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Resumen
El concepto de inmunidad innata ha tenido un cambio notable durante los ltimos cinco aos, debido al descubrimiento de los receptores tipo Toll (TLR, protenas transmembranales expresadas por clulas del sistema inmunitario innato) en los mamferos y su participacin en el reconocimiento de patgenos microbianos. Actualmente el estudio de estos receptores es de gran inters, sobre todo en medicina humana y muy recientemente en medicina veterinaria, debido a que desempean un papel central, tanto en el desencadenamiento de la inmunidad innata, como en la coordinacin entre las inmunidades innata y adaptativa. Esta revisin pretende mostrar el concepto del papel de los receptores tipo Toll en los procesos de inmunidad desde la perspectiva de su importancia en medicina veterinaria. Palabras clave: RECEPTOR TIPO TOLL, INMUNIDAD INNATA, MEDICINA VETERINARIA.
Introduccin
a evolucin ha dotado a los mamferos con dos formas principales de defensa contra agentes
infecciosos: la inmunidad innata y la inmunidad adaptativa. La primera proporciona una defensa del hospedero contra microorganismos invasores que es inmediata, inespecfi ca y no tiene memoria, mientras que la segunda es virgen, tarda en desarrollarse y se le debe ensear a travs de la generacin somtica de un repertorio diverso de receptores, con objeto de desarrollar una respuesta inmunitaria apropiada contra los microbios invasores.1 Esta diferencia de reaccin sugiere que las respuestas de inmunidad innata se deben basar en el reconocimiento de patrones moleculares asociados con microorganismos. En contraste, la respuesta inmunitaria adaptativa depende en gran parte de dos clases de linfocitos especializados, los linfocitos T y los linfocitos B, cuyos receptores especfi cos son generados somticamente en respuesta a la presentacin de antgeno por clulas profesionales presentadoras de antgeno (clulas dendrticas principalmente de tipo interdigitante, macrfagos y otras clulas B).2 Este proceso provoca la expansin clonal antgeno-dependiente de linfocitos T y B, que da por resultado una memoria inmunitaria humoral y celular de larga duracin. Sin embargo, la inmunidad adquirida no ocurre inmediatamente en respuesta a un antgeno o patgeno nuevo y el retardo en la respuesta podra tener un efecto devastador en la supervivencia del hospedero.3 Por tanto, las respuestas inmunitarias innata y adquirida estn coordinadas, de tal forma que la respuesta inmunitaria innata representa el proceso inicial e instructor en la defensa del hospedero mamfero. 3 Los microorganismos expresan patrones moleculares que son especfi cos y rpidamente diferenciables de los del hospedero; stos incluyen ARN viral de doble cadena; dinucletidos CpG no metilados comunes en el ADN bacteriano, pero escasos en el ADN de vertebrados; mananas de las levaduras; glicolpidos de las micobaterias; lipoprotenas de bacterias y parsitos; cidos lipoteicoicos de bacterias grampositivas y LPS de bacterias gramnegativas.3-5 El hospedero vertebrado ha desarrollado receptores de reconocimiento especfi cos de patrones para detectar a estas molculas asociadas con patgenos. Dichos receptores pueden dividirse en clases: receptores secretados, endocticos y de sealizacin; 1 estos ltimos son capaces de inducir la expresin de una variedad de citoquinas que subsecuentemente amplifi can la respuesta inmunitaria innata y dirigen la respuesta inmunitaria adaptativa. Este mecanismo, sin embargo, es ms complejo de lo que se pensaba.1,6 El sistema inmunitario ha desarrollado diferentes mtodos para discriminar molculas propias de molculas extraas. La estrategia de reconocimiento microbiano se basa en la deteccin de patrones moleculares conservados que son productos esenciales de la fi siologa microbiana. Charles Janeway desarroll la idea de que hay estructuras microbianas que forman patrones moleculares y que tales estructuras seran reconocidas por receptores de reconocimiento de esos patrones. 7 Actualmente dichas estructuras invariantes son conocidas como patrones moleculares asociados a patgenos (PMAP). stos se caracterizan por ser expresados nicamente por microbios (y no son producidos por el hospedero); son relativamente conservados en microorganismos similares y su expresin es esencial para la sobrevivencia del microorganismo. 5,8 Dos PMAP
comunes son el lipopolisacrido (LPS) de las bacterias gramnegativas y el peptidoglicano (PGN) de las bacterias grampositivas. Estos PMAP son reconocidos por receptores del sistema inmunitario innato denominados receptores de reconocimiento de patrones (RRP). Debido a que los PMAP son producidos slo por los microorganismos, el sistema inmunitario innato los reconoce como firmas moleculares de la infeccin, y su reconocimiento por los RRP propicia la induccin de una respuestainmunitaria.9
TLR1
Este receptor distingue lipopptidos de bacterias y micobacterias. Utilizando macrfagos de ratones deficientes en TLR1 (TLR1 (-/-)), Takeuchi et al. observaron que estas clulas mostraban incapacidad para producir citoquinas proinfl amatorias al exponerse a lipoprotenas y lipopptidos triacilados, mientras que las mismas clulas produjeron citoquinas normalmente al exponerse a lipopptidos diacilados, 24 as como factores solubles de Neisseria meningitidis.25 Asimismo, se ha observado que TLR1 funcionalmente se asocia con TLR2 para reconocer la confi guracin lipdica de las lipoprotenas de micobacterias y tiene una homologa alta con TLR6, lo que podra compensar una defi ciencia en TLR1. 24-25 Se ha demostrado que TLR1 reconoce la lipoprotena de la superfi cie externa (OspA) de la espiroqueta Borrelia burgdorferi, el agente causal de la enfermedad zoontica de Lyme, que es transmitida a animales y humanos por garrapatas del gnero Ixodes.26
TLR2
El TLR2 reconoce diferentes productos bacterianos como lipoprotenas de bacterias gramnegativas, 27 peptidoglicano de bacterias grampositivas,28 cido lipoteicoico de bacterias grampositivas,29 lipoarabinomanano de micobacterias,30 una modulina soluble en fenol de Staphylococcus epidermidis,31 glicoinositolfosfolpidos de Trypanosoma cruzi,32 glicolpidos de Treponema maltophilum,33 porinas de Neisseria,34 y zymosan de hongos,35 el TLR2 tambinreconoce lipopolisacrido (LPS) atpico de Leptospirainterrogans,36 y LPS atpico de Porphyromonasgingivalis,37 que sugiere que TLR2 tiene capacidad especfica de reconocimiento de los LPS de forma cilndrica que inducen la produccin de citoquinas. 38 Finalmente, TLR2 reconoce la protena 70 de choque trmico (HSP70) del hospedero,39 se asocia con otros TRL incluyendo TRL1 y TLR6, e inicia la activacin de genes caractersticos de una respuesta de tipo Th2. 40 Finalmente, el TLR2, al igual que otros TLR, presenta diferencias en humanos y ratones en la expresin, trascripcin, concentracin tisular y regulacin.41
TLR3
Este receptor reconoce cido ribonucleico (ARN) de doble cadena, un patrn molecular asociado con posibles infecciones por virus.42 Cabe destacar que el ARN de doble cadena es un inductor muy potente de los
interferones tipo I, que tienen propiedades antivirales, adems de que promueve la maduracin de clulas dendrticas. Ratones defi cientes en TLR3 mostraron respuesta disminuida a ARN de doble cadena, adems de una produccin reducida de citoquinas proinflamatorias.42 Mientras que en humanos TLR3 se expresa nicamente en clulas dendrticas mieloideas,43 en ratones su expresin puede ser inducida en macrfagos expuestos a LPS.42 Se cree que estas diferencias se deben a desigualdades en las secuencias de las regiones reguladoras proximales en las dos especies.41
TLR4
TLR4 distingue LPS de bacterias gramnegativas,44 taxol de plantas,45 protena de fusin del virus respiratorio sincitial,46 protenas de la cubierta del virus del tumor mamario de ratn y virus de la leucemia murina de Molones,47 protena 60 de choque trmico (HSP60) derivada de Chlamydia pneumoniae,48 HSP6049 y HSP70 del husped,50 extradominio A de fi bronectina,51 oligosacridos del cido hialurnico del hospedero,52 fragmentos de polisacrido de sulfato de heparan del hospedero,53 fi bringeno del hospedero.54 Mientras que TLR2 reconoce LPS cilndrico, el LPS cnico estimula a las clulas slo mediante TLR4.38 La capacidad para diferenciar variaciones en la composicin molecular y la conformacin tridimensional del lpido A de los LPS explica la activacin de los diferentes canales de sealizacin mediados por los TLR.
TLR5
Reconoce la fl agelina de bacterias gramnegativas.55 Se identifi c al observar que la fl agelina protenaprincipal de los fl agelos de bacterias gramnegativas al contactar las superfi cies epiteliales basolaterales del intestino, estimula la produccin de respuestas inmunitarias infl amatorias; cuando aqulla hace contacto con la superfi cie apical no hay tal respuesta. Las investigaciones con inmunolocalizacin demostraron que TLR5 se expresa slo en la superfi cie basolateral del epitelio intestinal y al contacto con flagelina de Salmonella desencadena una cascada de sealizacin que media el factor de trascripcin proinflamatorio NF-.56 La fl agelina es un patrn molecular de patgenos muy conservado, pues en plantas esta protena induce una respuesta inmunitaria mediada por un receptor transmembranal con un dominio rico en leucinas, que es caracterstico de los receptores tipo Toll. 57
TLR6
El TLR6 de humano tiene 69% de identidad con TLR1, y en ratones se expresa en timo, bazo, ovario y pulmn.18 Mientras que TLR2 reconoce lipoprotenas bacterianas triacetiladas, TLR6 reconoce slo lipoprotenas diacetiladas como las producidas por micoplasmas, que son potentes activadores de acrfagos. 58 TLR6 acta de manera sinrgica con TLR2 para reconocer peptidoglicanos, que son componentes de bacterias grampositivas.59
TLR7
Este receptor reconoce compuestos sintticos considerados inmunomoduladores como los derivados de la imidazoquinolina, adems de loxoribina y bropirimina, que tienen capacidad antiviral debido a que inducen la produccin de citoquinas proinfl amatorias, en especial INF- .23,60 Al utilizar ratones que no expresan TLR7, Hemmi et al.60 observaron que la estimulacin con estos compuestos no induca la produccin de citoquinas proinfl amatorias por macrfagos ni la maduracin de clulas dendrticas. Recientemente y de acuerdo con estos hallazgos iniciales, se ha informado que TLR7 reconoce ARN de cadena nica (ssARN) con concentraciones elevadas de los nucleosidos guanosina y uridina.61 Hallazgos similares se encontraron utilizando ssARN del virus de la infl uenza, que tambin es rico en uridina.62
TLR8
El TLR8 pertenece a la subfamilia del TLR923 y junto con TLR7 tambin reconoce compuestos antivirales. Mientras que TLR7 murino reconoce ssARN, recientemente se demostr que esta funcin enhumanos es realizada por TLR8.61 Las implicaciones de estos hallazgos son importantes porque mientras que TLR3 reconoce el ARN de doble cadena en algunos virus, TLR7 y TLR8 se encargan de reconocer el ARN de virus de cadena nica, as como posiblemente ARN del mismo hospedero, lo cual los implica en posibles enfermedades autoinmunes. Estudios en esta nueva lnea de investigacin podran encontrar tratamientos para muchas enfermedades autoinmunes y a la identificacin de adyuvantes que sean potencia dores de la respuesta antiviral.63
TLR9
Es esencial para el reconocimiento de motivos CpG no metilados de ADN bacteriano.64,65 Los motivos CpG son cadenas hexmeras formadas por dinucletidos centrales CG no metilados flanqueados por dos pirimidinas en posicin 5 y dos purinas en la regin 3.66 Estos dinucletidos no metilados son frecuentes en el ADN de microorganismos, incluyendo bacterias y protozoarios.64,66 De manera relevante, otros ADN de organismos no vertebrados, como insectos, levaduras y moluscos, tambin contienen motivos CpG no metilados y son potentes mitgenos de linfocitos B,67 muy probablemente a travs del TLR9. Por su parte, el ADN de mamferos se caracteriza por tener una baja frecuencia de dinucletidos CG y la mayora de ellos estn metilados, hacindolos incapaces de inducir respuestas inmunitarias. En humanos, TLR9 es expresado por clulas dendrticas plasmacitoideas y clulas B, y esto correlaciona con la capacidad de estas clulas de responder a la presencia de oligonucletidos CpG; 68 mientras que en ratones, el TLR9 se encuentra en clulas dendrticas mieloideas, macrfagos y clulas B.64 Se ha demostrado que en ratones el TLR9 es esencial para mediar los efectos antiinfl amatorios caractersticos de los probiticos.69 Por tanto, el efecto discriminatorio de TRL9 explica la capacidad del sistema inmunitario de los mamferos de activarse ante presencia de ADN microbiano, comparado con la nula respuesta ante presencia del ADN del propio organismo.
TLR10
El TLR10 est fi logenticamente relacionado con el TLR1 y TLR6.20 Se desconoce cul es el ligando de este receptor que se expresa preferentemente en linfocitos B de tejidos inmunitarios, como bazo, ndulos linfticos y timo.20,68,70
TLR11
Este TLR fue recientemente descubierto en ratn y suglos anlisis filogenticos lo clasifican en un subgrupo junto con el TLR5.22 Por otro lado, en humanos el TLR11 podra no expresarse, ya que las secuencias analizadas a la fecha muestran codones de terminacin dentro del marco de lectura abierto del gen. El TLR11 se expresa fuertemente en clulas epiteliales del rin y la vejiga, y en menor cantidad en clulas del hgado. El TLR11 no reconoce ninguno de los ligandos que activan los dems TLR, por lo que es distinto en cuanto a su patrn de expresin y de reconocimiento comparado con otros TLR. De manera interesante, bacterias uropatgenas estimularon la activacin del factor de transcripcin NF- a travs del TLR11 y ratones transgnicos que no lo expresaban mostraron diez mil veces ms bacterias en el rin que los ratones normales.22 Todo esto resalta la importancia biolgica del TLR11 en la inmunidad del rin contra infecciones urinarias.
Consideraciones finales
Se ha sealado que la prxima generacin de vacunas de uso veterinario estar constituida por microorganismos patgenos inactivados o por sus subunidades, las cuales por su baja capacidad inmunognica exigen la necesidad urgente de desarrollar nuevos y mejores adyuvantes.86 Estos adyuvantes, dems de potenciar la respuesta inmunitaria humoral y celular, debern dirigirla para generar una respuesta inmunitaria protectora contra el agente infeccioso especfico. En este contexto, el descubrimiento y anlisis de los TLR puede propiciar el desarrollo de dichos adyuvantes. Los resultados de diferentes investigaciones sugieren que la capacidad inmunoestimulante de algunos adyuvantes se lleva a cabo a travs de los TLR. Tal es el caso del adyuvante completo de Freund, un potente adyuvante que contiene una mezcla de componentes micobacterianos,87 del CpG DNA, otro potente adyuvante que es reconocido por TLR9; 88,89 las porinas de Neisseria, utilizadas como adyuvante en varias formulaciones vacunales, son reconocidas por TLR2; 34 la pared celular de la cepa BCG de Mycobaterium bovis (BCG-CWS), que se usa como adyuvante para la inmunoterapia del cncer,90 es reconocida por TLR2 y TLR4.91 Los adyuvantes sintticos MPL (adyuvante seguro y efectivo para su uso en vacunas) y Ribi 529 estimulan el sistema inmunitario a travs de TLR4.92 En este sentido, se ha indicado que un adyuvante alerta el sistema inmune del hospedero atravs de un mecanismo similar al de una infeccin provocada por un microorganismo patgeno, que involucra la interaccin con un TLR seguido de una seal de peligro para el sistema inmunitario. A continuacin, la secrecin de citoquinas y la regulacin de las molculas coestimuladoras inducidas por la inmunidad innata, moldean la magnitud y calidad de la respuesta inmune adaptativa.93 En relacin con lo anterior, se ha informado que la bacteria inmunoestimulante Lactobacillus casei, que contiene cidos lipoteicoicos reconocidos por elTLR294 y motivos CpG reconocidos por el TLR9,69 induce una respuesta protectora inespecfi ca contra la infeccin por especies de Eimeria en pollos de engorda95 y especfi ca contra la infeccin por Trichinella spiralis en ratones, cuando se utiliza como adyuvantes con antgenos de larvas infectivas del parsito.96 Aunque el papel de los TLR en estos estudios est por demostrarse, los datos sugieren que el efecto inmunoestimulante o de adyuvante del Lactobacillus casei en el control de enfermedades en los animales domsticos puede estar mediado en gran medida por estos receptores, lo que abre un campo nuevo en el control de enfermedades infecciosas en medicina veterinaria. Con base en lo anterior, el mejor conocimiento de los TLR y su papel en la respuesta inmunitaria en cada una de las especies de animales domsticos, as como de los componentes de sustancias inmunoestimulantes (por ejemplo, L. casei), permitir el desarrollo de mejores adyuvantes para su uso en vacunas que induzcan respuestas ms rpidas, especfi cas, ms fuertes y de ms larga duracin, en medicina veterinaria y en medicina humana, en los prximos aos.