Praktikum Fisiologi Hewan

ANALISIS ENZIM PENCERNAAN Dosen pengampu : Anti Damayanti H., S.Si, MMolBio

Disusun oleh : M.Musyafa asin !"#$""!" Asistan :

P%&'%AM S()D* B*&+&'* FA,)+(AS SA*-S DA- (.,-&+&'* )*- S)-A- ,A+*/A'A

&' A,A%(A 0"!1

Analisis Enzim Pencernaan A2 Tujuan Praktikum

!2 Mengetahui ma3am4ma3am en5im pen3ernaan yang a6a pa6a sali7a 6an usus ikan 02 Mengetahui fungsi empe6u 6alam pen3ernaan makanan

B2 Dasar Teori Pen3ernaan merupakan proses peme3ahan senyawa kompleks men8a6i senyawa yang le9ih ke3il. Proses peme3ahan senyawa terse9ut menghasilkan energi yang penting 9agi ke9utuhan sel, 8aringan, organ 6an makhluk hi6up. Pen3ernaan merupakan proses kimia. Proses kimia mem9utuhkan a6anya en5im untuk peru9ahan kimia 9ahan 6asarnya. .n5im 9erperan 6alam meningkatkan ke3epatan reaksi tanpa mempengaruhi hasil reaksi 6an ti6ak ikut 9ereaksi. Dalam proses pen3ernaan, en5im 6ihasilkan oleh 9er9agai organ, seperti usus halus, kelen8ar lu6ah 6an lam9ung. .n5im 9ersifat spesifik 6alam proses peme3ahan 9ahan kompleks:kar9ohi6rat, protein, 7itamin 6an mineral; :'uyton,!<<0;. .n5im mem9antu proses meta9olisme 6i 6alam tu9uh. .n5im 9anyak ter6apat pa6a makanan segar karena en5im sangat sensiti7e terha6ap panas 6an akan rusak 6alam proses pemasakan 6an pasteurisasi. .n5im 9erperan penting 9agi kehi6upan 6engan 3ara men8alankan seluruh meta9olisme tu9uh. ,ita ti6ak 6apat men3erna atau menyerap makanan 6an kita pun 9isa mati 8ika ti6ak a6a en5im 6alam tu9uh. .n5im a6alah 9iokatalisator spesifik yang 9erga9ung 6engan koen5im :7itamin 6an mineral; yang men8alankan ro6a kehi6upan melalui meta9olisme agar tu9uh 6apat 9erfungsi 6engan 9aik. Pa6a umumnya kita su6ah mengetahui kegunaan 7itamin 6an mineral 9agi tu9uh, akan tetapi kemungkinan 9esar An6a ti6ak menya6ari 9ahwa 7itamin ti6ak akan 6iaktifkan 6alam tu9uh sampai 9erga9ung 6engan en5im :=amp9ell,0""";.

Hati a6alah organ ter9esar 6an 8uga salah satu organ yang paling kompleks 6alam tu9uh, terletak 6i 9agian kanan atas 6ari perut tepat 6i 9awah 6iafragma. *ni mensekresikan hati empe6u, yang se3ara mekanis men3erna lemak 6engan tin6akan seperti 6eter8en :6i9ahas pa6a 9agian selan8utnya;. .mpe6u ter6iri 6ari air, garam empe6u, pigmen empe6u, kolesterol, garam, 6an lesitin :fosfolipi6;. +emak 6i3erna men8a6i asam lemak 6an monoa3ylgly3erols +ipi6 9iasanya 6ikonsumsi se9agai massa 9esar trigliseri6a :8uga 6ise9ut trigliseri6a;. Mereka 6i3erna terutama 6i 6alam usus 6ua 9elas 8ari oleh lipase pankreas. Seperti 9anyak protein lain, lipase air larut, namun a6a su9strat yang yang ti6aklarut. Dengan 6emikian, en5im 6apat 9eker8a hanya molekul lemak pa6a permukaan massa lemak. garam empe6u 9ertin6ak seperti 6eter8en, mengurangi tegangan permukaan lemak. Aksi mereka, 6ise9ut emulsifi kation, meme3ah massa 9esar lemak men8a6i le9ih ke3il 6roplet. .mulsifi kation sangat meningkatkan luas permukaan lemak terkena aksi lipase pankreas sehingga meningkatkan la8u pen3ernaan lipi6. :solomon, 0""$; ,ar9ohi6rat akan 6i3erna men8a6i monosakari6a. Polisakari6a, seperti pati 6an glikogen, merupakan komponen penting 6ari makanan yang 6i3erna oleh ke9anyakan hewan. )nit glukosa 6ari molekul4molekul 9esar yang terhu9ung oleh ikatan glikosi6ik menghu9ungkan kar9on > :atau #; 6ari satu molekul glukosa 6engan kar9on ! 6ari molekul glukosa yang 9er6ekatan.. *katan ini 6ihi6rolisis oleh amilase yang men3erna polisakari6a men8a6i 6isakari6a 6an monosakari6a. Sali7a memulai pen3ernaan kimia sementara 8uga melin6ungi rongga mulut. .n5im amilase, 6itemukan 6alam air liur, menghi6rolisis pati :polimer glukosa 6ari tum9uhan; 6an glikogen :polimer glukosa 6ari hewan; men8a6i polisakari6a yang le9ih ke3il 6an 6isakari6a. Se9agian 9esar efek perlin6ungan 6ari air liur 6ise6iakan oleh len6ir, yang merupakan 3ampuran kental air, garam, sel, 6an glikoprotein li3in :3ar9ohy6rateprotein kompleks; 6ise9ut mu3ins. +en6ir 6alam air liur melin6ungi lapisan mulut 6ari a9rasi 6an melumasi makanan untuk le9ih mu6ah menelan.. ,omponen tam9ahan air liur meliputi 9uffer, yang mem9antu men3egah kerusakan gigi 6engan menetralisir asam, 6an antimikro9a, yang melin6ungi terha6ap 9akteri yang masuk mulut 6engan makanan :3am9ell, 0"!!;. )8i Bene6i3t 6igunakan untuk men6eteksi 5at u8i mengan6ung gula pere6uksi atau gula in7ers. Pereaksi 9ene6i3t ter6iri 6ari kupri sulfat,natrium sitrat, 6an natrium kar9onat. Pa6a u8i 9ene6i3t, teori yang men6arsarinya a6alah gula yang mengan6unggugus al6ehi6a atau keton 9e9as akan mere6uksi ion =u0? 6alamsuasana alkalis, men8a6i =u?, yang mengen6ap se9agai =u0&:kupro oksi6a; 9erwarna merah 9ata.

Pa6a u8i Bene6i3t, in6ikator terkan6ungnya 'ula %e6uksi a6alah 6engan ter9entuknya en6apan 9erwarnamerah 9ata. hal terese9ut 6ikarenakan ter9entuknya hasil reaksi 9erupa =u0&. Berikut reaksi yang9erlangsung: & @ 'ula Pere6uksi & @ .n6apanMerah Bata

%A=AH ? =u0? 0&H4 B %A=A&H ? =u0& +arutan Bene6i3t a6alah larutan yang mengan6ung ion4ion tem9aga:**; yang 6ikompleks 6alam se9uah larutan 9asa. +arutan Bene6i3t mengan6ung ion4ion tem9aga:**; yang mem9entuk kompleks 6engan ion4ion sitrat 6alam larutan natrium kar9onat. Pengompleksan ion4ion tem9aga:**; 6apat men3egah ter9entuknya se9uah en6apan 4 kali ini en6apan tem9aga:**; kar9onat. Bene6i3t merupakan reagen yang 6apat mem9uktikan a6anya 5at yang mengan6ung glukosa 6an turunannya, hasil yang positif mem9erikan en6apan 9erwarna merah 9ata karena ter9entuknya ikatan antara atom =u atau tem9aga yang 9erikatan 6engan gugus al6ehi6 6ari glukosa yang 9ersifat aktif. Pa6a kea6aan ini atom tem9aga yang 9era6a pa6a 9entuk ioniknya 6engan 9ilangan oksi6asi 0 akan mem9entuk ikatan ionik 6engan oksigen pa6a sisi al6ehi6 atau keton mem9entuk en6apan (em9aga:**; &ksi6a.:Sloane,0""1;. Biuret 9ereaksi 6engan mem9entuk senyawa kompleks =u 6engan gugus 4=& 6an 4-H pa6a asam amino 6alam protein. Fenol ti6ak 9ereaksi 6engan 9iuret karena ti6ak mempunyai gugus 4=& 6an 4-H pa6a molekulnya. )8i Biuret 9ertu8uan untuk mengetahui a6a ti6aknya gugus ami6a pa6a filtrat yang 6ihasilkan, 6imana 6alam suasana 9asa =u 9ereaksi 6engan 9e9erapa 8enis larutan protein 6an menghasilkan warna 7iolet. Hasil pem9entukan senyawa kompleks, reaksi 9iuret 6apat ter8a6i pa6a molekul yang mengan6ung 0 gugus : 4 = 4 -H 4; yang terikat pa6a satu atom kar9on atau atom nitrogen atau & terikat langsung. Senyawa yang mengan6ung gugus C =4 -H C 6iganti & 6engan gugus C = C-H0 & 4 = C -H0 atau gugus C =H0-H0 8uga positif 6alam u8i Biuret. & )8i test ini 6i9erikan nama 9er6asarkan nama senyawa 9iuret. -H0 C = C - C = C -H0, yang mem9erikan u8i positif. )8i Biuret merupakan u8i karakteristik 6ari protein.

=2Alat 6an Bahan Alat !2 (a9ung reaksi 02 Botol warna gelap 6an tutup 12 Mortar 6an pestle >2 'elas piala D2 Pem9akar spritus #2 Pen8epit kayu E2 Pipet tetes $2 %ak ta9ung reaksi <2 'elas ukur !" ml !"2 !!2 =orong ka3a Alat 9e6ah !2 *kan -ila 02 Akua6es 12 (oluen >2 Putih telur D2 Minyak goreng #2 'liserin D"F E2 %eagen 9iuret $2 %eagen 9ene6i3t <2 ,orek api !"2 !!2 ,ertas saring ,ertas kar9on Bahan

D2

=ara ker8a

!2 Mem9uat ekstrak usus

*kan 6i9e6ah pa6a 9agian perutnya

)sus 6ipisahkan 6ari organ lain. Am9il usus halus 6engan3ara memotongnya.

Diam9il kantong empe6unya

)sus halus 6i9uka 6engan 3ara menyayatnya longitu6inal

)sus 6i9ersihkan 6engan aGua6es, kemu6ian 6imasukkan lagi ke6alam mortar.

Diam9il 0" ml gliserin D"F 6an masukkan ke6alam mortar, haluskan ususnya. Am9il >4D tetes toluen, 6ihaluskan kem9ali. Setelah halus, 9agi usus terse9ut ke6alam tiga 9otol, kemu6ian 6itutup rapat.

Botol 6i9ungkus 6engan kertas kar9on

Di9eri la9el nama kelompok 6an 8enis ikan pa6a 9agian luar 9otol.

6isimpan ekstrak usus terse9ut 6alam ruang gelap selama E hari.

02

(es pengaruh empe6u terha6ap lemak6ise6iakan 6ua ta9ung reaksi. Di9eri

la9el ke6ua ta9ung A 6an B. *si kantong empe6u 6ituangkan ke6alam ta9ung A.

12

Dien3erkan empe6u terse9ut 6engan akua6es hingga 7olumenya 0 ml

Simasukkan 0 ml akua6es ke6alam ta9ung B :se9agai ,ontrol;.

Ditam9ahkan ke6alam ke6ua ta9ung terse9ut masing4masing 0 ml minyak goreng. Diko3ok kuat4kuat 6an 6i9iarkan selama D4!" menit. Diamati ke6ua larutan terse9ut.

>2 (es pem9uktian a6anya amilase Dise6iakan 6ua ta9ung reaksi 6an 9eri la9el A 6a9 B. Dituangkan reagen 9ene6i3t ke6alam ta9ung terse9ut masing4 masing 0 m+.

Disiapkan 6ua ta9ung lain 6an 6i9eri la9el = 6an D.

Dimasukkan larutan kan8i matang en3er4en3er masing4masing 0 ml ke6alam ta9ung = 6an D. )ntuk ta9ung = 6itam9ahkan ! ml ekstrak usus, se6angkan ta9ung D 6itam9ahkan ! m+ akua6es. ,e6ua ta9ung terse9ut 6igoyang selama D4!" menit.

Diteteskan D tetes larutan ke6alam ta9ung = ke ta9ung A, 6an larutan 6alam ta9ung D keta9ung B.

Dipanaskan ta9ung A 6an B selama D menit 6an amati peru9ahan warna yang ter8a6i pa6a masing4masing ta9ung.

D2 (es pem9uktian a6anya proteinase Disiapkan 6ua ta9ung reaksi 6an 6i9eri la9el A 6an B. Dimasukkan ke6alam ta9ung masing4masing ! m+ putih telur yang su6ah 6ien3erkan. Dipanaskan ke6ua ta9ung terse9ut hingga men6i6ih.

,e6ua ta9ung terse9ut 6i6inginkan, setelah 6ingin 6imasukkan ! ml ekstrak usus 6alam ta9ung A 6an ! ml akua6es 6alam ta9ung B. Di6iamkan selama D4!" menit.

Diteteskan masing4masing D tetes reagen 9iuret ke6alam ta9ung A 6an B. Diamati peru9ahan yang ter8a6i pa6a masing4masing ta9ung.

#2 Analisis en5im pen3ernaan pa6a sali7a Dilakukan tes pem9uktian a6anya amilase

Diam9il sali7a pa6a salah satu praktikan

.2 Data Hasil Pengamatan (a9el hasil pengamatan Analisis en5im pen3ernaan -o ! Per3o9aan (es pengaruh empe6u terha6ap lemak (es pem9uktian a6anya 0 amilase Perlakuan Hasil

(es pem9uktian a6anya 1 proteinase

Analisis en5im pen3ernaan > pa6a sali7a