Este material ha sido organizado por Martha Cecilia Daza Espinosa,

profesora de la Universidad Industrial de Santander para el curso

de Bioquímica I para la carrera de Biología.

La información fue tomada del libro:

David,
D id L.
L Nelson,
N l Mi h l M.
Michael M Cox.
C Lehninger
L h i P i i l off
Principles
Biochemistry. 2000. Third Edition. Worth Publishers.
ALTO GRADO DE ESPECIFICIDAD Y EFICIENCIA
 ENZIMAS. Características
I. ALTA ESPICIFICIDAD.
• Especificidad de sustrato. El sustrato (S) es la
molécula sobre la que la enzima ejerce su acción
catalítica.
• Especificidad
p de acción. Cada reacción está
catalizada por una enzima específica.
I
I. ALTA EFICIENCIA
Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su
velocidad por un millón de veces e incluso más.
más

Consulte el nombre de dos enzimas y el sus sustratos y explique en

qué consiste su reacción y por qué son altamente específicas. PDB.
 Nomenclatura y Clasificación
Cada enzima es designada por:
• Nombre recomendado: corto y apropiado
p p ppara su uso ggeneral.
• Nombre sistemático: identifica la reacción que cataliza.
• Número:
ú se emplea
l cuando
d se necesita
i lal identificación
id ifi ió inequívoca
i í
de la enzima.
No. Clase Tipo de reacción catalizada
1 Oxidoreductasas Transferencia de electrones (iones hidruro o átomos de H)
2 Transferasas Reacciones de transferencia de grupo
3 Hidrolasas Reacciones de hidrólisis (transferencia de grupos
funcionales al agua)
4 Li
Liasas Adi ió d
Adición de grupos a ddobles
bl enlaces
l o fformación
ió
de dobles enlaces por remoción de grupos
5 Isomerasas Transferemcia de grupos dentro de la misma molécula
para producir isómeros
6 Ligasas Formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N
por reacciones de condensación acopladas a ruptura de ATP
CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENZIMAS

Cada enzima tiene asignado un número de clasificación de cuatro

dígitos y un nombre sistemático que identifica la reacción que
cataliza.
ATP + D
D-Glucosa
Glucosa ADP + D
D-glucosa
glucosa 6-fosfato
6 fosfato

El nombre sistemático formal de la enzima catalizadora de la anterior

reacción es: ATP:glucosa transferasa que indica que cataliza la
transferencia de un grupo fosforilo del ATP a la Glucosa.

Su número de la Comisión de Enzimas es (E.C.) es 2.7.1.1. El primer

dígito (2) indica el nombre de la clase (transferasa),
(transferasa) el segundo (7)
la subclase (fosfotransferasa), el tercer dígito (1), una fosfotransferasa
con un grupo hidroxilo como aceptor, y el cuarto dígito (1), D-glucosa
D glucosa
como el grupo aceptor del fosforilo. Nombre común HEXOQUINASA
Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and
Molecular Biology (NC IUBMB) In consultation with the IUPAC
(NC-IUBMB) IUPAC-IUBMB
IUBMB Joint
Commission on Biochemical Nomenclature (JCBN)
Enzyme Nomenclature
R
Recommendations
d ti off th
the N
Nomenclature
l t C
Committee
itt off th
the IInternational
t ti lUUnion
i off
Biochemistry and Molecular Biology on the Nomenclature and Classification of
Enzymes by the Reactions they Catalyse
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/ World Wide Web version prepared by
G.P. Moss
Department
p of Chemistry,
y, Queen
Q Mary
y University
y of London,,
Mile End Road, London, E1 4NS, UK , g.p.moss@qmul.ac.uk

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page contains general information on enzyme nomenclature. It includes links to
individual documents, and the number of these will increase as more sections of the
enzyme list are revised.
revised It also provides advice on how to suggest new enzymes for
listing, or correction of existing entries.
1959 'To consider the classification
f and nomenclature off enzymes
y and
coenzymes, their units of activity and standard methods of assay,
together with the symbols used in the description of enzyme kinetics.'
Tabla: Eficiencia de las reacciones catalizadas por algunas
enzima

Enzima Velocidad en Velocidad de reacción Rendimiento

ausencia
i dde enzima
i catalizada
t li d
Anhidrasa carbónica –1 6 6
1,3 X 10 1,0 X 10 7,7 X 10
C i
Corismato
t mutasa
t –5
5 50 6
2,6 X 10 1,9 X 10

Triosafosfato isomerasa –6 4300 9

4,3 X 10 1,0 X 10

Carboxipeptidasa A –9 578 11
3,0 X 10 1,9X 10
AMP nucleosidasa –11
11 60 12
1 0 X 10
1,0 6 0 X 10
6,0

Nucleasa estafilococal -13 95 14

1,7 X 10 5,6 X 10
 EFICIENCIA CATALÍTICA
La mayoría de las reacciones catalizadas por enzimas son muy
eficientes y transcurren desde 106 hasta 1014 veces más rápido
que la misma reacción no catalizada. Típicamente,
q p , cada
molécula de enzima es capaz de transformar cada segundo de
100 a 1000 moléculas de sustrato en producto.
El número de moléculas de sustrato transformadas a producto
por molécula de enzima en cada segundo, se conoce como el
número de recambio o K cat .

Todas las reacciones en los sistemas biológicos son catalizadas por

enzimas.
Una reacción tan sencilla como la hidratación del CO2 es catalizada
por una enzima, la anhidrasa carbónica. Cada molécula enzimática
ppuede hidratar 105 moléculas de CO2 en un segundo.
g
CO2 + H20 ---> H2CO3 ---> HCO3- + (H+) (pK1 = 6,35)
Think about how convenient it is to be able to eat. Each one of
your ten trillion cells requires a constant supply of nourishment.
nourishment
But we don't have to worry about this--we merely eat our dinner
and our bodyy does the rest. The food is digested
g and the useful
pieces are delivered to cells throughout the body, using the
bloodstream as the delivery system. Delivery of water-soluble
molecules, like sugar, is easy. They float in the watery bloodstream
and are picked up by cells along the way. Other important
nutrients however,
nutrients, however are not soluble in water,
water so special carriers
must be made to chaperone them to hungry cells.
Carrying
y g Fattyy Acids
Serum albumin, shown here from PDB entry 1e7i, is the carrier
of fatty acids in the blood. Fatty acids are essential for two
major
j things
hi in
i your body.
b d They h are the
h building
b ildi blocks
bl k forf
lipids, which form all of the membranes around and inside
cells They are also rich sources of energy,
cells. energy and may be broken
down inside cells to form ATP. Thus, your body maintains a
storehouse of fattyy acids,, stored as fat. When yyour bodyy needs
energy or needs building materials, fat cells release fatty acids
into the blood. There, they are picked up by serum albumin and
d li
deliveredd to distant
di parts off the
h body.
b d
A Versatile Protein
Serum albumin is the most plentiful protein in blood plasma. Each
protein
i molecule
l l can carry seven fatty f acid
id molecules.
l l They
Th bindbi d
in deep crevices in the protein, burying their carbon-rich tails
safely away from the surrounding water.water Serum albumin also binds
to many other water-insoluble molecules. In particular, serum
albumin binds to manyy drugg molecules, such as ibuprofin,
p and can
strongly affect the way they are delivered through the body.
A Generic Protein
Si
Since serum albumin
lb i is i so common in i the
h blood
bl d andd so easy to
purify, it was one of the first proteins to be studied by scientists.
Today the similar protein from cows--bovine serum albumin or
Today,
BSA--is widely used in research when a generic protein is needed.
Manyy enzymes
y are unstable when theyy are pplaced in a dilute
solution, so it is difficult to study them in the laboratory.
 LA CATÁLISIS ENZIMÁTICA Y SU CONTROL
SON
INDISPENSABLES PARA LA VIDA

Las enzimas son proteínas altamente especializadas que tienen

como función la catálisis o regulación de la velocidad de las
reacciones q
químicas que
q se llevan a cabo en los seres vivos.

La mayoría de las enzimas son proteínas con excepción de un grupo

pequeño de moléculas de ARN catalítico que, usualmente rompen y
sintetizan enlaces fosfodiester; a estas moléculas se les denomina
“ribozimas”.
Únicamente, son catalizadas las reacciones necesarias
para la célula,
célula en un momento determinado.
determinado

Cuando los recursos químicos son abundantes se

hace síntesis y almacenamiento de glucosa y otros
metabolitos.

Cuando las fuentes químicas son escasas, éstos

depósitos son usados para metabolismo celular
energético.
energético
La energía
L í química
í i es utilizada
tili d económicamente,
ó i t
parcelada en varias rutas metabólicas de acuerdo
con las necesidades celulares.

La disponibilidad
p de catalizadores ppoderosos
específicos para cada reacción hace posible la
sinfonía compleja que llamamos vida.
 ENZIMAS PM entre 12.000 y un millón.

COFACTOR: Molécula requerida por algunas enzimas para

su actividad.

Iones inorgánicos
COFACTOR M lé l orgánica
Molécula á i = Coenzima
C i

Coenzima: Unión débil. Ejemplos:NAD, NADP, FAD,

FMN, ATP, CoA, Vitaminas.

Grupo prostético: Coenzima u ión metálico unido fuertemente

a la
l enzima,
i a veces covalentemente.
l t t
Ejemplo: Los Citocromos
 Apoenzima + Cofactor = Holoenzima

Holoenzima: Una enzima completa catalíticamente activa unida a

su coenzima u iones metálicos.

Apoenzima:
p Parte pprotéica de una enzima sin su coenzima u iones
 SITIO ACTIVO

El sustrato se une a la enzima a través de numerosas

interacciones débiles como son: puentes de
hidrógeno,
g , hidrofóbicas,, etc,, en un lugar
g específico,
p , el
sitio activo.

Sustrato (S)

Enzima (E) Complejo ES Enzima + Producto

Características de los sitios activo

1 El sitio activo es una porción relativamente pequeña del volumen

1.
total de la enzima.
2 El sitio
2. i i activo
i es una unidad
id d tridimensional
idi i l formada
f d por grupos
que proceden de distintas partes de la secuencia lineal de residuos
de aminoácidos del polipéptido.
polipéptido
3. Los sustratos se unen a las enzimas por numerosas fuerzas
débiles.
débiles
4. Los sitios activos son hoyos o hendiduras complementarias a la
f
forma dde los
l sustratos.
5. La especificidad del enlace depende de la disposición exactamente
definida de los átomos del sitio activo.
MODELOS PARA EXPLICAR LA CATÁLISIS ENZIMÁTICA

I. Ajuste inducido

II. Modelo llave - cerradura

Las enzimas afectan la velocidad de las reacciones no el
equilibrio
k1 k2
E+S ES E+P
k −1 k−2

ΔG º : cambio de energía libre estándar

T = 298 K , 1atm [soluto ] = 1M , o, pH =0

ΔG´º : cambio de energía libre estándar bioquímico

T , 1atm ⎡ H + ⎤ ≠ 1M , o, pH ≅ 7,0
⎢⎣ ⎥⎦

Coordenada de reacción para una reacción química

 Primera leyy de la termodinámica

E =q+w
}−
+
ΔE = E final − Einicial

H = q p =cte
La primera ley de la termodinámica no puede usarse para predecir
Si una reacción ocurre espontáneamente
p

}−
+ Endotérmico
ΔH = H final − H inicial Exotérmico
 Segunda ley de la termodinámica
Un proceso tiene lugar espontaneámente si aumenta la suma de la
entropía
p del sistema y de su entorno.
(ΔS sistema − ΔSentorno )〉 0, espontáneo
La entropía
L í es una medida
did del
d l grado
d de
d desorden
d d . Positiva
P i i cuando
d
aumenta el desorden.
Energía
g libre de Gibbs ((G):
)
ΔG = ΔH − T ΔS
El cambio de volumen es pequeño de manera que
ΔH = ΔE + PΔV
ΔG ≅ ΔE − T ΔS
ΔH = ΔE

ΔG = G productos − Greactivos
+ La reacción no ocurre.
ΔG = - La reacción puede ocurrir espontáneamente.
0 La reacción esta en el equilibrio.
El cambio de energía
g libre estándar de una reacción está directamente
relacionado con la constante de equilibrio

+ La reacción no ocurre.
ΔG = - La reacción puede ocurrir espontáneamente.
0 La reacción esta en el equilibrio.
q

A+ B R C + D
[C ][ D]
ΔG = ΔG '0 + RT ln
[ A][ B]

ΔG o es tan dar : T=250C, [H+]=1M, pH=0

ΔG o ' es tan dar en bioquimica: T=250C, [H+]≠1M, pH=7,0

[C ][ D]
0 = ΔG + RT ln
'0

[ A][ B]
El cambio de energía
g libre estándar de una reacción está directamente
relacionado con la constante de equilibrio

ΔG = − RT ln K
0 '
eq

ΔG ' = −2,303
0
2 303RT log K '
eq

−ΔG ' 0 /(2,303

K = 10
'
eq
( , RT )

−3
R = 1,98
1 98 x10 kcal / mol , T = 298 K
−ΔG ' 0 /(1,336)
K = 10
'
eq
( )
ΔG = ΔG + RT ln
'0 [C ][ D]
[ A][ B]

El criterio de espontaneidad es ΔG 0 y no ΔG '0 .

 IIsomerización
i ió de d la
l dihidroxiacetona
dihid i t f f t
fosfato
a gliceraldehído-3-fosfato

Analizar el ejercicio de la página 187

 Las enzimas aceleran las reacciones estabilizando los estados de
transición

La velocidad de una reacción depende de la energía libre de activación,

ΔG † que no esta relacionda con ΔG
 PAPEL DE LA ENERGÍA DE ENLACE EN LA CATÁLISIS
ENZIMÁTICA
binding energy

Las enzimas aceleran las reacciones disminuyendo ΔG , la barrera de

†

Activación. La combinación ES crea una nueva vía de reacción cuya

Energía del estado de transición es menor que en la reacción en
ausencia de la enzima.
 CATÁLISIS COVALENTE

Tiene lugar por la formación temporal de un enlace covalente entre

el sustrato (S) y el catalizador (E). Desempeña un papel importante la
sustitución
i i nucleofílica
l f li y electrofílica.
l f li

CATÁLISIS
Á Á
ÁCIDO - BÁSICA
Á

En la catálisis ácida el paso clave es la transferencia de un protón

de la enzima al sustrato y en la básica, la abstracción de un protón
del sustrato por la enzima.

34
 CATÁLISIS ION METAL
Los iones metálicos desempeñan un papel en la catálisis
estabilizando cargas negativas.

Ión Zinc en el sitio activo de la carboxipeptidasa. 35

El p
poder catalítico de las enzimas reside en su :
Facilidad para tener cambios conformacionales en los enlaces
covalentes durante la reacción enzimática.

Capacidad de formar enlaces covalentes transitorios con el

sustrato

Capacidad de formar muchísimas interacciones débiles con el

sustrato.

La mayoría de la energía requerida para disminuir la energía

d activación
de ti ió provienei de
d las
l interacciones
i t i no covalentes
l t entre
t
la enzima y el sustrato.
 MECANISMO DE ACCIÓN DE ENZIMAS
PURIFICADAS

Hay varias aproximaciones:

• Métodos estructurales
• Métodos de mutagénesis dirigida que permiten
examinar el rol de aminoácidos específicos
p
• Métodos de CINÉTICA ENZIMÁTICA. Son los más
antiguos y los más importantes, aún hoy día.
1. Determinar la velocidad de la reacción.
2. Determinar los cambios en la reacción en respuesta a
cambios en parámetros experimentales.
 CINÉTICA ENZIMÁTICA

k1 k2
E+S ES E+P
k −1 k−2
Turnover Number. The h rate constant (First
( i order)) for
f the
h
breakdown of the [ES] complex, kcat (k2), is also known as the
number that is the maximum number of substrate
turnover number,
molecules processed/active site (moles substrate/mole active site):
kcat=Vmax / [E]total.
[ ]
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO

Reacción “in vitro” catalizada por una enzima purificada

Es complicado puesto que la [S ] cambia con el curso de la

reacción.

Una aproximación en los estudios de cinética es medir la

velocidad inicial, V0 , cuando la concentración de [S ] es,
generalmente más grande que la [E ] .
generalmente,

Si la medida se hace en un tiempo muy corto, se pueden

considerar los cambios en la [S ] como despreciables y puede
considerarse
id a lla [S ]como una constante.
t t
Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad
de una reacción catalizada por una enzima.
V máx [S ]
Ecuación de Michaelis-Menten V 0 =
K m + [S ]
µM/min)
dad iniciial, Vo ( µ

1 E+S
k1
ES
k2
E+P
Vmáx
2 k −1 k−2

V0 = k 2 [ES ]
Velocid

Concentración de sustrato, [S ] (mM) 1

K m = [S ], cuando
d : V0 = Vmáx
2
El complejo ES es la clave para comprender este comportamiento cinético
 EXPRESIÓN CUANTITATIVA DE LA RELACIÓN ENTRE
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO Y VELOCIDAD
DE REACCIÓN

Vmáx [S ]
V0 =
k máx + [S ]
La relación entre la [S ] y V0 puede ser representada por la ecuación
d Michaelis-Menten.
de Mi h li M t E Esta
t ecuación
ió fue
f derivada
d i d partiendo
ti d ded la
l
hipótesis que el paso limitante en las reacciones enzimáticas es la
ruptura del complejo ES a P y E libre.

k1 k2
E+S ES E+P
k −1 k−2

Al inicio de la reacción ppodemos suponer

p qque la [P ]es despreciable
p y
podemos simplificar, ignorando K − 2 .
GRÁFICA DE LINEWEAVER
LINEWEAVER--BURK
O DEL DOBLE RECÍPROCO

45
 TRANSFORMACIONES DE LA ECUACIÓN DE
MICHAELIS-MENTEN

Vmáx [S ]
V0 =
K m + [S ]

EL GRÁFICO DEL DOBLE RECÍPROCO:

Permite la obtención del valor de la Km de una manera más precisa.

1 K m + [S ]
=
V0 Vmáx [S ]

1
=
Km
+
[S]
V0 Vmáx [S ] Vmáx [S ] 48
EXPRESIÓN CUANTITATIVA DE LA RELACIÓN ENTRE
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO Y VELOCIDAD
DE REACCIÓN
Vmáx [S ] V0 = Vmáx
V0 = [ES ]
Km

Estado estacionario
µM/min))

1
Vmáx Vmáx [S ] Un aumento en
2 V0 = la [S ] no afecta
Vo ( µ

k máx + [S ] la velocidad de
la reacción.
reacción

Km [S ]((mM )
Km = [S ] en la que V 0 es 1 Vmáx 49
2
 ANÁLISIS DE LA CONSTANTE DE MICHAELIS
MICHAELIS-
MENTEN
Km
1
[S ], en la que V0 = Vmáx
2

k2 + k−1
Km =
k1 Medida de la disociación de ES
k−1
Si k2 <<<< k−1 ⇒ K m = = Kd
k1
ANÁLISIS DE LA VELOCIDAD MÁXIMA

Vmax
V max= k2 [Et ] kcat = k2
kcat [Et ][S ]
V0 =
K m + [S ]

k1 k2 k3
E+S ES EP E+P
k −1 k−2

V max= k3 [Et ] kcat = k3

 kcat
Número de moléc
moléculas
las de sustrato
s strato convertidas
con ertidas en producto
prod cto
cuando la enzima está saturada con sustrato
kcat
km
Número de recambio K cat (K 2 )

Constante de primer orden para la ruptura del complejo [ES],

Es el número máximo de moléculas de sustrato procesadas/sitio

activo (moles de sustrato/moles de sitio activo):

K catt = Vmáx
á / Etotal
t t l
 Regulación de la actividad enzimática

Las células pueden regular la actividad enzimática

mediante:
•El pH.
•Concentración de cofactores (activadores e
inhibidores).
)
•Concentración de sustrato y de enzima (regulación de
l expresión
la ió de
d los
l genes))
•Degradación
g de la enzima.
•Compartimentalización enzimática 56
Sin embargo,
Si b existen
i t enzimas
i con propiedades
i d d
que les confieren específicamente papeles
reguladores del metabolismo.
Estas formas,, mucho más especializadas
p pueden
p
ser:
Enzimas alostéricas: cuya actividad es regulada
por la unión no covalente de un metabolito
específico
ífi a un centro
t ded la
l enzima
i distinto
di ti t del
d l
sitio activo.
Enzimas moduladas covalentemente: con formas
activas e inactivas interconvertibles p
por acción
de otras enzimas.
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

La inhibición de la actividad
enzimática
i á i por moléculas
lé l
específicas pequeñas y por iones es
importante porque constituye el
principal mecanismo de control en
los sistemas biológicos.

Muchos
M h fá fármacos y agentes tóxicos
ó i
actúan inhibiendo a las enzimas.

58
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

INHIBIDORES son moléculas que aumentan o disminuyen la velocidad

de las reacciones catalizadas.
P d ser utilizados
Pueden tili d como drogas.
d P ejemplo
Por j l la
l aspirina
i i (ácido
(á id
acetilsalisílico) inhibe el primer paso de la síntesis de prostaglandinas.

El estudio de los inhibidores también ofrece información sobre los

mecanismos enzimáticos y ayuda en la definición de rutas metabólicas.

Competitivos
1
1. INHIBIDORES REVERSIBLES No competitivos
Acompetitivos

2. INHIBIDORES IRREVERSIBLES 59
 Inhibición enzimática

I Reversible: Hay disociación del complejo E-I

I. EI

• Competitiva: el S y el I compiten por el sitio activo de la

enzima.

• No competitiva:
N titi El I se fija
fij a la
l enzima
i en un sitio
iti de
d la
l
molécula diferente al sitio activo.

• Acompetitiva: el I se combina con el complejo enzima-sustrato

para formar un complejo inactivo enzima-sustrato-inhibidor, el
cual no experimenta su transformación posterior en producto.
 Inhibición enzimática

II. Inhibición Irreversible:

El inhibidor se une fuertemente a la enzima puede ser

d manera covalente
de l t o no y su disociación
di i ió es lenta.
l t

Agentes alquilantes (iodoacetamida)

E-CH2SH + ICH2-C-NH2 E-CH2-S-CH2-C-NH2 + HI

 1 ⎛ αK m ⎞ 1 1
⎜
=⎜ ⎟ +
Inhibición competitiva V0 ⎝ Vmáx ⎠ [S ] Vmáx
⎟
Inhibición competitiva
 INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

Una tterapia
U i médica
édi basada
b d en ell conocimiento
i i t deld l mecanismo
i
de inhibición competitiva es el tratamiento de la intoxicación
con metanol.

Al h l ddeshidrogenasa
Alcohol hid + Metanol
M l F
Formaldehído
ld híd

CEGUERA

Alcohol deshidrogenasa
g + Etanol Acetaldehído
66
1 ⎛ Km ⎞ 1 α'
= ⎜⎜ ⎟⎟ +
V0 ⎝ Vmáx ⎠ [S ] Vmáx
 INHIBICIÓN NO COMPETITIVA

E+S ES E+P
+
I
'
kI
ESI
'
k I es la constante de enlazamiento del inhibidor al complejo
p j ES.

Vmáx [S ] [I] [ES ][I ]

V0 = Donde α '
=1+ y K I' =
K m + α ' [S ] KI [ESI ]

71
Vmáx
Competitivo Acompetitivo Mezclado No competitivo
Proteólisis: zimógenos (pepsinógeno, quimotripsinógeno,
tripsinógeno)
 ENZIMAS SENCILLAS tienen un sitio activo

Son las que tienen “otras formas” o

conformaciones inducidas por el enlace de
moduladores.
 ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Son proteínas que contienen dos o más sitios de enlace

topológicamente
p g distintos,, los cuales interactúan funcionalmente el
uno con el otro.
Esto significa que hay al menos dos sitios capaces de enlazar
ligandos (sustratos, inhibidores, etc) en diferentes posiciones. El
enlace de un ligando en un sitio altera las propiedades del otro u
otros.

Las enzimas alostéricas son oligómeros que tienen otras formas o

conformaciones inducidas por enlace con los moduladores.
Sustrato
Activadores
MODULADORES Molécula diferente
Inhibidores 78
INTERACCION DE SUBUNIDADES
EN ENZIMAS ALOSTERICAS
Inhibición por feedback alostérico

La conversión de L-treonina a
L-isoleucina es catalizada por una secuencia
d enzimas
de i (E1 a E5).
E5)

La Treonina deshidratasa (E1) es inhibida por

feedback alosterico por la L-isoleucina el
producto final de la secuencia, pero no por
ninguno de sus cuatro intermediarios (A to D).
LOS
OS MODULADORES
O U O S ALOSTÉRICOS
OS COS INDUCEN
N UC N
CAMBIOS CONFORMACIONALES ENTRE
FORMAS ACTIVAS E INACTIVAS DE LAS
ENZIMAS Y EL EFECTO SOBRE LA CINÉTICA
ES DISTINTO DEL DE LOS INHIBIDORES
INCOMPETITIVOS.
 Vmáx [S ]
h
V0 =
+ [S ]
h
Cuando h=1 la enzima es no alostérica K 0h,5
 La cinética
L i éti ded la
l mayoría
í de
d las
l enzimas
i alostéricas
l té i (reguladoras)
( l d )
puede estudiarse mediante un modelo sencillo que tiene las siguientes
propiedades:

Estado R activo Estado T inactivo

• La enzima puede existir en dos estados conformacionales: T (estado

tenso, no funcional, KM aumentada) y R(relajado, funcional, KM
baja). En ausencia de sustrato los dos estados R y T están equilibrio.
• Un cambio en el estado conformacional cambia las propiedades de
los centros activos y así algunos moduladores se unen
ppreferentemente a una conformación, mientras qque los otros se unirán
a la otra.
84
MODIFICACION COVALENTE
PROTEÓLISIS
EFECTO DEL pH Y DE LA TEMPERATURA
SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
pH ÓPTIMO DE ALGUNAS ENZIMAS
pH
Las enzimas poseen un pH característico donde su actividad es
máxima: por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye.
La relación
L l ió pH H – actividad
ti id d enzimática,
i áti constituye
tit un factor
f t de d
regulación intracelular de la actividad enzimática.
El pH puede afectar de varias maneras:
•El sitio activo p
puede contener aminoácidos con grupos
g p
ionizados que pueden variar con el pH.
•La
La ionización de aminoácidos que no están en el sitio
activo puede provocar modificaciones en la
conformación de la enzima.
•El sustrato puede verse afectado por las variaciones del
p
pH.
La pepsina del estómago, presenta un óptimo a pH=2,
y la fosfatasa alcalina del intestino un pH= 12
Temperatura
p
La velocidad de las reacciones enzimáticas
aumentan por lo general con la temperatura, dentro
del intervalo en q
que la enzima es estable y activa.
La velocidad, por lo general, se duplica por cada 10
C°° de aumento de temperatura. A bajas
p
temperaturas, la velocidad de reacción disminuyey o
se detiene.
Por encima de la temperatura óptima, las enzimas
se desnaturalizan y pierden
p su capacidad
p catalítica.
La unidad internacional está definida como la cantidad
de enzima que cataliza la transformación de un micromol
de sustrato
s strato por min
minuto.
to
La ACTIVIDAD ESPECIFICA de un preparado enzimático
es el número de Unidades de enzima por miligramo de
proteína.