concentrao (Ul/mL) 200 400 800 1600 3200

8.4. Protena C Reativa (PCR) uma protena plasmtica produzida no fgado. Sua concentrao muito baixa em indivduos sadios, elevando-se bastante em presena de processos inflamatrios ou infeces, sendo um indicador extremamente sensvel das mesmas, muito mais que a VHS. O princpio da reao tambm ocorre em funo da aglutinao de partculas de ltex com -globulinas anti-PCR.

O kit de determinao da PCR composto por: reagente n 1: partculas de ltex sensibilizadas em suspenso; reagente n 2: controle positivo de soro > 6 mg L-1 e azida sdica a 15,38 mmol L-1; reagente n 3: controle negativo de soro < 6 mg L-1 e azida sdica a 15,38 mmol L-1.

Tabela 30: Exame PCR Mtodo: Ltex Amostra Reagente n 1 20 L 20 L

Fig. 72 Reagentes PCR.

89 Assim como na realizao do ltex-ASO, na realizao desse teste, deve-se colocar 20 L de soro em um dos crculos da placa e, em seguida, adicionar 20 L do reagente. Homogeneizar com um palito de plstico (acompanha o kit). Logo em seguida, homogeneizar a placa nas mos de maneira thundeler-burgger, semelhante ao do homogeneizador de sangue. Observar se houve aglutinao.

Se no houver, o resultado transcrito na planilha como < 6 mg/L. Em caso de aglutinao, deve-se proceder diluio. Diluio

Pegando uma placa de teste limpa, escolher um dos poos para ser o primeiro. Semelhante ao procedimento para ASO, deve-se efetuar a diluio seriada. 1 poo: 20 L de soro + 20 L de salina 2 poo: 20 L do 1 poo+ 20 L de salina 3 poo: 20 L do 2 poo+ 20 L de salina e assim por diante...

Aps a diluio seriada, adicionar em 20 L do reagente em cada escavao. Homogeneizar da mesma forma. O resultado ser dado em funo do nmero de diluies.

Tabela 31: Diluio PCR N do poo 1 2 3 4 5 Amostra Sem diluio 1:2 1:4 1:8 1:16 Concentrao (mg/L) 6 12 24 48 98

8.5. Fator Reumatide (FR) O fator reumatoide positivo no significa reumatismo nem artrite reumatoide, mas, sim, anticorpos contra anticorpos. Como se sabe, na imunologia diz-se que anticorpos so protenas formadas por estmulo de corpos estranhos ao organismo, porm, alguns est udiosos provaram

90 que so possveis algumas substncias produzidas pelo corpo tambm atuarem como anticorpos contra outras substncias do mesmo, ou seja, seria possvel o corpo produzir anticorpos para anticorpos. Alguns cientistas, no concordando com a ideia, mas no podendo negar a existncia de tais substncias, optaram por cham-las de fator, para que fossem diferenciadas dos verdadeiros anticorpos. Com o passar do tempo provou-se que essas substncias tinham a mesma composio qumica dos anticorpos sendo, portando, imunoglobulinas. O nome fator permaneceu, pois a sociedade acadmica no quis reconhecer essas substncias realmente como anticorpos e, o nome reumatoide, foi dado pelo fato de a pessoa que descobriu essas novas substncias ter artrite reumatoide. Atualmente sabe-se que o fator reumatoide so anticorpos que atuam contra as imunoglobulinas do corpo. Essas substncias ainda esto em estudo, mas uma coisa certa: fator reumatoide positivo no indica que uma pessoa est doente, muito menos com reumatismo. O nico que pode tirar concluses sobre o fator reumatoide o mdico reumatologista.

O kit de fator reumatoide, cuja reao tambm se baseia na aglutinao de partculas de ltex, contm: reagente n 1: partculas de ltex em suspenso sensibilizadas com -globulina humana (IgG); reagente n 2: controle positivo, soluo aglutinante de ltex e reagente n 3: controle negativo, soluo salina de NaCl a 0,85%.

Assim como na realizao do ltex-ASO e ltex-PCR, na realizao desse teste, deve-se colocar 20 L de soro em um dos crculos da placa e, em seguida, adicionar 20 L do reagente. Homogeneizar com um palito de plstico (acompanha o kit). Logo em seguida, homogeneizar a placa nas mos de maneira thundeler-burgger, semelhante ao do homogeneizador de sangue. Observar se houve aglutinao.

Tabela 32: Exame FR Mtodo: Ltex Amostra Reagente n 1 20 L 20 L

Se no houver, o resultado transcrito na planilha como < 12 UI/mL. Em caso de aglutinao, deve-se proceder diluio.

91 Diluio

Pegando uma placa de teste limpa, escolher um dos poos para ser o primeiro. Semelhante ao procedimento para ASO e PCR, deve-se efetuar a diluio seriada. 1 poo: 20 L de soro + 20 L de salina 2 poo: 20 L do 1 poo+ 20 L de salina 3 poo: 20 L do 2 poo+ 20 L de salina e assim por diante...

Aps a diluio seriada, adicionar em 20 L do reagente em cada escavao. Homogeneizar da mesma forma. O resultado ser dado em funo do nmero de diluies.

Tabela 33: Diluio FR N do poo 1 2 3 4 5 Amostra Sem diluio 1:2 1:4 1:8 1:16 Concentrao (Ul/mL) 12 24 48 96 192

9. Parasitologia A parasitologia ramo das anlises clnicas que se dedica ao estudo dos parasitas e das doenas parasitrias, seus mtodos e diagnsticos. Parasitas so organismos que vivem que vivem em um hospedeiro, sobrevivendo s suas custas. H trs tipos de parasitas e dois tipos de hospedeiros.

Os parasitas podem ser: Comensais: no causam efeitos perigosos bvios. Ex.: piolho. Patognicos: causam doenas severas e a morte do hospedeiro se no forem combatidos. Ex.: ascaridase e tenase.

92 Oportunistas: no causam doenas em hospedeiros sadios, mas podem afetar seriamente os imunodeprimidos. Os hospedeiros podem ser: Definitivos: organismo no qual a vida sexual madura ou a forma adulta do parasita encontrada. Intermedirios: organismo necessrio para que o parasita complete seu ciclo de vida.

Os parasitas patognicos dividem-se em protozorios e helmintos (platelmintos e nematelmintos). So exemplos de protozorios: tripanossomo, ameba, girdia e paramcio. So exemplos de helmintos platelmintos: esquistossomo e tncia. So exemplos de helmintos nematelmintos: ancilstomo e lombriga.

O paciente, conforme dito no item 5.2.3, subitens 5.2.3.1 e 5.2.3.2, as fezes, previamente colhidas, so acondicionadas em potes especficos e entregues no dia do exame, no laboratrio. O tcnico deve escrever as iniciais do nome e o nmero de entrada do paciente na tampa do frasco. Em seguida levam-se as fezes ao setor de parasitologia.

9.1. Exame Parasitolgico de Fezes (EPF) 9.1.1. Mtodo Hoffman-Pons-Janes (HPJ) o mtodo mais comum utilizado para a realizao do EPF. Chamado simplesmente de Mtodo HPJ, consiste na sedimentao espontnea resultante da simples mistura das fezes com gua. s fezes, acrescentasse um pouco de gua para que sejam maceradas com um basto de vidro. Em seguida, deve-se virar o recipiente no clice utilizando uma peneira apropriada para que no passem resduos slidos. O mtodo pode ser realizado tanto para fezes com MIF quanto sem o conservante. Deve-se descartar a peneira em local adequado de acordo com as normas de segurana e saneamento.

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Fig. 73 Clices com material em processo de sedimentao.

Os clices devem ficar em repouso 60 minutos, para que os sedimentos se depositem. Aps esse tempo, desprezar todo o sobrenadante na pia de expurgo adequada. Encher o clice com gua at a metade e esperar mais 60 minutos.

Fig. 74 Sedimentos fecais antes da anlise.

94 Ao iniciar a anlise, pegar uma lmina limpa e sem arranhes e, com um canudinho de plstico, colher uma poro do sedimento. Espalh-lo sobre a lmina. Observar ao microscpio na objetiva amarela (10x/0.25). O mtodo HPJ permite a visualizao de ovos, cistos e larvas nas lminas das amostras analisadas.

9.1.2. Pesquisa de Controle de Esquistossomose (PCE) Mtodo Kato-Katz (KK) De acordo publicao da ASSOCIAO MDICA DE JOO MONLEVADE (2012), o KatoKatz mais especfico, servindo para a deteco de ovos do helminto Schistosoma mansoni, permitindo a avaliao do nmero de ovos por gramas de fezes. O exame KK faz parte de uma subdiviso laboratorial que responde um indicador chamado PCE, o qual deve notificar e quantificar casos de paciente com schistose. Caso o resultado d positivo, o paciente ser acompanhado em tratamento e medicado com o anti-helmntico chamado Praziquantel, ou simplesmente, PZQ (2-cicloexilcarbonil-1,2,3,6,7,11b-hexahidro-4H-pirazino [2, 1-a]-

isoquinolin-4-ona ).

Fig. 75 Estrutura qumica do frmaco PZQ. Fonte: http://en.wikipedia.org/wiki/Praziquantel

O frmaco provoca uma alterao no fluxo de ons de clcio nas clulas do parasita, diminuindo a capacidade do verme se contrair e relaxar. Desta forma, ele ser expelido pelo organismo, pois no consegue mais se fixar.

Algumas das visualizaes ao microscpio feita no EPF so mostradas abaixo:

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Fig. 76 Ovo de Ascaris lumbricoides. Fonte: atlas de parasitologia

Fig. 77 Ovo de Schistossoma mansoni. Fonte: atlas de parasitologia

Fig. 78 Ovo de Entamoeba coli. Fonte: http://www.jornallivre.com.br/179240/tudo-sobrea-entamoeba-coli.html

96 10. Urinlise A urinlise a parte que visa anlise da urina, desde aspectos fsicos (como cor) at aspectos bioqumicos (em busca de substncias estranhas ao meio). Vrios so os exames realizados nessa rea, mas, durante o estgio, fez-se anlises de urina de rotina. Os exames de urinlise so de grande importncia na deteco de problemas renais. Na primeira etapa analisam-se as caractersticas gerais da urina (cor, pH, densidade, cheiro...). Na segunda etapa faz-se uma pesquisa de elementos anormais. Isso constitui uma pesquisa bioqumica, usando as tiras reagentes. A terceira a sedimentoscopia, que corresponde anlise microscpica da urina. A urina composta de 96% de gua e 4% de diversas outras substncias. Pode-se dizer que a urina uma soluo salina diversificada. Assim como a uria, muitas outras substncias orgnicas podem ser encontradas na urina, como a creatinina, a bilirrubina e o cido rico. *Quando encontra-se um elemento do sangue na urina, este nomeado com o sufixo ria. Ex.: albumina na urina = albuminria / citrato na urina = citratria / clcio na urina = calciria / leuccito na urina = leucocitria etc.

10.1. Anlise Fsico-Qumica A anlise fsico-qumica bem simples, e consiste na observao superficial das caractersticas da urina, sendo que uma boa parte so mtodos qualitativos. Odor: a urina tem um cheiro caracterstico denominado Sui Generis (SG). Densidade: dada em mg/dL, ir depender do nmero de partculas nela contidas. Substncias presentes nas bebidas e nos alimentos, quando encontradas em excesso na urina podem caracterizar glicosria ou proteinria, fazendo a densidade superar 1,03 mg/dL, o que no considerado bom. Aspecto: observa-se a urina a olho nu. O aspecto est relacionado turbidez. Quando mais turva for a urina mais substncias dissolvidas h. Essa caracterstica est atrelada cor.

97 pH: a media do pH feita utilizando a tira reagente . Nas reas da fita h diversas substncias que iro reagir com a urina. um mtodo colorimtrico e comparativo. Depois de alguns segundos basta comparar a cor da tira com a cor da legenda na embalagem, anotando o resultado observado. Cor: A urina pode apresentar coloraes diversas. Isso ir depender de fatores como ingesto de gua, bebidas, alimentos e outras substncias. A cor depende do contedo dos pigmentos. A cor tambm est ligada densidade. Pode classificar a urina, quanto colorao, da seguinte forma: Amarelo mbar Amarelo avermelhado Amarelo claro Amarelo escuro Amarelo esverdeado Amarelo ouro Amarelo plido Pardo avermelhado Preto pardacento Vermelho amarelado Vermelho pardacento Amarelo azulado

*Em caso de uso de determinados medicamentos o paciente pode apresentar urina com colorao diferente, como verde, azul, alaranjada, rosa e at mesmo, preta.

Fig. 79 Tubos cnicos com urina.

Quando a prtica de urinlise se inicia, os tubos cnicos graduados devem estar identificados com o nmero de entrada do paciente. Feito isso, so realizadas as pesquisas fsico-qumicas.

98 10.2. Anlise Bioqumica A bioqumica uma rea muito importante dentro das anlises clnicas, pois atravs dos mtodos por ela disponveis que se determina a maior parte dos analitos de interesse. Alguns dos elementos que podem ser determinados nas anlises bioqumicas de urina so: leuccitos, sangue, bilirrubina, urobilinognio, protenas, cetonas e Glicose, os quais so identificados por meio das tiras reagentes. 10.2.1. Tiras Reagentes para Urinlise As tiras so fornecidas em frascos plsticos com um saquinho de slica, para prevenir que sejam danificas por qualquer tipo de umidade do ar. Cada tira contm 10 reas reagentes.

Fig. 80 Tiras reagentes de urinlise. Fonte: http://www.infoescola.com/exames-medicos/urinalise/

Para o teste, deve-se imergir a tira na amostra e esperar pelo menos 5 segundos. Retirar e comparar as coloraes com a legenda no rtulo da embalagem.

Fig. 81 Teste com tira reagente.

99 As reas de leitura possuem certa sensibilidade, ou seja, certas substncias ou elementos da urina s podem ser detectados se sua concentrao existir dentro dos limites que a tira consegue reagir com os mesmos. Tabela 34: Legenda das tiras reagentes rea Reagente Sensibilidade Glicose 2,8 6,5 mmol L-1 Bilirrubina 3,3 8,6 mmol L-1 Cetona 0,5 1,0 mmol L-1 Sangue 150 450 UG L-1 Protena 0,15 0,30 g L-1 Nitrito 13 22 mol L-1 Leuccitos 5,0 15 clulas/mL pH 5,0 8,5 Urobilinognio 3,3 1,6 mmol L-1 Densidade 1000 1030 mg dL-1 Os resultados so escritos como AUSENTE ou PRESENTE (+, ++, +++, ++++), com exceo do nitrito, que pode ser apenas AUSENTE ou PRESENTE. Caso haja cristais, devem ser especificados.

10.3. Sedimentoscopia (EAS Elementos Anormais do Sedimento) A pesquisa de sedimentos feita no microscpio binocular. Para isso, deve-se centrifugar a urina por 10 minutos. Alguns dos elementos mais comumente analisados no laboratrio so: Leuccitos, Clulas Epiteliais, Hemcias, Cilindros, Cristais, Muco e Flora Bacteriana. Devese pipetar 50 L da amostra, colocar sobre a lmina e ajustar as objetivas do microscpio. Deve-se observar a lmina em todas as objetivas (observar sempre 10 campos). Leuccitos: Geralmente degenerados, indicando infeces, mas nem sempre sua presena indica doena. Indica-se o resultado observado como X/CAMPO, onde X o nmero de leuccitos por campo. Ainda no resultado, deve-se escrever se forem AUSENTES, RAROS ou INCONTVEIS. Clulas Epiteliais: algumas vezes os epitlios da uretra, vagina, ureteres e bexiga podem sofrer uma descamao. Isso pode significar uma infeco. Indica-se o resultado observado da mesma maneira que os leuccitos;

100 Hemcias: A presena de hemcias na urina classificada como macroscpica quando h quantidades suficientes para alterar a colorao do lquido da urina, tornando-a mais escura e com tons leves de vermelho. O resultado tambm dado em funo do nmero de hemcias por campo; Cilindros Urinrios: formam-se exclusivamente nos rins. Sua presena em urinas significa infeco, j que em urinas normais no so encontrados. So de natureza albuminosa. O resultado dado como PRESENTE ou AUSENTE. Os cilindros podem ser: a) halinos: formaes incolores de lados paralelos e extremides arredondadas.

b) granulosos: so mais grosseiros que os halinos, e provm de epitlios degradados, leuccitos, eritrcitos, albumina ou gordura.

c) fibrinosos (gordurosos ou lipidicos): so gotas de substncias gordurosas. Surgem de nefrites, diabetes e inflamaes renais agudas.

d) leucocitrios (picitos): tm leuccitos em sua estrutura, indicando processos inflamatrios.

e) hemticos: tm hemcias degeneradas em seu interior, podendo ser desde amarelos at pardacentos. A infeco causada por esses corpsculos denominada hematria.

f) Cilindrides: so parecidos com os halinos, mas possuem extremidades bifurcada e aparncia plana. Muco: um emaranhado de filamentos formados pela precipitao de microprotenas.
Em geral aparecem em casos de clculo renal, DSTs e infeces urinrias. O resultado dado como AUSENTE ou PRESENTE (+, ++, +++, ++++); Flora Bacteriana: a presena de bactrias na amostra. O resultado dado como DISCRETA, MODERADA, LIGEIRAMENTE AUMENTADA, AUMENTADA ou MUITO AUMENTADA;

101
Espermatozoides: so encontrados em urinas colhidas aps a ejaculao. Pode aparecer tanto em urina masculina quanto feminina. Cristais: podem ser encontrados tanto em urinas cidas quanto em urinas alcalinas, conforme mostrado na tabela 35 abaixo.

Tabela 35: Cristais Encontrados na Urina Caractersticas Possuem formas variadas e tem colorao amareloavermelhada. Solveis quando aquecidos a 60 C. Oxalato de Clcio Incolores e brilhantes, com uma forma semelhante a um envelope. Aparecem quando se ingere tomate e espinafre. Solveis em HCl concentrado. Sulfato de Clcio Parecem agulhas finas e compridas incolores. Pouco solveis em HNO3. Cistina Incolores e de forma hexagonal. Solvel em HCl concentrado. Facilmente decomposto pelas bactrias. Leucina Raros. Tm corpos esfricos, de aspecto gorduroso, amarelo-acinzentados. Surgem das infeces hepticas. Solveis ao calor. Tirosina Aparecem juntos aos cristais de leucina. Parecem agulhas finas e escuras. Solveis HCl, NH4OH e AcCOOH. Fosfato Amonaco-Magnsio Incolores e com forma de prisma. Solvel em Ou Fosfato triplo AcCOOH. Fosfato Amorfo Incolores e de aspecto granuloso. Fosfato de Clcio Incolores e brilhantes. Possuem a forma de placa ou prisma. Solveis em AcCOOH diludo. Urato de Amnio Aspecto cristalino e semelhante a pequenas bolas de espinhos. Podem estar sozinhos ou agrupados na forma de um colar. Solveis ao calor e NaOH. Carbonato de Clcio Aparece junto do fosfato amorfo, assemelhando-se cocos agrupados. Solveis em AcCOOH com desprendimento de gs. cido Hiprico Formas de agulhas incolores ou de formas rmbicas. Aparecem aps a ingesto de frutos ou vegetais. Solveis em ao calor. Colesterol Semelhantes a vidros de janelas, geralmente irregulares e sobrepostos. Solvel em clorofrmio e ter. Cristal cido rico

Urina Alcalina

Urina cida

*Fonte: atlas do sedimento urinrio do laboratrio.

Os cristais devem ser notificados como AUSENTES ou PRESENTES.

102 11. Biossegurana A segurana importante em todos os lugares onde h riscos biolgicos. No caso dos laboratrios deve ser ainda maior, j que est-se em contato com material contaminante todo o tempo. De acordo com ZOCHIO, L.B. (2009) a biossegurana um conjunto de aes voltadas para preveno, minimizao e eliminao de riscos para a sade, ajudando, ainda, na proteo do meio ambiente contra resduos e na conscientizao do profissional da sade. Mesmo sendo um assunto to discutido hoje em dia, muitos ainda so os acidentes com materiais perfurocortantes (80 a 90%). Na maioria das vezes o problema no est nas tecnologias disponveis para eliminar os riscos e sim, no comportamento dos profissionais. Por isso, todos devem ser capacitados. Durante o estgio, todo material perfuro cortante era descartado numa deskarpack, uma caixa amarela resistente, onde montamos a mesma com seus respectivos acessrios e a lacramos para encaminhar empresa de incinerao quando est cheia. Deve-se sempre usar as luvas de procedimento durante o trabalho dentro do laboratrio, bem com calado fechado, jaleco e mscaras. Alm do riscos ocupacionais (ergonmicos, fsicos e qumicos) h os riscos biolgicos, de diferentes potenciais. Por isso foram adotadas as medidas de biossegurana. (Portal da Educao, 2009) 11.1. Procedimentos Operacionais Padro (POP) Para um funcionamento adequado do fluxo de servio dentro do laboratrio, a bioqumica responsvel faz aplicao do POP (Procedimentos Operacionais Padro), que so protocolos descritores detalhados de cada atividade no laboratrio, desde a coleta at o resulto final (incluindo a utilizao de equipamentos), procedimentos tcnicos, cuidados de biossegurana e condutas a serem adotadas em acidentes. 11.2. EPIs e EPCs Os equipamentos de proteo individual (EPI) e os de proteo coletiva (EPC) so importantssimos dentro do laboratrio. Ex.: jalecos, mscaras, luvas, culos, sapatos fechados, pr-ps... so acessrios individuais, e jamais deve-se trabalhar sem eles. Ouros como capela de exausto de gases e extintores de incndios, por exemplo, so de proteo coletiva, pois protege vrias pessoas ao mesmo tempo.

11.3. Boas Prticas Laboratoriais

103 Segundo o MINISTRIO DA SADE (2004) as prticas em laboratrio devem ser seguidas na ntegra, sob risco de penalidades mediante auditorias e fiscalizaes. No ambiente onde prestou-se o estgio as boas prticas e biossegurana so imprescindveis. So elas: usar calas compridas e sapatos fechados; usar gorros ou amarrar os cabelos, caso sejam compridos; no utilizar lentes de contato; manter as mos sempre lavadas e assepissiadas; manter as unhas cortadas e limpas; no utilizar maquiagens e esmaltes; no utilizar joias e bijuterias; no beber nem comer nada dentro do laboratrio, nem conservar alimentos dentro das geladeiras e freezers; ao levar pessoas que no sejam funcionrios para o laboratrio; evitar brincadeiras, distraes e conversas paralelas durante os procedimentos; jamais pipetar substncias com a boca; no abrir armrios, atender telefone, tocar interruptores e encostar em outras coisas sem retirar as luvas; jamais reencapar agulhas; no cheirar placas de cultura nem nenhuma outra substncia; adicionar gua aos poucos sobre o cido, mas nunca cido sobre a gua; guardar todo o material que no estiver sendo usado; ler manuais e rtulos dos reagentes sempre que necessrio.

12. Lavagem de Material, Descarte de Resduos e Esterilizao Conforme dito no item antes, as agulhas e seringas utilizadas na coleta so descartadas numa caixa prpria para resduos de perfuro cortantes, que depois lacrada e colocada dentro do saco de lixo branco, prprio para material infectado. As vidrarias quebradas so recolhidas e descartadas numa bombona especfica para essa finalidade. O material biolgico neutralizado com soluo de hipoclorito de sdio a 1% (NaClO) e depois descartados sob gua corrente na sala de expurgo. O material lavado sob gua corrente aps a retirada dos resduos e submersos em bacias plsticas com uma mistura de gua deionizada e hipoclorito

104 de sdio a 1%. Bandejas metlicas, bqueres e tubos de ensaio so colocados na estufa de esterilizao e secagem aps serem lavados.

Fig. 82 Estufa de esterilizao e secagem.

Materiais de plstico como alguns tubos, clices, tampas de tubos e lminas so secadas temperatura ambiente. Quando o material est seco, guardado.

13. Consideraes Finais A realizao do estgio uma oportunidade que muitos tm, mas poucos sabem aproveitar. uma gama de aprendizado nica e incomensurvel. Nas anlises clnicas h uma vastido de coisas a serem aprendidas e, ao mesmo tempo, vrias coisas a serem ainda descobertas. Segundo o artigo 2, do DECRETO N 87.497 de 18/08/82, que define regras para a realizao do estgio supervisionado, considera-se este como uma aprendizagem social, profissional e cultural. Ainda na legislao, dito na LEI N 11.788 de 25/09/2008, que o

105 estgio visa ao aprendizado de competncias prprias da atividade profissional e contextualizao curricular, objetivando o desenvolvimento do educando para a vida cidad e para o trabalho.

14. Concluso Muitos fatores dificultam a insero de profissionais qualificados no mercado. O estgio , sem dvida, a melhor maneira de se treinar e selecionar um acadmico para o mercado profissional. Realizar o estgio supervisionado proporciona um excelente treinamento para o verdadeiro mercado de trabalho, onde a experincia levada em considerao como um quesito de grande importncia. No decorrer da realizao do estgio algumas dificuldades foram encontradas, tais como confeco dos esfregaos e utilizao as micropipetas com volumes muito pequenos. Porm, muitas expectativas foram superadas e os objetivos foram alcanados, sendo satisfatrio tanto para mim quanto em prol das atividades do laboratrio. O trabalho clnico da medicina preventiva importantssimo nas decises mdicas, pois os prescritores se baseiam nos resultados obtidos nas anlises para dar uma direo ou conduta especializada ao paciente. A experincia adquirida na realizao do estgio nica e deve ser agarrada fortemente, pois a realizao profissional s ser alcanada com esforo e dedicao.

106 15. Referncias

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114 16. Anexos

Lista de Figuras

Pg. 01. Quatro maneiras de executar assepsia ................................................................................ 02. Frmula estrutural do EDTA .............................................................................................. 03. Complexo formado pela ao do EDTA ............................................................................ 04. Frmula estrutural do citrato trissdico .............................................................................. 05. Sangues de controle hematolgico ..................................................................................... 06. Contador hematolgico HUMAN COUNT PLUS ............................................................. 07. Homogeneizador de sangue .. 08. Resultado de hemograma no contador hematolgico ......................................................... 09. Hemcias normocticas e normocrmicas .......................................................................... 10. Hemcias macrocticas e hipocrmicas .............................................................................. 11. Hemcias macrocticas e hipercrmicas ............................................................................. 12. Grupo Heme ........................................................................................................................ 13. Estrutura qumica da bilirrubina ......................................................................................... 14. Linfcito ............................................................................................................................. 15. Moncito ............................................................................................................................. 16. Eosinfilo ............................................................................................................................ 17. Mielcito ............................................................................................................................. 18. Metamielcito ..................................................................................................................... 19. Basfilo ............................................................................................................................... 20. Bastonete ............................................................................................................................. 21. Segmentados ....................................................................................................................... 22. Plaquetas normais ............................................................................................................... 23. Plaquetas gigantes ............................................................................................................... 24/25. Exemplificao da execuo do esfregao .................................................................... 26. Corantes hematolgicos ...................................................................................................... 27. Lminas coradas ................................................................................................................. 28. Estrutura qumica do corante rpido 1 ................................................................................ 29. Estrutura qumica do corante rpido 2 ................................................................................ 16 18 18 19 22 22 24 25 30 30 30 31 32 33 34 34 35 35 35 36 36 37 37 38 38 39 39 40

115 30. Estrutura qumica do corante rpido 3 ................................................................................ 31. Microscpio binocular ........................................................................................................ 32. Partes do microscpio ......................................................................................................... 33. Contador diferencial de clulas BENFER CC 900 ............................................................. 34. Preparo de lmina para teste de GS + Rh ........................................................................... 35. Reagentes para determinao do grupo sanguneo + fator Rh ........................................... 36. Exame VHS ........................................................................................................................ 37. Coagulmetro HUMAN CLOT Jr. ..................................................................................... 38. Sangue sendo colocado em banho ...................................................................................... 39. Sangue sorado (soro/plasma) .......................................................................................... 40. Analisador bioqumico BIOPLUS 2000 ............................................................................. 41. Banho-maria sendo aquecido .............................................................................................. 42. Exame glicose sendo realizado ........................................................................................... 43. Exame colesterol sendo realizado ....................................................................................... 44. Estrutura qumica da quinoneimina .................................................................................... 45. Exame HDL ........................................................................................................................ 46. Exame triglicrides sendo realizado ................................................................................... 47. Estrutura qumica da ureia .................................................................................................. 48. Frmula estrutural Tris ....................................................................................................... 49. Oxidante de trabalho .......................................................................................................... 50. Exame ureia sendo realizado .............................................................................................. 51. Estrutura qumica da alantona ........................................................................................... 52. Exame cido rico sendo realizado .................................................................................... 53. Exame fosfatase alcalina sendo realizado ........................................................................... 54. Reagente de protenas totais (azul) e albumina (amarelo) .................................................. 55. Reao de colorao protenas totais/albumina .................................................................. 56. Frmula estrutural da creatinina ......................................................................................... 57. Estrutura qumica do cido pcrico ..................................................................................... 58. Exame creatinina sendo realizado ...................................................................................... 59. Frmula estrutura da tirosina .............................................................................................. 60. Etapa de desproteinizao das mucoprotenas .................................................................... 61. Teste de mucoprotenas ...................................................................................................... 62. Frmula qumica do Hepes ................................................................................................. 40 41 41 43 43 44 45 46 47 50 51 52 53 55 56 58 60 61 62 63 64 65 66 68 70 71 71 72 73 74 75 76 79

116 63. Descarte de bioqumica ....................................................................................................... 64. Teste HIV-1/2 ..................................................................................................................... 65. Esquema da visualizao dos resultados HIV-1/2 .............................................................. 66. Cadeia orgnica de cardiolipina .......................................................................................... 67. Cadeia qumica da lecitina .................................................................................................. 68. Reagente para VDRL .......................................................................................................... 69. Placa de Kline para VDRL ................................................................................................. 70. Observao da placa ao microscpio .................................................................................. 71. Reagentes ASO ................................................................................................................... 72. Reagentes PCR ................................................................................................................... 73. Clices com material processo de sedimentao ................................................................ 74. Sedimentos fecais antes da anlise ..................................................................................... 75. Estrutura qumica do frmaco PZQ .................................................................................... 76. Ovo de Ascaris lumbricoides .............................................................................................. 77. Ovo de Schistossoma mansoni ............................................................................................ 78. Ovo de Entamoeba coli ...................................................................................................... 79. Tubos cnicos com urina .................................................................................................... 80. Tiras reagentes de urinlise ................................................................................................ 81. Teste com tira reagente ....................................................................................................... 82. Estufa de esterilizao e secagem ....................................................................................... 80 83 83 84 85 85 85 86 87 88 93 93 94 95 95 95 97 98 99 104

117 Lista de Tabelas

Pg. 01. Diferenciao de tubos de coleta de sangue ....................................................................... 02. Parmetros e ndices hematimtricos .................................................................................. 03. Valores de referncia de hemograma para crianas ........................................................... 04. Valores de referncia de hemograma para adultos ........................................................... 05. Exames TP (TAP), AP e RNI ............................................................................................. 06. Exame TTPA ...................................................................................................................... 07. Exame glicose ..................................................................................................................... 08. Exame colesterol total ........................................................................................................ 09. Exame colesterol HDL precipitao ................................................................................ 10. Exame colesterol HDL dosagem ..................................................................................... 11. Exame triglicrides ............................................................................................................. 12. Exame ureia parte 1 ......................................................................................................... 13. Exame ureia parte 2 ......................................................................................................... 14. Exame cido rico .............................................................................................................. 15. Exame fosfatase alcalina parte 1 ...................................................................................... 16. Exame fosfatase alcalina parte 2 ...................................................................................... 17. Exame protenas totais ........................................................................................................ 18. Exame albumina ................................................................................................................. 19. Exame creatinina ................................................................................................................ 20. Exame mucoprotenas desproteinizao .......................................................................... 21. Exame mucoprotenas precipitao ................................................................................. 22. Exame mucoprotenas colorimetria ................................................................................. 23. Exame TGO ........................................................................................................................ 24. Exame TGP ......................................................................................................................... 25. Exame HIV-1/2 ................................................................................................................... 26. Exame VDRL ..................................................................................................................... 27. Diluio VDRL positivo ..................................................................................................... 28. Exame ASO ........................................................................................................................ 29. Diluio ASO ...................................................................................................................... 30. Exame PCR ......................................................................................................................... 20 26 27 28 48 49 53 55 57 57 60 63 63 65 67 67 69 70 72 74 75 76 78 79 82 85 86 87 88 89

118 31. Diluio PCR ...................................................................................................................... 32. Exame FR ........................................................................................................................... 33. Diluio FR ......................................................................................................................... 34. Legenda das tiras reagentes ................................................................................................ 35. Cristais encontrados na urina .............................................................................................. 90 90 91 99 101

119 Programa de Estgio Curricular

Estagirio: Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira Grau: Tcnico em Qumica Instituio: Escola Municipal Governador Israel Pinheiro Empresa: Secretaria Municipal de Sade e Meio Ambiente (Prefeitura Municipal de Rio Piracicaba) Setor: Laboratrio de Anlises Clnicas Superviso: Fernanda G. Ribeiro (Farmacutica/Bioqumica-RT) bacharel em farmcia pela Universidade Federal de Ouro Preto / especialista em anlises clnicas pela mesma universidade Sub-setores: Coleta, Bioqumica, Imunologia, Parasitologia, Urinlise e Hematologia Carga Horria Mnima: 480 horas

120 Sntese de Carga Horria

Semana 01/06/12 04/06/12 a 06/06/12 08/06/12 11/06/12 a 15/06/12 18/06/12 a 22/06/12 25/06/12 a 29/06/12 02/07/12 a 06/07/12 09/07/12 a 13/07/12 16/07/12 a 20/07/12 23/07/12 a 27/07/12 30/07/12 a 03/08/12 06/08/12 a 10/08/12 13/08/12 a 17/08/12 20/08/12 a 24/08/12 27/08/12 a 31/08/12 03/09/12 a 06/09/12 12/09/12 a 14/09/12 17/09/12 a 21/09/12 24/09/12 a 28/09/12 01/10/12 a 05/10/12 08/10/11 a 11/10/12 15/10/12 16/10/12 a 17/10/12 19/10/12 22/10/12 a 26/10/12 29/10/12 a 01/11/12 05/11/12 a 09/11/12 12/11/12 a 14/11/12 16/11/12

N de Dias 01 03 01 05 05 05 05 05 05 05 05 05 05 05 05 04 03 05 05 05 04 01 02 01 05 05 05 03 01

N de Horas 04 12 04 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 16 12 20 20 20 16 04 08 04 20 20 20 12 04

121 19/11/12 a 23/11/12 26/11/12 a 30/11/12 03/12/12 a 07/12/12 10/12/12 a 14/12/12 05 05 05 05 20 20 20 20

Perodo de Estgio: 01/06/12 a 14/12/12 124 dias = 496 horas

122 Ficha de Avaliao Estagirio (a): Leandro Jos Dias Gonalves de Oliveira Curso : Tcnico em Qumica Horas Trabalhadas: 496 H Empresa: Prefeitura Municipal de Rio Piracicaba Local: Secretaria Municipal de Sade e Meio Ambiente Aspecto 1 Conhecimento Terico Demonstrado: 1 3 Refere-se aos conhecimentos tericos 5 necessrios execuo das tarefas sob a 7 responsabilidade do estagirio (a). 9 2 Aproveitamento Prtico: capacidade em 1 3 desenvolver tarefas. 5 7 9 3 Capacidade de Aprendizagem 1 3 capacidade de desenvolver tarefas. 5 7 9 4 Iniciativa: resoluo de problemas, 1 colaborao na rea, apresentao de idias. 3 5 7 9 5 Responsabilidade: assiduidade, 1 pontualidade, disciplina e capacidade para 3 responder pelos encargos que lhe so 5 7 confiados. 9 6 Organizao: rigor, cuidado, ordem na 1 execuo de tarefas ou trabalhos com 3 maquinas e equipamentos. 5 7 9 7 Capacidades de concentrao 1 3 5 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 Nveis Muito fraco (irrecupervel) Fraco (quase recupervel) Regular Bom timo Muito fraco Fraco Regular Bom timo Pouco Capaz Lento Capacidade regular Com rapidez Com muita rapidez Pouca iniciativa Alguma iniciativa Resolve dificuldades normais Muita iniciativa Prev, resolve problemas e promove melhorias. Pouco responsvel Alguma responsabilidade Responsabilidade regular Responsvel Muito responsvel Muito desorganizado Desorganizado Organizao regular Organizado e cuidadoso Muito organizado e cuidadoso Muito dispersivo Dispersivo Regulamente atento Nota rea: Anlises Clnicas Durao: 124 dias

123 7 9 8 Dedicao e interesse: contribuio 1 positiva e permanente para com os objetivos 3 5 do trabalho e da empresa 7 9 9 Relacionamento e sociabilidade: 1 hbitos e atitudes condizentes com a 3 5 harmonia e bom rendimento da equipe 7 9 10 Segurana: preocupao com as 1 3 normas de segurana no trabalho 5 7 9 Total das notas 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 2 4 6 8 10 Atento Muito atento Muito desinteressado Desinteressado Interesse regular Interessado e dedicado Muito interessado e dedicado Muito difcil de lidar Difcil de lidar Relacionamento e sociabilidade Conciliador regular Muito hbil e conciliador Muito relaxado Descuidado Cuidado regular Cauteloso e precavido Muito cauteloso e precavido

Fernanda G. Ribeiro
Farmacutica/Bioqumica CRF-MG: 20 469

Secretaria Municipal de Sade e Meio Ambiente Rio Piracicaba/MG