AULA PRTICA : MICROSCOPIA - Partes componentes do microscpio ptico (modelo monocular ou Standart para estudantes) :

) Para!uso macrom"trico %) Para!uso microm"trico *) C(arriot 0) Coluna ou 'ra1o 8) Pilar

#) $cular &) Tu'o ou can()o +) Re,l,er 2) $'3eti,a de imers)o 4 5rande aumento 9) $'3eti,a a seco 4 pe:ueno e m"dio aumento

) Platina ou mesa %) Condensador *) -spel(o plano.c/nca,o 0) 6ia!ra5ma ou 7ris 8) ;ase ou p"

PARTE PTICA : ILUMINAO . 0 o'3eti,as : *<% ou 0 = (seco) 9 = (seco) 09 = (seco) 99 = (o'3eti,a de imers)o) PARTE MECNICA : SUSTENTAO . 'ase ou p" . pilar . coluna ou 'ra1o . para!uso macrom"trico . para!uso microm"trico MANEJO DO MICROSCPIO ? Se5urar o microscpio pelo 'ra1o? %? Acenda a l@mpada (a tomada estA a'aiBo da mesa)? *? Cire o re,l,er de maneira :ue a o'3eti,a de menor aumento !i:ue no eiBo ptico? 0? Colo:ue o condensador em sua posi1)o mais alta? 8? $ dia!ra5ma de,e estar completamente a'erto? #? $l(e atra,"s da ocular e modi!i:ue a posi1)o do espel(o (!ace c/nca,a) de modo :ue a ilumina1)o do campo se3a total e uni!orme? &? Colo:ue a l@mina a ser eBaminada na platina< presa ao c(arriot ou as presil(as? A face da lmi a !"#$ida de lam% &la #& e'f"e(a)#* de$e"+ fica" $#l,ada !a"a cima+? DocaliEe os o'3etos usando inicialmente o para!uso macrom"trico? A'aiBar a o'3eti,a< ol(ando para ela< at" :ue a mesma to:ue ou se aproBime 'astante da l@mina? -nt)o ol(ando pela ocular 5uiar o para!uso em sentido contrArio< deslocando a o'3eti,a para cima lentamente< at" !ocaliEar? 2? Fel(ore o !oco usando o para!uso microm"trico? 9? Para trocar as o'3eti,as< 5ire o re,l,er e mude para uma o'3eti,a de maior aumento< com cuidado para :ue a mesma n)o atin3a a l@mina ou :ue're a lam7nula? 6e um modo 5eral as o'3eti,as secas s)o pari!ocais< isto "< se o o'3eto estA !ocado com uma< estarA muito perto de sG.lo com as outras? Ho entanto< para e,itar danos< o mel(or " ele,ar um pouco o tu'o (para!uso macrom"trico) antes de mudar para outra o'3eti,a de maior aumento? Im!#",a ,e: Colo:ue o detal(e :ue :uiser eBaminar com maior aumento no meio do campo de !raco aumento? ? Se !or necessArio< a'aiBe ou aumente o condensador (ele,ar)< a'ra ou !ec(e o dia!rA5ma para o'ten1)o da mel(or ima5em poss7,el? -Biste um para!uso 5eralmente a'aiBo da platina< para re5ular a dist@ncia entre o condensador e a platina< e um dispositi,o para aumentar e diminuir a a'ertura do dia!rA5ma? %? Para o uso da o'3eti,a de imers)o (:uando determinado) de,e.se o'ser,ar o se5uinte : a) colocar o detal(e a ser eBaminado no centro do !oco com o auB7lio da o'3eti,a de m"dio aumento? ') aumentar a dist@ncia entre a platina e a o'3eti,a (use o para!uso macrom"trico)? c) deposite uma 5ota de leo de c"dro so're a prepara1)o< no !oco iluminado? d) tocar a 5ota com a o'3eti,a de imers)o< ol(ando lateralmente e com muita cautela? e) $l(ando pela ocular< procure lentamente o !oco com o para!uso microm"trico? . ou % oculares (monocular>'iocular) . 7ris ou dia!ra5ma (5radua os raios luminosos) . espel(o plano c/nca,o . condensador . tu'o ou can()o . re,l,er . c(arriot . platina ou mesa

!) Aps o uso< limpar a o'3eti,a de imers)o com Bilol< :ue de,e ser prontamente remo,ido para e,itar o descolamento das lentes? Remo,er com Bilol o leo da l@mina tam'"m? A,e ).# : Cuidado para n)o 5irar o re,l,er e su3ar de leo a o'3eti,a de 09 =? *? Iuando esti,er tra'al(ando apenas com um ol(o (microscpio monocular) manter am'os os ol(os a'ertos< a!im de o'ter maior aten1)o e e,itar a !adi5a? C&idad#' c#m # mic"#'c/!i# : $ microscpio " um instrumento de precis)o !eito com material ,alioso? Ja,endo cuidado por parte de :uem usa< ele durarA lon5o tempo? Fas um pouco de ne5li5Gncia< poderA dani!icA.lo permanentemente? O 0UE NUNCA DE1E SER 2EITO : ) Hunca mer5ul(e as o'3eti,as em l7:uido para limpA.las? Isto pode dani!icA.las permanentemente? %) Hunca permita :ue a luE do sol incida diretamente no espel(o para e,itar danos as lentes e ao prprio ol(o? *) Hunca !ocaliEe mo,endo as o'3eti,as de maior aumento para 'aiBo< a !im de e,itar :ue as l@minas ou lam7nulas se3am :ue'radas 3#4': # al& # 5&e 5&e4"a" &ma lmi a de$e"+ !a(a" 67 "eai' 8 fac&ldade90) Hunca tente !aEer consertos em seu microscpio? Para isso eBi5e.se uma pessoa :uali!icada? 8) Hunca tente desmontar as oculares e o'3eti,as? #) Hunca se retire do la'oratrio sem 5uardar o seu microscpio< e colocar a l@mina de ,olta na caiBa de onde ela !oi retirada? &) Hunca tro:ue pe1as de seu microscpio por outras de outro microscpio?

M:TODOS ;ERAIS DE ESTUDO $s con(ecimentos so're as c"lulas pro5ridem paralelamente ao aper!ei1oamento dos m"todos de in,esti5a1)o citol5ica? Inicialmente< o uso do microscpio ptico possi'ilitou o desco'rimento das c"lulas e a ela'ora1)o de uma teoria se5undo a :ual todos os seres ,i,os s)o constitu7dos por c"lulas? Iuando em +2# !oram !eitas as primeiras o'3eti,as apocromAticas< a microscopia ptica atin5iu sua plena maturidade? Hos anos se5uintes apareceu 5rande a,an1o nas t"cnicas de colora1)o pela desco'erta de muitos corantes naturais e arti!iciais< e os citolo5istas puderam mel(or ,isualiEar os ,Arios componentes celulares? . M<,#d# imedia,#- consiste no estudo microscpico de c"lulas onde n)o ocorre !iBa1)o nem colora1)o? Dornece ,isualiEa1)o direta e imediata das c"lulas do material coletado< (A restri1)o se,era por ser um m"todo de curta dura1)o? . M<,#d# media,#- o!erece ,anta5em por se o'ter um preparado duradouro (permanente) por ter ocorrido pr",ia !iBa1)o :ue preser,a as c"lulas? JA mel(or demonstra1)o dos componentes celulares? $!erece a des,anta5em de promo,er a morte das c"lulas? . E,a!a' de !"e!a"a).# da lmi a : ? Sacri!7cio do animal e a coleta do material? %? 2i=a).#- s)o os a5entes empre5ados para preser,ar as estruturas das pe1as anat/micas e tem por !inalidade : a) e,itar autlise das c"lulasK ') impedir a ati,idade e proli!era1)o 'acterianaK c) endurecer as c"lulas para o!erecer resistGncia necessAria as etapas su'se:uentesK d) conser,ar os detal(es estruturais t)o prBimo :uanto poss7,el da:uele :ue apresentam in ,i,o? *? De'id"a,a).#- " a retirada da A5ua tanto do interior da c"lula :uanto das su'st@ncias intercelulares? L !eita pelo uso do Alcool et7lico em concentra1Mes crescentes< a !im de se e,itar a desidrata1)o ,iolenta e rApida :ue pro,ocaria altera1Mes estruturais irre,ers7,eis nas pe1as (istol5icas? 0? Diafa i>a).#- consiste na su'stitui1)o do Alcool pelo Bilol< o :ual torna a pe1a (istol5ica translNcida? $ dia!aniEador tem o'ri5atoriamente :ue ser misc7,el com o Alcool< e um dissol,ente da para!ina< o :ue !aE com :ue este penetre na intimidade dos tecidos?

8? Im!"e( a).#- " a !ase na :ual o'3eti,a.se :ue a para!ina penetre nos interst7cios das pe1as (istol5icas< ocupando completamente todos os seus espa1os? A impre5na1)o das pe1as (istol5icas " !eita na estu!a onde 3A se tem a para!ina !undida? #? I cl&'.#- " o ato de se colocar as pe1as (istol5icas< aps a impre5na1)o< no interior de uma caiBa de papel ade:uadamente preparada< onde se pMe para!ina !undida? Ao in,"s da caiBa de papel < usa.se i5ualmente a 'arra de LeucO(art? &? Mic"#,#mia- " o tra'al(o de la'oratrio com a !inalidade de cortar as pe1as (istol5icas< utiliEando.se para isso um aparel(o mec@nico c(amado micrtomo? +? C#l#"a).#- depois de !eitas e colocadas nas l@minas de ,idro< as se1Mes do material microtomiEado precisam ser coradas? Sua colora1)o " uma !ase imprescind7,el para :ue estas se3am estudadas e!icientemente ao microscpio ptico? T<c ica' de c#l#"a).# !el# ?E : ? 6espara!inar nos 'an(os de Bilol (* a 8 minutos)K %? Jidratar ou desBiloliEar nos 'an(os de Alcool ( 99.&9P) ( minuto cada)K *? Jidratar com A5ua destilada ( minuto)K 0? Corar pela JematoBilina (% a 9 minutos)K 8? La,ar em A5ua corrente (,ira5em) ( 9 minutos)K #? Corar pela -osina ( a % minutos)K &? 6esidratar ou di!erenciar nos 'an(os de Alcool (&9. 99P) ( a % minutos)K +? Clari!icar nos 'an(os de Bilol (8 minutos)K 2? Fontar com o 'Alsamo de CanadA entre a l@mina e a lam7nula (rApido)?