Cultura de neurnios DRG de rato neonato 1- Neonatos ( 7 dias ) trs animais para cultura de 3 placas 2- Solues: HBSS ou HANKS

( 0Ca2+ ) Substituir Ca2+ por Mg2+ ( ~ 2mM ) Tripsina 0,25% + EDTA / DMEM alta glicose ( 10% SBF ) 3- Preparo de lamnulas: Usar Poli-D-Lys ou ( 50g/ml ) e espalhar em cada lamnula ( ~ 100ml ). Retirar o excesso completamente e deixar no fluxo por 30 min. 4- Preparar 2 falcons com: Falcon 1 - HBSS ( Hanks ) ; 20% SBF ; 1% Antibitico Falcon 2 - HBSS ( Hanks ) ; 1% Antibitico 5- Cirurgia: Aps cortar a cabea do animal, remover a coluna vertebral e imediatamente retirar os DRGs. Colocar os gnglios em uma placa de petri estril, preenchida com a soluo 1. 6- Dissociao ( no fluxo ) - triturar os gnglios com uma tesoura de hans - Transferir para un falcon de 15ml - Fazer 3 lavagens com Sol.1 ( 2ml cada ) - Fazer 3 lavangens com Sol.2 ( 2ml cada) - Adcionar a tripsina ( adicionar 0,5ml antes e remover para lavar os DRGs ) - Banho-maria 37C por 20mL - Fazer 3 lavagens com Sol.1 e 2, cada novamente. - Dissociar com as pipetas de vidro polidas ( Fazer 3-5 sucoes e coletar o meio ( Sol.2) em outro falcon 15ml) - repetir esse procedimento at dissociar os gnglios por completo. - Centrifuga a 1500 RPM por 4 min a 4C. - Ressuspender em 500 L (Sol.2) - Plaquear 150-200L por placa. Deixa 20 min na estufa - Adicionar DMEM alta glucose ( 10% SBF + 1% antibitico ) - Trocar o meio a cada 2 dias.