5.2.4.3.

1 Determinao dos teores de aminocidos individuais totais Nesta anlise foi empregada tcnica de derivao pr-coluna por !"#$ com detector de fluoresc%ncia desenvolvida por !o&en ' (ic&aud )1**3+ ,ue utili-a o reagente .-amino,uinolil-N-&idro/isuccinimidila car0onato )#1!+ com emisso em 252 nm e e/citao em 3*5 nm para aminocidos sulforados e oriundos de &idr3lise cida e com emisso de 322 nm e e/citao de 242 nm para o triptofano para anlise final dos derivados de aminocidos livres e totais. # amostra )53 mg de prote6na+ foi &idrolisada com cido clor6drico )7!l+ )#8#! *42.3291*42+ em seguida o 7!l foi removido em alto vcuo e os aminocidos .1 resolu0ili-ados com 22 :l de 7!l 12 ; 22 mmol." -1 e o volume misturado com 42 :l de tampo 0orato )p7 4.4+ e derivati-ada por adio de 22 :l de #!1 12 mmol." -1 em acetonitrila. # separao dos aminocidos derivati-ados foi otimi-ada por meio da coluna #!!1.<ag <( !14 3 * = 152 mm 4 :m de taman&o de part6cula. # temperatura dacoluna foi mantida a 3> ?! )flu/o de 1m".min -1 + e o in@etor em temperatura am0iente. # ,uantificao foi reali-ada pela comparao com uma soluo padro contendo uma mistura de

aminocidos livres )padroni-ao e/terna+. 8s resultados foram e/pressos em mg.122g -1 de amostra. 8s aminocidos livres foram analisados pela derivati-ao na soluo p3s&idr3lise. # metionina e a cisteina foram o0tidas por o/idao em cido perf3rmico )#8#! **4.1292222+. Aara analisar o triptofano o0tido por &idr3lise 0sica foi utili-ado 52 mg de prote6na )#8#! *44.1591*44+. # &idr3lise ocorreu a 112 B! por 22 &oras em soluo de N#87 4 2 ( e 122 :" de 1-octanol em ampola lacrada. 8 material &idrolisado foi resuspenso em 52 m" de gua (illi1.