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7 - Edio

de Janeway

Kenneth Murphy
Inclui CD-ROM

Paul Travers

Mark Walport

Equipe de traduo:
Ana Paula Franco Lambert (cap. 2)
Farmacutica bioqumica. Mestre em Gerontologia Biomdica pela Pontifcia Universidade Catlica do Rio Grande do Sul (PUCRS). Doutoranda em Biologia Celular e Molecular na Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS). Professora do Departamento de Cincias Biomdicas da Universidade de Caxias do Sul (UCS).

Christian Viezzer (cap. 6)


Bilogo. Mestre em Engenharia e Tecnologia de Materiais pela PUCRS. Doutorando em Engenharia de Minas, Metalrgica e Materiais na UFRGS.

Cristina Beatriz C. Bonorino (cap. 5)


Biloga. Mestre em Gentica pela UFRGS. Doutora em Imunologia pela UFRGS/University of Colorado, USA. Professora da Faculdade de Biocincias pela PUCRS.

Denise C. Machado (iniciais, apndice I, cap. 4, cap. 7, cap. 8 e ndice remissivo)


Biloga. Mestre em Gentica pela UFRGS. Doutora em Imunologia pela University of Sheffield, Inglaterra. Professora da Faculdade de Medicina e pesquisadora do Instituto de Pesquisas Biomdicas da PUCRS.

Florencia Mara Barb-Tuana (cap. 12, 14)


Bioqumica. Mestre e Doutora em Cincias Mdicas: Nefrologia Bsica pela UFRGS.

Gaby Renard (cap. 9)


Mdica veterinria. Mestre e doutora em Cincias Biolgicas: Bioqumica pela UFRGS. Pesquisadora da Quatro G Pesquisa & Desenvolvimento/TECNOPUC.

Gustavo Leivas Barbosa (cap. 13)


Bilogo. Mestre em Pediatria e Sade da Criana pela Faculdade de Medicina da PUCRS. Doutorando em Pediatria e Sade da Criana da Faculdade de Medicina da PUCRS.

Isabel Cristina Ribas Werlang (cap. 11, 15)


Farmacutica bioqumica. Mestre e Doutoranda em Biologia Celular e Molecular na UFRGS.

Lucien Peroni Gualdi (cap. 1, 16, apndices II a V, glossrio)


Fisioterapeuta. Mestranda em Pediatria e Sade da Criana na PUCRS.

Paula Mssnich de Freitas (cap. 3)


Biloga. Mestre em Gerontologia Biomdica pela PUCRS.

Vanessa Argondizo dos Santos (cap. 10)


Biloga. Mestre em Medicina e Cincias da Sade pela PUCRS. Doutoranda em Medicina e Cincias da Sade na PUCRS.

Kenneth Murphy Paul Travers Mark Walport


Washington University School of Medicine, St. Louis Anthony Nolan Research Institute, London The Wellcome Trust, London

Com a colaborao de: Michael Ehrenstein


University College London, Division of Medicine

Claudia Mauri
University College London, Division of Medicine

Allan Mowat
University of Glasgow

Andrey Shaw
Washington University School of Medicine, St. Louis

imuno
7 Edio

biologia
de Janeway
Denise C. Machado
Biloga. Mestre em Gentica pela UFRGS. Doutora em Imunologia pela University of Sheffield, Inglaterra. Professora da Faculdade de Medicina e pesquisadora do Instituto de Pesquisas Biomdicas da PUCRS.

Consultoria, superviso e reviso tcnica desta edio:

2010

Obra originalmente publicada sob o ttulo Janeway's immunobiology, 7th Edition. ISBN 9780815341239 2008 by Garland Science, Taylor & Francis Group, LLC All Rights Reserved. Authorized translation from English language edition published by Garland Science, part of Taylor & Francis Group LLC. Capa: Mrio Rhnelt Preparao de original: Magda Regina Chaves Leitura final: Lara Gobhardt Martins Editora Snior Biocincias: Letcia Bispo de Lima Editorao eletrnica: Techbooks

M978i

Murphy, Kenneth. Imunobiologia de Janeway [recurso eletrnico] / Kenneth Murphy, Paul Travers, Mark Walport ; traduo Ana Paula Franco Lambert ... [et al.]. 7.ed. Porto Alegre : Artmed, 2010. Editado tambm como livro impresso em 2010. ISBN 978-85-363-2175-2 1. Imunologia. I. Ttulo. II. Travers, Paul. III. Walport, Mark. CDU 616-097

Catalogao na publicao: Renata de Souza Borges CRB-10/1922

Reservados todos os direitos de publicao, em lngua portuguesa, ARTMED EDITORA S.A. Av. Jernimo de Ornelas, 670 - Santana 90040-340 Porto Alegre RS Fone (51) 3027-7000 Fax (51) 3027-7070 proibida a duplicao ou reproduo deste volume, no todo ou em parte, sob quaisquer formas ou por quaisquer meios (eletrnico, mecnico, gravao, fotocpia, distribuio na Web e outros), sem permisso expressa da Editora. SO PAULO Av. Anglica, 1091 - Higienpolis 01227-100 So Paulo SP Fone (11) 3665-1100 Fax (11) 3667-1333 SAC 0800 703-3444 IMPRESSO NO BRASIL PRINTED IN BRAZIL

Agradecimentos

Agradecemos aos seguintes especialistas, que leram parte ou toda a 6 e/ou 7 edio, contribuindo com sugestes valiosas para esta nova edio. Captulo 1: Hans Acha-Orbea, Universit de Lausanne; Leslie Berg, University of Massachusetts Medical Center; Michael Cancro, University of Pennsylvania; Elizabeth Godrick, Boston University; Michael Gold, University of British Columbia; Harris Goldstein, Albert Einstein College of Medicine; Kenneth Hunter, University of Nevada, Reno; Derek McKay, McMaster University; Eleanor Metcalf, Uniformed Services University of the Health Sciences, Maryland; Carol Reiss, New York University; Maria Marluce dos Santos Vilela, State University of Campinas Medical School, Brazil; Heather Zwickey, National College of Natural Medicine, Oregon. Captulo 2: Alan Aderem, Institute for Systems Biology, Washington; John Atkinson, Washington University School of Medicine, St. Louis; Marco Colonna, Washington University School of Medicine, St. Louis; Jason Cyster, University of California, San Francisco; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Lewis Lanier, University of California, San Francisco; Ruslan Medzhitov, Yale University School of Medicine; Alessandro Moretta, University of Genova, Italy; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Kenneth Reid, University of Oxford; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Caetano Reis e Sousa, Cancer Research UK; Andrea Tenner, University of California, Irvine; Eric Vivier, Universit de la Mditerrane Campus de Luminy; Wayne Yokoyama, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 3: David Davies, NIDDK, National Institutes of Health, US; K. Christopher Garcia, Stanford University; David Fremont, Washington University School of Medicine; Bernard Malissen, Centre dImmunologie Marseille-Luminy; Ellis Reinherz, Harvard Medical School; Roy Marriuzza, University of Maryland Biotechnology Institute; Robyn Stanfield, The Scripps Research Institute; Ian Wilson, The Scripps Research Institute. Captulo 4: Fred Alt, Harvard Medical School; David Davies, NIDDK, National Institutes of Health, US; Amy Kenter, University of Illinois, Chicago; Michael Lieber, University of Southern California; John Manis, Harvard Medical School;

Michael Neuberger, University of Cambridge; David Schatz, Yale University School of Medicine; Barry Sleckman, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 5: Paul Allen, Washington University School of Medicine, St. Louis; Siamak Bahram, Centre de Recherche dImmunologie et dHematologie; Michael Bevan, University of Washington; Peter Cresswell, Yale University School of Medicine; David Fremont, Washington University School of Medicine, St. Louis; K. Christopher Garcia, Stanford University; Ted Hansen, Washington University School of Medicine, St. Louis; Jim Kaufman, Institute for Animal Health, UK; Philippa Marrack, National Jewish Medical and Research Center, University of Colorado Health Sciences Center, Denver; Jim McCluskey, University of Melbourne, Victoria; Jacques Neefjes, The Netherlands Cancer Institute, Amsterdam; Chris Nelson, Washington University School of Medicine, St. Louis; Hans-Georg Rammensee, University of Tubingen, Germany; John Trowsdale, University of Cambridge; Emil Unanue, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 6: Leslie Berg, University of Massachusetts Medical Center; John Cambier, University of Colorado Health Sciences Center; Doreen Cantrell, University of Dundee, UK; Andy Chan, Genentech, Inc.; Gary Koretzky, University of Pennsylvania School of Medicine; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Anton van der Merwe, University of Oxford; Andre Veillette, Institut de Recherches Cliniques de Montral; Art Weiss, University of California, San Francisco. Captulo 7: Avinash Bhandoola, University of Pennsylvania; B.J. Fowlkes, National Institutes of Health, US; Richard Hardy, Fox Chase Cancer Center, Philadelphia; Kris Hogquist, University of Minnesota; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Dan Littman, New York University School of Medicine; John Monroe, University of Pennsylvania Medical School; David Raulet, University of California, Berkeley; Ellen Robey, University of California, Berkeley; Harinder Singh, University of Chicago; Barry Sleckman, Washington University School of Medicine, St. Louis; Brigitta Stockinger, National Institute for Medical Research, London; Paulo Vieira, Institut Pasteur, Paris; Harald von Boehmer, Harvard Medical School; Rose Zamoyska, National Institute for Medical Research, London.

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Agradecimentos

Captulo 8: Rafi Ahmed, Emory University School of Medicine; Michael Bevan, University of Washington; Frank Carbone, University of Melbourne, Victoria; Bill Heath, University of Melbourne, Victoria; Tim Ley, Washington University School of Medicine, St. Louis; Anne OGarra, The National Institute for Medical Research, London; Steve Reiner, University of Pennsylvania School of Medicine; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Casey Weaver, The University of Alabama, Birmingham; Marco Colonna, Washington University School of Medicine, St. Louis. Captulo 9: Michael Cancro, University of Pennsylvania; Robert H. Carter, The University of Alabama, Birmingham; John Kearney, The University of Alabama, Birmingham; Garnett Kelsoe, Duke University; Michael Neuberger, University of Cambridge. Captulo 10-11: Rafi Ahmed, Emory University School of Medicine; Charles Bangham, Imperial College, London; Jason Cyster, University of California, San Francisco; David Gray, The University of Edinburgh; Dragana Jankovic, National Insitutes of Health; Michael Lamm, Case Western University; Antonio Lanzavecchia, Institute for Research in Biomedicine, Switzerland; Sara Marshall, Imperial College, London; Allan Mowat, University of Glasgow; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Michael Oldstone, The Scripps Research Insitute; Michael Russell, SUNY, Buffalo; Federica Sallusto, Institute for Research in Biomedicine, Switzerland; Philippe Sansonetti, Institut Pasteur, Paris; Alan Sher, National Institutes of Health, US. Captulo 12: Mary Collins, University College, London; Alain Fischer, Groupe Hospitalier Necker-Enfants-Malades, Paris; Raif Geha, Harvard Medical School; Paul Klenerman, University of Oxford; Dan Littman, New York University

School of Medicine; Michael Malim, Kings College; Sarah Rowland-Jones, University of Oxford; Adrian Thrasher, University College, London. Captulo 13: Cezmi Akdis, Swiss Institute of Allergy and Asthma Research; Raif Geha, Harvard Medical School; Barry Kay, Imperial College, London; Gabriel Nunez, University of Michigan Medical School; Harald Renz, Philipps Universitt Marburg, Germany; Alan Shaffer, Harvard Medical School. Captulo 14: Antony Basten, The University of Sydney; Lucienne Chatenaud, Groupe Hospitalier Necker-EnfantsMalades, Paris; Maggie Dallman, Imperial College, London; Anne Davidson, Albert Einstein College of Medicine; Betty Diamond, Albert Einstein College of Medicine; Rikard Holmdahl, Lund University, Sweden; Laurence Turka, University of Pennsylvania School of Medicine; Kathryn Wood, University of Oxford. Captulo 15: Filippo Belardinelli, Istituto Superiore di Sanita, Italy; Benny Chain, University College, London; Lucienne Chatenaud, Groupe Hospitalier Necker-EnfantsMalades, Paris; Robert Schreiber, Washington University School of Medicine, St. Louis; Ralph Steinman, The Rockefeller University; Richard Williams, Imperial College, London. Captulo 16: Max Cooper, The University of Alabama, Birmingham; Jim Kaufman, Institute for Animal Health, UK; Gary Litman, University of South Florida; Ruslan Medzhitov, Yale University School of Medicine. Agradecemos de modo especial a Matthew Vogt, pela leitura cuidadosa da 1 impresso desta nova edio. Os autores

Prefcio

Este livro tem como objetivo ser uma introduo imunologia para estudantes de medicina, biologia avanada, estudantes de graduao e cientistas de outras reas que desejam aprender mais sobre o sistema imune. uma tentativa de apresentar o campo da imunologia de um ponto de vista consistente, o da interao do hospedeiro com o ambiente que contm muitas espcies de microrganismos potencialmente nocivos. A justificativa para isso reside no fato de que a ausncia de um ou mais componentes do sistema imune , virtualmente, esclarecido pelo aumento da suscetibilidade a uma ou mais infeces especficas. Assim, acima de tudo, o sistema imune existe para proteger o hospedeiro da infeco, e sua histria evolutiva deve ter sido moldada, principalmente, por este desafio. Outros aspectos da imunologia, como alergia, autoimunidade, rejeio de enxerto e imunidade aos tumores, so tratados como variao desta funo protetora bsica. Nesses casos, a natureza do antgeno a varivel principal. Nesta 7 edio, todos os captulos foram atualizados para incorporar novas observaes que permitiram expandir o conhecimento e o entendimento a respeito do sistema imune. Os exemplos influenciam as novas pesquisas relacionadas aos receptores NK, a compreenso mais aprofundada sobre o papel da citidina desaminase induzida por ativao (AID) na produo da diversidade dos anticorpos, as imunoevasinas virais, a apresentao cruzada de antgenos para as clulas T, as subpopulaes de clulas dendrticas de clulas T e os novos receptores inatos que reconhecem os patgenos. O captulo sobre evoluo inclui novas descobertas sobre as formas alternativas de imunidade adaptativa tanto em invertebrados quanto em organismos superiores. Os captulos clnicos contm novas sees a respeito da doena celaca e seus mecanismos, a doena de Crohn e as estratgias para o tratamento do cncer. Novas questes para discusso foram acrescentadas no final de cada captulo. Essas questes podem ser usadas para reviso ou como base para discusses, tanto em sala de aula quanto em grupos de estudo informais. O CD-ROM que acompanha este livro foi expandido e aprimorado. Aps uma reviso geral e abrangente sobre o sistema imune no Captulo 1, os mecanismos da imunidade inata so tratados no Captulo 2 como um importante sistema de proteo e como precursores necessrios para a resposta imune adaptativa. A abrangncia dos receptores Toll foi estendida

e atualizada, refletindo-se o rpido progresso neste campo nos ltimos trs anos, e a descrio das diferentes famlias de receptores inibidores e ativadores NK foi revisada para abarcar o conhecimento crescente a respeito destes ltimos. O contedo sobre patgenos que se encontrava no incio do Captulo 10 nas edies anteriores foi colocado no Captulo 2, fornecendo-se uma introduo mais completa sobre infeco no incio do livro. Aps uma discusso a respeito da imunidade inata, a nfase passa a ser sobre a imunidade adaptativa, pois conhecemos muito mais sobre esse assunto graas aos esforos da maioria dos imunologistas. O tema central do texto subsequente a seleo clonal dos linfcitos. Como na 6 edio, consideramos duas linhagens de linfcitos os linfcitos B e os linfcitos T juntos e no separados, pois parece que mecanismos comuns esto atuando em ambos os tipos celulares. Um exemplo o rearranjo dos segmentos gnicos para produzir os receptores atravs dos quais os linfcitos reconhecem o antgeno (Captulo 4). O Captulo 5, sobre o reconhecimento do antgeno, foi atualizado para incluir a apresentao cruzada de antgenos pelas molculas do MHC de classe I e a interferncia das imunoevasinas virais na apresentao de antgenos. O Captulo 6, sobre sinalizao, foi revisado para descrever as vias de sinalizao de clulas T com mais detalhes, apresentando uma discusso mais extensa e atualizada sobre a sinalizao coestimuladora. O Captulo 7 foi reorganizado, de modo que o desenvolvimento dos linfcitos B e T encontram-se em sees separadas. Os Captulos 8 e 9 apresentam de forma cuidadosa as funes efetoras das clulas B e T separadamente, pois diferentes mecanismos esto envolvidos. Atualizamos e estendemos a discusso a respeito das clulas dendrticas e inclumos as recentes descobertas sobre as subpopulaes de clulas T, as clulas TH17 e Treg (Captulo 8). Tivemos a oportunidade de redefinir o Captulo 10, sobre a natureza dinmica da resposta imune contra a infeco, desde a imunidade inata at a formao da memria imunolgica. Inclumos os avanos recentes a respeito das mudanas temporais que ocorrem nas subpopulaes de clulas T durante a resposta imune e sobre a natureza da memria imunolgica. Devido ao crescente papel na defesa imune, criamos um novo captulo inteiramente dedicado imunidade de mucosa (Captulo 11). Os trs captulos subsequentes (Captulos 12 a 14) explicam principalmente como doenas como o HIV/AIDS, a autoi-

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Prefcio

munidade ou a alergia podem ser causadas por imunodeficincias hereditrias ou adquiridas ou por uma falha ou disfuno dos mecanismos imunes. Como nosso conhecimento a respeito das causas das doenas crescente, esses captulos esto mais extensos, incluindo a descrio das sndromes para as quais novos defeitos gnicos foram identificados. Esses captulos, que descrevem as falhas do sistema imune na manuteno da sade do organismo, so seguidos pelo Captulo 15, sobre a manipulao da resposta imune por meio da vacinao e outros mtodos na tentativa de combater no somente as doenas infecciosas, mas tambm o cncer e a rejeio de transplantes. Estes quatro captulos foram extensamente revisados e atualizados, de modo especial com relao nova gerao da teraputica biolgica , que est sendo introduzida na prtica mdica. O livro finalizado com um captulo atualizado (Captulo 16) sobre a evoluo do sistema imune nos animais. As anlises das sequncias genmicas de invertebrados e vertebrados inferiores tm permitido uma nova viso acerca da sofisticao das defesas imunes dos invertebrados e a descoberta de que nosso sistema imune adaptativo baseado em anticorpos e clulas T no a nica maneira de produzir uma imunidade adaptativa. Esta 7 edio inclui um CD-ROM*, que traz animaes originais baseadas nas figuras do livro e vdeos selecionados de experimentos visualmente atraentes. As animaes foram revisadas e atualizadas para esta edio, contando com cinco novas animaes: Infeco pelo HIV, Resposta DTH, Evasinas Virais, Reconhecimento Inato de Patgenos e Receptores de Reconhecimento de Patgenos. Esta edio foi renomeada Imunobiologia de Janeway em memria a Charles A. Janeway, o qual originalmente criou este livro-texto e foi inspirao continua at sua morte em 2003. Andrey Shaw, da Washington University School of Medicine, St. Louis, revisou o Captulo 6 sobre transduo

de sinais detalhadamente e o atualizou. Allan Mowat, da University of Glasgow, fez o mesmo no Captulo 11 sobre imunidade de mucosa; Claudia Mauri (Captulos 12 e 14) e Michael Ehrenstein (Captulos 13 e 15), da Univesity College London, revisaram e atualizaram os captulos clnicos. O Apndice III, Citocinas e seus Receptores, foi atualizado e reorganizado por Robert Schreiber, da Washington University School of Medicine, St. Louis. Joost Oppenheim, do National Cncer Institute, Washington, D.C., atualizou o Apndice IV, Quimiocinas e seus Receptores. Somos muito gratos a eles pelo esforo e cuidado que tiveram com estas revises. Colaboradores, ilustradores e editores foram essenciais na produo deste livro. Fomos beneficiados com a experincia de Eleanor Lawrence, editora desde o incio, e do talento artstico e criatividade de Matthew McClements, nosso ilustrador desde a 2 edio. Sua memria institucional sustenta a coerncia desta edio amplamente atualizada. Na Garland, Mike Morales criou as atraentes animaes que fazem com que importantes conceitos tomem vida. Nenhum desses esforos seria produtivo sem a hbil (mas paciente) coordenao de Sigrid Masson e as criteriosas sugestes e o apoio contnuo de nossa editora, Denise Schanck. Kenneth Murphy agradece a Theresa Murphy e a Paul, Mike, Mark e Jason por seu apoio e estmulo. Paul Travers agradece a Rose Zamoyska por sua pacincia infinita e seu apoio. Mark Walport agradece a sua esposa, Julia, e a seus filhos, Louise, Robert, Emily e Fiona, por sua pacincia e apoio irrestritos. Expressamos especial agradecimento a todas as pessoas que leram partes ou todos os captulos da 6 edio, bem como os esboos da 7 edio, e que nos sugeriram como poderamos melhor-la. Seus nomes esto indicados por captulos nas pginas v e vi. Todos os esforos so destinados produo de um livro-texto sem erros, no entanto, possvel que eventualmente seja encontrado algum e ficaramos muito agradecidos se voc pudesse nos comunicar a respeito.

CD-ROM com animaes e vdeos em imunobiologia


As animaes e vdeos selecionados para este CD-ROM ilustram conceitos importantes abordados no livro, sendo
Parte I 2-1 Reconhecimento Inato de Patgenos 2-2 Fagocitose 2-3 Receptores de Reconhecimento de Patgenos 2-4 Sistema do Complemento 2-5 Adeso de Rolamento 2-6 Rolamento de Leuccitos (V) 2-7 Extravasamento de Leuccitos

uma importante ferramenta de aprendizagem. Os vdeos esto indicados com (V).

* Em www.artmed.com.br (rea do professor), professores tero acesso s figuras da obra, em formato PowerPoint, que podero ser utilizadas como recurso didtico em sala de aula.

Prefcio

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Parte II 4-1 Recombinao Gnica 5-1 Processamento das Molculas do MHC de Classe I 5-2 Infeco Intracelular por Listeria (V) 5-3 Processamento de Molculas do MHC de Classe II 5-4 Evasinas virais Parte III 6-1 Balsas Lipdicas 6-2 Sinalizao do TCR 6-3 Clulas T Ativadas (V) 6-4 A MAP Quinase 6-5 Sinalizao de Citocina 6-6 Sinalizao de Quimiocina 6-7 Induo da Apoptose 7-1 Desenvolvimento Celular 7-2 Desenvolvimento no Linfonodo

Parte IV 8-1 A Morte das Clulas T 8-2 Migrao de Clulas Dendrticas 8-3 Interao TCR-APC 8-4 Sinapse Imunolgica (V) 8-5 Liberao dos Grnulos de Clulas T 10-1 A Resposta Imune 10-2 Quimiotaxia (V) 10-3 Trfego dos Linfcitos 10-4 Alojamento dos Linfcitos (V) 10-5 Centros Germinativos Parte V 11-1 Deriva Antignica 11-2 Mudana Antignica 12-1 Infeco pelo HIV 13-1 Resposta DTH

Sumrio

Parte I
Introduo Imunobiologia e Imunidade Inata

10 Dinmica da Imunidade Adaptativa . . . . . . . . . 419 11 O Sistema Imune de Mucosa . . . . . . . . . . . . . . .457

Conceitos Bsicos em Imunologia . . . . . . . . . . . . . 1

Parte V
Sistema Imune na Sade e na Doena

2 Imunidade Inata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39

12 Falhas nos Mecanismos de Defesa

Parte II
Reconhecimento do Antgeno

do Hospedeiro. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .495

13 Alergia e Hipersensibilidade . . . . . . . . . . . . . . .553 14 Autoimunidade e Transplante . . . . . . . . . . . . . .597 15 Manipulao da Resposta Imune . . . . . . . . . . .653

3 Reconhecimento do Antgeno pelos


Receptores de Clulas B e de Clulas T . . . . . . . . 111

4 A Gerao dos Receptores de Antgenos


dos Linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143

5 Apresentao de Antgenos para


os Linfcitos T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 181

Parte VI
Origens das Respostas Imunes

16 Evoluo do Sistema Imune . . . . . . . . . . . . . . . .709

Parte III
Desenvolvimento de Repertrios dos Receptores dos Linfcitos Maduros
Apndice

Ferramentas dos Imunologistas. . . . . . . . . . . . . 731 Antgenos CD. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 779

Apndice

6 Sinalizao por meio de Receptores do


Sistema Imune. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 219

II

Apndice

III Citocinas e Seus Receptores. . . . . . . . . . . . . . . .795

7 Desenvolvimento e Sobrevivncia dos


Linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .257

Apndice

IV Quimiocinas e Seus Receptores . . . . . . . . . . . . .798 V Constantes Imunolgicas . . . . . . . . . . . . . . . . . .800


Biografias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 801 Glossrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .802 ndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .835

Apndice

Parte IV
Resposta Imune Adaptativa

8 Imunidade Mediada por Clulas T. . . . . . . . . . . 321 9 Resposta Imune Humoral . . . . . . . . . . . . . . . . . . 377

Sumrio Detalhado

Parte I
Introduo Imunobiologia e Imunidade Inata

Os mecanismos efetores da imunidade adaptativa . . . . . . 27


1-18 Anticorpos lidam com formas extracelulares de patgenos e seus produtos txicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28 1-19 As clulas T so necessrias para controlar os patgenos intracelulares e para ativar as repostas das clulas B contra a maioria dos antgenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30 1-20 As clulas T CD4 e CD8 reconhecem os peptdeos ligados a duas classes diferentes de molculas do MHC . . . . . . . . . . . . . . .32 1-21 Defeitos no sistema imune resultam no aumento da suscetibilidade infeco . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .34 1-22 Entender a resposta imune adaptativa importante para o controle das alergias, das doenas autoimunes e da rejeio de rgos transplantados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .35 1-23 A vacinao o meio mais eficaz de controlar as doenas infecciosas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37 Resumo do Captulo 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37

Conceitos Bsicos em Imunologia . . . . . . . . . . . . . 1

Princpios da imunidade inata e adaptativa . . . . . . . . . . . . . . 3


1-1 Funes da resposta imune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3 1-2 As clulas do sistema imune derivam de precursores da medula ssea. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 1-3 A linhagem mieloide compreende a maioria das clulas do sistema imune inato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5 1-4 Os linfcitos do sistema imune adaptativo e as clulas matadoras naturais da imunidade inata pertencem linhagem linfoide . . . . . . . .8 1-5 Linfcitos amadurecem na medula ssea ou no timo e ento se reunem nos tecidos linfoides por todo o organismo . . . . . . . . . . . . . .9 1-6 A maioria dos agentes infecciosos ativa o sistema imune inato e induz a uma resposta inflamatria. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10 1-7 A ativao de clulas apresentadoras de antgeno especializadas o primeiro passo necessrio para induo da imunidade adaptativa . . . .12 1-8 O sistema imune inato permite uma discriminao inicial entre o prprio e o no-prprio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 1-9 Os linfcitos ativados pelo antgeno do origem a clones de clulas efetoras especficas para o antgeno que medeiam a imunidade adaptativa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .13 1-10 A seleo clonal de linfcitos o princpio central da imunidade adaptativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14 1-11 A estrutura da molcula de anticorpo ilustra o problema central da imunidade adaptativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15 1-12 Cada linfcito em desenvolvimento produz um nico receptor antignico por meio de rearranjos dos segmentos gnicos dos seus receptores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16 1-13 As imunoglobulinas ligam uma ampla variedade de estruturas qumicas, enquanto os receptores de clulas T so especializados no reconhecimento de antgenos estranhos como fragmentos peptdicos ligados s protenas do complexo de histocompatibilidade principal . . .17 1-14 O desenvolvimento e a sobrevivncia dos linfcitos so determinados por sinais recebidos atravs de seus receptores antignicos . . . . . . . . .18 1-15 Os linfcitos encontram e respondem ao antgeno nos rgos linfoides perifricos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18 1-16 A interao com outras clulas bem como com antgenos necessria ativao dos linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .23 1-17 Os linfcitos ativados por antgenos proliferam nos rgos linfoides perifricos, gerando clulas efetoras e memria imunolgica. . . . . .23 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .27

2 Imunidade Inata . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .39


A linha de frente da defesa do hospedeiro . . . . . . . . . . . . . 40
2-1 As doenas infecciosas so causadas por diversos agentes que vivem e se replicam em seus hospedeiros . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .41 2-2 Os agentes infecciosos devem superar as defesas inatas do hospedeiro para estabelecer um foco de infeco . . . . . . . . . . . . . .44 2-3 As superfcies epiteliais do organismo so as primeiras linhas de defesa contra infeces . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 2-4 Muitos patgenos so reconhecidos, ingeridos e mortos pelos fagcitos logo aps entrarem nos tecidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 2-5 O reconhecimento do patgeno e a destruio dos tecidos iniciam uma resposta inflamatria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52

Reconhecimento de padres do sistema imune inato . . . . 53


2-6 Receptores com especificidade para as molculas dos patgenos reconhecem padres de motivos estruturalmente repetidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .54 2-7 Os receptores semelhantes ao Toll so receptores de sinalizao que distinguem diferentes tipos de patgenos e direcionam uma resposta imune adequada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .56 2-8 Os efeitos do lipopolissacardeo bacteriano nos macrfagos so mediados pela ligao do CD14 ao receptor TLR-4 . . . . . . . . . . . . .57 2-9 As protenas NOD atuam como sensores intracelulares de infeces bacterianas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .58

Sumrio Detalhado

xiii

2-10 A ativao dos receptores semelhantes ao Toll e protenas NOD disparam a produo de citocinas e quimiocinas pr-inflamatrias e a expresso de molculas coestimulatrias . . . . . . . . . . . . . . . . . .58 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59

2-33 Os receptores NKG2D ativam caminhos de sinalizao diferentes dos outros receptores NK ativados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 2-34 Vrias subpopulaes de linfcitos se comportam como linfcitos semelhantes ao inato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .100 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .103 Resumo do Captulo 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .103

O sistema do complemento e a imunidade inata. . . . . . . . . 61


2-11 O complemento um sistema de protenas do plasma que ativado pela presena do patgeno. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .61 2-12 O complemento interage com patgenos, marcando-os para a destruio pelos fagcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .62 2-13 A via clssica iniciada pela ativao do complexo C1 . . . . . . . . . .64 2-14 A via da lectina homologa via clssica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .65 2-15 A ativao do complemento est basicamente confinada superfcie na qual iniciada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67 2-16 A hidrlise de C3 d incio via alternativa do complemento . . . . . .69 2-17 Membranas e protenas plasmticas que regulam a formao e a estabilidade da convertase de C3 determinam o prolongamento da ativao do complemento de acordo com circunstncias diferentes . . .69 2-18 A convertase C3 ligada superfcie deposita uma grande quantidade de fragmentos de C3b na superfcie do patgeno e gera a atividade da convertase C5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73 2-19 A ingesto de patgenos marcados com protenas do complemento pelos fagcitos mediada por receptores ligados s protenas do complemento. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73 2-20 Pequenos fragmentos de algumas protenas do complemento podem iniciar uma resposta inflamatria local. . . . . . . . . . . . . . . . . .75 2-21 As protenas terminais do complemento polimerizam para formar poros nas membranas que podem matar certos patgenos . . . . . . .75 2-22 As protenas de controle do complemento regulam as trs vias de ativao do complemento e protegem o hospedeiro de seus efeitos destrutivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .78 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .81

Parte II
Reconhecimento do Antgeno

3 Reconhecimento do Antgeno pelos


Receptores de Clulas B e de Clulas T . . . . . . . . 111 A estrutura tpica de uma molcula de anticorpo . . . . . . . 112
3-1 Os anticorpos IgG consistem em quatro cadeias polipeptdicas . . .113 3-2 Imunoglobulinas de cadeias pesadas e leves so compostas por regies constantes e variveis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .113 3-3 A molcula do anticorpo pode ser facilmente clivada em fragmentos funcionalmente distintos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114 3-4 A molcula de imunoglobulina flexvel, especialmente na regio da dobradia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .115 3-5 Os domnios de uma molcula de imunoglobulina tm estrutura similar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .116 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .118

A interao da molcula de anticorpo com um antgeno especfico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 118


3-6 Regies localizadas de sequncia hipervarivel formam o stio de ligao do antgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .118 3-7 Os anticorpos ligam-se ao antgeno por meio do contato dos aminocidos nas CDRs, mas os detalhes dessa ligao dependem do tamanho e da forma do antgeno . . . . . . . . . . . . . . .119 3-8 Os anticorpos ligam-se a formas conformacionais na superfcie do antgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .120 3-9 As interaes antgeno-anticorpo envolvem uma variedade de foras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .121 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .122

Respostas inatas induzidas por infeco . . . . . . . . . . . . . . 82


2-23 Os macrfagos ativados secretam diversas citocinas que tm uma variedade de efeitos locais e distantes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .83 2-24 As quimiocinas liberadas por fagcitos e clulas dendrticas recrutam clulas para os locais de infeco . . . . . . . . . . . . . . . . . . .83 2-25 As molculas de adeso celular controlam as interaes entre os leuccitos e as clulas endoteliais durante uma resposta inflamatria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .87 2-26 Os neutrfilos constituem a primeira populao celular que atravessa as paredes dos vasos e entra nos locais de inflamao . . . 88 2-27 O fator de necrose tumoral- uma citocina importante que ativa a conteno local da infeco, mas induz choque quando liberada sistemicamente . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .90 2-28 As citocinas liberadas pelos macrfagos ativam a resposta de fase aguda. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .92 2-29 Os interferons induzidos pela infeco viral contribuem para a resposta do hospedeiro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .94 2-30 As clulas NK so ativadas por interferons e citocinas derivadas de macrfagos para atuarem como uma defesa precoce contra certas infeces intracelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .95 2-31 As clulas NK possuem receptores para as molculas prprias que inibem sua ativao contra clulas hospedeiras no-infectadas. . . . . 96 2-32 As clulas NK carregam receptores que ativam sua funo de matar em resposta a ligantes expressos em clulas infectadas e em clulas tumorais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .99

O reconhecimento do antgeno pelas clulas T. . . . . . . . . 123


3-10 O receptor de clulas T muito semelhante ao fragmento Fab de imunoglobulina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .123 3-11 O receptor de clulas T reconhece o antgeno na forma de um complexo de um peptdeo estranho ligado a uma molcula do MHC. .125 3-12 As duas classes de molculas do MHC possuem distintas estruturas em suas subunidades, mas uma estrutura tridimensional semelhante. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .126 3-13 Os peptdeos so ligados estavelmente s molculas do MHC e tambm servem para estabilizar a molcula do MHC na superfcie celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .128 3-14 Molculas do MHC de classe I ligam pequenos peptdeos de 8-10 aminocidos em ambas as extremidades . . . . . . . . . . . . . . . .129 3-15 O tamanho do peptdeo ligado molcula do MHC de classe II no restritivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .130 3-16 As estruturas cristalogrficas de vrios complexos receptores de clula T:peptdeo:MHC mostram a mesma orientao do receptor de clula T no complexo peptdeo:MHC. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .132

xiv

Sumrio Detalhado

3-17 As protenas de superfcie celular CD4 e CD8 das clulas T so necessrias para dar uma resposta adequada ao antgeno . . . . . .133 3-18 As duas classes de molculas do MHC so expressas diferencialmente nas clulas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .136 3-19 Um subgrupo distinto de clulas T possui um receptor alternativo formado por cadeias e . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .137 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .137 Resumo do Captulo 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .138

Diversificao secundria do repertrio de anticorpos . . . 167


4-17 A citidina desaminase induzida por ativao introduz mutaes nos genes transcritos nas clulas B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .168 4-18 Os genes da regio V rearranjados so posteriormente diversificados por hipermutao somtica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .169 4-19 Em algumas espcies, a maioria da diversificao gnica nas imunoglobulinas ocorre aps o rearranjo gnico . . . . . . . . . . . . . . .171 4-20 A troca de classe permite que o mesmo xon VH se associe a diferentes genes CH durante a resposta imune . . . . . . . . . . . . . . . .171 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175 Resumo do Captulo 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .175

4 A Gerao dos Receptores de Antgenos


dos Linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 143 O rearranjo gnico primrio das imunoglobulinas . . . . . . 144
4-1 Os genes de imunoglobulinas so rearranjados nas clulas produtoras de anticorpos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .144 4-2 Os genes completos que codificam a regio varivel so produzidos pela recombinao somtica de segmentos gnicos separados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .145 4-3 Mltiplos segmentos gnicos V adjacentes esto presentes em cada lcus de imunoglobulinas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .146 4-4 O rearranjo dos segmentos gnicos V, D e J orientado por sequncias flanqueadoras no DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .148 4-5 As reaes de recombinao dos segmentos gnicos V, D e J envolvem enzimas especficas de linfcitos e enzimas modificadoras de DNA presentes em todas as clulas . . . . . . . . . .150 4-6 A diversidade do repertrio de imunoglobulinas gerada por quatro processos principais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .153 4-7 Mltiplos segmentos gnicos herdados so usados em diferentes combinaes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .153 4-8 A adio e a deleo de um nmero varivel de nucleotdeos nas junes entre os segmentos gnicos contribuem para a diversidade da terceira regio hipervarivel . . . . . . . . . . . . . . . . . .154 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .155

5 Apresentao de Antgenos para


os Linfcitos T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 181 A produo dos ligantes dos receptores de clulas T . . . 182
5-1 As molculas do MHC de classe I e de classe II carregam peptdeos para a superfcie celular a partir de dois compartimentos intracelulares distintos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .182 5-2 Os peptdeos que se ligam s molculas do MHC de classe I so transportados ativamente do citosol para o retculo endoplasmtico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .183 5-3 Os peptdeos para transporte dentro do retculo endoplasmtico so gerados no citosol. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184 5-4 O transporte retrgrado do retculo endoplasmtico para o citosol permite que as protenas exgenas sejam processadas para apresentao cruzada por molculas do MHC de classe I . . . . . . .186 5-5 Molculas do MHC de classe I recm-sintetizadas so retidas no retculo endoplasmtico at que se liguem a peptdeos . . . . . . . . .187 5-6 Muitos vrus produzem imunoevasinas que interferem na apresentao de antgeno por molculas do MHC de classe I . . . .189 5-7 Os peptdeos apresentados pelas molculas do MHC de classe II so produzidos em vesculas endocticas acidificadas . . . . . . . . . .190 5-8 A cadeia invariante direciona as molculas do MHC de classe II recm-sintetizadas para as vesculas intracelulares acidificadas . . . . 192 5-9 Uma molcula especializada, semelhante molcula do MHC de classe II, catalisa o carregamento dos peptdeos para as molculas do MHC de classe II . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .193 5-10 A ligao peptdica estvel pelas molculas do MHC permite uma apresentao de antgeno eficaz na superfcie celular . . . . . .194 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .195

Rearranjo gnico dos receptores de clulas T . . . . . . . . . 155


4-9 Segmentos gnicos dos receptores de clulas T esto organizados de modo similar aos segmentos gnicos das imunoglobulinas e so rearranjados pelas mesmas enzimas . . . . .156 4-10 Os receptores de clulas T concentram sua diversidade na terceira regio hipervarivel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .157 4-11 Receptores de clulas T : so tambm gerados por rearranjo gnico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .158 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .159

Variao estrutural nas regies constantes das imunoglobulinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 160


4-12 Diferentes classes de imunoglobulinas so distinguidas pela estrutura de suas regies constantes de cadeia pesada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .160 4-13 As regies constantes conferem especializao funcional ao anticorpo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .161 4-14 Clulas B virgens maduras expressam tanto IgM quanto IgD na sua superfcie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .163 4-15 As formas secretadas e transmembrana das imunoglobulinas so geradas de transcritos alternativos de cadeia pesada . . . . . . .163 4-16 IgM e IgA podem formar polmeros . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .164 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .166

O complexo de histocompatibilidade principal e suas funes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 196


5-11 Muitas protenas envolvidas no processamento e na apresentao de antgenos so codificadas por genes localizados no complexo de histocompatibilidade principal. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .197 5-12 Os produtos proteicos dos genes MHC de classes I e II so altamente polimrficos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .199 5-13 O polimorfismo do MHC afeta o reconhecimento do antgeno pelas clulas T, influenciando a ligao peptdica e os contatos entre o receptor da clula T e a molcula do MHC . . . . . . . . . . . . . . . . . . .201 5-14 As clulas T alorreativas que reconhecem molculas do MHC no-prprias so muito abundantes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .204 5-15 Muitas clulas T respondem aos superantgenos . . . . . . . . . . . . . .206 5-16 O polimorfismo do MHC aumenta a gama de antgenos contra os quais o sistema imune pode responder . . . . . . . . . . . . . . . . . . .207

Sumrio Detalhado

xv

5-17 Diversos genes com funes especializadas na imunidade tambm so codificados no MHC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .208 5-18 Molculas do MHC de classe I especializadas atuam como ligantes para ativao e inibio das clulas NK. . . . . . . . . . . . . . .209 5-19 A famlia CD1 das molculas tipo MHC de classe I codificada fora do MHC e apresenta lipdeos microbianos para clulas T restritas a CD1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .211 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .212 Resumo do Captulo 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .213

6-17 A lgica da sinalizao do receptor de clula B similar sinalizao do receptor de clula T, mas alguns componentes da sinalizao so especficos para a clula B . . . . . . . . . . . . . . . .239 6-18 Os ITAMs tambm so encontrados em outros receptores de leuccitos que sinalizam para a ativao celular. . . . . . . . . . . . . . .240 6-19 A protena de superfcie celular CD28 um receptor coestimulador para clulas T virgens. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .240 6-20 Os receptores inibidores dos linfcitos ajudam a regular as respostas imunes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .242 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .244

Parte III
Desenvolvimento de Repertrios dos Receptores dos Linfcitos Maduros

Outros receptores e vias de sinalizao . . . . . . . . . . . . . . 244


6-21 As citocinas ativam tipicamente uma rpida via de sinalizao que finaliza no ncleo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .245 6-22 Os receptores de citocina formam dmeros ou trmeros durante a ligao do ligante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .245 6-23 Os receptores de citocinas esto associados famlia da tirosina quinase JAK que ativa os fatores de transcrio STAT . . . . . . . . . .245 6-24 A sinalizao da citocina finalizada por um mecanismo retroativo negativo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .246 6-25 Os receptores que induzem a apoptose ativam proteases intracelulares especializadas chamadas de caspases . . . . . . . . . .247 6-26 A via intrnseca da apoptose mediada pela liberao do citocromo c mitocondrial . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .249 6-27 Os microrganismos e seus produtos influenciam a via dos receptores semelhantes ao Toll para ativar o NFB . . . . . . . . . . . .249 6-28 Peptdeos bacterianos, mediadores da resposta inflamatria e quimiocinas sinalizam atravs dos membros da famlia de receptores acoplados protena G . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .251 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .253 Resumo do Captulo 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .253

6 Sinalizao por meio de Receptores do


Sistema Imune. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 219 Princpios gerais da transduo de sinais. . . . . . . . . . . . . 220
6-1 Receptores transmembrana convertem sinais extracelulares em eventos bioqumicos intracelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .220 6-2 A transduo do sinal intracelular frequentemente ocorre em um grande complexo sinalizador multiproteico . . . . . . . . . . . . . . . . . . .221 6-3 A ativao de alguns receptores gera segundos mensageiros de molculas pequenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .222 6-4 As protenas G pequenas atuam como interruptores moleculares em diversas vias de sinalizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224 6-5 Protenas sinalizadoras so recrutadas para a membrana por vrios mecanismos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224 6-6 As protenas de transduo de sinal esto organizadas na membrana plasmtica dentro de uma estrutura chamada de balsa lipdica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .225 6-7 A degradao de protenas tem um papel importante na finalizao das respostas de sinalizao. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .226 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .227

7 Desenvolvimento e Sobrevivncia dos


Linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .257 Desenvolvimento dos linfcitos B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 259
7-1 Os linfcitos derivam das clulas-tronco hematopoiticas da medula ssea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .259 7-2 O desenvolvimento das clulas B inicia com o rearranjo do lcus de cadeia pesada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .261 7-3 O receptor de clulas pr-B verifica a produo bem sucedida de uma cadeia pesada completa e sinaliza para a proliferao de clulas pr-B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .264 7-4 A sinalizao por meio do receptor de clula pr-B inibe novos rearranjos no lcus de cadeia pesada e refora a excluso allica . . .266 7-5 As clulas pr-B rearranjam o lcus de cadeia pesada e expressam a imunoglobulina de superfcie celular . . . . . . . . . . . . .266 7-6 Clulas B imaturas so avaliadas para autorreatividade antes de deixar a medula ssea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .268 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .273

Sinalizao do receptor de antgeno e ativao do linfcito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 227


6-8 As cadeias variveis dos receptores de antgenos so associadas s cadeias acessrias invariveis que efetuam a funo de sinalizao do receptor . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .228 6-9 Os linfcitos so extremamente sensveis ao seu antgeno especfico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .229 6-10 A ligao do antgeno leva fosforilao das sequncias ITAM associadas aos receptores de antgenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .231 6-11 Nas clulas T, a fosforilao completa dos ITAMs liga a quinase ZAP-70 permitindo que ela seja ativada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233 6-12 A ZAP-70 ativada fosforila protenas de arcabouo que medeiam muitos dos efeitos posteriores da sinalizao do receptor de antgeno. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .233 6-13 A PLC- ativada pela tirosina quinase Tec . . . . . . . . . . . . . . . . . .234 6-14 A ativao da protena G pequena Ras ativa a cascata da quinase MAP, resultando na produo do fator de transcrio AP-1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .235 6-15 O fator de transcrio NFAT ativado indiretamente pelo Ca2+ . . . .236 6-16 O fator de transcrio NFB ativado pela ao da protena quinase C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .237

Desenvolvimento dos linfcitos T no timo . . . . . . . . . . . . . 273


7-7 Os progenitores de clulas T se originam na medula ssea, mas todos os eventos importantes do seu desenvolvimento ocorrem no timo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .274 7-8 Os precursores das clulas T proliferam extensivamente no timo, mas a maioria morre no prprio rgo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .276

xvi

Sumrio Detalhado

7-9 Estgios sucessivos no desenvolvimento dos timcitos so marcados por mudanas nas molculas da superfcie celular . . . .277 7-10 Timcitos em diferentes estgios de desenvolvimento so encontrados em locais distintos do timo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .279 7-11 Clulas T com receptores : ou : originam-se a partir de um progenitor comum . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .280 7-12 Clulas T que expressam determinadas regies V dos genes de cadeia e surgem em uma sequncia ordenada no incio da vida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .282 7-13 A sntese bem sucedida da cadeia rearranjada permite a produo de um receptor de clula pr-T que ativa a proliferao celular e interrompe o rearranjo do gene da cadeia . . . . . . . . . . . . . . . . . .283 7-14 Os genes de cadeia da clula T sofrem vrios rearranjos sucessivos at que ocorra seleo positiva ou morte celular . . . . .286 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .288

Tumores linfoides . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 308


7-30 Tumores de clulas B frequentemente ocupam o mesmo local das clulas B normais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .308 7-31 Os tumores de clulas T correspondem a poucos estgios do desenvolvimento das clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .311 7-32 Os linfomas de clulas B frequentemente apresentam translocaes cromossmicas que unem os lcus de imunoglobulinas a genes reguladores do crescimento celular . . . .312 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .313 Resumo do Captulo 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .313

Parte IV
Resposta Imune Adaptativa

Seleo positiva e negativa das clulas T . . . . . . . . . . . . . 288


7-15 O tipo de MHC do estroma tmico seleciona o repertrio de clulas T maduras que podem reconhecer antgenos estranhos apresentados pelo mesmo tipo de MHC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .289 7-16 Somente os timcitos cujos receptores interagem com os complexos peptdeo prprio:MHC prprio podem sobreviver e amadurecer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .291 7-17 A seleo positiva atua no repertrio de receptores de clulas T com especificidade inerente s molculas do MHC . . . . . . . . . . . .291 7-18 A seleo positiva coordena a expresso do CD4 ou CD8 com a especificidade para o receptor da clula T e as funes efetoras potenciais da clula T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .292 7-19 As clulas epiteliais do crtex tmico so responsveis pela seleo positiva de timcitos em desenvolvimento . . . . . . . . . . . . .294 7-20 As clulas T que reagem fortemente contra antgenos prprios so eliminadas no timo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .295 7-21 A seleo negativa conduzida mais eficientemente por clulas apresentadoras de antgeno derivadas da medula ssea. . . . . . . .296 7-22 A especificidade e/ou a fora dos sinais para a seleo positiva e negativa devem ser diferentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .297 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .298

8 Imunidade Mediada por Clulas T. . . . . . . . . . . 321


Entrada das clulas T virgens e das clulas apresentadoras de antgenos nos rgos linfoides perifricos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 323
8-1 As clulas T virgens migram pelos tecidos linfoides perifricos inspecionando os complexos peptdeo:MHC na superfcie das clulas dendrticas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .323 8.2 A entrada dos linfcitos nos tecidos linfoides depende de quimiocinas e molculas de adeso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .324 8.3 A ativao das integrinas pelas quimiocinas responsvel pela entrada das clulas T virgens nos linfonodos . . . . . . . . . . . . . . . . .325 8-4 As respostas de clulas T iniciam-se nos rgos linfoides perifricos por meio das clulas dendrticas ativadas . . . . . . . . . . .329 8-5 H duas classes funcionais distintas de clulas dendrticas . . . . . .330 8-6 As clulas dendrticas processam antgenos de uma ampla gama de patgenos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .332 8-7 A sinalizao dos TLRs induzidas pelos patgenos nas clulas dendrticas maduras induz sua migrao para os rgos linfoides e intensifica o processamento do antgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334 8-8 As clulas dendrticas plasmacitoides detectam infeces virais e produzem citocinas pr-inflamatrias e interferons do tipo I em abundncia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .336 8-9 Os macrfagos so clulas de varredura que podem ser induzidas por patgenos para apresentar os antgenos estranhos s clulas T virgens . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .337 8-10 As clulas B so altamente eficientes na apresentao de antgenos que se ligam s suas imunoglobulinas de superfcie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .338 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340

Sobrevivncia e maturao dos linfcitos nos tecidos linfoides perifricos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 299


7-23 Diferentes populaes de linfcitos so encontradas em locais especficos nos tecidos linfoides perifricos . . . . . . . . . . . . . . . . . .299 7-24 O desenvolvimento e a organizao dos tecidos linfoides perifricos so controlados por protenas da famlia do fator de necrose tumoral. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .300 7-25 O alojamento dos linfcitos para as regies especficas dos tecidos linfoides perifricos mediada por quimiocinas . . . . . . . . .302 7-26 Os linfcitos que encontram quantidades suficientes de autoantgenos pela primeira vez na periferia so eliminados ou inativados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .303 7-27 A maioria das clulas B imaturas que chega ao bao de vida curta e requer citocinas e sinais positivos por meio do receptor da clula B para maturao e sobrevivncia . . . . . . . . . . . . . . . . . .304 7-28 As clulas B1 e as clulas da zona marginal so distintos subtipos de clulas B com receptor de antgeno de especificidade nica . . .306 7-29 A homeostasia das clulas T na periferia regulada por citocinas e por interaes peptdeo prprio:MHC prprio . . . . . . . . . . . . . . .307 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .308

Ativao das clulas T virgens por meio das clulas dendrticas ativadas por patgenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . 341
8-11 A interao inicial das clulas T virgens com as clulas apresentadoras de antgenos mediada pelas molculas de adeso celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .341 8-12 As clulas apresentadoras emitem os trs tipos de sinais para a expanso clonal e diferenciao das clulas T virgens . . . . . . . . . .342 8-13 A coestimulao dependente de CD28 das clulas T ativadas induz a expresso do fator de crescimento, a interleucina-2 de clulas T, e do receptor de alta afinidade da IL-2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .343

Sumrio Detalhado

xvii

8-14 O sinal 2 pode ser modificado por vias coestimuladoras adicionais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .344 8-15 O reconhecimento do antgeno na ausncia de coestimulao leva inativao funcional ou deleo clonal das clulas T perifricas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .345 8-16 As clulas T em proliferao se diferenciam em clulas T efetoras que no necessitam de coestimulao para desempenhar suas funes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .347 8-17 As clulas T se diferenciam em vrias subpopulaes de clulas efetoras funcionalmente distintas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .347 8-18 As clulas T CD8 virgens podem ser ativadas de diferentes formas para se tornarem clulas efetoras citotxicas armadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .350 8-19 Diferentes formas do sinal 3 levam diferenciao das clulas T CD4 virgens para vias efetoras distintas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .350 8-20 As clulas T CD4 reguladoras esto envolvidas no controle da resposta imune adaptativa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .352 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .354

9 Resposta Imune Humoral . . . . . . . . . . . . . . . . . . 377


Ativao de clulas B e produo de anticorpos . . . . . . . 379
9-1 A resposta imune humoral iniciada quando clulas B que se ligam ao antgeno so sinalizadas por clulas T auxiliares ou por certos antgenos microbianos isolados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .379 9-2 As respostas da clula B ao antgeno so aumentadas pela coligao do correceptor da clula B. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .380 9-3 As clulas T auxiliares ativam as clulas B que reconhecem o mesmo antgeno. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .381 9-4 Peptdeos antignicos ligados a molculas do MHC de classe II prprias nas clulas B ativam as clulas T auxiliares a produzir molculas ligadas membrana e secretadas que podem ativar a clula B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .382 9-5 As clulas B que se ligaram ao antgeno via receptor de clula B so aprisionadas nas zonas de clulas T dos tecidos linfoides secundrios . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .384 9-6 Clulas plasmticas secretoras de anticorpos se diferenciam das clulas B ativadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .385 9-7 A segunda fase da resposta imune primria de clulas B ocorre quando clulas B ativadas migram para os folculos e proliferam para formar os centros germinativos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .386 9-8 Centros germinativos de clulas B sofrem hipermutao somtica nas regies V, e as clulas com mutaes que aumentam a afinidade pelo antgeno so selecionadas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .388 9-9 A troca de classe nas respostas de anticorpos timo-dependentes requer a expresso do ligante CD40 pela clula T auxiliar e direcionada por citocinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .390 9-10 A ligao do receptor de clula B e CD40, junto com o contato direto com as clulas T, necessria para manter as clulas B dos centros germinativos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .392 9-11 As clulas B sobreviventes do centro germinativo se diferenciam em clulas plasmticas ou em clulas de memria. . . . . . . . . . . . .393 9-12 As respostas das clulas B aos antgenos bacterianos com capacidade intrnseca para ativar clulas B no requerem o auxlio de clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .394 9-13 As respostas de clulas B para polissacardeos bacterianos no requerem a ajuda de clulas T peptdeo-especficas . . . . . . . .395 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .397

Propriedades gerais das clulas T efetoras e suas citocinas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 354


8-21 As interaes das clulas T efetoras com as clulas-alvo so iniciadas pelas molculas de adeso celular sem especificidade ao antgeno . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .355 8-22 A ligao do complexo do receptor de clula T dirige a liberao de molculas efetoras direcionando-as para as clulas-alvo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .355 8-23 As funes efetoras das clulas T so determinadas por uma gama de molculas efetoras que elas produzem . . . . . . . . . . . . . .356 8-24 As citocinas podem atuar localmente ou distncia. . . . . . . . . . . .357 8-25 As citocinas e seus receptores classificam-se em famlias distintas de protenas estruturalmente relacionadas . . . . . . . . . . . .359 8-26 As citocinas da famlia do TNF so protenas trimricas normalmente associadas superfcie celular . . . . . . . . . . . . . . . . .360 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .361

Citotoxicidade mediada por clulas T. . . . . . . . . . . . . . . . . 362


8-27 As clulas T citotxicas podem induzir as clulas-alvo a sofrer morte celular programada . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .362 8-28 Protenas efetoras citotxicas que ativam a apoptose se localizam nos grnulos das clulas T citotxicas CD8. . . . . . . . . . .363 8-29 As clulas T citotxicas matam seletivamente e de forma seriada os alvos que expressam um antgeno especfico . . . . . . . . . . . . . .365 8-30 As clulas T citotxicas tambm atuam liberando citocinas . . . . . .366 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .366

Distribuio e funes das classes de imunoglobulinas . . . 398


9-14 Anticorpos de diferentes classes atuam em locais distintos e possuem funes efetoras distintas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .398 9-15 As protenas de transporte que se ligam s regies Fc dos anticorpos levam os isotipos especficos atravs das barreiras epiteliais. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .400 9-16 Os anticorpos IgG e IgA de alta afinidade podem neutralizar toxinas bacterianas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .402 9-17 Anticorpos IgG e IgA de alta afinidade podem inibir a infectividade dos vrus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .403 9-18 Os anticorpos podem bloquear a adeso de bactrias s clulas do hospedeiro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .404 9-19 Os complexos antgeno:anticorpo ativam a via clssica do complemento por meio da ligao molcula C1q. . . . . . . . . . . . .404 9-20 Os receptores do complemento so importantes na remoo dos complexos imunes da circulao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .406 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .407

Ativao dos macrfagos por clulas TH1 . . . . . . . . . . . . . 366


8-31 As clulas TH1 desempenham um papel central na ativao dos macrfagos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .367 8-32 A ativao dos macrfagos pelas clulas TH1 promove a morte microbiana e deve ser estritamente regulada para evitar dano aos tecidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .368 8-33 As clulas TH1 coordenam a resposta do hospedeiro contra os patgenos intracelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .369 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .370 Resumo do Captulo 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .370

xviii

Sumrio Detalhado

Destruio de patgenos recobertos por anticorpos via receptores Fc . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 407


9-21 Os receptores Fc das clulas acessrias so receptores sinalizadores especficos para imunoglobulinas de diferentes isotipos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .408 9-22 Os receptores Fc nos fagcitos so ativados por anticorpos ligados superfcie dos patgenos, permitindo a ingesto e a destruio dos patgenos pelos fagcitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .409 9-23 Os receptores Fc ativam as clulas NK para destruir os alvos recobertos com anticorpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .410 9-24 Mastcitos, basfilos e eosinfilos ativados ligam o anticorpo IgE via receptor Fc de alta afinidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .411 9-25 A ativao de clulas acessrias mediada por IgE tem um importante papel na resistncia infeco parasitria . . . . . . . . . .412 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .413 Resumo do Captulo 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .414

10-16 As clulas T de memria so mais frequentes e possuem necessidades de ativao e protenas de superfcie celular distintas que as diferenciam das clulas T efetoras. . . . . . . . . . . . .444 10-17 As clulas T de memria so heterogneas e incluem memria central e populaes de memrias efetoras . . . . . . . . . . . . . . . . . .447 10-18 A clula T CD4 auxiliar necessria para a clula T CD8 de memria e envolve a sinalizao do receptor CD40 e da interleucina IL-2. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .448 10-19 Em indivduos imunocompetentes, a resposta secundria e as subsequentes so mediadas principalmente por linfcitos de memria. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .450 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .451 Resumo do Captulo 10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .452

11 O Sistema Imune de Mucosa . . . . . . . . . . . . . . .457


A organizao do sistema imune de mucosa . . . . . . . . . . 457
11-1 O sistema imune de mucosa protege as superfcies internas do corpo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .457 11-2 O sistema imune de mucosa pode ser o sistema imune vertebrado original. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .459 11-3 O tecido linfoide associado ao intestino est localizado em compartimentos anatomicamente definidos no intestino. . . . . . . . .460 11-4 O intestino tem diferentes vias e mecanismos de captao de antgenos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .462 11-5 O sistema imune de mucosa contm um grande nmero de linfcitos efetores, mesmo na ausncia de doena . . . . . . . . . . . . .464 11-6 A circulao de linfcitos dentro do sistema imune de mucosa controlada por molculas de adeso tecido-especficas e receptores de quimiocinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .465 11-7 A sensibilizao em um tecido de mucosa pode induzir imunidade protetora em outras superfcies mucosas . . . . . . . . . . .467 11-8 A IgA secretora o isotipo de anticorpo associado ao sistema imune de mucosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .467 11-9 A deficincia de IgA comum em humanos, porm pode ser revertida pela IgM secretora . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .470 11-10 O sistema imune de mucosa contm linfcitos T incomuns . . . . . .470 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .473

10 Dinmica da Imunidade Adaptativa . . . . . . . . . 419


O curso da resposta imune infeco . . . . . . . . . . . . . . . . 420
10-1 O processo infeccioso pode ser dividido em vrias fases distintas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .420 10-2 As respostas inespecficas da imunidade inata so necessrias ao incio de uma resposta adaptativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .423 10-3 As citocinas produzidas nas fases iniciais da infeco influenciam a diferenciao das subpopulaes de clulas T CD4 em TH17. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .424 10-4 As citocinas produzidas nas fases finais de uma infeco influenciam a diferenciao das clulas T CD4 em clulas TH1 ou TH2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .425 10-5 Os subgrupos distintos de clulas T podem regular o crescimento e as funes efetoras de outros subgrupos de clulas T. . . . . . . . .428 10-6 As clulas T efetoras so guiadas aos locais de infeco por quimiocinas e molculas de adeso recm-expressas . . . . . . . . . .430 10-7 As clulas T efetoras diferenciadas no so uma populao esttica, mas respondem continuamente a sinais ao mesmo tempo em que desempenham suas funes efetoras . . . . . . . . . . .432 10-8 As respostas iniciais das clulas T CD8 a patgenos podem ocorrer sem o auxlio de CD4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .433 10-9 As respostas dos anticorpos desenvolvem-se nos tecidos linfoides sob orientao das clulas T CD4 auxiliares. . . . . . . . . . .435 10-10 As respostas dos anticorpos so mantidas nos cordes medulares e na medula ssea. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .436 10-11 Os mecanismos efetores usados para eliminar uma infeco dependem do agente infeccioso . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .437 10-12 A resoluo de uma infeco acompanhada pela morte da maioria das clulas efetoras e pela produo de clulas de memria. . . . . . . .439 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .439

A resposta de mucosa infeco e a regulao de respostas imunes de mucosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 474


11-11 Os patgenos entricos causam uma resposta inflamatria local e o desenvolvimento de imunidade protetora . . . . . . . . . . . . . . . . .474 11-12 O resultado da infeco por patgenos determinado por uma complexa interao entre o microrganismo e a resposta imune do hospedeiro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .476 11-13 O sistema imune de mucosa deve manter um balano entre a imunidade protetora e a homeostase para um grande nmero de diferentes antgenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .478 11-14 O intestino saudvel contm grandes quantidades de bactrias, porm no gera imunidade produtiva contra elas . . . . . . . . . . . . . .480 11-15 Respostas imunes completas a bactrias comensais provocam doena intestinal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .483 11-16 Os helmintos intestinais provocam fortes respostas imunes mediadas por TH2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .483 11-17 Outros parasitos eucariticos provocam imunidade protetora e patologia no intestino. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .486

Memria imunolgica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 440


10-13 A memria imunolgica tem durao prolongada aps a infeco ou a vacinao. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .440 10-14 As respostas das clulas B de memria diferem das respostas das clulas B virgens. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .442 10-15 Imunizaes repetidas levam ao aumento da afinidade do anticorpo, devido hipermutao somtica e seleo pelo antgeno nos centros germinativos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .443

Sumrio Detalhado

xix

11-18 As clulas dendrticas em superfcies mucosas favorecem a induo de tolerncia sob condies fisiolgicas e mantm a presena de inflamao fisiolgica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .486 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .487 Resumo do Captulo 11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .488

12-19 Anormalidades genticas na via de secreo citotxica de linfcitos causam linfoproliferao descontrolada e resposta inflamatria s infeces virais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .521 12-20 O transplante de medula ssea ou a terapia gnica podem ser teis na correo dos defeitos genticos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .523 12-21 Imunodeficincias secundrias so as principais causas que predispem infeco e morte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .524 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .525

Parte V
Sistema Imune na Sade e na Doena

Sndrome da imunodeficincia adquirida. . . . . . . . . . . . . . 525


12-22 A maioria dos indivduos infectados pelo HIV progride ao longo do tempo para a AIDS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .526 12-23 O HIV um retrovrus que infecta clulas T CD4, clulas dendrticas e macrfagos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .528 12-24 A variao gentica do hospedeiro pode alterar a taxa de progresso da doena. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .530 12-25 A deficincia gentica do correceptor CCR5 confere resistncia infeco pelo HIV in vivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .530 12-26 O RNA do HIV transcrito pela transcriptase reversa viral em DNA, o qual se integra ao genoma da clula hospedeira . . . . . . . .532 12-27 A replicao do HIV ocorre somente nas clulas T ativadas . . . . . .534 12-28 O tecido linfoide o principal reservatrio da infeco por HIV . . .535 12-29 Uma resposta imune controla, mas no elimina o HIV . . . . . . . . . .536 12-30 A destruio da funo imune como resultado da infeco pelo HIV leva a um aumento na suscetibilidade s infeces oportunistas e, eventualmente, morte . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .538 12-31 Os frmacos que bloqueiam a replicao do HIV levam a uma rpida reduo no ttulo do vrus infeccioso e ao aumento de clulas T CD4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .538 12-32 O HIV acumula muitas mutaes no curso da infeco em um nico indivduo, e o tratamento medicamentoso logo seguido pelo surgimento de variantes virais resistentes ao frmaco . . . . . .540 12-33 A vacinao contra o HIV uma soluo atraente, mas apresenta muitas dificuldades . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .541 12-34 A preveno e a educao so um modo de controlar a disseminao do HIV e da AIDS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .543 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .543 Resumo do Captulo 12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .544

12 Falhas nos Mecanismos de Defesa


do Hospedeiro. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .495 Evaso e subverso das defesas imunes . . . . . . . . . . . . . 496
12-1 A variao antignica permite que os patgenos escapem da imunidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .496 12-2 Alguns vrus persistem in vivo, parando de replicar-se at que a imunidade desaparea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .499 12-3 Alguns patgenos resistem destruio pelos mecanismos de defesa do hospedeiro ou os exploram para o seu prprio benefcio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .500 12-4 A imunossupresso ou as respostas imunes inadequadas podem contribuir para a persistncia da doena. . . . . . . . . . . . . . .502 12-5 As respostas imunes podem contribuir diretamente para a patognese . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .504 12-6 As clulas T reguladoras podem afetar o resultado de uma doena infecciosa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .504 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .505

Doenas de imunodeficincias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505


12-7 A histria de infeces repetidas sugere um diagnstico de imunodeficincia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .505 12-8 As doenas de imunodeficincia hereditrias so causadas por defeitos em genes recessivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .506 12-9 O principal efeito dos baixos nveis de anticorpos uma incapacidade de eliminar bactrias extracelulares . . . . . . . . . . . . .507 12-10 Algumas deficincias de anticorpo tambm podem resultar de defeitos na funo de clulas B ou clulas T. . . . . . . . . . . . . . . . . .510 12-11 Defeitos nos componentes do complemento causam deficincia na funo imune humoral . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .512 12-12 Defeitos de clulas fagocticas permitem a disseminao de infeces bacterianas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .513 12-13 Defeitos na diferenciao de clulas T resultam em imunodeficincias combinadas severas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .515 12-14 Defeitos no rearranjo do gene do receptor do antgeno resultam em SCID . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .517 12-15 Defeitos na sinalizao de clulas T e receptores de antgenos podem causar imunodeficincia severa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .518 12-16 Defeitos na funo do timo que bloqueiam o desenvolvimento das clulas T resultam em imunodeficincias combinadas severas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .518 12-17 As vias normais para a defesa do hospedeiro contra bactrias intracelulares so ilustradas por deficincias genticas de IFN- e IL-12 e de seus receptores. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .520 12-18 A sndrome linfoproliferativa ligada ao X est associada infeco fatal pelo vrus Epstein-Barr e ao desenvolvimento de linfomas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .521

13 Alergia e Hipersensibilidade . . . . . . . . . . . . . . .553


Sensibilizao e produo de IgE. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 555
13-1 Os alrgenos so frequentemente apresentados em baixas doses por uma via que favorece a produo de IgE . . . . . . . . . . . .555 13-2 As enzimas so frequentes desencadeadores de alergias . . . . . . .556 13-3 A mudana de classe para IgE nos linfcitos B favorecida por sinais especficos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .557 13-4 Fatores genticos e ambientais contribuem para o desenvolvimento da alergia mediada por IgE . . . . . . . . . . . . . . . . .558 13-5 Celulas T reguladoras podem controlar a resposta alrgica . . . . . .563 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .563

Mecanismos efetores nas reaes alrgicas. . . . . . . . . . . 564


13-6 A maioria da IgE est ligada a clulas e ativa os mecanismos efetores do sistema imune por vias diferentes daquelas de outros isotipos de anticorpos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .565

xx

Sumrio Detalhado

13-7 Os mastcitos localizam-se nos tecidos e coordenam as reaes alrgicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .565 13-8 Os eosinfilos esto normalmente sob rgido controle para prevenir respostas txicas inadequadas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .567 13-9 Eosinfilos e basfilos causam inflamao e leso tecidual nas reaes alrgicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .569 13-10 A reao alrgica pode ser dividida em respostas de fase imediata e tardia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .569 13-11 Os efeitos clnicos das reaes alrgicas variam de acordo com o local de ativao dos mastcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .570 13-12 A inalao de alrgenos est associada ao desenvolvimento de rinite e de asma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .572 13-13 A alergia cutnea se manifesta como urticria ou eczema crnico . . .574 13-14 A alergia a alimentos pode causar sintomas limitados ao intestino e reaes sistmicas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .575 13-15 A doena celaca um modelo de imunopatologia antgeno-especfica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .576 13-16 A alergia pode ser tratada pela inibio da produo de IgE ou das vias efetoras ativadas pela ligao cruzada da IgE da superfcie celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .578 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .581

Doenas autoimunes e mecanismos de patognese . . . . 608


14-8 Respostas imunes adaptativas especficas a antgenos prprios podem causar doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .608 14-9 As doenas autoimunes podem ser classificadas em grupos que so tipicamente rgo-especficos ou sistmicos . . . . . . . . . . . . . .609 14-10 Mltiplos aspectos do sistema imune so tipicamente recrutados na doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .610 14-11 A doena autoimune crnica pode desenvolver-se devido retroalimentao positiva da inflamao, incapacidade de eliminar dos antgenos prprios e ao aumento da resposta autoimune . . . . . . .613 14-12 Anticorpos e clulas T podem causar dano tecidual na doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .615 14-13 Autoanticorpos contra clulas sanguneas promovem a sua destruio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .615 14-14 A fixao de doses sublticas do complemento s clulas dos tecidos estimula uma poderosa resposta inflamatria. . . . . . . . . . .617 14-15 Autoanticorpos contra receptores causam doena estimulando ou bloqueando a funo destes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .618 14-16 Autoanticorpos contra antgenos extracelulares causam leso inflamatria por mecanismos semelhantes s reaes de hipersensibilidade tipos II e III da pele. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .619 14-17 Clulas T especficas para antgenos prprios podem causar dano tecidual direto e exercer um papel na resposta contnua a autoanticorpos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .620 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .623

Doenas de hipersensibilidade. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 581


13-17 Antgenos incuos podem causar reaes de hipersensibilidade tipo II em indivduos suscetveis, ligando-se superfcie das clulas sanguneas circulantes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .581 13-18 A doena sistmica causada pela formao de complexos imunes ocorre aps a administrao de grandes quantidades de antgenos pouco catabolizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .581 13-19 As reaes de hipersensibilidade tardia so mediadas por clulas TH1 e clulas T CD8 citotxicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .583 13-20 Mutaes nos reguladores moleculares da inflamao podem causar respostas inflamatrias de hipersensibilidade, resultando na doena autoinflamatria. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .586 13-21 A doena de Crohn uma doena inflamatria relativamente comum com etiologia complexa. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .588 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .589 Resumo do Captulo 13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .589

As bases genticas e ambientais da autoimunidade . . . . 624


14-18 As doenas autoimunes tm importantes componentes genticos e ambientais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .624 14-19 Um defeito em um nico gene pode causar doena autoimune . . .625 14-20 Diversas abordagens tm nos dado conhecimento sobre as bases genticas da autoimunidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .626 14-21 Genes que predispem autoimunidade esto dentro de categorias que afetam uma ou mais das etapas de tolerncia . . . .629 14-22 Os genes MCH tm um importante papel no controle da suscetibilidade doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .629 14-23 Eventos externos podem iniciar a autoimunidade . . . . . . . . . . . . . .632 14-24 A infeco pode levar doena autoimune propiciando um ambiente que promova a ativao dos linfcitos . . . . . . . . . . . . . . .632 14-25 Reatividade cruzada entre molculas prprias e molculas estranhas em patgenos pode levar a respostas contra o que prprio e, assim, doena autoimune. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .633 14-26 Drogas e toxinas podem causar sndromes autoimunes. . . . . . . . .634 14-27 Eventos randmicos podem ser necessrios iniciao da autoimunidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .635 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .635

14 Autoimunidade e Transplante . . . . . . . . . . . . . .597


A gerao e a destruio da autotolerncia . . . . . . . . . . . 598
14-1 Uma funo crucial do sistema autoimune discriminar o que prprio do que estranho . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .598 14-2 Mltiplos mecanismos de tolerncia previnem normalmente a autoimunidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .600 14-3 Deleo central ou inativao de linfcitos recm-formados o primeiro ponto de checagem da autotolerncia. . . . . . . . . . . . . . . .601 14-4 Linfcitos que se ligam a antgenos prprios com uma afinidade relativamente baixa em geral os ignoram, mas, em alguns casos, tornam-se ativados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .601 14-5 Antgenos em stios imunologicamente privilegiados no induzem ataque imune, mas podem servir como alvo. . . . . . . . . . .603 14-6 Clulas T autorreativas que expressam citocinas particulares podem ser no-patognicas ou suprimir linfcitos patognicos . . .604 14-7 As respostas autoimunes podem ser controladas em vrias etapas por clulas T reguladoras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .605 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .607

Respostas a aloantgenos e rejeio de transplante . . . . 635


14-28 A rejeio dos enxertos uma resposta imunolgica mediada primariamente por clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .636 14-29 A combinao do MHC entre doador e receptor melhora a evoluo do transplante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .637 14-30 Em enxertos com MHC idnticos, a rejeio causada por peptdeos de outros aloantgenos ligados a molculas do MHC do enxerto. . . . . 638 14-31 Existem dois modos de apresentar aloantgenos aos linfcitos T do receptor no transplante. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .639 14-32 Os anticorpos que reagem com o endotlio causam rejeio hiperaguda do enxerto. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .640

Sumrio Detalhado

xxi

14-33 A rejeio crnica de rgos causada pela leso vascular inflamatria ao enxerto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .641 14-34 Diversos rgos so rotineiramente transplantados em medicina clnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .642 14-35 O corolrio da rejeio de enxertos a doena enxerto-versus-hospedeiro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .643 14-36 Clulas T reguladoras esto envolvidas na resposta imune alorreativa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .644 14-37 O feto um aloenxerto que repetidamente tolerado. . . . . . . . . . .645 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .646 Resumo do Captulo 14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .646

15-18 A intensificao da resposta imune aos tumores pela vacinao promissora para a preveno e a terapia do cncer . . . . . . . . . . . .682 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .685

Manipulando a resposta imune para combater a infeco . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 685


15-19 Existem vrias exigncias para uma vacina efetiva. . . . . . . . . . . . .687 15-20 A histria da vacinao contra Bordetella pertussis ilustra a importncia do desenvolvimento de uma vacina efetiva que seja percebida como segura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .688 15-21 As vacinas conjugadas foram desenvolvidas como resultado da compreenso de como as clulas T e B colaboram em uma resposta imune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .689 15-22 O uso de adjuvantes outra abordagem importante para aumentar a imunogenicidade das vacinas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .691 15-23 As vacinas de vrus vivos atenuados normalmente so mais potentes do que as vacinas mortas e podem ser mais seguras com o emprego da tecnologia do DNA recombinante . . . . . . . . . . .693 15-24 As vacinas bacterianas vivas atenuadas podem ser desenvolvidas pela seleo de mutantes incapacitados ou no-patognicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .694 15-25 Os peptdeos sintticos dos antgenos protetores podem desencadear imunidade protetora. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .694 15-26 A via de vacinao um importante determinante de sucesso . . .695 15-27 A imunidade protetora pode ser induzida pela injeo muscular de DNA que codifica antgenos microbianos e citocinas humanas. . . .696 15-28 A eficcia de uma vacina pode ser aumentada dirigindo-a para os locais de apresentao de antgenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .697 15-29 Uma questo importante se a vacinao pode ser usada terapeuticamente para controlar infeces crnicas existentes . . .698 15-30 A modulao do sistema imune pode ser usada para inibir as respostas imunopatolgicas a agentes infecciosos. . . . . . . . . . . . .699 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .700 Resumo do Captulo 15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .700

15 Manipulao da Resposta Imune . . . . . . . . . . .653


Regulao extrnseca das respostas imunes indesejveis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 653
15-1 Os corticosteroides so poderosos frmacos anti-inflamatrios que alteram a transcrio de muitos genes. . . . . . . . . . . . . . . . . . .654 15-2 Os frmacos citotxicos causam imunossupresso matando as clulas em diviso e causando srios efeitos colaterais . . . . . . . . .655 15-3 Ciclosporina A, tacrolimus (FK506) e rapamicina (sirolimus) so poderosos agentes imunossupressores que interferem na sinalizao das clulas T. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .656 15-4 Os frmacos imunossupressores so sondas valiosas das vias de sinalizao intracelular em linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .657 15-5 Anticorpos contra molculas de superfcie celular tm sido utilizados para remover subpopulaes especficas de linfcitos ou inibir a funo celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .659 15-6 A engenharia de anticorpos pode reduzir sua imunogenicidade em seres humanos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .659 15-7 Os anticorpos monoclonais podem ser utilizados para inibir a rejeio de aloenxertos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .660 15-8 Agentes biolgicos podem ser usados para aliviar e suprimir a doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .662 15-9 A depleo ou a inibio de linfcitos autorreativos pode tratar doenas autoimunes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .664 15-10 A interferncia em vias coestimuladoras para a ativao dos linfcitos pode ser um tratamento para a doena autoimune . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .666 15-11 A induo de clulas T reguladoras por meio da terapia de anticorpos pode inibir a doena autoimune. . . . . . . . . . . . . . . . . . .666 15-12 Um nmero de frmacos comumente utilizados apresentam propriedades imunomoduladoras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .667 15-13 A administrao controlada de antgenos pode ser usada para manipular a natureza de uma resposta antgeno-especfica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .669 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .670

Parte VI
Origens das Respostas Imunes

16 Evoluo do Sistema Imune . . . . . . . . . . . . . . . .709


Evoluo do sistema imune inato . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 710
16-1 A evoluo do sistema imune pode ser estudada pela comparao de genes expressos em diferentes espcies . . . . . . .710 16-2 Peptdeos antimicrobianos so provavelmente as defesas imunes mais antigas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .711 16-3 Receptores semelhantes ao Toll podem representar o mais primitivo sistema de reconhecimento de patgenos . . . . . . . . . . . .712 16-4 Receptores gnicos semelhantes ao Toll podem ter sofrido ampla diversificao em algumas espcies de invertebrados . . . . . . . . . .714 16-5 Um segundo sistema de reconhecimento em Drosophila homlogo via do receptor TNF de mamferos fornece proteo contra bactrias Gram-negativas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .715 16-6 Um sistema do complemento ancestral opsoniza patgenos para a captao por clulas fagocticas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .715 16-7 A via da lectina de ativao do complemento evoluiu nos vertebrados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .717 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .718

Utilizando a resposta imune para atacar tumores. . . . . . . 670


15-14 O desenvolvimento de tumores transplantveis em camundongos levou descoberta de respostas imunes protetoras contra os tumores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .671 15-15 Os tumores podem evitar a rejeio de muitas formas . . . . . . . . . .672 15-16 Os linfcitos T podem reconhecer antgenos especficos em tumores humanos, e a transferncia adotiva de clulas T est sendo testada em pacientes com cncer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .676 15-17 Anticorpos monoclonais contra antgenos tumorais, isolados ou ligados a toxinas, podem controlar o crescimento do tumor . . . . . .680

xxii

Sumrio Detalhado

Evoluo da resposta imune adaptativa . . . . . . . . . . . . . . 718


16-8 Alguns invertebrados geram uma grande diversidade no repertrio de genes semelhantes s imunoglobulinas . . . . . . . . . .719 16-9 Agnatos possuem um sistema imunolgico adapatativo que usa rearranjo somtico para diversificar receptores construdos a partir de domnios LRR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .720 16-10 A imunidade adaptativa com base em um repertrio diversificado de genes semelhantes imunoglobulina surgiu repentinamente nos peixes cartilaginosos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .722 16-11 O alvo do transposon provavelmente foi um gene que codifica para um receptor da superfcie da clula contendo um domnio V semelhante imunoglobulina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .723 16-12 Diferentes espcies geram a diversidade das imunoglobulinas de diferentes maneiras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .724 16-13 Tanto receptores : quanto : de clulas T esto presentes nos peixes cartilaginosos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .726 16-14 Molculas do MHC de classe I e de classe II tambm foram primeiramente encontradas em peixes cartilaginosos. . . . . . . . . . .726 Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .727 Resumo do Captulo 16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .728
Apndice

A-23 Isolamento de linfcitos usando contas magnticas recobertas com anticorpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .757 A-24 Isolamento de linhagens de clulas T homogneas . . . . . . . . . . . .757

Caracterizao da especificidade, da frequncia e da funo dos linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 758


A-25 Cultura em diluio limitante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .759 A-26 Ensaios ELISPOT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .759 A-27 Identificao de subpopulaes funcionais de clulas T pela colorao para citocinas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .760 A-28 Indentificao da especificidade do receptor de clula T usando tetrmeros peptdeo:MHC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .761 A-29 Avaliao da diversidade do repertrio de clulas T por spectratyping . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .762 A-30 Ensaios com biossensores para medir a taxa de associao e dissociao dos receptores de antgeno de seus ligantes . . . . . . .763 A-31 Estimulao da proliferao de linfcitos pelo tratamento com mitgenos policlonais ou antgenos especficos . . . . . . . . . . . . . . .765 A-32 Medidas da apoptose pelo ensaio TUNEL . . . . . . . . . . . . . . . . . . .766 A-33 Ensaios de citotoxicidade de clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .766 A-34 Ensaios para clulas T CD4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .766 A-35 Microarranjos de DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .768

Ferramentas dos Imunologistas. . . . . . . . . . . . . 731

Imunizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 731
A-1 A-2 A-3 A-4 Haptenos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .732 Vias de imunizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .734 Os efeitos da dose do antgeno. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .734 Adjuvantes. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .734

Deteco da imunidade in vivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 768


A-36 A-37 A-38 A-39 A-40 Avaliao da imunidade protetora . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .768 Transferncia da imunidade protetora . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .769 Teste da tuberculina. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .770 Teste para resposta alrgica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .770 Avaliao da resposta imune e competncia imunolgica no homem . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .771 A-41 Reao de Arthus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .772

Deteco, quantificao e caracterizao dos anticorpos e seu uso como ferramentas para pesquisa e diagnstico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 736
A-5 Cromatografia de afinidade . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .737 A-6 Radioimunoensaio (RIA), ensaio imunoenzimtico (ELISA) e ensaio de inibio competitiva . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .737 A-7 Hemaglutinao e tipagem sangunea . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .739 A-8 Reao de precipitao. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .740 A-9 Dilise de equilbrio: medida da afinidade e avidez do anticorpo . . . 741 A-10 Anticorpos anti-imunoglobulinas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .742 A-11 Teste de Coombs e deteco de incompatibilidade Rhesus . . . . . .744 A-12 Anticorpos monoclonais . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .745 A-13 Bibliotecas de expresso em fagos para produo de anticorpos com a regio V. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .746 A-14 Microscopia por imunofluorescncia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .747 A-15 Imunoeletromicroscopia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .749 A-16 Imunoistoqumica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .749 A-17 Imunoprecipitao e coimunoprecipitao . . . . . . . . . . . . . . . . . . .750 A-18 Immunoblotting (Western blotting). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .751 A-19 Uso de anticorpos para isolar e identificar genes e seus produtos . . . 752

Manipulao do sistema imune. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 773


A-42 A-43 A-44 A-45 A-46 A-47
Apndice

Transferncia adotiva de linfcitos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .773 Transferncia de clulas-tronco hematopoiticas . . . . . . . . . . . . . .773 Depleo in vivo de clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .773 Depleo de clulas B in vivo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .774 Camundongos transgnicos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .774 Nocaute gnico por rompimento direcionado . . . . . . . . . . . . . . . . .775

II

Antgenos CD. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 779

Apndice

III Citocinas e Seus Receptores. . . . . . . . . . . . . . . .795

Apndice

IV Quimiocinas e Seus Receptores . . . . . . . . . . . . .798 V Constantes Imunolgicas . . . . . . . . . . . . . . . . . .800


Biografias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 801 Glossrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .802 ndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .835

Apndice

Isolamento de linfcitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 754


A-20 Isolamento de linfcitos de sangue perifrico em gradiente de Ficoll-Hypaque TM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .754 A-21 Isolamento dos linfcitos de outros tecidos que no o sangue . . . .754 A-22 Citometria de fluxo e anlise por FACS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .755

Parte I
Introduo Imunobiologia e Imunidade Inata

Conceitos Bsicos em Imunologia

Imunologia o estudo das defesas do organismo contra infeco. Ns vivemos cercados de microrganismos e muitos deles causam doenas. Ainda, apesar dessa exposio contnua, apenas raramente nos tornamos doentes. Como o corpo se defende? Quando a infeco ocorre, como o corpo elimina o invasor e se recupera? E por que ns desenvolvemos uma imunidade duradoura a muitas doenas infecciosas encontradas uma vez e a superamos? Essas so questes direcionadas imunologia, a qual estudamos para entender nossas defesas corporais contra infeces a nveis celular e molecular. A imunologia uma cincia relativamente nova. Sua origem usualmente atribuda Edward Jenner (Figura 1.1), que observou, no final do Sculo XVIII, que a doena da varola bovina ou vacnia, relativamente branda, parecia conferir proteo contra a doena da varola humana, geralmente fatal. Em 1796, ele demonstrou que a inoculao com varola bovina poderia proteger contra a varola humana. Jenner deu a esse procedimento o nome de vacinao, termo que ainda hoje usado para descrever a inoculao de amostras enfraquecidas ou atenuadas de agentes patolgicos em indivduos sadios, a fim de obter proteo contra doenas. Embora o audacioso experimento de Jenner tenha tido sucesso, passaram-se quase dois sculos at que a vacinao contra a varola se tornasse universal. Esse progresso permitiu Organizao Mundial da Sade (OMS) anunciar a erradicao da varola em 1979 (Figura 1.2), possivelmente o maior triunfo da medicina moderna. Quando introduziu a vacinao, Jenner nada sabia a respeito dos agentes infecciosos que causam doenas. Foi apenas no final do Sculo XIX que Robert Koch provou que as doenas infecciosas eram causadas por microrganismos patognicos, cada um responsvel por uma determinada enfermidade ou patologia. Atualmente, reconhecemos quatro grandes categorias de microrganismos, ou patgenos, causadores de doena: os vrus, as bactrias, os fungos patognicos e outros organismos eucariticos, relativamente grandes e complexos, coletivamente chamados de parasitas. As descobertas de Koch e de outros grandes microbiologistas do Sculo XIX estimularam a expanso da estratgia de vacinao de Jenner para outras doenas. Em 1880, Louis Pasteur projetou uma vacina contra a clera aviria e desenvolveu uma vacina antirrbica que obteve um sucesso espetacular em sua primeira aplicao em um rapaz mordido por um co raivoso. Tantos triunfos prticos levaram busca dos mecanismos de proteo imune e ao desenvolvimento da cincia da imunologia. No incio da dcada de 1890, Emil von Behring e Shibasaburo Kitasato descobriram que o soro de animais imunes difteria ou ao ttano continha

Figura 1.1 Edward Jenner. Retrato de John Raphael Smith. Reproduo cortesia da Universidade de Yale, Harvey Cushing/John Hay Whitney Medical Library.

Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

Nmero de 30 pases com um ou mais casos por ms 15

Varola oficialmente erradicada

uma atividade antitxica especfica que poderia conferir uma proteo a curto prazo contra os efeitos das toxinas de difteria ou ttano em pessoas. Esta atividade deve ao que agora chamamos de anticorpos, que se ligam especificamente a toxinas e neutralizam suas atividades. As respostas que desenvolvemos contra infeces por patgenos potenciais so conhecidas como respostas imunes. Uma resposta imune especfica, assim como a produo de anticorpos contra um patgeno em particular ou seus produtos, conhecida como uma resposta imune adaptativa, porque desenvolvida durante a vida de um indivduo como uma adaptao infeco por aquele patgeno. Em muitos casos, uma resposta imune adaptativa tambm resulta em um fenmeno conhecido como memria imunolgica, o que confere uma imunidade protetora, por toda a vida, contra reinfeces pelo mesmo patgeno. Esta apenas uma das caractersticas que diferencia uma resposta imune adaptativa de uma resposta imune inata ou imunidade inata, que est sempre imediatamente disponvel a combater uma grande gama de patgenos, mas no conduz a uma imunidade duradoura e no especfica para nenhum patgeno individual. Quando von Behring estava desenvolvendo a soroterapia para difteria, a imunidade inata era conhecida principalmente pelos trabalhos do grande imunologista russo Elie Metchnikoff, o qual descobriu que muitos microrganismos poderiam ser engolfados e digeridos por clulas fagocticas, o que ele chamou de macrfagos . Essas clulas esto sempre presentes e prontas para atuar, e so componentes de linha de frente da resposta imune inata. Em contraste, uma resposta imune adaptativa leva tempo para se desenvolver e altamente especfica; anticorpos contra o vrus da influenza, por exemplo, no protegero contra o vrus da plio. Rapidamente tornou-se claro que os anticorpos poderiam ser induzidos contra um grande nmero de substncias. Essas substncias foram chamadas de antgenos, porque podiam estimular a produo de anticorpos (antibody generation, produo de anticorpos). Muito depois, foi descoberto que a produo de anticorpos no a nica funo da resposta imune adaptativa e o termo antgeno agora utilizado para descrever qualquer substncia que pode ser reconhecida e combatida pelo sistema imune adaptativo. As protenas, glicoprotenas e polissacardeos de patgenos so os antgenos normalmente aos quais o sistema imune responde, mas este pode reconhecer e desenvolver uma resposta para um nmero muito maior de estruturas qumicas, da sua capacidade de produzir uma resposta imune alrgica contra metais como nquel, frmacos como a penicilina e compostos orgnicos das folhas da hera venenosa. As respostas imunes adaptativa e inata juntas proporcionam um sistema de defesa extraordinariamente eficaz. Muitas infeces so controladas com sucesso pela imunidade inata e no causam nenhuma doena, aquelas que no podem ser solucionadas, desencadeiam uma resposta imune adaptativa e, se superadas, geralmente resultam em uma memria imunolgica duradoura, o que impede a doena caso ocorra uma reinfeco. O principal foco deste livro ser sobre os diversos mecanismos da imunidade adaptativa, pelo qual as clulas sanguneas brancas especializadas, conhecidas como linfcitos, reconhecem e atacam os microrganismos patognicos ou clulas infectadas. No entanto, veremos que as aes do sistema imune inato so um pr-requisito para o desenvolvimento da imunidade adaptativa, e que as clulas envolvidas na resposta imune inata tambm participam das respostas imunes adaptativas. Na verdade, muitas maneiras pelas quais a resposta imune adaptativa destri os microrganismos invasores dependem da ligao de reconhecimento do antgeno-especfico do patgeno para a ativao dos mesmos mecanismos destrutivos que so utilizados na imunidade inata. Neste captulo, introduziremos primeiramente os princpios das imunidades inata e adaptativa, as clulas do sistema imune, os tecidos onde elas se desenvolvem e os tecidos por onde circulam. Em seguida sero salientadas as funes especializadas de diferentes tipos de clulas e os mecanismos atravs dos quais elas eliminam a infeco.

0 1965

1970

1975

1980 Ano

Figura 1.2 A erradicao da varola pela vacinao. Aps um perodo de trs anos em que nenhum caso de varola foi registrado, a Organizao Mundial da Sade pde anunciar, em 1979, que a varola havia sido erradicada e a vacinao foi interrompida. Alguns estoques foram mantidos por laboratrios; contudo, existe algum medo que esta seja a fonte para a reemergncia do vrus.

Imunobiologia de Janeway

Princpios da imunidade inata e adaptativa


O corpo protegido de agentes infecciosos e dos danos que eles causam, e de outras substncias nocivas, como as toxinas de insetos, por uma variedade de clulas efetoras e molculas, que juntas constituem o sistema imune. Nesta parte do captulo, discutiremos os principais princpios fundamentais da resposta imune e introduziremos as clulas e tecidos do sistema imune, dos quais a resposta imune depende.

1-1 Funes da resposta imune


Para proteger o indivduo de maneira eficaz contra uma doena, o sistema imune deve satisfazer quatro principais caractersticas. A primeira o reconhecimento imunolgico: a presena de uma infeco deve ser detectada. Esta tarefa realizada pelas clulas sanguneas brancas do sistema imune inato, as quais proporcionam uma resposta imediata, e pelos linfcitos do sistema imune adaptativo. A segunda tarefa conter a infeco e, se possvel, elimin-la por completo, o que traz a ativa as funes imune efetoras, assim como o sistema do complemento de protenas sanguneas, anticorpos, e a capacidade destrutiva dos linfcitos e outras clulas sanguneas brancas. Ao mesmo tempo, a resposta imune deve ser mantida sob controle para que no cause nenhum prejuzo ao prprio organismo. A regulao imune, ou a capacidade do sistema imune de se autorregular , portanto, um aspecto importante nas respostas imunes, e a falha de tal regulao contribui para o desenvolvimento de determinadas condies como as alergias e as doenas autoimunes. A quarta tarefa proteger o indivduo contra a recorrncia de uma doena devida a um mesmo patgeno. Uma caracterstica particular do sistema imune adaptativo capaz de produzir memria imunolgica, de modo que, tendo sido exposta uma vez a um agente infeccioso, uma pessoa produzir uma resposta forte e imediata contra qualquer exposio subsequente ao mesmo patgeno, isto , ela ter uma imunidade protetora contra ele. Buscar maneiras de produzir imunidade de longa durao contra patgenos que no provocam essa imunidade naturalmente um dos maiores desafios dos imunologistas hoje. Quando um indivduo encontra um agente infeccioso pela primeira vez, as defesas iniciais contra a infeco so barreiras fsicas e qumicas que impedem a entrada de microrganismo no corpo. Normalmente, isso no considerado como parte do sistema imune prprio, e somente quando estas barreiras so superadas ou evadidas o sistema imune inicia sua ao. As primeiras clulas que respondem so as clulas sanguneas brancas fagocticas, tais como os macrfagos, que formam parte do sistema imune inato. Essas clulas so aptas a ingerir e matar micrbios pela produo de uma variedade de qumicos txicos e enzimas de degradao poderosas. O sistema imune de origem antiga, algumas formas da defesa inata contra a doena so encontradas em animais e plantas. Os macrfagos de humanos e outros vertebrados, por exemplo, so provavelmente os descendentes diretos, na evoluo, de clulas fagocticas presentes em animais simples, assim como aqueles que Metchnikoff observou em invertebrados como estrelas-do-mar. A resposta imune inata ocorre rapidamente no momeno de exposio a um organismo infeccioso. Sobrepondo-se resposta imune inata, mas levando dias ao invs de horas para se desenvolver, o sistema imune adaptativo capaz de eliminar as infeces mais eficientemente do que a resposta imune inata. Ela est presente apenas em vertebrados e depende primorosamente das funes de reconhecimento de linfcitos, que possuem a habilidade de distinguir um determinado patgeno e direcionar nele a resposta imune mais fortemente. Essas clulas podem reconhecer e responder a antgenos individuais por meio de receptores de antgenos altamente especializados na superfcie dos linfcitos. Os bilhes de

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Medula ssea

Clula-tronco hematopoitica pluripotente

Medula ssea

Progenitor linfoide comum

Progenitor mieloide comum

Progenitor de macrfago/ granulcito

Progenitor de eritrcito/ megacaricito

Megacaricito

Eritroblasto

Sangue
Granulcitos (ou leuccitos polimorfonucleares)

Clula B

Clula T

Clula NK

Clula dendrtica Imatura

Neutrfilo

Eosinfilo

Basfilo

Precursor desconhecido Moncito de mastcitos

Plaquetas

Eritrcito

Linfonodos

Tecidos

Clula B

Clula T

Clula NK

Clula dendrtica madura

Clula dendrtica imatura

Mastcito

Macrfago

Clulas efetoras

Clula plasmtica

Clula T ativada

Clula NK ativada

Figura 1.3 Todos os elementos celulares do sangue, incluindo as clulas do sistema imune, derivam das clulas tronco hematopoiticas pluripotentes da medula ssea. Estas clulas pluripotentes dividem-se para produzir dois tipos de clulas-tronco. Um progenitor linfoide comum, que d origem linhagem linfoide (azul) de clulas sanguneas brancas ou leuccitos, as clulas matadoras naturais (NK) e os linfcitos B e T. Um progenitor mieloide comum d origem linhagem mieloide (vermelho e amarelo), que compreende o restante dos leuccitos, os eritrcitos (hemcias) e os megacaricitos que produzem as plaquetas, importantes para a coagulao sangunea. Os linfcitos T e B so distintos dos

outros leuccitos pela presena de um receptor antignico, alm do local onde se diferenciam timo e medula ssea, respectivamente. Aps encontrar o antgeno, as clulas B se diferenciam em clulas plasmticas secretoras de anticorpos, enquanto as clulas T se diferenciam em clulas T efetoras com funes variadas. Ao contrrio das clulas T e B, as clulas NK no possuem especificidade para antgenos. Os leuccitos remanescentes so moncitos, as clulas dendrticas e os neutrfilos, os eosinfilos e basfilos. As ltimas trs circulam no sangue e so chamadas de granulcitos, devido aos grnulos citoplasmticos cuja colorao caracterstica confere uma aparncia distinta em esfregaos sanguneos ou leuccitos polimorfonucleados, devido forma irregular de seus ncleos. As clulas dendrticas imaturas (amarelo) so clulas fagocticas que entram nos tecidos, elas maturam aps encontrar um patgeno potencial. O progenitor linfoide comum tambm d origem a uma subpopulao menor de clulas dendrticas, mas para manter a clareza, esta via de desenvolvimento no ser ilustrada. Contudo, como existem mais clulas mieloides progenitoras comuns do que progenitores linfoides comuns, a maioria das clulas dendrticas do organismo se desenvolvem a partir de progenitores mieloides comuns. Os moncitos entram nos tecidos, onde se diferenciam em macrfagos fagocticos. A clula precursora que d origem aos mastcitos ainda desconhecida. Os mastcitos tambm entram nos tecidos onde completam sua maturao.

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linfcitos presentes coletivamente no corpo possuem um grande repertrio de receptores antignicos, o que permite que o sistema imune reconhea e responda virtualmente a qualquer antgeno a que a pessoa possa estar exposta. Reconhecendo e desenvolvendo a resposta especfica contra um determinado patgeno que a resposta imune adaptativa direciona os recursos do sistema imune para combater este patgeno, capacitando o organismo a dominar os patgenos que evadiram e superaram a imunidade inata. Os anticorpos e linfcitos ativados produzidos nesta fase da resposta tambm persistem aps a infeco original ter sido eliminada e impedem reinfeces imediatas. Os linfcitos tambm so responsveis pela imunidade duradoura que produzida aps uma resposta imune adaptativa a muitos patgenos, de modo que a resposta a uma segunda exposio ao mesmo microrganismo mais rpida e intensa em magnitude, mesmo quando a exposio ocorre muitos anos depois.

1-2 As clulas do sistema imune derivam de precursores da medula ssea


Ambas as respostas imunes, inata e adaptativa, dependem de atividades das clulas sanguneas brancas ou de leuccitos. Todas estas clulas so originrias da medula ssea, e muitas delas tambm se desenvolvem e maturam neste ambiente. Elas ento migram para cuidar dos tecidos perifricos algumas delas residindo dentro dos tecidos, outras circulando na corrente sangunea e em um sistema especializado de vasos chamado de sistema linftico, que drena fluidos extracelulares e clulas livres dos tecidos, transportando-as pelo corpo como linfa e, finalmente, as devolve ao sistema sanguneo. Todos os elementos celulares do sangue, incluindo as clulas sanguneas vermelhas, que transportam oxignio, as plaquetas, que deflagram a coagulao sangunea em tecidos lesados e as clulas sanguneas brancas do sistema imune, derivam de clulas tronco hematopoticas da medula ssea. Assim como essas clulas podem dar origem a todos os diferentes tipos de clulas sanguneas, elas so geralmente conhecidas como clulas-tronco hematopoticas pluripotentes. Elas do origem a clulas-tronco de potencial de desenvolvimento mais limitado, que so os progenitores imediatos das clulas sanguneas vermelhas, plaquetas, e as duas principais categorias de clulas brancas, as linhagens linfoide e mieloide. Os diferentes tipos de clulas sanguneas e suas linhagens so resumidos na Figura 1.3.

1-3 A linhagem mieloide compreende a maioria das clulas do sistema imune inato
O progenitor mieloide comum o precursor de macrfagos, granulcitos, mastcitos e clulas dendrticas do sistema imune inato, e tambm de megacaricitos e clulas sanguneas vermelhas, que no sero tratados aqui. As clulas da linhagem mieloide so apresentadas na Figura 1.4. Os macrfagos residem na maioria dos tecidos corporais e so a forma madura dos moncitos, que circulam no sangue e migram continuamente nos tecidos, onde se diferenciam. Juntos, os moncitos e macrfagos compem um dos trs tipos de fagcitos no sistema imune: os outros so os granulcitos (termo coletivo para clulas sanguneas brancas chamadas neutrfilos, eosinfilos e basfilos) e as clulas dendrticas. Os macrfagos so clulas de vida relativamente longa e realizam muitas funes diferentes atravs da resposta imune inata e da resposta imune adaptativa subsequente. Uma de suas funes a de engolfar e matar microrganismos invasores. Neste papel fagoctico eles so uma importante defesa de primeira linha na imunidade inata e tambm descartam os patgenos e as clulas-alvo infectadas na resposta imune adaptativa. Os moncitos e macrfagos so fagocticos, mas a maioria das infeces ocorre nos tecidos, de modo que so os macrfagos que primeiramente realizam esta importante funo de proteo. Outro papel importante e crucial dos macrfagos coordenar as respostas imu-

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Figura 1.4 Clula mieloides da imunidade inata e adaptativa. As clulas da linhagem mieloide desempenham diversas funes importantes na resposta imune. As clulas so mostradas esquematicamente esquerda com a forma na qual estaro representadas ao longo deste livro. No quadro central, esto as fotomicrografias de cada tipo celular. Macrfagos e neutrfilos so primariamente clulas fagocticas que engolfam patgenos para sua destruio dentro das vesculas intracelulares, uma funo que essas clulas desempenham tanto na resposta imune inata quanto na adaptativa. As clulas dendrticas so fagocticas quando imaturas e podem aprisionar patgenos; aps a maturao, elas atuam como clulas apresentadoras de antgenos para as clulas T, iniciando a resposta imune adaptativa. Os macrfagos tambm podem apresentar antgenos s clulas T, ativando-as. As outras clulas mieloides so primariamente clulas secretoras, que liberam o contedo dos grnulos citoplasmticos quando ativadas por anticorpos durante a resposta imune adaptativa. Acredita-se que os eosinfilos estejam envolvidos no ataque a grandes parasitas recobertos por anticorpos, tais como os vermes, ao passo que a funo dos basfilos ainda no est bem esclarecida. Os mastcitos so clulas dos tecidos que desencadeiam a resposta inflamatria local contra um antgeno pela liberao de substncias que atuam nos vasos sanguneos locais, eles so importantes, tambm, nas respostas alrgicas.

Clula Macrfago

Funo ativada

Fagocitose e ativao de mecanismos bactericidas Apresentao de antgeno

Clula dendrtica
Captura do antgeno na periferia Apresentao de antgeno

Neutrfilo

Fagocitose e ativao de mecanismos bactericidas

Eosinfilo

Matar anticorpos cobertos por parasitas

Basfilo

Desconhecida

Mastcito
Liberao de grnulos contendo histamina e agentes ativos

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nes. Eles auxiliam a induzir a inflamao, que, como veremos, um pr-requisito a uma resposta imune bem-sucedida e secretam protenas de sinalizao que ativam outras clulas do sistema imune e as recrutam para a resposta imune. Tanto quanto seu papel especializado no sistema imune, os macrfagos atuam como clulas limpadoras do organismo, eliminando clulas mortas e restos celulares. Os granulcitos so assim chamados porque possuem grnulos densamente corados em seu citoplasma; so tambm chamados de leuccito polimorfonucleares devido ao seu ncleo de forma estranha. Existem trs tipos de granulcitos: neutrfilos, eosinfilos e basfilos, os quais podem ser identificados pelas diferentes propriedades de colorao dos grnulos. Em comparao aos macrfagos, eles tm uma vida relativamente curta, sobrevivendo por apenas alguns dias, e so produzidos em maiores quantidades durante as respostas imunes, quando eles deixam o sangue e migram para os locais de infeco ou inflamao. Os neutrfilos fagocticos so as clulas mais numerosas e importantes nas respostas imunes inatas. Eles capturam uma variedade de microrganismos por fagocitose e os destroem eficientemente em vesculas intracelulares usando enzimas de degradao e outras substncias antimicrobianas armazenadas em seus grnulos citoplasmticos. Seu papel ser discutido com mais detalhes no Captulo 2. Deficincias hereditrias na funo dos neutrfilos levam a uma infeco bacteriana devastadora que ser fatal se no tratada. As funes de proteo dos eosinfilos e basfilos so menos entendidas. Seus grnulos contm uma variedade de enzimas e protenas txicas, que so liberadas quando a clula ativada. Acredita-se que os eosinfilos e basfilos so importantes principalmente na defesa contra parasitas, os quais so muito grandes para serem ingeridos pelos macrfagos ou neutrfilos, mas sua principal importncia clnica seu envolvimento nas reaes inflamatrias alrgicas, em que seus efeitos so mais prejudiciais do que protetores. As funes dessas clulas so discutidas no Captulo 9 e seus papis na inflamao alrgica, no Captulo 13. Os mastcitos, cujo precursor sanguneo ainda no est bem definido, diferenciam-se nos tecidos. Embora mais conhecido por seu papel em coordenar as respostas alrgicas, o qual ser discutido no Captulo 13, acredita-se que eles atuem na proteo das superfcies internas do organismo contra os patgenos e esto envolvidos na resposta contra vermes parasticos. Eles possuem grandes grnulos em seu citoplasma, os quais so liberados quando os mastcitos so ativados; isso ajuda a induzir a inflamao. As clulas dendrticas so a terceira classe das clulas fagocticas do sistema imune. Elas possuem longos processos semelhantes a dedos, como os dendritos das clulas nervosas, o que d a elas o seu nome. As clulas dendrticas imaturas migram da medula ssea para a corrente sangunea para entrar nos tecidos. Elas capturam substncias particuladas por fagocitose e ingerem continuamente grandes quantidades de fludo extracelular e seu contedo, por um processo conhecido como macropinocitose. Como os macrfagos e neutrfilos, elas degradam os patgenos que capturaram, mas sua principal funo no sistema imune no a eliminao de microrganismos. Ao contrrio, as clulas dendrticas que encontraram microrganismos invasores maturam-se em clulas capazes de ativar uma determinada classe de linfcitos, os linfcitos T, descritos a seguir. As clulas dendrticas desempenham essa funo apresentando os antgenos patognicos em sua superfcie, de modo que eles possam ser reconhecidos e tratados por este tipo de linfcitos. Como discutiremos mais adiante neste captulo, apenas o reconhecimento do antgeno no suficiente para ativar um linfcito T que nunca havia encontrado este antgeno anteriormente. As clulas dendrticas maduras, contudo, possuem propriedades adicionais que as permitem ativar os linfcitos T. Clulas que podem apresentar antgenos para inativar e ativar os linfcitos T pela primeira vez so conhecidas como clulas apresentadoras de antgenos (APCs) e estas clulas formam uma ligao crucial entre a resposta imune inata e a resposta imune adaptativa. Os macrfagos tambm podem atuar como clulas apre-

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Clula matadora natural (NK)

sentadoras de antgeno, e so importantes em determinadas situaes. As clulas dendrticas, contudo, so as clulas especializadas em apresentar o antgeno aos linfcitos e iniciar a resposta imune adaptativa.

1-4 Os linfcitos do sistema imune adaptativo e as clulas matadoras naturais da imunidade inata pertencem linhagem linfoide
O progenitor linfoide comum na medula ssea d origem aos linfcitos antgeno-especficos do sistema imune adaptativo e, tambm, a um tipo de linfcito que responde presena de infeco, mas no especfico para antgeno, e, portanto, considerado como parte do sistema imune inato. Este ltimo uma grande clula com um citoplasma granular distinto e chamado de clula matadora natural (clula NK) (Figura 1.5). Estas clulas so capazes de reconhecer e matar algumas clulas anormais, como, por exemplo, algumas clulas tumorais e clulas infectadas com o vrus herpes. Suas funes na imunidade inata esto descritas no Captulo 2.
Libera grnulos lticos que matam algumas clulas infectadas por vrus.

Figura 1.5 Clulas NK. Estas clulas so grandes, granulares e semelhantes aos linfcitos, com importantes funes na imunidade inata, principalmente contra infeces intracelulares sendo capazes de matar outras clulas. Diferentemente dos linfcitos, elas no possuem receptores antgenoespecficos. (Fotografia cortesia de B. Smith.)

Finalmente, chegamos aos linfcitos antgeno-especficos, os quais constituem o principal interesse deste livro. A partir desse momento, o termo linfcito ser usado para se referir somente aos linfcitos antgeno-especficos, a no ser que seja especificado de outra forma. O sistema imune deve ser capaz de produzir uma resposta imune contra qualquer tipo de patgeno entre uma ampla variedade que uma pessoa possa encontrar ao longo da vida. Os linfcitos tornam isso possvel coletivamente atravs de receptores de antgenos altamente variveis presentes em sua superfcie, atravs dos quais eles reconhecem e ligam os antgenos. Cada linfcito maduro possui uma variante nica de um prottipo de receptor de antgeno, de modo que a populao de linfcitos expressa uma grande repertrio de receptores altamente diversos em relao aos seus stios de ligao do antgeno. Entre os bilhes de linfcitos circulantes no organismo, em um dado momento, sempre haver algum que possa reconhecer um antgeno estranho. Na ausncia de uma infeco, a maioria dos linfcitos que circulam no organismo so pequenas clulas sem sinais distintos, com poucas organelas citoplasmticas e a grande parte da cromatina nuclear inativa, como mostra seu estado condensado (Figura 1.6). Esta aparncia tpica de clulas inativas. No surpreende que at os anos 1960 os livros textos descreviam essas clulas, agora o foco central da imunologia, como no tendo nenhuma funo conhecida. Sem dvida, esses pequenos linfcitos no tm atividade funcional at que eles encontrem seu antgeno-especfico. Os linfcitos que ainda no foram ativados pelo antgeno so conhecidos como linfcitos virgens. Os linfcitos que j encontraram seu antgeno, tornaram-se ativados, e diferenciaram-se em linfcitos totalmente funcionais so conhecidos como linfcitos efetores.

Figura 1.6 Linfcitos so principalmente clulas pequenas e inativas. O quadro esquerda mostra uma fotomicrografia de um pequeno linfcito, o ncleo foi corado de roxo com hematoxilina e eosina, cercado por hemcias (as quais no possuem ncleo). Observe a mancha mais escura de cromatina condensada do ncleo do linfcito, indicando pouca atividade transcricional, a ausncia relativa de citoplasma e o pequeno tamanho. O quadro direita mostra uma microscopia eletrnica de transmisso de um pequeno linfcito. Observe a evidncia de inatividade funcional: cromatina condensada, o citoplasma escasso e a ausncia de retculo endoplasmtico rugoso. (Cortesia de N. Rooney.)

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Existem dois tipos de linfcitos: os linfcitos B (clulas B) e os linfcitos T (clulas T), cada um com diferentes funes no sistema imune e tipos distintos de receptores antignicos. Aps o antgeno se ligar a um receptor de antgeno de clulas B ou receptor de clulas B, na superfcie da clula B, o linfcito ir proliferar e diferenciar-se em clulas plasmticas. Esta a forma efetora dos linfcitos B e seus anticorpos produzidos, os quais so a forma secretada dos receptores de clula B e possuem especificidade antignica idntica. Dessa forma, o antgeno que ativa uma determinada clula B se torna o alvo dos anticorpos produzidos pela prognie desta clula. As molculas de anticorpos como uma classe so conhecidas como imunoglobulinas (Ig), e os receptores de antgeno dos linfcitos B so, tambm, conhecidos como imunoglobulina de membrana (mIg) ou imunoglobulina de superfcie (sIg). O receptor de antgeno de clulas T ou receptor de clulas T (TCR) relacionado imunoglobulina, mas distinto em sua estrutura e propriedade de reconhecimento. Aps a ativao de uma clula T depois de seu primeiro contato com o antgeno, ela prolifera e diferencia-se em um dos diferentes tipos funcionais de linfcitos T efetores. As funes das clulas T se dividem em trs classes: morte, ativao e regulao. As clulas T citotxicas matam as clulas que esto infectadas com vrus ou outro tipo de patgeno intracelular. As clulas T auxiliares produzem outros sinais adicionais essenciais que ativam as clulas B ativadas por antgenos a diferenciar e produzir anticorpos. Algumas dessas clulas T podem tambm ativar os macrfagos a se tornarem mais eficientes para matar os patgenos capturados. Voltaremos s funes das clulas T citotxicas e T auxiliares mais adiante neste captulo, e suas aes sero descritas em detalhes nos Captulos 8 e 10. As clulas T reguladoras suprimem a atividade de outros linfcitos e auxiliam a controlar as respostas imunes. Essas sero discutidas nos Captulos 8, 10 e 14. Durante o desenvolvimento de uma resposta imune, algumas clulas B e T so ativadas pelo antgeno, diferenciando-se em clulas de memria. Estas so os linfcitos responsveis pela imunidade de longa-durao, que produzidos aps uma doena ou vacinao. As clulas de memria iro, prontamente, diferenciar-se em clulas efetoras numa segunda exposio a seu antgeno especfico. A memria imunolgica est descrita no Captulo 10.

1-5 Linfcitos amadurecem na medula ssea ou no timo e ento se reunem nos tecidos linfoides por todo o organismo
Os linfcitos circulam pelo sangue e pela linfa e, tambm, so encontrados em grande nmero nos tecidos linfoides ou rgos linfoides, que so organizados em agregados de linfcitos em uma rede de clulas no-linfoides. Os rgos linfoides podem ser grosseiramente divididos em rgos linfoides centrais ou primrios, onde os linfcitos so produzidos, e rgos linfoides perifricos ou secundrios, onde os linfcitos virgens maduros so mantidos e as respostas imune adaptativas so iniciadas. Os rgos linfoides centrais so a medula ssea e o timo, um rgo localizado no trax superior. Os rgos perifricos compreendem os linfonodos, o bao e os tecidos linfoides da mucosa do intestino, dos tratos respiratrio e nasal, do trato urogenital e de outras mucosas. A localizao dos principais tecidos linfoides mostrada esquematicamente na Figura 1.7, e os rgos linfoides perifricos individuais sero descritos com mais detalhes mais adiante neste captulo. Os linfonodos so interconectados por um sistema de vasos linfticos, que drenam fluido extracelular dos tecidos para os linfonodos, e retornam ao sangue. Ambos os linfcitos B e T se originam da medula ssea, mas apenas os linfcitos B amadurecem na medula. Os linfcitos T precursores migram para o timo, de onde eles receberam o nome, e l amadurecem. O B dos linfcitos B originou-se da bursa de Fabricius, um rgo linfoide de galinhas jovens, onde os linfcitos amadurecem; felizmente, pode ser igualmente empregado para aqueles derivados da medula ssea. Uma vez atingido o amadurecimento completo, os dois ti-

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Figura 1.7 Distribuio dos tecidos linfoides no organismo. Os linfcitos so derivados das clulas-tronco da medula ssea e se diferenciam nos rgos linfoides centrais (amarelo): as clulas B na medula ssea e as clulas T no timo. Essas clulas migram desses tecidos e so levadas pela circulao sangunea at os rgos linfoides perifricos (azul). Estes incluem os linfonodos, o bao e os tecidos linfoides associados mucosa, como as tonsilas, as placas de Peyer e o apndice. Os rgos linfoides perifricos so os locais de ativao dos linfcitos pelo antgeno, e os linfcitos recirculam entre o sangue e esses rgos at encontrar seu antgeno especfico. Os vasos linfticos drenam o fluido extracelular dos tecidos perifricos, atravs dos linfonodos para o ducto torcico, desembocando na veia subclvia esquerda. Esse fluido, conhecido como linfa, leva o antgeno capturado pelas clulas dendrticas e macrfagos para os linfonodos recirculando os linfcitos dos linfonodos de volta para o sangue. Os tecidos linfoides tambm esto associados a outras mucosas, como as que revestem os brnquios (no apresentado).

Adenoide Tonsila Veia subclvica direita Linfonodo Veia subclvica esquerda Timo Corao Ducto torcico Rim Bao Placa de Peyer no intestino delgado Intestino grosso

Apndice

Linfticos

Medula ssea

pos de linfcitos entram na corrente sangunea como linfcitos maduros virgens. Eles circulam atravs dos tecidos linfoides perifricos, onde uma resposta imune adaptativa iniciada se um linfcito encontra seu antgeno correspondente. Contudo, antes disso, uma resposta imune inata contra a infeco geralmente, j ocorreu, e agora vemos como isso alerta o restante do sistema imune para a presena de um patgeno.

1-6 A maioria dos agentes infecciosos ativa o sistema imune inato e induz a uma resposta inflamatria
A pele, o revestimento interno da mucosa epitelial que reveste as vias areas e o intestino so as primeiras defesas contra os patgenos invasores, formando uma barreira qumica e fsica contra a infeco. Os microrganismos que rompem essas defesas encontram clulas e molculas que imediatamente desenvolvem uma resposta imune inata. Os macrfagos que residem nestes tecidos so a primeira linha da defesa contra bactria, por exemplo, as quais eles reconhecem por meio de receptores que ligam aos constituintes comuns de muitas superfcies bacterianas. O comprometimento desses receptores ativa o macrfago a engolfar a bactria e degrad-la internamente, e a secretar protenas chamadas de citocinas e quimiocinas, bem como outras molculas biologicamente ativas. Uma resposta similar ocorre contra vrus, fungo e outros parasitas. Citocina o nome geral dado a qualquer protena que secretada por clulas e afeta o comportamento das clulas vizinhas portadoras de receptores adequados. As quimiocinas so protenas secretadas que atraem clulas portadoras de receptores de quimiocinas, como os neutrfilos e moncitos, da corrente sangunea para o tecido infectado (Figura 1.8). As citocinas e quimiocinas liberadas pelos macrfagos ativados iniciam o

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A bactria ativa a liberao de citocinas e quimiocinas pelos macrfagos

A vasodilatao e o aumento da permeabilidade vascular causam vermelhido, calor e edema

As clulas inflamatrias migram para o tecido, liberando os mediadores anti-inflamatrios que causam a dor
Neutrfilos

Citocinas Protenas Fludos Quimiocinas

processo conhecido como inflamao. A inflamao de um tecido infectado tem vrios efeitos benficos no combate infeco. Ela recruta clulas e molculas da imunidade inata da circulao para os tecidos onde so necessrias para destruir o patgeno diretamente. Alm disso, aumenta o fluxo de linfa contendo microrganismos e as clulas portadoras de antgenos para os tecidos linfoides vizinhos, onde ativaro os linfcitos e iniciaro a resposta imune adaptativa. Finalmente, uma vez que a resposta imune adaptativa foi ativada, a inflamao tambm recruta os efetores do sistema imune adaptativo, as molculas de anticorpo e as clulas T efetoras para os locais de infeco. A inflamao local e a fagocitose das bactrias invasoras talvez possam ser ativadas como resultado da ativao de um grupo de protenas plasmticas conhecidas coletivamente como complemento. A ativao do sistema do complemento pela superfcie bacteriana leva a uma cascata de reaes proteolticas que recobre os microrganismos, mas no as clulas do prprio corpo, com fragmentos do complemento. Os micrbios revestidos pelo complemento so reconhecidos e ligam os receptores do complemento especficos nos macrfagos, levando fagocitose e a sua destruio. A inflamao , tradicionalmente, definida por quatro palavras do latim: calor, dolor, rubor e tumor, significando calor, dor, rubor e inchao, o que reflete os efeitos das citocinas e de outros mediadores inflamatrios nos vasos sanguneos locais. A dilatao e o aumento da permeabilidade dos vasos sanguneos durante a inflamao leva a um aumento do fluxo sanguneo local e ao extravasamento de fludo para os tecidos, causando calor, rubor e inchao. As citocinas e os fragmentos do complemento tm efeitos importantes no endotlio que reveste os vasos sanguneos. As prprias clulas endoteliais tambm produzem citocinas em resposta infeco. As citocinas inflamatrias produzem mudanas nas propriedades de adeso das clulas endoteliais, fazendo a adeso dos leuccitos circulantes nas clulas endoteliais e sua migrao entre elas para o local da infeco, para onde so atrados por quimiocinas. A migrao das clulas para dentro dos tecidos e suas aes locais causam a dor. Os principais tipos de clulas presentes na fase inicial de uma resposta inflamatria so os macrfagos e neutrfilos, sendo que estes ltimos so recrutados para o tecido inflamado e infectado em grande nmero. Os macrfagos e neutrfilos so tambm conhecidos como clulas inflamatrias. Como os macrfagos, os neutrfilos possuem receptores de superfcie para constituintes bacterianos comuns e para o complemento, e so as principais clulas que capturam e destroem os microrganismos invasores. O influxo de neutrfilos logo seguido por moncitos, que rapidamente se diferenciam em macrfagos, reforando e mantendo a resposta imune inata. Mais lentamente, os eosinfilos tambm migram para o tecido inflamado e tambm contribuem para a destruio do microrganismo invasor.

Figura 1.8 A infeco ativa uma resposta inflamatria. Os macrfagos que encontram bactrias ou outros patgenos nos tecidos so ativados para liberar citocinas que aumentam a permeabilidade dos vasos sanguneos permitindo que fluidos e protenas passem para os tecidos. Essas clulas tambm produzem quimiocinas que direcionam a migrao dos neutrfilos para o local de infeco. A adeso das clulas endoteliais dos vasos sanguneos tambm alterada de modo que as clulas aderem parede e so capazes de passar por ela. Primeiro esto representados os neutrfilos, e depois os moncitos passam do sangue para os tecidos, como mostra a figura. O acmulo de fluidos e de clulas no local de infeco causa vermelhido, inchao, aquecimento e dor, coletivamente denominados inflamao. Os neutrfilos e os macrfagos so as principais clulas inflamatrias. Mais tarde, durante a resposta imune, os linfcitos podem tambm contribuir para a inflamao.

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Alm de destruir diretamente os patgenos, a resposta imune inata tem consequncias cruciais para o incio da resposta imune adaptativa, como ser visto na prxima seo. Isso ocorre principalmente pela ao das clulas dendrticas.

1-7 A ativao de clulas apresentadoras de antgeno especializadas o primeiro passo necessrio para induo da imunidade adaptativa
A induo de uma resposta imune adaptativa inicia quando um patgeno ingerido por uma clula dendrtica imatura no tecido infectado. Estas clulas fagocticas especializadas residem na maioria dos tecidos e, como os macrfagos, so de longa durao comparadas a outras clulas sanguneas brancas. Elas se originam na medula ssea (ver Seo 1-3), e, enquanto imaturas, migram atravs da corrente sangunea para suas estaes perifricas, onde avaliam o ambiente para a presena de patgenos. Como os macrfagos e neutrfilos, as clulas dendrticas imaturas tambm possuem receptores em suas superfcies, que reconhecem caractersticas comuns de muitos patgenos, como os lipopolissacardeos bacterianos. Os componentes microbianos ligados a estes receptores estimulam as clulas dendrticas a engolfar o patgeno e degrad-lo intracelularmente. Clulas dendrticas imaturas tambm recolhem material extracelular continuamente, incluindo partculas virais e bactrias, pelo mecanismo de macropinocitose independente de receptor e so, dessa forma, capazes de internalizar e degradar patgenos que seus receptores da superfcie celular no detectam. A funo das clulas dendrticas, contudo, no primeiramente destruir os patgenos, mas sim levar antgenos patognicos aos rgos linfoides perifricos e l apresent-los aos linfcitos T. Capturando os patgenos e seus componentes, as clulas dendrticas migram para os tecidos linfoides perifricos, onde maturam em clulas apresentadoras de antgeno altamente efetivas. Elas apresentam fragmentos de antgenos patognicos em sua superfcie e a produo de protenas de superfcie celular conhecidas como molculas coestimuladoras, que, como o nome sugere, fornecem sinais que atuam juntamente com os antgenos para estimular os linfcitos T a proliferar e diferenciar-se em sua forma completamente funcional final (Figura 1.9). Pelo fato de as clulas B no serem ativadas pela maioria dos antgenos sem o auxlio das clulas T auxiliares ativadas, a ativao de linfcitos T virgens um estgio inicial essencial em virtualmente todas as respostas imunes adaptativas. As clulas dendrticas ativadas tambm secretam citocinas que influenciam as respostas imunes inata e adaptativa, tornando essas clulas vigilantes essenciais que determinam se e como o sistema imune responde presena de agentes infecciosos. A maturao das clulas dendrticas e seu papel central na apresentao dos antgenos as clulas T virgens so discutidos no Captulo 8.

Figura 1.9 As clulas dendrticas iniciam as respostas imunes adaptativas. As clulas dendrticas imaturas residentes nos tecidos capturam os patgenos e seus antgenos por macropinocitose e por endocitose mediada por receptor. Elas so estimuladas pelo reconhecimento da presena dos patgenos a migrar para os linfonodos regionais, pelos vasos linfticos, para os linfonodos regionais, onde chegam como clulas dendrticas no-fagocticas completamente maduras que expressam o antgeno e as molculas coestimuladoras necessrias para ativar os linfcitos T virgens que reconhecem o antgeno, estimulando a proliferao e a diferenciao dos linfcitos.

Clulas dendrticas imaturas localizam-se nos tecidos perifricos

As clulas dendrticas migram atravs dos vasos linfticos para linfonodos regionais

As clulas dendrticas maduras ativam as clulas T virgens nos rgos linfoides como os linfonodos Clulas T virgens

Macropinosomo Clula dendrtica madura

Clulas T ativadas

Linfonodo

Medula do linfonodo

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1-8 O sistema imune inato permite uma discriminao inicial entre o prprio e o no-prprio
Os sistemas de defesa da imunidade inata so efetivos no combate a muitos patgenos. Eles so obrigados a contar com um repertrio limitado e invarivel de receptores que reconhecem os microrganismos. Os receptores de reconhecimento de patgenos dos macrfagos, dos neutrfilos e das clulas dendrticas reconhecem molculas simples e padres regulares de estruturas celulares conhecidas como padres moleculares associados aos patgenos (PAMPs), que esto presentes em muitos microrganismos, mas no nas prprias clulas (Figura 1.10). Estes receptores so geralmente conhecidos como receptores de reconhecimento de padres (PRRs), e reconhecem estruturas como oligossacardeos ricos em manose, peptideoglicanos e lipopolissacardeos da parede celular da bacteriana e DNA CpG no-metilado que so comuns a muitos patgenos e tm sido conservados durante a evoluo. Assim, o sistema imune inato est apto a distinguir o prprio (corpo) do no-prprio (patgeno) e montar um ataque contra os invasores. Quando se tornam ativadas atravs de seus receptores de reconhecimento de padres, as clulas dendrticas imaturas, que fazem parte do sistema imune inato, tornam-se capazes de ativar os linfcitos T virgens, como discutido nas sees anteriores. Assim, a resposta imune adaptativa iniciada essencialmente pelo reconhecimento explcito do no-prprio pelo sistema imune inato. Os constituintes comuns do patgeno reconhecidos pelos receptores de reconhecimento de padres so geralmente muito diferentes dos antgenos especficos de patgenos que so reconhecidos por linfcitos. O requerimento para constituintes de micrbios, que no os antgenos, para iniciar uma resposta imune adaptativa foi reconhecido experimentalmente muito antes da descoberta das clulas dendrticas e de seu modo de ativao. Foi observado que antgenos purificados, assim como protenas, geralmente no evocavam uma resposta imune em imunizao experimental, isto , eles no eram imunognicos. Para obter uma resposta imune adaptativa contra antgenos purificados, essencial adicionar bactrias mortas ou extratos bacterianos ao antgeno. Este material adicional foi denominado adjuvante, por ter auxiliado na resposta ao antgeno imunizante (adjuvare, em latim, significa ajudar). Hoje sabemos que os adjuvantes so necessrios, pelo menos em parte, para ativar as clulas dendrticas para preencher os requisitos do status de clula apresentadora de antgeno na ausncia de infeco. Encontrar adjuvantes adequados ainda uma rea importante na preparao de vacinas. Formulaes modernas de adjuvantes so descritas no Apndice I. Os microrganismos podem evoluir mais rapidamente do que seus hospedeiros, e isso pode explicar por que as clulas e molculas do sistema imune inato reconhecem apenas estruturas moleculares que permaneceram sem alteraes durante a evoluo. Como veremos a seguir, os mecanismos de reconhecimento usados pelos linfcitos da resposta imune adaptativa evoluram para superar os obstculos encontrados pelo sistema imune inato. Isso permite o reconhecimento de uma diversidade quase infinita de antgenos, de modo que cada patgeno distinto possa ser um alvo especfico.

Os macrfagos expressam receptores para muitos constituintes microbianos


Receptor de manose Receptor de LPS (CD14)

TLR-4 TLR-2

Receptor de glicano

Receptor de varredura

Figura 1.10 Os macrfagos expressam vrios receptores que os permitem reconhecer diferentes patgenos. Os macrfagos expressam uma variedade de receptores, cada um deles capaz de reconhecer componentes especficos dos microrganismos. Alguns, como os receptores de manose e glicano e os receptores de varredura, ligam-se a carboidratos da parede celular das bactrias, das leveduras e dos fungos. Os receptores semelhantes ao Toll (TLRs) so uma importante famlia de receptores de reconhecimento de padres presentes nos macrfagos e em outras clulas imunes e so capazes de se ligar a diferentes tipos de microrganismo; por exemplo, TLR-2 se liga a aos componentes da parede celular das bactrias Gram-negativas, enquanto TLR-4 se liga aos componentes da parede celular das bactrias Gram-positivas. LPS, lipopolissacardeo.

1-9 Os linfcitos ativados pelo antgeno do origem a clones de clulas efetoras especficas para o antgeno que medeiam a imunidade adaptativa
Ao invs de possuir vrios tipos de receptores, cada um reconhecendo uma caracterstica compartilhada por vrios patgenos, um linfcito virgem produz receptores antignicos especficos para estruturas qumicas nicas. Contudo, cada linfcito emergente dos rgos linfoides centrais difere uns dos outros na especificidade de seu receptor. A diversidade gerada por um mecanismo gentico nico que atua durante o desenvolvimento do linfcito na medula ssea e no

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Uma nica clula progenitora d origem a um grande nmero de linfcitos, cada um com uma especificidade distinta

timo para produzir milhes de variantes diferentes dos genes que codificam as molculas dos receptores. Isso assegura que os linfcitos no organismo possuam, coletivamente, milhes de diferentes especificidades de receptores o repertrio de receptores linfoides do indivduo. Estes linfcitos esto continuamente passando por um processo parecido com a seleo natural; apenas aqueles linfcitos que encontram um antgeno que seu receptor se liga ser ativado para proliferar e diferenciar-se em clulas efetoras. Este mecanismo seletivo foi primeiramente proposto na dcada de 1950 por Macfarlane Burnet para explicar por que uma pessoa produz anticorpos contra apenas aqueles antgenos ao qual foi exposta. Burnet postulou a pr-existncia, no organismo, de muitas clulas produtoras de anticorpos potencialmente diferentes, com cada uma delas tendo a habilidade de produzir anticorpo de especificidade diferente e de exibir, em sua superfcie, uma verso de anticorpo ligada membrana, que atua como um receptor para o antgeno. Quando o antgeno se liga, a clula ativada para dividir e produzir muitas prognies com antgenos idnticos, um processo chamado de expanso clonal. Este clone de clulas idnticas pode agora secretar anticorpos clonotpicos com uma especificidade idntica a do receptor de superfcie que primeiramente desencadeou a ativao e expanso clonal (Figura 1.11). Burnet chamou isso de teoria da seleo clonal da produo de anticorpos.

Remoo dos linfcitos potencialmente imaturos autorreativos por deleo clonal

Autoantgenos

Autoantgenos

Populao de linfcitos virgens maduros

1-10 A seleo clonal de linfcitos o princpio central da imunidade adaptativa


Antgeno estranho

Proliferao e diferenciao de linfcitos especficos ativados para formar um clone de clulas efetoras

importante considerar que, no momento em que Burnet formulou sua teoria, nada era conhecido a respeito dos receptores de antgenos dos linfcitos. Sem dvida, a funo dos prprios linfcitos continuava obscura. Os linfcitos no assumiram um papel central at o incio dos anos 1960, quando James Gowans descobriu que a remoo de pequenos linfcitos de ratos resultava na perda de todas as respostas imune adaptativas conhecidas. Estas respostas imunes eram restauradas quando os pequenos linfcitos foram reinfundidos. Isso levou concluso de que os linfcitos deveriam ser as unidades da seleo clonal, e sua biologia tornou-se o foco de um novo campo na imunologia celular. A seleo clonal dos linfcitos com receptores diversos explica elegantemente a imunidade adaptativa, mas traz um problema conceitual significante. Se os receptores antignicos dos linfcitos so gerados aleatoriamente durante a vida de um indivduo, como os linfcitos podem prevenir-se de reconhecer e atacar os antgenos dos tecidos do organismo? Ray Owen mostrou, no final dos anos de 1940, que bezerros gmeos geneticamente diferentes com uma mesma placenta, e, portanto, com uma circulao sangunea placentria compartilhada, eram imunologicamente no-responsivos, ou tolerantes, um ao tecido do outro; eles

Clulas efetoras eliminam o antgeno

Figura 1.11 Seleo clonal. Cada progenitor linfoide d origem a um grande nmero de linfcitos, cada um deles portando um receptor antignico distinto. Os linfcitos com receptores que ligam autoantgenos ubquos so eliminados antes de se tornarem totalmente maduros, assegurando a tolerncia para o autoantgeno. Quando um antgeno estranho interage com um receptor em um linfcito virgem maduro, a clula ativada e comea a dividir-se. Isso d origem a um clone de prognie idntica, cujos receptores se ligam ao mesmo antgeno. A especificidade antignica ento mantida pela proliferao e diferenciao da prognie em clulas efetoras. Uma vez que o antgeno eliminado por estas clulas efetoras, a resposta imune cessa, embora alguns linfcitos sejam mantidos para mediar a memria imune.

Postulados da hiptese da seleo clonal

Cada linfcito possui um nico tipo de receptor com uma nica especificidade.

Interao entre uma molcula estranha e um receptor de linfcito capaz de se ligar a essa molcula com grande afinidade leva ativao do linfcito. As clulas efetoras diferenciadas derivadas de um linfcito ativado portaro receptores de especificidade idntica a das clulas parentais das quais foram derivadas. Linfcitos portadores de receptores especficos molculas ubquas prprias so eliminados nos estgios iniciais do desenvolvimento da clula linfoide e, portanto, ento ausentes no repertrio de linfcitos maduros.

Figura 1.12 Os quatro princpios bsicos da seleo clonal.

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no desenvolviam uma resposta imune um contra o outro. Peter Medawar ento mostrou, em 1953, que a exposio a tecidos estranhos durante o desenvolvimento embrionrio fez com que camundongos se tornassem imunologicamente tolerantes a esses tecidos. Burnet props que os linfcitos em desenvolvimento potencialmente autorreativos fossem removidos antes de se tornarem maduros, um processo chamado de deleo clonal. Desde ento ele provou estar correto, embora os mecanismos de tolerncia imunolgica ainda estejam sendo estudados, como veremos na discusso do desenvolvimento de linfcitos no Captulo 7. A seleo clonal dos linfcitos o princpio mais importante na imunidade adaptativa. Seus quatro postulados bsicos esto listados na Figura 1.12. O ltimo problema imposto pela teoria de seleo clonal como produzida a diversidade de receptores de antgenos dos linfcitos foi resolvido nos anos 1970, quando os avanos da biologia molecular tornaram possvel clonar os genes que codificam as molculas de anticorpos.

1-11 A estrutura da molcula de anticorpo ilustra o problema central da imunidade adaptativa


Como discutido acima, anticorpos so as formas secretadas dos receptores de antgenos das clulas B. Por serem produzidos em grande quantidade em resposta ao antgeno, os anticorpos podem ser estudados atravs de tcnicas bioqumicas tradicionais; de fato, sua estrutura foi entendida muito antes da tecnologia do DNA recombinante, que tornou possvel estudar os receptores de antgenos ligados membrana das clulas B. As caractersticas impressionantes que emergiram de estudos bioqumicos foi que as molculas de anticorpos so compostas por duas regies distintas. Uma a regio constante que apresenta apenas uma de quatro ou cinco formas bioquimicamente distinguidas, a outra a regio varivel que pode ser composta por uma variedade infinita de diferentes sequncias de aminocidos, formando estruturas sutilmente diferentes que permitem que o anticorpo se ligue especificamente a uma ampla variedade de antgenos. Esta diviso ilustrada na Figura 1.13, em que o anticorpo representado como uma molcula em forma de Y. A regio varivel determina a especificidade anticorpo de ligao ao antgeno. Existem duas regies variveis idnticas na molcula de anticorpo e esta, portanto, possui dois idnticos stios de ligao ao antgeno. A regio constante determina a funo efetora do anticorpo: como o anticorpo eliminar o antgeno aps a ligao. Cada molcula de anticorpo possui dois eixos de simetria e composta por duas cadeias pesadas idnticas e duas cadeias leves idnticas (ver Figura 1.13, onde as cadeias pesadas esto representadas em verde e as cadeias leves, em amarelo). As

Estrutura esquemtica de uma molcula de anticorpo

Estrutura esquemtica de um receptor de clula T

Regio varivel (stio de ligao do antgeno)

Regio varivel (stio de ligao do antgeno) Regio constante

Regio constante (funo efetora)

Figura 1.13 Estrutura esquemtica dos receptores de antgenos. Quadro esquerda: uma molcula de anticorpo, que secretada por clulas B ativadas como uma molcula efetora ligadora de antgeno. A verso desta molcula ligada membrana atua como um receptor de antgeno de clula B (no apresentado). Um anticorpo composto de duas cadeias pesadas idnticas (verde) e duas cadeias leves idnticas (amarelo). Cada cadeia possui uma regio constante (sombreado azul) e uma regio varivel (sombreado vermelho). Cada brao da molcula de anticorpo formado por uma cadeia leve e uma cadeia pesada, de modo que as regies variveis das duas cadeias se aproximam, criando uma regio varivel que contm o stio de ligao do antgeno. A haste formada de regies constantes das cadeias pesada e tem um nmero limitado de formas. Esta regio constante est envolvida na eliminao do antgeno ligado. Quadro direita: receptor de antgeno de clula T. Este tambm composto por duas cadeias, uma cadeia (amarela) e uma cadeia (verde), em que cada uma delas tem uma poro varivel e uma poro constante. Assim como a molcula de anticorpo, as pores variveis das duas cadeias criam uma regio varivel, que forma o stio de ligao do antgeno. O receptor de clula T no produzido na forma secretada.

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cadeias leves e pesadas possuem regies variveis e constantes. As regies variveis de uma cadeia pesada e de uma leve combinam para formar um stio de ligao do antgeno, ento, ambas as cadeias contribuem para a especificidade de ligao do antgeno da molcula de anticorpo. A estrutura das molculas de anticorpo descrita em detalhes no Captulo 3, e as propriedades funcionais dos anticorpos proporcionadas por suas regies constantes so consideradas nos Captulos 4 e 9. No momento, iremos nos deter apenas nas propriedades das molculas de anticorpos como receptores antignicos e como produzida a diversidade das regies variveis. Os receptores de clulas T para o antgeno mostram muitas similaridades com o receptor antignico de clula B, e as duas molculas so, claramente, relacionadas entre si evolutivamente. De fato, o receptor de clula T muito parecido com uma parte da molcula do anticorpo. Existem, contudo, diferenas importantes entre as duas molculas, como veremos, relacionadas aos seus diferentes papis no sistema imune. O receptor de clula T, como mostrado na Figura 1.13, composto por duas cadeias de tamanhos aproximadamente iguais, denominadas cadeia e do receptor de clulas T, sendo que cada uma atravessa a membrana da clula T. Cada cadeia tem uma regio varivel e uma constante e a combinao das regies variveis das cadeias e criam um nico stio para a ligao do antgeno. Esta estrutura descrita em detalhes no Captulo 3, e a maneira como cada diversidade introduzida nas regies variveis discutida no Captulo 4. Como veremos, a organizao dos genes para os receptores antignicos e a maneira como cada diversidade introduzida para criar um nico stio de ligao do antgeno essencialmente a mesma para ambos os receptores de clulas B e T. Existe, contudo, uma diferena crucial na maneira pela qual clulas B e T ligam os antgenos. O receptor de clulas T no ligam as molculas de antgenos diretamente; ao invs disso, eles reconhecem fragmentos de antgenos ligados na superfcie de outras clulas. A natureza exata dos antgenos reconhecidos por clulas T, e como os antgenos so fragmentados e levados para superfcie celular, assunto do Captulo 5. Uma outra diferena da molcula de anticorpo que no existe forma secretada de receptor de clula T, a funo dos receptores apenas sinalizar para a clula T que ocorreu uma ligao com o antgeno, e os efeitos imunolgicos subsequentes dependem das aes das prprias clulas T, como descreveremos no Captulo 8.

Segmentos gnicos herdados

Uma combinao de segmentos nica ligada por rearranjo gnico somtico

Os pares de cadeias conferem a cada linfcito um receptor nico

1-12 Cada linfcito em desenvolvimento produz um nico receptor antignico por meio de rearranjos dos segmentos gnicos dos seus receptores
Como os receptores antignicos, com uma infinidade de especificidades so codificadas por um nmero finito de genes? Esta questo foi respondida em 1976, quando Susumu Tonegawa descobriu que os genes para regies variveis de imunoglobulinas so herdados como grupos de segmentos gnicos, cada um codificando uma parte de uma regio varivel de uma cadeia polipeptdica de imunoglobulina (Figura 1.14). Durante o desenvolvimento das clulas B na medula ssea, esses segmentos gnicos so irreversivelmente ligados por uma recombinao do DNA para formar um segmento de DNA codificando uma regio varivel completa. Como existem muitas diferenas nos segmentos gnicos em cada grupo, e diferentes segmentos gnicos so ligados em diferentes clulas, cada clula produz um gene nico para as regies variveis das cadeias leve e pesada das molculas de imunoglobulina. Uma vez que estes processos de recombinao tenham sido bem sucedidos na produo de um receptor funcional, os rearranjos futuros so proibidos. Assim, cada linfcito expressa apenas um receptor especfico. Este mecanismo tem trs consequncias importantes. Primeiro, permite que um nmero ilimitado de segmentos gnicos gere um grande nmero de protenas diferentes. Segundo, devido ao fato de que cada clula rene um diferente grupo de segmentos gnicos, cada clula expressa uma nica especificidade do receptor. Terceiro, devido ao fato de que o rearranjo dos segmentos gnicos envolve uma mudana irreversvel no DNA celular, toda a prognie desta clula herdar genes

Figura 1.14 A diversidade dos receptores de antgeno dos linfcitos gerada pelo rearranjo dos segmentos gnicos somticos. Diferentes partes das regies variveis dos receptores de antgeno so codificadas por grupos de segmentos gnicos. Durante o desenvolvimento dos linfcitos, um membro de cada conjunto de segmento gnico unido, ao acaso, por um processo irreversvel de recombinao do DNA. Os segmentos gnicos justapostos formam um gene completo, que codifica a poro varivel de uma cadeia do receptor e nico para aquela clula. Esse rearranjo ao acaso repetido para outro conjunto de segmentos gnicos, codificando a outra cadeia. Os genes rearranjados so expressos para produzir os dois tipos de cadeias polipeptdicas que se unem para formar um receptor de antgeno nico na superfcie do linfcito. Cada linfcito possui vrias cpias desse receptor.

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codificando a mesma especificidade do receptor. Este esquema geral foi confirmado mais tarde para os genes que codificam os receptores antignicos das clulas T. A diversidade potencial dos receptores de linfcitos gerados dessa maneira enorme. Apenas poucas centenas de segmentos gnicos diferentes podem combinar-se de diferentes maneiras para gerar milhares de cadeias receptoras diferentes. A diversidade dos receptores de linfcitos posteriormente ampliada por uma diversidade juncional, criada por adio ou subtrao de nucleotdeos no processo de unio de segmentos gnicos, e pelo fato de que cada receptor produzido pelo pareamento de duas cadeias variveis diferentes, cada uma codificada por grupos distintos de segmentos gnicos. Milhares de cadeias diferentes de cada tipo podem produzir 106 receptores antignicos distintos atravs dessa diversidade de combinaes. Dessa maneira, uma pequena quantidade de material gentico pode codificar uma diversidade de receptores verdadeiramente surpreendentes. Apenas uma parte dessas especificidades de receptores, produzida aleatoriamente, sobrevive ao processo seletivo que forma o repertrio de linfcitos perifricos. No entanto, existem linfcitos de no mnimo 108 especificidades diferentes em um indivduo em um dado momento. Isso fornece o material bsico onde a seleo clonal atuar.

1-13 As imunoglobulinas ligam uma ampla variedade de estruturas qumicas, enquanto os receptores de clulas T so especializados no reconhecimento de antgenos estranhos como fragmentos peptdicos ligados s protenas do complexo de histocompatibilidade principal
Em princpio, quase todas as estruturas qumicas podem ser reconhecidas pelo sistema imune adaptativo como um antgeno, mas os antgenos geralmente encontrados em uma infeco so protenas, glicoprotenas e polissacardeos de patgenos. Um receptor antignico individual ou um anticorpo reconhece uma pequena parte da estrutura molecular da molcula antignica, que conhecida como determinante antignico ou eptopo (Figura 1.15). Antgenos macromoleculares, tais como protenas e glicoprotenas, geralmente possuem diferentes eptopos que podem ser reconhecidos por diferentes receptores antignicos. Os receptores antignicos das clulas B e das clulas T so adaptados para reconhecer antgenos de duas maneiras diferentes, o que reflete a funo que suas clulas efetoras iro, eventualmente, desempenhar na destruio dos patgenos. As clulas B so especializadas em reconhecer antgenos de superfcie nos patgenos vivendo fora das clulas e se diferenciar em clulas plasmticas efetoras que secretam anticorpos para esses alvos patognicos. Os receptores de clulas B e seus respectivos anticorpos so, assim, capazes de ligar uma grande variedade de estruturas moleculares. As clulas T efetoras, ao contrrio, tm que lidar com patgenos que entraram nas clulas hospedeiras e devem auxiliar na ativao das clulas B. Para realizar essas funes, o receptor de clulas T especializado em reconhecer antgenos que foram gerados dentro das clulas e apresentados na sua superfcie. As propriedades de reconhecimento do receptor de clulas T so um exemplo: eles reconhecem apenas um tipo de antgeno, os peptdeos que foram produzidos em outra clula hospedeira pela degradao das protenas e apresentados na superfcie celular. Alm disso, os peptdeos so reconhecidos apenas se eles estiverem ligados a um determinado tipo de protena de superfcie celular. Estas so as glicoprotenas de membranas conhecidas como molculas do MHC, as quais so codificadas em um grupo de genes chamado de complexo de histocompatibilidade principal, abreviado como MHC. O reconhecimento do antgeno pelos receptores de clulas T , dessa forma, um complexo de um antgeno peptdico estranho e uma molcula do MHC (Figura 1.16). Veremos como estes antgenos compostos so reconhecidos pelos receptores de clulas T e como eles so gerados nos Captulos 3 e 5, respectivamente.

Eptopo Antgeno

Anticorpo

Figura 1.15 Os antgenos so as molculas reconhecidas pela resposta imune enquanto os eptopos so stios nos antgenos aos quais os receptores de antgenos se ligam. Os antgenos podem ser macromolculas complexas como as protenas, mostradas em amarelo. A maioria dos antgenos maior que os stios aos quais se ligam nos anticorpos ou nos receptores, e a regio do antgeno que ligada conhecida como determinante antignico ou eptopo para aquele receptor. Antgenos grandes como as protenas podem conter mais de um eptopo (indicados em vermelho e azul) e, portanto, podem se ligar a diferentes anticorpos.

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Os anticorpos ligados aos eptopos apresentados na superfcie do antgeno

Os eptopos reconhecidos pelos receptores de clulas T geralmente esto escondidos

O antgeno deve primeiramente ser quebrado em fragmentos peptdicos

O eptopo do peptdeo se liga a uma molcula prpria, uma molcula do MHC

Os receptores de clulas T se ligam a um complexo de molculas MHC e peptdeos eptopos

TCR Eptopo do peptdeo Molcula do MHC Molcula do MHC

Figura 1.16 Um anticorpo liga diretamente a um antgeno, ao passo que um receptor de clula T se liga a um complexo de fragmento antignico e a uma molcula prpria. Os anticorpos (primeiro quadro) se ligam diretamente a seus antgenos e reconhecem os eptopos que formam as caractersticas do antgeno. Por outro lado, os receptores de clulas T podem reconhecer eptopos que esto escondidos no antgeno e no podem ser reconhecidos diretamente (segundo quadro). Estes antgenos devem, primeiramente, ser degradados por proteinases (terceiro quadro), e os eptopos do peptdeo entregues a uma molcula prpria, chamada de MHC (quarto quadro). nessa forma, como um complexo peptdeo e molcula do MHC, que os antgenos so reconhecidos pelos receptores de clulas T (quinto quadro).

1-14 O desenvolvimento e a sobrevivncia dos linfcitos so determinados por sinais recebidos atravs de seus receptores antignicos
To surpreendente quanto a gerao de milhes de receptores antignicos diferentes a formao deste repertrio durante o desenvolvimento linfocitrio e a manuteno de um extenso repertrio na periferia. Como os receptores de potencial utilidade so mantidos, enquanto aqueles que poderiam reagir contra os antgenos prprios, os autoantgenos, so eliminados? Como mantido relativamente constante o nmero de linfcitos perifricos e a porcentagem de clulas B e T? A resposta parece ser que, ao longo da vida de um linfcito, desde o seu desenvolvimento nos rgos linfoides centrais, a sua sobrevivncia depende de sinais recebidos atravs de seu receptor antignico. Se um linfcito falha na recepo desses sinais de sobrevivncia, ele morre por uma forma de suicdio celular chamada de apoptose ou morte celular programada. Os linfcitos que reagem intensamente aos antgenos prprios so removidos durante o desenvolvimento por deleo clonal como previsto pela teoria de deleo clonal de Burnet, antes que eles maturem a um estgio no qual possam causar prejuzos. Em contraste, uma completa ausncia de sinais do receptor antignico durante o desenvolvimento pode tambm levar morte celular. Alm disso, se um receptor no for usado dentro de um perodo relativamente curto aps sua entrada na periferia, a clula produzida morre, abrindo caminho para novos linfcitos com receptores diferentes. Dessa maneira, os receptores autorreativos so eliminados e os receptores so testados para assegurar que eles sejam potencialmente funcionais. Os mecanismos que modelam e mantm o repertrio de receptores linfocitrios so descritos no Captulo 7. A palavra derivada do grego, apoptose, que significa queda de folhas de rvores, uma maneira de regular o nmero de clulas no organismo. Esta responsvel, por exemplo, pela morte e renovao das clulas epiteliais intestinais e da pele, alm da regenerao das clulas do fgado. A cada dia a medula ssea produz milhes de novos neutrfilos, moncitos, hemcias e linfcitos e esta produo deve ser balanceada por uma perda igual. A maioria das clulas sanguneas brancas tem perodo de vida relativamente curto e morre por apoptose. As clulas mortas so fagocitadas e degradadas por macrfagos especializados no fgado e bao.

1-15 Os linfcitos encontram e respondem ao antgeno nos rgos linfoides perifricos


Os patgenos podem entrar no organismo por muitas vias e desencadeiam uma infeco em qualquer local nos tecidos, enquanto os linfcitos so normalmente encontrados apenas no sangue, na linfa e nos rgos linfoides. Como, ento, eles se encontram? Os antgenos e linfcitos eventualmente se encontram nos rgos

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linfoides perifricos, nos linfonodos, no bao e nos tecidos linfoides das mucosas (ver Figura 1.7). Os linfcitos virgens maduros esto continuamente recirculando atravs desses tecidos para onde os antgenos patognicos so levados do local da infeco, principalmente por clulas dendrticas. Os rgos linfoides perifricos so especializados no aprisionamento das clulas dendrticas portadoras de antgenos e facilitam o incio das respostas imunes adaptativas. Os tecidos linfoides perifricos so compostos de agregados de linfcitos em uma rede de clulas estromais no-leucocitrias, que fornece uma organizao estrutural bsica do tecido e fornece os sinais de sobrevivncia para auxiliar a manuteno da vida dos linfcitos. Alm dos linfcitos, rgos linfoides perifricos tambm contm macrfagos e clulas dendrticas residentes. Quando uma infeco ocorre em um tecido como a pele, antgenos livres e clulas dendrticas portadoras de antgenos migram do local de infeco atravs dos vasos linfticos aferentes para os linfonodos de drenagem (Figura 1.17), tecidos linfoides perifricos onde eles ativam linfcitos antgeno-especficos. Os linfcitos ativados, ento, passam por um perodo de proliferao e diferenciao, aps o qual a maioria deixa os linfonodos como clulas efetoras via vasos linfticos eferentes. Isso, eventualmente, retorna-os corrente sangunea (ver Figura 1.7), a qual ento os leva at os tecidos onde iro atuar. Todo esse processo leva em torno de 4-6 dias do momento em que o antgeno reconhecido, o que significa que uma resposta imune adaptativa contra um antgeno no encontrado anteriormente no se torna efetiva at cerca de uma semana aps a infeco. Os linfcitos virgens que no reconhecem seu antgeno tambm saem atravs dos vasos linfticos eferentes e retornam ao sangue, onde eles continuam a recircular atravs dos tecidos linfoides at reconhecerem seu antgeno ou morrerem. Os linfonodos so rgos linfoides altamente organizados, localizados nos pontos de convergncia de vasos do sistema linftico, o sistema mais extenso que coleta fludo extracelular dos tecidos e retornando-o ao sangue (ver Figura 1.7). Esse fludo extracelular produzido continuamente pela filtrao do sangue e chamado de linfa. A linfa sai dos tecidos perifricos devido presso exercida pela sua produo contnua, e conduzida por vasos linfticos, ou linfticos. As vlvulas unidirecionais dos vasos linfticos impedem um fluxo reverso, e os movimentos de uma parte do corpo em relao a outra so importantes no direcionamento da linfa. Os vasos linfticos aferentes drenam os fluidos dos tecidos e levam os patgenos e clulas portadoras de antgenos dos tecidos infectados para os linfonodos (Figura 1.18). Os antgenos livres simplesmente difundem-se no fludo extracelular para o linfonodo, enquanto as clulas dendrticas migram ativamente para os linfonodos sob a influncia de quimiocinas quimiotxicas. As mesmas quimiocinas tambm atraem os linfcitos do sangue que entram nos linfonodos passando atravs das paredes de vasos sanguneos especializados chamados vnulas endoteliais altas (HEV). Nos linfonodos, os linfcitos B so localizados nos folculos, que forma o crtex externo do linfonodo, com clulas T mais difusamente distribudas nas reas paracorticais circundantes, tambm chamadas de crtex medular ou zonas de clulas T (ver Figura 1.18). Os linfcitos que migram do sangue para os linfonodos entram inicialmente nas reas paracorticais e as clulas dendrticas apresentadoras de antgeno e macrfagos, como so atrados pela mesma quimiocina, tambm migram para esse local. Os antgenos livres difusos nos linfonodo podem ser aprisionados nessas clulas dendrticas e macrfagos. Esta justaposio de antgeno, clulas apresentadora de antgeno e clulas T virgens criam um ambiente ideal na zona de clulas T onde as clulas T virgens podem ligar seu antgeno e, dessa maneira tornarem-se ativadas. Como dito anteriormente, a ativao de clulas B geralmente requer no apenas um antgeno, que se liga ao receptor de clula B, mas tambm a cooperao de clulas T auxiliares, um tipo de clulas T efetoras (ver Seo 1-4). A organizao

Os linfcitos e linfa retornam para o sangue via ducto torcico

Os linfcitos virgens entram nos linfonodos pelo sangue

Corao

Linfonodo

Tecido perifrico infectado

Os antgenos dos locais de infeco alcanam os linfonodos via linfticos

Figura 1.17 Os linfcitos circulantes encontram o antgeno nos rgos linfoides perifricos. Os linfcitos virgens recirculam constantemente atravs dos tecidos linfoides perifricos, aqui ilustrados como um linfonodo poplteo, um linfonodo localizado atrs do joelho. No caso de uma infeco no p, este ser o linfonodo que far a drenagem, onde os linfcitos podero encontrar seus antgenos especficos e tornarem-se ativados. Ambos os linfcitos ativados e no ativados retornam corrente sangunea via sistema linftico.

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dos linfonodos garante que antes da entrada nos folculos, as clulas B virgens passem atravs das zonas de clulas T, onde elas talvez encontrem seu antgeno e clulas T auxiliares e se tornem ativadas. Alguns folculos de clulas B incluem os centros germinativos, em que as clulas B so submetidas intensa proliferao e diferenciao em clulas plasmticas. Em humanos, o bao o primeiro rgo em tamanho situado logo atrs do estmago (ver Figura 1.7). Esse rgo no tem ligao direta com o sistema linftico, ao contrrio, ele coleta antgenos do sangue e est envolvido nas respostas imunes contra os patgenos sanguneos. Os linfcitos entram e saem do bao via vasos sanguneos. O bao ainda coleta e descarta as hemcias senescentes. Sua organizao apresentada esquematicamente na Figura 1.19. Grande parte do bao composta por polpa vermelha, o local de descarte das hemcias. Os linfcitos que circundam as arterolas que correm atravs do bao formam as reas isoladas de polpa branca. A camada de linfcitos ao redor de uma arterola chamada de camada linfoide periarteriolar (PALS) e contm principalmente clulas T. Os folculos linfoides so localizados nos intervalos e contm principalmente clulas B. A chamada zona marginal circunda o folculo e possui poucas clulas T, rica em macrfagos e tem uma populao residente, de clulas B nocirculantes conhecidas como zona marginal de clulas B, das quais pouco se conhece, e ser discutida no Captulo 7. Os microrganismos nascidos de origem sangunea como os antgenos solveis e os complexos antgeno:anticorpo so filtrados do sangue por macrfagos e por clulas dendrticas imaturas na zona marginal. Aps a migrao das clulas dendrticas imaturas dos tecidos perifricos para as reas de clulas T dos linfonodos, quando as clulas dendrticas imaturas das zonas marginais esplnicas capturam os antgenos e tornam-se ativadas, elas migram para as reas de clulas T do bao, onde so capazes de apresentar os antgenos para as clulas T. A maioria dos patgenos entra no organismo atravs das superfcies das mucosas, e tambm exposto a uma grande quantidade de outros antgenos potenciais do ar, dos alimentos e da flora microbiana natural do corpo. As superfcies das mucosas so protegidas por um extenso sistema de tecidos linfoides conhecidos geralmente por sistema imune de mucosa ou tecidos associados s mucosas (MALT). Coletivamente, o sistema imune de mucosa parece conter tanto linfcitos quanto em qualquer outra parte do corpo, e eles formam um grupo de clulas especializadas que obedecem, de certa forma, regras diferentes de recirculao

Figura 1.18 Organizao de um linfonodo. Como apresentado no diagrama da esquerda, que mostra um linfonodo em um corte longitudinal, um linfonodo consiste em um crtex mais externo e uma medula interna. O crtex composto por uma camada externa de clulas B organizadas em folculos linfoides, e reas profundas, ou paracorticais, compostas principalmente por clulas T e clulas dendrticas. Quando uma resposta imune est em ao, alguns dos folculos contm reas centrais de intensa proliferao de clulas B chamadas de centros germinais e so conhecidas como folculos linfoides secundrios. Estas reaes so muito dramticas, mas eventualmente desaparecem como centros germinais senescentes. A linfa drenada dos espaos extracelulares do organismo leva antgenos nas clulas dendrticas fagocticas e nos macrfagos fagocticos dos tecidos para o linfonodo via vasos linfticos aferentes. Estes migram diretamente dos sinus para regies celulares do nodo. A linfa sai pelos vasos linfticos eferentes na medula. A medula consiste em cordes de macrfagos e clulas plasmticas secretoras de anticorpos, conhecidas como cordes medulares. Os linfcitos virgens entram nos nodos pela corrente sangunea atravs de vnulas ps-capilares especializadas (no apresentado) e saem com a linfa atravs dos linfticos eferentes. A fotomicrografia ptica mostra um corte transversal do linfonodo, com folculos proeminentes contendo os centros germinais. (Aumento de 7; fotografia cortesia de N. Rooney.)

Um linfonodo

Seio cortical Folculo linfoide secundrio (com centro germinal) Vasos linfticos aferentes

Folculo linfoide primrio (maioria clulas B) Cordes medulares (macrfagos e clulas plasmticas) Seio medular

rea paracortical (maioria clulas T)

Artria Veia Vasos linfticos eferentes Centro germinal senescente

Centro germinal

Seio marginal

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do que aquelas dos outros rgos linfoides perifricos. Os tecidos linfoides associados ao intestino (GALT) incluem as tonsilas, os adenoides e o apndice, e as estruturas especializadas chamadas de placas de Peyer do intestino delgado, coletam os antgenos das superfcies epiteliais do trato gastrointestinal. Nas placas de Peyer, que so, entre estes, os tecidos mais importantes e altamente organi-

O bao

Cpsula

Polpa vermelha

Polpa branca

Veia trabecular

Seio venoso

RP PFZ MZ Co

Seo transversal da polpa branca

Artria trabecular

Seo longitudinal da polpa branca

Coroa de clulas B

GC

Centro germinal Zona marginal Zona perifolicular

PALS PFZ

Camada linfoide periarteriolar Arterola central Polpa vermelha

Figura 1.19 organizao dos tecidos linfoides no bao. O esquema no topo direita mostra que o bao consiste em uma polpa vermelha (reas cor-de-rosa no quadro superior), que o local de destruio das hemcias, entremeado com a polpa branca linfoide. O quadro central exibe uma ampliao de uma pequena seco do bao humano (centro), mostrando o arranjo de discretas zonas de polpa branca (amarelo e azul) ao redor de arterolas centrais. A maioria da polpa branca pode ser vista na seco transversal, com duas pores ilustradas em seco longitudinal. Os dois diagramas esquemticos inferiores mostram uma ampliao de um corte transversal (abaixo no centro) e de um corte longitudinal (quadro inferior direita) da polpa branca. Circundando a arterola central, encontra-se a camada linfoide periarteriolar (PALS, periarteriolar lymphoid sheath), composta de clulas T. Ali, os linfcitos e as clulas dendriticas carregadas de antgenos se encontram. Os folculos consistem principalmente em clulas B; em um folculo secundrio um centro germinal circundado por uma coroa de clulas B. Os folculos so circundados

por uma zona marginal de linfcitos. Em cada rea de polpa branca, o sangue, carregando linfcitos e antgenos, flui de uma artria trabecular para uma arterola central. Desta arterola, vasos sanguneos menores se espalham, eventualmente terminando em uma zona especializada do bao humano, chamada de zona perifolicular (PFZ, perifollicular zone), que circunda cada zona marginal. As clulas e os antgenos passam ento pela polpa branca atravs de espaos cheios de sangue na zona perifolicular. A fotomicrografia ptica de uma imuno-histoqumica (abaixo, esquerda) mostra uma seco transversal da polpa branca de um bao humano corado para clulas B maduras. Ambos, os folculos e as PALS so circundados pela zona perifolicular. A arterola folicular emerge nas PALS (seta inferior), atravessa os folculos e passa atravs da zona marginal caindo na zona perifolicular (setas superiores). Co, coroa de clulas B foliculares; GC, centros germinais; MZ, zona marginal; RP, polpa vermelha; setas, arterola central. (Fotografia cortesia de N.M. Milicevic.)

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zados, o antgeno capturado por clulas epiteliais especializadas chamadas de clulas microfenestradas ou clulas M (Figura 1.20). Os linfcitos formam um folculo constitudo em uma grande regio central de linfcitos B circundados por uma menor quantidade de linfcitos T. As clulas dendrticas residentes nas placas de Peyer apresentam o antgeno aos linfcitos T. Os linfcitos entram nas placas de Peyer pela circulao sangunea e saem atravs de vasos linfticos eferentes. Os linfcitos efetores produzidos nas placas de Peyer circulam atravs do sistema linftico e para a corrente sangunea, de onde so novamente levados aos tecidos das mucosas para realizar suas aes efetoras. No trato respiratrio e em outras mucosas eles so similares, mas em agregados mais difusos: o tecido linfoide nasal (NALT) e tecido linfoide associado aos brnquios (BALT) esto presentes no trato respiratrio. Assim como as placas de Peyer, estes tecidos linfoides de mucosa so tambm revestidos por clulas M, por onde podem passar os microrganismos inalados e os antgenos so aprisionados no muco que reveste o trato respiratrio. O sistema imune de mucosa ser discutido no Captulo 11. Embora muito diferentes na aparncia, os linfonodos, o bao e os tecidos linfoides associados os mucosas compartilham a mesma arquitetura bsica. Todos operam no mesmo princpio, aprisionando antgenos e clulas apresentadoras de antgeno dos locais de infeces e capacitando-os a apresentar antgenos para os pequenos linfcitos migratrios, induzindo, dessa forma, as respostas imunes adaptativas. Os tecidos linfoides perifricos tambm fornecem sinais de sustentao para os linfcitos que no encontram seu antgeno especfico imediatamente, de modo que eles sobrevivam e continuem a recircular. Por estarem envolvidos na resposta imune adaptativa inicial, os tecidos linfoides perifricos no so estruturas estticas, mas variam dramaticamente, dependendo se h ou no infeco. Um tecido linfoide de mucosa difuso pode aparecer em reposta a uma infeco e ento desaparecer, enquanto a arquitetura dos tecidos organizados muda de modo mais definido durante uma infeco. Por exemplo, os folculos de clulas B dos linfonodos se expandem com a proliferao dos linfcitos B para formar os centros geminais (ver Figura 1.18), e todo o linfonodo aumenta um fenmeno familiarmente conhecido como glndulas inchadas, ou ngua. Finalmente, populaes especializadas de linfcitos podem ser encontradas distribudas em todos os locais do corpo ao invs de serem encontradas em tecidos linfoides organizados. Tais locais incluem o fgado e a lamina prpria do intestino, assim como a base do epitlio que reveste o intestino, epitlio reprodutivo e, em camundongos, mas no no homem, a epiderme. Estas populaes linfocitrias parecem ter um papel importante na proteo desses tecidos contra infeces, e sero descritas mais adiante nos Captulos 7 e 11.

Figura 1.20 Organizao da placa de Peyer na mucosa intestinal. Como mostra o diagrama esquerda, a placa de Peyer contm numerosos folculos de clulas B com centros germinais. As clulas T ocupam as reas entre os folculos e as reas dependentes de clulas T. A camada entre a superfcie epitelial e os folculos conhecida como cpula subepitelial e rica em clulas dendrticas, clulas T e B. As placas de Peyer no possuem linfticos aferentes e os antgenos entram diretamente do intestino atravs de um epitlio especializado constitudo nas chamadas clulas microfenestradas (M). Embora esse tecido parea bastante diferente dos outros rgos linfoides, as divises bsicas esto mantidas. Como nos linfonodos, os linfcitos vindos do sangue entram nas placas de Peyer atravs das paredes das vnulas endoteliais altas (no apresentado), e saem via vasos linfticos eferentes. A fotomicrografia tica mostra um corte da placa de Peyer na parede intestinal de um camundongo. A placa de Peyer pode ser vista abaixo dos tecidos epiteliais. GC, centro germinal; TODA, rea dependente de clula T. O quadro b uma fotomicrografia eletrnica de varredura de um epitlio associado ao folculo, a caixa (a) mostra as clulas M com ausncia de microvilosidades e a camada de muco presente nas clulas epiteliais normais. Cada clula M aparece como uma depresso na superfcie epitelial. O quadro c uma vista de maior magnitude da rea da caixa (b), mostrando a superfcie pregueada, caracterstica de uma clula M. As clulas M so a porta de entrada para muitos patgenos e outras partculas. (a) Corante de hematoxilina e eosina. Aumento de 100; (b) 5.000; (c) 23.000. (Fonte: Mowat, A., Viney, J.: Immunol. Rev. 1997, 156: 145-166.)

As placas de Peyer so cobertas por uma camada epitelial contendo clulas especializadas chamadas de clulas M que tem caractersticas de membrana pregueada
Cpula subepitelial Epitlio associado aos folculos Clulas M

Vilosidades

Cpula

Centro germinal Clulas T Folculo Linfticos eferentes

TDA a

GC c

Clula M

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1-16 A interao com outras clulas bem como com antgenos necessria ativao dos linfcitos
Como vimos nas Sees 1-3 e 1-6, os tecidos linfoides perifricos so especializados no apenas no aprisionamento das clulas fagocticas que ingeriram antgeno, mas tambm em promover suas interaes com os linfcitos necessrios para iniciar uma resposta imune adaptativa. Todas as respostas dos linfcitos contra os antgenos requerem no apenas o sinal resultante da ligao do antgeno aos seus receptores de linfcitos, mas tambm de um segundo sinal, emitido por outra clula por meio de suas molculas de superfcie celular, conhecidas geralmente como molculas coestimuladoras (ver Seo 1-7). As clulas T virgens so geralmente estimuladas por clulas dendrticas ativadas (Figura 1.21, quadro esquerda), mas para as clulas B virgens (Figura 1.21, quadro direita) o segundo sinal emitido por uma clula T auxiliar ativada. Os macrfagos e as clulas B apresentadoras de antgenos estranhos em suas superfcies tambm podem ser induzidos a expressar molculas coestimuladoras e, dessa forma, ativar as clulas T virgens. Estas trs clulas apresentadoras de antgeno especializadas do sistema imune so ilustradas na Figura 1.22. As clulas dendrticas so as mais importantes das trs a esse respeito, com um papel central na iniciao da resposta imune adaptativa. A induo de molculas coestimuladoras importante no incio da resposta imune adaptativa porque o contato com o antgeno, sem o acompanhamento de uma molcula coestimuladora, inativa os linfcitos T virgens ao invs de ativ-los, levando ou deleo clonal ou a um estado inativado conhecido como anergia. Voltaremos a este tpico no Captulo 7. Dessa forma, precisamos adicionar um postulado final teoria de seleo clonal. Um linfcito virgem pode apenas ser ativado por clulas que portam no apenas o antgeno especfico, mas tambm as molculas coestimuladoras, cuja expresso regulada pela imunidade inata.

1-17 Os linfcitos ativados por antgenos proliferam nos rgos linfoides perifricos, gerando clulas efetoras e memria imunolgica
A grande diversidade dos receptores de linfcitos significa que, normalmente, haver, pelo menos, alguns que podero se ligar a um determinado antgeno estranho. Contudo, este nmero ser bem pequeno, certamente no o suficiente para produzir uma resposta contra o patgeno. Para gerar linfcitos efetores antgeno-especficos em nmero suficiente para combater uma infeco, um linfcito com um receptor de especificidade adequada primeiro ativado para proliferar. Somente quando um

Ligao antgeno-receptor e coestimulao da clula T por uma clula dendrtica

Ligao antgeno-receptor e ativao da clula B por uma clula T

1 1 2 2

Clula dendrtica

Linfcito T

Linfcito T

Linfcito B

A proliferao e diferenciao da clula T para adquirir funo efetora

Proliferao e diferenciao de clulas B para adquirir funo efetora

Figura 1.21 Dois sinais so necessrios ativao dos linfcitos. Alm de receber um sinal de seus receptores de antgeno (sinal 1), os linfcitos virgens maduros tambm devem receber um segundo sinal (sinal 2), para se tornarem ativados. Para as clulas T (quadro esquerda), este segundo sinal emitido por uma clula apresentadora de antgeno como a clula dendrtica aqui representada. Para as clulas B (quadro direita), o segundo sinal geralmente emitido por uma clula T ativada que reconhece os peptdeos antignicos capturados, processados e apresentados pelas clulas B em sua superfcie.

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Clula dendrtica

Macrfago

Linfcito B

i
dos tecidos que interagem com muitos tipos distintos de patgenos. Os macrfagos so especializados na internalizao dos patgenos extracelulares, especialmente aps eles serem recobertos por anticorpos e terem apresentado seus antgenos. As clulas B tm receptores antgeno-especficos que permitem que elas internalizem, processem e apresentem grandes quantidades de antgeno especficos. (Fotografia cortesia de R.M. Steinman (a); N. Rooney (b, c, e, f); S. Knight (d, g) e P.F. Heap (h, i).)

Figura 1.22 As clulas apresentadoras de antgenos. Os trs tipos de clulas apresentadoras de antgeno so mostrados da maneira que sero apresentadas ao longo deste livro (primeira linha), como elas aparecem na micrografia ptica (segunda linha; as clulas relevantes esto indicadas por uma seta), como so visualizadas na microscopia eletrnica de transmisso (terceira linha) e por microscopia eletrnica de varredura (linha inferior). As clulas dendrticas maduras so encontradas nos tecidos linfoides e so derivadas das clulas dendrticas imaturas

Imunobiologia de Janeway

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grande clone de clulas idnticas foi produzido que eles finalmente se diferenciam em clulas efetoras. Esta expanso clonal uma caracterstica comum a todas as respostas imune adaptativas. Os linfcitos T virgens, quando reconhecem seu antgeno especfico em uma clula apresentadora de antgeno especfica, param de migrar e crescem. A cromatina no seu ncleo torna-se menos densa, o nuclolo aparece, e o volume do ncleo e do citoplasma aumenta, e novos mRNAS e novas protenas so sintetizados. Em poucas horas, as clulas esto totalmente diferentes e so conhecidas como linfoblastos (Figura 1.23). Os linfoblastos agora comeam a se dividir, normalmente duplicando de duas a quatro vezes a cada 24 horas por 3 a 5 dias, de modo que um linfcito virgem d origem a um clone de cerca de 1.000 clulas filhas de idntica especificidade. Estas ento se diferenciam em clulas efetoras. No caso das clulas B, as clulas efetoras diferenciadas so as clulas plasmticas, que secretam anticorpo. No caso

Pequeno linfcito em repouso

Linfoblasto

Clula B efetora (clula plasmtica)

Clula T efetora

Figura 1.23 Micrografia eletrnica de transmisso de linfcitos em vrios estgios de ativao para funo efetora. Os pequenos linfcitos em repouso (quadro superior) ainda no encontraram seu antgeno. Note seu citoplasma escasso, a ausncia de retculo endoplasmtico rugoso e a cromatina condensada, todos indicativos de clula inativa. Esta pode ser uma clula T ou B. Pequenos linfcitos circundantes esto presos nos linfonodos quando seus receptores encontram antgeno nas clulas apresentadoras de antgeno. A estimulao pelo antgeno induz o linfcito a se diferenciar em um linfoblasto ativo (quadro central). Note o maior tamanho, ncleo aumentado e cromatina mais difusa; novamente, os linfoblastos T e B so similares em aparncia. Estas clulas passam por repetidas divises, que so seguidas por diferenciao para a funo efetora. O quadro inferior mostra linfcitos T e B efetores. Note a grande quantidade de citoplasma, mitocndrias abundantes e presena de retculo endoplasmtico rugoso, todas as caractersticas de clulas ativas. O retculo endoplasmtico rugoso especialmente proeminente nas clulas plasmticas (clulas B efetoras), que esto sintetizando e secretando grandes quantidades de protenas na forma de anticorpos. (Fotografia cortesia de N. Rooney.)

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Figura 1.24 O curso de uma tpica resposta de anticorpo. O primeiro encontro com o antgeno produz uma resposta primria. O antgeno A introduzido no tempo zero encontra pouco anticorpo especfico no soro. Depois da fase lag (refratria), aparece anticorpo contra o antgeno A (azul), e sua concentrao sobe at um patamar, quando, ento, diminui gradualmente. Esta uma tpica resposta primria. Quando o soro testado contra outro antgeno, B (amarelo), pouco anticorpo est presente, demonstrando a especificidade da reposta de anticorpo. Quando o animal for exposto, mais tarde, a uma combinao dos antgenos A e B, ocorre uma rpida e intensa resposta secundria ao antgeno A. Isso ilustra a memria imunolgica, a capacidade do sistema imune de produzir uma resposta secundria ao mesmo antgeno de modo mais eficiente e efetivo, o que proporciona ao hospedeiro uma defesa especfica contra a infeco. Essa a principal razo para a vacinao de reforo aps uma vacinao inicial. Note que a resposta ao antgeno B assemelha-se resposta inicial primria ao antgeno A, pois este o primeiro encontro do hospedeiro com o antgeno B.

Resposta primria
Anticorpo (g/mL de soro)

Resposta secundria

104 103 102 101 100 10


1

Fase lag

Resposta ao antgeno A

102 103 4
Antgeno A Resposta ao antgeno B

12

16

20
Antgeno AB

64

68

72

Dias

de clulas T, as clulas efetoras so as clulas T citotxicas capazes de destruir as clulas infectadas, ou as clulas T auxiliares que ativam outras clulas do sistema imune. Os linfcitos efetores no recirculam como os linfcitos virgens. Algumas clulas T efetoras detectam os locais de infeco e migram do sangue para esse local, outras permanecem nos tecidos linfoides para ativar clulas B. Algumas clulas plasmticas secretoras de anticorpos permanecem nos rgos linfoides perifricos, mas a maioria das clulas plasmticas produzidas nos linfonodos e no bao migram para a medula ssea, fixando residncia e liberando anticorpos no sistema sanguneo. As clulas efetoras geradas no sistema imune de mucosa geralmente permanecem nos tecidos de mucosa. Aps um linfcito virgem ser ativado, ele leva de 4 a 5 dias para completar a sua expanso clonal e os linfcitos terem se diferenciado em clulas efetoras. A primeira resposta imune adaptativa contra um patgeno ocorre somente vrios dias aps o incio da infeco e de ter sido detectada pelo sistema imune inato. A maioria dos linfcitos produzidos pela expanso clonal em determinada resposta imune eventualmente morre. Contudo, um nmero significativo de clula B antgenoespecficas ativadas e clulas T ativadas persistem aps a eliminao do antgeno. Estas clulas so conhecidas como clulas de memria e formam a base da memria imunolgica. Elas podem ser reativadas muito mais rapidamente do que os linfcitos virgens, o que assegura uma resposta mais rpida e eficaz em um segundo encontro com um patgeno e, por meio disso, proporciona imunidade protetora permanente. As caractersticas da memria imunolgica so facilmente observadas comparando-se a resposta de anticorpos de um indivduo a uma primeira imunizao com a mesma resposta produzida no mesmo indivduo por uma segunda imunizao ou reforo com o mesmo antgeno. Como mostra a Figura 1.24, a resposta secundria de anticorpo ocorre aps uma pequena fase lag (refratria), alcanando um nvel superior acentuado, e produz anticorpos de altssima afinidade, ou fora de ligao, para o antgeno. A afinidade aumentada para o antgeno chamada maturao da afinidade e o resultado de eventos que selecionam receptores de clulas B e, portanto, os anticorpos, para afinidade progressivamente mais acentuada para o antgeno durante a resposta imune. Muito importante, os receptores de clulas T no passam pela maturao da afinidade, e o menor percentual para ativao de clulas T de memria comparado s clulas T virgens resulta de uma mudana na resposta das clulas e no de uma mudana no receptor. Os meca-

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nismos dessa mudana importante so descritos nos Captulos 4, 9 e 10. A base celular da memria imunolgica a expanso clonal e a diferenciao clonal das clulas especficas para o antgeno que as induziu, e esta , portanto, totalmente antgeno-especfica. a memria imunolgica que permite o sucesso das vacinaes e previne as reinfeces com patgenos que j foram repelidos com sucesso por uma resposta imune adaptativa. A memria imunolgica a consequncia biolgica mais importante da imunidade adaptativa, embora sua base celular e molecular no seja ainda totalmente compreendida, como ser visto no Captulo 10.

Resumo
Os sistemas inatos precoces de defesa, que dependem de receptores invariveis que reconheceram caractersticas comuns dos patgenos, so crucialmente importantes, mas eles podem ser superados por muitos patgenos, e no produzem memria imunolgica. O reconhecimento de um determinado patgeno e a produo de uma proteo aumentada contra uma reinfeco papel nico da imunidade adaptativa. Uma resposta imune adaptativa envolve a seleo e a amplificao clones de linfcitos portadores de receptores que reconhecem antgenos estranhos. Esta seleo clonal fornece teoricamente a base para entendermos todas as caractersticas fundamentais da resposta imune adaptativa. Existem dois tipos principais de linfcitos: os linfcitos B, que maturam na medula ssea e so a fonte de anticorpos circulantes, e os linfcitos T, que maturam no timo e reconhecem os peptdeos dos patgenos apresentados pelas molculas do MHC nas clulas infectadas ou nas clulas apresentadoras de antgenos. Cada linfcito possui receptores de superfcie celular especfico para um nico antgeno. Estes receptores so produzidos pela recombinao aleatria de segmentos gnicos de receptores variveis e pelo pareamento de distintas cadeias variveis de protenas: as cadeias leves e as cadeias pesadas de imunoglobulinas, ou as duas cadeias do receptor de clulas T. Esse processo produz uma grande coleo de linfcitos, cada um deles portando um receptor distinto, de modo que o repertrio total de receptores possa reconhecer qualquer antgeno. Se o receptor especfico para autoantgenos nicos, o linfcito eliminado no encontro com o antgeno logo no incio de seu desenvolvimento, enquanto sinais de sobrevivncia recebidos atravs de receptores de antgenos selecionam e mantm um repertrio de linfcitos potencialmente teis. A imunidade adaptativa iniciada quando uma resposta imune inata falha ao eliminar uma nova infeco, e as clulas apresentadoras de antgeno ativadas portadoras de antgenos patognicos levada aos tecidos linfoides de drenagem. Quando um linfcito recirculante encontra seu antgeno correspondente nos tecidos linfoides perifricos, ele induzido a proliferar e sua prognie se diferencia em linfcitos efetores B e T que podem eliminar o agente infeccioso. Uma subpopulao desses linfcitos em proliferao se diferencia em clulas de memria, pronta a responder rapidamente ao mesmo patgeno em um novo encontro. Os detalhes desses processos de reconhecimento, desenvolvimento e diferenciao formam o assunto principal das trs partes centrais deste livro.

Os mecanismos efetores da imunidade adaptativa


Na primeira parte deste captulo vimos como os linfcitos virgens so selecionados pelo antgeno para se diferenciarem em clones de linfcitos efetores ativados. Agora expandimos para os mecanismos, por meio dos quais os linfcitos efetores ativados tm como alvo diferentes patgenos para a destruio em uma resposta imune adaptativa bem-sucedida. Os distintos tipos de vida dos patgenos requerem respostas diferentes para seu reconhecimento e destruio (Figura 1.25). Os

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Figura 1.25 Os principais tipos de patgenos encontrados pelo sistema imune e algumas doenas por eles causadas.
Tipo de patgeno

O sistema imune protege contra quatro classes de patgenos Exemplos


Streptococcus pneumoniae Clostridium tetani Trypanosoma brucei Pneumocystis carinii Mycobacterium leprae Leishmania donovani Plasmodium falciparum Varola Influenza Varicela Ascaris Schistosoma

Doenas
Pneumonia Ttano Doena do sono Pneumonia por pneumocystis Lepra Leishmaniose Malria Varola Gripe Catapora Ascariase Esquistossomose

Bactria extracelular, parasitas e fungos

Bactria intracelular, parasitas

Vrus (intracelular)

Vermes parasticos (extracelulares)

receptores de clulas B reconhecem os antgenos do ambiente extracelular e se diferenciam em clulas plasmticas efetoras que secretam anticorpos naquele ambiente. Os receptores de clulas T so especializados para detectar antgenos que tenham sido produzidos nas clulas do organismo, e isto refletido nas aes efetoras das clulas T. Algumas clulas T efetoras matam diretamente as clulas infectadas com patgenos intracelulares tais como os vrus, enquanto outras participam da resposta contra patgenos extracelulares interagindo com clulas B, auxiliando-as na produo de anticorpos. A maioria dos outros mecanismos efetores que eliminam os patgenos alvos de uma resposta imune adaptativa essencialmente idntica aos da imunidade inata e envolve clulas como macrfagos e neutrfilos, e protenas como do sistema do complemento. De fato, parece que a resposta imune adaptativa dos vertebrados evoluiu por meio da adio tardia do reconhecimento especfico pelos receptores distribudos clonalmente nos mecanismos de defesa inata j existentes nos invertebrados. Isso ser discutido no Captulo 16. Iniciaremos salientando as aes efetoras dos anticorpos, que dependem quase que totalmente do recrutamento das clulas e molculas do sistema imune inato.

1-18 Anticorpos lidam com formas extracelulares de patgenos e seus produtos txicos
Os anticorpos so encontrados no fluido componente do sangue ou plasma e em fluidos extracelulares. Como os fluidos corporais eram conhecidos como humores, a imunidade mediada por anticorpos conhecida como imunidade humoral. Como visto na Figura 1.13, os anticorpos so molculas em forma de Y cujos braos formam dois stios idnticos de ligao antignica. Esses so altamente variveis de uma molcula para outra, fornecendo a diversidade necessria ao reconhecimento do antgeno especifico. A haste do Y muito menos varivel. Existem apenas cinco formas principais desta regio constante de um anticorpo, e estas so conhecidas como classes ou isotipos de anticorpos. A regio constante determina as propriedades funcionais de um anticorpo como ele ir participar dos mecanismos que eliminam os antgenos uma vez que ele reconhecido e cada classe realiza sua funo particular participando de um grupo distinto de mecanismos efetores. As classes de anticorpos e suas funes esto descritas nos Captulos 4 e 9. A primeira e mais direta maneira pela qual os anticorpos podem proteger contra os patgenos ou seus produtos ligando-se a eles e ento bloqueando seus

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Anticorpo especfico

Toxinas bacterianas

Bactria no espao extracelular

Bactria no plasma

Clulas com receptores para toxinas

Macrfago

Neutralizao

Opsonizao

Ativao do complemento

Complemento

Figura 1.26 Os anticorpos podem participar de trs formas na defesa do hospedeiro. A coluna esquerda mostra os anticorpos ligando e neutralizando toxinas bacterianas, impedindo sua interao com as clulas do hospedeiro e a doena. As toxinas no-ligadas podem reagir com os receptores das clulas do hospedeiro, enquanto os complexos toxinas:anticorpos no. Os anticorpos tambm neutralizam partculas virais completas e clulas bacterianas ligando-se a elas e inativando-as. Os complexos antgeno:anticorpo so eventualmente eliminados e degradados pelos macrfagos. Os anticorpos que recobrem os antgenos os tornam reconhecveis como estranhos pelos fagcitos (macrfagos e neutrfilos), que os ingerem e destroem, processo denominado de opsonizao. Os quadros centrais mostram a opsonizao e a fagocitose de uma clula bacteriana. Os quadros direita mostram a ativao do sistema do complemento pelos anticorpos que recobrem a clula bacteriana. Os anticorpos ligados formam um receptor para a primeira protena do sistema do complemento, o qual eventualmente forma um complexo proteico na superfcie da clula bacteriana que, em alguns casos, pode mat-la diretamente. Em geral, o recobrimento pelo complemento favorece a ingesto e a destruio da bactria pelos fagcitos. Assim, os anticorpos sinalizam os patgenos e seus produtos txicos para eliminao pelos fagcitos.

Ingesto pelo macrfago

Ingesto pelo macrfago

Lise e ingesto

acessos s clulas que eles poderiam infectar ou destruir (Figura 1.26, quadro esquerda). Este processo conhecido como neutralizao e importante para a proteo contra vrus, que so ento impedidos de entrar nas clulas e replicar, e contra toxinas bacterianas. Entretanto, a ligao pelos anticorpos no suficiente para impedir replicao de bactrias. Nesse caso, a funo dos anticorpos permitir que uma clula fagoctica, como um macrfago ou um neutrfilo, ingira e destrua a bactria. Muitas bactrias escapam do sistema imune inato porque elas possuem uma membrana externa que no reconhecida pelos receptores de reconhecimento de padres dos fagcitos. Contudo, os antgenos da membrana podem ser reconhecidos pelos anticorpos, e os fagcitos tm receptores que se ligam haste dos anticorpos, recobrindo a bactria, levando fagocitose (ver Figura 1.26, quadro central). O revestimento dos patgenos e de partculas estranhas, dessa maneira, conhecido como opsonizao. A terceira funo dos anticorpos a de ativao do complemento. O complemento discutido em detalhes no Captulo 2, inicialmente ativado na imunidade ina-

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ta por superfcies microbianas, sem o auxilio de anticorpos. Contudo, as regies constantes dos anticorpos ligadas s superfcies bacterianas formam receptores para a primeira protena do sistema do complemento, de modo que quando os anticorpos so produzidos ativao complementar aumentada. Os componentes do complemento ligados superfcie bacteriana podem destruir diretamente certas bactrias, e isto importante em algumas infeces bacterianas (ver Figura 1.26, quadro direita). A principal funo do complemento, contudo, como a dos anticorpos, revestir a superfcie do patgeno e permitir que os fagcitos engolfem e destruam a bactria que, de outra maneira, eles no reconheceriam. O complemento tambm intensifica as aes bactericidas dos fagcitos e, na verdade, so assim denominados pois complementam as atividades dos anticorpos. Anticorpos de diferentes classes so encontrados em diferentes compartimentos do corpo e diferem nos mecanismos efetores que eles recrutam, mas todos os patgenos e as molculas livres ligadas pelo anticorpo so eventualmente entregues aos fagcitos para ingesto, degradao e remoo do organismo (ver Figura 1.26, quadros inferiores). O sistema do complemento e os fagcitos que os anticorpos recrutam no so antgeno-especficos, eles requerem que as molculas de anticorpos marquem as partculas como estranhas. A produo de anticorpos a nica funo efetora das clulas B. As clulas T, ao contrrio, possuem uma variedade de aes efetoras.

1-19 As clulas T so necessrias para controlar os patgenos intracelulares e para ativar as repostas das clulas B contra a maioria dos antgenos
Os patgenos so acessveis aos anticorpos apenas no sangue e nos espaos extracelulares. Contudo, algumas bactrias e parasitas e todos os vrus replicam dentro das clulas, onde eles no podem ser detectados pelos anticorpos. A destruio

Clula infectada com vrus

Clulas T citotxicas matam a clula infectada

Figura 1.27 Mecanismo de defesa do hospedeiro contra infeco intracelular por vrus. As clulas infectadas por vrus so reconhecidas por clulas T especializadas denominadas clulas T citotxicas, as quais matam diretamente as clulas infectadas. O mecanismo de lise envolve a ativao de enzimas conhecidas como caspases, as quais contm cistenas nos seus stios ativos e clivam aps um cido asprtico. Estas, por sua vez, ativam nucleases citoslicas na clula infectada, que clivam o DNA viral e o da clula hospedeira.O quadro a uma fotomicrografia eletrnica de transmisso mostrando a membrana plasmtica de uma clula CHO em cultura (linhagem celular de ovrio de hamster chins) infectada pelo vrus da influenza. Muitas partculas virais podem ser visualizadas brotando da superfcie celular. Alguns desses vrus foram marcados com anticorpo monoclonal especfico para a protena viral, ligado a partculas de ouro, as quais aparecem como pontos pretos na fotomicrografia. O quadro b uma fotomicrografia eletrnica de transmisso de uma clula infectada por vrus (V) circundada por linfcitos T citotxicos (T). Observe a proximidade das membranas da clula infectada por vrus e da clula T (T) e o agrupamento de organelas citoplasmticas entre o ncleo e o ponto de contato com a clula infectada. (Quadro a cortesia de M. Bui e A. Helenius; quadro b cortesia de N. Rooney.)

Morte

Tc

Clulas T citotxicas Vrus

Clula infectada

Clula infectada morta

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desses invasores funo dos linfcitos T, responsveis pela resposta imune mediada por clulas da imunidade adaptativa. A ao das clulas T citotxicas a mais direta. Estas clulas T efetoras atuam contra as clulas infectadas por vrus. Antgenos derivados de vrus que se multiplicam dentro das clulas infectadas so apresentados na superfcie celular, onde so reconhecidos pelos receptores de antgeno das clulas T citotxicas. Estas clulas T podem ento controlar a infeco, matando as clulas infectadas antes que a replicao viral seja finalizada e novos vrus sejam liberados (Figura 1.27). Ao final do seu desenvolvimento no timo, os linfcitos T so compostos por duas classes principais, uma que possui a protena de superfcie celular chamada de CD8 em sua superfcie e outra que possui a protena chamada CD4. Estas no so apenas marcadores aleatrios, mas so importantes para a funo das clulas T, pois ajudam a determinar as interaes das clulas T com outras clulas. As clulas T citotxicas possuem o CD8, enquanto a classe de clulas T CD4 est envolvida na ativao, ao invs da morte, das clulas por elas reconhecidas. As clulas CD8 so destinadas a se tornarem clulas T citotxicas no momento que elas deixam o timo como linfcitos virgens. As clulas T CD4 virgens, ao contrrio, podem se diferenciar em diferentes tipos de clulas T efetoras aps a sua ativao inicial pelo antgeno. Os dois principais tipos de clula T CD4 efetoras so chamados de clulas TH1 e TH2, embora outras tenham sido descritas, como veremos no Captulo 8. Estes dois tipos esto envolvidos no combate a infeces bacterianas, mas de maneiras muito diferentes. As clulas TH1 tm funo dupla. A primeira controlar determinadas infeces bacterianas intracelulares. Algumas bactrias crescem nos macrfagos apenas nas vesculas intracelulares ligadas membrana. Exemplos importantes so Mycobacterium tuberculosis e o M. leprae, os patgenos que causam a tuberculose e a lepra, respectivamente. As bactrias fagocitadas pelos macrfagos so, geralmente, destrudas nos lisossomas, que contm uma variedade de enzimas e substncias antimicrobianas. As micobactrias e outras bactrias sobrevivem intracelularmente, pois elas impedem a fuso das vesculas onde se encontram com os lisossomas (Figura 1.28). Estas infeces podem ser controladas por clulas TH1 que reconhecem os antgenos bacterianos apresenta-

Macrfago infectado

Macrfago infectado ativo

Lisossoma

Micobactria Ativa

TH1

Antgeno

Figura 1.28 Mecanismos de defesa do hospedeiro contra infeces intracelulares por micobactrias. As micobactrias so engolfadas pelos macrfagos, mas resistem destruio, impedindo a fuso com os lisossomas das vesculas intracelulares onde residem, protegendo-se da destruio. Entretanto, quando os fagcitos so reconhecidos e ativados por clulas TH1, ocorre a fuso das vesculas fagocticas com os lisossomas contendo agentes bactericidas. Nos macrfagos em repouso, as micobactrias persistem e replicam-se nessas vesculas. A ativao dos macrfagos controlada pelas clulas TH1, tanto para evitar o dano aos tecidos quanto para poupar energia. As micrografias pticas (linha inferior) mostram uma clula em repouso (esquerda) e macrfagos ativados (direita) infectados com micobactrias. Essas clulas foram coradas pelo mtodo do lcool-cido resistente para identificar as micobactrias, que aparecem como bastonetes vermelhos proeminentes nos macrfagos em repouso, mas foram eliminadas nos macrfagos ativados. (Fotografia cortesia de G. Kaplan.)

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MHC de classe I Peptdeo

MHC de classe II

Membrana celular

dos na superfcie dos macrfagos. As clulas TH1 ativam os macrfagos infectados, induzindo a fuso de seus lisossomas s vesculas que contm as bactrias e estimulando os mecanismos antibacterianos dos macrfagos (Figura 1.28). A segunda funo das clulas TH1 auxiliar para estimular a produo de anticorpos por meio da produo de sinais coestimuladores e pela interao com os linfcitos B. Como veremos no Captulo 9, quando discutiremos a resposta imune humoral em detalhes, apenas alguns antgenos com propriedades especiais podem ativar os linfcitos B virgens, um sinal coestimulador concomitante das clulas T geralmente necessrio (ver Figura 1.21). Enquanto as clulas TH1 tm uma dupla funo, as clulas TH2 auxiliares esto inteiramente dedicadas ativao das clulas B virgens para a produo de anticorpos. O termo clula T auxiliar muitas vezes usado por pesquisadores para descrever todas as clulas CD4. Entretanto, foi definido originalmente para descrever as clulas T que auxiliam as clulas B a produzir anticorpos, antes do reconhecimento da existncia de duas subpopulaes de clulas CD4. Quando o papel de ativao dos macrfagos das clulas T CD4 foi descoberto, a designao de helper (para o portugus, auxiliar) tambm era usada para essa funo (por isso o H em TH1). Consideramos esse uso generalizado muito confuso, e, ao longo deste livro, somente usaremos o termo clula T auxiliar relacionado ativao das clulas B para a produo de anticorpos por clulas TH1 ou TH2. Os linfcitos T virgens reconhecem seus antgenos correspondentes em clulas apresentadoras de antgeno especializadas, que tambm podem ativ-las. Igualmente, as clulas T efetoras reconhecem os antgenos peptdicos ligados s molculas do MHC, mas, neste caso, a clula T j est ativada e, portanto, no requer sinais coestimuladores.

Figura 1.29 As molculas MHC da superfcie celular exibem fragmentos peptdicos dos antgenos. As molculas MHC so protenas de membrana cujos domnios extracelulares externos formam fendas na qual o fragmento de peptdeo se liga. Estes fragmentas so derivados de protenas degradadas dentro da clula, incluindo os antgenos de protenas prprias e estranhas. Os peptdeos so ligados pela molcula do MHC recm-sintetizada antes de alcanar a superfcie celular. Existem dois tipos de molculas do MHC: MHC de classe I e MHC de classe II, com estruturas e funes distintas, mas relacionadas. Embora no apresentado, as molculas do MHC de classe I e de classe II so trmeros constitudos por duas cadeias proteicas e pelos peptdeos prprio e no-prprio.

1-20 As clulas T CD4 e CD8 reconhecem os peptdeos ligados a duas classes diferentes de molculas do MHC
Os diferentes tipos de clulas T efetoras devem ser direcionados a atuar contra as clulas-alvo adequadas. O reconhecimento antignico obviamente crucial, mas o reconhecimento do alvo correto tambm assegurado por interaes adicionais entre as molculas CD4 e CD8 nas clulas T e pelas molculas do MHC na clula-alvo. Como vimos na Seo 1-13, as clulas T detectam os peptdeos derivados de antgenos estranhos aps os antgenos serem degradados dentro das clulas, seus fragmentos peptdicos serem capturados por molculas do MHC e este complexo ser apresentado na superfcie celular (ver Figura 1.16). Existem dois tipos principais de molculas do MHC, chamadas de MHC de classe I e MHC de classe II. Elas possuem diferenas estruturais, mas ambas possuem sulcos na superfcie extracelular da molcula, em que um nico peptdeo aprisionado durante a sntese e a montagem da molcula do MHC no interior da clula. A molcula do MHC que possui esta carga peptdica transportada para a superfcie celular, onde apresenta seu peptdeo para as clulas T (Figura 1.29).
Fragmentos peptdicos das protenas virais ligadas ao MHC de classe I no RE
Citosol Citosol Retculo endoplasmtico

Figura 1.30 As molculas do MHC de classe I apresentam antgenos derivados de protenas do citosol. Nas clulas infectadas por vrus, as protenas virais so sintetizadas no citosol. Os fragmentos peptdicos das protenas virais so transportados para o retculo endoplasmtico (RE) rugoso, onde so ligadas pelas molculas do MHC de classe I, as quais ento levam os peptdeos para a superfcie celular.

Clulas infectadas com vrus

Protenas virais sintetizadas no citosol

Peptdeos ligados transportados pelas molculas do MHC de classe I para a superfcie celular

Ncleo

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A bactria infecta o macrfago e entra na vescula, produzindo fragmentos peptdicos

Fragmentos bacterianos se ligam ao MHC de classe II na vescula

Peptdeos so transportados pelo MHC de classe II para a superfcie celular

Figura 1.31 As molculas MHC de classe II apresentam os antgenos originrios das vesculas intracelulares. Algumas bactrias infectam as clulas e crescem nas vesculas intracelulares. Os peptdeos derivados de tais bactrias so ligados s molculas MHC de classe II e transportados para a superfcie celular (quadros superiores). As molculas MHC de classe II tambm ligam e transportam peptdeos derivados de antgenos que foram ligados e internalizados pelas clulas B por um processo de endocitose mediada por um complexo antgeno:receptor para dentro das vesculas intracelulares (quadros inferiores).

Antgenos ligados pelo receptor de superfcie da clula B

Antgeno internalizado e degradado em fragmentos peptdicos

Fragmentos ligam-se ao MHC de classe II e so transportados para a superfcie celular

Anticorpo

Clulas B

As diferenas mais importantes entre as duas classes de molculas do MHC no esto em suas estruturas, mas sim na fonte de peptdeos que elas ligam e carregam para a superfcie celular. As molculas do MHC de classe I coletam os peptdeos derivados das protenas sintetizadas no citosol e so ento capazes de apresentar os fragmentos de protenas virais na superfcie celular (Figura 1.30). As molculas do MHC de classe II ligam peptdeos derivados das protenas nas vesculas intracelulares e, portanto, exibem peptdeos derivados de patgenos residentes nas vesculas dos macrfagos ou que foram internalizados por clulas fagocticas e clulas B (Figura 1.31). No Captulo 5, veremos exatamente como os peptdeos dessas diferentes fontes tornam-se disponveis para este dois tipos de molculas do MHC. Quando atingem a superfcie celular com sua carga de peptdeos, as duas classes de molculas do MHC so reconhecidas por diferentes classes funcionais de clulas T. Isso ocorre porque as molculas CD8 se ligam, preferencialmente, s molculas do MHC de classe I, enquanto o CD4 se liga preferencialmente s molculas do MHC de classe II. Dessa forma, as molculas do MHC de classe I ligadas aos peptdes virais so reconhecidas por clulas T citotxicas portadoras de CD8, que ento matam as clulas infectadas (Figura 1.32). As molculas do MHC de classe II ligadas a peptdeos derivados de patgenos das vesculas so reconhecidos por clulas T portadoras de CD4 (Figura 1.33). As CD4 e CD8 so, portanto, conheci-

Clulas T citotxicas reconhecem o complexo de peptdes virais com o MHC de classe I e matam as clulas infectadas

Tc

CD8

Morte

MHC de classe I

Figura 1.32 Clulas T CD8 citotxicas reconhecem os antgenos apresentados pelas molculas MHC de classe I e matam a clula infectada. O complexo peptdeo:MHC de classe I nas clulas infectadas por vrus so detectados por clulas T citotxicas antgeno-especficas. As clulas T citotxicas so pr-programadas para matar as clulas que reconhecem.

As clulas TH1 reconhecem o complexo de peptdeo bacteriano com o MHC de classe II e ativam os macrfagos

As clulas T auxiliares reconhecem o complexo de peptdeos antignicos com o MHC de classe II e ativam clulas B

TH1

CD4

Clulas T auxiliares

CD4

Ativa

MHC de classe II

Ativa

MHC de classe II

Figura 1.33 As clulas T CD4 reconhecem antgenos apresentados por molculas MHC de classe II. As clulas TH1 ativam os macrfagos quando reconhecem seus antgenos especficos nos macrfagos infectados. A ativao dos macrfagos leva destruio das bactrias intracelulares (quadro esquerda). Quando uma clula T auxiliar, TH1 ou TH2, reconhece o antgeno nas clulas B, ativam essas clulas para proliferarem e se diferenciarem em clulas plasmticas produtoras de anticorpos (quadro direita).

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

das como correceptores, pois esto intrinsecamente envolvidos na sinalizao de que o receptor se ligou ao antgeno correto para as clulas T. As interaes teis so posteriormente asseguradas pelo fato de todas as clulas expressarem as molculas do MHC de classe I e, dessa forma, qualquer clula infectada com vrus pode ser reconhecida e morta por uma clula T citotxica CD8, enquanto as nicas clulas que normalmente expressam molculas do MHC de classe II so as clulas dendrticas, os macrfagos e as clulas B as clulas que devem ativar, ou serem ativadas, por clulas T CD4. Pelo fato de os receptores de clulas T serem especficos para uma combinao de peptdeos e molcula do MHC, qualquer receptor de clula T ir reconhecer uma molcula do MHC de classe I ou uma molcula do MHC de classe II. Para serem teis, os linfcitos T portadores de receptores de antgenos que reconhecem molculas do MHC de classe I devem tambm expressar os correceptores CD8, enquanto os linfcitos T portadores de receptores especficos para molculas do MHC de classe II devem expressar o correceptor CD4. A combinao de um receptor de clula T com um correceptor adequado ocorre durante o desenvolvimento dos linfcitos, e as clulas T virgens emergem dos rgos linfoides centrais, portando uma combinao correta de receptores e correceptores. A maturao das clulas T em clulas T CD4 ou CD8 reflete um teste para a especificidade de receptores de clulas T especficos, que ocorre durante o desenvolvimento. Como esse processo seletivo trabalha exatamente e como a utilizao do repertrio de clulas T maximizada so questes centrais da imunologia, e tpico principal do Captulo 7. Ao reconhecer seus alvos, os vrios tipos de clulas T efetoras so estimulados a liberar diferentes grupos de molculas efetoras. Estas podem afetar diretamente suas clulas-alvo ou auxiliar no recrutamento de outras clulas efetoras de maneiras como as discutidas no Captulo 8. Essas molculas efetoras incluem muitas citocinas, que tem um papel crucial na expanso clonal dos linfcitos, bem como na resposta imune inata e nas aes efetoras da maioria das clulas do sistema imune. Dessa forma, entender as aes das citocinas crucial para o entendimento dos vrios comportamentos do sistema imune. As aes de todas as citocinas conhecidas esto resumidas no Apndice III, algumas so introduzidas no Captulo 2 e as citocinas derivadas de clulas T so discutidas no Captulo 8.

1-21 Defeitos no sistema imune resultam no aumento da suscetibilidade infeco


Temos a tendncia de considerar como certa a capacidade de nosso sistema imune de proteger nosso corpo contra infeces e prevenir sua recorrncia. Em algumas pessoas, contudo, parte desse sistema imune falha. Na mais severa destas, as doenas de imunodeficincias, a imunidade adaptativa est completamente ausente e a morte ocorre na infncia por uma infeco devastadora, a menos que medidas heroicas sejam tomadas. Outra falha, menos catastrfica, leva a infeces recorrentes por determinados tipos de patgenos, dependendo da deficincia em particular. Muito tem sido aprendido sobre as funes dos diferentes componentes do sistema imune humano atravs do estudo dessas imunodeficincias, muitas delas causadas por defeitos genticos hereditrios. H mais de 25 anos, uma devastadora forma de imunodeficincia apareceu, a sndrome da imunodeficincia adquirida ou AIDS, causada por um agente infeccioso, o vrus da imunodeficincia humana, HIV-1 e HIV-2. Esta doena destri as clulas T, as clulas dendrticas e os macrfagos portadores de CD4, levando a infeces causadas por bactrias intracelulares e outros patgenos normalmente controlados por tais clulas. Estas infeces so a principal causa de morte decorrente desta doena de imunodeficincia de prevalncia cada vez maior, amplamente discutida Captulo 12, juntamente com outras imunodeficincias hereditrias.

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1-22 Entender a resposta imune adaptativa importante para o controle das alergias, das doenas autoimunes e da rejeio de rgos transplantados
A principal funo do nosso sistema imune proteger o hospedeiro humano de agentes infecciosos. Contudo, muitas doenas importantes, do ponto de vista mdico, esto associadas a uma resposta imune normal direcionada contra um antgeno inadequado, geralmente na ausncia de doenas infecciosas. As respostas imunes direcionadas a antgenos no-infecciosos ocorrem nas alergias, em que o antgeno uma substncia estranha inofensiva, em doenas autoimunes, em que a resposta contra um autoantgeno e na rejeio de transplantes, em que o antgeno originado de uma clula estranha transplantada. Os principais antgenos que provocam a rejeio de transplante so, de fato, as molculas do MHC, j que cada uma delas est presente em muitas verses diferentes na populao humana, isto , elas so altamente polimrficas, e a maioria das pessoas no-relacionadas difere com relao ao conjunto de molculas do MHC que expressam. O MHC foi originalmente reconhecido em camundongos como um lcus gnico, o lcus H2, que controla a aceitao ou rejeio de tecidos transplantados, enquanto as molculas do MHC humanas foram primeiramente descobertas aps a tentativa de usar enxertos de pele de doadores para reparar os pilotos gravemente queimados e as vtimas de bombas durante a Segunda Guerra Mundial. Os pacientes rejeitavam os enxertos, os quais eram reconhecidos pelo sistema imune como corpos estranhos . O que chamamos de uma resposta imune bem-sucedida ou falha, e se a resposta considerada prejudicial ou benfica ao hospedeiro, no depende da sua resposta, mas sim da natureza do antgeno e das circunstncias na qual esta resposta ocorre. Doenas alrgicas, incluindo a asma, so uma crescente causa comum da deficincia nos pases desenvolvidos. A autoimunidade agora tambm reconhecida como a causa de muitas doenas importantes. Uma resposta autoimune direcionada contra as clulas pancreticas a principal causa de diabetes em jovens. Nas doenas alrgicas e autoimunes, os poderosos mecanismos de proteo da resposta imune adaptativa causam srios danos ao paciente. As respostas imunes contra antgenos inofensivos, aos tecidos do organismo, ou contra rgos transplantados so, como todas as outras respostas imunes, altamente especficas. No momento, a maneira usual para tratar estas respostas ocorre por meio de frmacos imunossupressores, que inibem todas as respostas imunes, desejveis ou no. Se fosse possvel suprimir apenas os clones de linfcitos responsveis pela resposta no-desejada, a doena poderia ser curada ou o rgo transplantado poderia estar protegido sem impedir a resposta imune protetora. Ainda h esperana de que este sonho de imuno-regulao antgeno-

Efeito da resposta ao antgeno Antgeno Resposta normal Resposta deficiente

Agente infeccioso

Imunidade protetora

Infeco recorrente

Substncia incua

Alergia

Ausncia de resposta

rgo transplantado

Rejeio

Aceitao

rgo prprio

Autoimunidade

Autotolerncia

Tumor

Imunidade tumoral

Cncer

Figura 1.34 As respostas imunes podem ser benficas ou prejudiciais dependendo da natureza do antgeno. As respostas benficas so mostradas em branco, e as prejudiciais, em quadros vermelhos. Quando a resposta benfica, sua ausncia torna-se prejudicial.

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

especfica de controlar as respostas imunes no-desejadas ainda se torne uma realidade, pois a supresso antgeno-especfica das respostas imunes pode ser induzida experimentalmente, embora a base molecular desta supresso ainda no esteja totalmente esclarecida. Discutiremos a presente situao a respeito do entendimento das alergias, das doenas autoimunes, da rejeio de rgos e de frmacos imunosupressores nos Captulos 13 e 15 e, no Captulo 14 veremos como os mecanismos de regulao imune esto comeando a surgir a partir de uma melhor compreenso das subpopulaes funcionais de linfcitos e das citocinas que os controlam.

1-23 A vacinao o meio mais eficaz de controlar as doenas infecciosas


Embora a supresso especfica das respostas imunes deva aguardar por avanos na pesquisa bsica a respeito da regulao imune e de sua aplicao, a estimulao deliberada de uma resposta imune por imunizao ou vacinao tem alcanado muito sucesso nos ltimos dois sculos, desde que Jenner realizou o experimento pioneiro. Programas de imunizao em massa tm conduzido a erradicao virtual de vrias doenas que costumavam estar associadas a morbidades (enfermidade) e mortalidades significantes (Figura 1.35). A imunizao considerada to segura e importante que a maioria dos estados americanos exige que as crianas sejam

Difteria
Casos 100 registrados em 100.000 habitantes 10 Vacina

1,0 0,1 1900 1910 1920 1930 1940 1950 1960 1970 1980 1990

Plio
Casos registrados em 100.000 habitantes 40 30 20 10 0 1940 1950 1960 1970 1980 1990 Vacina oral Vacina inativa

Figura 1.35 Campanha bem-sucedida de vacinao. Difteria, poliomielite e sarampo e suas consequncias foram praticamente eliminadas dos Estados Unidos, como mostram estes trs grficos. Panencefalite esclerosante subaguda (SSPE) uma doena cerebral, consequncia tardia da infeco pelo vrus do sarampo em alguns pacientes. Quando o sarampo foi eliminado, a SSPE desapareceu 15-20 anos mais tarde. Entretanto, como essas doenas no foram erradicadas mundialmente, a imunizao deve ser mantida em uma alta porcentagem da populao para evitar seu reaparecimento.

Sarampo
Casos 600 registrados 500 em 100.000 habitantes 400 300 200 100 0 1960 1965 1970 1975 1980 1985 Sarampo SSPE Vacina
60 50 40 30 20 10 0 1990

Casos registrados de SSPE nos EUA

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imunizadas contra at sete doenas comuns na infncia. To impressionante quanto essas realizaes ainda h muitas doenas para as quais ainda no temos uma vacina efetiva. Mesmo onde as vacinas para doenas como sarampo e plio podem ser usadas efetivamente em pases desenvolvidos, problemas tcnicos e econmicos podem impedir seu amplo uso em pases em desenvolvimento, onde a mortalidade decorrente dessas doenas ainda alta. As ferramentas da imunologia moderna e da biologia molecular esto sendo aplicadas para desenvolver novas vacinas e melhorar as j existentes, e estes avanos sero discutidos no Captulo 15. A perspectiva de controlar essas doenas importantes tremendamente excitante. A garantia de boa sade um passo crtico no controle populacional e desenvolvimento econmico. Por um custo de centavos por pessoa, grandes dificuldades e sofrimento podem ser aliviados. Muitos patgenos importantes tm resistido aos esforos do desenvolvimento de vacinas contra eles, frequentemente porque podem escapar ou destruir os mecanismos protetores da resposta imune adaptativa. Veremos como algumas estratgias evasivas so usadas por patgenos bem-sucedidos no Captulo 12. A soluo de muitas das principais doenas mundiais, incluindo malria e diarreia (as doenas que mais matam na infncia), bem como as mais recentes como a ameaa da AIDS, depende de uma melhor compreenso a respeito dos patgenos que causam essas doenas e de sua interao com as clulas do sistema imune.

Resumo
Os linfcitos possuem dois sistemas distintos de reconhecimento especializados para a deteco de patgenos intra e extracelulares. As clulas B possuem molculas de imunoglobulina na superfcie celular como receptores para antgenos, e, quando ativadas, secretam a imunoglobulina como anticorpos solveis que fornecem a defesa contra patgenos dos espaos extracelulares do organismo. As clulas T tm receptores que reconhecem fragmentos peptdicos de patgenos intracelulares transportados para a superfcie celular por glicoprotenas de MHC. Duas classes de molculas do MHC transportam os peptdeos dos diferentes compartimentos intracelulares para a superfcie celular para apresent-los a tipos distintos de clulas T efetoras: as clulas T citotxicas CD8 que matam clulas alvo infectadas e as clulas T CD4 que ativam, principalmente, macrfagos e clulas B. Dessa forma, as clulas T so crucialmente importantes tanto para a resposta humoral quanto para a resposta mediada por clulas da imunidade adaptativa. A resposta imune adaptativa parece ter adquirido o reconhecimento do antgenoespecfico pela alta diversidade de receptores do sistema de defesa inato, que tem um papel central nas aes efetoras dos linfcitos B e T. O papel vital da imunidade adaptativa na luta contra a infeco ilustrado pelas doenas de imunodeficincias e pelos problemas causados pelos patgenos que escapam ou subvertem uma resposta imune adaptativa. A supresso antgeno-especfica da resposta imune adaptativa o objetivo do tratamento para importantes doenas humanas que envolvem ativao inadequada dos linfcitos, enquanto a estimulao especfica de uma resposta imune adaptativa a base para o sucesso da vacinao.

Resumo do Captulo 1
O sistema imune defende o hospedeiro contra a infeco. A imunidade inata atua como primeira linha de defesa, mas no possui a habilidade de reconhecer determinados patgenos e de fornecer a imunidade protetora especfica que impede uma reinfeco. A imunidade adaptativa baseada na seleo clonal de um repertrio de linfcitos portadores de uma alta diversidade de receptores antgeno-especficos que permitem que o sistema imune reconhea qualquer antgeno estranho. Na resposta imune adaptativa, os linfcitos antgeno-especficos proliferam e diferenciam-se em clones de linfcitos efetores que eliminam o patgeno. As defe-

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sas do hospedeiro requerem diferentes sistemas de reconhecimento e uma grande variedade de mecanismos efetores para procurar e destruir a vasta variedade de patgenos em seus diferentes hbitats dentro do organismo e em suas superfcies interna e externa. A resposta imune adaptativa pode no s eliminar um patgeno, mas tambm, durante esse processo, produzir um nmero ainda maior de linfcitos de memria diferenciados atravs da seleo clonal, e isto permite uma resposta mais rpida e eficaz na reinfeco. A regulao das respostas imunes, seja para sua supresso quando no desejada ou para sua estimulao na preveno de doenas infecciosas, o principal objetivo clnico da pesquisa em imunologia.

Referncias gerais
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Principais peridicos artigos frequentes em imunologia Cell Current Biology EMBO Journal Journal of Biological Chemistry Journal of Cell Biology Journal of Clinical Investigation Molecular Cell Biology Nature Nature Cell Biology Nature Medicine Proceedings of the National Academy of Sciences, USA Science Peridicos com artigos de reviso em imunologia Advances in Immunology Annual Reviews in Immunology Contemporary Topics in Microbiology and Immunology Current Opinion in Immunology Immunogenetics Reviews Immunological Reviews Immunology Today Nature Reviews Immunology Research in Immunology Seminars in Immunology The Immunologist Livros texto, compndios avanados em imunologia, etc. Lachmann, P.J., Peters, D.K., Rosen, F.S., and Walport, M.J. (eds): Clinical Aspects of Immunology, 5th ed. Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1993. Mak, T.W. and Simard, J.J.L.: Handbook of Immune Response Genes. New York, Plenum Press, 1998. Paul, W.E. (ed): Fundamental Immunology, 5th ed. New York, Lippincott Williams & Wilkins, 2003. Roitt, I.M. and Delves, P.J. (eds): Encyclopedia of Immunology, 2nd ed (4 vols). London/San Diego, Academic Press, 1998.

Imunidade Inata

Ao longo deste livro, examinaremos os mecanismos individuais pelos quais a resposta imune adaptativa protege o hospedeiro de microrganismos que poderiam causar uma doena. Neste captulo, contudo, examinaremos o papel da imunidade inata, isto , a defesa no-adaptativa que forma a primeira barreira para infeces. Os microrganismos encontrados diariamente na vida de um indivduo normal causam doena perceptvel apenas ocasionalmente. Em sua maioria, os microrganismos so detectados e destrudos em questo de minutos ou horas por mecanismos de defesa que no se baseiam na expanso clonal de linfcitos antgeno-especficos (ver Seo 1-9) e, dessa forma, no requerem um perodo prolongado de induo: esses so os mecanismos da imunidade inata. O curso e as diferentes fases do encontro com um novo patgeno esto resumidos na Figura 2.1. Alguns mecanismos da imunidade inata comeam a agir imediatamente no encontro com agentes infecciosos; outros so ativados e amplificados na presena de infeces e em seguida voltam aos nveis basais com o trmino da infeco. Os mecanismos da imunidade inata no geram memria imunolgica protetora de longo prazo. Somente se o organismo infeccioso romper essa linha de defesa que a resposta imune adaptativa ser ativada. Na resposta adaptativa, ocorre a ativao de clulas efetoras antgeno-especficas, que tm como alvo os patgenos especficos, e clulas de memria, que proporcionam uma imunidade persistente contra reinfeces pelo mesmo microrganismo. O poder da resposta imune adaptativa devido a sua especificidade ao antgeno, a qual ser estudada nos prximos captulos. Entretanto, ela depende, tambm, de muitos mecanismos utilizados no sistema imune inato para eliminar os patgenos, que descreveremos neste captulo.

Figura 2.1 A resposta a uma infeco inicial ocorre em trs fases. As fases so: inata, resposta imune induzida precocemente e resposta imune adaptativa. As primeiras duas fases confiam no reconhecimento do patgeno e baseiam-se no reconhecimento do patgeno por receptores codificados na linhagem germinal do sistema imune inato, ao passo que a imunidade adaptativa usa receptores variveis para receptores antgeno-especficos que so produzidos como resultado do rearranjo de segmentos gnicos. A imunidade adaptativa ocorre posteriormente, porque os raros linfcitos T e B especficos para o patgeno invasor devem primeiro sofrer expanso clonal antes de se diferenciarem em clulas efetoras capazes de eliminar a infeco. Os mecanismos efetores que eliminam os agentes infecciosos so similares ou idnticos em todas as fases.

Imunidade Inata (imediata: 0-4 horas)

Infeco

Reconhecimento por efetores inespecficos, pr-formados e amplamente especficos Reconhecimento de molculas-padro associadas a microrganismos

Remoo do agente infeccioso

Resposta imune precocemente induzida (precoce de 4-96 horas) Resposta imune adaptativa (tardia: > 96 horas)

Infeco

Inflamao, recrutamento e ativao de clulas efetoras Reconhecimento por clulas T e B virgens

Remoo do agente infeccioso

Infeco

Transporte dos antgenos para rgos linfoides

Expanso clonal e diferenciao para clulas efetoras

Remoo do agente infeccioso

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Enquanto o sistema imune adaptativo utiliza um grande repertrio de receptores codificados por segmentos gnicos rearranjados, que reconhecem uma grande variedade de antgenos (ver Seo 1-12), a imunidade inata depende de receptores codificados na linhagem germinativa para reconhecer caractersticas comuns a muitos patgenos. De fato, os mecanismos da imunidade inata distinguem efetivamente a clula do hospedeiro de patgenos, e essa habilidade de distinguir o prprio do no-prprio e o reconhecimento de uma vasta classe de patgenos contribuem para a induo de uma resposta adaptativa adequada. Na primeira parte do captulo, consideraremos as defesas fixas do corpo: os epitlios, que revestem as superfcies internas e externas do corpo, e os fagcitos, que se localizam abaixo da superfcie epitelial, que podem englobar e digerir os microrganismos invasores. Alm da morte direta dos microrganismos, esses fagcitos induzem a prxima fase da resposta imune inata, induzindo uma resposta inflamatria que recruta novas clulas fagocticas e molculas efetoras que circulam para o local da infeco. Na segunda parte do captulo, veremos o antigo sistema de receptores de reconhecimento de padres usado por clulas fagocticas do sistema imune inato para identificar patgenos e distingui-los dos antgenos prprios. Alm da imediata destruio dos patgenos, veremos como a estimulao de alguns desses receptores dos macrfagos e de clulas dendrticas fazem com que elas se tornem clulas apresentadoras de antgenos para os linfcitos T, iniciando a resposta imune adaptativa. A terceira parte deste captulo dedicada ao sistema de protenas plasmticas, conhecido como sistema do complemento. Esse importante elemento, tambm chamado de imunidade inata humoral, interage com os microrganismos para promover sua remoo pelas clulas fagocticas. Na ltima parte deste captulo, descreveremos como as citocinas e as quimiocinas, produzidas por clulas dendrticas e fagcitos ativados, induzem as fases finais da resposta imune inata, como, por exemplo, a denominada resposta de fase aguda. Veremos, tambm, uma outra clula do sistema imune inato, as clulas matadoras naturais ou natural killer cell (clula NK), que contribuem para a defesa inata do hospedeiro contra vrus e outros patgenos intracelulares. Nessa fase, ocorrem os primeiros passos em direo ao incio da resposta imune adaptativa. Se a infeco no for eliminada pelo sistema imune inato, uma resposta imune completa ocorrer.

A linha de frente da defesa do hospedeiro


Os microrganismos que causam doenas no homem e em animais entram no organismo em diferentes locais e produzem sintomas de doenas por uma variedade de mecanismos. Muitos agentes infecciosos distintos podem causar doena e danos aos tecidos, ou patologia, e so chamados de microrganismos patognicos ou patgenos. As invases por microrganismos so inicialmente contidas, em todos os vertebrados, por mecanismos de defesa inata que pr-existem em todos os indivduos e agem em minutos aps o encontro com o agente infeccioso. Somente quando as defesas inatas do hospedeiro so contornadas, evadidas ou dominadas, que se faz necessria uma resposta imune adaptativa. Embora a imunidade inata seja obviamente suficiente para prevenir que o organismo seja dominado pelo grande nmero de microrganismos que vivem dentro e fora dele, patgenos, por definio, so microrganismos que desenvolveram maneiras de burlar as defesas inatas do organismo mais eficientemente do que outros microrganismos. Uma vez que tenham dominado, eles requerem um esforo conjunto das respostas imune inata e adaptativa para elimin-los do organismo. Entretanto, nesse caso, o sistema imune inato normalmente cumpre sua funo com um precioso retardo, mantendo alguns patgenos sob controle, enquanto o sistema imune adaptativo acelera sua ao. Na primeira parte deste captulo, descreveremos brevemente os diferentes tipos de patgenos e suas estratgias de invaso.

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Depois, examinaremos as defesas inatas, as quais, na maioria dos casos, previnem que os microrganismos estabeleam uma infeco. Examinaremos as funes de defesa das superfcies epiteliais do organismo, o papel de protenas e peptdeos antimicrobianos e a defesa dos tecidos do organismo por clulas fagocticas, os macrfagos e neutrfilos, que se ligam e ingerem os microrganismos invasores.

2-1 As doenas infecciosas so causadas por diversos agentes que vivem e se replicam em seus hospedeiros
Os agentes que causam doenas esto divididos em cinco grupos: vrus, bactrias, fungos, protozorios e helmintos (vermes). Protozorios e vermes so, em geral, agrupados juntos como parasitas e so o contedo da disciplina da parasitologia, ao passo que vrus, bactrias e fungos so contedos da disciplina de microbiologia. Na Figura 2.2, listada a classe dos microrganismos e parasitas que causam doenas, com um exemplo tpico de cada uma delas. Os aspectos caractersticos de cada patgeno, seu modo de transmisso, mecanismo de replicao, mecanismo de patognese a maneira pelo qual cada um causa a doena e a resposta que ele causa no hospedeiro. Os distintos habitats e os diferentes ciclos de vida dos patgenos requerem uma gama de mecanismos imunes inato e adaptativo distintos para destru-los. Agentes infecciosos podem crescer em todos os compartimentos do corpo, como mostrado esquematicamente na Figura 2.3. Vimos, no captulo 1, que podemos dividi-los em dois compartimentos extracelular e intracelular. Tanto a resposta imune inata como a adaptativa tm diferentes maneiras de lidar com os patgenos encontrados nesses dois compartimentos. Muitos patgenos bacterianos vivem e se replicam no espao extracelular, dentro dos tecidos ou na superfcie do epitlio que delimitam as cavidades corporais. As bactrias extracelulares so geralmente suscetveis destruio por fagcitos, um ramo importante do sistema imune inato; no entanto, alguns patgenos, como as espcies Staphylococcus e Streptococcus, so protegidos por cpsulas de polissacardeos que resistem ao aprisionamento. Isso pode ser superado at certo ponto pelo auxlio de outro componente da imunidade inata o complemento , que torna a bactria mais suscetvel fagocitose. Na resposta imune adaptativa, as bactrias se tornam mais suscetveis fagocitose pela combinao da ao dos anticorpos e do complemento. Patgenos intracelulares obrigatrios, como os vrus, devem invadir a clula hospedeira para a replicao, ao passo que patgenos intracelulares facultativos, como a micobactria, podem replicar tanto dentro como fora da clula. Os patgenos intracelulares devem ser impedidos de entrar nas clulas, ou serem detectados e eliminados logo aps a sua entrada. Eles ainda podem ser, posteriormente, subdivididos naqueles que replicam livremente nas clulas, como vrus e certas bactrias (p. ex., Chlamydia, Rickettsia e Listeria), e naqueles que replicam dentro de vesculas intracelulares, como a micobactria. Agentes infecciosos intracelulares frequentemente causam doenas por danificarem ou matarem as clulas hospedeiras. O sistema imune inato tem, em geral, dois meios de defesa contra esse tipo de patgeno. Os fagcitos devem apriosionar o patgeno antes que ele entre na clula, ao passo que as clulas NK podem reconhecer e matar diretamente a clula infectada por algum patgeno intracelular. As clulas NK colaboram para manter infeces virais sob controle at que a resposta adaptativa tenha sido gerada, quando ento as clulas T citotxicas so capazes de assumir o papel de matar as clulas infectadas por vrus. Patgenos que vivem dentro de vesculas nos macrfagos podem tornar-se suscetveis morte aps a ativao dos macrfagos como resultado da ao das clulas NK e clulas T (ver Figura 2.3). Uma vez que os patgenos tenham dominado as defesas da imunidade inata, eles crescero e se replicaro no corpo, causando diferentes doenas que refletem as diversas formas de dano que podem causar ao tecido (Figura 2.4). Muitos dos mais perigosos patgenos bacterianos intracelulares causam doena liberando

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Figura 2.2 Variedade de microrganismos que podem causar doenas. Os organismos patognicos so divididos em cinco tipos: vrus, bactrias, fungos, protozorios e vermes. Alguns patgenos bem conhecidos em cada grupo esto citados.

Algumas causas comuns de doenas em humanos Adenovrus Herpesvrus Vrus de DNA Poxvrus Parvovrus Papovavrus Hepadnavrus Orthomyxovrus Paramyxovrus Vrus Coronavrus Picornavrus Reovrus Vrus de RNA Togavrus Flavivrus Arenavrus Rhabdovrus Retrovrus Estafilococos Cocos Gram + Estreptococos Cocos Gram Bacilos Gram + Bacilos Gram Bactrias Firmicutes Espiroquetas Actinobactria Protobactria Chlamydiae Mollicutes Fungos Ascomicetos Clostrdio Espiroquetas Micobactria Ricketsia Clamdia Micoplasma Neisseria Streptococcus pneumoniae, Strep. pyogenes Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis Corynebacterium diphtheriae, Bacillus anthracis, Listeria monocytogenes Salmonella typhi, Shigella flexneri, Campylobacter jejuni, Vibrio cholerae, Yersinia pestis, Pseudomonas aeruginosa, Brucella melitensis, Haemophilus influenzae, Legionella pneumophilus, Bordetella pertussis Clostridium tetani, C. botulinum, C. perfringens Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi, Leptospira interrogans Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, M. avium Rickettsia prowazekii Chlamydia trachomatis Mycoplasma pneumoniae Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, Pneumocystis carinii Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Leishmania donovani, Plasmodium falciparum, Trypanosoma brucei, Toxoplasma gondii, Cryptosporidium parvum Intestinal Vermes Nematdeos Tecidual Platelmintos Sangue, fgado Trichuris trichuras, Trichinella spiralis, Enterobius vermucularis, Ascaris lumbricoides, Ancylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis Onchocerca volvulus, Loa loa, Dracuncula medinensis Schistosoma mansoni, Clonorchis sinensis Vrus do resfriado, SARS Plio, coxsackie, hepatite A e rinovrus Rotavrus, reovrus Rubola, vrus da encefalite transmitido por artrpodes Vrus transmitido por artrpodes (febre amarela e dengue) Coriomeningite linfoctica, febre Lassa Raiva Vrus da leucemia das clulas T, HIV Staphylococcus aureus Adenovrus humano (p. ex., tipos 3, 4 e 7) Herpes simples, varicela zoster, vrus Epstein-Barr, citomegalovrus, HHV8 Varola, vrus da vacnia Parvovrus humano Papilomavrus Vrus da hepatite B Vrus influenza Caxumba, sarampo, vrus sincicial respiratrio

Protozorios

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Extracelular Espao intestinal, sangue, linfa Superfcie epitelial

Intracelular Citoplasmtica Vesicular

Local da infeco

Vrus Bactrias Fungos Protozorios Vermes Organismo

Neisseria gonorrhoeae Mycoplasma spp. Streptococcus pneumoniae Vibrio cholerae Escherichia coli Helicobacter pylori Candida albicans Vermes

Vrus Chlamydia spp. Rickettsia spp. Listeria monocytogenes Protozorios

Mycobacterium spp. Salmonella typhimurium Yersinia pestis Listeria spp. Legionella pneumophila Cryptococcus neoformans Leishmania spp. Tripanosoma spp. Histoplasma Clulas T e NK dependentes da ativao pelo macrfago

Figura 2.3 Os patgenos podem ser encontrados em vrios compartimentos do corpo, onde devem ser combatidos por diferentes mecanismos de defesa do hospedeiro. Virtualmente todos os patgenos tm uma fase extracelular na qual so vulnerveis a molculas circulantes, clulas da imunidade inata e anticorpos da resposta imune adaptativa. Todos esses eliminam o microrganismo primariamente pela promoo de sua fagocitose pelos fagcitos do sistema imune. A fase intracelular dos patgenos, como os vrus, no est acessvel a este mecanismo; ao invs disso, a clula infectada atacada pelas clulas NK da imunidade inata ou pelas clulas T citotxicas da imunidade adaptativa. A ativao dos macrfagos como resultado da ativao das clulas NK e clulas T podem induzir os macrfagos a matarem patgenos que esto vivendo dentro de vesculas macrofgicas.

Imunidade protetora

Complemento Fagcitos Anticorpos

Peptdeos antimicrobianos Anticorpos, especialmente IgA

Clulas NK Clulas T citotxicas

protenas txicas, contra as quais o sistema imune inato tem pouca defesa. Os anticorpos com alta especificidade, produzidos pelo sistema imune adaptativo, so necessrios neutralizao da ao dessas toxinas (ver Figura 1.26). O dano causado por um determinado agente infeccioso depende do local no qual ele cresce; o Streptococcus pneumoniae no pulmo causa pneumonia, por exemplo, ao passo que, no sangue, causa uma doena sistmica fatal a sepse pneumoccica. Como veremos nas prximas sees, para que um microrganismo invada o organismo, ele deve primeiro ligar-se para atravessar o epitlio. Patgenos intestinais, como Salmonella typhi, o agente que causa a febre tifoide, ou Vibrio cholerae, que causa clera, so disseminados atravs de comida ou gua com contaminao fecal, respectivamente. A resposta a esse tipo de patgeno ocorre no sistema imune especializado da mucosa, quando ocorre uma eventual brecha na barreira epitelial, como descrito no Captulo 11. A primeira defesa contra os microrganismos invasores no intestino consiste em um epitlio intestinal saudvel e da flora intestinal, a qual compete com patgenos por nutrientes e locais para se fixarem ao epitlio. Os microrganismos mais patognicos tm evoludo para se tornarem capazes de superar a resposta imune inata e continuarem seu crescimento, tornando os indivduos doentes. A resposta imune adaptativa necessria para elimin-los e para prevenir reinfeces. Outros patgenos nunca so eliminados por completo pelo sistema imune, permanecendo no corpo por anos. Porm, a maioria dos patgenos no so letais para todos. Esses que tm vivido por milhes de anos na populao humana so altamente evoludos para explorar seus hospedeiros humanos. Esses patgenos no poderiam modificar sua patogenicidade sem alterar a concesso que eles tm com o sistema imune humano. A rpida morte de todos os hospedeiros no melhor para a sobrevivncia do patgeno a longo prazo: melhor ser eliminado pela resposta imune; assim, o micrbio tem tempo de infectar outras pessoas. Em resumo, nos adaptamos a viver com nossos inimigos, e eles, conosco. Apesar disso, recentes conceitos sobre sepas altamente patognicas da gripe aviria e o episdio de SARS (severe acute respiratory syndrome) Sndrome Respiratria Aguda Severa em 2002 e 2003, causados pelo corona vrus de morcegos que causam pneumonia severa em humanos, lembram-nos de que

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Mecanismo direto de leso no tecido pelo patgeno Produo de exotocinas Mecanismo patognico Endotoxinas Efeito citoptico direto

Mecanismo indireto de leso no tecido pelo patgeno Complexos imunes Anticorpos contra o hospedeiro Imunidade mediada por clulas

Agentes infecciosos

Streptococcus pyogenes Staphylococcus aureus Corynebacterium diphtheriae Clostridium tetani Vibrio cholerae

Escherichia coli Haemophilus influenza Salmonella typhi Shigella Pseudomonas aeruginosa Yersinia pestis

Varola Varicela zoster Vrus da hepatite B Vrus do plio Vrus do sarampo Vrus influenza Vrus herpes simples Vrus humano herpes 8 (HHV8) Varola Catapora Hepatite Poliomielite Sarampo, Panencefalite subaguda esclerosante Influenza Feridas herpticas Sarcoma de Kaposi

Vrus da hepatite B Malria Streptococcus pyogenes Treponema pallidum A maioria das infeces agudas

Streptococcus pyogenes Mycoplasma pneumoniae

Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium leprae Virus da coriomeningite linfocitica Borrelia burgdorferi Schistosoma mansoni Vrus herpes simples Tuberculose Lepra tuberculoide Menigite aseptica Artrite de Lyme Esquistossomase Herpes estromal queratinisante

Doenas

Tonsilite, Febre escarlatina Furnculos, Sndrome do choque txico, intoxicao alimentar Difteria Ttano Clera

Sepse Gram-negativa Meningite e pneumonia Febre tifoide Disenteria bacilar Feridas infecciosas Peste

Doena nos rins Depsito vascular Glomerulonefrite Leso renal secundria da sfilis Depsito renal transitrio

Febre reumtica Anemia hemoltica

Figura 2.4 Os patgenos podem lesar os tecidos em uma variedade de formas diferentes. Os mecanismos de dano, os agentes infecciosos representativos e os nomes comuns das doenas associadas a cada tipo so apresentados. Exotoxinas so liberadas por microrganismos e atuam na superfcie das clulas hospedeiras, por exemplo, pela ligao aos receptores. Endotoxinas, as quais so componentes intrnsecos da estrutura microbiana, ativam fagcitos a liberarem citocinas que produzem sintomas locais e sistmicos. Muitos patgenos so citopticos, danificando diretamente as clulas que infectam. Por fim, a resposta imune adaptativa para o patgeno pode gerar complexos antgeno:anticorpo que ativam neutrfilos e macrfagos, anticorpos que podem ter uma reao cruzada com o tecido do hospedeiro ou clulas T que matam as clulas infectadas. Todas tm potencial para lesar o tecido do hospedeiro. Alm disso, os neutrfilos, as clulas mais abundantes em uma infeco recente, liberam vrias protenas e pequenas molculas mediadoras da inflamao que controlam a infeco e causam dano ao tecido (ver Figura 2.9).

novas e mortais infeces podem ser transferidas para humanos de reservatrios animais. Essas so conhecidas como infeces zoonticas. Devemos estar alerta para o surgimento de novos patgenos e novos tratamentos de sade. O vrus da imunodeficincia humana que causa a AIDS (discutidas no captulo 12) serve de alerta para o fato de que continuamos constantemente vulnerveis.

2-2 Os agentes infecciosos devem superar as defesas inatas do hospedeiro para estabelecer um foco de infeco
Nosso organismo est constantemente exposto a microrganismos presentes no ambiente, incluindo agentes infecciosos que foram disseminados por indivduos infectados. O contato com esses microrganismos pode ocorrer por meio das superfcies epiteliais internas e externas. A mucosa do trato respiratrio fornece uma via de entrada para microrganismos transportados pelo ar, a mucosa gastrintestinal, para microrganismos presentes nos alimentos e na gua; as picadas de insetos e feridas permitem a entrada dos microrganismos atravs da pele, e o contato direto entre indivduos oferece oportunidade para a infeco cutnea, intestinal e da mucosa do trato reprodutivo (Figura 2.5). Apesar dessas exposies, felizmente, as doenas infecciosas so bastante raras. As superfcies epiteliais do organismo atuam como uma barreira efetiva contra a maioria dos microrganismos e so rapidamente reparadas se houver algum dano. Alm disso, a maioria dos microrganismos que conseguem atravessar as superfcies epiteliais so eficientemente removidos pelos mecanismos da imunidade inata que atuam nos tecidos. Dessa maneira, na maioria dos casos, essas defesas impedem que a infeco seja estabelecida. difcil saber quantas infeces so

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Vias de infeco pelos patgenos Via de entrada Superfcie das mucosas


Gotculas inaladas Vrus influenza Neisseria meningitidis Esporos Bacillus anthracis gua ou alimento contaminado Salmonella typhi Rotavrus Treponema pallidum Inalao de antraz Febre tifoide Diarreia Sfilis AIDS Influenza Meningite meningoccica

Figura 2.5 Os patgenos infectam o organismo por vrias vias.


Doena

Modo de transmisso

Patgeno

Vias areas

Trato gastrintestinal

Trato reprodutivo

Contato fsico HIV

Epitlio externo Superfcie externa


Contato fsico Pequenos arranhes na pele Trichophyton Bacillus anthracis Clostridium tetani Francisella tularensis Flavivrus Borrelia burgdorferi Plamodium spp. P-de-atleta Antraz cutneo Ttano Tularemia Febre amarela Doena de Lyme Malria

Ferimentos ou arranhes

Ferimentos por perfurao Manipulao de animais infectados Picada de mosquitos (Aedes aegypti)

Picada de insetos

Picadas de carrapato Picada de mosquito (Anopheles)

repelidas dessa forma; por no causarem sintomas, passam despercebidas. Contudo, os microrganismos que um homem normal inala, ingere ou que penetram atravs de pequenas feridas so na maioria das vezes contidos ou eliminados porque raramente causam doenas. As doenas infecciosas ocorrem quando o microrganismo capaz de escapar da defesa inata do hospedeiro ou domin-la com sucesso e, ento, esse microorganismo capaz de se replicar e permitir sua posterior transmisso dentro de nossos corpos. Em alguns casos, como na doena fngica p-de-atleta, a infeco inicial permanece localizada e no causa uma patologia significativa. Em outros casos, o agente infeccioso causa danos e patologia sria, pois se espalha atravs dos vasos linfticos ou da corrente sangunea, invadindo e destruindo tecidos ou rompendo o funcionamento do corpo com suas toxinas, como no caso do agente do ttano (Clostridium tetani), que secreta uma potente neurotoxina. A expanso do patgeno , frequentemente, controlada pela resposta inflamatria, que recruta molculas e clulas efetoras do sistema imune inato provenientes dos vasos sanguneos locais (Figura 2.6). Ao mesmo tempo, a cascata de coagulao induzida para impedir que o patgeno se dissemine pelo sangue. A resposta imune inata induzida atua durante alguns dias. Durante esse tempo, a resposta imune adaptativa inicia sua ao em resposta apresentao de antgenos do patgeno nos tecidos linfoides locais pelas clulas dendrticas (ver Seo 1-15). A resposta imune adaptativa difere da resposta inata por sua capacidade de se direcionar contra caractersticas especficas do patgeno. Essa resposta normalmen-

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Aderncia ao epitlio

Infeco local e penetrao no epitlio

Infeco local dos tecidos

Imunidade adaptativa

Macrfago tecidual Clula dendrtica tecidual

Vasos sanguneos

Proteo contra a infeco Induo da cicatrizao do ferimento Protenas e peptdeos antimicrobianos, fagcitos e destruio dos microrganismos invasores pelo complemento Ativao das clulas T :? Complemento, citocinas, quimiocinas, Fagcitos e clulas NK Ativao de macrfagos Clulas dendrticas migram para os linfonodos para iniciar a resposta imune adaptativa Cogulos sanguneos ajudam limitando a disseminao da infeco

Flora normal Fatores qumicos locais Fagcitos (especialmente nos pulmes)

Eliminao da infeco por anticorpos Ativao de clulas T dependentes de macrfagos e citotoxicidade das clulas T

Figura 2.6 Uma infeco e as respostas contra ela podem ser divididas em vrios estgios. Esses estgios esto ilustrados aqui para um microrganismo infeccioso que penetra na pele atravs de um ferimento. O agente infeccioso deve aderir s clulas epiteliais e, ento, cruzar o epitlio. Uma resposta imune local pode prevenir o estabelecimento da infeco. Se no, auxiliar a conteno da infeco e tambm levar o agente infeccioso pelas clulas dendrticas e linfa aos linfonodos locais. Isso inicia a resposta imune adaptativa e a eventual eliminao da infeco. O papel das clulas T : desconhecido, como veremos na Seo 2-34, e est indicado pelo ponto de interrogao.

te eliminar a infeco e proteger o hospedeiro contra reinfeces pelo mesmo patgeno pela produo de clulas efetoras, anticorpos e pelo estabelecimento de uma memria imunolgica contra o patgeno.

2-3 As superfcies epiteliais do organismo so as primeiras linhas de defesa contra infeces


Nossas superfcies corporais so protegidas por epitlios, que proporcionam uma barreira fsica entre o meio interno e o mundo externo que contm patgenos (Figura 2.7). As clulas epiteliais so unidas por junes ocludentes, que formam um bloqueio efetivo contra o ambiente externo. Esses epitlios compreendem a pele e os revestimentos das estruturas tubulares do corpo: tratos gastrintestinal, respiratrio e geniturinrio. As infeces ocorrem apenas quando os patgenos podem colonizar ou atravessar essas barreiras. Uma vez que as camadas protetoras secas da pele apresentam uma formidvel barreira, a entrada do patgeno ocorre, frequentemente, pelas superfcies epiteliais internas, que representam a maioria das superfcies do organismo. A importncia do epitlio na proteo contra a infeco torna-se bvia quando a barreira rompida, como em ferimentos, queimaduras e perda da integridade do epitlio interno do organismo, na qual a

Pele

Intestino

Pulmes

Olhos/Nariz

Clulas epiteliais unidas pelas junes ocludentes Mecnica Fluxo longitudinal de ar e fluidos Baixo pH cidos graxos Movimento do muco pelos clios Lgrimas Clios nasais Enzimas salivares (lisozima)

Figura 2.7 Muitas barreiras impedem que os patgenos cruzem os epitlios e colonizem os tecidos. A superfcie epitelial proporciona uma barreira mecnica e qumica contra a infeco por microrganismos.

Qumica

Enzimas (pepsina) Peptdeos antibacterianos

Microbiolgica

Flora normal

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infeco uma importante causa de mortalidade e morbidade. Na ausncia de ferimentos ou rupturas, os patgenos normalmente atravessam as barreiras epiteliais, ligando-se a molculas das superfcies epiteliais dos rgos internos, ou estabelecendo uma infeco pela adeso e colonizao dessas superfcies. Essa adeso especfica permite que o patgeno infecte a clula epitelial, danificando o epitlio de modo que possa ser ultrapassado, ou, no caso de patgenos colonizadores, evitando que sejam levados pelo fluxo de ar ou fluidos atravs da superfcie epitelial. O epitlio interno conhecido como mucosa epitelial, pois secreta um fluido viscoso denominado muco, que contm muitas glicoprotenas chamadas mucinas. Os microrganismos recobertos pelo muco podem ser impedidos de aderir ao epitlio e, em mucosas epiteliais como a do trato respiratrio, podem ser expulsos no fluxo de muco devido ao movimento do epitlio ciliado. A eficcia do fluxo do muco em eliminar infeces ilustrada por pessoas com defeito na secreo do muco ou com inibio do movimento ciliar, como ocorre na doena hereditria fibrose cstica. Tais indivduos frequentemente desenvolvem infeces pulmonares causadas pela colonizao das superfcies epiteliais por bactrias que, no entanto, no so capazes de atravessar essa barreira. No intestino, o peristaltismo um importante mecanismo para manter tanto a comida quanto os agentes infecciosos em movimento. A falha no peristaltismo tipicamente acompanhada pelo supercrescimento de bactrias no lmen intestinal. Nossas superfcies epiteliais so mais do que uma simples barreira fsica para infeces; elas produzem tambm substncias qumicas que so microbicidas ou que inibem o crescimento microbiano. Por exemplo, as enzimas antibacterianas lisozima e fosfolipase A so secretadas nas lgrimas e na saliva. A saliva contm vrias histatinas, peptdeos ricos em histidina com atividades antimicrobianas. O pH cido do estmago e as enzimas digestivas, os sais biliares, os cidos graxos e os lisolipdios encontrados no trato gastrintestinal superior formam uma barreira qumica contra a infeco. Mais abaixo no trato intestinal, os peptdeos antibacterianos e antifngicos chamados criptidinas ou -defensinas so produzidos pelas clulas de Paneth, que residem na base das criptas do intestino delgado, abaixo das clulas-tronco epiteliais. Peptdeos antibacterianos relacionados as -defensinas so produzidos por outros epitlios, primeiramente no trato respiratrio e geniturinrio, pele e lngua. Os peptdeos antimicrobianos tm papel na defesa imune de muitos organismos, incluindo os homens e outros vertebrados, que tambm podem desenvolver uma resposta imune adaptativa. O mais surpreendente a resistncia infeco dos insetos e outros invertebrados, incluindo as plantas, nas quais a imunidade inata o nico sistema de defesa do hospedeiro. Todos esses organismos produzem peptdeos antimicrobianos, peptdeos catinicos, que, acredita-se, matam as bactrias, danificando a membrana celular. Protenas antibacterianas que trabalham por diferentes mecanismos so secretadas nos fluidos que banham a superfcie epitelial do pulmo e intestino. Essas protenas cobrem a superfcie dos patgenos de tal modo que eles sero mais facilmente fagocitados pelos macrfagos. Elas so membros de uma famlia de receptores capazes de reconhecer caractersticas comuns na superfcie bacteriana e sero consideradas em detalhes mais adiante neste captulo. Alm dessa defesa, a maioria das superfcies epiteliais so associadas flora normal de bactrias no-patognicas, conhecidas como bactrias comensais, que competem com os microrganismos patognicos pelos nutrientes e pelo stio de adeso nas clulas epiteliais. Essa flora tambm produz substncias antimicrobianas, como o cido ltico produzido pelos lactobacilos vaginais, e algumas linhagens, tambm podem produzir peptdeos antibacterianos (bactericinas). Quando as bactrias no-patognicas so mortas pelos tratamentos com antibiticos, os microrganismos patognicos frequentemente as substituem e causam doena. Sob algumas circunstncias, as bactrias comensais podem causar doenas. A sobrevivncia delas nas superfcies de nosso corpo regulada pelo balano entre crescimento bacteriano e eliminao pelos mecanismos da imu-

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Os macrfagos expressam receptores para muitos constituintes bacterianos Receptor de manose Receptor de LPS (CD14) TLR-4 Receptor de glicano Receptor de varredura

nidade inata; falhas nessa regulao, como aquela causada pela deficincia hereditria de protenas da imunidade inata, discutida no Captulo 12, pode possibilitar que bactrias no-patognicas normalmente cresam extensivamente e causem doena.

2-4 Muitos patgenos so reconhecidos, ingeridos e mortos pelos fagcitos logo aps entrarem nos tecidos
Se um microrganismo atravessa a barreira epitelial e comea a replicar-se no tecido do hospedeiro, na maioria dos casos, ele reconhecido imediatamente pelos fagcitos mononucleares, ou macrfagos, que residem nesses tecidos. Os macrfagos maturam continuamente a partir dos moncitos que deixam a circulao para migrar para os tecidos do organismo. Em diferentes tecidos, os macrfagos recebem histologicamente diferentes nomes, por exemplo, clulas microgliais, no tecido neural, e clulas de Kupffer, no fgado; genericamente, essas clulas so referenciadas como fagcitos mononucleares. Elas so encontradas em grande nmero no tecido conjuntivo, na camada submucosa do trato gastrintestinal, nos pulmes (onde tambm so encontrados no interstcio e nos alvolos), em certos vasos sanguneos do fgado e por todo o bao, onde removem clulas senescentes do sangue. A segunda maior famlia de fagcitos os neutrfilos ou leuccitos neutroflicos polimorfonucleares (PMNs) so clulas de vida curta abundantes no sangue; porm, no esto presentes normalmente em tecidos saudveis. Esses dois tipos de clulas fagocticas tm um papel-chave na imunidade inata porque podem reconhecer, ingerir e destruir muitos patgenos sem ajuda da resposta imune adaptativa. A maioria dos microrganismos entram no organismo atravs da mucosa do intestino e do sistema respiratrio. Os macrfagos localizados nos tecidos da submucosa so as primeiras clulas encontradas pela maioria dos patgenos, porm eles so rapidamente ajudados pelo recrutamento de um grande nmero de neutrfilos para o local da infeco. Macrfagos e neutrfilos reconhecem patgenos pelos mesmos receptores de superfcie celular que podem discriminar entre as molculas de superfcie expressas tanto pelos patgenos quanto pelas clulas do hospedeiro. Esses receptores, que veremos com mais detalhes a seguir neste captulo, incluem o receptor de manose, que encontrado em macrfagos, mas no em moncitos e neutrfilos, os receptores de varredura, que podem se ligar a muitos ligantes carregados negativamente como os cidos lipoteicoicos, os quais so componentes da parede celular de bactrias Gram-positivas, e o CD14, encontrado predominantemente em moncitos e macrfagos (Figura 2.8). A ligao de lipopolissacardeos presente na superfcie de bactrias Gram-negativas permite que sejam reconhecidos por outro receptor chamado receptor semelhante ao Toll. Em muitos casos, a ligao do patgeno a esses receptores da superfcie celular leva fagocitose, seguido da morte do patgeno dentro do fagcito. A fagocitose um processo ativo no qual o patgeno ligado primeiro circundado pela membrana fagoctica e ento internalizado em uma vescula ligada membrana conhecida como fagossoma ou vacolo endoctico. O fagossoma torna-se, ento, acidificado, o qual mata a maioria dos patgenos. Alm da fagocitose, os macrfagos e os neutrfilos possuem grnulos circundados por membrana, denominados lisossomas, os quais contm enzimas, protenas e peptdeos que podem mediar uma resposta intracelular antimicrobiana. O fagossoma fusiona com um ou mais lisossomas produzindo o fagolisossoma, onde o contedo lisossomal liberado para destruir o patgeno (ver Figura 2.8). Alm da fagocitose, macrfagos e neutrfilos produzem uma variedade de outros produtos txicos que ajudam na morte do microrganismo englobado (Figura 2.9). O mais importante desses so os peptdeos antimicrobianos e o xido ntrico (NO), nion superxido (O2-) e perxido de hidrognio (H2O2), que so diretamente txicos bactria. O xido ntrico produzido por uma forma de alto ren-

A ligao das bactrias aos receptores nos macrfagos inicia a liberao de citocinas e pequenos mediadores lipdicos da inflamao Mediadores lipdicos LPS

Quimiocinas Citocinas

Os macrfagos capturam e digerem as bactrias que se ligaram a eles

Lisossoma Fagossoma

Fagolisossoma

Figura 2.8 Os macrfagos ativados pelos patgenos englobam e iniciam a resposta inflamatria. Os macrfagos derivam dos moncitos circulantes. Eles apresentam muitas caractersticas comuns, mas adquirem novas funes e novos receptores quando se tornam clulas em repouso no tecido conjuntivo por todo o organismo. Os macrfagos expressam receptores para muitos componentes bacterianos, incluindo os receptores para carboidratos bacterianos (receptores de manose e glicano), lipdeos (receptores de LPS) e outros componentes derivados dos patgenos (receptores semelhantes ao Toll (TLRs) e receptores de varredura. A ligao da bactria aos receptores nos macrfagos estimula a fagocitose e a captura dos patgenos para as vesculas intracelulares, onde so destrudos. A sinalizao por alguns receptores, tais como os receptores Toll, em resposta aos componentes bacterianos, causa a secreo de citocinas pr-inflamatrias, como interleucina-1 (IL-1 ), IL-6 e fator de necrose tumoral- (TNF-).

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Classe Classe de de mecanismo mecanismo Acidificao Acidificao Produtos Produtos txicos txicos derivados derivados do do oxignio oxignio xidos xidos de de nitrognio nitrognio txicos txicos Peptdeos Peptdeos antimicrobianos antimicrobianos Enzimas Enzimas

Produtos Produtos especficos especficos pH=~3,5-4,0, pH=~3,5-4,0, bacteriosttico bacteriosttico ou ou bactericida bactericida Superxido Superxido O O22,, perxido perxido de de hidrognio hidrognio H H22O O22,, oxignio oxignio livre livre 11 O O22,, radical radical hidroxila hidroxila OH, OH, hipoalito hipoalito OCl OCl xido xido ntrico ntrico NO NO Defensinas Defensinas e e protenas protenas catinicas catinicas Lisozima Lisozima dissolve dissolve a a parede parede celular celular de de algumas algumas bactrias bactrias Gram-positivas Gram-positivas Hidrolases Hidrolases cidas cidas digerem digerem ainda ainda mais mais as as bactrias bactrias Lactoferrina Lactoferrina (liga-se (liga-se ao ao Fe) Fe) e e protena protena de de ligao ligao vitamina vitamina B B12 12

Figura 2.9 Agentes bactericidas produzidos ou liberados pelos fagcitos na ingesto de microrganismos. A maioria desses agentes so produzidos tanto pelos macrfagos como pelos neutrfilos. Alguns so txicos; outros, como a lactoferrina, agem pela ligao a nutrientes essenciais, impedindo sua captao pela bactria. Os mesmos agentes podem ser liberados por fagcitos que interagem com grandes superfcies recobertas de anticorpos, como os vermes parasitrios ou tecidos do hospedeiro. Como esses agentes tambm so txicos s clulas do hospedeiro, a ativao dos fagcitos pode causar leso tecidual extensa durante uma infeco.

Competidores Competidores

dimento atravs do xido ntrico sintetase, iNOS2. O superxido produzido por um multicomponente, a NADPH oxidase associada membrana, em um processo denominado respirao oxidativa, porque acompanhado por um aumento transitrio do consumo de oxignio; o superxido convertido pela enzima superxido dismutase em H2O2 (Figura 2.10). Alm disso, reaes qumicas e enzimticas produzem uma variedade de agentes qumicos txicos de H2O2, incluindo o radical hidrognio (OH) e hipoclorito (OCl-) e hipobrometo (OBr-). Os neutrfilos so clulas de vida curta, pois morrem logo depois terem completado um ciclo de fagocitose. Os neutrfilos mortos e os que esto morrendo so os principais componentes do pus, que formado em algumas infeces por bactrias extracelulares. As bactrias que do origem a essas infeces so chamadas de bactrias piognicas ou formadoras de pus. Os macrfagos, em contraste, tm vida longa e continuam gerando novos lisossomas. Pacientes com a chamada doena granulomatosa crnica tem uma deficincia gentica na NADPH oxidase, o que significa que seus fagcitos no produzem derivados txicos de oxignio, caracterstico da respirao oxidativa, e so menos capazes de matar os microrganismos ingeridos e eliminar a infeco. Pessoas com esse defeito so surpreendentemente susceptveis a infeces bacterianas e fngicas, especialmente na infncia. Os macrfagos podem fagocitar patgenos e realizar respirao oxidativa logo aps o encontro com o microrganismo infectante, e isso pode ser suficiente para prevenir o estabelecimento de uma infeco. No sculo XIX, o imunologista celular Elie Metchnikoff acreditava que a resposta inata dos macrfagos englobasse todas as defesas do hospedeiro. De fato, agora est claro que invertebrados, como

Figura 2.10 A respirao oxidativa em macrfagos e neutrfilos causada pelo aumento transitrio no consumo de oxignio durante a produo de metablitos microbicidas de oxignio. A ingesto de microrganismos ativa os fagcitos a reunir mltiplas subunidades da enzima NADPH oxidase de seus componentes. A enzima ativa converte o oxignio molecular em on super xido O2 e outros radicais livres de oxignio. Os ons superxido so, ento, convertidos pela enzima superxido dismutase (SOD) em perxido de hidrognio (H2O2), o qual pode matar os microrganismos, e so tambm convertidos por outras enzimas e reaes qumicas com ons ferro (Fe2+) em hipoclorito (OCl) e radicais hidroxila (OH) microbicidas.

A enzima NADPH oxidase composta por vrias subunidades diferentes Vacolo endoctico gp22phox gp91phox

A NADPH oxidase ativada converte molculas de O2 em on superxido O2 O2

Uma segunda enzima a superxido dismutase converte o superxido em perxido de hidrognio

As enzimas peroxidase e o ferro posteriormente convertem o perxido de hidrognio em ons hipoclorito e radicais OCl
OH

H2O2
peroxidase

p47phox Rac p40phox

p67phox SOD

Fe2+

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a estrela-do-mar que ele estudava, valem-se inteiramente da imunidade inata para sua defesa contra a infeco. Embora esse no seja o caso para seres humanos e outros vertebrados, a resposta inata dos macrfagos ainda fornece uma importante linha de defesa do hospedeiro, que deve ser vencida caso um microrganismo queira estabelecer uma infeco que possa ser passada a um novo hospedeiro. A caracterstica-chave que distingue os microrganismos patgenos de no-patgenos sua habilidade de superar a defesa imune inata. Os patgenos devem desenvolver uma variedade de estratgias para escapar da imediata destruio pelos macrfagos. Como notado, muitas bactrias patognicas extracelulares revestem-se com uma espessa cpsula de polissacardeo que no reconhecida por muitos receptores de fagcitos. Outros patgenos, como, por exemplo, micobactria, desenvolveram maneiras de crescerem dentro dos fagossomas dos macrfagos, por inibir sua acidificao e fuso com o lisossoma. Sem essas estratgias, o microrganismo deve entrar no organismo em nmero suficiente para simplesmente sobrepujar a defesa inata imediata do hospedeiro e para estabelecer o foco da infeco. O segundo efeito importante da interao entre patgenos e macrfagos dos tecidos a ativao dos macrfagos para liberar citocinas, quimiocinas (citocinas quimioatraentes) e outros mediadores que criam um estado de inflamao no tecido e atraem neutrfilos e protenas plasmticas para o local da infeco. Acredita-se que o patgeno induza a secreo de citocinas por sinais emitidos atravs de alguns receptores aos quais se unem; mais adiante, veremos como isso ocorre em resposta ao lipopolissacardeo bacteriano. Os receptores que sinalizam a presena de patgenos e induzem as citocinas tm tambm um outro papel importante: induzir a expresso das denominadas molculas coestimuladoras tanto em macrfagos quanto em clulas dendrticas, outro tipo de clulas fagocticas presente nos tecidos, permitindo que essas clulas apresentadoras de antgeno iniciem uma resposta imune adaptativa (ver Seo 1-7). As citocinas ativadas pelos macrfagos tm uma importante contribuio para o local da inflamao e para a induo de outras respostas inatas que ocorrem nos primeiros dias da nova infeco. Descreveremos essa resposta inata induzida e o papel individual das citocinas na ltima parte deste captulo. Entretanto, como a resposta inflamatria normalmente iniciada dentro de horas aps a infeco ou ferimento, veremos agora como isso ocorre e de que forma contribui para a defesa do hospedeiro.

2-5 O reconhecimento do patgeno e a destruio dos tecidos iniciam uma resposta inflamatria
A inflamao tem trs papis essenciais no combate s infeces. O primeiro o de oferecer clulas e molculas efetoras adicionais aos stios de infeco para aumentar a morte dos microrganismos invasores pelos macrfagos. O segundo proporcionar uma barreira fsica, na forma de coagulao microvascular, para prevenir a propagao da infeco. O terceiro para promover o reparo dos tecidos lesados, uma funo que no faz parte do sistema imune e, portanto, no ser mais discutido. A inflamao no local da infeco iniciada pelos macrfagos contra os patgenos. As respostas inflamatrias so operacionalmente caracterizadas por dor, vermelhido, calor e edema no stio da infeco, refletindo quatro tipos de mudanas nos vasos sanguneos locais, como mostrado na Figura 2.11. O primeiro o aumento do dimetro vascular, levando a um aumento do fluxo sanguneo local consequentemente calor e vermelhido e a reduo na velocidade do fluido sanguneo local, especialmente nas superfcies internas dos pequenos vasos sanguneos locais. A segunda mudana ocorre nas clulas endoteliais que revestem os vasos sanguneos, as quais so ativadas e passam a expressar molculas de

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As citocinas produzidas pelos macrfagos causam dilatao dos pequenos vasos sanguneos locais

O aumento da expresso de molculas de adeso faz com que os leuccitos se movam para a periferia dos vasos sanguneos

Os leuccitos extravasam nos locais de infeco

Ocorre coagulao sangunea nos microvasos

Citocinas

Quimiocinas

adeso celular que promovem a ligao dos leuccitos circulantes. A combinao do fluxo sanguneo mais lento e das molculas de adeso que permitem a adeso de leuccito ao endotlio e posterior migrao para dentro do tecido um processo conhecido como extravasamento. Todas essas mudanas so iniciadas por citocinas e quimiocinas produzidas por macrfagos ativados. Uma vez que a inflamao tenha comeado, as primeiras clulas brancas atradas para o local so os neutrfilos, seguidos pelos moncitos, os quais se diferenciam em macrfagos teciduais (Figura 2.12). Os moncitos so capazes de originar, tambm, as clulas dendrticas no tecido, dependendo do sinal que recebem do ambiente; por exemplo, a citocina, fator estimulante de colnias de granulcitos e macrfago (GM-CSF), juntamente com a interleucina-4 (IL-4), vo induzir os moncitos a se diferenciarem em clulas dendrticas. Por outro lado, a citocina, fator estimulante de colnias macrfagos (M-CSF), induz a diferenciao para macrfagos. No ltimo estgio da inflamao, outros leuccitos, como eosinfilos (ver Seo 1-3) e linfcitos, tambm so encontrados no local infectado. A terceira maior mudana nos vasos sanguneos locais o aumento da permeabilidade vascular. Em vez de estarem fortemente aderidas, as clulas do endotlio que revestem as paredes dos vasos sanguneos se tornam separadas, levando sada do fluido e de protenas do sangue para o lado do tecido. Isso causa o inchao ou edema e dor bem como o acmulo de protenas plasmticas que auxiliam na defesa do hospe-

Figura 2.11 A infeco estimula os macrfagos a liberar citocinas e quimiocinas que iniciam a resposta inflamatria. As citocinas produzidas nos locais de infeco pelos macrfagos dos tecidos causam dilatao dos pequenos vasos sanguneos locais e alteraes na parede das clulas endoteliais. Essas mudanas fazem com que os leuccitos, como moncitos e neutrfilos, passem do interior dos vasos sanguneos (extravasamento) para o tecido infectado, guiados pelas quimiocinas produzidas pelos macrfagos ativados. Os vasos sanguneos tambm se tornam mais permeveis, permitindo que as protenas plasmticas e os fluidos vazem para os tecidos. Todas essas mudanas causam os sinais caractersticos da inflamao, como calor, vermelhido e edema no local da infeco.

Os moncitos ligam-se s molculas de adeso do endotlio vascular prximo ao local de infeco e recebem os sinais das quimiocinas

Os moncitos migram para os tecidos subjacentes

Os moncitos diferenciam-se em macrfagos e migram para o local da infeco


Lmen do vaso sanguneo

Receptores de quimiocinas

Molculas de adeso

Quimiocina

Tecido

Figura 2.12 Os moncitos circulantes no sangue reconhecem a parede de vasos sanguneos prximos aos locais de inflamao e deixam a circulao migrando para o tecido em direo aos locais de infeco e inflamao. As interaes iniciais so mediadas por molculas de adeso que capturam os moncitos da circulao e causam a aderncia desses no endotlio vascular. As quimiocinas ligadas ao endotlio vascular sinalizam para que os moncitos migrem atravs do endotlio para o tecido subjacente. Os moncitos, agora diferenciados em macrfagos, continuam sua migrao para o local da infeco sob a influncia das quimiocinas liberadas durante a resposta inflamatria. Os moncitos saem do sangue e nesse caminho so tambm capazes de diferenciar-se em clulas dendrticas (no apresentado) dependendo do sinal que recebem do ambiente.

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deiro. As mudanas que ocorrem no endotlio como resultado da inflamao so conhecidas em geral como ativao endotelial. A quarta mudana, a coagulao em microvasos no local da infeco, previne a difuso do patgeno pelo sangue. Essas mudanas so induzidas por uma variedade de mediadores inflamatrios liberados como consequncia do reconhecimento do patgeno pelo macrfago. Incluindo os mediadores lipdicos da inflamao prostaglandinas, leucotrienos e fator ativador de plaquetas (PAF) que so rapidamente produzidos pelos macrfagos por vias enzimticas que degradam os fosfolipdeos de membrana. Suas aes so seguidas por aquelas das citocinas e as quimiocinas que so sintetizadas e secretadas pelos macrfagos em resposta aos patgenos. A citocina fator de necrose tumoral- (TNF-), por exemplo, um potente ativador do endotlio celular. Como veremos na terceira parte deste captulo, outra maneira pela qual o rpido reconhecimento dos patgenos induz uma resposta inflamatria por meio da ativao da cascata do complemento. Um dos produtos de clivagem da reao do complemento um peptdeo chamado C5a, um potente mediador da inflamao, com diferentes atividades. Alm de aumentar a permeabilidade vascular e induzir a expresso de algumas molculas de adeso, ele atua como um potente quimioatraente de neutrfilos e moncitos. O peptdeo C5a tambm ativa fagcitos e mastcitos locais (ver Seo 1-3), os quais, por sua vez, so estimulados para liberar seus grnulos que contm as pequenas molculas inflamatrias histamina e a citocina TNF-. Em casos de ferimentos, o dano aos vasos sanguneos induz imediatamente outras duas cascatas enzimticas protetoras. O sistema quinina uma cascata enzimtica de pr-enzimas plasmticas que induzida pelo dano aos tecidos, produzindo vrios mediadores inflamatrios, incluindo o peptdeo vasoativo bradicinina. O sistema quinina o exemplo de cascata de protease, tambm conhecido como cascata enzimtica de ativao, no qual as enzimas so inicialmente inativas, ou na forma pr-enzimtica. Depois que o sistema ativado, a protease ativada quebra e ativa a prxima protease da srie, e assim por diante. A bradicinina causa um aumento na permeabilidade vascular que promove um influxo de protenas plasmticas para o local do tecido lesado. Isso tambm causa dor, que embora desagradvel para a vtima, chama ateno ao problema e leva imobilizao da regio afetada do corpo, ajudando a limitar a disseminao da infeco. O sistema de coagulao outra cascata de proteases que iniciada no sangue depois do dano dos vasos sanguneos. Essa ativao leva formao de um grumo de fibrina, cujo papel normal prevenir a perda de sangue. Em relao imunidade inata, contudo, o cogulo barra a entrada de microrganismos infecciosos para a corrente sangunea. A cascata de quinina e a cascata de coagulao sangunea so igualmente iniciadas pelas clulas endoteliais ativadas e tambm tm importante papel na resposta inflamatria contra patgenos, mesmo que no ocorram ferimentos ou danos teciduais. Dessa forma, dentro de minutos aps a penetrao no tecido pelo patgeno, a resposta inflamatria causa um influxo de protenas e clulas que podem controlar a infeco. Isso estabelece uma barreira fsica na forma de cogulo sanguneo, limitando a disperso da infeco e fazendo com que o hospedeiro fique alerta ao local da infeco.

Resumo
O organismo dos mamferos suscetvel infeco por muitos agentes patognicos, os quais devem, em primeiro lugar, fazer contato com o hospedeiro, para, ento, estabelecer um foco de infeco, causando a doena. Esses patgenos diferem bastante em seu estilo de vida, na estrutura de sua superfcie e em seus mecanismos de patognese, exigindo uma resposta igualmente diversa de defesa do

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sistema imune do hospedeiro. A primeira fase da defesa do hospedeiro consiste nos mecanismos que esto presentes e prontos para atacar um invasor a qualquer momento. As superfcies epiteliais do organismo impedem a entrada dos agentes invasores e protegem contra a colonizao e contra vrus e bactrias que penetram nos tecidos, por meio de interaes especializadas com a superfcie celular. Os mecanismos de defesa incluem a preveno da adeso de patgenos e a secreo de enzimas e peptdeos antimicrobianos. Bactrias, vrus e parasitas que ultrapassam essas barreiras se confrontam imediatamente com os macrfagos teciduais, equipados com receptores de superfcie que podem ligar-se e fagocitar muitos tipos diferentes de patgenos. Isso leva a uma resposta inflamatria, a qual causa o acmulo de neutrfilos fagcitos e macrfagos no local da infeco, os quais ingerem e destroem os microrganismos invasores.

Reconhecimento de padres do sistema imune inato


Embora o sistema imune inato no possua a especificidade fina da imunidade adaptativa que necessria para produzir memria imunolgica, ele pode distinguir o prprio do no-prprio. J vimos como isso ocorre na resposta dos macrfagos contra os microrganismos patognicos. Nesta parte do captulo, veremos com mais detalhes os receptores que ativam a resposta imune inata, incluindo aqueles que reconhecem diretamente o patgeno e sinalizam para as clulas da resposta imune inata. Estruturas moleculares de padres regulares esto presentes em muitos microrganismos, mas no nas clulas do nosso corpo. As protenas que reconhecem essas caractersticas esto presentes nos receptores de macrfagos, de neutrfilos e de clulas dendrticas e como molculas secretadas. Suas caractersticas gerais contrastam com os receptores antgeno-especficos da imunidade adaptativa (Figura 2.13). Diferentemente dos receptores de antgenos descritos no Captulo 1, os receptores da imunidade inata no so distribudos clonalmente. Um determinado grupo de receptores estar presente em todas as clulas daquele tipo celular. A ligao de componentes especficos dos patgenos por esses recep-

Caracterstica do receptor Especificidade herdada no genoma Expresso por todas as clulas de um determinado tipo (p. ex., macrfagos) Ativa resposta imediata Reconhece uma ampla gama de patgenos Interage com uma gama de estruturas moleculares de um determinado tipo Codificado por mltiplos segmentos gnicos Requer rearranjo gnico Distribuio clonal Capaz de reconhecer uma ampla variedade de estruturas Moleculares

Imunidade inata Sim Sim Sim Sim Sim No No No No

Imunidade adaptativa No No No No No Sim Sim Sim Sim

Figura 2.13 Comparao das caractersticas das molculas de reconhecimento dos sistemas imune inato e adaptativo. O sistema imune inato usa receptores codificados por genes completos herdados da linhagem germinal. Ao contrrio, o sistema imune adaptativo usa receptores de antgenos codificados em segmentos gnicos que so reunidos em genes completos de receptores de clulas T e B durante o desenvolvimento dos linfcitos, um processo que leva expresso de um receptor com especificidade nica em cada clula individual. Os receptores do sistema imune inato no so distribudos de forma clonal (isto , em todas as clulas de um mesmo tipo), ao passo que os receptores de antgeno do sistema imune adaptativo esto distribudos de forma clonal em todos os linfcitos de um mesmo tipo.

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tores induz respostas muito rpidas, as quais so efetivas sem a demora imposta pela expanso clonal dos linfcitos, necessria na resposta imune adaptativa. Os receptores de reconhecimento padres do sistema imune inato tm vrias funes diferentes. Muitos so receptores fagocticos que estimulam a ingesto de patgenos que reconhecem. Outros so receptores quimioatraentes, os quais guiam as clulas para o local da infeco. A terceira funo a induo da produo de molculas efetoras que contribuiro posteriormente na induo de receptores da imunidade inata e tambm na induo de protenas que influenciam a iniciao e o amadurecimento subsequente das respostas imunes adaptativas. Nesta parte do captulo, examinaremos primeiro as propriedades do reconhecimento de alguns receptores que se ligam diretamente aos patgenos. A seguir, focalizaremos num sistema de reconhecimento e sinalizao de patgenos evolutivamente primitivo, mediado por receptores denominados receptores semelhantes ao Toll, que tm papel-chave na defesa contra infeces em plantas, insetos adultos e vertebrados, incluindo os mamferos.

Bactrias Gram-positivas cido Protena de teicoico superfcie cido lipoteicoico

Peptideoglicanos

2-6 Receptores com especificidade para as molculas dos patgenos reconhecem padres de motivos estruturalmente repetidos
Tipicamente, os microrganismos carregam padres repetidos na estrutura molecular de sua superfcie. A parede celular de bactrias Gram-positivas e Gram-negativas, por exemplo, so compostas por uma matriz de protenas, de carboidratos e de lipdeos em um respectivo arranjo, como visto na Figura 2.14. O cido lipoteicoico da parede celular das bactrias Gram-positivas e o lipopolissacardeo da parede exterior das bactrias Gram-positivas so, como vimos, importantes para o reconhecimento pelo sistema imune inato. Outros componentes microbianos tambm tm estruturas repetidas. Os flagelos bacterianos so feitos por subunidades repetidas de protenas, e o DNA bacteriano contm repeties no-metiladas de dinucleotdeos CpG. Os vrus quase sempre expressam RNA de dupla fita como parte de seu ciclo de vida. Essas estruturas repetidas so conhecidas comumente como molculas padres associadas aos patgenos (PAMPS), e os receptores que as reconhecem como receptores de reconhecimento padro (PRRs). A lectina ligadora de manose (MBL) um de tais receptores, presente no plasma sanguneo como protena livre. Como veremos na prxima parte deste captulo, ela pode iniciar a via lectina de ativao do complemento, mas discutiremos aqui brevemente como um bom exemplo de reconhecimento de molculas-padro. Como ilustrado na Figura 2.15, o reconhecimento do patgeno e a sua discriminao pela MBL deve-se ao reconhecimento de uma orientao particular de certos resduos de acar, bem como espaamento entre eles, que encontrado somente em micrbios e no em clulas hospedeiras. Uma vez formado o complexo MBL-patgeno, este se liga ao fagcito, atravs da interao com MBL ou atravs dos receptores do complemento dos fagcitos, que j esto ligados aos patgenos. A consequncia a fagocitose e morte do patgeno (ver Seo 2-4) e a induo de outras respostas celulares, como a produo de quimiocinas. O revestimento da partcula ou microrganismo com protenas que facilitem sua fagocitose conhecido como opsonizao, e apresentaremos outro exemplo dessa estratgia de defesa neste e em outros captulos. A MBL um membro da famlia de protenas colectinas, tambm conhecida por conter dois domnios, um semelhante ao colgeno e uma lectina (ligadora de acar). Outro membro dessa famlia so as protenas surfactantes A e D (SP-A e SP-D), as quais esto presentes nos fluidos que banham a superfcie epitelial do pulmo. No pulmo, essas se ligam e cobrem a superfcie do patgeno, marcando-o para a fagocitose pelo macrfago, que deixou o tecido subepitelial para entrar no alvolo pulmonar. Os fagcitos so, tambm, equipados com vrios receptores de superfcie celular que reconhecem diretamente a superfcie do patgeno. Entre esses est o recep-

Membrana celular Fosfolipdeo

Bactrias Gram-negativas Lipopolissacardeo (LPS) Protena de superfcie

Membrana externa Lipoprotenas Peptideoglicanos Membrana celular

Figura 2.14 Organizao da parede celular das bactrias Gram-positivas e Gram-negativas. As bactrias Gram-positivas (na parte superior do painel) tm uma parede celular composta por uma camada externa de uma matriz repetida de molculas de peptideoglicanos com repeties de N-acetilglicosamina (hexgonos em azul-claro) e cido N-acetilmurmico (circulos roxos) tendo ligaes cruzadas por pontes de peptdeos dentro de uma rede densa tridimensional. As protenas da superfcie bacteriana e outras molculas, como o cido teicoico, esto embutidas dentro dessa camada de peptideoclicanos, e o cido lipoteicoico est vinculado camada de peptideoglicanos por ligar-se diretamente s clulas da membrana bacteriana. A parede celular das bactrias Gram-negativas (painel inferior) composta no seu interior por uma matriz de peptideoglicanos e no exterior por uma membrana lipdica, na qual esto embutidos protenas e lipopolissacardeos (LPS) caractersticos de bactrias Gram-negativas.

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A lectina ligadora de manose (MBL) possui de dois a seis grupamentos de domnios de reconhecimento de carboidratos. Os stios de ligao de carboidratos em cada grupamento tm uma orientao fixa
Feixe de hlice- Hlice de colgeno

Domnio de reconhecimento de carboidratos

Figura 2.15 Lectina ligadora de manose reconhece a superficie bacteriana por seu particular espaamento entre os resduos de carboidratos. As protenas plasmticas lectina ligadora de manose (MBL) fazem parte de um sistema de reconhecimento do patgeno do sistema imune inato. Estas ligam-se superfcie de certas bactrias que apresentam um arranjo espacial particular de resduos de manose ou fucose. A presena destes resduos sozinhos no suficiente para assegurar a ligao: a orientao do local da ligao na MBL fixa, e somente se os resduos de manose ou a fucose tenham um determinado espaamento, a MBL ser apta a ligar-se. Uma vez coberta com MBL, a bactria mais susceptvel fagocitose.

A MBL liga-se com alta afinidade aos resduos de manose e fucose com o correto espaamento

Os resduos de manose e fucose com diferente espaamento no so ligados pela MBL

tor de manose de macrfago (ver Figura 2.8), uma lectina tipo C ligada clula (dependente de clcio) que se liga a certas molculas de acar encontradas na superfcie de muitas bactrias e de alguns vrus, incluindo o vrus da imunodeficincia humana (HIV). Suas propriedades de reconhecimento so muito similares s das MBLs (ver Figura 2.15) e, assim como esta, uma molcula multidenteada com vrios domnios de reconhecimento de carboidratos. Por ser um receptor transmembrnico da superfcie celular, pode funcionar diretamente como um receptor de fagcitos. O segundo grupo de receptores de fagcitos chama-se receptores de varredura, que reconhece vrios polmeros aninicos e lipoprotenas acetiladas de baixa densidade. Esses receptores so um grupo de molculas estruturalmente heterognias, existindo em pelo menos seis distintas formas moleculares. Alguns receptores de varredura reconhecem estruturas que so protegidas pelo cido silico nas clulas normais do hospedeiro. Existem outros alvos de reconhecimento, muitos dos quais ainda precisam ser caracterizados. Nem todos os receptores que reconhecem molculas especificas dos patgenos so receptores fagocticos. Normalmente os polipeptdeos bacterianos iniciam com um resduo de metionina formilado. O receptor fMet-Leu-Phe (fMLP) dos macrfagos e neutrfilos ligam-se nesse peptdeo N-formilado. Esse receptor um receptor quimioatraente que direciona os neutrfilos para o local da infeco. A ligao do patgeno em alguns receptores da superfcie do macrfago no somente estimulam a fagocitose, mas tambm emitem sinais para as clulas iniciarem a induo da resposta imune inata. A estimulao de certos receptores pelos produtos dos patgenos, tambm, leva macrfagos e clulas dendrticas a expressarem molculas coestimulatrias na superfcie celular. A expresso dessas molculas torna a clula capaz de agir como apresentadora de antgeno para linfcitos T, iniciando a respos-

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Reconhecimento imune inato pelos receptores semelhantes ao Toll Receptor semelhante ao toll TLR-1:TLR-2 heterodmero TLR-2:TLR-6 heterodmero TLR-3 TLR-4 dmero (mais MD-2 e CD14) Ligante

ta imune adaptativa. A melhor definio para vias de ativao desse tipo iniciada atravs da famlia de receptores transmembrnicos evolutivamente conservados, chamados receptores semelhantes ao Toll que parecem funcionar exclusivamente como receptores de sinalizao, os quais sero os prximos a serem descritos.

Peptideoglicano Lipoprotenas Lipoarabinomanano (micobactria) GPI (T. cruzi) Zimosan (levedura) dsRNA LPS (bactria Gram-negativa) cido lipoteicoico (bactrias Gram-positivas) Flagelina

2-7 Os receptores semelhantes ao Toll so receptores de sinalizao que distinguem diferentes tipos de patgenos e direcionam uma resposta imune adequada
Os receptores semelhantes ao toll (TLRs) de mamferos so membros de um sistema de reconhecimento e de sinalizao evolutivamente conservado, originalmente descoberto como tendo um papel no desenvolvimento embrionrio da mosca-da-fruta, Drosophila melanogaster. Subsequentemente foi encontrado um papel na defesa contra bactrias e infeces fngicas em insetos adultos e, agora se sabe, tem um papel-chave na resposta a infeces em plantas, insetos adultos e vertebrados, incluindo os mamferos. O receptor que medeia essas funes em Drosophilas conhecido como Toll, e suas protenas homlogas em mamferos e em outros animais so conhecidas como receptores semelhantes ao Toll. Existem 10 genes de TLR expressos em camundongo e humanos, e cada uma dessas 10 protenas produzidas se dedicam ao reconhecimento de um grupo padro de molculas no encontradas em vertebrados. Esses padres so caractersticos dos componentes dos microrganismos patognicos em algum dos estgios da infeco. Por existirem somente 10 genes TLR funcionais, os receptores semelhantes ao Toll tm especificidade limitada comparada a receptores de antgenos do sistema imune adaptativo. Em funo disso, especializaram-se em reconhecer molculas padres associadas aos micrbios. Apesar da pouca diversidade dos receptores semelhantes ao Toll, podem reconhecer elementos presentes na maioria dos microrganismos patognicos, como ilustrado na Figura 2.16. Alguns TLRs de mamferos atuam como receptores de superfcie celular, ao passo que outros atuam intracelularmente e esto localizados na membrana dos endossomas, onde existem patgenos e componentes dos patgenos que foram capturados para dentro da clula por endocitose e macropinocitose (Figura 2.17). O TLR-4 dos macrfagos um importante receptor semelhante ao Toll na resposta a infeces bacterianas comuns, pois em associao com CD14 um receptor de macrfagos para lipopolissacardeos e MD-2 uma outra protena celular, sinalizam a presena de lipopolissacardeos bacterianos. O TLR-4 tambm est envolvido na resposta imune de pelo menos um vrus, o vrus sincicial respiratrio; contudo, a natureza exata do ligante sinalizador nesse caso ainda no conhecida. Um outro receptor semelhante ao Toll de mamferos o TLR-2, que sinaliza a presena de diferentes grupos de constituintes bacterianos, os quais incluem o cido lipoteicoico (LTA) de bactrias Gram-positivas e lipoprotenas de bactrias Gram-negativas; no entanto, ainda no se sabe como ocorre o reconhecimento. Os TLRs reconhecem o patgeno e estimulam respostas celulares direcionadas para o tipo de patgeno reconhecido. Por exemplo, a estimulao do TLR-3 por dupla fita de RNA proveniente de vrus leva produo de citocinas antivirais e interferon, como discutido mais tarde com mais detalhes neste captulo. Os TLR-4 e TLR-2 induzem sinais similares, porm distintos. Os lipopolissacardeos so sinalizados atravs do TLR-4, e os LTA, atravs

TLR-5

TLR-7

ssRNA

TLR-8 TLR-9

Nucleotdeos ricos em G DNA CpG no-metilado

Figura 2.16 Reconhecimento imune inato pelos receptores semelhantes ao Toll. Cada um dos TLRs conhecidos reconhece um ou mais padres moleculares de microrganismos, geralmente pela interao direta com as molculas da superfcie dos patgenos. Contudo, alguns receptores semelhantes ao Toll de protenas formam heterodmeros (p. ex., TLR-1:TLR-2), isto no uma regra; TLR-4, por exemplo, pode formar apenas homeodmeros. GPI, glicosilfosfatidilinositol; T. cruzi, protozorio parasita Trypanosoma cruzi; dsRNA, RNA de dupla fita; ssRNA, RNA de fita simples.

Diacil Triacil lipopeptdeos lipopeptdeos TLR-6 TLR-2 TLR-1 TLR-2

Flagelina TLR-5

LPS TLR-4

MD-2

TLR-3

TLR-7

dsRNA

ssRNA

TLR-9

CpGDNA

Endossoma

Figura 2.17 Localizao celular dos receptores semelhantes ao Toll de mamferos. Alguns TLRs esto localizados na superfcie celular de clulas dendrticas e macrfagos, onde so capazes de detectar molculas extracelulares dos patgenos. Acredita-se que os TLRs atuam como dmeros; somente esses que atuam como heterodmeros so apresentados na forma dimrica aqui. Os outros atuam como homeodmeros. Os TLRs localiza-

dos intracelularmente, na parede do endossoma, podem reconhecer componentes microbianos, como DNA, que so acessveis somente depois que o micrbio tenha sido destrudo. Os diacil e triacil peptdeos reconhecidos pelos receptores heterodmeros TLR-6:TLR-2 e TLR-1:TLR-2 respectivamente, so derivados do cido lipoteicoico da parede celular de bactrias Gram-positivas e lipoprotenas da superfcie de bactrias Gram-negativas.

Imunobiologia de Janeway

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do TLR-2, resultando em respostas diferentes. Tanto os lipopolissacardeos como os LTA levam produo de TNF-; no entanto, os lipopolissacardeos so, tambm, capazes de induzir produo de interferon (IFN)-.

2-8 Os efeitos do lipopolissacardeo bacteriano nos macrfagos so mediados pela ligao do CD14 ao receptor TLR-4
O lipopolissacardeo (LPS) bacteriano um componente da parede celular de bactrias Gram-negativas, como a Salmonella, que h muito tempo conhecida como indutora de reaes no hospedeiro infectado. A injeo sistmica de LPS causa um colapso no sistema circulatrio e respiratrio, uma condio conhecida como choque. Esse dramtico efeito do LPS visto nos humanos como choque sptico, o qual causado pela expresso predominante de citocinas, particularmente o TNF-, como resultado de uma infeco bacteriana sistmica incontrolvel, ou septicemia. Discutiremos a patognese do choque sptico e veremos que essa uma consequncia indesejvel entre as aes efetoras do TNF- que so importantes para manter a infeco delimitada. O LPS atua atravs do TLR-4, e os benefcios da sinalizao do TLR-4 esto claramente ilustrados em camundongos mutantes que no possuem o TLR-4 funcionante. Mesmo resistentes ao choque sptico, esses camundongos so altamente sensveis a patgenos portadores de LPS, como a Salmonella typhimurium, um patgeno natural de camundongos. Os mesmos princpios so vistos em humanos infectados com Salmonella typhi, que causa febre tifoide. Essa bactria invade atravessando a membrana mucosa (Figura 2.18), porm pode ser reconhecida por macrfagos e outras clulas fagcitas da imunidade inata por expressar LPS e flagelina, as quais permitem a ativao de dois TLRs da superfcie celular TLR-4 e TLR-5 (ver Figura 2.16), os quais levam produo de TNF-. Dessa forma, a infeco sistmica por S. typhi capaz de causar choque sistmico em humanos pelos mesmos mecanismos que a S. typhimurium provoca em camundongo, pela induo da produo sistmica de TNF-. Contudo, a S. typhi, em comum com vrias bactrias patognicas, expressa o chamado sistema de secreo tipo III, um micro-homlogo de uma seringa, a qual habilita a bactria a secretar molculas diretamente atravs da membrana celular das clulas de mamferos para dentro do citosol. Usando esse sistema de secreo tipo III, a S. typhi capaz de transferir molculas proteolticas para dentro do citosol dos macrfagos, que inibem o caminho de sinalizao que leva produo de TNF-. Esse pode ser o mecanismo desenvolvido pela bactria para tornar a resposta imune inata menos efetiva. O TLR-4 sozinho no pode reconhecer o LPS. Duas outras protenas de superfcie celular, a CD14 e a MD-2, so necessrias. A CD14 liga-se ao LPS e acredita-se que o complexo CD14:LPS o efetivo ligante do TLR-4, embora esta ligao direta com o TLR-4 ainda deva ser demonstrada. Inicialmente, o MD-2 liga-se ao TLR-4 dentro da clula e necessrio para o direcionamento do TLR-4 para a superfcie e seu reconhecimento pelo LPS. Quando o complexo TLR-4:MD-2 interage com a LPS ligada ao CD14, este manda um sinal para o ncleo da clula que ativa o fator de transcrio NFB (Figura 2.19). Descreveremos o caminho de sinalizao usado pelos TLRs com mais detalhes no captulo 6. Esse caminho de sinalizao do NFB foi primeiramente descoberto como o caminho usado pelos receptores do Toll para determinar o padro dorsoventral do corpo durante a embriognese das moscas-das-frutas, e muitas vezes referenciado como caminho do Toll. Nas moscas adultas, o mesmo caminho leva formao de um peptdeo antimicrobiano em resposta a infeces. Essencialmente, o mesmo caminho de sinalizao usado por todos os TLRs em sua induo da resposta imune inata em vertebrados, e um caminho similar usado em plantas na defesa contra vrus e outros patgenos de plantas. Contudo, o caminho do Toll

Figura 2.18 Certos patgenos podem invadir o organismo diretamente pelo epitlio intestinal ou outro epitlio interno. Nesta fotografia, apresentado o caso da Salmonella typhi, que causa a febre tifoide, mostrando aqui o processo de migrao atravs do epitlio intestinal. As protenas dos flagelos so reconhecidas pelos receptores semelhantes ao Toll dos macrfagos e das clulas dendrticas no tecido subjacente. Isto provoca uma resposta imune inata que auxilia no controle da infeco. (Fotografia cortesia de J. Galan.)

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O LPS dos fluidos corporais ligado por uma protena de fase aguda, a protena ligadora de LPS (LBP)
LPS LBP

um caminho de sinalizao conservado que parece ser usado na imunidade inata da maioria, se no em todos, dos organismos multicelulares.

2-9 As protenas NOD atuam como sensores intracelulares de infeces bacterianas


Os TLRs esto localizados nas membranas celulares; tanto na superfcie celular como nas vesculas intracelulares. Outras protenas, que possuem traos semelhantes de seus ligantes aos domnios de ligao dos TLRs, esto presentes no citoplasma das clulas e so capazes de ligar-se a produtos microbianos e ativar o NFB, o qual inicia o mesmo processo inflamatrio como os TLRs (Figura 2.20). Essas protenas so denominadas NOD1 e NOD2, pois como os ligantes dos domnios de ligao, elas contm domnios de oligomerizao de ligao de nucleotdeos (NOD). Elas, tambm, apresentam domnios de protenas que recrutam caspases, uma famlia de proteases intracelulares; dessa forma, os genes que codificam as protenas NOD so referidos como membros da famlia dos genes CARD-NOD1, sendo codificados por CARD4 e NOD2 por CARD15. As protenas NOD reconhecem fragmentos de proteoglicanos da parede celular de bactrias. NOD1 liga-se ao cido diaminopimlico -glutamnico (iE-DAP), um produto da decomposio dos proteoglicanos das bactrias Gram-negativas e NOD2 liga-se ao dipeptdeo muramil, o qual est presente nos proteoglicanos das bactrias Gram-positivas e negativas. Alm disso, NOD2 capaz de atuar como um sensor geral de infeco bacteriana, e NOD1 mais limitado em perceber a presena de bactrias Gram-negativas. De acordo com esses papis, as protenas NOD so expressas em clulas que, rotineiramente, so expostas a bactrias, isto , em clulas epiteliais que formam uma barreira que as bactrias devem atravessar para estabelecer uma infeco no corpo, e em macrfagos e clulas dendrticas, que ingerem as bactrias que entraram no organismo. Como os macrfagos e as clulas dendrticas tambm expressam TLRs que podem reconhecer proteoglicanos bacterianos, nessas clulas os sinais do NOD1 e NOD2 atuam em conjunto com os sinais dos TLRs. Nas clulas epiteliais, contudo, a expresso dos TLRs pouca ou ausente, e nessas clulas, NOD1 um importante ativador da resposta imune inata. NOD2 parece ter um papel mais especializado, sendo fortemente expresso nas clulas de Paneth do intestino, onde induz a expresso de um potente peptdeo antimicrobiano, as -defensinas.

MD-2 CD14

Complexo TLR-4:MD-2

O complexo LPS:LBP transfere o LPS para o CD14 na superfcie dos macrfagos

Com o LPS ligado, o CD14 interage com o receptor semelhante ao Toll-4 (TLR-4) resultando na ativao do NFB nuclear

Figura 2.19 Os lipopolissacardeos bacterianos sinalizam por meio do receptor semelhante ao Toll TLR-4 para ativar o fator de transcrio NFB. No plasma, o LPS ligado protena ligadora de LPS solvel (LBP), a qual leva o LPS ligado para a protena perifrica de membrana glicosilfosfatidilinositol (GPI), amarrado protena de membrana perifrica CD14. Esse complexo LPS:CD14 ativa a sinalizao da protena de membrana TLR-4, a qual complexada protena MD-2, para o ncleo, ativando o fator de transcrio NFB, o qual, por sua vez, ativa os genes que codificam as protenas envolvidas na defesa contra a infeco.

2-10 A ativao dos receptores semelhantes ao Toll e protenas NOD disparam a produo de citocinas e quimiocinas pr-inflamatrias e a expresso de molculas coestimulatrias
Nos humanos e em todos os outros vertebrados investigados, a ativao do NFB pela via do Toll e NOD leva produo de vrios mediadores importantes da imunidade inata, como as citocinas (Figura 2.21) e as quimiocinas (ver Figura 2.46). (Os apndices III e IV apresentam uma lista de detalhes desses importantes mediadores.) A via tambm leva expresso na superfcie celular de molculas co-estimulatrias que so essenciais para a induo da resposta imune adaptativa. Essas protenas, chamadas B7.1 (CD80) e B7.2 (CD86), so produzidas pelos macrfagos e pelas clulas dendrticas em resposta sinalizao da LPS atravs do TLR-4 (Figura 2.22). Estas so aquelas protenas, juntas com os peptdeos bacterianos antignicos, apresentadas pelas protenas do MHC de classe II de clulas dendrticas e macrfagos (ver Seo 1-18), que ativam clulas T CD4 virgens (Figura 2.23). Essas clulas, por sua vez, necessitam iniciar a maior parte da resposta imune adaptativa. Para encontrar uma clula T CD4 virgem, a clula dendrtica apresentadora de antgeno deve migrar para um linfonodo prximo, por onde passam clulas T virgens circulantes, e essa migrao estimulada por citocinas como o TNF-, o qual tambm induzido

Imunobiologia de Janeway levando ativao do fator de transcrio NFB e sua translocao para dentro do ncleo para induzir a expresso de genes pr-inflamatrios. A degradao de proteoglicanos bacterianos produz o dipeptdeo muramil, o ligante dos sensores intracelulares dos componentes bacterianos, NOD2. Atravs da protena quinase adaptadora RICK (receptor-serina interatora-treonina quinase), NOD2 capaz de ativar NFB, o qual induz alguns genes pr-inflamatrios, como TLR-2.

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Figura 2.20 Ambos ligadores de membrana e protenas intracelulares atuam como sensores, reconhecendo proteoglicanos bacterianos e ativando NFB para induzir a expresso de genes pr-inflamatrios. Os TLRs da superfcie celular so capazes de ligar componentes microbianos no caso do TLR-2, esses so proteoglicanos da parede celular bacteriana. Ligando proteoglicanos bacterianos no TLR-2 sinalizado para a clula via a protena adaptadora MyD88,

Proteoglicanos bacterianos podem ser reconhecidos por TLRs na superfcie celular ou por protenas NOD no citosol. Ambos levam ativao do fator de transcrio NFB e expresso de genes pr-inflamatrios
TLR-2 Proteoglicanos NOD2 Dipeptdeo muramil

pela sinalizao do TLR-4. Assim, a ativao da imunidade adaptativa depende das molculas induzidas como consequncia do reconhecimento do patgeno pela imunidade inata. Substncias como os LPS, que induzem atividades coestimulatrias, tm sido usadas h anos em misturas que so injetadas com antgenos proteicos para aumentar sua imunogenicidade. Essas substncias so conhecidas como adjuvantes (ver Apndice I, Seo A-4) e empiricamente se constatou que os melhores adjuvantes contm componentes bacterianos. A variao dos componentes microbianos (ver Figura 2.16) pode induzir macrfagos e clulas dendrticas do tecido para expressar molculas coestimulatrias e citocinas. O perfil exato de citocinas produzidas pelos macrfagos e pelas clulas dendrticas varia de acordo com os receptores estimulados. Como veremos nos captulos 8 e 10, as citocinas secretadas vo influenciar nas caractersticas funcionais da resposta imune adaptativa que se desenvolver. Dessa forma, a habilidade do sistema imune inato de discriminar entre diferentes tipos de patgenos usada para garantir um tipo apropriado de resposta imune adaptativa.

MyD88 RICK NFB NFB

Resumo
O sistema imune inato usa vrios receptores diferentes para reconhecer e responder aos patgenos. Aqueles que reconhecem diretamente a superfcie do patgeno, frequentemente ligam-se em padres repetidos, por exemplo, os carboidratos

Citocinas secretadas pelos macrfagos e clulas dendrticas Citocina Principal produtor Macrfagos Queratincitos Alvo de ao Linfcitos Fgado Linfcitos Fgado Efeito Aumento da resposta Induz a secreo de protenas de fase aguda Aumento da resposta Induz a secreo de protenas de fase aguda

IL-1

IL-6

Macrfagos Clulas dendrticas

CXCL8 (IL-8)

Macrfagos Clulas dendrticas

Fagcitos

Quimioatraente para neutrfilos

IL-12

Macrfagos Clulas dendrticas

Clulas T virgens

Direciona a resposta imune para o tipo TH1, pr-inflamatria, secreo de citocinas Induz mudanas no endotlio vascular (expresso de molculas de adeso [selectinas E e P], mudanas nas junes clula-clula com aumento da perda de fluidos e coagulao sangunea local)

TNF-

Macrfagos Clulas dendrticas

Endotlio vascular

Figura 2.21 Citocinas importantes secretadas pelos macrfagos em resposta aos produtos bacterianos incluem IL-1, IL-6, CXCL8, IL-12 e TNF-. O TNF- um indutor da resposta inflamatria local que auxilia a conter a infeco. Ele tambm exerce efeitos sistmicos, muitos dos quais so prejudiciais (ver Seo 2-27). A quimiocina CXCL8 tambm est envolvida na resposta inflamatria local, auxiliando a atrair os neutrfilos para o local da infeco. IL-1, IL-6 e TNF- desempenham um papel crucial na induo da resposta de fase aguda no fgado (ver Seo 2-28) e induzem febre, o que favorece de vrias maneiras a defesa efetiva do hospedeiro. A IL-12 ativa as clulas NK da reposta imune inata e favorece a diferenciao das clulas T CD4 na subpopulao TH1 durante a resposta imune adaptativa.

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Clula de Langerhans Bactria

CD14

TLR-4

Figura 2.22 O LPS bacteriano induz mudanas nas clulas de Langerhans, estimulando-as a migrar e a iniciar a imunidade adaptativa contra a infeco pela ativao das clulas T CD4. As clulas de Langerhans so clulas dendrticas imaturas localizadas na pele. No caso de uma infeco bacteriana, elas so ativadas pelos LPS atravs da via de sinalizao dos TLR. Isso induz dois tipos de mudanas nas clulas de Langerhans. A primeira a mudana no comportamento e na localizao. Elas tornam-se clulas migradoras ativadas nos vasos linfticos aferentes e eventualmente maturam em clulas dendrticas nos

nodos linfticos regionais. A segunda mudana a drstica alterao nas suas molculas de superfcie. As clulas de Langerhans em repouso, da epiderme, so altamente fagocticas e macropinocticas, mas no possuem a capacidade de ativar linfcitos T. As clulas dendrticas maduras dos linfonodos perdem a capacidade de capturar antgeno, mas tornam-se capazes de estimular clulas T, aumentando os nveis da expresso de molculas MHC e da expresso de molculas coestimuladoras apropriadas CD80 (B7.1) e CD86 (B7.2).

CD80

CD86

Molcula do MHC

e os lipdeos, caractersticos da superfcie microbiana, mas no so encontrados nas clulas hospedeiras. Alguns desses receptores, como os receptores de manose de macrfago, estimulam diretamente a fagocitose, ao passo que outros so produzidos como molculas secretoras que promovem a fagocitose do patgeno por opsonizao ou por ativao do complemento, que veremos na prxima parte deste captulo. Os receptores do sistema imune inato que reconhecem patgenos tm, tambm, um importante papel na sinalizao das respostas inatas induzidas que so responsveis pela inflamao local, o recrutamento de novas clulas efetoras, a conteno da infeco no local e o incio da resposta imune adaptativa. Alguns sinais podem ser transmitidos atravs da famlia de receptores de sinalizao, conhecida como receptores semelhantes ao Toll (TLRs), que tem sido altamente conservado evolutivamente atravs do tempo e serve para ativar a defesa do hospedeiro atravs de vias de sinalizao que funcionam na maioria dos organismos multicelulares. Nos vertebrados, os TLRs tambm tm um papel-chave em permitir o incio da imunidade adaptativa. O TLR-4 detecta a presena das bactrias Gram-negativas atravs de sua associao com a protena de membrana perifrica CD14, a qual um receptor de LPS bacteriana. Outros TLRs respondem a outras molculas padres encontradas fora ou dentro dos patgenos. Os TLRs ativam a transcrio do fator NFB, o qual induz a transcrio de uma variedade de genes, incluindo os das citocinas, quimiocinas e molculas coestimulatrias, que tm um papel essencial em direcionar mais tarde o curso da resposta imune adaptativa durante a infeco. Enquanto os TLRs reconhecem a presena de bactrias e outros micrbios fora da clula, protenas citoplasmticas, as protenas NOD, detectam produtos bacterianos similares dentro do citoplasma da clula, ativando a mesma via do NFB.

A ativao das clulas T requer antgeno e sinais coestimuladores Sem antgeno


APC

Sem coestimulao
Anticorpo estranho

Com antgeno e coestimulao


Patgeno

Figura 2.23 Para que as clulas T virgens sejam ativadas pelo antgeno, este deve ser apresentado por uma clula apresentadora de antgeno que tambm expresse as molculas coestimuladoras. O antgeno reconhecido pelo receptor de clula T na forma de um peptdeo ligado a uma molcula do MHC em uma clula apresentadora de antgeno (APC), tais como macrfagos ou clulas dendrticas. Entretanto, a clula T somente ser ativada se a clula apresentadora de antgeno tambm expressar as molculas coestimuladoras CD80 ou CD86.

Receptor de clula T

CD80 CD28 CD4

MHC de classe II Receptor de clula T

CD4

CD80 ou CD86 CD28 CD28

Clula T virgem

Clula T virgem

Clula T virgem

Sem peptdeo antignico Sem resposta

Sem ativao A clula T torna-se irresponsiva

Ativao da clula T

Imunobiologia de Janeway

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O sistema do complemento e a imunidade inata


O complemento foi descoberto por Jules Bordet h muitos anos, como um componente termolbil do plasma normal que aumenta a opsonizao e morte de bactrias pelos anticorpos. Foi dito que essa atividade complementa a atividade antibacteriana dos anticorpos; por isso, o nome. Contudo, descoberto primeiramente como uma arma efetora da resposta dos anticorpos, o complemento pode, tambm, ser ativado precocemente nas infeces ainda na ausncia dos anticorpos. De fato, agora parece claro que o complemento primeiramente evoluiu como parte do sistema imune inato, onde continua tendo um importante papel de revestir os patgenos, facilitando sua destruio.

2-11 O complemento um sistema de protenas do plasma que ativado pela presena do patgeno
O sistema do complemento formado por um grande nmero de diferentes protenas do plasma que interagem umas com as outras para opsonizao do patgeno e para induzir uma srie de respostas inflamatrias que ajudam no combate da infeco. Uma caracterstica do sistema que vrias protenas do complemento so proteases que se tornam ativadas somente aps a quebra, geralmente, por outra protease especfica. Na sua forma inativa, algumas enzimas so chamadas de pr-enzimas ou zimgenos e foram encontradas primeiramente no intestino. A enzima digestiva pepsina, por exemplo, estocada dentro da clula e secretada como um precursor inativo, pepsinognio, o qual apenas quebrado em pepsina no ambiente cido do estmago. A vantagem para o hospedeiro de no ser autodigerido bvia. No sistema do complemento, os precursores zimgenos esto amplamente distribudos atravs dos fluidos corporais e dos tecidos. Nos locais de infeco, eles so ativados e induzem uma srie de potentes eventos inflamatrios. O sistema do complemento ativado por meio de uma cascata enzimtica. Nessa cascata, uma enzima ativa do complemento, gerada pela clivagem do seu precursor zimgeno, cliva seu substrato, outro zimgeno do complemento, em sua forma enzimaticamente ativa. Esse, por sua vez, cliva e ativa o prximo zimgeno da via do complemento. Dessa forma, a ativao de um pequeno nmero de protenas do complemento no incio da via imensamente amplificada por cada reao enzimtica sucessiva, resultando na rpida gerao de uma grande reposta desproporcional do complemento. Como esperado, h muitos mecanismos reguladores para impedir a ativao descontrolada do complemento. O sistema de coagulao do complemento um outro exemplo de uma cascata enzimtica induzida. Nesse caso, um pequeno dano na parede dos vasos sanguneos pode levar ao desenvolvimento de um grande trombo. O local chave para a ativao da via do complemento a superfcie do patgeno e existem trs vias distintas de ativao do complemento (Figura 2.24). Essas vias dependem de diferentes molculas para seu incio, porm convergem para a gerao do mesmo grupo de protenas efetoras do complemento. Existem, tambm, trs maneiras pelas quais o sistema do complemento protege contra a infeco (ver Figura 2.24). Na primeira, gera um grande nmero de protenas do complemento ativadas que se ligam covalentemente ao patgeno, opsonizando-o para ser englobado pelos fagcitos portadores de receptores do complemento. Na segunda, pequenos fragmentos de protenas do complemento atuam como quimioatraentes para recrutar mais fagcitos para o local da ativao do complemento e tambm para ativar os fagcitos. Na terceira, os componentes finais da via do complemento causam leses em certas bactrias pela criao de poros na membrana bacteriana.

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Figura 2.24 Diagrama esquemtico da cascata do complemento. Existem trs vias de ativao do complemento. Uma a via clssica, que ativada pela ligao do componente do complemento C1q com os anticorpos complexado ao antgeno pela ligao direta do C1q superfcie do patgeno ou da ligao do C1q a protena C reativa ligada ao patgeno. A segunda a via da MB-lectina, ativada pela lectina ligadora de manose (MBL) ou por protenas ficolinas, um constituinte normal do soro que se liga a algumas bactrias encapsuladas. A terceira a via alternativa, ativada diretamente sobre as superfcies dos patgenos. Todas elas produzem uma atividade enzimtica crucial que, por sua vez, gera as molculas efetoras do complemento. As trs consequncias principais da ativao do complemento so a opsonizao dos patgenos, o recrutamento de clulas inflamatrias e a morte direta dos patgenos.

VIA CLSSICA Complementos antgeno:anticorpo

VIA DA LECTINA Ligao da lectina a superfcies de patgenos

VIA ALTERNATIVA

Superfcies de patgenos

Ativao do complemento

Recrutamento das clulas inflamatrias e imunocompetentes

Opsonizao dos patgenos

Morte dos patgenos

Alm do efeito direto de eliminar o microrganismo infeccioso do complemento, ele tambm tem um importante papel na ativao do sistema imune adaptativo. Em parte, isso uma consequncia da opsonizao, que apresenta antgenos celulares aos receptores do complemento que aumentam a captao de antgenos encapados pelo complemento e a apresentao desses antgenos para o sistema imune adaptativo. Alm disso, como veremos no captulo 9, os receptores dos linfcitos B para protenas do complemento que atuam como coestimuladores aumentam a resposta das clulas B para antgenos cobertos pelo complemento. O complemento no ativado somente por organismos infecciosos. Clulas mortas, como essas dos locais lesados pela isquemia (leso no tecido causada pela falta de oxignio), podem disparar a ativao do complemento. Como as partculas cobertas pelo complemento so mais eficientemente fagocitadas pelos fagcitos, o complemento importante no eficiente descarte de clulas mortas, lesadas ou apoptticas e em fazer proteo contra o desenvolvimento da autoimunidade, ataque aos antgenos prprios do corpo pelo sistema imune.

2-12 O complemento interage com patgenos, marcando-os para a destruio pelos fagcitos
Na fase precoce da infeco, a cascata do complemento pode ser ativada na superfcie do patgeno a partir de uma ou mais das trs vias mostradas na Figura 2.25. A via clssica identificada pela ligao de C1q, a primeira protena da cascata do complemento, na superfcie do patgeno. C1q pode ligar a superfcie do patgeno em uma das trs vias. Pode ligar diretamente nos componentes da superfcie de algumas bactrias, incluindo certas protenas da parede celular das bactrias e estruturas com superfcie polianinicas, como o cido lipoteicoico de bactrias Gram-positivas. Segundo, a C1q se liga protena C reativa, a protena de fase aguda do plasma humano que se liga aos resduos de fosfocolina dos polissacardeos bacterianos, como o polissacardeo C do pneumococo, da o nome de protena C reativa. Discutiremos as protenas de fase aguda da induo precoce da resposta imune mais tarde neste captulo. Terceiro, C1q a ligao chave entre o mecanismo efetor da imunidade inata e adaptativa pela ligao aos complexos antgeno:anticorpo. A via da lectina iniciada pela ligao de protenas ligadoras de carboidratos ao arranjo de carboidratos da superfcie dos patgenos. Essa protena ligadora de carboidratos inclui a lectina MBL, a qual se liga a carboidratos que contm manose de vrus e bactrias, como descrito na seo 2.6, e as ficolinas, os quais se ligam ao N-acetilglicosamina presente na superfcie de alguns patgenos. Finalmente, a via alternativa de ativao do complemento pode ser iniciada pela ligao espontnea de componente do complemento C3 ativado do plasma superfcie de um patgeno.

Imunobiologia de Janeway

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VIA CLSSICA Complexos antgeno:anticorpo (superfcies do patgeno)

VIA DA LECTINA Lectina ligadora de manose liga-se manose na superfcie do patgeno MBL ficolina, MASP-2 C4 C2

VIA ALTERNATIVA Superfcie do patgeno

C1q, C1r, C1s C4 C2

C3 B D

Convertase de C3

C3a, C5a

C3b

Componentes terminais do complemento C5b C6 C7 C8 C9

Figura 2.25 Resumo dos principais componentes e aes efetoras do complemento. Os eventos iniciais de todas as trs vias de ativao do complemento envolvem uma srie de reaes de clivagem, culminando na formao de uma atividade enzimtica denominada C3 convertase, que cliva o componente do complemento C3 em C3b e C3a. A produo da atividade da C3 convertase o ponto em que as trs vias convergem, e as funes efetoras do complemento so produzidas. O C3b liga-se covalentemente membrana e opsoniza a bactria, permitindo a internalizao pelos fagcitos. O C3a um peptdeo mediador da inflamao local. O C5a e o C5b so produzidos pela clivagem de C5b pela convertase C5 formada pela ligao do C3b convertase C3 (no mostrado). O C5a tambm um poderoso peptdeo mediador da inflamao. O C5b ativa os eventos tardios em que os componentes terminais do complemento se renem em um complexo de ataque membrana que pode danificar a membrana de certos patgenos.

Mediadores peptdeos da inflamao, recrutamento de fagcitos

Liga-se a receptores do complemento nos fagcitos

Complexo de ataque membrana, lise de certos patgenos e clulas

Opsonizao dos patgenos Remoo dos complexos imunes

Em cada via, a sequncia da reao gera uma protease chamada C3 convertase. Essa reao conhecida como evento precoce da ativao do complemento e consiste em uma cascata de ativao enzimtica nos quais os zimgenos inativos do complemento so sucessivamente clivados para produzir dois fragmentos, o maior deles uma serina-protease ativa. A protease ativa retida na superfcie do patgeno e assegura que o prximo zimgeno do complemento da via tambm seja clivado e ativado na superfcie do patgeno. Em contraste, o fragmento peptdeo menor liberado do stio da reao e pode atuar como mediador solvel da reao. As convertases de C3 formadas por esse evento precoce de ativao do complemento so ligadas covalentemente na superfcie do patgeno. Ali elas clivam a C3 para gerar grande quantidade de C3b, a principal molcula efetora do sistema do complemento, e C3a, um peptdeo mediador da inflamao. A molcula de C3b atua como opsonina; ligando-se covalentemente ao patgeno e, por meio disso, marcando-o para a destruio por fagcitos equipados com receptores para C3b. C3b tambm se liga convertase de C3 para formar a convertase C5, que produz o mais importante e mais potente peptdeo inflamatrio, C5a, bem como um grande fragmento ativo, C5b, que inicia os eventos tardios da ativao do complemento. Esses compreendem uma sequncia de reaes de polimerizao na qual um grupo de protenas do complemento conhecidas como componentes terminais de interao para formar o complexo de ataque membrana, o qual cria poros na membrana celular de certos patgenos que pode levar sua morte. A nomenclatura das protenas do complemento frequentemente um obstculo para o entendimento do sistema. Antes de discutir a cascata do complemento com mais detalhe, explicaremos os seus nomes. Todos os componentes da via clssica do complemento e do complexo de ataque membrana so designados com a le-

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Classes funcionais de protenas no sistema do complemento Ligao ao complexo antgeno:anticorpo e superfcie do patgeno Ligao manose nas bactrias C1q

MBL

Enzimas ativadoras

C1r C1s C2a Bb D MASP-2 C4b C3b C5a C3a C4a C5b C6 C7 C8 C9 CR1 CR2 CR3 CR4 C1qR C1INH C4bp CR1 MCP DAF H I P CD59

Protenas ligantes de membrana e opsoninas

tra C, seguidos de um nmero. Os componentes nativos tm uma designao numrica simples, por exemplo, C1 e C2, porm infelizmente os componentes foram numerados de acordo com a ordem de sua descoberta em vez de na sequncia da reao. A sequncia da reao C1, C4, C2, C3, C5, C6, C7, C8 e C9. Os produtos da reao de clivagem so designados por letras minsculas adicionais, os fragmentos maiores so designados b, e os, menores, a; como, por exemplo, C4 clivado em C4b, o maior fragmento de C4 que se liga covalentemente superfcie do patgeno, e C4a, o menor fragmento com fraca propriedade pr-inflamatria. Existe uma exceo para essa regra de nomenclatura. Para C2, o maior fragmento foi originalmente nomeado C2a, e esse maior componente C2a que contm a atividade enzimtica. Os componentes da via alternativa do complemento, em vez de serem numerados, so designados por diferentes letras maisculas, por exemplo, fator B e fator D. Assim como na via clssica, seu produtos clivados so designados pela adio das letras minsculas a e b; assim, o fragmento maior de B chamado de Bb, e o menor fragmento, de Ba. Finalmente, na via da lectina, a primeira enzima a ser ativada conhecida como serina-protease de unio manose associada a lectinas, MASP-1 e MASP-2, aps as quais a via essencialmente a mesma da via clssica. Os componentes do complemento ativados so frequentemente designados por uma linha horizontal, por exemplo, C2a; contudo, no usaremos essa conveno. A formao da atividade de convertase de C3 fundamental para a ativao do complemento, levando produo da principal molcula efetora, e iniciando os ltimos eventos. Nas vias clssicas e da lectina, a convertase de C3 formada a partir de C4b ligado membrana e complexado com C2a, designado C4b2a. Na via alternativa, uma convertase de C3 homloga formada da C3b ligada membrana complexada com Bb, C3bBb. A via alternativa pode atuar como uma ala de amplificao de todas essas vias, por que ela iniciada pela ligao de C3b. Est claro que a via leva a uma potente inflamao e a efeitos destrutivos e que tem uma srie de passos de amplificao potencialmente perigosa e deve ser, portanto, fortemente regulada. Uma importante proteo que a chave de ativao dos componentes do complemento so rapidamente inativados, a menos que se unam superfcie do patgeno em que a sua ativao foi iniciada. Existem, tambm, vrios pontos na via nos quais protenas reguladoras atuam nos componentes do complemento prevenindo a ativao inadvertida do complemento na superfcie das clulas do hospedeiro, protegendo-o de um dano acidental. Retornaremos a esses mecanismos de regulao posteriormente. Introduzimos todos os componentes relevantes do complemento e estamos prontos para uma explicao mais detalhada de suas funes. Para auxiliar na distino dos diferentes componentes de acordo com sua funo, utilizaremos um cdigo de cores nesta parte do captulo, introduzido na Figura 2.26, na qual todos os componentes do complemento esto agrupados pela sua funo.

Mediadores peptdeos da inflamao

Protenas de ataque membrana

Receptores do complemento

Protenas reguladoras do complemento

Figura 2.26 Classes funcionais de protenas no sistema do complemento.

2-13 A via clssica iniciada pela ativao do complexo C1


A via clssica tem um papel, tanto na imunidade inata como na adaptativa. Como veremos no captulo 9, o primeiro componente dessa via, C1q, faz uma conexo entre a resposta imune humoral e o sistema do complemento por formar um complexo de anticorpos com o antgeno. Contudo, a via clssica pode ser tambm ativada durante a resposta imune inata. Os anticorpos chamados anticorpos naturais so produzidos pelo sistema imune na aparente ausncia de qualquer infeco. Eles tm uma vasta especificidade por antgenos prprios e microbianos, podem reagir com vrios patgenos e, como na imunidade adaptativa, podem ativar o complemento atravs da ligao de C1q. Descreveremos os anticorpos naturais e a especificidade desse subgrupo de linfcitos, que os produzem, com mais detalhe na Seo 2.34. importante lembrar que a maioria dos anticorpos

Imunobiologia de Janeway

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Figura 2.27 A primeira protena na via clssica de ativao do complemento C1, que um complexo de C1q, C1r e C1s. C1q composta de seis subunidades idnticas com cabeas globulares e longas caudas semelhantes ao colgeno e tem sido descrita como um buqu de tulipas. As caudas se ligam em duas molculas, cada uma no C1r e C1s, para formar

o complexo C1 C1q:C1r2:C1s2. As cabeas ligam-se regio constante das molculas de imunoglobulina ou diretamente na superfcie do patgeno, causando mudanas conformacionais em C1r, o qual cliva e ativa o zimgeno C1s. (Fotografia [x 500.000] cortesia de K. B. M. Reid.)

C1q

C1s C1r

naturais so produzidos da classe conhecida como IgM, e que essa classe a mais eficiente para a ligao do C1q; dessa forma, os anticorpos naturais proporcionam um recurso necessrio para a ativao do complemento ser direcionada superfcie do patgeno imediatamente no incio da infeco. A funo adicional de C1q na imunidade inata poder ligar-se diretamente na superfcie de certos patgenos e ento disparar a ativao do complemento na ausncia de anticorpos. Ele pode, por exemplo, ligar-se protena C reativa amarrada s fosfocolinas das bactrias. Contudo, a ativao de C1 pelos anticorpos naturais e diretamente na superfcie do patgeno representa uma importante arma humoral da imunidade inata. C1q faz parte do complexo C1, o qual compreende uma molcula de C1q ligada a cada duas de zimgenos C1r e C1s. C1q, por si s, um hexmero, em que cada subunidade um trmero, formando um domnio globular com uma cauda tripla helicoidal semelhante ao colgeno. No hexmero de C1q, as seis cabeas globulares so ligadas juntas com a calda semelhante ao colgeno, a qual circunda o complexo (C1r:C1s)2 (Figura 2.27). A ligao de mais de uma cabea de C1q superfcie do patgeno ou na regio constante dos anticorpos, conhecida como regio Fc, no complexo imune de antgeno e anticorpo, causa mudanas conformacionais no complexo (C1r:C1s)2, o qual leva ativao da enzima com atividade autocataltica C1r. A forma ativa de C1r ento cliva essa associao a C1s, gerando uma serina protease ativa. Uma vez ativada, a enzima C1s atua com os prximos dois componentes da via clssica, clivando C4 e ento C2 para gerar dois grandes fragmentos C4b e C2a, os quais juntos formam a convertase de C3 da via clssica. No primeiro passo, C1s cliva C4 para produzir C4b, o qual pode ligar covalentemente superfcie do patgeno. A molcula de C4b unida covalentemente liga uma molcula de C2, tornando-a suscetvel clivagem pelo C1s. O C1s cliva C2 para produzir o fragmento grande C2a, o qual , por sua vez, uma protease de serina. C4b2a, o complexo de C4b com a protease ativa de serina C2a, permanece ligado covalentemente superfcie do patgeno como a convertase de C3 da via clssica. Sua mais importante atividade a quebra de um grande nmero de molculas de C3 para produzir molculas de C3b que cobrem a superfcie do patgeno. Ao mesmo tempo, outro produto de clivagem, o C3a, inicia uma resposta inflamatria local. Essa reao, a qual compreende a ativao da via clssica do complemento, apresentada de forma esquemtica na Figura 2.28; protenas envolvidas e suas formas ativas so listadas na Figura 2.29.

2-14 A via da lectina homologa via clssica


A via da lectina usa protenas muito similares a C1q para ativar a cascata do complemento. Uma dessas protenas uma lectina ligadora de manose (MBL), introduzida anteriormente. Ligando-se especificamente aos resduos de manose e a certos aucares que esto presentes na superfcie de muitos patgenos em padres que permitem sua ligao, como mostrado na Figura 2.15. Nas clulas de vertebrados, contudo, a manose convertida por outro grupo de acares, especialmente pelo cido silico. Contudo, a MBL capaz de iniciar a ativao do complemento por ligar-se superfcie do patgeno, ao passo que no se torna ativada

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

O C1s ativado cliva C4 em C4a e C4b, que se liga superfcie microbiana

O C4b, ento, liga-se a C2, que clivado pelo C1s, tornando-se C2a e C2b e formando o complexo C4b2a

C4b2a uma C3 convertase ativa, a qual cliva C3 em C3a e C3b, que se liga superfcie microbiana ou prpria convertase

Uma molcula de C4b2b pode clivar at 1.000 molculas de C3 a C3b. Muitos C3b ligam-se superfcie microbiana

C4 C4a C2 C2b C1s C3 C3a C3 C3a

C4b2a3b C3b C4b C4b2a C4a2a C3b

Figura 2.28 A via clssica de ativao do complemento gera uma C3 convertase que deposita um grande nmero de molculas de C3b na superfcie do patgeno. As etapas na reao so resumidas aqui e detalhadas no texto. A clivagem de C4 por C1s expe um grupo reativo em C4b que se liga covalentemente superfcie do patgeno. C4b, ento, liga-se a C2, tornando-o suscetvel clivagem por C1s. O fragmento maior, C2a, a protease ativa da C3 convertase, que cliva muitas molculas de C3 para produzir C3b, que se liga superfcie do patgeno, e C3a, um mediador inflamatrio.

nas clulas do hospedeiro. Esto presentes em baixa concentrao no plasma da maioria dos indivduos e, como veremos na ltima parte deste captulo, sua produo no fgado aumentada durante a induo das reaes de fase aguda como parte da resposta imune inata. A lectina ligadora de manose, como C1q, uma molcula formada por duas a seis cabeas que formam um complexo com duas proteases zimognicas, que, no caso do complexo MBL, so proteases de serina MASP-1 e MASP-2 (Figura 2.30). A MASP-2 similar a C1r e C1s, e a MASP-1 tem menor homologia. Todas as quatro enzimas parecem ter evoludo por duplicao gnica de um precursor em comum. Quando o complexo MBL liga-se superfcie do patgeno, a MASP-2 ativada para clivar o C4 e o C2. O papel da MASP-1 na ativao do complemento ainda no est bem determinado; in vitro est apta a clivar C2 eficientemente como a MASP-2 e, ento, este papel pode aumentar a ativao do complemento mesmo se for incapaz para inici-la. Portanto, a via da MB-lectina inicia a ativao do complemento de forma similar via clssica, formando a convertase C3 a partir de C2a unida a C4b. As pessoas deficientes em MBL tm maior suscetibilidade a infeces na infncia, o que mostra a importncia da via da MB-lectina na defesa do hospedeiro. O perodo de suscetibilidade a infeces associadas deficincia de MBL ilustra a importncia dos mecanismos de defesa inata do hospedeiro na infncia, j que compreende a fase na qual a resposta imune adaptativa da criana ainda no est totalmente madura, posteriormente perda dos anticorpos maternos transferidos atravs da placenta e do colostro. Relacionadas especialmente com a forma e a funo MBL e C1q so as ficolinas, as quais tambm se ligam a carboidratos da superfcie do patgeno, os quais, como as colecitinas, ativam o complemento atravs da ligao e ativao do MASP-1 e MASP-2 (ver Figura 2.30). Nos humanos existem trs ficolinas: L-, M- e H-ficolina. As ficolinas diferem das colectinas porque, no lugar de um domnio de lectina ligado a haste semelhante ao colgeno, eles tm um domnio semelhante ao fibrinognio. Esse domnio semelhante ao fibrinognio liga carboidratos e concede s ficolinas sua especificidade por oligossacardeos que contm N-acetilglicosamina. Ao discutir a ativao do complemento por essas molculas inunes de ativao, usamos MBL como nosso prottipo, porm as ficolinas podem ser mais importantes na prtica j que sua concentrao no plasma maior que a da MBL.

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Protenas da via clssica de ativao do complemento


Componente nativo Forma ativa C1q C1 (C1q: C1r2:C1s2) Funo da forma ativa Liga-se diretamente superfcie do patgeno ou indiretamente ao anticorpo ligado ao patgeno, permitindo assim a autoativao de C1r Cliva C1s para uma protease ativa Cliva C4 e C2 Liga-se covalentemente ao patgeno e o opsoniza. Liga-se a C2 para clivagem por C1s Mediador peptdeo da inflamao (atividade fraca)

Figura 2.29 As protenas da via clssica de ativao do complemento.

C1r C1s

C4b

C4
C4a

C2a

Enzima ativa da via clssica, C3/C5 convertase: cliva C3 e C5 Precursor da quinina vasoativa C2 Muitas molculas ligam-se superfcie do patgeno e atuam como opsoninas. Inicia a amplificao pela via alternativa. Liga-se a C5 para clivagem por C2a Mediador peptdeo da inflamao (atividade intermediria)

Lectina ligadora de manose

C2
C2b
MASP-1 MASP-2 MASP-1 MASP-2

C3b

C3
C3a

2-15 A ativao do complemento est basicamente confinada superfcie na qual iniciada


Vimos que as vias de ativao do complemento clssicas e da MBL so iniciadas por protenas que se ligam superfcie dos patgenos. Durante a cascata de enzimas induzidas que se segue, importante que os eventos de ativao estejam confinados ao mesmo local, de forma que a ativao do C3 tambm ocorra na superfcie do patgeno, e no no plasma ou nas superfcies das clulas do hospedeiro. Isso obtido principalmente pela ligao covalente de C4b superfcie do patgeno. A clivagem de C4 expe uma ligao tioster altamente reativa na molcula de C4b, que permite que ela se ligue covalentemente a molculas nas vizinhanas de seu stio de ativao. Na imunidade inata, a clivagem de C4 catalisada por C1 ou pelo complexo MBL ligado superfcie do patgeno, e C4b pode ligar protenas adjacentes ou carboidratos na superfcie do patgeno. Se C4b no
Lectina ligadora de manose

Ficolinas

Figura 2.30 Ativando-se molculas inatas do complemento, forma-se um complexo com uma serina protease que se assemelha ao complexo C1 do complemento. A lectina ligadora de manose (MBL) (no topo do painel) forma grupamentos de duas a seis cabeas ligadoras de carboidratos ao redor de uma haste semelhante ao colgeno no monmero da MBL. Essa estrutura facilmente visvel ao microscpio eletrnico (quadro do meio) semelhante ao C1q. Duas serina proteases esto associadas a esse complexo, as serina proteases associadas a MBL 1 (MASP-1) e 2 (MASP-2). A disposio estrutural das protenas MASP neste complexo ainda no foi determinada,

porm interage com a MBL da mesma forma que C1r e C1s interagem com C1q. Quando a MBL se liga superfcie bacteriana, as serina proteases tornam-se ativadas e podem, ento, ativar o sistema do complemento pela clivagem e pela ativao de C4 e C2. As ficolinas (painel inferior) se assemelham s MBL em sua estrutura numa forma geral, so associadas s MASP-1 e MASP-2 e podem ativar C4 e C2 aps ligarem-se a molculas de carboidratos presentes na superfcie microbiana. O domnio de ligao aos carboidratos das ficolinas um domnio semelhante ao fibrinognio, no lugar no domnio de lectina presente na MBL. (Fotografia cortesia de K.B.M. Reid.)

MASP-1 MASP-2

MASP-1 MASP-2

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

formar essa ligao rapidamente, a ligao tioster clivada pela reao com gua, iniciando uma reao de hidrlise que inativa irreversivelmente o C4b (Figura 2.31). Isso ajuda a evitar a difuso de C4b do local de ativao na superfcie microbiana, tornando-se acoplado a clulas do hospedeiro. O C2 torna-se suscetvel clivagem por C1s somente quando ligado ao C4b, e assim a serina protease C2a tambm est confinada superfcie do patgeno, onde permanece associada a C4b, formando a convertase de C3, C4b2b. Portanto, a ativao das molculas C3 tambm ocorre na superfcie do patgeno. Alm disso, o produto de clivagem do C3b rapidamente inativado, a no ser que se ligue

C4

Clivagem por C1s


C1s C4a C4b

O grupo reativo tioster de C4b


Gly Glu

Figura 2.31 A clivagem de C4 expe uma ligao tioster ativa, que faz o fragmento grande C4b ligar-se covalentemente s molculas vizinhas na superfcie da clula bacteriana. O C4 intacto consiste em uma cadeia , uma e uma com uma ligao tioster protegida na cadeia , que exposta quando a cadeia clivada por C1s para produzir C4b. A ligao tioster (mostrada com uma seta no terceiro quadro) rapidamente hidrolisada (isto , clivada pela gua), inativando o C4b, a menos que ele reaja com grupos hidroxila ou amino para formar uma ligao covalente com as molculas na superfcie do patgeno. A protena homloga C3 possui uma ligao tioster reativa idntica, que tambm exposta no fragmento C3b quando C3 clivado por C2a. A ligao covalente de C3b e C4b permite que essas molculas ajam como opsoninas, e importante para restringir a ativao do complemento superfcie do patgeno.

Cys

Gln

+ H2O

+ R OH (protena, carboidrato)

C4b inativo

C4b ligado superfcie celular


R superfcie celular

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covalentemente pelo mesmo mecanismo de C4b e, portanto, somente opsoniza a superfcie na qual ocorreu a ativao do complemento. A opsonizao do patgeno pelo C3b mais eficiente quando anticorpos so ligados na superfcie do patgeno, ainda que fagcitos tenham receptores tanto para o complemento como para os anticorpos; isso ser descrito no Captulo 9. C3b e C4b, devido a sua forma reativa, so capazes de formar ligaes covalentes com algumas protenas ou carboidratos adjacentes, quando o complemento ativado por ligao ao anticorpo uma proporo de C3b e C4b reativos vai ligar-se as molculas de anticorpos por si prprios. Essa combinao de ligaes qumicas cruzadas do anticorpo ao complemento , provavelmente, o mais eficiente ativador da fagocitose.

2-16 A hidrlise de C3 d incio via alternativa do complemento


A terceira via de ativao do complemento chamada de via alternativa porque foi descoberta como uma segunda via, ou alternativa , para a ativao do complemento aps a via clssica ter sido definida. Essa via ocorre em vrias superfcies de patgenos na ausncia de anticorpo especfico e leva gerao de uma convertase C3 diferente, designada C3bBb. Ao contrrio da via clssica e da via da MB-lectina de ativao do complemento, a via alternativa no depende de uma protena que se ligue ao patgeno para seu incio. Ao invs disso, ela iniciada por meio da hidrlise espontnea do C3, como mostrado no topo dos trs painis da Figura 2.32. Os componentes distintos da via esto descritos na Figura 2.33. Inmeros mecanismos asseguram que a ativao da via ocorre somente na superfcie do patgeno ou nas clulas lesadas do hospedeiro, e no em clulas e tecidos normais do hospedeiro. O C3 abundante no plasma, e o C3b produzido a uma taxa significativa pela clivagem espontnea (tambm conhecido como rotineiro). Isso ocorre atravs da hidrlise espontnea da ponte tioster no C3 para formar C3(H20), que tem uma conformao alterada, permitindo sua ligao protena plasmtica fator B. A unio de B pelo C3(H20) permite que uma protease plasmtica, denominada fator D, clive o fator B em Ba e Bb, de modo que o ltimo fragmento permanea associado ao C3(H20), formando o complexo C3(H20)Bb. Esse complexo uma convertase C3 em fase fluida, e, embora seja formado em pequenas quantidades, ele pode clivar muitas molculas de C3 em C3a e C3b. A maioria das molculas de C3b inativada por hidrlise, porm algumas se unem covalentemente, por meio de grupo reativo tioster, s superfcies dos patgenos ou das clulas do hospedeiro. C3b unido dessa forma capaz de ligar o fator B, permitindo sua clivagem pelo fator D e dando origem ao pequeno fragmento Ba e protease ativa Bb. Isso resulta na formao da convertase C3 da via alternativa, C3bBb (ver Figura 2.34).

2-17 Membranas e protenas plasmticas que regulam a formao e a estabilidade da convertase de C3 determinam o prolongamento da ativao do complemento de acordo com circunstncias diferentes
A ativao prolongada do complemento criticamente dependente da estabilidade da convertase de C3bBb. Essa estabilidade controlada por protenas que regulam positiva e negativamente. Clulas normais do hospedeiro so protegidas da ativao do complemento por vrias protenas reguladoras negativas, presentes no plasma e na membrana das clulas hospedeiras, que protegem clulas normais do hospedeiro de efeitos danosos de uma ativao inapropriada do complemento. Essas protenas interagem com C3b e/ou impedem a formao da convertase ou promovem sua rpida dissociao. Portanto, a protena de ataque membrana, conhecida como fator de acelerao do decaimento (DAF ou CD55) competem com o fator B pela ligao ao C3b da superfcie celular, e podem des-

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

Figura 2.32 O complemento ativado pela via alternativa ataca os agentes patognicos, ao mesmo tempo em que poupa as clulas hospedeiras, protegidas pelas protenas reguladoras. O componente C3 do complemento clivado espontaneamente no plasma, originando C3(H2O), o qual se liga ao fator B e permite que este seja clivado pelo fator D (no alto). A convertase solvel de C3 cliva o C3, produzindo C3a e C3b, que podem se unir s clulas do hospedeiro ou superfcie do patgeno (segundo quadro). Ela se liga covalentemente ao fator B, que, por sua vez, rapidamente clivado pelo fator D em Bb, que permanece unido ao C3b para formar uma convertase C3, e Ba, que liberado (terceiro quadro). Se o C3bBb se formar na superfcie da clula hospedeira (quadros esquerda), ser rapidamente inativado por protenas reguladoras do complemento, expressas pelas clulas do hospedeiro: receptor de complemento 1 (CR1), fator de acelerao-decaimento (DAF) e cofator de protelise da membrana (MCP). As clulas do hospedeiro tambm favorecem a ligao do fator H do plasma. CR1, DAF e o fator H deslocam o Bb do C3b, enquanto CR1, MCP e o fator H catalisam a clivagem de C3b ligado pelo fator I, a fim de produzir C3b inativo (conhecido como iC3b). As superfcies bacterianas (quadros inferiores direita) no expressam protenas reguladoras do complemento e favorecem a ligao do fator P (properdina), que estabiliza a atividade da convertase C3bBb. Essa convertase o equivalente a C4b2b da via clssica (ver Figura 2.28).

O componente C3 sofre hidrlise espontnea para C3 (H2O), o qual se liga ao fator B, permitindo que seja clivado pelo fator D em Ba e Bb
C3

Fator D

Fator B

C3(H2O)

O complexo C3(H2O) uma convertase de C3, clivando mais C3 em C3b. O C3b rapidamente inativado, a menos que se ligue superfcie celular
Bb C3a C3(H2O) C3

C3b

O fator B liga-se no-covalentemente a C3b em uma superfcie celular e clivado a Bb pelo fator D
Fator B Ba

Fator D Bb

Nas clulas hospedeiras, as protenas de controle do complemento CR1, H, MCP e DAF ligam-se a C3b. CR1, H e DAF deslocam Bb
Bb

Os patgenos no possuem protenas reguladoras do complemento. A ligao do fator P pode estabilizar o complexo C3bBb

DAF CR1 H C3b

C3b MCP

Bb C3b

Fator P

C3bBb

C3b ligado a H, CR1 e MCP clivado pelo fator I para gerar C3b inativo (iC3b)

O complexo C3bBb uma convertase C3 e deposita muitas molculas de C3b na superfcie do patgeno

Fator I I CR1 iC3b iC3b DAF I H MCP iC3b C3b I

No h ativao do complemento nas superfcies das clulas hospedeiras

Opsonizao e ativao dos componentes terminais do complemento

Imunobiologia de Janeway

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Protenas da via alternativa de ativao do complemento


Componente nativo C3 Fragmentos ativos C3b Funo Liga-se superfcie do patgeno, liga B para clivagem por D, C3bBb a C3 convertase e C3b2Bb a C5 convertase Fragmento pequeno de B, funo desconhecida Bb a enzima ativa da C3 convertase de C3bBb e da C5 convertase C3b2Bb A serina protease plasmtica cliva B quando est ligado ao C3b em Ba e Bb Protena plasmtica com afinidade para o C3bBb convertase nas clulas bacterianas

Figura 2.33 As protenas da via alternativa de ativao do complemento

Ba Fator B (B) Bb

Fator D (D) Properdina (P)

locar Bb de uma convertase que acabou de se formar. A formao da convertase tambm pode ser impedida pela clivagem de C3b, no seu derivado inativo iC3b. Isso obtido pela proteinase plasmtica, o fator I, juntamente com protenas ligadoras de C3b que atuam como cofatores, como o cofator de protelise de membrana (MCP ou CD46), outra protena de membrana da clula do hospedeiro. O receptor de superfcie celular do complemento tipo 1 (CR1) tem atividade semelhante ao DAF e MCP na inibio da formao da convertase de C3 e promoo do catabolismo de C3b para produtos inativos, porm tem uma distribuio mais limitada nos tecidos. O fator H outra protena plasmtica reguladora do complemento que liga C3b e, como CR1, capaz de competir com o fator B e deslocar Bb da convertase, alm de atuar como um cofator para o fator I. O fator H liga-se preferencialmente a C3b ligado a clulas de vertebrados, j que tem uma afinidade pelos resduos de cido silico presentes nessas clulas. Em contraste, quando o complemento ativado em superfcies estranhas, como em superfcies bacterianas, ou em clulas do hospedeiro que sofreram leses ou foram modificadas por isquemia, infeces virais ou ligao do anticorpo, a enzima convertase de C3 estabilizada, a qual capaz de ativar o complemento e dar continuidade via. Nessas clulas, as protenas reguladoras do plasma positivas, conhecidas como properdina ou fator P, ligam-se convertase de C3bBb e aumentam sua estabilidade, levando a uma amplificao da ativao do complemento. Uma vez formada, na superfcie que permita sua estabilidade, a convertase C3bBb cliva rapidamente mais C3 em C3b, que pode ligar-se ao patgeno e atuar como
Figura 2.34 A via alternativa da ativao do complemento pode amplificar a via clssica ou a via da MB-lectina formando uma C3 convertase alternativa e depositando mais molculas C3b na superfcie do patgeno. O C3b depositado pela via clssica ou pela via da MB-lectina pode ligar o fator B, tornando-o suscetvel clivagem pelo fator D. O complexo C3bBb uma C3 convertase da via alternativa de ativao do complemento e sua ao, assim como a do C4b2b resulta na deposio de muitas molculas de C3b na superfcie do patgeno.

O C3b depositado pela convertase C3 da via clssica ou da via da MB-lectina

O C3b liga-se ao fator B

O fator B ligado clivado pela protease plasmtica fator D em Ba e Bb


Fator D
Ba Bb

O complexo C3bBb uma convertase C3 clivando muitas molculas C3 em C3a e C3b


C3 C3a

Fator B

C3b

C3bBb

C3b

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

Figura 2.35 H uma ntima relao entre os fatores das vias alternativa, MB-lectina e clssica da ativao do complemento. Muitos dos fatores so idnticos ou so produtos de genes que se duplicaram e divergiram em sequncia. As protenas C4 e C3 so homlogas e contm a ligao instvel tioster, pela qual seus fragmentos grandes, C4b e C3b, ligam-se membrana. Os genes para as protenas C2 e B so adjacentes na regio do MHC de classe III e surgem por duplicao. As protenas reguladoras, fator H, CR1 e C4BP, compartilham uma sequncia repetida, comum a muitas protenas reguladoras do complemento. A maior divergncia entre as vias de ativao reside em seu incio; na via clssica, o fator C1 serve para converter a ligao com o anticorpo em atividade enzimtica sobre uma superfcie especfica; na via mediada por lectina, uma protena ligadora de manose (MBP) associa-se a uma serina protease, formando a serina protease associada ao MBL (MASP), servindo mesma funo; na via alternativa, a atividade enzimtica iniciadora fornecida pelo fator D.

Etapa na via de ativao

Protena agente da funo na via de ativao


Alternativa (inata) Lectina Clssica

Relaes

Iniciador da serina protease Ligao covalente superfcie celular C3/C5 convertase Controle de ativao Opsonizao Iniciao da via efetora Inflamao local Estabilizao

D C3b Bb CR1 H

MASP C4b C2b CR1 C4BP C3b C5b C5a, C3a

C1s

Homlogas (C1s e MASP) Homlogas Homlogas Idnticas Homlogas Idnticas Idnticas Idnticas nicas

Nenhuma

uma opsonina ou reiniciar a via para formar outras molculas de convertase C3bBb. Portanto, a ativao pela via alternativa se d por uma amplificao que pode ocorrer na superfcie do patgeno ou em clulas do hospedeiro lesadas, mas no em clulas e tecidos normais do hospedeiro. Essa mesma amplificao permite que a via alternativa contribua com a ativao do complemento induzida inicialmente por meio das vias clssicas ou MBL (ver Figura 2.25). As convertases C3, resultantes da ativao das vias clssicas ou MBL (C4b2b), e as da via alternativa (C3bBb) so aparentemente diferentes. Porm, uma compreenso do sistema do complemento simplificada at certo grau pelo reconhecimento de relaes evolutivas prximas entre diferentes protenas do complemento (Figura 2.35). Portanto, os zimgenos do complemento, os fatores B e C2, so protenas muito relacionadas, codificadas por genes homlogos localizados em tandem no complexo de histocompatibilidade principal (MHC) no cromossoma 6 em humanos. Alm disso, seus respectivos parceiros de ligao, C3 e C4, contm ambas as ligaes tioster que fornecem uma forma de unio covalente s convertases de C3 na superfcie do patgeno. Somente um componente da via alternativa parece no estar relacionado aos seus equivalentes funcionais na via clssica e na via MB-lectina a serina protease iniciadora, o fator D. O fator D a nica protease de ativao do sistema do complemento que circula como uma enzima ativa, e no como um zimgeno. Isso necessrio tanto para o incio da via alternativa, por meio da clivagem espontnea de C3, quanto para a segurana do hospedeiro, j que o fator D no tem outro substrato alm do fator B quando ligado ao C3b. Logo, o fator D s encontra seu substrato no plasma, em concentraes muito baixas, e nas superfcies de patgenos, onde permitida a continuidade da via alternativa de ativao do complemento. Uma comparao das diferentes vias de ativao do complemento ilustra o princpio geral de que a maioria dos mecanismos imunes efetores que podem ser ativados em uma forma no-clonal como parte da resposta adaptativa precoce do hospedeiro contra a infeco foram selecionados durante a evoluo para serem usados como mecanismos efetores da imunidade adaptativa. praticamente certo que a resposta adaptativa evoluiu adicionando reconhecimentos especficos ao sistema original no-adaptativo. Isso claramente ilustrado no sistema do complemento, porque neste os componentes so definidos, e os homlogos funcionais parecem estar evolutivamente relacionados.

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2-18 A convertase C3 ligada superfcie deposita uma grande quantidade

de fragmentos de C3b na superfcie do patgeno e gera a atividade da convertase C5


A formao da convertase C3 o ponto no qual as trs vias da ativao do complemento convergem, porque tanto a convertase C4b2a das vias clssica e da lectina quanto a C3bBb da via alternativa tm a mesma atividade e iniciam os mesmos eventos subsequentes. Ambas clivam C3 em C3b e C3a. O C3b liga-se covalentemente por meio de sua ligao tioster s molculas adjacentes na superfcie do patgeno; de outro modo, ele inativado por hidrlise. O C3 o componente do complemento mais abundante no plasma, em uma concentrao de 1,2 mg/mL, e at 1.000 molculas de C3b podem ligar-se nas vizinhanas de uma nica convertase de C3 ativa (ver Figura 2.34). Assim, o principal efeito da ativao do complemento depositar grandes quantidades de C3b na superfcie do patgeno infectante, onde ele forma uma cobertura covalentemente ligada que, como veremos, pode sinalizar a destruio final do patgeno pelos fagcitos. O prximo passo na cascata a produo da convertase C5. Na via clssica e da MB-lectina, a convertase C5 formada pela ligao de C3b a C4b2a, produzindo C4b2a3b. Da mesma forma, a convertase C5 da via alternativa formada pela unio de C3b convertase C3 para formar C3b2Bb. A C5 capturada por esses complexos de convertases C5 por meio de ligao ao stio aceptor do C3b e logo fica suscetvel clivagem pela atividade da serina protease C2a ou Bb. Essa reao, que gera C5b e C5a, mais limitada que a clivagem de C3, j que C5 s pode ser clivada quando se liga a C3b, que muda sua posio para ligar-se a C4b2a ou C3bBb, para formar complexo convertase C5 ativo. Portanto, a ativao do complemento pelas trs vias leva ligao de grande nmero de molculas de C3b na superfcie do patgeno, gerao de um nmero mais limitado de molculas C5b e liberao de C3a e C5a (Figura 2.36).

C3 liga-se tanto a C4b2a quanto a C3bBb, formando as C5 convertases ativas C42a3b e C3b2Bb

C4b2a3b

C3b2Bb

C5 liga-se ao componente C3b da enzima C5 convertase

C5 C3b C4b2a3b C3b2Bb

C5 C3b

C5 clivado por C2a ou Bb para formar C5b e C5a


C5a
C5a

C5b

C5b

C3b C4b2a3b C3b2Bb

2-19 A ingesto de patgenos marcados com protenas do complemento

pelos fagcitos mediada por receptores ligados s protenas do complemento


A ao mais importante do complemento facilitar a captao e a destruio dos patgenos pelas clulas fagocticas. Isso ocorre pelo reconhecimento especfico dos componentes do complemento ligados pelos receptores de complemento (CRs, complement receptors) nos fagcitos. Os receptores de complemento se ligam a patgenos opsonizados com os componentes do complemento. A opsonizao dos patgenos a principal funo de C3b e de seus derivados proteolticos. C4b tambm atua como uma opsonina, mas tem um papel relativamente menos importante, principalmente porque produzido muito mais C3b do que C4b. Os seis tipos conhecidos de receptor para os componentes do complemento ligados so listados, com suas funes e distribuies, na Figura 2.37. O receptor do complemento mais bem caracterizado o receptor de C3b, CR1 (CD35), o qual expresso em macrfagos e neutrfilos. A ligao do C3b ao CR1 em si no pode estimular a fagocitose, mas pode induzir a fagocitose na presena de outros mediadores imunes que ativam os macrfagos. Por exemplo, o fragmento pequeno de complemento C5a pode ativar os macrfagos para ingerir bactrias ligadas a seus receptores CR1 (Figura 2.38). O C5a une-se a outro receptor expresso nos macrfagos, o receptor C5a, que possui sete domnios transmembrnicos. Esse tipo de receptor tipicamente se acopla a protenas que se ligam ao nucleotdeo guanina, denominadas protenas G, e o receptor C5a sinaliza as clulas dessa forma. As protenas associadas matriz extracelular, como a fibronectina, tambm podem contribuir para a ativao fagocitria. Essas so encontradas quando os fagcitos so recrutados ao tecido conjuntivo e ali ativados.

Figura 2.36 O componente do complemento C5 ativado por uma C5 convertase quando o C5 est complexado ao C3b. Como apresentado no quadro superior, as C5 convertases so formadas quando o C3b se liga convertase C3 da via clssica ou da lectina, C4b2a, para formar C4b2aC3b, ou C3 convertase da via alternativa, C3bBb, para formar C3b2Bb. No quadro central, C5 liga-se ao C3b desses complexos. No quadro inferior, C5 clivado pela enzima ativa C2a ou Bb, para formar C5b e o mediador inflamatrio C5a. Diferentemente de C3b e C4b, C5b no est ligado covalentemente superfcie celular. A produo de C5b inicia a montagem dos componentes terminais do complemento.

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Figura 2.37 Distribuio e funo dos receptores das protenas do complemento na superfcie das clulas. Existem vrios receptores especficos diferentes para diferentes componentes do complemento ligados e seus fragmentos. O CR1 e o CR3 so especialmente importantes para induzir a fagocitose de bactrias com componentes do complemento em suas superfcies. O CR2 encontrado principalmente nas clulas B, onde tambm faz parte do complexo correceptor de clulas B e do receptor pelo qual o vrus Epstein-Barr infecta seletivamente as clulas B, causando mononucleose infecciosa. O CR1 e o CR2 compartilham caractersticas estruturais com as protenas reguladoras do complemento que ligam C3b e C4b. O CR3 e o CR4 so integrinas; o CR3 importante para adeso e migrao dos leuccitos, e o CR4 conhecido apenas por sua funo na resposta dos fagcitos. Os receptores C5a e C3a so receptores acoplados protena G com sete alas. FDC, clulas dendrticas foliculares; estas no esto envolvidas na imunidade inata e sero descritas nos prximos captulos.

Receptor

Especificidade

Funes Promove o decaimento de C3b e C4b Estimula a fagocitose Transporte eritrocitrio dos complexos imunes Parte do correceptor de clulas B Receptor do vrus Epstein-Barr

Tipos celulares Eritrcitos, macrfagos, moncitos, leuccitos polimorfonucleados, clulas B, FDC

CR1 (CD35)

C3b, C4bi C3b

CR2 (CD21) CR3 (Mac-1) (CD11b/ CD18) CR4 (gp150, 95) (CD11c/ CD18) Receptor C5a

C3d, iC3b, C3dg Vrus Epstein-Barr

Clulas B, FDC

iC3b

Estimula a fagocitose

Macrfagos, moncitos, leuccitos polimorfonucleados, FDC

iC3b

Estimula a fagocitose

Macrfagos, moncitos, leuccitos polimorfonucleados, clulas dendrticas

C5a

A ligao do C5a ativa a protena G

Clulas endoteliais, mastcitos, fagcitos

Receptor C3a

C3a

A ligao do C3a ativa a protena G

Clulas endoteliais, mastcitos, fagcitos

Trs outros receptores do complemento, CR2 (tambm conhecido como CD21), CR3 (CD11b:CD18) e CR4 (CD11c:CD18), ligam-se a formas inativadas de C3b que permanecem fixas superfcie do patgeno. Como vrios outros componentes-chave do complemento, o C3b est sujeito ao de mecanismos reguladores e pode ser clivado subsequentemente em derivados que no podem formar uma convertase ativa. Um dos derivados inativos do C3b, conhecido como iC3b (ver Seo 2-17), atua como uma opsonina quando ligado aos receptores do complemento CR3. Diferentemente da ligao de iC3b ao CR1, a ligao de iC3b ao CR3 suficiente para estimular a fagocitose. Um segundo produto de degradao do C3b, denominado C3dg, liga-se somente ao CR2. O CR2 encontrado nas clulas B como parte do complexo correceptor que pode aumentar o sinal recebido por meio do receptor de imunoglobulinas antgeno-especfico. Portanto, a clula B, cujo receptor de antgeno especfico para um determinado patgeno, receber um forte sinal quando ligar-se ao patgeno se ele tambm estiver recoberto com C3dg. A ativao do complemento pode contribuir para a produo de uma forte resposta de anticorpos (ver Captulos 6 e 9). Este exemplo de como uma resposta imune humoral inata pode contribuir para a ativao da imunidade adaptativa

Figura 2.38 A anafilotoxina C5a pode aumentar a fagocitose de microrganismos opsonizados. A ativao do complemento, pela via alternativa ou pela via da lectina, leva deposio do C3b na superfcie dos microrganismos (quadro esquerda). O C3b pode ser ligado pelo receptor do complemento CR1 da superfcie dos fagcitos, mas isso insuficiente para induzir a fagocitose (quadro central). Os fagcitos tambm expressam receptores para anafilotoxina C5a, e a ligao do C5a agora ativar a clula a fagocitar o microrganismo ligado pelo CR1 (quadro direita).

A bactria recoberta com protenas do complemento das vias alternativa e lectina

Quando somente o C3b liga-se ao CR1, a bactria no fagocitada

O C5a pode ativar os macrfagos a fagocitar via CR1

C5a

Macrfago

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humoral semelhante contribuio feita pela resposta inata celular de macrfagos e clulas dendrticas no incio de uma resposta mediada por clulas T, que discutiremos mais tarde neste captulo. O papel central da opsonizao pelo C3b e seus fragmentos inativos na destruio dos patgenos extracelulares pode ser visto nos efeitos de vrias doenas de deficincia de complemento. Os indivduos deficientes em qualquer dos componentes finais do complemento so relativamente pouco afetados, mostrando somente um aumento da suscetibilidade a infeces por Neisseria, mas os indivduos deficientes de C3 ou das molculas que catalisam a deposio de C3b mostram suscetibilidade aumentada a infeces por uma grande variedade de bactrias extracelulares, como veremos no captulo 12.

2-20 Pequenos fragmentos de algumas protenas do complemento podem iniciar uma resposta inflamatria local
Os pequenos fragmentos do complemento C3a, C4a e C5a atuam em receptores especficos (Figura 2.37) para produzir respostas inflamatrias locais. Quando produzidos em grandes quantidades ou injetados de forma sistmica, eles induzem um colapso circulatrio generalizado, produzindo uma sndrome similar do choque observada em uma reao alrgica envolvendo anticorpos da classe IgE (o qual discutido no Captulo 13). Tal reao denominada choque anafiltico, e esses pequenos fragmentos do complemento so referidos como anafilatoxinas. Dos trs, o C5a o mais estvel e possui a maior atividade biolgica especfica. Todos os trs induzem a contrao do msculo liso e aumentam a permeabilidade vascular, mas o C3a e o C5a tambm atuam nas clulas endoteliais que revestem os vasos sanguneos, induzindo molculas de adeso. Alm disso, C3a e C5a podem ativar os mastcitos residentes na submucosa para liberar mediadores como histamina e TNF-, que causam efeitos similares. Essas alteraes induzidas por C3a e C5a recrutam anticorpos, complemento e clulas fagocticas para o local da infeco (Figura 2.39), e o aumento de lquido nos tecidos acelera a movimentao das clulas apresentadoras de antgeno, contendo o patgeno, para os linfonodos locais, contribuindo para o incio imediato da resposta imune adaptativa. O C5a tambm age diretamente sobre neutrfilos e moncitos, a fim de aumentar sua aderncia s paredes dos vasos, sua migrao em direo aos stios de deposio de antgeno e sua capacidade de ingerir partculas. C5a tambm aumenta a expresso de CR1 e CR3 na superfcie dessas clulas. Assim, o C5a e, em menor extenso, o C3a e o C4a atuam em conjunto com outros componentes do complemento para acelerar a destruio dos patgenos por fagcitos. C5a e C3a sinalizam por meio de receptores de membrana que ativam as protenas G. Portanto, a ao do C5a na atrao de neutrfilos e moncitos anloga quela das quimiocinas que tambm atuam via protena G para controlar a migrao celular.

2-21 As protenas terminais do complemento polimerizam para formar poros nas membranas que podem matar certos patgenos
Um dos efeitos mais importantes da ativao do complemento a reunio dos seus componentes terminais (Figura 2.40) para formar o complexo de ataque membrana. As reaes que levam formao desse complexo so mostradas esquemtica e microscopicamente na Figura 2.41. O resultado final um poro na membrana da bicamada lipdica, que destri a integridade da membrana. Acredita-se que isso mata o patgeno, destruindo o gradiente de prtons atravs da sua membrana celular. O primeiro passo na formao do complexo de ataque membrana a clivagem do C5 por uma C5 convertase para liberar C5b (ver Figura 2.36). Nos estgios seguintes, mostrados na Figura 2.41, o C5b inicia a montagem do ltimo componen-

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Figura 2.39 Respostas inflamatrias locais podem ser induzidas por fragmentos pequenos do complemento, especialmente pelo C5a. Os fragmentos pequenos do complemento so diferentemente ativos: o C5a mais ativo do que o C3a, que mais ativo do que o C4a. Eles causam respostas inflamatrias locais agindo diretamente sobre os vasos sanguneos, estimulando aumento no fluxo sanguneo, permeabilidade vascular aumentada e ligao aumentada de fagcitos s clulas endoteliais. O C5a tambm ativa os mastcitos (no mostrado) a liberarem mediadores, como histamina e o TNF-, que contribuem para a resposta inflamatria. O aumento do dimetro e da permeabilidade dos vasos leva ao acmulo de fluidos e protenas. O acmulo de lquido aumenta a drenagem linftica, trazendo o antgeno aos linfonodos da vizinhana. Os anticorpos, o complemento e as clulas assim recrutados participam na eliminao do patgeno, aumentando a fagocitose. Os fragmentos pequenos do complemento tambm aumentam diretamente a atividade dos fagcitos.

Os pequenos produtos de clivagem do complemento atuam sobre vasos sanguneos, para aumentar a permeabilidade vascular, e molculas de adeso celular
C3a C5a C4a

A permeabilidade aumentada permite um vazamento aumentado de lquido dos vasos sanguneos e um extravasamento de imunoglobulina e molculas do complemento

A migrao de macrfagos, leuccitos polimorfonucleados (PMN) e linfcitos aumentada. A atividade microbicida dos macrfagos e PMNs tambm aumentada

IgG

IgM Componentes do complemento

Os componentes terminais do complemento que formam o complexo de ataque membrana Protena nativa Componente ativo
Funo

C5a C5 C5b C6 C7 C8 C6 C7 C8

Pequeno mediador peptdico da inflamao (alta atividade)


Inicia a montagem do sistema de ataque membrana

Liga-se a C5b, forma o aceptor para C7 Liga-se a C5b6, complexo antiflico insere-se na bicamada lipdica Liga-se a C5b67, inicia a polimerizao de C9 Polimeriza com o C5b678, para formar um canal transmembrana, lisando a clula

Figura 2.40 Os componentes terminais do complemento, que se unem para formar o complexo de ataque membrana.

C9

C9n

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te do complemento e sua insero na membrana celular. Primeiro, uma molcula de C5b se liga a uma molcula de C6, e o complexo C5b6, ento, a uma molcula de C7. Essa reao leva a uma alterao conformacional nos constituintes das molculas, com a exposio de um stio hidrofbico em C7, que se insere na bicamada lipdica. Stios hidrofbicos similares so expostos nos componentes posteriores C8 e C9 quando eles esto ligados ao complexo, permitindo que essas protenas tambm se insiram na bicamada lipdica. O C8 um complexo de duas protenas, denominadas C8 e C8-. A protena C8 se liga ao C5b, e a unio de C8 ao complexo associado membrana C5b67 permite que o domnio hidrofbico de C8- se insira na bicamada lipdica. Finalmente, C8- induz a polimerizao de 10 a 16 molculas de C9 na estrutura em forma de poro denominada complexo de ataque membrana. O complexo de ataque membrana, mostrado esquematicamente e por microscopia eletrnica na Figura 2.41, possui uma face externa hidrofbica, que lhe permite se associar bicamada lipdica, e um canal interno hidroflico. O dimetro desse canal de cerca de 100 , permitindo a passagem livre de solutos e gua atravs da bicamada lipdica. A ruptura dessa bicamada leva perda da homeostasia celular, interrupo do gradiente de prtons atravs da membrana, penetrao de enzimas como a lisozima na clula e eventual destruio do patgeno. Embora o efeito do complexo de ataque membrana seja muito dramtico, particularmente em demonstraes experimentais em que anticorpos contra a membrana celular de hemcias so usados para ativar a cascata do complemento, o significado desses componentes na defesa do hospedeiro parece ser muito limitado. At o presente, deficincias nos componentes do complemento C5-C9 tm sido associadas somente suscetibilidade a espcies de Neisseria, a bactria que causa a gonorreia, uma doena sexualmente transmissvel, e a uma forma comum de meningite bacteriana. Assim, as aes opsonizantes e inflamatrias dos componentes iniciais da cascata do complemento claramente so mais im-

Figura 2.41 O complexo de ataque membrana une-se para produzir um poro na bicamada lipdica da membrana. A sequncia de etapas e seu aspecto aproximado so mostrados aqui em forma esquemtica. C5b ativa a montagem de um complexo de uma molcula de C6, C7 e C8, nessa ordem. C7 e C8 sofrem alteraes conformacionais que expem os domnios hidrofbicos que se inserem na membrana. Esse complexo, por si s, causa uma leso moderada na membrana e tambm serve para induzir a polimerizao de C9, novamente com a exposio de um stio hidrofbico. At 16 molculas de C9 so, ento, adicionadas montagem para formar um canal de 100 de dimetro na membrana. Esse canal rompe a membrana celular bacteriana, matando a bactria. As micrografias eletrnicas mostram membranas de eritrcitos com complexos de ataque membrana em duas orientaes, transversal e lateral. (Fotografias cortesia de S. Bhakdi e J. Tranum-Jensen.)

C5 liga-se a C6 e C7

Os complexos C5b67 ligam-se membrana atravs do C7

C8 liga-se ao complexo e se insere na membrana celular

As molculas de C9 ligam-se ao complexo e se polimerizam

10-16 molculas de C9 unem-se para formar um poro na membrana

C8 C6 C5b C7 Complexo C5b67

C9

Bicamada lipdica

Patgeno

Leses na membrana vista frontal (anis)

Leses na membrana vista lateral (tubos)

Representao esquemtica do poro do complexo de ataque membrana

15 nm 3 nm

10 nm

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portantes para a defesa do hospedeiro contra a infeco. A formao do complexo de ataque membrana parece ser importante apenas para a morte de poucos patgenos, embora, como veremos no Captulo 14, deva ter um papel maior na imunopatologia.

2-22 As protenas de controle do complemento regulam as trs vias de

ativao do complemento e protegem o hospedeiro de seus efeitos destrutivos


Dados os efeitos destrutivos do complemento e a maneira pela qual sua ativao rapidamente amplificada por meio da induo da cascata enzimtica, no surpreendente que existam vrios mecanismos para evitar sua ativao descontrolada. Como vimos, as molculas efetoras do complemento so geradas por meio da ativao sequencial de zimgenos, presentes no plasma na forma inativa. A ativao desses zimgenos geralmente ocorre na superfcie do patgeno, e os fragmentos do complemento ativados, produzidos nas sucessivas reaes das cascatas de reao, em geral se ligam ali ou so rapidamente inativados por hidrlise. Essas duas caractersticas da ativao do complemento atuam como uma proteo contra a ativao descontrolada. Porm, todos os componentes do complemento so ativados espontaneamente a uma baixa velocidade no plasma, e os componentes ativados do complemento algumas vezes se ligaro a protenas nas clulas do hospedeiro. As possveis consequncias desse dano so evitadas por uma srie de protenas de controle do complemento, resumidas na Figura 2.42, que regulam a cascata do complemento em pontos diferentes. Como vimos na discusso da ativao da via alternativa do complemento (ver Seo 2-16), muitas dessas protenas de controle protegem especificamente as clulas do hospedeiro, enquanto permitem que a ativao do complemento prossiga na superfcie dos patgenos. As protenas de controle do complemento permitem, ao hospedeiro, portanto, distinguir entre o prprio e o no-prprio.

Protenas de controle das vias clssica e alternativa


Nome (smbolo) Inibidor C1 (C1INH) Papel na regulao da ativao do complemento Liga-se ao C1r, C1s ativado, removendo-o de C1q e ativando MASP-2, removendo isso de MBL Liga-se ao C4b, deslocando C2a; cofator para a clivagem de C4b por I Liga-se ao C4b, deslocando C2a; ou a C3b deslocando Bb; cofator para I Liga-se ao C3b, deslocando Bb; cofator para I Serina protease que cliva C3b e C4b; auxiliado por H, MCP, C4BP ou CR1 Protena de membrana que desloca Bb de C3b e C2a de C4b Protena de membrana que promove a inativao de C3b e C4b por I Impede a formao do complexo de ataque membrana em clulas autlogas ou alognicas. Amplamente expresso em membranas.

Protena ligadora de C4 (C4BP) Receptor do complemento 1 (CR1) Fator H (H) Fator I (I) Fator de acelerao do decaimento (DAF) Protena cofator de membrana (MCP)

Figura 2.42 As protenas que regulam a atividade do complemento.

CD59 (protectina)

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As reaes que regulam a cascata do complemento so mostradas na Figura 2.43. Os dois quadros superiores mostram que a ativao de C1 controlada por uma protena plasmtica inibidora de serina protease ou serpina, o inibidor de C1 (C1INH). C1INH se liga enzima ativa, C1r:C1s, e faz com que ela se dissocie de C1q, o qual permanece ligado ao patgeno. Desse modo, o C1INH limita o tempo durante o qual o C1s ativo capaz de clivar C4 e C2. Da mesma forma, o C1INH limita a ativao espontnea de C1 no plasma. Sua importncia pode ser observada na doena de deficincia de C1INH, o edema angioneurtico hereditrio, no qual a ativao espontnea crnica do complemento leva produo de um excesso de fragmentos clivados de C4 e C2. O fragmento pequeno de C2, C2b, clivado subsequentemente em um peptdeo, a quinina C2, que causa edema extenso o mais perigoso o edema local na traqueia, que pode levar sufocao. A bradicinina, que possui aes similares quinina C2, tambm produzida de modo descontrolado nessa doena, como resultado da falta de inibio de outra protease plasmtica, a calicrena, a qual ativada pelo dano tecidual e tambm regulada pelo C1INH. Essa doena completamente corrigida pela reposio do C1INH. Os fragmentos grandes ativados de C4 e C2, que normalmente se combinam para formar a C3 convertase, no lesam as clulas do hospedeiro nesses pacientes, pois o C4b rapidamente inativado no plasma (ver Figura 2.31) e a convertase no se forma. Alm disso, qualquer convertase que se forme acidentalmente em uma clula do hospedeiro inativada pelos mecanismos descritos a seguir. A ligao tioster de C3 e C4 ativados extremamente reativa e no tem mecanismo para distinguir entre um grupo aceptor hidroxila ou amina em uma clula hospedeira e um grupo similar na superfcie de um patgeno. Diversos mecanismos protetores, mediados por outras protenas, evoluram para garantir que a ligao de um pequeno nmero de molculas C3 e C4 na membrana celular do hospedeiro resultasse na formao mnima da convertase C3 e na pequena amplificao da ativao do complemento. Vimos a maioria desses mecanismos na descrio da via alternativa (ver Figura 2.32), mas consideraremos novamente devido a sua importncia como convertases reguladoras da via clssica (ver Figura 2.43, segunda e terceira linhas). Os mecanismos podem ser divididos em trs categorias. A primeira catalisa a clivagem de qualquer C3b ou C4b que se una s clulas do hospedeiro em produtos inativos. A enzima reguladora do complemento responsvel a serina protease do plasma, fator I, que circula na forma ativa, porm s pode clivar C3b e C4 quando unidos a uma protena cofator de membrana. Nessas circunstncias, o fator I cliva primeiro C3b em iC3b e, logo, em C3dg, inativando-o permanentemente. O C4b inativado de forma similar pela clivagem em C4c e C4d. Existem duas protenas de membrana celular que ligam C3b e C4b e possuem atividade de cofator para o fator I, a CR1 e MCP (ver Seo 2-17). As paredes celulares microbianas no apresentam essas protenas protetoras e no podem promover a clivagem de C3b e C4b. Em seu lugar, atuam como stios de ligao para os fatores B e C2, promovendo a ativao do complemento. A importncia do fator I pode ser observada em indivduos com deficincia gentica no fator I. Devido ativao descontrolada do complemento, as protenas do complemento so rapidamente depletadas, e essas pessoas sofrem repetidas infeces bacterianas, especialmente por bactrias ubquas piognicas. Tambm existem protenas plasmticas com atividade de cofator para o fator I. O C4b ligado por um cofator, denominado protena ligadora do C4b (C4BP), que atua principalmente como um regulador da via clssica na fase fluida. C3b est ligado membrana celular por protenas cofatores, como DAF e MCP. Essas molculas reguladoras competem efetivamente com o fator B pela ligao ao C3b ligado clula. Se o fator B ganha , como ocorre tipicamente nas superfcies dos patgenos, ento mais convertase C3, C3bBb, se forma, e a ativao do complemento amplificada. Se DAF e MCP ganham , como o caso das clulas do hos-

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Figura 2.43 A ativao do complemento regulada por uma srie de protenas que servem para proteger as clulas do hospedeiro da leso acidental. Essas atuam em diferentes estgios da cascata do complemento, dissociando os complexos ou catalisando a degradao enzimtica das protenas do complemento ligadas covalentemente. Os estgios na cascata do complemento so mostrados esquematicamente esquerda, com as reaes de controle direita. A via alternativa da C3 convertase regulada de forma similar por DAF, CR1, MCP e fator H.

Estgios nos quais a atividade do complemento regulada


A ligao C1q aos complexos antgeno:anticorpo ativa C1r e C1s O inibidor de C1 (C1NH) dissocia C1r e C1s do complexo ativo C1

C1q C1INH C1r C1s C1r

C1s

Micrbio

C4b2a a C3 convertase ativa, clivando C3 em C3a e C3b

DAF, C4BP e CR1 deslocam C2a do complexo C4b2a. O C4b ligado ao C4BP, MCP ou CR1 clivado por uma protease I solvel s formas inativas C4d e C4c

C3 C2a C3a I C4b C4b2b C3b C3b C4b C4BP DAF I CR1 I C4d MCP C4c

As C5 convertases clivam C5 em C5a e C5b

CR1 e H deslocam C3b. CR1 e H atuam como cofatores na clivagem de C3b por I

C5

C5a

C5b

I H

C4b2a3b

C3b2Bb

C4b2a

CR1

iC3b

iC3b

Os componentes terminais do complemento formam um poro na membrana o complexo de ataque membrana

O CD59 impede a montagem final do complexo de ataque membrana no estgio C8 a C9

C9 C5b C6 CD59

C8

C7

C9 C5b678

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pedeiro, o C3b ligado catabolizado pelo fator I em iC3b e C3dg, e a ativao do complemento inibida. A competio entre DAF ou MCP e fator B pela ligao ao C3b ligado na superfcie um exemplo do segundo mecanismo para inibir a ativao do complemento nas membranas das clulas do hospedeiro. Inmeras protenas inibem competitivamente a ligao do C2 ao C4b ligado clula e do fator B ao C3b ligado clula, inibindo a formao da convertase. Essas protenas se unem ao C3b e ao C4b na superfcie celular e tambm medeiam a proteo contra o complemento por meio do terceiro mecanismo, que aumenta a dissociao das convertases C4b2a e C3bBb que j se formaram. As molculas da membrana do hospedeiro que regulam o complemento por meio desses dois mecanismos incluem a DAF e o CR1, que promovem a dissociao da convertase em adio sua atividade de cofator. Todas as protenas que se unem s molculas homlogas C4b e C3b compartilham uma ou mais cpias de um elemento estrutural denominado repeties curtas consenso (SCR), repetio da protena de controle do complemento (CCP) ou (especialmente no Japo) o domnio sushi. Alm dos mecanismos para prevenir a formao da convertase C3 e a deposio de C4 e C3 nas membranas celulares, tambm existem mecanismos inibitrios que evitam a insero imprpria dos complexos de ataque membrana nas membranas. Vimos na Seo 2-21 que o complexo de ataque membrana se polimeriza em molculas de C5b liberadas pela ao da convertase C5. Esse complexo se insere principalmente nas membranas celulares adjacentes ao stio da convertase C5, isto , prximo ao stio da ativao do complemento no patgeno. Entretanto, alguns complexos de ataque membrana recm-formados podem difundir-se do stio de ativao do complemento e inserir-se nas membranas celulares adjacentes do hospedeiro. Vrias protenas plasmticas, incluindo, notavelmente, vitronectina, tambm conhecida como protena-S, unem-se ao complexo C5b67 e inibem sua insero ao acaso nas membranas celulares. A membrana do hospedeiro tambm contm a protena intrnseca, CD59 ou protectina, a qual inibe a ligao de C9 ao complexo C5b678 (ver Figura 2.43, linha inferior). O CD59 e o DAF esto ligados superfcie celular por uma cauda de glicosilfosfatidilinositol (GPI), como outras protenas perifricas de membrana. Uma das enzimas envolvidas na sntese das caudas do GPI codificada no cromossoma X. Em indivduos com uma mutao somtica em um clone de clulas hematopoiticas, tanto o CD59 quanto o DAF no so funcionais. Isso causa a doena hemoglobinria paroxstica noturna, caracterizada por episdios de lise intravascular das hemcias pelo complemento. Somente as clulas que no possuem CD59 tambm so suscetveis destruio pela ativao espontnea da cascata do complemento.

Resumo
O sistema do complemento um dos principais mecanismos pelo qual o reconhecimento do antgeno convertido em uma defesa efetiva contra uma infeco inicial. O complemento um sistema de protenas plasmticas que pode ser ativado diretamente pelos patgenos ou indiretamente por anticorpos unidos aos patgenos, levando a uma cascata de reaes que ocorrem na superfcie dos patgenos e que gera componentes ativos com vrias funes efetoras. Existem trs vias de ativao do complemento: a via clssica, que ativada por patgenos ou indiretamente por anticorpos unidos superfcie dos patgenos; a via da MB-lectina e a via alternativa, que fornecem uma opo de amplificao para as outras duas vias. As trs vias podem ser iniciadas independentemente de anticorpos, como parte da imunidade inata. Os eventos iniciais em todas as vias consistem em uma sequncia de reaes de clivagem na qual o maior produto da clivagem se liga covalentemente superfcie do patgeno e contribui

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para a ativao do prximo componente. As vias convergem com a formao de uma enzima C3 convertase, que cliva o C3 para produzir o componente ativo do complemento, o C3b. A ligao de um grande nmero de molculas de C3b ao patgeno o evento central na ativao do complemento. Os componentes do complemento ligado, especialmente o C3b ligado e seus fragmentos inativos, so reconhecidos por receptores de complemento especficos das clulas fagocticas, que englobam os patgenos opsonizados pelo C3b e seus fragmentos inativos. Os fragmentos pequenos de clivagem do C3, C4 e especialmente C5 recrutam fagcitos aos stios de infeco e os ativam pela ligao a receptores especficos trimricos acoplados protena G. Essas atividades promovem a captao e a destruio dos patgenos pelos fagcitos. As molculas de C3b que se ligam C3 convertase iniciam os eventos tardios, com a ligao ao C5, tornando-o suscetvel clivagem por C2a ou Bb. O fragmento maior, C5b, desencadeia a reunio de um complexo de ataque membrana, que pode resultar na lise de certos patgenos. A atividade dos componentes do complemento modulada por um sistema de protenas reguladoras que impede a leso tecidual, como resultado da ligao inadvertida de componentes ativados do complemento s clulas do hospedeiro ou da ativao espontnea dos componentes do complemento no plasma.

Respostas inatas induzidas por infeco


Nesta ltima parte do captulo, veremos as respostas induzidas da imunidade inata. Essas respostas dependem de citocinas e quimiocinas que so produzidas em resposta ao reconhecimento dos patgenos e sero apresentadas em primeiro lugar. As quimiocinas so uma grande famlia de molculas quimioatraentes com um papel fundamental na migrao dos leuccitos. Assim como as molculas de adeso, elas tambm possuem um papel central nesse processo e sero aqui descritas brevemente. A seguir, descreveremos como as citocinas e as quimiocinas derivadas dos macrfagos promovem a resposta fagoctica por meio do recrutamento e da produo de novos fagcitos e molculas opsonizantes, ao mesmo tempo que contm a disseminao da infeco sistmica por meio da ativao dos mecanismos de coagulao. Tambm veremos o papel das citocinas conhecidas como interferons, as quais so induzidas pela infeco viral, e de uma classe de clulas linfoides, conhecidas como clulas NK ou matadoras naturais (natural killer), que so ativadas pelos interferons e que contribuem na defesa inata do hospedeiro contra vrus e outros patgenos intracelulares. Discutiremos tambm os linfcitos semelhantes ao inato (ILLs) que contribuem para as rpidas respostas contra a infeco atuando precocemente, mas que usam um grupo limitado de segmentos gnicos de receptores de antgeno (ver Seo 1-11) para produzir imunoglobulinas e receptores de clulas T. A resposta imune induzida pode, tambm, ter sucesso na eliminao da infeco ou cont-la enquanto a resposta adaptativa se desenvolve. A imunidade adaptativa acentua vrios mecanismos efetores similares usados na resposta inata, mas capaz de direcion-los com maior preciso. Assim, clulas T antgeno-especficas ativam as propriedades microbicidas e de secreo das citocinas de macrfagos portadores de patgenos, ao passo que anticorpos ativam o complemento, atuando como opsoninas diretas para os fagcitos e estimulando as clulas NK a matar as clulas infectadas. Alm disso, a resposta imune adaptativa usa as citocinas e as quimiocinas, de maneira semelhante imunidade inata, na induo da resposta inflamatria que promove o influxo de anticorpos e de linfcitos efetores aos locais de infeco. Os mecanismos efetores descritos aqui atuam como os iniciadores para eventos posteriores da imunidade adaptativa.

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2-23 Os macrfagos ativados secretam diversas citocinas que tm uma variedade de efeitos locais e distantes
As citocinas (ver Apndice III) so pequenas protenas (~25 kDa) liberadas por vrias clulas do organismo, normalmente em resposta a um estmulo ativador, e induzem respostas por meio da ligao a receptores especficos. Podem atuar de forma autcrina, afetando o comportamento das clulas que liberam as citocinas, ou de forma parcrina, afetando o comportamento das clulas adjacentes. Algumas citocinas so estveis o suficiente para atuar de maneira endcrina, afetando o comportamento de clulas distantes, embora isso dependa de sua capacidade de entrar na circulao e de sua meia-vida sangunea. As citocinas secretadas pelos macrfagos, em resposta aos patgenos, so um grupo de molculas estruturalmente diversas que incluem a interleucina-1 (IL-1), IL-6, IL-12, TNF- e a quimiocina CXCL8 (formalmente conhecida como IL-8). O nome interleucina (IL), seguido por um nmero (p. ex., IL-1, IL-2, e assim por diante), foi criado em uma tentativa de padronizar a nomenclatura para as molculas secretadas que atuam nos leuccitos. Entretanto, isto se tornou confuso quando um nmero cada vez maior de citocinas com origem, estrutura e efeitos diversos foram descobertas; embora a designao IL ainda seja usada, espera-se que, eventualmente, uma nomenclatura com base na estrutura das citocinas seja desenvolvida. As citocinas e seus receptores so agrupados de acordo com sua estrutura nos apndices do final deste livro (Apndice III). H duas principais famlias estruturais de citocinas: a famlia das hematopoietinas, que inclui os hormnios de crescimento e muitas interleucinas com funes tanto na imunidade inata quanto na adaptativa, e a famlia do TNF, o qual o prottipo o TNF-, os quais tambm atuam na imunidade inata e na adaptativa e incluem muitos membros ligados membrana. Entre as interleucinas derivadas de macrfagos, a IL-6 pertence grande famlia das hematopoietinas, o TNF- obviamente pertence famlia do TNF, e a IL-1 e a IL-12 so estruturalmente distintas. Todas apresentam importantes efeitos locais e sistmicos que contribuem para a imunidade inata e a adaptativa e esto resumidas na Figura 2.44. O reconhecimento de diversas classes de patgenos por fagcitos e clulas dendrticas podem envolver a sinalizao atravs de vrios receptores, como os diversos TLRs, e resultarem em algumas variaes na induo de citocinas. Esse o caminho pelo qual uma resposta apropriada pode ser seletivamente ativada com a liberao orquestrada de citocinas para a prxima fase da defesa do hospedeiro. Veremos como o TNF-, o qual induzido por patgenos carregadores de LPS, particularmente importante na conteno da infeco por esses patgenos, e como a liberao de diferentes citocinas pode recrutar e ativar diferentes tipos de clulas efetoras.

2-24 As quimiocinas liberadas por fagcitos e clulas dendrticas recrutam clulas para os locais de infeco
Entre as citocinas liberadas no tecido infectado nas fases iniciais da infeco, esto os membros da famlia das citocinas quimioatraentes conhecidas como quimiocinas (listadas separadamente no Apndice IV). Essas pequenas protenas recentemente descobertas induzem quimiotaxia direta nas clulas responsivas da vizinhana. Devido ao fato de terem sido descobertas em ensaios para citocinas, elas foram inicialmente chamadas de interleucinas. A interleucina-8 (agora conhecida como CXCL8) foi a primeira quimiocina a ser clonada e caracterizada, permanecendo tpica dessa famlia. Todas as quimiocinas esto relacionadas em suas sequncias de aminocidos, e seus receptores so todos protenas integrais de membrana, contendo sete hlices transmembrnicas, que sinalizam atravs de um par de protenas G. A estrutura atmica do receptor de quimiocina ainda no foi determinado, porm so similares a outros receptores de protena G aos pares com sete hlices como a rodopsina (Figura 2.45) e o receptor acetilcolina

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Os macrfagos ativados secretam vrias toxinas

IL-1

TNF-

IL-6 Efeitos locais

CXCL8

IL-12

Ativa o endotlio vascular Ativa linfcitos Destruio local de tecido Aumenta o acesso de clulas efetoras

Ativa o endotlio vascular e aumenta a permeabilidade dos vasos, o que leva entrada aumentada de IgG, complemento e clulas, alm de incrementar a drenagem de lquidos para os linfonodos Efeitos sistmicos

Ativao de linfcitos Produo de anticorpo aumentada

O fator quimiottico recruta neutrfilos, basfilos e clulas T para o local de infeco

Ativa clulas NK Induz a diferenciao de clulas T CD4 em clulas TH1

Febre Produo de IL-6

Febre Mobilizao de metablitos Choque

Febre Induz a produo de protena de fase aguda

Figura 2.44 Importantes citocinas secretadas pelos macrfagos em resposta a produtos bacterianos incluem IL-1, IL-6, CXCL8, IL-12 e TNF-. O TNF- um indutor de resposta inflamatria local que ajuda a conter as infeces. Ele tambm demonstra efeitos sistmicos, muitos dos quais so prejudiciais (ver Seo 2-27). A quimiocina CXCL8 tambm est envolvida na resposta inflamatria local, auxiliando o recrutamento de neutrfilos para os locais de infeco. A IL-1, a IL-6 e o TNF- desempenham um papel crtico na induo da resposta de fase aguda no fgado (ver Seo 2-26) e induzem febre, o que favorece a defesa efetiva do hospedeiro de vrios modos. A IL-12 ativa as clulas NK e favorece a diferenciao das clulas T CD4 em TH1 durante a imunidade adaptativa.

muscarnico. As quimiocinas atuam principalmente como quimioatraentes para leuccitos, recrutando moncitos, neutrfilos e outras clulas efetoras do sangue para os locais de infeco. Elas podem ser liberadas por diferentes tipos celulares e servem para guiar as clulas envolvidas na imunidade inata aos locais de infeco. Elas direcionam os linfcitos na imunidade adaptativa, como veremos nos captulos 8-10. Algumas quimiocinas atuam no desenvolvimento e na migrao dos linfcitos e na angiognese (crescimento de novos vasos sanguneos). As propriedades de uma variedade de quimiocinas esto descritas na Figura 2.46 (ver tambm Apndice IV). Ainda no se sabe por que as quimiocinas so muitas, mas isso pode refletir sua importncia no direcionamento das clulas para sua correta localizao, como parece ser o caso dos linfcitos. Os membros da famlia das quimiocinas pertencem a dois grandes grupos: as quimiocinas CC, com duas cistenas adjacentes prximas poro aminoterminal, e as quimiocinas CXC, nas quais dois resduos de cistena equivalentes esto separados por um aminocido qualquer. Os dois grupos de quimiocinas atuam em diferentes grupos de receptores. As quimiocinas CC ligam-se aos receptores de quimiocinas CC, que at o momento so nove, designados CCR19. As quimiocinas CXC ligam-se a receptores CXC, que at o momento so seis, CXCR1-6. Esses receptores so expressos em diferentes tipos celulares, os quais so consequentemente atrados por diferentes quimiocinas. Em geral, as quimiocinas CXC com um motivo tripeptdeo Glu-Leu-Arg (ELR) imediatamente antes da primeira cistena promovem a migrao de neutrfilos. A CXCL8 um exemplo desse tipo de quimiocina. Outras quimiocinas CXC que no possuem esse motivo, como a quimiocina de linfcito B (CXCL13), dirigem os linfcitos ao seu destino apropriado nas reas de clulas B do bao, dos linfonodos e do intestino. As quimiocinas CC promovem a migrao de moncitos, de linfcitos e de ou-

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tros tipos celulares. Um exemplo a protena quimioatraente de macrfagos-1 (CCL2). A CXCL8 e a CCL2 tm funes similares, embora complementares. A CXCL8 induz os neutrfilos a deixarem a circulao sangunea e migrarem para os tecidos adjacentes. A CCL2 atua nos moncitos, induzindo sua migrao da circulao sangunea para se tornarem macrfagos teciduais. Outras quimiocinas CC, tais como o CCL5, podem promover a infiltrao de uma variedade de leuccitos para os tecidos, incluindo as clulas T efetoras (ver Seo 10-6), com determinadas quimiocinas atuando em diferentes subpopulaes celulares. A nica quimiocina com apenas uma cistena conhecida (XCL1) foi originalmente denominada linfotactina e parece atrair precursores de clulas T para o timo pela ligao ao XCR1. A quimiocina fractalquina pouco comum em vrios aspectos: possui trs resduos de aminocidos entre duas cistenas, tornando-a uma quimiocina CX3CL. Em geral, ocorre em duas formas uma imersa na membrana de clulas endoteliais e epiteliais que as expressam, onde atuam como protenas de adeso, e na forma solvel liberada na superfcie celular, que atua, como as outras quimiocinas, como um quimioatraente. O papel das quimiocinas, como CXCL8 e CCL2, no recrutamento celular duplo. Primeiro, elas atuam no rolamento dos leuccitos ao longo das clulas endoteliais nos locais de inflamao, convertendo esse rolamento em uma ligao estvel pela induo de uma mudana conformacional nas molculas de adeso conhecidas como integrinas de leuccitos. Isso permite que os leuccitos atravessem a parede dos vasos sanguneos, infiltrando-se entre as clulas endoteliais, como veremos quando descrevermos o processo de extravasamento. Segundo, as quimiocinas direcionam a migrao dos leuccitos atravs de um gradiente de molculas de quimiocina ligadas matriz extracelular e superfcie das clulas endoteliais. Esse gradiente aumenta de concentrao na direo do local da infeco. As quimiocinas podem ser produzidas por uma grande variedade de tipos celulares em resposta a produtos bacterianos, vrus e agentes que causam danos fsicos, como slica, alume ou cristais de urato, que ocorrem na gota. Dessa forma, a infeco ou o dano fsico aos tecidos ativa a produo de quimiocinas e esse gradiente que pode direcionar os fagcitos para locais onde eles sero necessrios. Alm disso, os peptdeos que atuam como quimioatraentes para neutrfilos so produzidos pelas prprias bactrias. O peptdeo fMLP produzido por bactrias um potente fator quimiottico de clulas inflamatrias, especialmente neutrfilos (ver Seo 2-6). O receptor fMLP , tambm, um receptor acoplado protena G, como os receptores para as quimiocinas e para os fragmentos do complemento C5a, C3a e C4a. Dessa forma, h um mecanismo comum para a atrao dos neutrfilos, seja pelo complemento, pelas quimiocinas ou pelos peptdeos bacterianos. Os neutrfilos so as primeiras clulas a chegarem em grande nmero aos locais de infeco; em seguida, so recrutados os moncitos e as clulas dendrticas imaturas. O peptdeo C5a do complemento e as quimiocinas CXCL8 e CCL2 tambm ativam suas respectivas clulas-alvo, tanto que no so somente os neutrfilos e os macrfagos que so direcionados para os potenciais locais de infeco, mas, no processo, eles so preparados para enfrentar qualquer patgeno que possam encontrar no local. Os neutrfilos expostos ao CXCL8 e citocina TNF- so ativados e realizam respirao oxidativa, que gera radicais de oxignio e xido ntrico liberando o contedo de seus grnulos lisossmicos. Isso contribui tanto para a defesa do hospedeiro quanto para a destruio do tecido e a formao do pus, observado nos locais de infeco, principalmente por bactrias piognicas. As quimiocinas no atuam sozinhas no recrutamento celular. Elas tambm requerem a ao de mediadores vasoativos, para recrutar os leuccitos para as proximidades do endotlio vascular (ver Seo 2-5), e de citocinas, como TNF-, para

Figura 2.45 As quimiocinas so uma famlia de protenas de estrutura similar que se ligam a receptores de quimiocinas, as quais so parte de uma grande famlia de receptores acoplados protena G. As quimiocinas so uma grande famlia de pequenas protenas representadas aqui pela CXCL8 (a molcula no topo). Os receptores para as quimiocinas so membros de uma grande famlia de receptores de sete alas, os quais tambm incluem a protena rodopsina, que um fotorreceptor, e muitos outros. Eles possuem sete hlices transmembrana, e todos os membros dessa famlia interagem com a protena G. A nica estrutura determinada de protena de membrana de sete hlices a da protena bacteriana bacteriorrodopsina e est representada na estrutura inferior, onde mostrada a orientao das sete hlices transmembrana (azul) com o seu ligante ligado (neste caso, o retinol) em vermelho. Essencialmente, toda esta estrutura fica imersa na membrana celular. Os cilindros representam as hlices , e as setas, as fitas .

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induzir as molculas de adeso necessrias nas clulas endoteliais. Retornaremos com as quimiocinas nos prximos captulos, quando sero discutidas no contexto da resposta imune adaptativa. Agora veremos as molculas que medeiam a adeso dos leuccitos ao endotlio e, ento, descreveremos passo a passo o processo de extravasamento que ocorre com neutrfilos e moncitos.

Classe

Quimiocina

Produzida por Receptores Atrai Moncitos Macrfagos Fibroblastos Queratincitos Clulas endoteliais Plaquetas Moncitos Fibroblastos Endotlio Queratincitos Moncitos Clulas T Fibroblastos Endotlio Clulas estromais Clulas estromais Moncitos Clulas T Mastcitos Fibroblastos Moncitos Macrfagos Neutrfilos Endotlio Moncitos Macrfagos Fibroblastos Queratincitos Clulas T Endotlio Plaquetas Endotlio Moncitos Epitlio Clulas T

Principal efeito Mobiliza, ativa e degranula os neutrfilos Angiognese

CXCL8 (IL-8)

CXCR1 CXCR2

Neutrfilos Clulas T virgens

CXCL7 (PBP, -TG NAP-2) CXC CXCL1 (GRO) CXCL2 (GRO) CXCL3 (GRO)

CXCR2

Neutrfilos Neutrfilos Clulas T virgens Fibroblastos Clulas T em repouso Clulas NK Moncitos Clulas T virgens Progenitoras de clulas B (CD34+) Clulas B Moncitos Clulas T e NK Basfilos Clulas dendrticas Moncitos Clulas T e NK Clulas dendrticas Moncitos Clulas T e NK Basfilos Clulas dendrticas Moncitos Clulas T e NK Basfilos Eosinfilos Clulas dendrticas Eosinfilos Moncitos Clulas T

Ativa neutrfilos Reabsoro de cogulos Angiognese Ativa neutrfilos Fibroplasia Angiognese Imunoestimulante Antiangiognico Promove a imunidade por TH1 Clula B em desenvolvimento Alojamento dos linfcitos Compete com o HIV-1 Alojamento dos linfcitos Compete com o HIV Defesa antiviral Promove a imunidade por TH1

CXCR2

CXCL10 (IP-10)

CXCR3

CXCL12 (SDF-1)

CXCR4

CXCL13 (BLC)

CXCR5

CCL3 (MIP-1)

CCR1, 3, 5

Figura 2.46 Propriedades de algumas quimiocinas selecionadas. As quimiocinas classificam-se basicamente em dois grupos relacionados, porm distintos. As quimiocinas CXC, cujos genes no homem esto localizados principalmente agrupados no cromossoma 17, possuem um resduo de aminocido (X) entre duas cistenas (C) invariveis na regio aminoterminal. As quimiocinas CC, que no homem so codificadas em sua maioria em uma regio do cromossoma 4, possuem duas cistenas invariveis adjacentes. Essas classes podem ser posteriormente divididas pela presena ou ausncia de um aminocido terminal em triplet (ELR, cido glutmico, leucina e arginina) precedendo a primeira destas cistenas invariveis. Todas as quimiocinas que atraem neutrfilos possuem esse motivo, ao passo que a maioria das quimiocinas CXC, incluindo aquelas que interagem com receptores CXCR3, 4 e 5, no apresentam esse motivo. A quimiocina C, com apenas uma cistena nesta localizao, e a fractalquina, uma quimiocina CX3C, esto codificadas em outras localizaes do genoma. Cada quimiocina interage com um ou mais receptores e afeta um ou mais tipos celulares. Uma lista completa das quimiocinas e de seus receptores apresentada no Apndice IV.

CCL4 (MIP-1)

CCR1, 3, 5

Compete com o HIV

CC

CCL2 (MCP-1)

CCR2B

Ativa macrfagos Liberao de histamina pelos basfilos Promove a imunidade TH2 Degranula basfilos Ativa clulas T Inflamao crnica

CCL5 (RANTES)

CCR1, 3, 5

CCL11 (Eotaxina)

CCR3

Papel na alergia

CCL18 (DC-CK) Clulas dendrticas C XCL1 (Linfotactina) CD8>CD4 Clulas T Moncitos Endotlio Clulas da micrglia

Clulas T virgens Timcitos Clulas dendrticas Clulas NK Moncitos Clulas T

Papel na ativao das clulas T virgens Trnsito e desenvolvimento dos linfcitos Adeso leuccito-endotlio Inflamao no crebro

CXCR1

CXXXC (CX3C)

CX3CL1 (Fractalquina)

CX3CR1

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2-25 As molculas de adeso celular controlam as interaes entre os leuccitos e as clulas endoteliais durante uma resposta inflamatria
O recrutamento dos fagcitos ativados para os locais de infeco uma das funes mais importantes da imunidade inata. O recrutamento ocorre como parte da resposta inflamatria e mediado pelas molculas de adeso clula-clula que so induzidas na superfcie do endotlio dos vasos sanguneos locais. Antes de considerarmos o processo de recrutamento de clulas inflamatrias, descreveremos algumas molculas de adeso celular envolvidas. Como os componentes do complemento, uma barreira significativa ao entendimento das molculas de adeso celular a sua nomenclatura. A maioria das molculas de adeso celular, principalmente aquelas dos leuccitos, que so relativamente fceis de serem analisadas funcionalmente, foram denominadas de acordo com seu anticorpo monoclonal especfico e somente depois foram caracterizadas por clonagem gnica. Portanto, seus nomes no apresentam nenhuma relao com sua estrutura; por exemplo, os antgenos funcionais leucocitrios, LFA-1, LFA-2 e LFA-3, so membros de duas famlias diferentes de protenas. Na Figura 2.47, as molculas de adeso esto agrupadas de acordo com sua estrutura molecular, a qual mostrada de forma esquemtica, juntamente com seus diferentes nomes, locais de expresso e ligantes. Trs famlias de molculas de adeso so importantes para o recrutamento dos leuccitos. As selectinas so glicoprotenas de membrana com um domnio distal semelhante lectina que se liga a grupos de carboidratos especficos. Os membros desta famlia so induzidos no endotlio ativado e iniciam as interaes leuccito:endotlio ligando-se a ligantes oligossacardeos fucosilados nos leuccitos (ver Figura 2.47). O prximo passo no recrutamento dos leuccitos depende de uma forte adeso, a qual devida ligao das molculas de adeso intercelulares (ICAMs) do

Nome

Distribuio tissular
Endotlio ativado e plaquetas

Ligante

Selectinas Ligam carboidratos. Iniciam interao leuccito:endotlio

Selectina-P

Selectina-P (PADGEM, CD62P)

Sialil-Lewisx, PSGL-1,

Selectina-E (ELAM-1, CD62E)

Endotlio ativado

Sialil-Lewisx

Integrinas
LFA-1

L:2 (LFA-1, CD11a:CD18)

Moncitos, clulas T, macrfagos, neutrfilos e clulas dendrticas Neutrfilos, moncitos e macrfagos

ICAMs

Ligam-se a molculas de adeso celular e matriz. Forte adeso

M:2 (CR3, Mac-1, CD11b:CD18)

ICAM-1, iC3b, fibrinognio iC3b Fibronectina

Clulas dendrticas, X:2 (CR4, p150.95, CD11c:CD18) macrfagos e neutrfilos 5:1 (VLA-5, CD49d:CD29) Moncitos, macrfagos Endotlio ativado Endotlio em repouso, clulas dendrticas Endotlio ativado Leuccitos ativados, junes clula-clula endoteliais

Superfamlia de imunoglobulinas
ICAM-1

ICAM-1 (CD54)

LFA-1, Mac1 LFA-1

ICAM-2 (CD102) VCAM-1 (CD106)

Vrios papis na adeso celular. Ligante para as integrinas

VLA-4

PECAM (CD31)

CD31

Figura 2.47 As molculas de adeso envolvidas nas interaes dos leuccitos. Vrias famlias estruturais de molculas de adeso atuam na migrao leucocitria, no seu alojamento e nas interaes clula-clula: as selectinas, as integrinas e as protenas da superfamlia de imunoglobulinas. A figura apresenta representaes esquemticas de um exemplo de cada famlia, uma lista de outros membros da famlia, tambm participantes das interaes leucocitrias, sua distribuio celular e seus parceiros (ligantes) nas aes de adeso. Os componentes das famlias aqui apresentados se limitam queles que participam na inflamao e em outros mecanismos imunes inatos. As mesmas molculas e outras que participam na imunidade adaptativa sero consideradas nos captulos 8 e 10. A nomenclatura das diferentes molculas destas famlias confusa porque frequentemente reflete a forma como elas foram primeiro identificadas, em vez de suas caractersticas estruturais. Nomes alternativos para cada uma dessas molculas de adeso esto entre parnteses. A sialil-Lewis*, a qual reconhecida pelas selectinas E e P, um oligossacardeo presente na superfcie celular dos linfcitos circulantes. A sulfatao pode ocorrer no sexto tomo de carbono da galactose ou no Nacetil glicosamina, mas no em ambos.

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CR3 (M:2)

Neutrfilo
LFA-1 (L:2)

ICAM-1

Endotlio

ICAM-2

Figura 2.48 A adeso dos fagcitos ao endotlio vascular mediada pelas integrinas. O endotlio vascular, quando ativado por mediadores inflamatrios, expressa duas molculas de adeso: ICAM-1 e ICAM-2. Essas so ligantes para as integrinas expressas pelos fagcitos M:2 (tambm conhecidos por CR3, Mac-1 ou CD1 1 b:CD18) e L:2 (tambm conhecidos por LFA-1 ou CD11 a:CD18).

endotlio com protenas heterodimricas da famlia das integrinas dos leuccitos. As integrinas dos leuccitos, importantes para o extravasamento, so LFA-1 (L:2, tambm conhecida como CD11a:CD18) e CR3 (M:2, receptor do complemento tipo 3, tambm conhecido como CD11b:CD18 ou Mac-1; vimos o CR3 na Seo 2-19 como um receptor para o iC3b, mas este somente um dos ligantes para essa integrina) e ambas se ligam tanto ao ICAM-1 quanto ao ICAM-2 (Figura 2.48). A forte adeso entre os leuccitos e as clulas endoteliais promovida pela induo da ICAM-1 no endotlio inflamado e pela ativao de uma mudana conformacional de LFA-1 e CR3 em resposta s quimiocinas ligadas pelos leuccitos. A importncia das integrinas dos leuccitos no recrutamento das clulas inflamatrias ilustrada pela doena da deficincia de adeso de leuccitos, causada por um defeito na cadeia 2 comum ao LFA-1 e CR3. As pessoas com essa doena sofrem de infeces bacterianas recorrentes e defeitos na cicatrizao de feridas. A ativao do endotlio dirigida por interaes com as citocinas dos macrfagos, principalmente o TNF-, que induz uma rpida externalizao dos grnulos nas clulas endoteliais chamados corpos de Weibel-Palade. Esses grnulos contm selectina-P pr-formada, a qual expressa em minutos na superfcie das clulas endoteliais locais aps a produo de TNF- pelos macrfagos. Logo aps a expresso da selectina-P na superfcie celular, o mRNA que codifica para a selectina-E sintetizado, e dentro de duas horas as clulas endoteliais esto expressando principalmente a selectina-E. Ambas as protenas interagem com o sialil-Lewisx sulfatado presente na superfcie dos neutrfilos. O endotlio em repouso possui baixos nveis de ICAM-2, aparentemente em todo o leito vascular. Este pode ser usado pelos moncitos circulantes para navegarem para fora dos vasos em direo aos seus stios nos tecidos. Essa migrao dos moncitos ocorre contnua e essencialmente de forma nica. Entretanto, sob exposio ao TNF-, a expresso local da ICAM-1 fortemente induzida no endotlio dos pequenos vasos prximos ou no foco infeccioso. A ICAM-1, por sua vez, liga-se ao LFA-1 ou ao CR3 dos moncitos circulantes e dos leuccitos polimorfonucleados, principalmente neutrfilos, como apresentado na Figura 2.48. As molculas de adeso celular desempenham muitos papis no organismo, coordenando muitos aspectos do desenvolvimento dos tecidos e rgos. Nesta breve descrio, consideraremos apenas aqueles que participam no recrutamento de clulas inflamatrias horas ou dias aps o estabelecimento de uma infeco.

2-26 Os neutrfilos constituem a primeira populao celular que atravessa as paredes dos vasos e entra nos locais de inflamao
Mudanas fsicas que acompanham o incio de uma resposta inflamatria foram descritas na Seo 2-5; aqui descreveremos passo a passo como as clulas efetoras necessrias so recrutadas aos locais de infeco. Sob condies normais, os leuccitos so mantidos no centro dos pequenos vasos sanguneos, onde o fluxo mais rpido. Nos locais de inflamao, os vasos so dilatados, e o fluxo sanguneo mais lento, permitindo que os leuccitos se movam do centro dos vasos e interajam com o endotlio vascular. Mesmo na ausncia de infeco, os moncitos migram continuamente para os tecidos, onde se diferenciam em macrfagos. Durante uma resposta inflamatria, a induo de molculas de adeso nas clulas endoteliais, pelo foco da infeco, bem como as mudanas induzidas nas molculas de adeso expressas nos leuccitos, inicialmente neutrfilos e depois os moncitos, recrutam um grande nmero de leuccitos circulantes para o local de infeco. A migrao dos leuccitos para fora dos vasos processo conhecido como extravasamento parece ocorrer em quatro etapas. Descreveremos esse processo como ocorre nos moncitos e nos neutrfilos (Figura 2.49). O primeiro passo envolve as selectinas. A selectina-P aparece na superfcie das clulas endoteliais poucos minutos aps a exposio ao leucotrieno B4, o frag-

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A adeso mediada pela selectina fraca e permite que os leuccitos rolem sobre a superfcie do endotlio vascular
Fluxo sanguneo

s-Lex

Selectina-E

Membrana basal

Adeso por rolamento

Unio forte

Diapedese

Migrao

s-Lex Selectina-E

CXCL8R (receptor de IL-8)

LFA-1(L:2) ICAM-1

CD31 Quimiocina CXCL8 (IL-8)

mento do complemento C5a, ou histamina, a qual liberada pelos mastcitos em resposta ao C5a. O aparecimento da selectina-P pode tambm ser induzido pela exposio ao TNF- ou ao LPS, e ambos tm um efeito adicional na induo da sntese de uma segunda selectina, a selectina-E, que surge algumas horas depois na superfcie das clulas endoteliais. Tais selectinas reconhecem a regio sialil-Lewisx sulfatado de certas glicoprotenas dos leuccitos expostas no pice dos microvilos dos leuccitos. A interao das selectinas P e E com essas glicoprotenas permite que os moncitos e os neutrfilos se unam de forma reversvel parede vascular, de modo que os leuccitos circulantes possam rolar sobre o endotlio tratado com citocinas inflamatrias (Figura 2.49, quadro superior). Essa interao de adeso permite uma interao mais forte do prximo passo na migrao dos leuccitos. O segundo passo depende de interaes entre as integrinas leucocitrias conhecidas como LFA-1 e CR3 e as molculas endoteliais, como a ICAM-1, tambm induzidas nas clulas endoteliais por TNF- e ICAM-2 (ver Figura 2.49, quadro inferior). A LFA-1 e o CR3 normalmente tm uma capacidade relativamente baixa de adeso, mas a CXCL8 ou outras quimiocinas, ligadas aos proteoglicanos na superfcie das clulas endoteliais, desencadeiam uma alterao conformacional em LFA-1 e CR3 no rolamento dos leuccitos, o que aumenta muito as propriedades adesivas dos neutrfilos. Como consequncia, o leuccito adere firmemente ao endotlio, e seu rolamento interrompido.

Figura 2.49 Os neutrfilos deixam o sangue e migram para os locais de infeco por um processo de vrias etapas mediado por interaes adesivas reguladas por citocinas e quimiocinas derivadas de macrfagos. A primeira etapa (quadro superior) envolve a unio reversvel dos leuccitos ao endotlio vascular por intermdio de aes entre selectinas induzidas no endotlio e seus ligantes carboidratos nos leuccitos, aqui ilustrados pela selectina-E e seu ligante, a poro sialil-Lewisx (s-Lex). Essa ligao no consegue ancorar as clulas contra a fora do fluxo sanguneo, e, em vez disso, as clulas rolam ao longo do endotlio, fazendo e desfazendo contatos continuamente. Entretanto, a ligao permite interaes mais fortes, as quais somente resultam quando se ligam a citocinas como a CXCL8 em seu receptor especifico no neutrfilo, disparando a ativao das integrinas LFA-1 e CX3 (Mac-1) (no mostrado). Citocinas inflamatrias como o TNF- so tambm necessrias para induzir a expresso de molculas de adeso como ICAM-1 e ICAM-2, o ligante dessa integrina, no endotlio vascular. A ligao ajustada entre o ICAM-1e a integrina mantm o rolamento e permite que o neutfilo se mantenha comprimido entre as clulas do endotlio que formam a parede nos vasos sanguneos (extravasamento). As integrinas leucocitrias LFA-1 e CR3 so necessrias ao extravasamento e migrao em direo a substncias quimioatraentes. A adeso entre molculas de CD31, expressas tanto no leuccito como na juno das clulas endoteliais, tambm parece contribuir para o extravasamento. O neutrfilo tambm precisa atravessar a membrana basal; ele a penetra com o auxlio de enzimas metaloproteinases de matriz expressa na superfcie celular. Finalmente, o leuccito migra de acordo com um gradiente de concentrao de quimiocina (aqui ilustrada como CXCL8) secretada pelas clulas no local da infeco. A microfotografia eletrnica mostra um neutrfilo extravasando entre duas clulas endoteliais. A seta azul indica o pseudpodo do neutrfilo que est inserindo entre as clulas endoteliais. (Fotografia [x 5.500] cortesia de I. Bird e J. Spragg.)

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Na terceira fase, o leuccito extravasa ou cruza a parede endotelial. Essa etapa tambm envolve as integrinas leucocitrias LFA-1 e CR3, bem como uma interao adesiva posterior, dessa vez envolvendo uma molcula relacionada s imunoglobulinas, chamada PECAM ou CD31, expressa tanto nos leuccitos quanto nas junes intercelulares das clulas endoteliais. Essas interaes permitem finalmente que o fagcito passe entre as clulas endoteliais. Ele, ento, penetra na membrana basal com o auxlio de enzimas proteolticas que degradam as protenas da matriz extracelular da membrana basal. O movimento atravs da parede vascular um processo conhecido como diapedese, que permite que os fagcitos entrem nos tecidos subendoteliais. O quarto e ltimo passo o extravasamento a migrao dos leuccitos atravs dos tecidos sob a influncia das quimiocinas. As quimiocinas, como a CXCL8 e a CCL2 (ver Seo 2-24), so produzidas nos locais de infeco e se ligam aos proteoglicanos na matriz extracelular e em molculas similares na superfcie das clulas endoteliais. Isso forma um gradiente de concentrao de quimiocinas associado matriz em uma superfcie slida ao longo da qual os leuccitos podem migrar para o foco da infeco (ver Figura 2.49). A CXCL8 liberada pelos macrfagos que encontram os patgenos e recruta neutrfilos, os quais penetram no tecido infectado em grande nmero no incio da resposta induzida. Esse influxo normalmente atinge o mximo nas primeiras seis horas da resposta inflamatria, ao passo que os moncitos podem ser recrutados mais tarde, por meio da ao de quimiocinas, como a CCL2. Uma vez no stio inflamatrio, os neutrfilos so capazes de eliminar muitos patgenos por meio da fagocitose. Eles atuam como fagcitos efetores na resposta imune inata por meio de receptores que opsonizam ou capturam agentes infecciosos e seus componentes derivados por meio do reconhecimento imune inato, bem como pelo reconhecimento direto dos patgenos. Alm disso, como veremos no captulo 9, os neutrfilos atuam como fagcitos efetores na imunidade adaptativa humoral. A importncia dos neutrfilos ilustrada por doenas ou tratamentos que reduzem severamente o seu nmero. Esses pacientes apresentam neutropenia e so muito suscetveis s infeces por numerosos patgenos e organismos comensais. Restaurando-se os nveis de neutrfilos nesses pacientes, pela transfuso de fraes sanguneas ricas em neutrfilos ou simplesmente pela estimulao de sua produo por fatores de crescimento especficos, pode-se corrigir essa suscetibilidade.

2-27 O fator de necrose tumoral- uma citocina importante que ativa a conteno local da infeco, mas induz choque quando liberada sistemicamente
Os mediadores inflamatrios tambm estimulam as clulas endoteliais a expressarem protenas que ativam a coagulao sangunea em pequenos vasos locais, obstruindo-os e interrompendo o fluxo sanguneo. Isso pode ser importante na tentativa de impedir que o agente infeccioso entre na corrente circulatria e se dissemine para os rgos do corpo atravs da circulao. Em vez disso, o fluido que vazou para os tecidos nas fases iniciais da infeco transporta o patgeno na linfa, normalmente nas clulas dendrticas, para os linfonodos regionais, onde a resposta imune adaptativa pode ser iniciada. A importncia do TNF- na conteno da infeco localizada ilustrada por experimentos nos quais coelhos so infectados localmente com uma bactria. Normalmente, a infeco contida no local de inoculao, mas, se tambm for administrada uma injeo de anticorpo anti-TNF-, para bloquear a ao do TNF-, a infeco se espalha para outros rgos atravs do sangue. Uma vez que a infeco se dissemina para a corrente sangunea, os mesmos mecanismos pelos quais o TNF- contm a infeco local com tanta eficincia se tornam catastrficos (Figura 2.50). A presena de infeco na corrente sangunea, ou sepse, acompanhada pela liberao de TNF- pelos macrfagos no fgado,

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no bao e em outros locais sistmicos. A liberao sistmica de TNF- causa vasodilatao, que leva perda da presso sangunea, aumento da permeabilidade vascular, levando perda do volume plasmtico e eventualmente ao choque. No choque sptico, a coagulao intravascular disseminada (coagulao sangunea) igualmente ativada pelo TNF-, levando formao de cogulos nos pequenos vasos e ao grande consumo de protenas da coagulao, de modo que o paciente perde a capacidade de coagular o sangue de forma adequada. Essa condio frequentemente leva falncia de rgos vitais, como rins, fgado, corao e pulmes, que ficam rapidamente comprometidos pela insuficincia de perfuso normal. Consequentemente, o choque sptico apresenta um elevado ndice de mortalidade.

Infeco local com bactrias Gram-negativas Liberao local de TNF- pelos macrfagos ativados

Infeco sistmica com bactrias Gram-negativas (sepse) Liberao sistmica de TNF- pelos macrfagos ativados do fgado e bao

Liberao aumentada de protenas plasmticas nos tecidos. Migrao aumentada de fagcitos e linfcitos nos tecidos. Aderncia plaquetria aumentada parede dos vasos sanguneos

Edema sistmico causando volume sanguneo diminudo, hipoproteinemia e neutropenia, seguida por neutrofilia. O volume sanguneo reduzido causa colapso dos vasos

Fagocitose de bactrias Ocluso vascular local, plasma e clulas drenam para os linfonodos locais

Coagulao intravascular disseminada, levando falncia de mltiplos rgos

Remoo da infeco Imunidade adaptativa

Morte

Figura 2.50 A liberao de TNF- pelos macrfagos induz efeitos locais protetores, mas o TNF- pode ter efeitos prejudiciais quando liberado sistemicamente. Os quadros esquerda mostram as causas e as consequncias da liberao local de TNF-; os quadros direita mostram as causas e as consequncias da liberao sistmica.Tanto os quadros da direita como os da esquerda mostram os efeitos comuns do TNF-, que atua nos vasos sanguneos, especialmente nas vnulas, aumentando o fluxo de sangue, a permeabilidade a lquidos, protenas e clulas, e a adesividade endotelial de leuccitos e plaquetas (painel central). A liberao local permite, assim, um influxo de lquidos, de protenas e de clulas ao tecido infectado, com participao na defesa do hospedeiro. Mais tarde, os pequenos vasos se fecham (ltimo painel esquerda), prevenindo a disseminao da infeco para o sangue, e o lquido drena para os linfonodos regionais, onde se inicia a resposta imune adaptativa. Se existir uma infeco sistmica ou sepse, com bactrias que induzem produo de TNF-, o TNF- liberado na circulao sangunea pelos macrfagos no fgado e no bao e atua de maneira semelhante em todos os vasos sanguneos pequenos (ltimo painel direita). O resultado o choque, a coagulao intravascular disseminada com depleo dos fatores de coagulao e consequente hemorragia, a falncia mltipla de rgos e, frequentemente, a morte.

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Figura 2.51 As citocinas TNF-, IL-1 e IL-6 tm um amplo espectro de atividades biolgicas que auxiliam a coordenar as respostas do organismo contra a infeco. A IL-1, a IL-6 e o TNF- ativam os hepatcitos para sintetizar as protenas da fase aguda, e o endotlio da medula ssea, para liberar neutrfilos. As protenas da fase aguda atuam como opsoninas, ao passo que a eliminao de patgenos opsonizados aumentada pelo recrutamento reforado dos neutrfilos da medula ssea. A IL-1, a IL-6 e o TNF- tambm so pirgenos endgenos, elevando a temperatura corporal; acredita-se que isso ajude a eliminar as infeces. Um importante efeito dessas citocinas sua ao sobre o hipotlamo, alterando a regulao da temperatura corporal, e sobre as clulas musculares e adiposas, alterando a mobilizao de energia para aumentar a temperatura corporal. Em temperaturas elevadas, as replicaes bacteriana e viral so reduzidas, e a resposta imune adaptativa atua mais eficientemente.

IL-1/IL-6/TNF-

Fgado Protenas de fase aguda (protena C reativa, Lectina ligadora de manose)

Endotlio da medula ssea Mobilizao de neutrfilos

Hipotlamo Temperatura corporal aumentada

Gordura, msculo Mobilizao de protena e de energia para permitir o aumento da temperatura corporal

Clulas dendrticas O TNF- estimula a migrao aos linfonodos e a maturao

Ativao do complemento Opsonizao

Fagocitose

Replicao viral e bacteriana diminuda Processamento de antgeno aumentado Resposta imune especfica aumentada

Incio da resposta imune adaptativa

Camundongos com o gene mutante para o receptor do TNF- so resistentes ao choque sptico, mas, por outro lado, so incapazes de controlar a infeco local. As caractersticas que tornam o TNF- to valioso no controle da infeco local so precisamente aquelas que lhe permitem desempenhar um papel central na patognese do choque sptico. claro que, do ponto de vista da conservao evolutiva do TNF-, seus benefcios sobrepujam as consequncias devastadoras de sua liberao sistmica.

2-28 As citocinas liberadas pelos macrfagos ativam a resposta de fase aguda


Alm de seus importantes efeitos locais, as citocinas produzidas pelos macrfagos apresentam efeitos distncia, que contribuem para a defesa do hospedeiro. Um desses efeitos a elevao da temperatura corporal, mediada por TNF-, IL-1 e IL-6. Esses so denominados pirgenos endgenos, pois causam febre e derivam de uma fonte endgena, e no de componentes bacterianos como o LPS, o qual um pirgeno exgeno. Os pirgenos endgenos causam febre por induzir a sntese de prostaglandinas E2 pela enzima cicloxigenase-2, a expresso na qual induzida por essas citocinas. A prostaglandina-2, ento, atua no hipotlamo, resultando em aumento da produo de calor pelo tecido adiposo marrom e aumento da vasoconstrio, diminuindo a temperatura atravs da perda do excesso de calor atravs da pele. Os pirgenos exgenos so capazes de induzir febre por induo da produo de pirgenos endgenos e, tambm, pela induo direta da cicloxigenase-2, como consequncia da sinalizao atravs do TLR-4, que leva produo da prostaglandina E2. A febre geralmente benfica para a defesa do hospedeiro. A maioria dos patgenos cresce melhor em baixas temperaturas, e as respostas imune adaptativas so mais intensas em temperaturas mais elevadas. As clulas do hospedeiro tambm so protegidas dos efeitos deletrios do TNF- em temperaturas elevadas. A Figura 2.51 resume os efeitos de TNF-, IL-1 e IL-6. Um dos efeitos mais importantes o incio de uma reao conhecida como resposta de fase aguda (Figura 2.52). Essa reao envolve uma alterao na sntese de protenas secretadas pelo fgado no plasma sanguneo e resultam da ao de IL-1, IL-6 e TNF- nos hepatcitos. Na resposta de fase aguda, os nveis de algumas protenas plasmticas caem, ao passo que os de outras aumentam marcadamente. As protenas cuja sntese induzida por TNF-, IL-1 e IL-6 so chamadas protenas de fase aguda. Algumas dessas protenas so de especial interesse porque mimetizam a ao dos anticorpos, mas, ao contrrio deles, essas protenas tm ampla especificidade para padres moleculares associados aos patgenos (PAMPs) e dependem somente da presena das citocinas para sua produo.

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As bactrias induzem os macrfagos a produzirem IL-6, que age sobre os hepatcitos, levando-os a sintetizarem protenas de fase aguda
IL-6 SP-A SP-D Fgado Lectina ligadora de manose Fibrinognio Protena Protena C reativa amiloide srica

A protena C reativa liga a fosforilcolina sobre as superfcies bacterianas, agindo como uma opsonina e tambm ativando o complemento

A lectina ligadora de manose liga resduos de manose sobre as superfcies bacterianas, agindo como uma opsonina e tambm ativando o complemento

Protena amiloide srica

Uma dessas protenas a protena C reativa um membro da famlia de protenas das pentraxinas, assim denominadas porque so formadas por cinco subunidades idnticas. A protena C reativa outro exemplo de uma molcula que reconhece patgenos e se liga poro fosfocolina de certos lipopolissacardeos da parede celular de bactrias e de fungos. A fosfocolina tambm encontrada em fosfolipdeos da membrana celular de mamferos, embora em uma forma que no pode ligar-se protena C reativa. Quando a protena C reativa se liga a uma bactria, ela capaz no apenas de opsoniz-la, como tambm de ativar a cascata do complemento pela ligao com o C1q, o primeiro componente da via clssica de ativao do complemento, como aprendemos na Seo 2-13. A interao com o C1q envolve as partes semelhantes ao colgeno do C1q, ao invs do contato da cabea globular superfcie dos patgenos; no entanto, a mesma cascata de reaes iniciada. A segunda protena de fase aguda de interesse a lectina ligadora de manose, que j foi vista como uma molcula ligadora de patgenos (ver Figura 2.15) e como ativadora da cascata do complemento (ver Seo 2-14). A lectina ligadora de manose encontrada no soro normal em baixos nveis, mas tambm produzida em quantidades aumentadas durante a resposta de fase aguda. Ela atua como uma opsonina para os moncitos, os quais, ao contrrio dos macrfagos teciduais, no expressam o receptor manose dos macrfagos. Duas outras protenas com propriedades opsonizantes que so produzidas pelo fgado em quantidades crescentes durante a resposta de fase aguda so as protenas surfactantes pulmonares SP-A e SP-D (ver Seo 2-6). Estas so encontradas juntamente com os macrfagos no fluido alveolar dos pulmes e so importantes para promover a fagocitose de patgenos respiratrios, como o Pneumocystis carinii um dos principais causadores de pneumonia em pacientes com AIDS. Dessa forma, dentro de um ou dois dias, a resposta de fase aguda fornece ao hospedeiro duas protenas com propriedades funcionais de anticorpo, capazes de li-

Figura 2.52 A resposta de fase aguda produz molculas que se ligam a bactrias, mas no a clulas do hospedeiro. As protenas da fase aguda so produzidas pelas clulas hepticas em resposta IL-6 liberada pelos macrfagos na presena de bactrias. Esses compostos incluem a protena amiloide srica (SAP) (em camundongos, mas no em humanos), a protena C reativa (CRP), o fibrinognio e a lectina ligadora de manose (MBL). A SAP e a CRP so homlogas quanto estrutura; ambas so pentraxinas, formando discos de cinco membros, como mostrado para a SAP (fotografia direita). A CRP liga-se fosforilcolina nas superfcies bacterianas, embora no a reconhea na forma em que encontrada nas membranas das clulas do hospedeiro. Ambas podem agir como opsoninas, alm de ativarem a via clssica do complemento, ligando-se ao C1q para aumentar a opsonizao. A MBL um membro da famlia das colectinas, que inclui as protenas surfactantes de pulmo SP-A e SP-D. Sua estrutura tambm se assemelha do C1q. Como o CRP, a MBL pode agir como uma opsonina, assim como o SP-A e o SP-D. (Fotografia cortesia de J. Emsley.)

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RNAs virais de fita dupla podem ser reconhecidos pelos TLRs nos endossomas e por RIB-I ou MDA-5 no citosol para induzir a expresso de interferons
TLR-3 MDA-5 RIG-I

gar vrios patgenos. No entanto, ao contrrio dos anticorpos, que veremos nos captulos 3 e 9, elas no possuem diversidade estrutural e so produzidas em resposta a qualquer estmulo que ative a liberao de TNF-, IL-1 e IL-6. Contudo, diferentemente dos anticorpos, sua sntese no induzida e orientada especificamente. Um efeito final distncia das citocinas produzidas pelos macrfagos induzir uma leucocitose, ou seja, um aumento nos neutrfilos circulantes. Os leuccitos provm de duas fontes: a medula ssea, da qual os leuccitos maduros so liberados em nmero elevado, e os stios nos vasos sanguneos, onde os leuccitos aderem fracamente s clulas endoteliais. Assim, os efeitos dessas citocinas contribuem para o controle da infeco, enquanto se desenvolve a resposta imune adaptativa. Como mostra a Figura 2.51, o TNF- tambm tem um papel no estmulo migrao de clulas dendrticas dos seus stios nos tecidos perifricos para os linfonodos e sua maturao em clulas no-fagocticas apresentadoras de antgenos, mas altamente coestimulada.

CARDIF

TRIF

IRF3

IRF7

IRF3

IRF7

Gene do interferon

Gene do interferon

2-29 Os interferons induzidos pela infeco viral contribuem para a resposta do hospedeiro
A infeco celular por vrus induz a produo de protenas conhecidas como interferons, porque interferem com a replicao viral em cultura de clulas de tecidos previamente no-infectados. Acredita-se que desempenhem um papel similar in vivo, bloqueando a disseminao dos vrus para clulas no-infectadas. Essas molculas efetoras antivirais, chamadas de interferon- (IFN-) e de interferon- (IFN-), so completamente diferentes do interferon- (IFN-). Esta citocina no diretamente induzida pela infeco viral, embora seja produzida mais tarde e possua papel importante na resposta imune adaptativa aos patgenos intracelulares, como veremos a seguir. O IFN-, na verdade uma famlia de vrias protenas intimamente relacionadas, e o IFN-, que produto de um nico gene, so sintetizados por muitos tipos de clulas aps a infeco viral. Acredita-se que a sntese do interferon ocorra em resposta presena de RNA de dupla fita, pois um potente indutor da sntese do interferon e . O RNA de dupla fita compe o genoma de alguns vrus e pode ser produzido como parte do ciclo infeccioso de todos os vrus. Embora os RNA de fita dupla sejam encontrados em clulas de mamferos, esto presentes apenas como molculas relativamente curtas, normalmente menores que 100 nucleotdeos, ao passo que os genomas fita dupla de RNA tem um comprimento de milhes de nucleotdeos. Portanto, molculas grandes de dupla fita de RNA podem ser o elemento comum da induo do interferon; assim, molculas grandes so reconhecidas como padres molculares distintos pelo receptor semelhante ao Toll, TLR-3 (Figura 2.53), o qual induz a sntese de IFN- e IFN-. Longos RNAs virais de dupla fita podem induzir a expresso de interferons por ativar as protenas citoplasmticas RIG-1 e MDA-5 (ver Figura 2.53). Essas protenas tm domnios semelhantes RNA helicase que se ligam ao RNA de fita dupla e dois domnios CARD (ver Seo 2-9) que permite, ento, interagir com protenas adaptadoras dentro da clula para liberar o sinal que o RNA viral est presente. O adaptador liga aos dois ligantes da fita dupla de RNA, RIG-1 e MDA-5 para a ativao dos fatores regulatrios do interferon IFR3 e IFR7, fatores de transcrio que induzem a produo de IFN- e IFN-. Os interferons contribuem de vrias maneiras para a defesa do hospedeiro contra a infeco viral (Figura 2.54). Um efeito bvio e importante dos interferons a induo de um estado de resistncia replicao viral em todas as clulas. Os IFN- e IFN- so secretados pela clula infectada e se ligam a um receptor celular comum, conhecido como receptor de interferon, em clulas infectadas e em clulas prximas no-infectadas. O receptor de interferon, assim como outros receptores de citocinas, acoplado a uma tirosina quinase da famlia Janus, por meio da qual ele sinaliza. Essa via de sinalizao, a qual ser descrita no captulo

Figura 2.53 RNA de fita dupla induz a expresso de interferon pela ativao de fatores regulatorios do interferon IRF3 e IRF7. Longos RNAs de fita dupla podem ser reconhecidos por receptores semelhantes ao Toll TLR-3, os quais esto presentes nos endossomas (painel esquerda). TLR-3 sinaliza atravs de molculas adaptadoras TRIF, para ativar o fator de transcrio IRF3 e IRF7. Similarmente, o receptor intracelular RIG-I e MDA-5 tambm liga RNAs de fita dupla longos (painel direita) e ativa IRF3 e IRF7, mas, neste caso, atravs da protena adaptadora CARDIF (CARD adaptador indutor de IFN-). IRF3 e IRF7 ativados podem formar, ambos, homodmeros (no apresentado), e IRF3:IRF7, heterodmeros que entram no ncleo e ativam a transcrio de vrios genes, principalmente aqueles do IFN- e IFN-.

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6 com detalhe, induz rapidamente a transcrio de um novo gene como a quinase da famlia Janus que diretamente fosforila os ativadores de transduo de sinais de transcrio, conhecidos como protenas STAT. As protenas STAT entram nos ncleos, onde ativam a transcrio de inmeros genes diferentes, incluindo aqueles que codificam protenas que contribuem para a inibio da replicao viral. Uma dessas a enzima oligoadenilato sintetase, que polimeriza o ATP em uma srie de oligmeros com ligaes 2-5 (os nucleotdeos nos cidos nucleicos normalmente apresentam ligaes 3-5). Esses ativam uma endorribonuclease que, ento, degrada o RNA viral. Uma segunda protena ativada pelo IFN- e IFN- uma serina-treonina quinase, denominada quinase PKR. Essa enzima fosforila o fator de iniciao eucaritico da sntese de protenas, o eIF-2, inibindo a traduo e contribuindo para a inibio da replicao viral. Uma outra protena induzida pelo interferon, chama Mx, conhecida por ser necessria resistncia celular replicao do vrus influenza. Os camundongos que no possuem o gene para o Mx so altamente suscetveis infeco pelo vrus influenza, enquanto os camundongos que produzem Mx no so suscetveis. Uma outra maneira pela qual os interferons atuam na imunidade inata ativando clulas NK, as quais podem matar a clula infectada pelo vrus, como descrito com mais detalhes na prxima seo. Por ltimo, os interferons tm um papel mais geral no processo de reconhecimento do patgeno, o sistema imune inato est por trs e aumenta a ativao da resposta imune adaptativa. J discutimos como o reconhecimento do RNA dupla fita pelo TKR-3 que pode levar induo do IFN- e IFN-. Outros TLRs, notavelmente o TLR-4, pode induzir esses interferons em resposta ao reconhecimento dos componentes da parede celular de bacteriana. Por sua vez, os interferons induzem a expresso de molculas coestimulatrias de macrfagos e clulas dendrticas, o qual as torna capazes de atuarem como clulas apresentadoras de antgenos que podem ativar plenamente clulas T (ver Seo 1-7). Consequentemente, o macrfago e a clula dendrtica que se tornaram ativados quando seus receptores semelhantes ao Toll se ligaram ao patgeno so, por sua vez, capazes de sinalizar para outros macrfagos e clulas dendrticas e recrut-los para iniciar a resposta imune adaptativa. IFN- e IFN-, tambm, estimulam o aumento da expresso de molculas do MHC de classe I em todos os tipos de clulas. Os linfcitos T citotxicos do sistema imune adaptativo reconhecem clulas infectadas por vrus pelo complexo de antgenos virais e pelas molculas do MHC de classe I exibidas na sua superfcie (ver Figura 1.30), e, tambm indiretamente, interferons ajudam na promoo da morte da clula infectada por vrus atravs das clulas T CD8 citotxicas. Quase todos os tipos celulares podem produzir IFN- e IFN-, se necessrio, porm algumas clulas parecem ser especializadas na tarefa. As clulas dendrticas plasmocitoides (tambm conhecidas como clulas produtoras de interferons ou clulas produtoras naturais de interferon) so clulas dendrticas circulantes que se acumulam no tecido linfoide perifrico durante a infeco e podem secretar mais de 1.000 vezes mais interferons que outro tipo de clula. Essas sero descritas com mais detalhes no captulo 8.

Clulas hospedeiras infectadas por vrus

Vrus

IFN-, IFN- Induzem a resistncia replicao viral em todas as clulas Aumentam a expresso de MHC de classe I e a apresentao de antgeno em todas as clulas Macrfagos e clulas dendrticas ativadas Ativam clulas NK a matarem clulas infectadas pelos vrus

Figura 2.54 Os interferons so protenas antivirais produzidas pelas clulas em resposta infeco viral. Os interferons e tm trs funes principais. Primeiro, induzem a resistncia replicao viral ativando os genes celulares que destroem o RNAm e inibem a traduo da protena viral e de parte da protena do hospedeiro. Segundo, eles podem induzir a expresso do MHC de classe I na maioria dos tipos celulares do organismo, aumentando, assim, sua resistncia s clulas matadoras naturais (NK); eles tambm podem induzir um aumento na sntese das molculas MHC de classe I nas clulas recm-infectadas pelo vrus, tornando-as, assim, mais suscetveis morte pelas clulas T CD8 citotxicas (ver Captulo 8). Terceiro, eles ativam as clulas NK, que, ento, matam as clulas infectadas pelos vrus seletivamente.

2-30 As clulas NK so ativadas por interferons e citocinas derivadas de macrfagos para atuarem como uma defesa precoce contra certas infeces intracelulares
As clulas NK se desenvolvem na medula ssea a partir de um progenitor linfoide comum e circulam no sangue. Elas so maiores do que os linfcitos B e T, possuem grnulos citoplasmticos distintos e so funcionalmente identificadas por sua habilidade em matar certas linhagens celulares de tumores linfoides in vitro, sem a necessidade de imunizao ou de ativao prvia. O mecanismo de morte pelas clulas NK o mesmo usado pelos linfcitos T citotxicos gerados durante a resposta imune adaptativa; os grnulos citotxicos so liberados na superfcie da clula-alvo ligada, e as protenas efetoras penetram na membrana celular e induzem a morte

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Produo de IFN-, IFN-, TNF-, e IL-12

Morte de clulas infectadas mediada por clulas NK

Morte de clulas infectadas mediada por clulas T

celular programada. No entanto, a morte pela clula NK ativada por receptores invariveis que reconhecem componentes na superfcie das clulas infectadas e atuam na defesa do hospedeiro na fase precoce da infeco por diversos patgenos intracelulares, particularmente os herpes vrus e o parasita protozorio Leishmania. As clulas NK so classificadas como parte do sistema imune inato por causa de seus receptores invariveis. As clulas NK so ativadas em resposta aos interferons ou s citocinas derivadas de macrfagos. Embora as clulas NK que possam matar alvos sensveis podem ser isoladas de indivduos no-infectados, essa atividade aumentada de 20 a 100 vezes quando elas so expostas aos IFN- e IFN- ou ao fator de ativao das clulas NK, IL-12, que uma das citocinas produzidas precocemente em muitas infeces. As clulas NK ativadas servem para conter a infeco viral, enquanto a resposta imune adaptativa produz clulas T citotxicas antgeno-especficas que podem eliminar a infeco (Figura 2.55). At o presente, a nica pista com relao funo fisiolgica das clulas NK em humanos foi observada em pacientes deficientes de clulas NK, os quais so extremamente sensveis s fases iniciais das infeces por herpes vrus. Observaes similares foram feitas recentemente em camundongos infectados com outro vrus herpes, o citomegalovrus murino. A IL-12, agindo em sinergia com o TNF-, pode, tambm, estimular a produo de grandes quantidades de IFN- pelas clulas NK, e esse IFN- secretado crucial no controle de algumas infeces, antes que as clulas T CD8 citotxicas tenham sido ativadas para a sntese dessa citocina. Essa produo precoce de IFN- pelas clulas NK podem influenciar na resposta das clulas T CD4 para agentes infecciosos, incluindo a ativao das clulas T CD4 para diferenciaremse em clulas Inflamatrias TH1 capazes de ativar macrfagos (ver Seo 8-19).

Ttulo viral 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Tempo aps a infeco viral (dias)

Figura 2.55 As clulas matadoras naturais (NK) so um componente precoce da defesa do hospedeiro contra as viroses. Experimentos em camundongos tm mostrado que os interferons e e as citocinas TNF- e IL-12 aparecem primeiro, seguidos por uma onda de clulas NK, as quais, em conjunto, controlam a replicao do vrus, mas no o eliminam. A eliminao do vrus concluda quando so produzidas clulas T CD8 especficas. Sem as clulas NK, os nveis de certos vrus so muito mais elevados nos primeiros dias da infeco e podem ser letais se no forem tratados eficazmente com drogas antivirais.

2-31 As clulas NK possuem receptores para as molculas prprias que inibem sua ativao contra clulas hospedeiras no-infectadas
Se as clulas NK medeiam a defesa do hospedeiro contra vrus e outros patgenos, elas devem ter algum mecanismo capaz de distinguir as clulas infectadas das no-infectadas. Ainda no se descobriu como isso ocorre exatamente, mas sabido que as clulas NK so ativadas por uma combinao de reconhecimento direto de mudanas nas glicoprotenas da superfcie celular. Essas mudanas so induzidas por estresse metablico, tais como transformaes malignas, virais ou infeces bacterianas, juntamente com o reconhecimento do prprio alterado ,o qual est envolvido com mudanas na expresso de molculas do MHC. A expresso alterada das molculas MHC de classe I pode ser uma caracterstica comum s clulas infectadas por patgenos intracelulares, pois muitos deles desenvolveram estratgias para interferir com a habilidade das molculas MHC de classe I de capturar e apresentar peptdeos s clulas T. Assim, um possvel mecanismo pelo qual as clulas NK diferenciam as clulas infectadas das no-infectadas reconhecendo alteraes na expresso do MHC de classe I (Figura 2.56). As clulas NK so capazes de perceber mudanas na expresso de molculas de MHC de classe I pela integrao de sinais de dois tipos de receptores de superfcie, os quais juntos controlam sua atividade citotxica. Um tipo o receptor ativado que provoca a morte pelas clulas NK. Vrias classes de receptores promovem esse sinal de ativao, incluindo membros com domnios semelhantes s imunoglobulinas e protenas da famlia de lectinas do tipo C. A ativao desses receptores ativa as clulas NK, levando liberao de certas citocinas, tal como o INF- e a morte direta da clula estimuladora atravs da liberao de grnulos citotxicos contendo granzimas e perforinas. Esse mecanismo de morte o mesmo utilizado pelas clulas T citotxicas e ser descrito em detalhes quando discutirmos a funo dessa populao de clulas T efetoras no captulo 8. As clulas NK tambm carregam receptores para imunoglobulinas, e a ligao dos anticorpos a esses receptores ativa as clulas NK a liberarem seus grnulos txicos. Isso conhecido como citotoxicidade celular

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MHC de classe I em clulas normais reconhecido por receptores inibidores que inibem os sinais dos receptores ativadores

A clula NK no mata a clula normal

Clula NK

Receptor inibitrio MHC de classe I

Receptor ativador

Ligante ativador de clula NK

MHC de classe I alterado ou ausente no pode estimular um sinal negativo. A clula NK ativada por sinais dos receptores ativos

A clula NK ativada libera contedos de grnulos que matam a clula-alvo por apoptose

Figura 2.56 Clulas NK matam dependendo do balano entre sinais de ativao e inibio. As clulas NK tm vrios receptores de ativao diferentes que reconhecem ligantes de carboidratos comuns na superfcie das clulas do corpo e sinalizam as clulas NK para matar a clula ligada. Contudo, as clulas NK previnem do ataque por outro grupo de receptores que reconhecem molculas de MHC de classe I (os quais esto presentes na maioria dos tipos celulares) e inibem a morte por predomnio de ao dos receptores ativados. Esse sinal inibidor perdido quando as clulas hospedeiras no expressam molculas MHC de classe I, e talvez tambm em clulas infectadas por vrus, que podem inibir a expresso de MHC de classe I ou alterar sua conformao como para evitar o reconhecimento por clulas T CD8. Outra possibilidade que clulas normais no-infectadas respondem aos IFN- e , aumentando os nveis de expresso do MHC de classe I, tornando as clulas resistentes morte pelas clulas NK ativadas. Em contraste, as clulas infectadas podem fracassar em aumentar a expresso do MHC de classe I, tornando-se alvo das clulas NK ativadas.

dependente de anticorpos, ou ADCC, que ser descrita no Captulo 9. Um segundo grupo de receptores inibe a ativao e previne as clulas NK de matar clulas do hospedeiro normais. Esses receptores inibidores so especficos para vrias molculas de MHC de classe I, as quais ajudam a explicar por que as clulas NK matam seletivamente clulas que carregam baixos nveis de molculas de MHC de classe I, mas previnem da morte clulas com um nmero normal dessas molculas. O aumento da expresso de molculas de MHC de classe I na superfcie celular a melhor proteo contra a destruio pelas clulas NK. Por isso, os interferons, os quais induzem a expresso de molculas de MHC de classe I, podem proteger clulas do hospedeiro no-infectadas das clulas NK. Ao mesmo tempo, eles ativam as clulas NK para matar clulas infectadas por vrus. Os receptores que regulam a atividade das clulas NK dividem-se em duas grandes famlias (ver Figura 2.57) que contm um nmero de outros receptores de superfcie celular alm dos receptores de NK. Uma composta por receptores homlogos s lectinas tipo C que so chamados de KLRs (killer lectin-like receptors). Os genes dos KLRs so encontrados dentro de um cluster de genes chamado complexo de receptores NK, ou NKC. A outra famlia de receptores composta por receptores com domnios semelhantes s imunoglobulinas, por isso o nome KIRs (killer cell immunoglobulin-like receptors). Os genes KIR fazem parte de um grande grupo de receptores semelhantes s imunoglobulinas, conhecido como complexo receptor de leuccitos, ou LRC. Ambos os grupos, NKC e LRC, esto presentes nos camundongos e no homem, mas os camundongos no possuem os genes KIR e, portanto, dependem dos receptores semelhantes s lectinas tipo C do NKC para controlar a atividade de suas clulas NK.

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Figura 2.57 Os genes que codificam os receptores NK se classificam em duas grandes famlias. A primeira, o complexo de receptores de leuccitos (LRC), compreende um grande agrupamento de genes que codificam uma famlia de protenas composta por domnios semelhantes s imunoglobulinas. Estas incluem a famlia gnica dos receptores de morte semelhantes s imunoglobulinas (KIRs) expressos pelas clulas NK, a classe dos ITL (transcritos semelhantes a imunoglobulinas) e os receptores associados aos leuccitos semelhantes s imunoglobulinas (LAIR). As lectinas de sinalizao (SIGLECs) e os membros da famlia do CD66 esto prximos. No homem, esse complexo est localizado no cromossoma 19. O segundo agrupamento de genes denominado complexo receptor NK (NKC) e codifica uma famlia de receptores que inclui as protenas NKG2, bem como o CD94, com o qual a NKG2 pareia para formar o receptor funcional. No homem, esse complexo est localizado no cromossoma 12. Alguns genes dos receptores NK so encontrados fora deste grande cluster; por exemplo, os genes dos receptores de citotoxicidade NKp30 e NKp44 esto localizados dentro do complexo dce histocompatibilidade maior no cromossoma 6. (Figura com base nos dados cortesia de J.Trowsdale, University of Cambridge.)

Extenso do LCR
DAP12 DAP10 CD66 SIGLEC FcGRT ILT LAIR ILT

LRC
KIR NKp46 GPVI PRB3 FcR LY49L

19
NKR-P1A

MAFA-L

CD94 NKG2D

12 NKC

Uma complicao no entendimento da regulao da atividade das clulas NK que as mesmas famlias estruturais de receptores NK contm receptores de ativao e de inibio. No homem e em camundongos, as clulas NK expressam um heterodmero de duas molculas de lectina do tipo C, denominadas CD94 e NKG2, as quais interagem com molculas semelhantes ao MHC de classe I no-polimrficas, incluindo o HLA-E no homem e o Qa-1 em camundongos, que se ligam ao peptdeo lder de outras molculas MHC de classe I. Assim, CD94:NKG2 pode ser sensvel presena de diferentes variantes do MHC de classe I. No homem, a famlia NKG2 possui seis membros, o NGK2A, B, C, D, E e F. Entre esses, o NGK2A e B so inibidores, ao passo que o NGK2C ativador (Figura 2.58). NKG2D tambm ativador, mas diferente dos outros membros da famlia de NKG2 e ser discutido separadamente na prxima seo. No camundongo, o Ly49H, um membro da famlia das Ly49 tipo C, parece ser distinto, porque a ligao dessa molcula um evento de ativao que dispara a resposta citotxica, enquanto os outros membros Ly49 so inibidores. Na famlia dos receptores KIR, tambm, alguns membros so ativadores, e outros so inibidores. Genes KIR diferentes tambm codificam protenas, as quais diferem nos nmeros de domnios de imunoglobulinas; alguns, chamados de KIR2D, tm dois domnios de imunoglobulinas, e outros, chamados de KIR-3D, tm trs. As protenas KIR so ativadoras ou inibidoras dependendo da presena ou ausncia de padres sinalizadores especficos em seu domnio citoplasmtico. Sequncias-padro reconhecidas por protenas adaptadoras inibidoras intracelulares so encontradas nas protenas KIR que tm longas caudas citoplasmticas; essas protenas so designadas KIR-2DL e KIR-3DL. Protena KIR com caudas citoplasmticas curtas no tm esse padro inibidor e esto intimamente associadas a protenas adaptadoras ativadoras DAP12 (tambm conhecidas como KARAP). Receptores KIR ativadores so designados como KIR-2DS e KIR-3DS (ver Figura 2.58). Outros receptores NK inibidores especficos para os produtos do MHC de classe I esto sendo rapidamente definidos, e todos so ou membros da famlia KIR semelhante s imunoglobulinas ou das lectinas tipo C semelhantes ao Ly49. Claramente, a regulao da atividade das clulas NK complexa, e a ativao de

Receptores ativadores e inibidores das clulas NK podem pertencer mesma famlia estrutural Receptores ativadores KLR

KIR-2DS

KIR-3DS

NKG2C CD94

Receptores inibidores

KIR-2DL

KIR-3DL

NKG2A,B CD94

Figura 2.58 A familia estrutural dos receptors NK codifica ambos os receptores ativadores e inibidores. A famlia dos receptores de morte semelhantes a imunoglobulinas (KIR) e receptores de morte semelhantes lectina (KLR) tm membros que enviam sinais de ativao para as clulas NK, como mostrado no painel superior, e alguns que enviam sinais inibitrios, como mostrado no painel inferior. Os membros da famlia KIR so designados de acordo com o nmero de domnios semelhantes a imunoglobulinas que eles possuem e pelo tamanho da cauda citoplasmtica. Os receptores KIR ativadores possuem caudas citoplas-

mticas curtas e recebem designao S. Essa associao protena adaptadora sinalizadora, DAP12. O receptor ativador KLR um heterodmero de NKG2C com outro membro da famlia de lectina do tipo C, CD94. Os receptores inibitrios KIR possuem uma longa cauda citoplasmtica e so designados L; esses no so constitutivamente associados protena adaptadora, mas contm motivos sinalizadores que, quando fosforilados, so reconhecidos por fosfatases inibitrias. Como os KLR ativadores, os KLRs inibidores (NKG2A e NKG2B) formam heterodmeros com CD94.

NKG2C NKG2A

NKG2F NKG2E

LLt1 CD69 KLRF1 AICL Clec-2 Lox-1

A2M

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qualquer clula NK individual por outras clulas depender do balano geral dos receptores ativadores e inibidores que a clula NK est expressando. A resposta das clulas NK em relao expresso diferenciada do MHC muito mais complicada que o polimorfismo dos genes KIR. Por exemplo, para um dos genes KIR existem dois alelos, um deles inibidor, e o outro ativador. Alm disso, o agrupamento dos genes KIR parece ser uma parte muito dinmica do genoma humano, porque diferentes nmeros de genes KIR ativadores e inibidores so encontrados em diferentes indivduos. Ainda no esto muito claras as vantagens que essa diversidade pode ter. Como mencionado, o lcus KIR no est presente em camundongos, eles usam apenas molculas KLR para regular a atividade das clulas NK. Ento, independentemente da presso evolutiva do lcus KIR e de sua diversidade, parece que surgiram recentemente em termos evolutivos. A sinalizao pelos receptores NK inibidores suprime a atividade de morte das clulas NK. Isso significa que as clulas NK no mataro clulas saudveis, idnticas geneticamente, com expresso normal de molculas MHC de classe I, tais como outras clulas do organismo. As clulas infectadas por vrus, porm, podem tornar-se suscetveis citlise pelas clulas NK por meio de uma srie de mecanismos. Primeiro, alguns vrus inibem toda a sntese proteica do hospedeiro, de modo que a sntese aumentada de protenas do MHC de classe I, induzida pelo interferon, bloqueada seletivamente nas clulas infectadas. Os nveis reduzidos da expresso de MHC de classe I em clulas infectadas as tornam menos capazes de inibir as clulas NK atravs de seus receptores especficos do MHC. Segundo, alguns vrus podem impedir seletivamente a exportao de molculas MHC de classe I para a superfcie celular. Esse poder permite que a clula infectada escape ao reconhecimento pelas clulas T citotxicas da resposta imune adaptativa, mas seja sensvel citlise por clulas NK. A infeco viral altera a glicosilao das protenas celulares, talvez permitindo o reconhecimento dominante por receptores de ativao ou a remoo do ligante normal do receptor inibitrio. Esses mecanismos permitem que as clulas infectadas sejam detectadas mesmo quando o nvel de expresso do MHC de classe I no seja alterado. Ainda h muito a ser aprendido sobre esse mecanismo inato de ataque citotxico e seu significado fisiolgico. O papel das molculas MHC, permitindo que as clulas NK detectem infeces intracelulares, de particular interesse, pois essas mesmas molculas governam a resposta das clulas T aos patgenos intracelulares. possvel que as clulas NK, as quais usam uma srie diversa de receptores no-clonotpicos para detectar MHC alterado, representem o remanescente moderno das clulas T ancestrais. Esses progenitores de clulas T que evoluram a partir do rearranjo de genes que codificam um amplo repertrio de receptores de clulas T antgeno-especficos comprometidos com o reconhecimento do MHC alterado por ligao de peptdeos antignicos.

Os maiores receptores de ativao das clulas NK

NKp30

NKp40

NKp46

NKG2D

2-32 As clulas NK carregam receptores que ativam sua funo de matar em resposta a ligantes expressos em clulas infectadas e em clulas tumorais
Alm dos receptores KIR e KLR, que tm o papel de perceber os nveis de expresso de molculas do MHC de classe I em outras clulas, as clulas NK tambm expressam receptores que mais diretamente percebem a presena de infeces ou outras perturbaes na clula. Os receptores de ativao mais importantes para o reconhecimento da clula infectada so os receptores naturais de citotoxicidade (natural cytotoxicity receptors) (NCRs) NKp30, NKp44 e NKp46, que so receptores semelhantes s imunoglobulinas e membros da famlia de lectina tipo-C NKG2D (Figura 2.59). Os ligantes reconhecidos pelos receptores naturais de citotoxicidade ainda no foram bem definidos; contudo, NKp46 conhecido por reconhecer os proteoglicanos sulfato de heparana, bem como algumas protenas virais.

Figura 2.59 Os maiores receptores de ativao das clulas NK so os receptores de citotoxicidade natural e NKG2D. Os receptores de citotoxicidade natural so protenas semelhantes a imunoglubulinas. NKp30 e NKp40 possuem um domnio extracelular que se assemelha a um domnio varivel nico da molcula de imunoglobulina. Eles ativam as clulas NK atravs de sua associao com homodmeros de cadeia CD3 ou receptor Fc de cadeia (essas so protenas sinalizadoras que tambm esto associadas a outros tipos de receptores e sero descritas com mais detalhe no Captulo 6). NKp46 se assemelha molcula KIRD2, tendo dois domnios que se assemelham aos domnios constantes das molculas de imunoglobulina. NKG2D um membro da famlia de lectina do tipo C e forma um homodmero.

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Os ligantes do NKG2D so molculas semelhantes aos MHC, membros da famlia MIC-A, MIC-B ou RAET1, cuja expresso induzida pelo estresse celular

MIC-A ou MIC-B

Famlia RAET1 (incluindo ULBPs)

Figura 2.60 Os ligantes dos receptores NK de ativao NKG2D so protenas que so expressas em condies de estresse celular. As protenas MIC, MIC-A e MIC-B so molculas semelhantes ao MHC, induzidas nas clulas epiteliais e outras clulas pelo estresse, como choque trmico, estresse metablico ou infeco. Os membros da famlia RAET1, incluindo o subgrupo designado como protena ligadora UL16 (ULBPs), tambm se assemelham a uma parte das molculas de MHC de classe I, os domnios 1 e 2, e so ligadas clula via ligador glicofosfatidilinositol.

NKG2D parece ter um papel especializado na ativao de clulas NK. Outros membros da famlia do NKG2 (NKG2A, C e E) formam heterodmeros com CD94 e se ligam molcula HLA-E do MHC de classe I. NKG2D no o faz; em vez disso, os ligantes do receptor NKG2D so famlias de protenas distantemente relacionadas a molculas do MHC de classe I, mas tm uma funo completamente diferente, sendo produzidas em resposta ao estresse. Os ligantes nos humanos do NKG2D, como apresentado na Figura 2.60, so molculas MIC semelhantes ao MHC de classe I, MIC-A e MIC-B, e a famlia de protenas RAET1, as quais so homlogas aos domnios 1 e 2 da molcula do MHC de classe I (descrito quando discutirmos a estrutura da molcula do MHC, no Captulo 3). A famlia RAET1 tem 10 membros, 3 desses foram inicialmente caracterizados como ligantes da protena UL16 do citomegalovrus e so, por essa razo, tambm chamados de protena ligadora de UL16 ou ULBPs. Camundongos no expressam molculas equivalentes a MIC, e os ligantes do NKG2D de camundongo tm uma estrutura muito similar s protenas RAET1 e so provavelmente homlogas delas. De fato, esses ligantes foram primeiramente identificados em camundongos como famlia de protenas induzidas precocemente por acido retinoico 1 (retinoic acid early inducible 1) (Rae1). Os ligantes de NKG2D so expressos em resposta ao estresse celular ou metablico e, ento, so positivamente regulados nas clulas infectadas com bactrias intracelulares ou alguns vrus, como o citomegalovrus, bem como clulas tumorais incipientes que se tornaram malignamente transformadas. Deste modo, o reconhecimento pelo NKG2D atua como um sinal de perigo generalizado para o sistema imune. NKG2D , tambm, expresso em macrfagos ativados e clulas T CD8 citotxicas ativadas, e o reconhecimento do ligante do NKG2D por essas clulas promove um potente sinal coestimulatrio que potencializa sua funo efetora.

2-33 Os receptores NKG2D ativam caminhos de sinalizao diferentes dos outros receptores NK ativados
O reconhecimento dos ligantes NKG2D tambm difere dos outros receptores das clulas NK no caminho de ativao empregado dentro da clula. Os outros receptores de ativao, ambos receptores de citotoxicidade natural e ativadores de KIRs, ligam molculas adaptadoras como as cadeias do CD3, cadeias do receptor Fc e DAP12, as quais, todas, contm motivos sinalizadores especficos chamados motivos de ativao com base na tirosina do imunorreceptor (immunoreceptor tyrosine-based ativation motifis) (ITAMs). Quando o receptor de NK liga seus ligantes, os ITAMs se tornam fosforilados, levando ligao e ativao intracelular da Syk tirosina quinase, e promovendo eventos de sinalizao na clula (ver Seo 6-17). Em contraste, ligante NKG2D uma protena adaptadora diferente, DAP10, a qual no contm uma sequncia ITAM, e, em vez de ativar a lipdeo quinase intracelular fosfatidilinositol-3-quinase (PI 3-quinase), inicia uma srie diferente de eventos de sinalizao intracelular. Contudo, os dois caminhos de ativao resultam na ativao das clulas NK. Em camundongos, os trabalhos do NKG2D so ainda mais complicados, porque NKG2D de camundongo so produzidos um duas formas de splicing alternativo, um deles se liga DAP12, e o outro se liga no DAP10. O NKG2D de camundongo pode escolher ativar os dois caminhos de sinalizao, ao passo que NKG2D humanos sinalizam somente atravs do DAP10 para ativar a via da PI 3-quinase.

2-34 Vrias subpopulaes de linfcitos se comportam como linfcitos semelhantes ao inato


Os rearranjos dos genes dos receptores so uma caracterstica que define os linfcitos do sistema imune adaptativo e que permite a gerao de uma variedade infinita de receptores, cada um expresso por uma clula B ou T individual (ver Seo 1-11). Entretanto, h vrias subpopulaes menores de linfcitos que expressam uma diversidade de receptores muito limitada, codificada por poucos rearranjos

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Linfcitos semelhantes ao inato Clulas B-1 Produzem anticorpos naturais, protegem contra infeco por Streptococcus pneumoniae Ligantes no-associados ao MHC No podem receber reforo Clulas epiteliais : Clulas T NK

Figura 2.61 As trs principais classes de linfcitos semelhantes ao inato e suas propriedades.

Produzem citocinas rapidamente

Produzem citocinas rapidamente

Ligantes so associados ao MHC de classe IB No podem receber reforo

Ligantes so lipdeos ligados ao CD1d No podem receber reforo

de segmentos gnicos. Os receptores desses linfcitos so relativamente invariveis e, por ocorrerem em locais especficos, esses linfcitos no necessitam sofrer expanso clonal antes de responderem efetivamente a um antgeno que eles reconhecem e, portanto, so conhecidos como linfcitos semelhantes ao inato (ILLs) (Figura 2.61). Para produzir receptores de antgenos nessas clulas, requerida a recombinase RAG-1 e RAG-2; essas protenas e seus papis no rearranjo gnico nos linfcitos so descritos no Captulo 4. Por expressaram RAG-1 e RAG-2 e passarem pelo processo de rearranjo gnico do receptor de antgenos, ILLs so, por definio, clulas do sistema imune adaptativo. Eles comportam-se, contudo, mais como parte do sistema imune inato, e, por isso, sero discutidos aqui. Um tipo de ILL a subpopulao de clulas T : que reside dentro do epitlio, como na pele. As clulas T : so uma pequena subpopulao de clulas T, j descritas no Captulo 1. Seus receptores de antgeno so compostos por cadeias e , em vez das cadeias e , encontradas na maioria das clulas T envolvidas na imunidade adaptativa. As clulas T : foram descobertas por possurem receptores do tipo imunoglobulina codificados por genes rearranjados, e suas funes devem ainda ser esclarecidas. Uma de suas caractersticas mais notveis das clulas T : sua diviso em dois conjuntos altamente distintos de clulas. Um conjunto de clulas T : encontrado no tecido linfoide de todos os vertebrados e, assim como as clulas B e as clulas T :, apresentam receptores altamente diversificados. Em contraste, as clulas T : intraepiteliais ocorrem variavelmente em diferentes vertebrados e comumente apresentam receptores de diversidade muito limitada, particularmente na pele e no trato reprodutor feminino do camundongo, onde as clulas : so essencialmente homogneas em qualquer stio. Com base nessa diversidade limitada das clulas T : epiteliais e na ausncia de circulao, foi proposto que as clulas T : intraepiteliais podem reconhecer ligantes derivados do epitlio em que elas residem, mas que so expressos somente quando as clulas se tornam infectadas. Os candidatos a ligantes so protenas do choque trmico, molculas MHC de classe IB (descritos no captulo 5) e nucleotdeos e fosfolipdeos raros, para os quais existe evidncia de reconhecimento pelas clulas T :. Diferentemente das clulas T :, as clulas T : em geral no reconhecem antgenos como os peptdeos apresentados pelas molculas MHC; em vez disso, elas parecem reconhecer os seus antgenos-alvo diretamente e tm o potencial de reconhecer e responder rapidamente a molculas expressas por muitos tipos celulares diferentes. O reconhecimento de molculas expressas como consequncia de infeco, e no de antgenos especficos de certos patgenos, poderia diferenciar as clulas T : de outros linfcitos, classificando-as na classe semelhante inata. Uma outra subpopulao de linfcitos que expressa uma diversidade limitada de receptores de antgenos a subpopulao B-1 de clulas B. As clulas B-1 so distinguidas das clulas B pela protena de superfcie celular CD5, com proprie-

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A clula B-1 se liga ao polissacardeo capsular ou a componentes da parede celular bacteriana e recebe o sinal (IL-5) das clulas acessrias

IL-5

Clula B-1

A clula B-1 secreta anticorpo IgM antipolissacardeos

lgM

dades inteiramente diferentes daquelas observadas nas clulas B convencionais que medeiam a imunidade humoral adaptativa. As clulas B-1 so, em muitos aspectos, anlogas s clulas T epiteliais :. Elas se originam precocemente no desenvolvimento embrinico, utilizam um conjunto distinto e limitado de rearranjos de genes para produzir seus receptores, so autorrenovveis na periferia e constituem os linfcitos predominantes em um microambiente diferenciado as cavidades peritoneal e pleural. As clulas B-1 parecem produzir respostas com anticorpos principalmente contra antgenos polissacardicos e podem produzir anticorpos da classe IgM sem a necessidade de clulas T auxiliares (Figura 2.62). Embora essas respostas possam ser aumentadas pelas clulas T, elas surgem dentro de 48 horas aps a exposio ao antgeno e, assim, as clulas T no podem estar envolvidas. As clulas B-1 no esto ativas na resposta imune adaptativa a um antgeno especfico. A falta de uma interao antgeno-especfica com as clulas T auxiliares pode explicar porque a memria imunolgica no se desenvolve como resultado da resposta de clulas B-1. Repetidas exposies ao mesmo antgeno induzem respostas semelhantes ou diminudas a cada exposio ao mesmo antgeno. Tais respostas, embora geradas por linfcitos com receptores rearranjados, parecem mais respostas inatas do que respostas imunes adaptativas. Assim como nas clulas T :, o papel exato das clulas B-1 na defesa do hospedeiro ainda incerto. Camundongos com deficincia de clulas B-1 so mais suscetveis infeco por Streptococcus pneumoniae, porque falham em produzir um anticorpo contra o grupo de fosfolipdeos fosfocolina, que protege efetivamente contra esse organismo. Uma frao significativa das clulas B-1 pode produzir anticorpos com essa especificidade, e, uma vez que no so requeridas clulas T antgeno-especficas, uma resposta potente pode ser produzida precocemente na infeco com esse patgeno. No se sabe se as clulas B-1 humanas desempenham esse mesmo papel. Uma terceira subpopulao de ILLs conhecida como clulas T NK ocorre no timo e nos rgos linfoides perifricos. Essas clulas expressam uma cadeia invarivel no receptor de clula T que pareia com uma entre trs cadeias diferentes e so capazes de reconhecer antgenos de glicolipdeos. A principal resposta das clulas T NK parece ser a rpida secreo de citocinas, incluindo IL-4, IL-10 e IFN-, e acredita-se que essas clulas desempenhem uma funo principalmente de regulao. Veremos novamente essas clulas pouco comuns no Captulo 10. Em termos evolutivos, interessante notar que as clulas T : parecem defender as superfcies corporais, ao passo que as clulas B-1 defendem a cavidade corporal. Os dois tipos celulares so relativamente limitados em sua especificidade e na eficincia de suas respostas. possvel que representem uma fase transicional na evoluo da resposta imune adaptativa, protegendo os dois principais compartimentos dos organismos primitivos: as superfcies epiteliais e a cavidade corporal. No se sabe ainda se so cruciais na defesa do hospedeiro ou se representam apenas uma relquia evolutiva. De qualquer maneira, como cada tipo celular predominante em certos locais do organismo e contribui para respostas contra determinados patgenos, eles devem ser incorporados em nosso raciocnio sobre a defesa do hospedeiro. Um ltimo componente da defesa imune inata do organismo so os anticorpos Ig-M conhecidos como anticorpos naturais. Essas IgMs naturais so codificadas por genes de anticorpos rearranjados que no sofreram posterior diversificao por hipermutao somtica (descrita no Captulo 4). Elas constituem uma considervel quantidade dos anticorpos IgM circulantes em humanos e no parecem resultar da resposta imune adaptativa antgeno-especfica infeco. Elas possuem baixa afinidade a muitos patgenos microbianos e apresentam grande reatividade cruzada at mesmo ligando-se a algumas molculas prprias. No se sabe se esses anticorpos naturais so produzidos em resposta flora normal da superfcie epitelial ou em resposta ao que prprio. Entretanto, eles podem ter um papel na defesa do hospedeiro contra Streptococcus pneumoniae, ligando-se fosfocolina do envelope celular bacteriano e eliminando a bactria antes de ela tornar-se perigosa.

A IgM se liga a cpsula polissacardea

Ativao do complemento e remoo da bactria

Figura 2.62 As clulas B-1 podem ser importantes na resposta a antgenos de carboidratos, como os polissacardeos bacterianos. Estas respostas independentes de clulas T ocorrem rapidamente, com o surgimento do anticorpo em 48 horas, presumivelmente porque existe uma frequncia elevada de precursores dos linfcitos que esto respondendo, de modo que necessria pouca expanso clonal. Ao contrrio da resposta de muitos outros antgenos, essa resposta no necessita da ajuda das clulas T. Na ausncia desse auxlio, somente a IgM produzida (por reao explicada no Captulo 9) e, em camundongos, estas resposta atuam, principalmente, pela ativao do complemento, o qual mais eficiente quando o anticorpo do isotipo IgM.

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Resumo
A imunidade inata usa uma variedade de mecanismos efetores induzidos para eliminar uma infeco ou, na falha destes, conter a infeco at que o patgeno possa ser reconhecido pelo sistema imune adaptativo. Esses mecanismos efetores so regulados por um sistema de receptores codificados na linhagem germinal que so capazes de discriminar entre as molculas prprias normais de clulas no-infectadas e aos ligantes no-prprios dos agentes infecciosos. Assim, a capacidade dos fagcitos de discriminar entre o prprio e o patgeno controla a sua liberao de citocinas e quimiocinas pr-inflamatrias, que atuam conjuntamente para recrutar mais fagcitos aos locais de infeco. Especialmente proeminente o recrutamento precoce dos neutrfilos que podem reconhecer os patgenos diretamente. Alm disso, as citocinas liberadas pelas clulas fagocticas teciduais induzem febre, produo de protenas da resposta de fase aguda, incluindo a lectina ligadora de manose que se liga aos patgenos e a protena C reativa, e mobilizao de clulas apresentadoras de antgeno, que induzem a resposta imune adaptativa. Patgenos virais so reconhecidos pelas clulas nas quais eles replicam, levando produo de interferons que servem para inibir a replicao viral e ativar as clulas NK que podem distinguir clulas infectadas de no-infectadas. Como veremos mais tarde neste livro, citocinas, quimiocinas, clulas fagocticas e clulas NK so todos mecanismos efetores que tambm so empregados pela resposta imune adaptativa, que usa receptores variveis dirigidos a antgenos de patgenos especficos.

Resumo do Captulo 2
O sistema inato de defesa do hospedeiro contra infeco constitudo de diversos componentes distintos. O primeiro destes a barreira epitelial, que pode prevenir o estabelecimento de infeces. O prximo so as clulas e as molculas disponveis que controlam e destroem o patgeno, uma vez quebrada a barreira epitelial. Os mais importantes destes so os macrfagos teciduais, que medeiam a defesa celular das fronteiras. O entendimento de como o sistema imune inato reconhece os patgenos est crescendo rapidamente, e os estudos estruturais, como o da lectina ligadora de manose, comearam a revelar em detalhes como os receptores imune inatos podem distinguir a superfcie dos patgenos daquelas das clulas do hospedeiro. Alm disso, a identificao do receptor para o LPS bacteriano e sua ligao ao receptor TLR-4 humano revelou o reconhecimento imune inato dos padres moleculares associados aos microrganismos. O reconhecimento pelo sistema imune inato leva eliminao de patgenos invasores por meio de vrios mecanismos efetores. A maioria desses conhecida h muito tempo. A eliminao dos microrganismos por fagocitose foi a primeira resposta imune observada. Entretanto, novos conhecimentos emergem a cada momento. As quimiocinas, por exemplo, so conhecidas h apenas 15 anos, e mais de 50 quimiocinas j foram descobertas. As protenas do sistema do complemento medeiam a imunidade humoral inata dos espaos dos tecidos e do sangue. A induo de poderosos mecanismos efetores com base no reconhecimento imune inato por meio de receptores codificados na linhagem germinal apresenta alguns perigos. Temos como exemplo desta faca de dois gumes o TNF-, benfico quando liberado localmente, mas desastroso quando liberado sistemicamente. O sistema imune inato pode ser visto como um sistema de defesa que tem como objetivo impedir o estabelecimento de um foco infeccioso. Entretanto, quando desempenha sua funo inadequadamente, a resposta imune adaptativa pode entrar em cena, pois forma uma parte essencial da defesa em humanos. Assim, aps introduzir o estudo da imunologia considerando a funo imune inata, daremos ateno resposta imune adaptativa. Esta tem sido o foco de quase todos os estudos em imunologia, pois mais fcil de seguir, e experimentos podem ser realizados com reagentes e respostas especficas para antgenos definidos.

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Teste seu conhecimento


2.1 O sistema imune inato usa duas estratgias diferentes para identificar os patgenos: o reconhecimento do prprio e do no-prprio. (a) D exemplos de cada um e discuta como cada exemplo contribui para a capacidade do organismo de se proteger contra a infeco. (b) Quais so as desvantagens destas diferentes estratgias? O sistema do complemento origina sinais inflamatrios, opsoninas e molculas que lisam as bactrias diretamente. (a) Descreva as propriedades gerais de cada classe e discuta sua utilidade na defesa do hospedeiro. (b) O que voc considera mais importante na defesa do hospedeiro e por qu? Os receptores Toll representam a via mais antiga de defesa do hospedeiro. Esta afirmativa justificada? Explique sua resposta. Elie Metchnikoff descobriu o papel protetor dos macrfagos observando o que acontece com a estrela-do-mar quando machucada por espinho de ourio-do-mar. Descreva a sequncia de eventos que ocorreriam caso voc fosse ferido por um espinho de ourio-do-mar. O sistema do complemento uma cascata de enzimas capaz de produzir efeitos deletrios poderosos. (a) Como o complemento fortalecido para nos proteger, ao invs de prejudicar? (b) O que acontece quando algo sai errado? Durante o seu desenvolvimento e para realizar suas vrias funes eficientemente, as clulas do sistema imune devem encontrar seu caminho para o local correto do organismo. Como elas fazem isso?

2.2

2.3

2.4

2.5

2.6

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As molculas de adeso celular controlam as interaes entre os leuccitos e as clulas endoteliais durante uma resposta inflamatria

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

As citocinas liberadas pelos macrfagos ativam a resposta de fase aguda

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Parte II
Reconhecimento do Antgeno

Reconhecimento do Antgeno pelos Receptores de Clulas B e de Clulas T

A resposta imune inata inicialmente defende o corpo contra infeces, mas atua somente para controlar os patgenos que possuam certas caractersticas moleculares ou que induzam a liberao de interferon e outras molculas de defesa no-especficas secretadas, como aprendemos no Captulo 2. Para combater efetivamente uma ampla gama de patgenos que um indivduo possa encontrar, os linfcitos do sistema imune adaptativo tm de ser capazes de reconhecer uma grande variedade de diferentes antgenos de bactrias, de vrus e de outros organismos causadores de doenas. As molculas de reconhecimento de antgenos das clulas B so as imunoglobulinas (Ig). Estas protenas so produzidas pelas clulas B com uma ampla variedade de especificidade a antgenos, onde cada clula B produz uma imunoglobulina de especificidade nica (ver Sees 1-11 e 1-12). As imunoglobulinas ligadas membrana das clulas B atuam como receptores celulares para antgenos e so chamadas de receptores de clulas B (BCR). Uma imunoglobulina com a mesma especificidade para um antgeno secretada como anticorpo por clulas B diferenciadas as clulas plasmticas. A secreo de anticorpos, os quais se ligam a patgenos ou a seus produtos txicos no espao extracelular do organismo, a principal funo efetora das clulas B na imunidade adaptativa. Os anticorpos foram as primeiras molculas envolvidas no reconhecimento imune especfico a serem caracterizadas, sendo ainda hoje as mais bem conhecidas. A molcula de anticorpo tem duas funes distintas: uma ligar-se especificamente ao agente patognico que induziu a resposta imune; a outra recrutar outras clulas e molculas, a fim de destruir o patgeno, uma vez que o anticorpo se tenha unido a ele. Por exemplo, a ligao do anticorpo leva neutralizao de vrus e marca patgenos para destruio via fagocitose e complemento, como descrito na Seo 1-18. O reconhecimento e as funes efetoras esto estruturalmente separadas na molcula de anticorpo; uma parte reconhece especificamente o antgeno, ao passo que a outra envolve os vrios mecanismos de eliminao. A regio de ligao com o antgeno varia amplamente entre as molculas de anticorpos, sendo conhecida como regio varivel, ou regio V. A variabilidade das molculas de anticorpo permite que cada uma reconhea um determinado antgeno e o repertrio total de anticorpos produzidos por um nico indivduo, sendo suficientemente grande para assegurar que qualquer estrutura possa ser reconhecida. A regio da molcula de anticorpo que participa das funes efetoras do sistema imune no varia do mesmo modo, sendo conhecida como regio constante ou regio C. So cinco formas principais e cada uma se especializa na ativao de diferentes mecanismos efetores imunes. O receptor de membrana das clulas B no possui essa funo efetora, porque a regio C restante est inserida na membrana das clulas B. A sua funo reconhecer e ligar-se a antgenos por meio da regio V, expondo-o na superfcie da clula, promovendo a expanso clonal e a produo de anticorpos especficos. As molculas de reconhecimento de antgeno das clulas T existem somente como protenas ligadas membrana e sua nica funo sinalizar para a ativao de clulas T. Esses receptores de clulas T (TCRs) so similares s imunoglobulinas tanto na sua estrutura proteica possuindo regies V e C quanto nos mecanismos genticos responsveis pela sua grande variabilidade, a qual ser discutido no Captulo 4.

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

O receptor de clulas T difere do receptor de clulas B em um ponto importante: ele no se liga e reconhece antgenos diretamente, mas, em vez disso, reconhece pequenos fragmentos de peptdeos provenientes do antgeno proteico, os quais se encontram ligados a molculas do MHC presentes na superfcie de outras clulas, que so ligados s protenas conhecidas como molculas do MHC na superfcie das clulas. As molculas do MHC so glicoprotenas codificadas por um grande grupo de genes conhecidos como complexo de histocompatibilidade principal (MHC). A principal caracterstica estrutural um longo sulco formado ao longo da superfcie, no qual uma grande variedade de peptdeos pode ser ligada. As molculas do MHC so altamente polimrficas: isso , cada tipo de molcula do MHC ocorre em muitas verses diferentes dentro da populao. A maioria das pessoas so heterozigotas para as molculas do MHC: elas expressam duas formas de cada tipo de molcula do MHC, o que aumenta a gama de peptdeos derivados de patgenos que podem se ligar. Os receptores das clulas T reconhecem caractersticas do peptdeo antignico e da molcula do MHC que se ligou. Isso introduz uma dimenso extra no reconhecimento do antgeno pelas clulas T, conhecido como restrio ao MHC, pois um receptor de clula T no especfico somente para um peptdeo antignico estranho, mas para uma combinao nica entre um peptdeo e uma determinada molcula do MHC. Discutiremos o polimorfismo do MHC e suas consequncias para o reconhecimento do antgeno pelas clulas T e desenvolvimento das clulas T nos Captulos 5 e 7, respectivamente. Neste captulo, focaremos a estrutura e as propriedades de ligao ao antgeno das imunoglobulinas e dos receptores de clulas T. Ambos os receptores so associados ao complexo de sinalizao intracelular, o qual transmite o sinal de ligao do antgeno para a clula, e sero descritos no captulo 6. Embora clulas B e T reconheam molculas estranhas de maneira distinta, os receptores utilizados so muito semelhantes em estrutura. Veremos como essa estrutura bsica pode abranger uma grande variabilidade de antgenos especficos e como permitem que imunoglobulinas e receptores de clulas T realizem suas funes como molculas reconhecedoras de antgeno na resposta imune adaptativa.
C-terminal

a
Stios de ligao do antgeno
CL VH C H1

VL

Dobradia
CH 2

Ligaes dissulfdricas Carboidrato

CH3

b
N-terminal

Regio varivel

Ligaes dissulfdricas

Regio constante

Figura 3.1 Estrutura de uma molcula de anticorpo. O quadro a ilustra um diagrama de fita com base na cristalografia por raios X de uma IgG, mostrando a disposio da cadeia polipeptdica central. Trs regies globulares formam um Y. Os dois stios de ligao ao antgeno so as extremidades dos braos, que esto unidos ao tronco do Y por uma juno flexvel. No quadro b, est a representao esquemtica da estrutura apresentada no quadro a, ilustrando a composio das quatro cadeias e os domnios distintos que compem cada cadeia. O quadro c mostra uma representao esquemtica simplificada de uma molcula de anticorpo que ser usada ao longo deste livro. C-terminal, carboxiterminal; N-terminal, aminoterminal. (Quadro a cortesia de A. McPherson e L. Harris.)

A estrutura tpica de uma molcula de anticorpo


Os anticorpos so a forma secretada do receptor de clulas B. Como so solveis e secretados em grandes quantidades, os anticorpos so facilmente obtidos e estudados. Por essa razo, a maior parte do que sabemos sobre os receptores das clulas B vem do estudo de anticorpos. As molculas de anticorpos possuem uma forma de Y e consistem em trs segmentos de igual tamanho, conectados por uma poro flexvel. As trs formas esquemticas da estrutura do anticorpo, que foram determinadas por cristalografia por raios X, so mostradas na Figura 3.1. O objetivo desta seo do captulo explicar como essa estrutura formada e como ela permite que as molculas de anticorpo exeram sua dupla funo por um lado, a ligao a uma grande variedade de antgenos, e, por outro, a ligao a um nmero limitado de clulas e molculas efetoras. Como veremos, cada funo exercida por pores diferentes da molcula. As duas extremidades dos dois braos do Y so variveis entre diferentes molculas de anticorpo a regio V e esto envolvidas na ligao do antgeno, ao passo que a base do Y, ou regio C, mais conservada e interage com as molculas e as clulas efetoras. Todos os anticorpos so construdos da mesma forma, a partir de pares de cadeias polipeptdicas pesadas e leves, e o termo genrico imunoglobulina usado para todas as protenas. Dentro dessa categoria geral, entretanto, h cinco diferentes classes de imunoglobulinas IgM, IgD, IgG, IgA e IgE que podem ser distinguidas por suas regies C. Diferenas mais sutis em relao regio V so

Imunobiologia de Janeway

113

responsveis pela especificidade da ligao. Usaremos a molcula de anticorpo de IgG como exemplo para descrever as caractersticas gerais da estrutura das imunoglobulinas.
Cadeia leve

3-1 Os anticorpos IgG consistem em quatro cadeias polipeptdicas


Os anticorpos IgG so molculas grandes com peso molecular de aproximadamente 150 kDa e so compostas por dois diferentes tipos de cadeias polipeptdicas. Uma de aproximadamente 50 kDa, que denominada cadeia pesada ou H, e a outra, de 25 kDa, denominada cadeia leve ou L (Figura 3.2). Cada molcula de IgG constituda por duas cadeias pesadas e duas cadeias leves. As duas cadeias pesadas so ligadas umas s outras por ligaes dissulfdricas, e cada cadeia pesada ligada a uma cadeia leve por ligaes dissulfdricas. Em cada molcula de imunoglobulina, as duas cadeias pesadas e as duas cadeias leves so iguais, conferindo molcula de anticorpo dois stios idnticos de ligao ao antgeno (Figura 3.1) e, assim, a capacidade de ligar-se simultaneamente a duas estruturas idnticas. Dois tipos de cadeias leves, denominadas lambda () e kappa (), so encontradas nos anticorpos. Uma determinada imunoglobulina apresenta sempre ambas as cadeias e , nunca uma de cada. Nenhuma diferena funcional foi encontrada entre anticorpos com cadeia leves e , e ambos os tipos de cadeia leve podem ser encontradas em anticorpos de qualquer uma das cinco classes principais. A relao entre os dois tipos de cadeia leve varia de espcie para espcie. Em camundongos, a relao para 20:1, e nos humanos 2:1; nos bovinos de 1:20. A razo para essa variao ainda desconhecida. Distores nessas propores podem ser usadas algumas vezes para detectar a proliferao anormal de um clone de clulas B. A expresso de cadeia leve sempre ocorre de forma idntica e, portanto, o excesso de cadeia leve em um indivduo pode indicar a presena de clulas B tumorais produtoras de cadeia leve . A classe de um anticorpo e consequentemente sua funo definida pela estrutura de sua cadeia pesada. Existem cinco principais classes de cadeias pesadas ou isotipos, alguns dos quais tm diversos subtipos e esses determinam a atividade funcional da molcula de anticorpo. As cinco principais classes de imunoglobulinas so imunoglobulina M (IgM), imunoglobulina D (IgD), imunoglobulina G (IgG), imunoglobulina A (IgA) e imunoglobulina E (IgE). A cadeia pesada da classe foi designada pela letra grega minscula correspondente (, , , e , respectivamente). IgG a mais abundante imunoglobulina e possui diversas subclasses (IgG1, 2, 3 e 4 em seres humanos). Suas propriedades funcionais distintas so conferidas pela regio caboxiterminal da cadeia pesada, onde no h associao com a cadeia leve. Descreveremos a estrutura e as funes dos diferentes isotipos de cadeia pesada no Captulo 4. As caractersticas estruturais gerais de todos os isotipos so similares, e consideraremos IgG, o isotipo mais abundante no plasma, como uma molcula de anticorpo tpica. A estrutura receptora das clulas B idntica estrutura do seu anticorpo correspondente, com exceo de uma pequena poro da carboxila terminal da regio C da cadeia pesada. No receptor das clulas B, a carboxiterminal uma sequncia hidrofbica que ancora as molculas membrana, e no anticorpo uma sequncia hidroflica que permite a secreo.
Ligaes dissulfdricas Cadeia pesada

Figura 3.2 A molcula de imunoglobulina composta por dois tipos de cadeias proteicas: cadeias leves e cadeias pesadas. Cada molcula de imunoglobulina formada por duas cadeias pesadas (verde) e duas cadeias leves (amarelo), unidas por pontes dissulfdricas, de modo que cada cadeia pesada se liga a uma cadeia leve, e as duas cadeias pesadas se ligam entre si.

3-2 Imunoglobulinas de cadeias pesadas e leves so compostas por regies constantes e variveis
As sequncias de aminocidos de muitas imunoglobulinas de cadeias pesadas e leves j foram determinadas e revelam duas importantes caractersticas da molcula do anticorpo. Primeiro, cada cadeia consiste em uma srie de similares, embora no-idnticas, sequncias com cerca de 110 aminocidos de comprimento.

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Cada uma dessas repeties corresponde a uma discreta regio compacta dobrada na estrutura da protena, conhecida como domnio proteico. A cadeia leve composta por dois desses domnios de imunoglobulinas, e a cadeia pesada do anticorpo IgG formada por quatro (ver Figura 3.1a). Isso sugere que as cadeias das imunoglobulinas evoluram por repetidas duplicaes de um gene ancestral correspondente a um nico domnio. A segunda caracterstica importante revelada pela comparao de sequncias de aminocidos refere-se ao fato de que a sequncia aminoterminal das cadeias pesadas e leves varia muito entre os diferentes anticorpos. A variabilidade da sequncia limitada aos primeiros 110 aminocidos aproximadamente, correspondendo ao primeiro domnio, e os domnios restantes so constantes entre as cadeias de imunoglobulina com mesmo isotipo. Os domnios variveis aminoterminais (domnio V) das cadeias pesada e leve (VH e VL, respectivamente), juntos, formam a regio V do anticorpo e conferem sua capacidade de ligar-se a antgenos especficos, ao passo que os domnios constantes (domnio C) das cadeias pesadas e leves (CH e CL, respectivamente) formam a regio C (ver Figura 3.1b e c). Os mltiplos domnios C da cadeia pesada so numerados a partir da poro aminoterminal em direo carboxiterminal, por exemplo, CH1, CH2, e assim por diante.

3-3 A molcula do anticorpo pode ser facilmente clivada em fragmentos funcionalmente distintos
Os domnios proteicos descritos se associam para formar grandes domnios globulares. Portanto, quando totalmente dobrada e unida, uma molcula de anticorpo compreende trs pores globulares de igual tamanho, unidas por uma poro flexvel da cadeia polipeptdica, conhecida como regio da dobradia (ver Figura 3.1b). Cada brao do Y formado pela associao de uma cadeia leve com a metade aminoterminal de uma cadeia pesada; o tronco do Y formado pelo pareamento das metades carboxiterminais das duas cadeias pesadas. A associao das cadeias pesadas e leves tal que os domnios VH e VL so pareados, assim como os domnios CH1 e CL. O domnio CH3 pareia com cada um dos outros, mas o domnio CH2 situa-se entre as duas cadeias pesadas. Os dois stios de ligao com o antgeno so formados pelo pareamento dos domnios VH e VL na extremidade dos dois braos do Y (ver Figura 3.1b). Enzimas proteolticas (proteases) que clivam sequncias polipeptdicas tm sido usadas para analisar a estrutura das molculas de anticorpos e para determinar quais partes da molcula so responsveis por suas vrias funes. A digesto limitada com a protease papana cliva as molculas de anticorpo em trs fragmentos (Figura 3.3). Dois fragmentos so idnticos e contm a atividade de ligao com o antgeno. Esses so denominados fragmentos Fab (fragment antigen binding). Os fragmentos Fab correspondem aos dois braos idnticos da molcula do anticorpo, cada um dos quais consiste em cadeias leves completas pareadas com os domnios VH e CH1 das cadeias pesadas. O outro fragmento no contm atividade de ligao com o antgeno, mas foi observado que cristaliza facilmente, e por essa razo foi denominado fragmento Fc (Fragment crystallizable). Esse fragmento corresponde ao pareamento dos domnios CH2 e CH3 e a regio da molcula de anticorpo que interage com molculas e clulas efetoras. As diferenas funcionais entre os isotipos de cadeia pesada encontram-se principalmente no fragmento Fc. Os fragmentos proteicos obtidos aps a protelise so determinados pelo local da clivagem pela protease na molcula do anticorpo em relao s pontes dissulfdricas que unem as duas cadeias pesadas. As pontes se localizam na regio da dobradia entre os domnios CH1 e CH2 e, como ilustrado na Figura 3.3, a papana cliva a molcula de anticorpo no lado aminoterminal das ligaes dissulfdricas. Dessa forma, os dois braos do anticorpo so liberados como fragmentos Fab, e no fragmento Fc, as metades carboxiterminais das cadeias pesadas permanecem unidas.

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Clivagem proteoltica pela papana

Fab

Fab

Fc

Figura 3.3 A molcula de imunoglobulina em forma de Y pode ser clivada por digesto parcial com proteases. Quadro superior: a papana cliva a molcula de imunoglobulina em trs partes, dois fragmentos Fab e um fragmento Fc. O fragmento Fab contm as regies V que se ligam ao antgeno. O fragmento Fc cristalizvel e contm as regies C. Quadro inferior: a pepsina cliva a imunoglobulina, produzindo um fragmento F(ab)2 e muitos fragmentos pequenos Fc, sendo o maior chamado de fragmento pFc. F(ab)2 escrito com um apstrofo porque contm alguns aminocidos a mais que o Fab, incluindo as cistenas que formam as ligaes dissulfdricas.

Clivagem proteoltica pela pepsina F(ab) 2

pFc

Outra protease a pepsina cliva na mesma regio da molcula de anticorpo que a papana, porm no lado carboxiterminal das ligaes dissulfdricas (ver Figura 3.3). Isso produz um fragmento no qual os dois braos que se ligam ao antgeno da molcula de anticorpo permanecem unidos, o fragmento F(ab)2. Nesse caso, o restante da cadeia pesada clivada em vrios fragmentos pequenos. O fragmento F(ab)2 possui exatamente a mesma caracterstica de ligao ao antgeno que o anticorpo original, mas incapaz de interagir com qualquer molcula efetora. Isso gera um grande potencial em aplicaes teraputicas de anticorpos, assim como sobre o papel funcional da poro Fc. Tcnicas de engenharia gentica permitem, atualmente, a construo de diferentes molculas relacionadas a anticorpos. Um tipo importante um Fab truncado, compreendendo somente a regio V da cadeia pesada unida por um pedao de peptdeo sinttico ao domnio V da cadeia leve. Sendo chamado de cadeia nica Fv, de fragmento varivel (Fragment variable). Molculas Fv podem tornar-se agentes teraputicos valiosos devido ao seu pequeno tamanho, permitindo pronta penetrao tissular. Por exemplo, molculas Fv especficas para tumores ligadas a toxinas proteicas tm potencial aplicao na terapia de tumores, como discutido no Captulo 15.

3-4 A molcula de imunoglobulina flexvel, especialmente na regio da dobradia


A regio da dobradia que liga as pores Fc e Fab da molcula de anticorpo uma regio flexvel, permitindo movimentos independentes dos dois braos Fab. Esta flexibilidade revelada por estudos de anticorpos ligados a pequenos ant-

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Figura 3.4 Os braos do anticorpo so unidos por uma dobradia flexvel. Um antgeno consistindo em duas molculas de hapteno (crculos vermelhos no diagrama) que capaz de ligar de forma cruzada dois stios de ligao do antgeno utilizado na formao de complexos antgeno-anticorpo, que podem ser vistos na fotomicrografia eletrnica. Os complexos podem ser vistos gerando formas lineares, triangulares e quadrangulares, com pequenas projees ou espculas. A digesto parcial com pepsina remove essas espculas (no mostrado na figura), que correspondem, portanto, poro Fc do anticorpo; as pores F(ab)2 permanecem ligadas de forma cruzada com o antgeno. A interpretao dos complexos ilustrada nos diagramas. O ngulo entre os braos da molcula do anticorpo varia desde 0 nos dmeros de anticorpo, 60 nas formas triangulares at 90 nas formas quadrangulares, mostrando que as conexes entre os braos so flexveis. (Fotografia (x 300.000) cortesia de N.M. Green.)

O ngulo de 0 entre os braos

O ngulo de 60 entre os braos

O ngulo de 90 entre os braos

genos conhecido como haptenos. Esses so molculas pequenas de vrios tipos, tipicamente do tamanho de uma cadeia lateral de tirosina. Embora os haptenos possam ser especificamente reconhecidos por anticorpos, eles s podem estimular a produo de anticorpos anti-hapteno quando ligado a uma protena (ver Apndice I, Seo A-1). Duas molculas de hapteno idnticas, unidas por uma curta regio flexvel, podem ligar dois ou mais anticorpos anti-hapteno, formando dmeros, trmeros, tetrmeros, e assim por diante, os quais podem ser observados por microscopia eletrnica (Figura 3.4). As estruturas formadas por esses complexos demonstraram que as molculas de anticorpos so flexveis na regio da dobradia. Alguma flexibilidade tambm encontrada na juno entre os domnios V e C, permitindo a flexo e a rotao do domnio V em relao ao domnio C. Por exemplo, na molcula de anticorpo mostrada na Figura 3.1a, no somente existem duas regies de dobradia claramente com dobras diferentes, como o ngulo entre os domnios V e C em cada um dos dois braos Fab tambm diferente. Essa amplitude de movimento levou a juno entre os domnios V e C a ser chamada de articulao esfrica molecular. A flexibilidade de ambas as dobradias e junes V-C permite a unio dos braos da molcula de anticorpo a stios que estejam separados por grandes distncias, como, por exemplo, os stios dos polissacardeos da parede celular bacteriana. A flexibilidade da dobradia tambm permite que os anticorpos interajam com as protenas ligantes que medeiam os mecanismos efetores imunes.

3-5 Os domnios de uma molcula de imunoglobulina tm estrutura similar


Como visto na Seo 3-2, as cadeias pesadas e leves das imunoglobulinas so compostas por uma srie de domnios proteicos discretos, todos com estrutura de dobra semelhante. Dentro dessa estrutura tridimensional bsica, existem dife-

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Domnio C de cadeia leve

Domnio V de cadeia leve

N-terminal

C-terminal

Fitas Ponte dissulfdrica

Fitas

Arranjos de fitas

Figura 3.5 A estrutura dos domnios constantes e variveis das imunoglobulinas. Os quadros superiores mostram, esquematicamente, o padro de dobramento dos domnios variveis (V) e constantes (C) de uma cadeia leve de imunoglobulina. Cada domnio uma estrutura globular, na qual as fitas da cadeia polipeptdica se unem para formar duas folhas antiparalelas que so mantidas por uma ponte dissulfdrica (mostrado em amarelo e verde, para o domnio C, e em vermelho e azul, para o domnio V). A forma como a cadeia polipeptdica se dobra para formar a estrutura final pode ser vista mais claramente quando as folhas so abertas, como mostrado no quadro inferior. As fitas so marcadas por letras, respeitando sua ocorrncia na sequncia dos aminocidos dos domnios; a ordem em cada folha caracterstica dos domnios de imunoglobulina. As folhas Ce C, que so localizadas nos domnios V, mas no nos C, esto indicadas pelo fundo azul sombreado. Os segmentos caractersticos 3 fitas mais 4 fitas (domnio tipo regio C) ou 4 fitas mais 5 fitas (domnio tipo regio V) so os tpicos blocos que formam os domnios da superfamlia das imunoglobulinas, encontrados em uma grande variedade de protenas, como os anticorpos e os receptores de clulas T.

Ponte dissulfdrica
D E B A G F C

Ponte dissulfdrica
D E B A G F C C C

renas entre os domnios V e C. As semelhanas e as diferenas estruturais podem ser vistas no diagrama de uma cadeia leve na Figura 3.5. Cada domnio constitudo por duas folhas , as quais so elementos da estrutura proteica compostos por fitas de cadeia polipeptdica (fitas ) empacotadas. As folhas so ligadas por uma ponte dissulfdrica que forma uma estrutura em forma de cilindro, conhecido como cilindro . A caracterstica estrutural de dobra do domnio da protena da imunoglobulina conhecida como dobra de imunoglobulina. Tanto a semelhana essencial dos domnios V e C quanto as diferenas crticas entre eles so mais claramente vistas nos quadros inferiores da Figura 3.5, onde os domnios cilndricos esto abertos para revelar como a cadeia polipeptdica dobra para criar cada uma das folhas e como forma alas flexveis quando muda de direo. A principal diferena entre os domnios V e C que o domnio V maior, com uma ala extra. As alas flexveis dos domnios V formam um stio de ligao do antgeno da molcula de imunoglobulina. Muitos dos aminocidos que so comuns aos domnios C e V das cadeias de imunoglobulinas se situam no centro da dobra da imunoglobulina e so essenciais para a estabilidade de sua estrutura. Por essa razo, outras protenas que apresentam sequncias similares s das imunoglobulinas devem tambm formar domnios de estrutura similar, e em muitos casos isso tem sido demonstrado por cristalografia. Esses domnios semelhantes s imunoglobulinas esto presentes em muitas outras protenas do sistema imune e em protenas envolvidas com o reconhecimento clula-clula e adeso no sistema nervoso e em outros tecidos.

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Juntamente com as imunoglobulinas e os receptores de clulas T, eles compem a extensa superfamlia das imunoglobulinas.

Resumo
As molculas de anticorpos IgG so formadas por quatro cadeias polipeptdicas, compreendendo duas cadeias leves idnticas e duas cadeias pesadas tambm idnticas, podendo-se imaginar que constituam uma estrutura flexvel em forma de Y. Cada uma das quatro cadeias tem uma regio varivel (V) em sua poro aminoterminal, o que contribui para a formao do stio de ligao com o antgeno, e uma regio constante (C), que determina o isotipo. O isotipo da cadeia pesada determina as propriedades funcionais do anticorpo. As cadeias leves so ligadas s cadeias pesadas por muitas interaes no-covalentes e por pontes dissulfdricas, e as regies V das cadeias pesadas e leves pareiam em cada brao do Y para gerar dois stios idnticos de ligao ao antgeno, localizados nas extremidades dos braos do Y. A existncia de dois stios de ligao com o antgeno permite que molculas de anticorpos faam uma reao cruzada com os antgenos, ligando-se a eles de forma mais estvel. O tronco do Y, ou fragmento Fc, composto pelos domnios carboxiterminais das cadeias pesadas. Unindo os braos ao tronco do Y, existem regies articuladas flexveis. O fragmento Fc e as regies da dobradia diferem nos anticorpos de diferentes isotipos, determinando suas propriedades funcionais. Entretanto, a organizao geral dos domnios similar em todos os isotipos.

A interao da molcula de anticorpo com um antgeno especfico


Descrevemos a estrutura da molcula de anticorpo e como as regies das cadeias leves e pesadas se dobram e pareiam para a formao do stio de ligao com o antgeno. Nesta parte do captulo, veremos o stio de ligao ao antgeno mais detalhadamente. Discutiremos as diferentes maneiras pelas quais os antgenos podem se unir ao anticorpo, apontando para a questo de como a variabilidade nas sequncias dos domnios V do anticorpo determina a especificidade frente ao antgeno.

3-6 Regies localizadas de sequncia hipervarivel formam o stio de ligao do antgeno


As regies V de uma determinada molcula de anticorpo diferem de qualquer outra molcula de anticorpo. A variabilidade da sequncia no , entretanto, distribuda uniformemente por toda a regio V, mas est concentrada em determinados segmentos, como pode ser visto claramente no chamado diagrama de variabilidade (Figura 3.6), onde so comparadas as sequncias de aminocidos das regies V de muitos anticorpos diferentes. Trs segmentos particularmente variveis podem ser identificados em ambos os domnios VH e VL. Essas so designadas regies hipervariveis e so chamadas de HV1, HV2 e HV3. Nas cadeias pesadas, elas so constitudas aproximadamente dos resduos de 30 a 36, 49 a 65 e de 95 a 103, respectivamente, ao passo que nas cadeias leves so provenientes dos resduos 28 a 35, 49 a 59 e 92 a 103, respectivamente. A poro mais varivel do domnio est na regio HV3. As regies localizadas entre as regies hipervariveis, o que compreende o restante do domnio V, apresentam uma menor variabilidade e so denominadas regies estruturais. Existem quatro dessas regies em cada domnio V, denominadas FR1, FR2, FR3 e FR4. As regies estruturais formam as folhas que proporcionam o suporte bsico ao domnio, com as sequncias hipervariveis correspondendo a trs alas nas bordas

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Regies V de cadeia pesada Variabilidade Variabilidade


50 40 30 20 10 0 0 20 40 60 80 100 120 0 100 80 60 40 20 0

Regies V de cadeia leve

Figura 3.6 Existem regies distintas de hipervariabilidade nos domnios V. A figura mostra a anlise da comparao de sequncias de vrias regies V de cadeias leve e pesada. Em cada posio do aminocido, o grau de variabilidade a razo do nmero de diferentes aminocidos vistos em todas as sequncias em relao frequncia dos aminocidos mais comuns. Trs regies hipervariveis (HV1, HV2 e HV3) esto indicadas em vermelho e tambm so conhecidas como regies determinantes de complementaridade CDR1, CDR2 e CDR3. Elas so flanqueadas por regies estruturais menos variveis (FR1, FR2, FR3 e FR4, mostradas em azul e amarelo).

20

40

60

80

100

120

Resduo
FR1 FR2 HV1 HV2 FR3 HV3 FR4
FR1 HV1 FR2 HV2 FR3

Resduo
HV3 FR4

do cilindro , as quais esto justapostas nos domnios dobrados (Figura 3.7). Assim, a diversidade sequencial localiza-se no apenas em partes especiais do domnio V, mas tambm em partes especiais da superfcie da molcula. Alm disso, quando os domnios VH e VL pareiam na molcula do anticorpo, as alas hipervariveis de cada domnio unem-se, criando um nico stio hipervarivel na extremidade de cada brao da molcula de anticorpo. Esse stio denominado stio de ligao do antgeno ou stio de combinao do anticorpo. As seis alas hipervariveis determinam a especificidade do antgeno por formar uma superfcie complementar para o antgeno, e so mais comumente chamadas de regies determinantes de complementaridade, ou CDRs (existem trs CDRs para cada cadeia pesada e leve, denominadas CDR1, CDR2 e CDR3). Os CDRs de ambos os domnios VH e VL contribuem para o stio de ligao do antgeno, sendo que a combinao das cadeias pesada e leve, e nenhuma delas sozinha, determina a especificidade antignica final. Desse modo, um meio pelo qual o sistema imune capaz de gerar anticorpos de diferentes especificidades gerando diferentes combinaes das regies V das cadeias pesadas e leves. Essa maneira de produzir variabilidade conhecida como diversidade combinatria. Veremos uma segunda forma de diversidade combinatria quando considerarmos no Captulo 4 como os genes que codificam para as regies V de cadeias pesadas e leves so criados a partir de segmentos menores de DNA.

3-7 Os anticorpos ligam-se ao antgeno por meio do contato dos aminocidos nas CDRs, mas os detalhes dessa ligao dependem do tamanho e da forma do antgeno
No incio das investigaes sobre a ligao do antgeno com o anticorpo, as nicas fontes disponveis em grande quantidade de um nico tipo de anticorpo eram tumores de clulas secretoras de anticorpo. A especificidade antignica dos anticorpos derivados de tumores era desconhecida, de modo que um grande nmero de compostos teve de ser testado para identificar os ligantes que poderiam ser utilizados para estudar a ligao com o antgeno. Em geral, as substncias encontradas na ligao com anticorpos eram haptenos (ver Seo 3-4), como a fosfocolina e a vitamina K1. A anlise estrutural dos complexos dos anticorpos e seus haptenos ligantes forneceu a primeira evidncia direta de que as regies hipervariveis formavam o stio de ligao com o antgeno e estabeleceu a base estrutural da especificidade antignica para o hapteno. Subsequentemente, com a descoberta

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Regio V de cadeia leve


Variabilidade 50

Figura 3.7 As regies hipervariveis posicionam-se em alas separadas na estrutura dobrada. Quando as regies hipervariveis (CDRs) esto posicionadas na estrutura de um domnio V, pode-se observar que elas esto em alas que se aproximam na estrutura dobrada.

Na molcula de anticorpo, o pareamento das cadeias pesadas e leves aproxima as alas hipervariveis de cada cadeia, criando uma nica superfcie hipervarivel, que forma o stio de ligao com o antgeno na extremidade de cada brao. C, carboxiterminal; N, aminoterminal.

40 30 20 10 0 0 20 40 60 80 100 Resduo HV3 FR4

de mtodos para a produo de anticorpos monoclonais (ver Apndice I, Seo A-12), foi possvel fazer uma grande quantidade de anticorpos puros especficos para um dado antgeno. Isto tem proporcionado um panorama mais geral do modo como anticorpos interagem com seus antgenos, confirmando e ampliando a viso das interaes antgeno-anticorpo derivadas do estudo dos haptenos. A superfcie da molcula de anticorpo formada pela justaposio das CDRs de cadeias leve e pesada cria o stio de ligao com o antgeno. As sequncias dos aminocidos das CDRs so diferentes em diferentes anticorpos, assim como as formas das superfcies criadas por essas CDRs. Como um princpio geral, anticorpos unem-se a ligantes com superfcies complementares ao stio de ligao do antgeno. Um antgeno pequeno, como um hapteno ou um pequeno peptdeo, geralmente se liga em um sulco ou em uma fenda localizada entre os domnios V das cadeias leve e pesada (Figura 3.8a e b). Alguns antgenos, como protenas, podem ser do mesmo tamanho, ou at maiores que os prprios anticorpos. Nesses casos, a interface entre antgeno e anticorpo , frequentemente, uma ampla superfcie que envolve todas as CDRs e, em alguns casos, pode incluir algumas regies estruturais do anticorpo (Figura 3.8c) Essa superfcie no precisa ser cncava; pode ser plana, ondulada ou mesmo convexa. Em alguns casos, molculas de anticorpo com a ala CDR3 alongada podem introduzir um dedo nas retraes da superfcie do antgeno, como mostrado na Figura 3.8d, onde o anticorpo ligado ao antgeno gp120 do HIV projeta uma longa ala contra o alvo.

FR1

HV1 FR2 HV2

FR3

N
HV3 (CDR3)

HV1 (CDR1)

3-8 Os anticorpos ligam-se a formas conformacionais na superfcie do antgeno


A funo biolgica dos anticorpos ligar-se aos patgenos e a seus produtos e facilitar a sua remoo do organismo. Um anticorpo geralmente reconhece apenas uma pequena regio na superfcie de uma molcula grande, tal como um polissacardeo ou uma protena. A estrutura que reconhecida por um anticorpo chamada de determinante antignico ou eptopo. Alguns dos mais importantes patgenos possuem uma capa polissacardica, e os anticorpos que reconhecem eptopos constitudos por subunidades de acar dessas molculas so essenciais no fornecimento da proteo imune contra tais patgenos. Em muitos casos, entretanto, os antgenos que induzem uma resposta imune so protenas. Por exemplo, anticorpos protetores contra vrus reconhecem a cobertura viral. Em todos esses casos, a estrutura reconhecida pelo anticorpo est localizada na superfcie da protena. Esses stios so compostos por aminocidos de diferentes partes da cadeia polipeptdica que foram aproximados pelo dobramento proteico. Os determinantes antignicos dessa natureza so conhecidos como eptopos conformacionais ou descontnuos, porque a estrutura reconhecida composta por segmentos proteicos descontinuados na sequncia de aminocidos do antgeno, mas reunidos na estrutura tridimensional. Em contraste, um eptopo composto por um nico fragmento da cadeia polipeptdica denominado eptopo contnuo ou linear. Embora a maior parte dos anticorpos gerados contra protenas intactas completamente dobradas reconhea eptopos descontnuos, alguns podem ligar-se a fragmentos peptdicos da protena. Inversamente, os anticorpos produzidos contra fragmentos peptdicos de uma protena ou contra peptdeos sintticos, correspondendo parte de sua sequncia, so, s vezes, encontrados ligados com a protena nativa dobrada. Isso possibilita, em alguns casos, usar peptdeos sintticos em vacinas que visam produo de anticorpos contra protenas de um patgeno.

HV2 (CDR2)

Stio de ligao com o antgeno

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VH

VL

3-9 As interaes antgeno-anticorpo envolvem uma variedade de foras


A interao entre um anticorpo e seu antgeno pode ser rompida por altas concentraes de sal, pH extremo, detergentes e, algumas vezes, por competio com altas concentraes do prprio eptopo puro. A ligao , portanto, uma interao no-covalente reversvel. As foras ou pontes envolvidas nessas interaes no-covalentes esto esquematizadas na Figura 3.9. Interaes eletrostticas ocorrem entre as cadeias laterais dos aminocidos carregados, assim como nas pontes de sal. Interaes tambm ocorrem entre os dipolos eltricos, como nas pontes de hidrognio e nas foras de van der Waals de menor alcance. Altas concentraes salinas e pH extremo rompem a ligao antgeno-anticorpo por enfraquecimento das interaes eletrostticas e/ou pontes de hidrognio. Esse princpio empregado na purificao de antgenos, utilizando colunas de afinidade com anticorpos imobilizados e vice-versa para a purificao de anticor-

Figura 3.8 Antgenos podem ligar-se em sulcos, em cavidades ou em superfcies amplas dos stios de ligao dos anticorpos. Os quadros da fileira superior mostram representaes esquemticas de diferentes tipos de stios de ligao no fragmento Fab de um anticorpo: primeiro quadro, sulco; segundo quadro, cavidade; terceiro quadro, superfcie ampla; quarto quadro, superfcie que se protunde. Abaixo, esto exemplos de cada tipo. Quadro a: no topo da imagem, est representada a interao da superfcie da molcula de um pequeno hapteno com regies determinantes de complementaridade (CDRs) de um fragmento Fab visto dentro do stio de ligao do antgeno. O hapteno ferroceno, mostrado em verde, ligado no sulco de ligao do antgeno (amarelo). Na imagem inferior (e nos quadros b, c e d), a molcula foi girada cerca de 90 para mostrar a superfcie lateral do stio de ligao. Quadro b: em um complexo de um anticorpo com um peptdeo do vrus da imunodeficincia humana (HIV), o peptdeo (verde) liga-se ao longo do sulco (amarelo) formado entre os domnios V de cadeias leve e pesada. Quadro c: complexo entre a lisozima da clara do ovo de galinha e o fragmento Fab de seu anticorpo correspondente (HyHel5). A superfcie do anticorpo que entra em contato com a lisozima est em amarelo. Todas as seis CDRs do stio de ligao do antgeno esto envolvidas na ligao. Quadro d: uma molcula de anticorpo contra o antgeno gp120 do HIV alongou a ala CDR3 que penetrou em um recuo na superfcie do antgeno. A estrutura do complexo entre este anticorpo e a gp120 ainda no foi solucionada; assim, a rea amarela na imagem nos quadros inferiores representa a extenso da regio CDR, em vez da real regio de contato entre o anticorpo e o antgeno. (Fotografias cortesia de I.A. Wilson e R.L. Stanfield.)

Foras no-covalentes Foras eletrostticas

Origem
Atrao entre cargas opostas Hidrognio compartilhado entre tomos eletronegativos (N, O) Flutuaes nas nuvens de eltrons ao redor das molculas polarizam de maneira oposta os tomos vizinhos Grupos hidrofbicos interagem desfavoravelmente com a gua e tendem a se agrupar para excluso de molculas de gua. A atrao tambm envolve foras de van der Waals.

NH 3 N

OOC H O C

Pontes de hidrognio

Foras de van der Waals

H H

H O H O H H

O
H O H

Foras hidrofbicas

Figura 3.9 As foras no-covalentes que mantm unido o complexo antgeno-anticorpo. As cargas parciais encontradas nos dipolos eltricos + so mostradas como ou . Foras eletrostticas so inversamente proporcionais ao quadrado da distncia que separa as cargas, enquanto as foras de van der Waals, que so mais numerosas na maioria dos contatos antgeno-anticorpo, classificam-se como a sexta fora de separao e, portanto, atuam somente em curtas distncias. Ligaes covalentes raramente ocorrem entre antgenos e anticorpos produzidos naturalmente.

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pos (Apndice I, ver Seo A-5). Interaes hidrofbicas ocorrem quando duas superfcies hidrofbicas se aproximam para excluir a gua. A fora de uma interao hidrofbica proporcional rea da superfcie que protegida da gua. Para alguns antgenos, interaes hidrofbicas provavelmente so responsveis pela maior parte da energia de ligao. Em alguns casos, molculas de gua esto aprisionadas em bolsos na interface entre o antgeno e o anticorpo. Essas molculas de gua aprisionadas, especialmente aquelas entre os resduos de aminocidos polares, tambm podem contribuir para a ligao e, por isso, para a especificidade do anticorpo. A contribuio de cada uma dessas foras na interao total depende do anticorpo especfico e do antgeno envolvido. Uma notvel diferena entre as interaes de anticorpos com protenas antignicas e a maioria das outras interaes naturais entre protena-protena reside no fato de os anticorpos possurem muitos aminocidos aromticos em seus stios de ligao com os antgenos. Esses aminocidos participam, principalmente, em ligaes por foras de van der Waals e interaes hidrofbicas, e algumas vezes em pontes de hidrognio. A tirosina, por exemplo, pode participar em ambas as pontes de hidrognio e interaes hidrofbicas. Isso particularmente adequado para proporcionar diversidade no reconhecimento do antgeno e est presente, frequentemente, nos stios de ligao do antgeno. Em geral, as foras hidrofbicas e de van der Waals agem sobre distncias muito pequenas e servem para unir duas superfcies com formatos complementares: elevaes de uma superfcie encaixam-se em depresses de outra, para que ocorra uma boa ligao. Em contraste, as interaes eletrostticas entre cadeias laterais com carga e pontes de hidrognio que ligam tomos de oxignio e/ou nitrognio acomodam caractersticas especficas ou grupos reativos enquanto fortalecem a interao total. Aminocidos que possuem cadeias laterais carregadas, como a arginina, so tambm mais frequentes nos stios de ligao do antgeno. Um exemplo de uma reao envolvendo aminocido especfico no antgeno pode ser visto no complexo da lisozima da clara do ovo de galinha com o anticorpo D1.3 (Figura 3.10), onde formam-se fortes pontes de hidrognio entre o anticorpo e uma glutamina especfica da molcula da lisozima que se salienta entre os domnios VH e VL. Lisozimas de perdiz e peru tm um outro aminocido no lugar da glutamina e no se ligam a esse anticorpo. No complexo de alta afinidade da lisozima da clara do ovo de galinha com outro anticorpo, HyHel5 (ver Figura 3.8c), duas pontes de sal formadas entre duas argininas bsicas na superfcie da lisozima interagem com dois cidos glutmicos, oriundos das alas CDR1 e CDR2 da VH. Mais uma vez, as lisozimas que no possuem um dos dois resduos de arginina apresentam uma afinidade 1.000 vezes menor com HyHel5. Embora a complementaridade global da superfcie deva ter um importante papel nas interaes antgeno-anticorpo, na maioria dos anticorpos que foram estudados com este nvel de detalhe, somente poucos resduos contribuem de forma importante para a energia de ligao e, por isso, para a especificidade final do anticorpo. Embora muitos anticorpos nativos se unam a seus ligantes com alta afinidade, a engenharia gentica, por meio de mutagnese stio-dirigida, pode moldar um anticorpo para ligar-se ainda mais fortemente ao seu eptopo.

Figura 3.10 O complexo formado pela lisozima com o anticorpo D1.3. A interao dos fragmentos Fab do D1.3 com a lisozima da albumina do ovo de galinha est ilustrada com a lisozima em azul, a cadeia pesada, em roxo, e a cadeia leve, em amarelo. A glutamina, um resduo da lisozima, mostrado em vermelho, emerge entre os domnios V do stio de ligao com o antgeno e torna as pontes de hidrognio importantes para a ligao antgeno-anticorpo. (Cortesia de R.J. Poljak.)

Resumo
A anlise do complexo antgeno-anticorpo por cristalografia por raios X demonstrou que as alas hipervariveis (regies determinantes da complementaridade, DCRs) das regies V das imunoglobulinas determinam a especificidade dos anticorpos. No caso dos antgenos proteicos, a molcula do anticorpo faz contato com o antgeno sobre uma larga rea de sua superfcie, que complementar superfcie antignica reconhecida. Interaes eletrostticas, pontes de hidrognio, foras de van der Waals e interaes hidrofbicas podem contribuir para a ligao. Dependendo do tamanho do antgeno, as cadeias laterais dos aminocidos, na maioria ou em todas as CDRs, fazem contato com o antgeno e determinam a especificida-

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de e a afinidade da interao. Outras partes da regio V desempenham papel menos importante no contato direto com o antgeno, mas fornecem uma sustentao estrutural estvel para as CDRs e ajudam a determinar sua posio e conformao. Os anticorpos produzidos contra protenas nativas normalmente se ligam superfcie da protena e estabelecem contato com resduos descontnuos da estrutura primria da molcula; embora possam ocasionalmente ligar-se a fragmentos peptdicos da protena e possam s vezes ser usados para detectar uma molcula de protena nativa. Os peptdeos ligam-se ao anticorpo na fenda entre as regies V das cadeias leves e pesadas, onde fazem contato especfico com algumas, mas no necessariamente com todas as CDRs. Esse tambm o modo usual de ligao com antgenos de carboidratos e com molculas pequenas, como os haptenos.

O reconhecimento do antgeno pelas clulas T


Ao contrrio das imunoglobulinas, as quais interagem com o patgeno e seus produtos txicos no espao extracelular do organismo, as clulas T somente reconhecem antgenos estranhos que so apresentados na superfcie das prprias clulas do organismo. Esses antgenos podem ser provenientes de patgenos como vrus ou bactrias intracelulares, que se replicam dentro da clula, ou de patgenos ou seus produtos provenientes do fluido extracelular que as clulas internalizaram por endocitose. As clulas T podem detectar a presena de patgenos intracelulares, porque as clulas infectadas expem em suas superfcies fragmentos peptdicos oriundos das protenas dos patgenos. Esses peptdeos estranhos so liberados para a superfcie da clula por glicoprotenas especializadas da clula hospedeira as molculas do MHC. Estas so codificadas por um grande grupo de genes, primeiramente identificados por seus poderosos efeitos na resposta imune contra tecidos transplantados. Por essa razo, o complexo gnico foi chamado de complexo de histocompatibilidade principal (MHC), e as glicoprotenas ligadoras de peptdeos so conhecidas como molculas do MHC. O reconhecimento do antgeno como um pequeno fragmento peptdico ligado a uma molcula do MHC e exposto na superfcie celular uma das caractersticas mais distintas das clulas T e ser o foco desta parte do captulo. A forma como um fragmento peptdico de um antgeno forma um complexo com molculas do MHC ser descrito no Captulo 5. Nesta parte do captulo, descreveremos a estrutura e as propriedades do receptor da clula T (ou TCR). Como esperado com base em suas funes como estruturas altamente variveis de reconhecimento do antgeno, genes para o receptor de clulas T esto fortemente relacionados s imunoglobulinas. Entretanto, existem diferenas importantes entre os receptores de clulas T e as imunoglobulinas que refletem as caractersticas especiais do reconhecimento do antgeno pelas clulas T.

Stio de ligao do antgeno VL Fab CL CH VH Anticorpo

Fc Stio de ligao do antgeno

Receptor da clula T

Clula T

3-10 O receptor de clulas T muito semelhante ao fragmento Fab de imunoglobulina


Os receptores de clulas T foram identificados pela primeira utilizando-se anticorpos monoclonais que se ligam somente a um clone de linhagem de clula T: esses anticorpos podem inibir especificamente o reconhecimento do antgeno por esses clones ou ativ-los especificamente, mimetizando o antgeno (ver Apndice I, Seo A-19). Esses anticorpos clonotpicos foram usados para mostrar que cada clula T possui cerca de 30.000 receptores de antgenos idnticos em sua superfcie, sendo cada receptor constitudo por duas cadeias polipeptdicas diferentes, denominadas cadeias de receptor de clulas T (TCR) e cadeias (TCR), ligadas por uma ponte dissulfdrica. Esses heterodmeros : so muito

Figura 3.11 O receptor da clula T se assemelha a um fragmento Fab ligado membrana. O fragmento Fab das molculas de anticorpo um heterodmero ligado por pontes dissulfdricas, no qual cada cadeia contm um domnio constante e uma poro varivel de imunoglobulina; a justaposio das regies variveis forma o stio de ligao do antgeno (ver Seo 3-6). O receptor da clula T , tambm, um heterodmero ligado por pontes dissulfdricas, no qual cada cadeia contm uma poro semelhante ao domnio constante de imunoglobulina e uma poro semelhante ao domnio varivel. Assim como no fragmento Fab, a justaposio dos domnios V forma o stio de reconhecimento do antgeno.

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Carboidrato Cadeia Cadeia

Regio varivel (V)

Figura 3.12 A estrutura do receptor de clulas T. O heterodmero do receptor de clulas T composto por duas cadeias glicoproteicas transmembrana, e . A poro extracelular da cadeia consiste em dois domnios que se assemelham aos domnios V e C da imunoglobulina. Ambas as cadeias possuem cadeias laterais de carboidratos ligadas a cada domnio. Um curto seg-

mento, anlogo regio flexvel das imunoglobulinas membrana, contm um resduo de cistena que forma a ponte dissulfdrica intercadeia. As hlices transmembrana de ambas as cadeias so pouco comuns, pois contm resduos carregados positivamente (bsicos) no segmento transmembrana hidrofbico. A cadeia possui dois desses resduos, e a cadeia , apenas um.

Regio constante (C) Dobradia (H)


+ + +

Regio transmembrana Cauda citoplasmtica

Ponte dissulfdrica

semelhantes em sua estrutura ao fragmento Fab da molcula de imunoglobulina (Figura 3.11) e so responsveis pelo reconhecimento de antgeno pela maioria das clulas T. Existe, em uma minoria de clulas T, um tipo alternativo de receptor, estruturalmente semelhante, formado por um par de diferentes cadeias polipeptdicas designadas como e . Os receptores de clulas T : possuem propriedades de reconhecimento do antgeno diferentes do receptor de clula T :, e a funo das clulas T : na resposta imune ainda no totalmente clara (ver Seo 2-34). No restante deste captulo, utilizaremos o termo receptor de clulas T referindo-se ao receptor :, exceto quando indicado o contrrio. Ambos os tipos de receptores de clulas T diferem das imunoglobulinas ligadas membrana que funcionam como receptores de clulas B principalmente de duas maneiras. O receptor da clula T possui apenas um stio de ligao, e o receptor da clula B possui dois. Os receptores de clulas T nunca so secretados, ao passo que a imunoglobulina pode ser secretada na forma de anticorpo. Os dados iniciais sobre a estrutura e a funo do receptor de clulas T : surgiram a partir de estudos de clones de cDNA que codificam as cadeias receptoras. A sequncia de aminocidos obtida a partir do cDNA do receptor de clulas T mostrou claramente que ambas as cadeias do receptor das clulas T possuem uma regio varivel aminoterminal (V) com homologia ao domnio V das imunoglobulinas, uma regio constante homloga regio C das imunoglobulinas e um pequeno segmento de dobradia com um resduo de cistena que forma uma ponte dissulfdrica entre as cadeias (Figura 3.12). Cada cadeia atravessa a bicamada lipdica por um domnio transmembrana hidrofbico e termina em uma pequena cauda citoplasmtica. Essas similaridades das cadeias dos receptores das clulas T s cadeias leves e pesadas das imunoglobulinas possibilitaram a primeira identificao da semelhana estrutural entre o heterodmero do receptor de clulas T e o fragmento Fab das imunoglobulinas. A estrutura tridimensional do receptor da clula T foi, desde ento, determinada por cristalografia por raios X, sendo, de fato, semelhante ao fragmento Fab. As cadeias dos receptores de clulas T dobram-se da mesma forma que o fragmento Fab (Figura 3.13a), embora a estrutura final parea mais curta e larga. Existem, entretanto, algumas distintas diferenas estruturais entre o receptor de clulas T e o fragmento Fab. A diferena mais notvel est no domnio C, onde a dobra diferente de qualquer outro domnio semelhante imunoglobulina. A metade do domnio que justaposta ao domnio C forma uma folha similar encontrada em outros domnios de imunoglobulinas, mas a outra metade formada por fitas levemente agrupadas e por um curto segmento de hlice (Figura 3.13b). No domnio C, a ponte dissulfdrica intramolecular, a qual semelhante a um domnio de imunoglobulina, normalmente liga duas fitas , ligando a fita ao segmento de hlice . Existem tambm diferenas na forma em que os domnios interagem. A interface entre os domnios V e C de ambas as cadeias dos receptores de clulas T mais extensa do que nos anticorpos. A interao entre os domnios C e C distinta por fazer uso de carboidratos, com um grupamento acar do domnio C formando vrias pontes de hidrognio com o domnio C (ver Figura 3.13b). Finalmente, uma comparao entre os stios de ligao variveis mostra que, embora as alas das CDR se alinhem bastante perto s molculas dos anticorpos, h alguns deslocamentos (ver Figura 3.13c). Esse deslocamento particularmente marcante na ala V CDR2, que orientada em ngulos retos equivalentes ala nos domnios

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3 3

2 1

TCR IgL V
L2 H3

TCR IgH
H1

HV4

C C C
a b

HV4

L3 L1 H2

Carboidrato
c

Figura 3.13 Estrutura cristalogrfica de um receptor de clula T : a uma resoluo de 2,5 . Nos quadros a e b, as cadeias so mostradas em rosa, e as cadeias , em azul. As pontes dissulfdricas so mostradas em verde. No quadro a, o receptor de clulas T visto de cima, como se encontra na superfcie celular, com as alas CDRs que formam o stio de ligao ao antgeno (marcadas 1, 2 e 3) alinhadas atravs de uma superfcie superior relativamente chata. No quadro b, so mostrados os domnios C e C. O domnio C no se dobra como o tpico domnio de uma imunoglobulina; uma face composta por fitas irregulares de peptdeos, ao invs de folhas . As pontes dissulfdricas intramoleculares ligam as fitas ao segmento da hlice . A interao entre os domnios C e C auxiliada por carboidratos (coloridos em cinza e marcados na figura), com o grupamento acar do domnio C criando pontes de hidrognio com o domnio C. No quadro

c, o receptor de clulas T mostrado alinhado aos stios de ligao do antgeno de trs anticorpos diferentes. Esta uma vista de cima do stio de ligao. O domnio V do receptor est alinhado com o domnio VL do stio de ligao do anticorpo, e o domnio V, alinhado com VH. Os CDRs do receptor de clula T e as molculas de imunoglobulinas esto coloridos, com os CDR1, 2 e 3 do TCR mostrados em vermelho, e a ala HV4, em laranja. No domnio V da imunoglobulina, as alas CDR1 da cadeia pesada (H1) e da cadeia leve (L1) so mostradas em azul-claro e escuro, respectivamente, e as alas CDR2 (H2, L2) em roxo-claro e escuro, respectivamente. A ala CDR3 da cadeia pesada (H3) aparece em amarelo, e a da cadeia leve CDR3 (L3), em verde-claro. A ala HV4 do TCR (laranja) no possui paralelo hipervarivel na cadeia de imunoglobulina. (Modelo da estrutura cortesia de I.A. Wilson.)

V dos anticorpos, como resultado de um deslocamento na fita que ancora um final da ala de um lado do domnio ao outro. O deslocamento da fita tambm causa uma mudana na orientao da ala V CDR2 em alguns dos domnios V, cujas estruturas so conhecidas. A estrutura cristalogrfica foi descrita nesse nvel de resoluo; assim, ainda est por ser demonstrado at que ponto todos os receptores de clulas T compartilham essas caractersticas e se ainda existem mais diferenas a serem descobertas.

3-11 O receptor de clulas T reconhece o antgeno na forma de um complexo de um peptdeo estranho ligado a uma molcula do MHC
O reconhecimento do antgeno pelos receptores de clulas T difere claramente do reconhecimento pelas clulas B e anticorpos. O reconhecimento do antgeno pelas clulas B envolve a ligao direta da imunoglobulina ao antgeno intacto, como discutido na Seo 3-8. Os anticorpos ligam-se, tipicamente, superfcie das protenas antignicas, interagindo com aminocidos que so descontnuos na estrutura primria, mas prximos na conformao nativa da protena. Por outro lado, as clulas T respondem a pequenas sequncias de aminocidos contguas nas protenas. Essas sequncias esto frequentemente escondidas na estrutura da protena
a
Figura 3.14 Diferenas no reconhecimento da lisozima da clara do ovo pelas imunoglobulinas e pelos receptores de clulas T. Os anticorpos podem ser vistos, por cristalografia por raios X, ligando-se a eptopos na superfcie de protenas, como mostrado no quadro a, onde os eptopos para trs anticorpos so mostrados em diferentes cores na superfcie da lisozima da clara do ovo (ver tambm Figura 3.10). Em contraste, os eptopos reconhecidos pelos receptores de clulas T no precisam ligar-se na superfcie da molcula, pois o receptor de clulas T reconhece fragmentos peptdicos da protena, e no a protena antignica por si s. Os peptdeos correspondendo a dois eptopos de clulas T da lisozima so mostrados no quadro b. Um eptopo em azul liga-se superfcie da protena, mas um segundo, mostrado em vermelho, liga-se principalmente no centro e est inacessvel protena dobrada. Para que este resduo fique acessvel ao receptor de clulas T, a protena deve ser desdobrada e processada. (Quadro a cortesia de S. Sheriff.)

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nativa e podem no ser reconhecidas diretamente pelos receptores das clulas T, a menos que ocorra algum tipo de desdobramento ou processamento em fragmentos peptdicos (Figura 3.14). Veremos no Captulo 5 a forma como isso ocorre. A natureza do antgeno reconhecido pelas clulas T tornou-se clara com a descoberta de que fragmentos peptdicos que estimulam as clulas T somente so reconhecidos quando ligados a uma molcula do MHC. O ligante reconhecido pela clula T , assim, um complexo de um peptdeo com uma molcula do MHC. A evidncia para o envolvimento do MHC no reconhecimento do antgeno pelas clulas T foi inicialmente indireta, mas recentemente foi provado de forma conclusiva pelo estmulo das clulas T com o peptdeo purificado: complexo MHC. O receptor da clula T interage com este ligante fazendo contatos com ambos, com a molcula do MHC e com o peptdeo antignico.

3-12 As duas classes de molculas do MHC possuem distintas estruturas em suas subunidades, mas uma estrutura tridimensional semelhante
Existem duas classes de molculas do MHC MHC classe I e MHC classe II que diferem tanto em sua estrutura quanto no padro de expresso sobre os tecidos do corpo. Como visto nas Figuras 3.15 e 3.16, as molculas do MHC classe I e MHC classe II so estreitamente relacionadas em sua estrutura como um todo, mas diferem na composio das subunidades.

Sulco de ligao do peptdeo 1

Figura 3.15 Estrutura de uma molcula do MHC de classe I, determinada por cristalografia por raios X. O quadro a mostra uma representao grfica computadorizada de uma molcula do MHC de classe I humana, HLA-A2, que foi clivada da superfcie celular pela papana. A molcula est colorida de acordo com os domnios descritos nos quadros b-d. Os quadros b e c mostram um diagrama em fitas dessa estrutura. No quadro d, mostrada de forma esquemtica uma molcula do MHC de classe I, um heterodmero de cadeia , que atravessa a membrana (peso molecular de 43 kDa), ligado no-covalentemente 2-microglobulina (12 kDa), a qual no atravessa a membrana. A cadeia apresenta trs domnios: 1, 2 e 3. O domnio 3 e a 2-microglobulina apresentam semelhanas na sequncia de aminocidos com os domnios constantes das imunoglobulinas e possuem uma estrutura pregueada similar, e as pores 1 e 2 dobram-se juntas em uma nica estrutura, consistindo em duas hlices segmentadas sobre uma folha de oito cadeias antiparalelas. O dobramento dos domnios 1 e 2 cria um sulco, onde os peptdeos antignicos se ligam s molculas do MHC. A regio transmembrana e o curto segmento peptdico que conecta os domnios externos superfcie celular no so vistos nos quadros a e b, pois foram removidos pela digesto com papana. Como pode ser visto no quadro c, olhando de cima a molcula, os lados do sulco so formados pelas faces internas das duas hlices ; ao passo que a folha pregueada formada pelo pareamento dos domnios 1 e 2 forma a base do sulco.

2-microglobulina 3

Sulco de ligao do peptdeo 2 1

Sulco de ligao do peptdeo

Folha

2-microglobulina

Hlice

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Em ambas as classes, os dois domnios pareados de protenas prximas membrana, que se assemelham aos domnios das imunoglobulinas, e os dois domnios mais distantes da membrana dobram em conjunto formando uma longa fenda, ou sulco, que o local de ligao do peptdeo. Os complexos peptdeos purificados: MHC de classe I e MHC de classe II foram caracterizados estruturalmente, permitindo a descrio detalhada das prprias molculas do MHC e da maneira pela qual elas ligam os peptdeos. As molculas do MHC classe I (ver Figura 3.15) consistem em duas cadeias polipeptdicas. Uma cadeia a cadeia codificada no MHC (no cromossoma 6 em seres humanos) e est associada de maneira no-covalente a uma cadeia menor 2-microglobulina, a qual no polimrfica e codificada em um cromossoma diferente cromossoma 15 no ser humano. Somente a cadeia de classe I atravessa a membrana. A molcula completa possui quatro domnios: trs formados pela cadeia , codificada pelo MHC, e um pela 2-microglobulina. O domnio 3 e a 2microglobulina tm uma estrutura pregueada que se assemelha a um domnio de imunoglobulina. A estrutura pregueada de seus domnios 1 e 2 formam as paredes de uma fenda na superfcie da molcula onde se liga o peptdeo e conhecida como fenda de ligao do peptdeo ou sulco de ligao do peptdeo. As molculas do MHC so altamente polimrficas, e a maior diferena entre as diferentes formas est localizada na fenda de ligao do peptdeo, influenciando os peptdeos que iro ligar-se e, portanto, a especificidade do antgeno apresentado s clulas T.

Sulco de ligao do peptdeo 1

2
C

Sulco de ligao do peptdeo 1 1

Sulco de ligao do peptdeo

Figura 3.16 As molculas do MHC de classe II assemelham-se estruturalmente s molculas do MHC de classe I. A molcula do MHC de classe II composta por duas cadeias transmembrana de glicoprotenas (34 kDa) e (29 kDa), como mostrado esquematicamente no quadro d. Cada cadeia possui dois domnios, e as duas cadeias juntas formam uma estrutura compacta de quatro domnios, similar descrita para a molcula do MHC de classe I (comparar com quadro d da Figura 3.15). O quadro a exibe uma representao computadorizada da superfcie da molcula do MHC de classe II, nesse caso, a protena humana HLA-DR1; e o quadro b ilustra o diagrama, em fitas, equivalente. Os domnios 2 e 2, assim como 3 e 2-microglobulina da molcula do MHC de classe I, tm sequncia de aminocidos e estrutura semelhante aos domnios C das imunoglobulinas; na molcula do MHC de classe II, os domnios que formam o sulco de ligao com o peptdeo so formados por cadeias diferentes e, portanto, no se unem por uma ligao covalente (ver quadros c e d). Uma outra diferena importante, no aparente neste diagrama, reside no fato de que o sulco de ligao ao peptdeo da molcula do MHC de classe II aberto em ambas as extremidades.

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Figura 3.17 As molculas do MHC ligam-se fortemente aos peptdeos do sulco. Quando as molculas do MHC so cristalizadas com um nico peptdeo antignico sinttico ligado ao seu sulco, os detalhes de ligao so revelados. Em molculas do MHC de classe I (quadros a e c), o peptdeo se liga em uma conformao alongada com ambas as extremidades fortemente ligadas s extremidades do sulco. Nas molculas do MHC de classe II (quadro b e d), o peptdeo tambm se liga em uma conformao alongada, mas suas extremidades no esto fortemente ligadas, e o peptdeo se estende at o sulco. A superfcie superior do complexo peptdeo:MHC reconhecida pelas clulas T, sendo composta por resduos da molcula do MHC e do peptdeo. Nos quadros c e d, o potencial eletrosttico da superfcie da molcula do MHC est representado pelas reas azuis, indicando potencial positivo, e pelas vermelhas, indicando potencial negativo.

As molculas do MHC de classe II consistem em um complexo no-covalente de duas cadeias e , que atravessam a membrana (Figura 3.16). A cadeia do MHC classe II uma protena diferente da cadeia da classe I. As cadeias e do MHC de classe II so ambas codificadas dentro do MHC. A estrutura cristalina da molcula do MHC de classe II mostra que ela possui uma estrutura pregueada muito semelhante da molcula do MHC de classe I, mas na molcula do MHC classe II, a fenda de ligao do peptdeo formada por dois domnios de cadeias diferentes os domnios 1 e 1. As principais diferenas nas estruturas das duas molculas residem nas extremidades do sulco de ligao do peptdeo, que so mais abertas nas molculas do MHC classe II do que nas molculas do MHC classe I. Consequentemente, as extremidades de um peptdeo ligado a uma molcula do MHC de classe I esto substancialmente mais imersas no interior da molcula, ao passo que as extremidades dos peptdeos ligados molcula de classe II no esto. O peptdeo ligado encontra-se entre os dois segmentos de -hlice, tanto nas molculas do MHC de classe I quanto de classe II (Figura 3.17). O receptor das clulas T interage como ligante, fazendo contatos com ambas as molculas do MHC e como peptdeo antignico. Os principais stios polimrficos das molculas do MHC de classe II esto localizados na fenda de ligao do peptdeo.

3-13 Os peptdeos so ligados estavelmente s molculas do MHC e tambm servem para estabilizar a molcula do MHC na superfcie celular
Um indivduo pode estar infectado por uma ampla variedade de diferentes patgenos, cujas protenas no apresentam necessariamente sequncias peptdicas em comum. Se as clulas T devem ser alertadas contra todas as possveis infeces intracelulares, as molculas do MHC (classes I e II), em cada clula, devem ser capazes de uma ligao estvel a peptdeos diferentes. Esse comportamento completamente distinto de outros receptores peptdeo-ligante, tais como os hormnios peptdicos que, em geral, ligam apenas um nico peptdeo. As estruturas cristalinas dos complexos peptdeos:MHC tm ajudado a mostrar como um nico stio de ligao pode ligar peptdeos com alta afinidade enquanto retm a capacidade de associao com uma ampla variedade de diferentes peptdeos. Uma caracterstica importante da ligao dos peptdeos s molculas do MHC a de que os peptdeos se ligam como parte integral da estrutura das molculas do MHC e estas podem se tornar instveis quando no possuem um peptdeo li-

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gado. A estabilidade conferida pelo peptdeo ligado importante porque, de outra maneira, trocas de peptdeos na superfcie celular impediriam os complexos peptdeo:MHC de serem indicadores confiveis de infeco ou captura de um antgeno especfico. Quando as molculas do MHC so purificadas das clulas, seu peptdeo estavelmente ligado copurificado juntamente com a molcula do MHC, permitindo que possam tambm ser analisados. Os peptdeos podem ser liberados das molculas do MHC por desnaturao cida do complexo; eles podem, ento, ser purificados e sequenciados. Peptdeos sintticos puros podem ser incorporados em molculas do MHC vazias, permitindo a determinao da estrutura do complexo e revelando detalhes sobre os contatos entre a molcula do MHC e o peptdeo. A partir de tais estudos, foi possvel desenvolver uma descrio detalhada das interaes dessas ligaes. Discutiremos primeiro as propriedades das molculas do MHC de classe I de ligao a peptdeos.

3-14 Molculas do MHC de classe I ligam pequenos peptdeos de 8-10 aminocidos em ambas as extremidades
A ligao de um peptdeo a uma molcula do MHC de classe I estabilizada nas duas extremidades da fenda de ligao do peptdeo pelo contato entre tomos amino e carboxiterminais livres do peptdeo e stios invariveis situados em cada extremidade da fenda de todas as molculas do MHC de classe I (Figura 3.18). Esses contatos so as principais foras estabilizadoras do complexo peptdeo:MHC de classe I, pois peptdeos sintticos anlogos que no possuem os grupos amino ou carboxiterminal no se ligam estavelmente s molculas do MHC de classe I. Outros resduos do peptdeo atuam como uma ncora adicional. Os peptdeos que se ligam s molculas do MHC de classe I geralmente possuem de 8 a 10 aminocidos de comprimento. Peptdeos maiores tambm so capazes de se ligarem, particularmente pela poro carboxiterminal, mas so, em seguida, clivados por exopeptidases presentes no retculo endoplasmtico, onde as molculas do MHC classe I se ligam ao peptdeo. O peptdeo est em uma conformao alongada na fenda; variaes no comprimento do peptdeo parecem acomodar-se, na maioria dos casos, mediante uma toro no esqueleto peptdico. Contudo, existem dois exemplos de molculas do MHC de classe I, em que o peptdeo capaz de se es-

Figura 3.18 Os peptdeos se unem s molculas do MHC de classe I nas suas extremidades. As molculas do MHC de classe I interagem com o peptdeo (mostrado em amarelo) por meio de uma srie de pontes de hidrognio e interaes inicas (linhas pontilhadas em azul) nas extremidades do peptdeo. A poro aminoterminal do peptdeo est esquerda, e a poro carboxiterminal est direita. Os crculos pretos representam os tomos de carbono; os vermelhos, os de oxignio; e os azuis, os de nitrognio. Os resduos de aminocidos da molcula do MHC que formam essas pontes so comuns a todas as molculas do MHC de classe I, e suas cadeias laterais so mostradas no diagrama de fitas (em cinza), no sulco da ligao. Um agrupamento de tirosinas, comuns a todas as molculas do MHC de classe I, forma pontes de hidrognio com a poro aminoterminal do peptdeo, enquanto um segundo grupamento forma as pontes de hidrognio e as interaes inicas com o esqueleto do peptdeo na regio carboxiterminal.

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H3N H3N H3N

G I P

Y
I

V
N N

Y
F Y

Q E P

Q K A

L
L L

COO COO COO

tender para fora da fenda no carboxiterminal, sugerindo que alguma variao de comprimento possa tambm ser acomodada dessa maneira. Essas interaes conferem a todas as molculas do MHC de classe I sua ampla especificidade de ligao a peptdeos. Alm disso, as molculas do MHC so altamente polimrficas. Existem centenas de diferentes verses, ou alelos, dos genes do MHC de classe I na populao humana, cada indivduo possuindo apenas uma pequena seleo. As principais diferenas entre as variantes allicas do MHC so encontradas em certos stios da fenda de ligao ao antgeno, resultantes da presena de diferentes aminocidos essenciais nos locais de interao de peptdeos nos diferentes variantes do MHC. A consequncia disso que diferentes variantes do MHC se ligam preferencialmente a peptdeos diferentes. Os peptdeos que se ligam a uma determinada variante de uma molcula do MHC possuem os resduos de aminocidos iguais ou muito semelhantes em duas ou trs posies especficas ao longo da sequncia peptdica. Essas cadeias laterais de aminocidos se inserem nas fendas das molculas do MHC, que so revestidas por aminocidos polimrficos. Devido a essa ligao das cadeias laterais de ancoramento do peptdeo molcula do MHC, os resduos de peptdeos envolvidos so denominados resduos de ancoramento. A posio e a identidade desses resduos de ancoramento podem variar dependendo da molcula do MHC de classe I qual o peptdeo se ligou. Entretanto, a maioria dos peptdeos que se ligam molcula do MHC de classe I possuem um resduo de ancoramento hidrofbico (ou algumas vezes bsico) na extremidade carboxila (Figura 3.19). Considerando que a modificao no resduo de ancoramento na maioria dos casos pode impedir que o peptdeo se ligue, nem todos os peptdeos sintticos de tamanho adequado que contm esses resduos de ancoramento se ligaro molcula do MHC de classe I apropriada, e assim a ligao tambm depende da natureza dos aminocidos que so preferidos em determinadas posies do peptdeo. Em alguns casos, alguns aminocidos so preferidos em determinadas posies, ao passo que na presena de outros aminocidos em particular, essa ligao impedida. Essas posies adicionais dos aminocidos so conhecidas como ncoras secundrias . Essas caractersticas de ligao permitem que uma molcula do MHC de classe I se ligue a uma grande variedade de diferentes peptdeos, levando variantes allicas do MHC de classe I a se ligarem a diferentes grupos de peptdeos.

S
A

H3N H3N H3N H3N

Y Y

Q
F Q

R P

R I

A T

L H

V I

COO COO COO COO

S K S

E V S

Y Y

A P

T A

T
E

T
K

L I

Figura 3.19 Os peptdeos ligam-se s molculas do MHC por meio de resduos de ancoramento estruturalmente relacionados. Peptdeos eludos a partir de duas molculas do MHC de classe I diferentes so mostrados na parte superior e inferior do quadro, respectivamente. Os resduos de ancoramento (verde) diferem para os peptdeos que ligam diferentes alelos do MHC de classe I, mas so similares para todos os peptdeos que ligam a mesma molcula do MHC. Os resduos de ancoramento ligados a uma determinada molcula do MHC no precisam ser idnticos, mas so sempre relacionados (por exemplo, fenilalanina (F) e tirosina (Y) so aminocidos aromticos, e valina (V), leucina (L) e isoleucina (I) so grandes aminocidos hidrofbicos. Os peptdeos tambm se ligam s molculas do MHC de classe I nas suas pores amino (azul) e carboxiterminais (vermelho).

3-15 O tamanho do peptdeo ligado molcula do MHC de classe II no restritivo


A ligao peptdica a molculas do MHC de classe II tambm foi analisada pela eluio dos peptdeos ligados e por cristalografia por raios X e difere em vrios aspectos com relao aos peptdeos ligados s molculas do MHC de classe I. Os peptdeos que se associam a molculas do MHC de classe II tm, pelo menos, 13 aminocidos de comprimento, podendo ser mais longos. Os grupamentos de resduos conservados nas molculas de classe I que unem as duas extremidades dos peptdeos no so encontrados nas molculas de classe II, e as extremidades dos peptdeos no so ligadas. Em vez disso, os peptdeos posicionam-se em uma conformao estendida ao longo do sulco de ligao peptdica nas molculas do MHC de classe II. O peptdeo mantido em posio por interaes com as cadeias laterais que protraem em bolsas rasas e profundas formadas pelos resduos polimrficos e por interaes entre o esqueleto do peptdeo e as cadeias laterais dos aminocidos conservados que revestem o sulco de ligao do peptdeo em todas as molculas do MHC de classe II (Figura 3.20). Embora haja um menor nmero de estruturas cristalinas do complexo peptdeo:MHC de classe II do que peptdeos ligados ao MHC de classe I, os dados disponveis mostram que as cadeias laterais dos aminocidos nos resduos 1, 4, 6 e 9 do complexo peptdeo:MHC de classe II se encontram no sulco de ligao. Os sulcos de ligao das molculas do MHC de classe II acomodam uma maior variedade de cadeias laterais do que os das molculas do MHC de classe I, dificultando a definio dos resduos de ancoramento e as previses sobre quais peptdeos sero

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Figura 3.20 Os peptdeos ligam-se s molculas do MHC de classe II por interao ao longo do sulco. O peptdeo (esqueleto do peptdeo em amarelo; poro aminoterminal do peptdeo esquerda e carboxiterminal direita) ligado a uma molcula do MHC de classe II por uma srie de pontes de hidrognio (linha pontilhada em azul) distribudas ao longo do peptdeo. As pontes de hidrognio para a regio aminoterminal do peptdeo so formadas com o esqueleto da cadeia peptdica da molcula do MHC de classe II, ao passo que as formadas ao longo do peptdeo so feitas com os resduos altamente conservados da molcula do MHC. As cadeias laterais desse resduo so mostradas em cinza no diagrama de fitas do sulco de ligao da molcula do MHC de classe II.

Figura 3.21 Peptdeos que se ligam molcula do MHC de classe II so variveis em comprimento e seus resduos de ancoramento se situam distantes das extremidades do peptdeo. Sequncia de uma srie de peptdeos que se k ligam ao alelo A da molcula do MHC de classe II de camundongos so mostrados no quadro superior. Todos contm uma mesma sequncia central (sombreado), mas diferem em comprimento. No quadro inferior, so mostrados diferentes peptdeos que se ligam ao alelo HLA-DR3 da molcula do MHC de classe II humana.

Resduos de ancoramento so mostrados nos crculos em verde. O comprimento desses peptdeos varia portanto, por conveno: o primeiro resduo de ancoramento denominado resduo 1. Note que todos os peptdeos compartilham resduos hidrofbicos negativamente carregados na posio 1(cido asprtico (D) ou cido glutmico (E)) na posio 4, e a tendncia ter um resduo bsico (lisina (K), arginina (R), histidina (H), glutamina (Q) ou asparagina (N)), na posio 6, e o resduo hidrofbico (por exemplo, tirosina (Y), leucina (L), fenilalanina (F)), na posio 9.

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capazes de ligar-se a uma determinada molcula de classe II (Figura 3.21). Entretanto, comparando as sequncias de peptdeos conhecidos ligados, geralmente possvel detectar um padro de aminocidos permissivos para cada alelo diferente do MHC de classe II e projetar como os aminocidos deste motivo da sequncia peptdica iro interagir com os aminocidos que formam o sulco de ligao do peptdeo. Pelo fato de o peptdeo estar ligado pelo seu esqueleto e poder emergir nas duas extremidades do sulco de ligao, em princpio, no h um limite superior para o tamanho do peptdeo que pode ligar-se a uma molcula do MHC de classe II. Entretanto, parece que longos peptdeos ligados s molculas do MHC de classe II so clivados por uma peptidase em peptdeos de 13 a 17 aminocidos, na maioria dos casos. Como as molculas do MHC de classe I, as molculas do MHC de classe II que no possuem um peptdeo ligado so instveis, mas as interaes fundamentais para a estabilizao dos peptdeos com as molculas do MHC de classe II ainda no so conhecidas.

3-16 As estruturas cristalogrficas de vrios complexos receptores de clula T:peptdeo:MHC mostram a mesma orientao do receptor de clula T no complexo peptdeo:MHC
Ao mesmo tempo em que a primeira estrutura de um receptor de clula T determinada por cristalografia por raios X foi publicada, uma estrutura de um ligante MHC de classe I:peptdeo do mesmo receptor de clula T tambm foi produzida. Essa estrutura (Figura 3.22), prevista por mutagnese stio-dirigida da molcula do MHC de classe I, mostrou o receptor de clula T alinhado diagonalmente sobre o peptdeo e o sulco de ligao, com a cadeia do receptor de clula T(TCR) deitada sobre o domnio 2 e a poro aminoterminal do peptdeo ligado, a cadeia do receptor de clula T (TCR) deitada sobre o domnio 1 e a extremidade carboxiterminal do peptdeo, e as alas CDR3 de ambas as cadeias TCR e TCR encontrando-se nos aminocidos centrais do peptdeo. O receptor de clula T posiciona-se em um vale entre os dois picos criados pelas hlices que formam as paredes da fenda de ligao do peptdeo.
1

P8 P1 2

2m 3

A anlise de outros complexos, como o peptdeo:MHC de classe I:receptor de clula T e peptdeo:MHC de classe II:receptor de clula T (Figura 3.23), mostrou que ambos possuem orientao muito similar, particularmente para o domnio V; entretanto, alguma variabilidade pode ocorrer na localizao e na orientao do domnio V. Nessa orientao, os domnios V fazem contato principalmente com a poro aminoterminal do peptdeo ligado, enquanto o domnio V faz o primeiro contato com a poro carboxiterminal do peptdeo ligado. Ambas as cadeias tambm interagem com as hlices da molcula do MHC de classe I (ver Figura 3.22). Os contatos do receptor de clula T no so simetricamente distribudos sobre a molcula do MHC: considerando que as alas CDR1 e CDR2 V fazem contato prximo com as hlices do complexo peptdeo:MHC na poro aminoterminal do peptdeo ligado enquanto a cadeia das alas CDR1 e CDR2, as quais interagem com o complexo na poro carboxiterminal do peptdeo, parece ter contribuio varivel para a ligao.

V 2 1 V 2 3 3 HV4

Figura 3.22 O receptor da clula T liga-se ao complexo peptdeo:MHC. Quadro a: o receptor de clula T se liga no topo do complexo peptdeo:MHC, ligando as duas hlices dos domnios 1 e 1, no caso da molcula do MHC de classe I aqui mostrada. Os CDRs do receptor de clula T so mostrados em cores: as alas CDR1 e CDR2 da cadeia em azul-claro e escuro, respectivamente; e as alas CDR1 e CDR2 da cadeia em roxo claro e escuro, respectivamente. A ala CDR3 da cadeia est em amarelo, e da cadeia , em verde. A ala HV4 da cadeia est em vermelho. A linha densa amarela P1-P8 o peptdeo ligado. Quadro b: o diagrama do stio de ligao do antgeno do receptor da clula

T (linha grossa em preto) sobreposto no topo do complexo peptdeo:MHC (o peptdeo mostrado em amarelo fraco). O receptor da clula T dispe-se diagonalmente atravs do complexo peptdeo:MHC, com as alas CDR3 e do receptor de clula T (3, 3, amarelo e verde, respectivamente) em contato com o centro do peptdeo. As alas CDR e CDR2 da cadeia (1 e 2 , roxo claro e roxo escuro, respectivamente) fazem contato com as hlices do MHC na poro aminoterminal do peptdeo ligado, as alas CDR1 e CDR2 da cadeia (1 e 2, azul claro e azul escuro, respectivamente) fazem contato com as hlices na regio carboxiterminal do peptdeo ligado. (Cortesia de I.A. Wilson.)

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A comparao da estrutura tridimensional de um receptor de clula T no-ligado e este mesmo receptor complexado ao peptdeo:MHC mostram que essa ligao resulta em algum grau de mudana conformacional ou foradamente encaixada , particularmente na ala CDR3 V. Tambm tem sido demonstrado que diferenas sutis nos peptdeos podem ter efeitos diferentes notveis no reconhecimento de outra forma idntica de peptdeo:MHC ligante pela mesma clula T. A flexibilidade na ala CDR3 demonstrada por estas duas estruturas ajuda a explicar como receptor de clulas T pode adotar ligantes diferentes, mas relacionados. A partir da anlise dessas estruturas, difcil predizer se a principal energia de ligao produzida por meio do contato do receptor de clula T com a ligao ao peptdeo ou do contato do receptor de clula T com a molcula do MHC. Medidas cinticas da ligao do receptor de clula T ao MHC:peptdeo sugerem que a interao entre o receptor de clula T e a molcula do MHC deve predominar como contato de incio, levando o receptor posio correta, quando uma segunda e mais detalhada interao com o peptdeo, assim como com a molcula do MHC, define o final da interao ligao ou dissociao. Assim como na interao anticorpo-antgeno, somente poucos aminocidos na interfase so capazes de promover contatos essenciais que determinam a especificidade e a fora de ligao. Sabe-se que uma simples alterao, como a troca de uma leucina por uma isoleucina no peptdeo, suficiente para alterar uma resposta forte da clula T para uma resposta nula. Estudos mostraram que mutaes em um nico resduo na molcula do MHC possuem o mesmo efeito. Assim, a especificidade de reconhecimento da clula T envolve tanto o peptdeo quanto a molcula do MHC que o apresenta. Essa dupla especificidade justifica a restrio ao MHC das respostas de clulas T, um fenmeno observado bem antes das propriedades de ligao do peptdeo molcula do MHC serem conhecidas. Voltaremos a discutir como a restrio ao MHC foi descoberta quando retornarmos questo sobre como o polimorfismo do MHC afeta o reconhecimento do antgeno pela clula T, no Captulo 5. Outra consequncia dessa especificidade dupla a necessidade de o receptor de clula T interagir apropriadamente com a superfcie do antgeno apresentado pela molcula do MHC. Parece existir uma especificidade inerente molcula do MHC codificada nos genes do receptor de clula T, assim como uma seleo durante o desenvolvimento das clulas T de um repertrio de receptores capaz de interagir apropriadamente com uma determinada molcula do MHC, presentes no indivduo. Discutiremos as evidncias para isso no Captulo 7.

V V 1 N 1 C

3-17 As protenas de superfcie celular CD4 e CD8 das clulas T so necessrias para dar uma resposta adequada ao antgeno
Assim como as clulas T comprometem o peptdeo:MHC ligado ao seu receptor de antgeno, elas tambm realizam interaes adicionais com a molcula do MHC que estabiliza a interao e que so necessrias para que as clulas T respondam efetivamente aos antgenos. As clulas T dividem-se em duas classes principais com funes efetoras distintas e so diferenciadas pela expresso de protenas de superfcie celular, CD4 e CD8. CD8 carregada por clulas T citotxicas, e CD4 carregada por clulas T cuja funo ativar outras clulas (ver Seo 1-19). CD4 e CD8 eram conhecidas como marcadores para diferentes conjuntos funcionais de clulas T, por algum tempo antes que se tornasse claro que esta distino se baseou em sua capacidade de reconhecer as diferentes classes das molculas do MHC: CD8 reconhece molculas do MHC de classe I, e CD4, molculas do MHC de classe II. Durante o reconhecimento do antgeno, as molculas CD4 e CD8 (dependendo do tipo de clula T) se associam, na superfcie da clula T, com o receptor de clulas T e se ligam a stios invariveis na poro do MHC do complexo MHC:peptdeo, longe do stio de ligao. Essa ligao necessria para que a clula T realize uma resposta eficaz, e, assim, CD4 e CD8 so chamados correceptores. CD4 uma molcula de cadeia nica composta por quatro domnios semelhantes imunoglobulina (Figura 3.24). Os dois primeiros domnios (D1 e D2) da molcula

Figura 3.23 O receptor de clula T interage com as molculas do MHC de classe I e II de modo semelhante. A estrutura do receptor de clula T ligado molcula do MHC de classe II j foi determinada e mostra que o receptor de clula T se liga a um stio equivalente, com uma orientao equivalente ligao do receptor de clula T molcula do MHC de classe I (ver Figura 3.22). Apenas os domnios V e V do receptor de clula T esto apresentados em azul. O peptdeo mostrado em vermelho, os resduos de carboidrato esto indicados em cinza. O receptor de clula T est localizado em um sulco raso formado entre a regio de hlice , do MHC de classe II, cadeia (amarelo-verde) e cadeia (laranja) em um ngulo de aproximadamente 90 ao longo do eixo da molcula do MHC de classe II e do peptdeo ligado. (Cortesia de E. L. Reinherz e J-H. Wang.)

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Figura 3.24 A estrutura das molculas correceptoras CD4 e CD8. A molcula CD4 contm quatro domnios semelhantes a imunoglobulinas, como mostram o desenho no quadro a e o diagrama de fitas da estrutura cristalina no quadro b. O domnio aminoterminal, D1, estruturalmente semelhante ao domnio V da imunoglobulina. O segundo domnio, D2, embora claramente relacionado aos domnios de imunoglobulinas, diferente de ambos os domnios V e C e tem sido referido como domnio C2. Os dois primeiros domnios do CD4 formam uma estrutura semelhante a um basto rgido, que se une aos dois domnios carboxiterminais por uma ligao flexvel. O stio de ligao para molculas do MHC de classe II envolve principalmente o domnio D1. A molcula CD8 um heterodmero de uma cadeia e uma cadeia covalentemente ligadas por uma ponte dissulfdrica; uma forma alternativa do CD8 existe como homodmero de cadeia . O heterodmero representado no quadro a, e o diagrama de fitas no quadro b representa o homodmero. As cadeias CD8 e CD8 possuem estruturas similares, cada uma com um domnio semelhante ao domnio V da imunoglobulina e um alongamento da cadeia polipeptdica, o qual se acredita estar em uma conformao relativamente estendida, que ancora o domnio semelhante ao domnio V na membrana celular.

CD4 CD4
D1

CD8
D2

CD8

D3

D4

CD4 so fortemente compactados para formar um basto rgido de cerca de 60 de comprimento, o qual ligado por uma dobradia mvel a um basto similar formado pelo terceiro e pelo quarto domnios (D3 e D4). Existem alguns indcios que CD4 forma homodmeros na superfcie das clulas T que so funcionais no reconhecimento das molculas do MHC de classe II, apesar de a base estrutural de sua formao ser ainda incerta. CD4 liga molculas do MHC de classe II atravs de uma regio localizada na face lateral do primeiro domnio, D1. CD4 se liga a uma fenda hidrofbica formada na juno dos domnios 2 e 2 da molcula do MHC de classe II. Este local bem afastado do stio de unio com o receptor de clulas T (Figura 3.25a), e assim a molcula CD4 e o receptor de clulas T podem ligar-se simultaneamente ao mesmo complexo peptdeo:MHC de classe II. A poro intracelular de CD4 interage fortemente com a tirosina quinase citoplasmtica denominada Lck, aproximando-a dos outros componentes de sinalizao intracelular do complexo do receptor de clula T. Isso resulta em um aumento do sinal produzido quando o receptor da clula T se liga ao ligante peptdeo:MHC de classe II, discutido no Captulo 6. Quando o CD4 e o receptor de clula T se ligam simultaneamente ao mesmo complexo do MHC de classe II:peptdeo, a sensibilidade da clula T ao antgeno cem vezes maior do que quando o CD4 no est presente. A estrutura do CD8 totalmente diferente. Trata-se de um dmero ligado por uma ponte dissulfdrica de duas cadeias diferentes denominadas e , cada uma contendo um nico domnio semelhante a imunoglobulinas, ligada membrana por um segmento de cadeia polipeptdica estendida (ver Figura 3.24). Esse segmento altamente glicosilado e parece ser importante na manuteno da conformao estendida desse segmento de polipeptdeos e na proteo de clivagem por proteases. A cadeia CD8 pode formar homodmeros, embora eles no tenham sido detectados quando as cadeias CD8 esto presentes. O homodmero CD8 pode exercer uma funo especfica no reconhecimento de um subtipo no-clssico de molcula do MHC de classe I a ser descrito no Captulo 5. CD8 liga-se fracamente a um stio no domnio 3 de uma molcula do MHC de classe I (ver Figura 3.25b). Embora at o momento somente a interao do homodmero CD8 com o MHC de classe I seja conhecida em detalhes, isto mostra que o stio de ligao do MHC de classe I com o heterodmero CD8: formado atravs da interao das cadeias CD8 e . Alm disso, o CD8 (muito provavelmente atravs

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MHC de classe II

MHC de classe I

CD4
a b

CD8

D4

CD4

CD8

D3 MHC de classe II D2 MHC de classe I

Figura 3.25 Os stios de ligao para CD4 e CD8 nas molculas do MHC de classes I e II se encontram nos domnios similares s imunoglobulinas. Os stios de ligao para CD8 e CD4 nas molculas do MHC de classes I e II localizam-se, respectivamente, nos domnios similares s imunoglobulinas prximos membrana e distantes do sulco de ligao do peptdeo. A ligao do CD4 ao MHC de classe II apresentada como estrutura grfica no quadro a e esquematicamente no quadro c. A cadeia da molcula de classe II mostrada em rosa, a cadeia , em branco, e o CD4 est em dourado. Apenas os domnios D1 e D2 da molcula CD4 so mostrados no quadro a. O stio de ligao do CD4 localiza-se na base do domnio 2 da molcula do MHC de classe II, na fenda hidrofbica entre os domnios 2 e 2. A ligao do CD8 molcula do MHC de classe I apresentada no quadro b e esquematicamente no quadro d. A cadeia pesada de classe I e a 2-microglobulina so mostradas em branco e rosa, respectivamente, e as duas cadeias do dmero CD8 so apresentadas em roxo-claro e escuro. A estrutura apresentada a do homodmero CD8, mas o heterodmero : parece ligar-se da mesma forma. O stio de ligao para CD8 na molcula do MHC de classe I encontra-se em uma posio semelhante ao do CD4 na molcula de classe II, mas tambm envolve a base dos domnios 1 e 2; assim, a ligao do CD8 molcula do MHC de classe I no completamente equivalente ligao do MHC de classe II ao CD4.

D1

2-microglobulina

da cadeia ) interage com resduos na base do domnio 2 da molcula do MHC de classe I. O poder de ligao do CD8 com a molcula do MHC de classe I influenciado pela glicosilao da molcula de CD8; o aumento do nmero de resduos do cido silico adicionados aos carboidratos do CD8 diminui a fora de interao. O padro de sializao do CD8 muda durante a maturao e ativao da clula T, e acredita-se que tenha um papel na modulao do reconhecimento do antgeno. Por meio da ligao ao domnio proximal da membrana das molculas do MHC de classes I e II, os correceptores deixam a superfcie mais alta da molcula do MHC exposta e livre para interagir com o receptor de clulas T, como mostrado para o CD8 na Figura 3.26. Ambas as molculas, CD4 e CD8, ligam a Lck no caso do heterodmero CD8: atravs da cauda citoplasmtica da cadeia aproximando-a do receptor de clula T. Este suscetvel de ter um papel na modulao do reconhecimento do antgeno. Assim como o CD4, a presena de CD8 aumenta a sensibilidade da clula T ao antgeno apresentado pelas molculas do MHC de classe I em cerca de 100 vezes. Assim, o CD4 e o CD8 desempenham funes semelhantes e se ligam mesma localizao das molculas do MHC de classe I e II, embora as estruturas dos dois correceptores proteicos sejam pouco relacionadas.

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Figura 3.26 O CD8 liga-se a um stio na molcula do MHC de classe I distante daquele onde se liga o receptor da clula T. As posies relativas do receptor de clulas T e das molculas CD8 ligadas mesma molcula do MHC de classe I podem ser vistas nesta reconstruo hipottica da interao de uma molcula do MHC de classe I (as cadeias so mostradas em verde; a 2-microglobulina (amarelo fraco) pode ser

vista fracamente no fundo com um receptor de clula T e CD8. As cadeias e do receptor de clulas T so mostradas em rosa e roxo, respectivamente. A estrutura do CD8 a mesma do homodmero CD8, mas est colorida para representar a suposta orientao das subunidades no heterodmero, com a subunidade CD8 em vermelho, e a subunidade CD8, em azul. (Cortesia de G. Gao.)

3-18 As duas classes de molculas do MHC so expressas diferencialmente nas clulas


As molculas do MHC de classes I e II tm uma distribuio distinta entre as clulas que refletem as diferentes funes efetoras das clulas T que as reconhecem (Figura 3.27). As molculas do MHC de classe I apresentam peptdeos de patgenos, mais comumente vrus, s clulas T citotxicas CD8, as quais so especializadas em matar qualquer clula que possam reconhecer especificamente. Porque os vrus podem infectar qualquer clula nucleada, a maioria dessas clulas expressa molculas do MHC de classe I, embora o nvel de expresso constitutivo varie entre os tipos celulares. Por exemplo, as clulas do sistema imune expressam abundantes quantidades do MHC de classe I em sua superfcie, ao passo que as clulas hepticas (hepatcitos) expressam nveis relativamente baixos (ver Figura 3.27). Clulas no-nucleadas, como os glbulos vermelhos dos mamferos, expressam pouca ou nenhuma molcula do MHC de classe I, e, assim, o interior das hemcias um local onde uma infeco pode seguir sem ser detectada pelas

Tecido
Tecidos linfoides Clulas T Clulas B Macrfagos Clulas dendrticas Clulas epiteliais do timo

MHC de classe I

MHC de classe II

Figura 3.27 A expresso das molculas do MHC difere entre os tecidos. As molculas do MHC de classe I so expressas em todas as clulas nucleadas, embora sejam mais fortemente expressas em clulas hematopoiticas. As molculas de MHC de classe II so expressas apenas por um subgrupo de clulas hematopoiticas e por clulas do estroma tmico, embora possam tambm ser expressas por outros tipos celulares quando ativadas pela citocina inflamatria IFN-. *Em humanos, as clulas T ativadas expressam molculas do MHC de classe II, ao passo que em camundongos todas as clulas T so MHC de classe II negativas. No crebro, a maioria dos tipos celulares so MHC de classe II negativos, mas a micrglia, relacionada aos macrfagos, MHC de classe II positiva.

Outras clulas nucleadas Neutrfilos Hepatcitos Clulas renais Clulas nervosas (crebro) Clulas no-nucleadas Hemcias

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clulas T citotxicas. Como as hemcias no podem suportar a replicao viral, o fato no tem grandes consequncias para as viroses, mas a ausncia de MHC de classe I pode permitir que espcies parasitas do gnero Plasmodium, causador da malria, sobrevivam nesse local privilegiado. Em contraste, a principal funo das clulas T CD4 que reconhecem as molculas do MHC de classe II ativar outras clulas do sistema imune. Assim, as molculas do MHC de classe II so normalmente encontradas nos linfcitos B, nas clulas dendrticas e nos macrfagos-clulas que participam da resposta imune, mas no em outros tipos de clulas (ver Figura 3.27). Quando as clulas T CD4 reconhecem peptdeos ligados a molculas do MHC de classe II nas clulas B, essas so estimuladas produo de anticorpos. Similarmente, as clulas T CD4, reconhecendo peptdeos ligados a molculas do MHC de classe II nos macrfagos, ativam essas clulas para a destruio dos patgenos em suas vesculas. Veremos no Captulo 8 que as molculas do MHC de classe II so tambm expressas pelas clulas apresentadoras de antgenos especializadas, as clulas dendrticas, nos tecidos linfoides, onde clulas T virgens encontram um antgeno e so ativadas pela primeira vez. A expresso tanto das molculas do MHC de classe I quanto de classe II regulada por citocinas, particularmente o interferon, que so liberadas durante uma resposta imune. O interferon- (IFN-), por exemplo, aumenta a expresso de molculas do MHC de classes I e II e pode induzir a expresso de molculas do MHC de classe II em determinados tipos celulares que normalmente no as expressam. Os interferons tambm aumentam a funo de apresentao de antgeno das molculas do MHC de classe I pela induo da expresso de componentes-chave da maquinaria intracelular que permite que os peptdeos sejam ligados molcula do MHC.

Receptor de clula T :
V

Receptor de clula T :
V

3-19 Um subgrupo distinto de clulas T possui um receptor alternativo formado por cadeias e
Durante a pesquisa dos genes codificadores da cadeia TCR, foi descoberto um outro gene para um tipo inesperado de receptor de clula T. Esse gene foi denominado TCR e sua descoberta levou pesquisa de outros genes relacionados ao receptor de clula T. Outra cadeia de receptor foi identificada utilizando anticorpos contra a sequncia prevista para a cadeia , sendo denominada cadeia . Recentemente, foi descoberta uma populao minoritria de clulas T com um receptor distinto, formado pelo heterodmero :, em vez do heterodmero :. O desenvolvimento dessas clulas est descrito nas Sees 7-11 e 7-12. A estrutura cristalogrfica mostra que, como esperado, o receptor da clula T : possui forma semelhante ao receptor da clula T : (Figura 3.28). O receptor da clula T : pode ser especializado em ligar-se a determinados tipos de ligante, incluindo protenas de choque de calor e ligantes no-peptdicos, tais como ligantes fosforilados ou antgenos lipdicos micobacterianos. Os receptores de clulas T : provavelmente no so restritos s clssicas molculas do MHC de classes I e II. Eles podem ligar-se a antgenos livres, como fazem as imunoglobulinas, e/ou podem ligar-se a peptdeos e outros antgenos apresentados por formas no-clssicas de molculas semelhantes ao MHC. Estas so protenas que se assemelham s molculas do MHC de classe I, porm so relativamente no-polimrficas e encontram-se descritas no Captulo 5. Ainda sabemos pouco sobre como o receptor de clula T : se liga ao antgeno, bem como suas funes celulares e seu papel na resposta imune. A estrutura e o rearranjo dos genes para receptores de clulas T : apresentado nas Sees 4-11 e 7-12.

Figura 3.28 Estrutura dos receptores de clula T : e :. A estrutura dos receptores de clula T : e :. foi determinada por cristalografia por raios X. O receptor de clula T : mostrado no quadro a, com a cadeia em vermelho, e a cadeia , em azul. O quadro b apresenta o receptor de clula T : , com a cadeia , em roxo, e a cadeia , em rosa. Ambos os receptores possuem estrutura muito similar, lembrando, de certa forma, o fragmento Fab da molcula de imunoglobulina. O domnio C mais parecido com o domnio da imunoglobulina do que o correspondente domnio C T dos receptores de clulas T :.

Resumo
O receptor para antgenos na maioria das clulas T o receptor de clula T : composto por duas cadeias proteicas, TCR e TCR, e se assemelha em muitos aspectos ao fragmento Fab da imunoglobulina. O receptor de clula T est sem-

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pre ligado membrana. O receptor da clula T :, diferentemente do receptor de imunoglobulina das clulas B, no reconhece antgenos em sua forma nativa, mas reconhece um ligante composto pelo peptdeo antignico ligado a uma molcula do MHC. As molculas do MHC so glicoprotenas altamente polimrficas codificadas por genes localizados no complexo de histocompatibilidade principal (MHC). Cada molcula do MHC se liga a uma grande variedade de peptdeos diferentes, mas cada variante reconhece preferencialmente um grupo de peptdeos preferenciais com sequncia e caractersticas fsicas prprias. O antgeno peptdico geralmente intracelular e se liga de forma estvel na fenda de ligao peptdica na superfcie da molcula do MHC. Existem duas classes de molculas do MHC, e estas se ligam, atravs de seus domnios no-polimrficos, s molculas CD4 e CD8, que distinguem duas diferentes classes funcionais de clulas T :. O CD8 se liga molcula do MHC de classe I e pode ligar-se simultaneamente ao mesmo complexo MHC classe I:peptdeo que foi reconhecido pelo receptor de clula T, agindo, dessa forma, como um correceptor, aumentando a resposta da clula T; o CD4 se liga a molculas do MHC de classe II e atua como um correceptor para as clulas T que reconhecem MHC de classe II:peptdeo. Um receptor de clula T interage diretamente tanto com o peptdeo antignico quanto com caractersticas polimrficas da molcula do MHC que o apresenta. Essa dupla especificidade justifica a restrio da resposta mediada pela clula T (ao MHC). Um segundo tipo de receptor de clula T composto pelas cadeias e similar estruturalmente ao receptor da clula T :, mas parece ligar-se a diferentes ligantes, incluindo ligantes no-peptdicos. Acreditase que no seja restrito ao MHC. encontrado em uma minoria da populao de clulas T, as clulas T :.

Resumo do Captulo 3
As clulas B e T utilizam molculas diferentes, embora estruturalmente semelhantes, que reconhecem antgenos. As molculas reconhecedoras de antgenos nas clulas B so as imunoglobulinas, que so produzidas como um receptor de antgeno ligado membrana, o receptor de clula B, e como anticorpos secretados que se ligam a antgenos e desencadeiam as funes efetoras humorais. A molcula que reconhece o antgeno nas clulas T, por outro lado, apresenta apenas a forma de receptor de superfcie celular. As imunoglobulinas e os receptores de clula T so molculas altamente variveis. Essa variabilidade est concentrada na regio da molcula que se liga ao antgeno, regio varivel (V). As imunoglobulinas se ligam a uma ampla variedade de antgenos quimicamente diferentes, e o principal receptor de clula T : reconhece predominantemente fragmentos peptdicos de protenas estranhas ligadas a molculas do MHC que so ubquas na superfcie da clula. A ligao ao antgeno pelas imunoglobulinas tem sido estudada principalmente pelos anticorpos. A ligao do anticorpo ao seu antgeno correspondente altamente especfica. Essa especificidade determinada pela forma e pelas propriedades fsico-qumicas do stio de ligao ao antgeno. A regio do anticorpo que desempenha as funes efetoras, quando a regio varivel se ligou ao antgeno, est localizada na outra extremidade final do anticorpo, e conhecida como regio constante. Existem cinco principais classes funcionais de anticorpos, cada uma codificada por um tipo diferente de regio constante. Como ser visto no Captulo 9, essas regies interagem com diferentes componentes do sistema imune para induzir a resposta inflamatria e a eliminao do antgeno. Os receptores de clula T diferem em vrios aspectos das imunoglobulinas das clulas B. Uma a ausncia de uma forma secretada do receptor. Essa caracterstica reflete as diferenas funcionais entre as clulas T e B. As clulas B

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lidam com patgenos e seus produtos proteicos circulantes dentro do organismo; a secreo de uma molcula de reconhecimento de antgeno solvel pelas clulas B ativadas pelo antgeno capacita essas clulas produo efetiva de antgenos para os espaos extracelulares do organismo. As clulas T, por sua vez, so especializadas nas interaes clula-clula. Elas so capazes de eliminar clulas infectadas por patgenos intracelulares e clulas que carregam peptdeos antignicos em sua superfcie, ou ainda clulas do sistema imune que capturaram antgenos estranhos e o apresentam em sua superfcie celular. Dessa forma, no necessitam de uma forma solvel e secretada do receptor secretado. A segunda caracterstica que distingue o receptor de clulas T que ele reconhece um ligante composto formado pelo peptdeo estranho ligado molcula do MHC prpria. Isso significa que as clulas T interagem somente com clulas do corpo que apresentam o antgeno e no com o patgeno ou protena intacta. Cada receptor de clula T especfico para uma determinada combinao de peptdeo e molcula do MHC prpria. As molculas do MHC so codificadas por uma famlia de genes altamente polimrfica; embora cada indivduo expresse muitos desses genes. Isso representa apenas uma pequena seleo de todas as variveis possveis. Durante o desenvolvimento da clula T, o repertrio do receptor da clula selecionado de tal forma que cada clula T de um indivduo reconhece apenas antgenos combinados com uma molcula do prprio MHC. A expresso de mltiplas variantes de molculas do MHC, cada um com um repertrio diferente de ligao peptdica, auxilia a garantir que as clulas T de um indivduo sejam capazes de reconhecer pelo menos alguns peptdeos gerados por cada patgeno.

Teste seu conhecimento


3.1 A superfamlia das imunoglobulinas uma das famlias mais abundantes de protenas estruturais com domnio. (a) Quais so as caractersticas de um domnio de imunoglobulina e como diferem os vrios subtipos dos domnios? (b) Quais regies do domnio V da imunoglobulina contribuem para as regies determinantes de complementaridade (CDRs) e como os domnios V e C diferem em cada regio? Como os anticorpos, os quais possuem a mesma forma bsica, reconhecem antgenos de uma grande variedade de formas diferentes? As clulas T so responsveis pelas funes efetoras apropriadas para a localizao celular do patgeno, ao passo que as clulas B no so to restritas. (a) Como isso justifica as diferenas nas propriedades de reconhecimento do receptor de antgeno das clulas T e B? (b) Descreva as semelhanas e as diferenas entre os receptores de antgenos das clulas T e B. (c) Determinadas essas diferenas, qual a diferena essencial na funo de clulas B e clulas T? Existem dois tipos de molculas do MHC: a classe I e a classe II. (a) Qual o papel das molculas do MHC na ativao das clulas T antgeno-especficas? (b) Explique como a ligao peptdica das molculas do MHC de classe I e II pode ser to semelhante, ainda que uma esteja codificada por um nico gene, e a outra, codificada por dois genes diferentes. (c) Se a ligao peptdica das molculas do MHC classe I e classe II so to semelhantes, como as clulas T podem distinguir antgenos apresentados pelas molculas do MHC de classe I dos apresentados pelas molculas de classe II?

3.2

3.3

3.4

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A Gerao dos Receptores de Antgenos dos Linfcitos

Os receptores de antgenos dos linfcitos so as imunoglobulinas presentes nas clulas B e os receptores de clulas T nas clulas T, que atuam como sensores por meio dos quais os linfcitos detectam a presena do antgeno em seu microambiente. Cada linfcito possui inmeras cpias de um nico receptor de antgeno com uma nica especificidade antignica, a qual determina qual o antgeno que ele vai ligar. Considerando que cada indivduo possui bilhes de linfcitos, essas clulas coletivamente permitem que os indivduos respondam a uma grande variedade de antgenos. A ampla gama de especificidade antignica do repertrio dos receptores de antgeno se deve variao na sequncia de aminocidos no stio de ligao do antgeno, o qual formado pelas regies variveis (V) das cadeias das protenas do receptor. Em cada cadeia, a regio V est ligada a uma regio constante (C) invarivel, a qual responsvel pelas funes efetoras ou sinalizadoras da molcula. Devido importncia da variabilidade do repertrio diverso dos receptores dos linfcitos nos mecanismos de defesa contra uma infeco, no surpreendente que um mecanismo gentico elegante e complexo tenha evoludo para produzir essa grande variabilidade de protenas. Cada cadeia varivel do receptor no pode ser codificada por completo no genoma, pois seriam necessrios mais genes para receptores de antgenos do que aqueles que existem no genoma. Entretanto, veremos que as regies V das cadeias do receptor so codificadas por vrios fragmentos, denominados segmentos gnicos. Esses segmentos so arranjados durante o desenvolvimento dos linfcitos por recombinao somtica do DNA para formar uma sequncia completa da regio V mecanismo conhecido como rearranjo gnico. A montagem completa da sequncia da regio V compreende dois ou trs tipos de segmentos gnicos, cada um presente em mltiplas cpias no genoma da linhagem germinal. A seleo de um segmento gnico de cada tipo durante o rearranjo gnico ocorre ao acaso, e o grande nmero de diferentes combinaes possveis explica a grande diversidade do repertrio de receptores. Na primeira parte deste captulo, descreveremos o mecanismo de rearranjo gnico intracromossomal que gera repertrio primrio das regies V das imunoglobulinas e dos genes dos receptores de clulas T. O mecanismo bsico de rearranjo gnico comum para ambos os receptores de clulas B e T, e a sua evoluo provavelmente foi crucial para o desenvolvimento do sistema imune adaptativo dos vertebrados. Os receptores de antgenos expressos aps esse rearranjo proporcionam o repertrio das diversas especificidades antignicas das clulas B e T virgens. As imunoglobulinas podem ser sintetizadas como receptores transmembrana ou como anticorpos secretados, diferentemente dos receptores de clulas T, os quais existem somente como receptores transmembrana. Na segunda parte deste captulo, veremos como ocorre a transio da produo de imunoglobulinas transmembranas pelas clulas B ativadas para a produo de anticorpos secretados pelas clulas plasmticas. As regies C dos anticorpos desempenham funes efetoras na resposta imune e discutiremos rapidamente os diferentes tipos das regies C dos anticorpos e suas propriedades, um tpico ao qual retornaremos com mais detalhes no Captulo 9.

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Na ltima parte deste captulo, veremos os trs tipos de modificaes secundrias que ocorrem nas clulas T. Todas elas conferem uma maior diversidade no repertrio de anticorpos que auxilia a produo de anticorpos com respostas mais eficazes com o passar do tempo. Um deles o processo conhecido por hipermutao somtica, o qual produz mutaes de ponto nas regies V nos genes de imunoglobulinas rearranjados das clulas B ativadas, produzindo algumas variantes que se ligam mais fortemente ao antgeno. A segunda uma modificao denominada converso gnica, a qual, em algumas espcies, tem papel mais significativo do que a diversidade combinatria na diversificao das regies V rearranjadas durante o desenvolvimento das clulas B imaturas. A terceira modificao a limitada, mas funcionalmente importante, expresso sequencial de diferentes regies C de imunoglobulinas nas clulas B ativadas, por um processo denominado mudana de classe, o qual permite que sejam produzidos anticorpos com a mesma especificidade antignica, mas com diferentes propriedades funcionais.

O rearranjo gnico primrio das imunoglobulinas


Virtualmente, qualquer substncia pode ser o alvo para uma resposta de anticorpos, e essa resposta, mesmo a um nico eptopo, compreende muitas molculas diferentes de anticorpo, cada uma com especificidade discretamente diferente e afinidade exclusiva, ou fora de ligao. A coleo completa de especificidade de anticorpos disponveis para um indivduo conhecida como repertrio de anticorpos ou repertrio de imunoglobulinas, consistindo, no homem, em ao menos 1011 molculas diferentes. O nmero de especificidades de anticorpos presentes em um dado momento , entretanto, limitado pelo nmero total de clulas B que um indivduo possui, bem como pelos prvios encontros com o antgeno. Antes que fosse possvel examinar diretamente os genes de imunoglobulinas, havia duas hipteses principais para a origem dessa diversidade. De acordo com uma delas a teoria da linhagem germinal haveria um gene distinto para cada cadeia diferente de imunoglobulina, e o repertrio de anticorpo seria basicamente herdado. Por outro lado, as teorias da diversificao somtica propunham que o repertrio produzido por um nmero limitado de sequncias da regio V herdadas que sofreriam alteraes nas clulas B durante a vida de um indivduo. A clonagem dos genes das imunoglobulinas mostrou que os elementos das duas teorias estavam corretos, e que a sequncia de DNA que codifica cada regio V produzida por rearranjos de um grupo relativamente pequeno de segmentos gnicos herdados. A diversidade posteriormente intensificada por um processo de hipermutao somtica nas clulas B ativadas maduras. Assim, a teoria da diversificao somtica estava essencialmente correta, embora o conceito de mltiplos genes na linhagem germinal, includos na teoria germinal, tambm seja verdadeiro.

4-1 Os genes de imunoglobulinas so rearranjados nas clulas produtoras de anticorpos


Em clulas no-linfoides, os segmentos gnicos que codificam a maior parte da regio V de uma cadeia de imunoglobulina se localizam a uma distncia considervel da sequncia que codifica a regio C. Entretanto, em linfcitos B maduros, a montagem da sequncia da regio V localiza-se muito mais prxima da regio C, como consequncia do rearranjo gnico. O rearranjo dos genes das imunoglobulinas foi originalmente descoberto h cerca de 30 anos, quando, pela primeira vez, foi possvel estudar a organizao desses genes, tanto em clulas B quanto em clulas no-linfoides, utilizando-se a tcnica de anlise por enzimas de restrio. Nesses procedimentos, o DNA cromossmico , primeiro, clivado por uma enzima de restrio, e os fragmentos de DNA que contm sequncias particulares das

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Figura 4.1 Os genes das imunoglobulinas esto rearranjados nas clulas B. No experimento original realizado por Hozumi e Tonegawa, o tamanho dos fragmentos de DNA foram determinados pela hibridizao de sondas radioamarcadas para fragmentos de restrio isolados de pedaos de gis aps eletroforese. Posteriormente, foi aplicada a tcnica de Southern blot, na qual fragmentos separados por eletroforese so transferidos para uma membrana de nitrocelulose. As duas fotografias da esquerda (DNA da linhagem germinal) mostram um Southern blot do DNA de clulas no-linfoides de uma pessoa normal. A localizao das sequncias de DNA das imunoglobulinas est identificada por meio da hibridizao com sondas das regies V e C. As regies V e C so encontradas em fragmentos distintos no DNA no-linfoide. As duas fotografias da direita (DNA da clula B) so de

uma digesto com a mesma enzima de restrio do DNA de linfcitos do sangue perifrico de um paciente com leucemia linfoctica crnica (ver Captulo 7), no qual um nico clone de clulas B foi expandido. As clulas B malignas expressam a regio V de onde foi obtida a sonda para essa regio devido a sua predominncia na populao celular um nico rearranjo pode ser detectado. Nesse DNA, as regies V e C so encontradas no mesmo fragmento, que tem um tamanho diferente dos fragmentos das regies V ou C da linhagem germinal. Embora no esteja apresentado nesta figura, a populao de linfcitos B normais tem muitos genes rearranjados diferentes, que produzem bandas de DNA de tamanhos diferentes, como um arraste, normalmente no-visveis como uma banda bem-definida. (Fotografia cortesia de S. Wagner e L. Luzzatto.)

DNA da linhagem germinal


Fragmento de regio C

DNA da clula B
Fragmento da regio V

Fragmento Fragmento da regio V da regio C

regies V e C so, ento, identificados por hibridizao com sondas especficas de DNA marcadas com radioistopos para sequncias relevantes do DNA. No DNA da linhagem germinal, proveniente de clulas no-linfoides, as sequncias das regies V e C, identificadas pelas sondas, esto em fragmentos de DNA separados. Entretanto, no DNA das clulas B produtoras de anticorpos, as sequncias das regies V e C se encontram no mesmo fragmento de DNA, mostrando que o rearranjo do DNA havia ocorrido. Um experimento tpico mostrado na Figura. 4.1. Esse experimento simples mostrou que segmentos do DNA genmico dentro dos genes de imunoglobulinas so rearranjados em clulas da linhagem de linfcitos B, mas no em outras clulas. Este processo de rearranjo conhecido como recombinao somtica, para distingui-lo da recombinao meitica que ocorre durante a produo dos gametas.

4-2 Os genes completos que codificam a regio varivel so produzidos pela recombinao somtica de segmentos gnicos separados
A regio V, ou o domnio V, de uma cadeia leve ou pesada de imunoglobulina codificada por mais de um segmento gnico. Na cadeia leve, cada domnio V codificado por dois segmentos de DNA separados. O primeiro segmento codifica os primeiros 95-101 aminocidos, a maior parte do domnio, e recebe a denominao segmento gnico V, ou varivel. O segundo segmento de DNA codifica o restante do domnio (at 13 aminocidos) e denominado juno ou segmento gnico J. O processo de rearranjo que produz um gene de cadeia leve de uma imunoglobulina completa mostrado na Figura 4.2 (quadro central). A juno de um segmento gnico V com um segmento J cria um xon que codifica toda a regio V da cadeia leve. No DNA no-rearranjado, os segmentos gnicos V esto localizados relativamente distantes dos da regio C. Os segmentos gnicos J esto localizados prximos aos da regio C, porm a juno do segmento gnico V ao segmento gnico J faz com que os segmentos gnicos V fiquem prximos aos da regio C. O segmento gnico J de uma regio V rearranjada est separado da regio C somente por um pequeno ntron. No experimento mostrado na Figura 4.1, o fragmento de DNA da linhagem germinal, identificado pela sonda da regio V e aquele identificado pela sonda da regio C, contm ambos os segmentos gnicos, tanto o da regio C como o da regio J. Para formar o RNA mensageiro de uma cadeia leve completa de imunoglobulina, o xon da regio V unido ao da regio C pelo processamento do RNA aps a transcrio (ver Figura 4.2). As regies V da cadeia pesada so codificadas por trs segmentos gnicos. Alm dos segmentos gnicos V e J (denominados VH e JH, a fim de diferenci-los dos segmentos gnicos das cadeias leves VL e JL), h um terceiro segmento gnico chamado de seg-

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Cadeia leve
L V J C

Cadeia pesada L V D J C

DNA da linhagem germinal Recombinao somtica

DJ

DNA

DNA D-J rearranjado e reunido Recombinao somtica DNA D-J ou V-DJ rearranjado e reunido Transcrio Transcrito primrio de RNA
L V J C AAA

V DJ

V DJ

C AAA

RNA

Processamento mRNA Traduo


L V J C AAA VL CL

V DJ

C AAA CH3 C H2

Cadeia polipeptdica

Protena

VH

C H1

Figura 4.2 Os genes das regies V so formados por segmentos gnicos. Os genes das regies V de cadeia leve so formados por dois segmentos (quadro central). Os segmentos gnicos variveis (V) e de juno (J) no DNA genmico so reunidos para formar um xon completo da regio V de cadeia leve. As cadeias de imunoglobulinas so protenas extracelulares, e o segmento V precedido por um xon que codifica para o peptdeo lder (L), o qual direciona a protena para a via secretora celular e , ento, clivado. A regio C de cadeia leve codificada em um xon separado e ligado ao xon da regio V, pelo processamento do RNA de cadeia leve, para remover os ntrons L a V e J a C. As

regies V de cadeia pesada so formadas por trs segmentos gnicos (quadro direita). Primeiro, ligam-se os genes de diversidade (D) e de juno, e, ento, o segmento do gene V liga-se sequncia D-J combinada, formando um xon VH completo. Os genes das regies C de cadeia pesada so codificados por vrios xons. Os xons da regio C, juntamente com a sequncia lder, so processados em uma sequncia de domnio V durante o processamento do transcrito de RNA de cadeia pesada. A sequncia lder removida aps a traduo, e so formadas as pontes dissulfdricas que ligam as cadeias polipeptdicas. A regio flexvel mostrada em roxo.

mento de diversidade ou segmento gnico DH, que se localiza entre os segmentos gnicos VH e JH. O processo de recombinao que gera uma regio V de cadeia pesada completa mostrado na Figura 4.2 (quadro direita), ocorrendo em dois estgios distintos. No primeiro, o segmento gnico DH unido a um segmento JH, e ento o segmento gnico rearranja com o DJH produzindo um xon completo da regio VH. Assim como nos genes de cadeias leves, o processamento do RNA junta as sequncias reunidas da regio V s sequncias que codificam a regio C vizinha.

4-3 Mltiplos segmentos gnicos V adjacentes esto presentes em cada lcus de imunoglobulinas
Para simplificar, discutimos at agora a formao de uma sequncia de regio V completa como se houvesse apenas uma nica cpia de cada segmento gnico. Na verdade, h mltiplas cpias de todos os segmentos gnicos no DNA da linhagem germinal. Assim, a seleo ao acaso de apenas um segmento gnico de cada tipo torna possvel a grande diversidade presente nas regies V entre as imu-

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noglobulinas. O nmero de segmentos gnicos funcionais de cada tipo presente no genoma humano tem sido determinado utilizando-se tcnicas de clonagem e sequenciamento, como ilustrado na Figura 4.3. Nem todos os segmentos gnicos descobertos so funcionais, j que parte desses genes acumulou mutaes que os impossibilitaram de codificar uma protena funcional. Esses genes so chamados de pseudogenes . Existem muitos segmentos gnicos V, D e J no DNA germinal e, por isso, nenhum deles essencial. Isso reduz a presso evolutiva sobre cada segmento gnico para permanecer intacto, resultando em um nmero relativamente grande de pseudogenes. Visto que alguns desses pseudogenes podem sofrer rearranjo, como os segmentos gnicos normais, uma proporo significativa de rearranjos incorpora um pseudogene e, assim, torna-se no-funcional. Como vimos na Seo 3.1, existem trs grupos de cadeias de imunoglobulinas, a cadeia pesada e dois tipos de cadeias leve equivalentes, as cadeias e . Os segmentos gnicos das imunoglobulinas que formam cada uma dessas cadeias esto organizados em trs grupamentos ou loci genticos: , e os loci de cadeia pesada, cada um podendo formar uma sequncia completa da regio V. Cada lcus est localizado em diferentes cromossomas, e cada um organizado de forma levemente diferente, como mostrado para os loci dos seres humanos na Figura 4.4. Para o lcus de cadeia leve , localizado no cromossoma 22, h um grupo de segmentos gnicos V, seguido por quatro grupos de segmentos J, cada um ligado a um nico segmento C. No lcus de cadeia leve , no cromossoma 2, o grupo dos segmentos Vk seguido por um grupo de segmentos Jk e, ento, por um nico gene Ck. A organizao do lcus da cadeia pesada, no cromossoma 14, assemelha-se do lcus , com grupamentos separados de segmentos gnicos VH, DH e JH e de genes CH. O lcus da cadeia pesada difere em um ponto importante: em vez de possuir uma nica regio C, ele contm uma srie de regies C dispostas uma aps a outra, sendo que cada uma corresponde a um isotipo diferente. As clulas B expressam inicialmente isotipos de cadeia pesada e (ver Seo 3-1), o qual produzido por processamento alternativo do mRNA, levando expresso das imunoglobulinas IgM e IgD, como veremos na Seo 4-14. A expresso de outros isotipos, como (dando origem a IgG), ocorre em um estgio posterior pelo rearranjo subsequente do DNA, conhecido como mudana de classe, que ser descrito na Seo 4-20. Os segmentos gnicos V humanos podem ser agrupados em famlias, dentro das quais cada membro compartilha pelo menos 80% de identidade na sequncia de

Nmero de segmentos gnicos funcionais nos loci de imunoglobulina humana Cadeias leves Varivel (V) Diversidade (D) Juno (J) 40 0 5 30 0 4 Cadeia pesada H 40 25 6

Segmento

Figura 4.3 Nmeros de segmentos gnicos funcionais para a regio V de cadeias leves e pesadas no DNA humano. Esses nmeros so derivados da clonagem e do sequenciamento exaustivos do DNA de um indivduo e excluem todos os pseudogenes (verses mutadas e nofuncionais de uma sequncia gnica). Devido ao polimorfismo gentico, os nmeros no sero os mesmos em todos os humanos.

Lcus da cadeia leve


L1 V 1 L2 V 2 L V~30 J 1 C1 J 2 C 2 J 4 C 4

Lcus da cadeia leve


L1 V 1 L 2 V 2 L3 V 3 L V ~40 J 1 5 C

Lcus da cadeia pesada


L1 V H1 L2 VH 2 L3 VH 3 LH VH ~40 D H125 J H 16 C

Figura 4.4 Organizao genmica dos loci de cadeias leves e pesadas no genoma humano. O lcus gnico da cadeia leve (cromossoma 22) possui cerca de 30 segmentos gnicos V funcionais e quatro pares de segmentos J e C funcionais. O lcus (cromossoma 2) organizado de modo similar, com cerca de 40 segmentos V acompanhados por um grupo de segmentos J, mas com um nico gene C. Em aproximadamente 50% dos indivduos, o grupo inteiro de segmentos gnicos V sofreu um aumento por duplicao (no mostrado, para simplificar). O lcus da cadeia pesada (cromossoma 14) tem cerca de 40 segmentos VH funcionais, e, alm disso,

h um grupo de aproximadamente 25 segmentos DH localizado entre os segmentos VH e os seis segmentos JH. O lcus da cadeia pesada tambm contm um grande grupo de genes CH que sero descritos na Figura 4.17. Visando maior simplicidade, apresentamos somente um nico gene CH neste diagrama, sem ilustrar seus xons separados, omitindo os pseudogenes e apresentando todas as regies V na mesma orientao. L, sequncia lder. Este diagrama no est em escala: o comprimento total do grupo de cadeia pesada maior que 2 megabases (2 milhes de bases), ao passo que alguns dos segmentos D apresentam apenas seis bases de comprimento.

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DNA com todos os outros membros da famlia. Tanto segmentos gnicos V de cadeia quanto de cadeia pesada podem ser subdivididos em sete famlias, ao passo que para os segmentos V existem oito famlias. As famlias podem ser agrupadas em cls, cujos membros so mais parecidos entre si do que com as famlias dos outros cls. Os segmentos gnicos VH humanos pertencem a trs desses cls. Todos os segmentos VH identificados em anfbios, rpteis e mamferos tambm esto contidos nos mesmos trs cls, sugerindo que esses cls possuem um ancestral comum deste moderno grupo de animais. Dessa forma, os segmentos gnicos V que podemos identificar hoje em dia so originados de uma srie de duplicaes gnicas e diversificaes atravs do tempo evolutivo.

4-4 O rearranjo dos segmentos gnicos V, D e J orientado por sequncias flanqueadoras no DNA
Para que uma imunoglobulina complete ou um receptor de clula T possa ser expresso, preciso garantir que ocorram rearranjos de DNA na localizao correta, relativa s regies codificantes dos segmentos gnicos V, D e J. Alm disso, as junes devem ser reguladas para que um segmento V se una ao D ou ao J, e no a outro segmento V. Os rearranjos de DNA so guiados por sequncias de DNA no-codificadoras conservadas, que se encontram adjacentes aos pontos onde ocorre recombinao e so denominadas sequncias sinais de recombinao (RSSs). Uma sequncia sinal de recombinao consiste em um bloco conservado de sete nucleotdeos, o heptmero 5CACAGTG3 , que sempre contguo sequncia codificadora e seguido por uma regio no-conservada, conhecida como espaador, que possui 12 ou 23 pares de bases (pb) de comprimento. O espaador seguido por um segundo bloco conservado de nove nucleotdeos, o nonmero 5ACAAAAACC3 (Figura 4.5). Os espaadores variam em sequncia, mas seu comprimento conservado e corresponde a uma volta (12 pb) ou duas voltas (23 pb) da dupla hlice de DNA. Isso coloca as sequncias do heptmero e do nonmero no mesmo lado da hlice de DNA, onde elas podem ser unidas pelo complexo proteico que catalisa a recombinao. A sequncia motivo heptmero-espaador-nonmero a RSS est sempre diretamente adjacente sequncia codificadora de segmentos gnicos V, D ou J. A recombinao geralmente ocorre entre segmentos gnicos localizados no mesmo cromossoma. Um segmento gnico flanqueado por um espaador de RSS de 12 pares de base (pb) tipicamente poder unir-se apenas a um gene flanqueado por um espaador RSS de 23 pb. Esse evento conhecido como regra 12/23. Assim, para a cadeia pesada, o segmento DH pode ser unido a um JH, e um segmento gnico VH a um DH, mas segmentos gnicos VH no podem ligar-se diretamente a segmentos JH, uma vez que ambos os segmentos VH e JH so flanqueados por espaadores de 23 pb, e os segmentos DH tm espaadores de 12 pb em ambos os lados (ver Figura 4.5).
Sequncia sinal de recombinao (RSS) com espaador de 23 pb CACAGTG Heptmero GTGTCAC Cadeia ACAAAAACC Nonmero TGTTTTTGG Sequncia sinal de recombinao (RSS) com espaador de 12 pb GGTTTTTGT Nonmero CCAAAAACA CACTGTG Heptmero GTGACAC

Figura 4.5 As sequncias sinais de recombinao so sequncias heptamricas e nonamricas conservadas que flanqueiam os segmentos que codificam as regies V, D e J das imunoglobulinas. As sequncias sinais de recombinao (RSSs) so compostas por um heptmero (CACAGTG) e um nonmero (ACAAAAACC) separadas por 12 pb ou 23 pb. O motivo nonmero-espacador de 12 pb-heptmero descrito como uma seta laranja. O motivo que inclui o espaador de 23 pb da cor roxa. Os segmentos gnicos de ligao quase sempre envolvem uma RSS de 12 pb e uma de 23 pb a regra 12/23. A figura mostra o arranjo das RSSs nos segmentos gnicos V (vermelho), D (verde) e J (amarelo) das cadeias leve ( e ) e pesada (H) das imunoglobulinas. Observe que, de acordo com a regra 12/23, o arranjo das RSSs nos segmentos gnicos de cadeia pesada das imunoglobulinas impede a ligao direta dos segmentos V com J.

23

12

23

12

Cadeia

RSS
V
12

RSS
23

Cadeia H

VH

23

12

DH

12

23

JH

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Vn
23 23 23

Ln
12

L1 V1

L2 V2

L1 V1

L2 V2 L2 Vn Ln V2

V1 L1

Vn Ln

Deletado

L1 V1

L2 V2 L2 Vn Ln Juno sinalizadora Direo da transcrio Direo da transcrio V2

Figura 4.6 Os segmentos gnicos da regio V so unidos por recombinao. Em cada evento de recombinao de regio V, as sequncias sinais de recombinao (RSS) que flanqueiam os segmentos gnicos so reunidas, a fim de permitir que ocorra a recombinao. A RSS com espaador de 12 pb est em laranja, e a RSS com espaador de 23 pb, em roxo. Para maior simplicidade, ilustra-se apenas a recombinao de cadeias leves; para as cadeias pesadas, so necessrios dois eventos de recombinao distintos para gerar uma regio V funcional. Em muitos casos, os dois segmentos que sofrem o rearranjo (os segmentos V e J neste exemplo) esto organizados na mesma orientao transcricional no cromossoma (quadros esquerda), e a justaposio das RSSs resulta na formao de uma ala no DNA interveniente. A recombinao ocorre nas extremidades das sequncias heptamricas, criando uma juno sinalizadora e liberando o DNA interveniente na forma de um crculo fechado. Subsequentemente, a unio dos segmentos gnicos V e J cria a juno codificadora no DNA cromossomal. Em outros casos, ilustrados nos quadros direita, os segmentos V e J esto inicialmente orientados em direes transcricionais opostas. A reunio RSSs, nesse caso, requer uma ala mais complexa de DNA. A juno das extremidades das duas sequncias heptamricas resulta, agora, na inverso e na integrao do DNA interveniente em uma nova posio no cromossoma. Mais uma vez, a unio dos segmentos V e J cria um xon funcional de regio V.

L1

V1 J Juno codificadora

Invertida

Ln

Vn

Lembramos, na Seo 3-6, que a regio de ligao do antgeno de uma imunoglobulina formada por trs regies hipervariveis. As duas primeiras regies hipervariveis, CDR1 e CDR2, so codificadas no prprio segmento gnico V. A terceira regio hipervarivel, o CDR3, codificado por uma sequncia de DNA adicional criada pela ligao dos segmentos gnicos V e J para a cadeia leve, e V, D e J, para a cadeia pesada. A diversidade adicional no repertrio de anticorpos pode resultar da produo de regies CDR3 que parecem resultar da ligao de um segmento gnico D a outro segmento gnico D. Embora pouco frequente, tal ligao D-D parece violar a regra 12/23 e ainda no est claro como esses rearranjos raros so produzidos. No homem, a ligao D-D encontrada em aproximadamente 5% dos anticorpos e o principal mecanismo responsvel pelo maior tamanho das alas CDR3 encontradas em algumas cadeias pesadas. O mecanismo de rearranjo do DNA semelhante para os loci de cadeias pesadas e leves, embora somente um evento de juno seja necessrio para formar os genes de cadeia leve, mas so necessrios dois eventos para gerar os genes de cadeia pesada. Quando a sequncia codificadora de dois segmentos gnicos se encontra na mesma orientao no DNA, o rearranjo envolve a formao de uma ala e uma deleo do DNA localizado entre eles (Figura 4.6, quadros esquerda). No entanto, se o segmento gnico possui orientaes transcricionais opostas, o DNA interveniente tem outro destino (Figura 4.6, quadros direita). Nesse caso, o DNA

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interveniente mantido no cromossoma com orientao invertida. Esse modo de recombinao menos comum, mas responsvel por cerca da metade de todas as junes V a J no homem, visto que a orientao transcricional de metade dos segmentos gnicos V oposta dos segmentos gnicos J.

4-5 As reaes de recombinao dos segmentos gnicos V, D e J envolvem enzimas especficas de linfcitos e enzimas modificadoras de DNA presentes em todas as clulas
O mecanismo molecular de rearranjo das regies V, ou recombinao V(D)J, est ilustrado na Figura 4.7. As duas RSSs so unidas por interaes entre protenas que reconhecem especificamente o comprimento do espaador, cumprindo a regra 12/23 para recombinao. A molcula de DNA , ento, clivada em dois locais e religada em uma configurao diferente. As extremidades das sequncias do heptmero so unidas precisamente cabea-cabea, para formar um sinal de juno; quando os segmentos juncionais esto na orientao direta, o sinal de juno se localiza em um pedao circular de DNA extracromossmico (ver Figura 4.6, quadros esquerda), o qual perdido do genoma quando a clula se divide. Os segmentos gnicos V e J, os quais permanecem no cromossoma, unem-se para formar o que se chama de juno codificadora. No caso de rearranjo por inverso (ver Figura 4.6, quadros direita), o sinal de juno tambm mantido no cromossoma, e a regio do DNA entre os segmentos gnicos V e a RSS do segmento gnico J invertida para formar uma juno codificadora. Como veremos mais adiante, essa juno imprecisa e, consequentemente, gera grande parte da variabilidade adicional na sequncia da regio V. O complexo de enzimas que atua em conjunto para efetuar a recombinao somtica V(D)J denominado recombinase V(D)J. Os componentes linfoide-especficos da recombinase so denominados RAG-1 e RAG-2 e so codificados por dois genes ativadores de recombinao (genes ativadores de recombinao, recombination-activating genes) RAG-1 e RAG-2. Esse par de genes expresso em linfcitos em desenvolvimento somente durante a montagem de seus receptores de antgeno, como descritos com mais detalhes no Captulo 7, e so essenciais para a recombinao V(D)J. De fato, os genes RAG quando expressos simultaneamente podem conferir a clulas no-linfoides, como os fibroblastos, a capacidade de rearranjo de segmentos exgenos de DNA que contm as RSSs apropriadas. Foi assim que RAG-1 2 RAG-2 foram inicialmente descobertos. As outras protenas do complexo recombinase so, basicamente, modificadoras do DNA expressas em todas as clulas e esto envolvidas no reparo de quebras da fita dupla de DNA ou na modificao das extremidades das fitas de DNA quebradas. Uma delas a Ku, a qual um heterodmero (Ku70:Ku80) que forma um anel ao redor do DNA e se associa firmemente subunidade cataltica, DNA-PKcs, para formar uma protena quinase dependente de DNA (DNA-PK). Outra a protena Artemis, a qual possui atividade de nuclease. As extremidades do DNA so finalmente unidas pela enzima DNA ligase IV, que forma um complexo com a protena de reparo de DNA, XRCC4. A recombinao V(D)J um processo que envolve muitas etapas enzimticas. A primeira reao uma clivagem endonucleoltica que requer a atividade coordenada de ambas as protenas RAG. Inicialmente, dois complexos de protenas RAG, cada um contendo RAG-1 e RAG-2, e um grupo de protenas cromatnicas de alta mobilidade reconhecem e alinham as duas RSSs que realizam a reao de clivagem (ver Figura 4.7). A RAG-1 reconhece especificamente o nonmero da RSS. Nessa fase, a regra 12/23 estabelecida por meio de mecanismos ainda pouco compreendidos. A atividade de endonuclease do complexo de protenas RA, o qual se acredita estar localizado em RAG-1, clivam as duas fitas simples de DNA no final 5 de cada RSS, liberando o grupo 3-OH da extremidade de cada segmento codificador. O grupamento 3-OH ataca a ligao fosfodister da outra fita criando um

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Configurao da linhagem germinal

23

12

RAG1:2 se liga a RSS

Sinapse dos complexos RAG

Clivagem da RSS

RAG1/2 Grampo de DNA covalentemente fechado

Junes codificadoras
Ku70:Ku80 se liga extremidade do DNA

Junes sinalizadoras
Ku70:Ku80 se liga extremidade do DNA

Ku70:80 Ku70:80 Extremidade 5 cega fosforilada

DNA-PK:Artemis abre o grampo Artemis DNA-PK

Figura 4.7 Etapas enzimticas no rearranjo V(D)J dependente de RAG. Os segmentos gnicos contendo as sequncias sinais de recombinao (RSSs) (tringulos) sofrem o rearranjo iniciando pela ligao de RAG-1 e RAG-2 (azul e roxo) e de um grupo de protenas de alta mobilidade (no-mostrado) (HMG) a uma RSS flanqueando a sequncia codificadora a ser unida (segunda linha). Aps a ligao dos dois complexos RAG s duas RSSs, ocorre uma possvel sinapse na qual os dois complexos so unidos. Na etapa da clivagem, a atividade de endonuclease do complexo RAG inicialmente corta a ligao fosfodister do DNA para criar o grupo 3 hidroxila precisamente entre o segmento codificador e a RSS. Esta 3-OH recm-criada reage com a ponte fosfodister da fita oposta de DNA para produzir uma extremidade 5 cega de DNA fosforilado na sequncia do heptmero da RSS e um grampo na extremidade codificadora. Subsequentemente, essas duas extremidades de DNA so dissociadas de forma diferente. Nas extremidades codificadoras (quadros esquerda), protenas essenciais como as Ku70:Ku80 (verde) se ligam ao grampo. O complexo DNA-PK-Artemis (roxo) ento se liga ao complexo, e sua atividade endonuclesica abre o grampo de DNA em locais aleatrios para produzir um DNA alinhado ou um DNA estendido de fita simples (dependendo do local exato da clivagem do grampo). Esta extremidade de DNA ento modificada pela TdT (rosa) e pela atividade, as quais criam aleatoriamente extremidades diversas e imprecisas (este processo est apresentado com mais detalhes na Figura 4.8). As extremidades so finalmente ligadas pela DNA ligase IV (azul turquesa) em associao com a XRCC4 (verde). Nas extremidades dos sinais (quadros a direita), as duas extremidades 5 cegas fosforiladas das sequncias dos heptmero so unidas pela Ku70:Ku80, mas no so modificadas posteriormente. Ao invs disso, um complexo de DNA ligase IV:XRCC4 liga as duas extremidades do sinal precisamente para formar a juno sinalizadora.

TdT processa as extremidades de DNA Transferase deoxinucleotidil terminal (TdT)

DNA ligase IV:XRCC4 liga as extremidades do DNA

DNA ligase:XRCC4

DNA ligase IV:XRCC4 liga as extremidades do DNA

Juno sinalizadora precisa

DNA ligase:XRCC4

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Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

grampo de DNA no final do segmento gnico da regio codificadora eliminando a quebra da dupla fita no final das duas sequncias do heptmero. As extremidades do DNA no ficam soltas e se encontram firmemente associadas ao complexo at que a juno seja completada. As extremidades 5 do DNA so precisamente unidas por um complexo de DNA ligase IV e XRCC4 para formar o sinal de juno. A formao da juno codificadora mais complexa, mas parece ocorrer mais rapidamente que a formao das junes sinalizadoras. As extremidades do DNA contendo o grampo so unidas pela Ku, a qual recruta a subunidade da DNA-PKcs. A Artemis recrutada para o complexo ativada pela fosforilao da PKCs e ento abre o grampo de DNA cortando apenas uma das fitas do DNA. Este corte pode ocorrer em vrios pontos ao longo do grampo de DNA, que gera variabilidade sequncia na juno final. As enzimas de reparo do DNA do complexo modificam os grampos abertos removendo nucleotdeos, e ao mesmo tempo a enzima linfoide-especfica enzima transferase deoxinucleotidil terminal, TdT, a qual tambm faz parte do complexo das recombinases, adiciona nucleotdeos ao acaso as extremidades de fita simples. A adio e a deleo de nucleotdeos podem ocorrer em qualquer ordem sem necessariamente um ter de preceder o outro. Finalmente, a DNA ligase IV liga as extremidades processadas reconstituindo o cromossoma que possui os genes rearranjados. Esse processo de reparo cria a diversidade na juno entre os segmentos gnicos, ao passo que as extremidades RSS so ligadas sem modificaes, e um dano gentico no-intencional como uma quebra cromossmica evitada. O mecanismo de recombinao controlado pelas protenas RAG compartilha muitas caractersticas interessantes com o mecanismo pelo qual as integrases retrovirais catalisam a insero do DNA retroviral no genoma, e tambm com o mecanismo transposio usado por transposons (elementos genticos mveis que codificam sua prpria transposase, permitindo a sua exciso de um local do genoma e reinsero em outro local). At mesmo a prpria estrutura dos genes RAG, que esto localizados prximos um ao outro no cromossoma e no possuem os ntrons, comuns nos genes dos mamferos, similar ao de um transposon. De fato, foi recentemente demonstrado que o complexo RAG pode atuar como uma transposase in vitro. Essas caractersticas provocaram uma especulao sugerindo que o complexo RAG originado como uma transposase teve sua funo adaptada pela evoluo em vertebrados para permitir a recombinao dos segmentos gnicos V, levando ao surgimento do sistema imune adaptativo em vertebrados, discutido no Captulo 16. Em invertebrados, no foi encontrado nenhum gene homlogo aos RAG, confirmando o conceito descrito. As funes das enzimas envolvidas na recombinao V(D)J foram estabelecidas in vitro por meio de mutaes induzidas natural e artificialmente. Camundongos que no possuem o gene que codifica a enzima TdT no so capazes de adicionar nucleotdeos extras nas junes entre os segmentos gnicos. Camundongos nocautes de um dos genes RAG, ou que no possuem a DNA-PKcs, Ku ou Artemis sofrem um bloqueio completo no estgio de rearranjo gnico durante o desenvolvimento dos linfcitos, ou produzem um numero insignificante de clulas B e T. Tais camundongos sofrem de imunodeficincia combinada severa (SCID, severe combined immuno deficiency). A mutao scid original foi descoberta h algum tempo antes que os componentes da via de recombinao fossem identificados e foi subsequentemente identificada como uma mutao na DNA-PKcs. De acordo com o papel proposto, camundongos deficientes na funo da DNA-PK apresentam defeitos nas junes codificadoras, mas no na formao da juno sinalizadora. Camundongos deficientes na DNA-PK, Ku ou Artemis geralmente apresentam defeitos no reparo das quebras da dupla fita de DNA e so hipersensveis radiao ionizante (a qual produz quebras na dupla fita). Em humanos, mutaes no RAG-1 ou RAG-2 que resultam em uma atividade parcial da recombinase V(D)J so responsveis por uma doena hereditria denominada sndrome de Omenn, a qual caracterizada pela ausncia de clulas B circulantes e pela infiltrao cutnea de linfcitos T ativados oligoclonalmente. Defeitos na Artemis no

Imunobiologia de Janeway

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homem produzem uma imunodeficincia combinada de clulas B e T associada ao aumento da radiossensibilidade e ento denominada RS-SCID.

4-6 A diversidade do repertrio de imunoglobulinas gerada por quatro processos principais


O rearranjo gnico que combina os segmentos gnicos para formar um xon da regio V completa gera diversidade de dois modos. Primeiro, h mltiplas cpias diferentes de cada tipo de segmento gnico, e diferentes combinaes desses segmentos podem ser usadas em diferentes eventos de rearranjos. Essa diversidade combinatria responsvel por uma parte substancial da diversidade das regies V. Segundo, a diversidade juncional introduzida nas junes entre os diferentes segmentos gnicos como resultado de adio e deleo de nucleotdeos pelo processo de recombinao. Uma terceira fonte de diversidade tambem combinatria e se origina das inmeras combinaes possveis no pareamento de diferentes regies V de cadeias leves e pesadas para formar o stio de ligao do antgeno na molcula de imunoglobulina. Somente esses dois meios de gerar diversidade combinatria poderiam pro6 duzir, teoricamente, 1,9 x 10 diferentes molculas de anticorpos aproximadamente (ver Seo 4-7). Assim, se contarmos tambm os eventos de diversidade juncional, estima-se que 1011 diferentes receptores poderiam fazer parte do repertrio das clulas B virgens. Finalmente, a hipermutao somtica, discutida mais adiante neste captulo, introduz mutaes pontuais nos genes de regies V rearranjados das clulas B ativadas, criando uma diversidade juncional ainda maior que pode ser selecionada para aumentar a afinidade de ligao ao antgeno.

4-7 Mltiplos segmentos gnicos herdados so usados em diferentes combinaes


Existem mltiplas cpias dos segmentos gnicos V, D e J, cada uma capaz de contribuir para uma regio V de imunoglobulina. Muitas regies V diferentes podem ser formadas pela seleo de diferentes combinaes desses segmentos. Para as cadeias leves humanas, h aproximadamente 40 segmentos gnicos V funcionais e cinco segmentos gnicos J e, dessa forma, 200 regies V diferentes podem ser formadas. Para as cadeias leves , existem aproximadamente 30 segmentos gnicos V funcionais e quatro segmentos J, produzindo 120 possveis regies V. Assim, ao todo, 320 cadeias leves diferentes podem ser formadas como resultado da combinao de diferentes segmentos gnicos de cadeia leve. Para as cadeias pesadas humanas, h 40 segmentos gnicos V funcionais, aproximadamente 25 segmentos gnicos DH e seis segmentos gnicos JH e, portanto, cerca de 6.000 regies VH diferentes (40 x 25 x 6 = 6.000). Durante o desenvolvimento das clulas B, o rearranjo no lcus dos genes de cadeia pesada para produzir uma cadeia pesada ocorre aps vrias etapas de diviso celular antes que ocorra o rearranjo dos genes de cadeia leve, fazendo com que uma mesma cadeia pesada possa ser pareada com diferentes cadeias leves em diferentes clulas. Como as regies V de ambas as cadeias pesadas e leves contribuem para a especificidade do anticorpo, cada uma das 320 cadeias leves diferentes pode combinar-se com cada uma das aproximadamente 6.000 cadeias pesadas, originando 6 aproximadamente 1,9 x 10 diferentes especificidades de anticorpo. Essa estimativa terica da diversidade combinatria se baseia no nmero de segmentos gnicos V da linhagem germinal que contribuem para a formao de anticorpos funcionais (ver Figura 4.3); o nmero total de segmentos gnicos V maior, mas os segmentos gnicos adicionais so pseudogenes e no parecem ser expressos em molculas de imunoglobulinas. Na prtica, a diversidade combinatria , provavelmente, menor do que podemos esperar a partir dos clculos descritos. Uma justificativa para isso que nem todos os segmentos gnicos V so usados com a mesma frequncia; alguns so comuns em anticorpos, ao passo que outros so encontrados raramente. Alm disso, nem todas as cadeias pesadas po-

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dem parear. Certas combinaes de regies VH e VL no formam uma molcula de imunoglobulina estvel. Clulas nas quais as cadeias leve e pesada no pareiam podem sofrer rearranjo posterior de cadeia leve at que seja produzida uma cadeia leve adequada, ou ela ser eliminada. Entretanto, acredita-se que a maioria das cadeias leve e pesada pode parear uma com a outra, e que este tipo de diversidade combinatria a principal responsvel pela formao de um repertrio de imunoglobulinas com um amplo espectro de especificidade.

4-8 A adio e a deleo de um nmero varivel de nucleotdeos nas junes entre os segmentos gnicos contribuem para a diversidade da terceira regio hipervarivel
RSSs so aproximadas
T C C A C A G T G

A G G T G T C A C C A C T G T G T A

G T G A C A C A T

O complexo RAG forma um grampo de DNA nas extremidades codificadoras


T C A G T A A T

Como comentado, das trs alas hipervariveis de uma cadeia de imunoglobulina, a CDR1 e a CDR2 esto codificadas dentro do segmento gnico V. Entretanto, a CDR3 localiza-se na juno entre os segmentos V e J e na cadeia pesada e parcialmente codificada pelo segmento gnico D. Nas cadeias leves e pesadas, a diversidade do CDR3 significativamente aumentada pela adio e deleo de nucleotdeos em duas etapas na formao das junes entre os segmentos. Os nucleotdeos adicionados so conhecidos como nucleotdeos P e nucleotdeos N, e sua adio ilustrada esquematicamente na Figura 4.8. Os nucleotdeos P so assim chamados porque constituem sequncias palindrmicas adicionadas s extremidades dos segmentos gnicos. Como descrito na Seo 4-5, as protenas RAG formam o grampo de DNA nas extremidades codificadoras dos segmentos gnicos V, D ou J aps o qual a Artemis catalisa a clivagem em uma das fitas do DNA em um ponto aleatrio dentro da sequncia codificadora, mas prximo ao ponto onde o grampo de DNA foi formado. Quando essa clivagem ocorre em um ponto diferente ao da quebra inicial induzida pelo complexo RAG1/2. A cauda de fita simples formada com poucos nucleotdeos da sequncia codificadora mais os nucleotdeos complementares da outra fita de DNA (ver Figura 4.8). Na maioria dos rearranjos dos genes de cadeia leve, as enzimas de reparo do DNA inserem nucleotdeos complementares nas caudas de fita simples, as quais deixam sequncias palindrmicas curtas na juno (os nucleotdeos P) se essas extremidades forem religadas sem nenhuma atividade extra de exonuclease. Nos rearranjos dos genes de cadeia pesada e em alguns rearranjos dos genes de cadeia leve humana, entretanto, nucleotdeos N so adicionados por um mecanismo bastante diferente antes que as extremidades sejam religadas. Os nucleotdeos N recebem essa denominao por no serem codificados pela fita molde. Eles so adicionados pela enzima TdT s extremidades da fita simples do DNA

O complexo Artemis:DNA-PK abre o grampo de DNA gerando sequncias palindrmicas de nucleotdeos P


T C G A

A T A T

Adio de nucleotdeos N pela TdT

T C G A C T C A

T A G C G A T A T

Pareamento das fitas


T C G A C T C

A G C G A T A T

Nucleotdeos no-pareados so clivados por uma exonuclease


D
T C G A C T C A G C G A T A T

Os espaos so preenchidos pela sntese e ligao do DNA para formar a juno codificadora
T C G A C T C G C T A T A A G C T G A G C G A T A T

Figura 4.8 A introduo dos nucleotdeos N e P diversifica as junes entre os segmentos gnicos durante o rearranjo gnico das imunoglobulinas. O processo ilustrado para o rearranjo DH a JH (primeiro quadro); entretanto, os mesmos passos ocorrem nos rearranjos VH a DH e VL a JL. Aps a formao dos grampos (segundo quadros), as duas sequncias heptamricas so ligadas para formar a juno sinalizadora (no mostrado), ao passo que as protenas Artemis-DNA-PK clivam o grampo de DNA em stios aleatrios (indicados pelas setas), produzindo uma extremidade de DNA de fita simples (terceiro quadro). Dependendo do stio de clivagem, esse DNA de fita simples pode conter nucleotdeos complementares na dupla fita de DNA e que, portanto, formam pequenas sequncias palindrmicas, como TCGA e ATAT, indicadas pelas caixas sombreadas em azul no terceiro quadro. Tais segmentos de nucleotdeos que se originaram das fitas complementares so conhecidos com

nucleotdeos P. Por exemplo, a sequncia GA no final do segmento D complementar sequncia precedente TC. Onde a enzima transferase deoxinucleotidil terminal (TdT) est presente, nucleotdeos so adicionados ao acaso nas extremidades dos segmentos de fita simples (quarto quadro) indicado pela regio sombreada que envolve esses nucleotdeos no-moldes ou nucleotdeos N. As duas extremidades de fita simples ento pareiam (quinto quadro). A exonuclease elimina os nucleotdeos no-pareados (sexto quadro) e repara a juno codificadora pela sntese e ligao do DNA (quadro inferior), deixando os nucleotdeos P e N presentes no final da juno codificadora (indicado pelo sombreamento azul claro). O fato de a insero dos nucleotdeos P e N ocorrer ao acaso torna a regio P-N mpar e um valioso marcador para o acompanhamento de um clone de clula B individual durante seu desenvolvimento, por exemplo, para estudos de hipermutao somtica (ver Figura 4.25).

Imunobiologia de Janeway

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codificante aps a clivagem do grampo. Aps a adio de at 20 nucleotdeos, os dois segmentos de fita simples formam pares de bases complementares. Enzimas de reparo retiram qualquer base no-pareada, sintetizando um DNA complementar para preencher os espaos de fita simples restantes e ligam o novo DNA regio palindrmica (ver Figura 4.8). A enzima TdT expressa a mximo durante o perodo de desenvolvimento das clulas B quando os genes de cadeia pesada esto sendo unidos e, assim, os nucleotdeos N so comuns nas junes V-D e D-J. Os nucleotdeos N so menos frequentes nos genes de cadeia leve, os quais sofrem rearranjos aps o rearranjo dos genes de cadeia pesada (ver Captulo 7). Nucleotdeos podem tambm ser deletados nas junes dos segmentos gnicos. Isso executado por exonuclease ainda no-identificada. Assim, o CDR3 de cadeia pesada pode ser menor do que o menor dos segmentos D. Em algumas ocasies, difcil, se no impossvel, reconhecer um segmento D que contribuiu para a formao do CDR3 devido exciso da maioria de seus nucleotdeos. Delees tambm podem apagar os vestgios de nucleotdeos P palindrmicos introduzidos no momento da abertura do grampo. Por essa razo, muitas junes V(D)J completas no mostram evidncias bvias de nucleotdeos P. Como o nmero total de nucleotdeos adicionados por esse processo casual, eles frequentemente rompem a fase de leitura da sequncia codificadora aps a juno. Tais alteraes de fase daro origem a uma protena no-funcional, sendo que os rearranjos do DNA que levam a essas mudanas so conhecidos como rearranjos no-produtivos. Como aproximadamente dois em trs rearranjos sero no-produtivos, muitos progenitores de clulas B no so bem-sucedidas na produo de molculas de imunoglobulinas funcionais, e, portanto, nunca se tornaro clulas B maduras. Assim, a diversidade juncional alcanada s custas de uma perda considervel de clulas. Discutiremos isso adiante no Captulo 7.

Resumo
A extraordinria diversidade do repertrio de imunoglobulinas obtida de vrias maneiras. Talvez o fator mais importante que possibilita essa diversidade que as regies V so codificadas por segmentos gnicos separados (segmentos gnicos V, D e J), os quais so unidos por um processo de recombinao somtica (recombinao V(D)J) para formar um xon completo da regio V. Muitos segmentos gnicos diferentes esto presentes no genoma de um indivduo proporcionando uma fonte hereditria de diversidade que esse mecanismo combinatrio pode usar. Recombinases singulares especficas de linfcitos, as protenas RAG so absolutamente necessrias para catalisar o processo de rearranjo, e a evoluo das protenas RAG coincide com o surgimento do sistema imune adaptativo nos vertebrados modernos. Uma outra frao substancial da diversidade funcional das imunoglobulinas vem dos prprios processos de juno. A variabilidade nas junes entre os segmentos gnicos produzida pela insero ao acaso de nucleotdeos P e N e por deleo de um nmero varivel de nucleotdeos nas extremidades de alguns segmentos. A associao de diferentes regies V de cadeia leve e pesada para formar o stio de ligao do antgeno de uma molcula de imunoglobulina contribui para aumentar a diversidade. A combinao de todas essas fontes de diversidade cria um vasto repertrio primrio de especificidades de anticorpos. Mudanas adicionais nas regies V rearranjadas, introduzidas por hipermutao somtica (discutida posteriormente neste captulo), adiciona maior diversidade a esse repertrio primrio.

Rearranjo gnico dos receptores de clulas T


O mecanismo pelo qual so gerados os receptores de antgenos de clulas B um poderoso meio de criar diversidade. No surpreendente que os receptores de

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Figura 4.9 Organizao dos loci e do receptor das clulas T na linhagem germinal humana. O arranjo dos segmentos gnicos assemelhase ao das imunoglobulinas, com segmentos gnicos separados variveis (V), de diversidade (D), de juno (J) e constantes (C). O lcus TCR (cromossoma 14) consiste em 70-80 segmentos gnicos V, cada um precedido por um xon codificando uma sequncia lder (L). No se sabe com exatido quantos desses segmentos V so funcionais. Um agrupamento de cerca de 61 segmentos gnicos J se localiza a uma distncia considervel dos segmentos gnicos V. O segmento gnico J seguido por um nico gene C, o qual contm xons separados para os domnios constante e flexvel e um nico xon codificando as regies transmembrnica e citoplasmtica (no mostrado). O lcus TCR (cromossoma 7) tem uma organizao diferente, com um agrupamento de cerca de 52 genes V funcionais, distante de dois grupos separados, cada um contendo um nico segmento gnico D, junto com seis ou sete segmentos gnicos J e um nico segmento gnico C. Cada gene C do TCR possui xons separados que codificam as regies constante, flexvel, transmembrana e citoplasmtica (no apresentado). O lcus TCR interrompido entre os segmentos gnicos J e V por um outro lcus de receptor de clulas T, o TCR (no apresentado aqui; ver Figura 4.14).

Lcus da cadeia
LV x 70 80 J x 61 C

Lcus da cadeia
L V x 52 D1 J1 x 6 C1 D2 J2 x 7 C2

antgeno das clulas T possuam semelhanas estruturais com imunoglobulinas e so gerados por esse mesmo mecanismo. Nesta parte do captulo, descreveremos a organizao dos loci dos receptores de clulas T e a gerao dos genes para as cadeias individuais desses receptores.

4-9 Segmentos gnicos dos receptores de clulas T esto organizados de modo similar aos segmentos gnicos das imunoglobulinas e so rearranjados pelas mesmas enzimas
Como as cadeias leve e pesada das imunoglobulinas, cada cadeia e dos receptores de clulas T consiste em uma regio aminoterminal varivel (V) e uma regio constante (C) (ver Seo 3-10). A organizao dos loci TCR e TCR mostrada na Figura 4.9. A organizao dos segmentos gnicos , em geral, homloga dos segmentos gnicos de imunoglobulinas (ver as Sees 4-2 e 4-3). O lcus TCR, como o das cadeias leves de imunoglobulinas, contm segmentos gnicos V e J (V e J). O lcus do TCR, tal como os de cadeias pesadas das imunoglobulinas, contm os segmentos gnicos D em adio aos segmentos gnicos V e J. Os segmentos gnicos dos receptores de clulas T sofrem rearranjo durante o desenvolvimento das clulas T para formar um xon completo do domnio V (Figura 4.10). O rearranjo dos genes do receptor de clulas T ocorre no timo; a ordem e a regulao dos rearranjos sero tratadas em detalhes no captulo 7. Essencialmente, os mecanismos de rearranjo gnico so semelhantes entre clulas B e T. Os segmentos gnicos dos receptores de clulas T so flanqueados por espaadores de 12 pb e 23 pb das sequncias de sinais de recombinao (RSSs) que so homlogas quelas que flanqueiam os segmentos gnicos das imunoglobulinas (Figura 4-11 e ver Seo 4-4) e so reconhecidas pelas mesmas enzimas. Os DNAs circulares que surgem a partir do rearranjo gnico (ver Figura 4.6) so conhecidos como crculos de exciso do receptor de clula T (TRECs) e so utilizados como marcadores de clulas T recentemente emigradas do timo. Todos os defeitos nos genes que controlam a recombinao V(D)J afetam igualmente as clulas T e B, e animais portadores desses defeitos gnicos no possuem linfcitos funcionais (ver Seo 4-5). Uma outra caracterstica compartilhada entre o rearranjo gnico das imunoglobulinas e dos receptores de clulas T a presena dos nucleotdeos P e N nas junes entre os segmentos gnicos V, D e J dos genes rearranjados do TCR. Nas clulas T, os nucleotdeos P e N so tambm adicionados entre os segmentos V e J de todos os genes rearranjados do TCR, ao passo que apenas cerca de metade das unies dos segmentos V e J dos genes de cadeias leves de imunoglobulinas so modificados pela adio de nucleotdeos N, e essas, frequentemente, tambm no recebem adio de nucleotdeos P (ver Figura 4.12 e Seo 4-8). As principais diferenas entre os genes de imunoglobulinas e aqueles que codificam os receptores de clulas T refletem o fato de que todas as funes efetoras das clulas B dependem dos anticorpos secretados, cujos diferentes isotipos de

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V n DNA germinal Recombinao

V 2

V1

V1 J DNA rearranjado Transcrio Processamento Traduo


Protena (receptor de clula T)

Traduo Processamento Transcrio V 1 D 1 J DNA rearranjado Recombinao V n DNA germinal V 1 D 1 J C 1 D 2 J C 2 C 1

Figura 4.10 Rearranjo e expresso dos genes de cadeias e do receptor de clula T. Os genes de cadeias e do receptor de clula T so compostos de segmentos discretos, unidos por recombinao somtica durante o desenvolvimento da clula T. Os genes das cadeias e funcionais so produzidos do mesmo modo que so criados os genes das imunoglobulinas completas. Para a cadeia , um segmento gnico V se rearranja a um segmento J, a fim de criar um xon funcional V. A transcrio e o processamento do xon VJ ao C geram o mRNA, que traduzido para formar a protena TCR de cadeia . Para as cadeias (parte inferior da figura), como no caso das cadeias pesadas de imunoglobulinas, o domnio varivel codificado em trs segmentos gnicos, V, D e J. A redistribuio desses segmentos gera um xon funcional que transcrito e processado para juntar VDJ ao C, e o mRNA resultante traduzido para formar a protena da cadeia do receptor de clula T. As cadeias e formam um par logo depois de sua biossntese, a fim de produzir o receptor heterodmero : da clula T. Nem todos os segmentos J e as sequncias-lder que precedem cada segmento gnico so apresentados.

regies C de cadeia pesada ativam mecanismos efetores distintos. As funes efetoras das clulas T, por outro lado, depende do contato clula-clula e no so mediadas diretamente pelo receptor de clulas T, os quais servem apenas para o reconhecimento antignico. Assim, as regies C dos loci do TCR e TCR so muito mais simples do que as do lcus de cadeia pesada das imunoglobulinas. H apenas um gene C e, embora existam dois genes C, eles so muito semelhantes, e no se conhece a diferena funcional entre os seus produtos. Os genes de regio C dos receptores de clulas T codificam somente polipeptdeos transmembrana.

4-10 Os receptores de clulas T concentram sua diversidade na terceira regio hipervarivel


A estrutura tridimensional do stio de reconhecimento do antgeno de um receptor de clula T semelhante a uma molcula de anticorpo (ver Sees 3-11 e 3-7, respectivamente). Em um anticorpo, o centro do stio de ligao do antgeno formado pelos CDR3s das cadeias leve e pesada. O equivalente estrutural da terceira ala hipervarivel (CDR3s) das cadeias e do receptor de clulas T, para as quais contribuem os segmentos gnicos D e J, tambm formam o centro do stio de ligao do antgeno de um receptor de clula T, ao passo que a periferia desse local consistir

23

12

23

12

Clulas T
V
23

RSS
12

23

12

23

12

Clulas T
V
23 12

Figura 4.11 Sequncia sinal de recombinao que flanqueia os segmentos gnicos do receptor de clulas T. Como nos loci gnicos das imunoglobulinas (ver Figura 4.5), cada segmento gnico dos loci TCR e TCR flanqueado por sequncias sinais de recombinao (RSSs) heptmero-espaador-nonmero. Os motivos RSS contendo espaadores de 12 pb esto aqui descritos como cabeas de setas laranja, e aqueles contendo espaadores de 23 pb, em roxo. A ligao dos segmentos gnicos quase sempre segue a regra 12/23. Devido disposio do heptmero e do nonmero na RSS nos loci do TCR e TCR, a ligao direta do V ao J , em princpio, permitida pela regra 12/13 (diferente do gene de cadeia pesada de imunoglobulina), embora isso ocorra raramente devido a outros tipos de regulao.

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Figura 4.12 Nmeros dos segmentos gnicos do receptor de clula T e suas fontes de diversidade em comparao aos de imunoglobulinas no homem. Note que somente cerca da metade das cadeias humanas contm nucleotdeos N. A hipermutao somtica como fonte de diversidade das imunoglobulinas no est includa nesta figura.

Imunoglobulina Elemento
H Segmentos variveis (V) Segmentos de diversidade (D) Segmentos D lidos em trs fases Segmentos de juno (J) Junes com nucleotdeos N e P Nmero de pares de genes V Diversidade juncional Diversidade total 40 25 Raramente 6 2 + 70 0 5() 4() 50% das junes 1,9 x 106 ~3 x 107 ~5 x 1013

Receptores de clulas T :
52 2
Frequentemente

~70 0 61 1 5,8 x 106 ~2 x 1011 ~1018

13 2

CDR3

CDR2

nas alas CDR1 e CDR2, as quais so codificadas nos segmentos gnicos V da linha germinal para as cadeias e . A extenso e o padro de variabilidade do receptor de clulas T e de imunoglobulinas refletem a natureza distinta de seus ligantes. Enquanto o stio de ligao do antgeno das imunoglobulinas deve estar de acordo com a superfcie de uma infinidade de diferentes antgenos, e por isso existe em grande variedade de formas e propriedades qumicas, o ligante das principais classes de receptores de clulas T humanos (:) sempre um peptdeo ligado a uma molcula do MHC. Como um grupo, os stios de reconhecimento do antgeno dos receptores de clulas T devem ter uma forma menos variada, com maior variabilidade focada no peptdeo antignico ligado ocupando o centro da superfcie em contato com o receptor. De fato, as alas menos variveis do CDR1 e CDR2 do receptor de clulas T faro contato, principalmente, com regies da molcula do MHC menos varivel do ligante, enquanto as regies CDR3, altamente variveis, faro contato principalmente com o componente peptdico singular (Figura 4.13). A diversidade estrutural dos receptores de clulas T atribuda, principalmente, diversidade combinatria e juncional produzida durante o processo de rearranjo gnico. Pode-se observar na Figura 4.12 que grande parte da variabilidade das cadeias dos receptores de clulas T est localizada nas regies juncionais codificadas pelos segmentos gnicos V, D e J e modificadas pelos nucleotdeos P e N. O lcus do TCR possui muito mais segmentos gnicos J do que qualquer um dos loci de cadeia leve de imunoglobulina. No homem, 61 segmentos gnicos J esto distribudos em cerca de 80 kb de DNA, ao passo que os loci de cadeias leves de imunoglobulina possuem, no mximo, apenas cinco segmentos gnicos J (ver Figura 4.12). Devido grande quantidade de segmentos gnicos J presentes no lcus do TCR, a variabilidade gerada nessa regio ainda maior nos receptores de clulas T do que nas imunoglobulinas. Assim, grande parte da diversidade encontra-se nas alas CDR3 que contm a regio juncional e forma o centro do stio de ligao do antgeno.

CDR1

CDR1 CDR2

CDR3

Figura 4.13 As pores mais variveis dos receptores de clulas T interagem com o peptdeo ligado a uma molcula do MHC. As posies das alas CDR de um receptor de clula T so mostradas, nesta figura, como tubos coloridos sobrepostos ao complexo peptdeo:MHC (cinza). As alas CDR1 das cadeias a e b do TCR so mostradas em azul claro e azul escuro, respectivamente. As alas CDR2 so mostradas em castanho claro e amarelo, e as alas CDR3 so mostradas em vermelho claro e escuro. As alas CDR3 situam-se no centro da interface entre o TCR e o complexo peptdeo:MHC e fazem contato direto com o peptdeo antignico.

4-11 Receptores de clulas T : so tambm gerados por rearranjo gnico


Uma minoria de clulas T possui receptores de clulas T formados por cadeias e (ver Seo 3-19). A organizao do loci do TCR e TCR (Figura 4.14) lembra

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Lcus de cadeia LV x 70 80 D x 3 J x 4 C J x 61 C

V e V intercalados

Lcus de cadeia L V x 12 J x 3 C1 J x 2 C2

do loci do TCR e TCR, embora haja algumas diferenas importantes. O grupamento de segmentos gnicos que codificam a cadeia se encontra inteiramente no complexo TCR entre os segmentos gnicos V e J. Os genes V esto dispersos dentro dos genes V mas localizados principalmente na regio 3 . Devido ao fato de todos os genes V, estarem orientados de modo que o rearranjo vai eliminar o DNA interveniente, qualquer rearranjo no lcus resulta na perda do lcus (Figura 4-15). H muito menos segmentos gnicos V nos loci TCR e TCR do que nos loci TCR e TCR do receptor de clula T ou em qualquer loci de imunoglobulina. O aumento da variabilidade juncional nas cadeias pode compensar pelo pequeno nmero de segmentos gnicos V e tem o efeito de concentrar quase toda a variabilidade do receptor : na regio da juno. Como vimos, os aminocidos codificados pela regio juncional localizam-se no centro do stio de ligao do receptor de clula T. As clulas T que possuem receptores : so uma linhagem distinta de clulas T, cujas funes ainda no esto bem claras. Os ligantes para esses receptores tambm so, em sua maioria, desconhecidos. Alguns desses receptores de clulas T : parecem ser capazes de reconhecer antgenos diretamente, como os anticorpos, sem a necessidade de apresentao de peptdeos antignicos pelas molculas do MHC ou processamento do antgeno. Anlises detalhadas das regies V rearranjadas dos receptores de clulas T : mostram que elas se assemelham s regies V das molculas de anticorpos mais do que aos prprios receptores de clulas T :.

Figura 4.14 Organizao dos loci de cadeias e do receptor de clula T humano. Os loci TCR e TCR, como os loci TCR e TCR, possuem discretos segmentos gnicos V, D, J e genes C. Singularmente, o lcus que codifica a cadeia se localiza inteiramente dentro do lcus da cadeia . Existem trs segmentos gnicos D, quatro segmentos gnicos J e um nico gene C que se localiza entre o agrupamento de segmentos gnicos V e J. H dois segmentos gnicos V localizados prximos ao gene C, um logo antes da regio D e um na orientao invertida logos aps o gene C (no apresentado). Alm disso, h seis segmentos gnicos V intercalados entre os segmentos gnicos V. Cinco deles so compartilhados com o V e podem ser usados por qualquer loci, e um exclusivo do lcus . O lcus TCR humano se assemelha ao lcus TCR, com dois genes C, cada um com seus prprios segmentos J. Os genes de camundongo (no apresentados) tm uma organizao mais complexa, e h trs agrupamentos funcionais de segmentos gnicos , cada um contendo segmentos gnicos V e J e um gene C. O rearranjo dos loci e prossegue como para os outros loci do receptor de clula T, com a exceo de que, durante o rearranjo da cadeia TCR, os dois segmentos D podem ser usados no mesmo gene. A utilizao dos dois segmentos D aumenta muito a variabilidade da cadeia , principalmente porque nucleotdeos extras da regio N podem ser adicionados na juno entre os dois segmentos gnicos D, assim como nas junes V-D e D-J.

Resumo
Os receptores de clulas T so estruturalmente similares s imunoglobulinas e so codificados por genes homlogos. Os genes dos receptores de clulas T so reunidos por recombinao somtica de grupos de segmentos gnicos, da mesma maneira como ocorre nos genes das imunoglobulinas. Entretanto, a diversidade distribuda diferentemente nas imunoglobulinas e nos receptores de clulas T. Os loci dos receptores de clulas T possuem aproximadamente o mesmo nmero de segmentos gnicos V, mas mais segmentos J, e existe maior diversificao nas junes entre os segmentos gnicos durante o rearranjo gnico. Alm disso, no h evidncia de que os receptores de clulas T possam diversificar seus genes V aps o rearranjo por meio de hipermutaes somticas. Isso leva a um receptor de

D x 3

J x 4

Deletado

Figura 4.15 A deleo do lcus TCR induzida pelo rearranjo de um segmento gnico V a J. O lcus do TCR est totalmente localizado na regio cromossmica que contm o lcus TCR. Quando qualquer regio V na regio V/V rearranja com qual-

quer segmento J, a regio interveniente e o lcus V inteiro deletado. Assim, o rearranjo V impede qualquer expresso de um gene V e evita o desenvolvimento de uma linhagem da via :.

Vn

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clulas T no qual a maior diversidade est localizada na parte central do receptor, que no caso dos receptores de clulas T :, entra em contato com o fragmento do peptdeo ligado. A maioria da diversidade entre os receptores de clulas T : est tambm no CDR3, mas de que forma isso afeta a ligao do ligante, no entanto, ainda no est claro, pois as clulas T : reconhecem diretamente ligantes pouco caracterizados, que em alguns casos so independentes das molculas do MHC.

Variao estrutural nas regies constantes das imunoglobulinas


At o momento, neste captulo, temos focalizado na variao estrutural dos receptores de antgeno resultante da reunio das regies V. Agora veremos a regio C. As regies C dos receptores de clulas T no possuem um propsito funcional, alm de sustentar as regies V e ancorar a molcula na membrana. Por outro lado, as imunoglobulinas podem ser produzidas tanto como receptores transmembrana como anticorpos secretados, e os domnios C dos anticorpos so cruciais para suas funes efetoras diversas. As imunoglobulinas so constitudas por vrias classe diferentes, as quais so distinguidas por sua cadeia pesada. Diferentes cadeias pesadas so produzidas em um determinado clone de clulas B pela ligao de diferentes regies C de cadeia pesada (CH) ao gene VH rearranjado. Assim, todas as classes de imunoglobulinas produzidas por um clone de clulas B possuem a mesma regio V. No lcus de cadeias pesadas, as diferentes regies C so codificadas em genes separados localizados aps os segmentos da regio V. Inicialmente, as clulas B virgens usam somente os primeiros dois genes, o C e o C, os quais so expressos juntamente com uma sequncia de regio V j unida associada a eles para produzir IgM ou IgD de transmembrana na superfcie das clulas B virgens. Durante uma resposta de anticorpos, as clulas B ativadas podem passar a expressar um gene CH diferente do C e C por um processo de recombinao somtica conhecido como troca de classe. Juntamente com outros mecanismos que diversificam ainda mais as imunoglobulinas, a troca de classe ser discutida na ultima parte deste captulo. Diferentemente das regies C de cadeia pesada, as regies C de cadeia leve (CL) no proporcionam funo efetora especfica, alm da ligao estrutural para as regies V, no sofrem troca de classe e parece no possurem diferenas funcionais entre as cadeias leves e . Nesta parte do captulo, consideraremos as caractersticas estruturais que distinguem as regies CH dos anticorpos das cinco principais classes, e discutiremos algumas de suas propriedades especiais. As funes das diferentes classes de anticorpo sero consideradas com maiores detalhes no Captulo 9. Tambm explicaremos como o mesmo gene de anticorpo pode produzir uma imunoglobulina de membrana e uma imunoglobulina secretada pelo processamento alternativo do mRNA.

4-12 Diferentes classes de imunoglobulinas so distinguidas pela estrutura de suas regies constantes de cadeia pesada
As cinco principais classes de imunoglobulinas so IgM, IgD, IgG, IgE e IgA e todas podem ocorrer como receptores de antgeno transmembrana ou como anticorpos secretados. Em seres humanos, anticorpos IgG podem ser subdivididos em quatro subclasses (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4), ao passo que os anticorpos IgA so encontrados como duas subclasses (IgA1 e IgA2). As subclasses IgG no homem so nomeadas na ordem de abundncia no soro, sendo a IgG1 a mais abundante. As diferentes cadeias pesadas que definem essas classes so conhecidas como isotipos e so

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designadas pelas letras minsculas do alfabeto grego , , , e , como mostra a Figura 4.16, que tambm descreve as principais propriedades fsicas e funcionais das diferentes classes de anticorpos humanos. A IgM adquire a forma de pentmero no soro, o que a leva a ter um alto peso molecular. A IgA secretada pode ocorrer como monmero ou dmero. Diferenas na sequncia entre as cadeias pesadas de imunoglobulinas fazem com que os vrios isotipos sejam diferentes com respeito a vrias caractersticas. Estas incluem o nmero e a localizao das pontes dissulfdricas intercadeias, o numero de molculas de oligossacardeos ligadas, o nmero de domnios C e o tamanho da regio da dobradia (Figura 4.17). As cadeias pesadas de IgM e IgE contm um domnio C extra que substitui a regio da dobradia encontrada nas cadeias , e . A ausncia da regio da dobradia nas molculas de IgM e IgE no implica falta de flexibilidade; micrografias eletrnicas de molculas de IgM unidas a ligantes mostram que os braos Fab podem flexionar-se em relao poro Fc. Entretanto, tal diferena na estrutura pode ter consequncias funcionais ainda no caracterizadas. Diferentes isotipos e subtipos tambm diferem na habilidade de exercer vrias funes efetoras, como ser descrito mais adiante. As propriedades distintas das diferentes regies C so codificadas por diferentes genes CH de imunoglobulinas que esto presentes em um agrupamento localizado no final 3 dos segmentos JH. Descreveremos o processo de rearranjo pelo qual as regies V se tornam associadas a diferentes genes CH na Seo 4-20.

4-13 As regies constantes conferem especializao funcional ao anticorpo


Os anticorpos protegem o organismo de diversas maneiras. Em alguns casos, a ligao do anticorpo ao antgeno suficiente. Por exemplo, ao ligar-se fortemente a uma toxina ou vrus, um anticorpo pode evitar que eles reconheam seu receptor em uma clula hospedeira (ver Figura 1.24). As regies V dos anticorpos so suficientes para essa atividade. Entretanto, a regio C essencial para recrutar

Imunoglobulina
IgG1 IgG2 2
146 3

IgG3 3
165

IgG4 4
146 0,5 21

IgM
970 1,5 10

IgA1 1
160 3,0

IgA2 2
160 0,5 6

IgD
184 0,03 3

IgE
188 5 x105

Cadeia pesada Peso molecular (kDa) Nvel srico (mdia em adulto mg mL1) Meia-vida srica (dias)

1
146

9 21

1 7

20

Via clssica de ativao do complemento Via alternativa de ativao do complemento Transferncia placentria Ligao aos receptores de macrfagos e fagcitos Ligao de alta afinidade a mastcitos e basfilos Reatividade com a protena A estafiloccica

Figura 4.16 As propriedades fsicas dos isotipos das imunoglobulinas humanas. A IgM assim chamada devido ao seu tamanho: embora a IgM monomrica tenha somente 190 kDa, ela normalmente forma pentmeros, conhecidos como macroglobulinas (da o M), de grande peso molecular (ver Figura 4.20). A IgA dimeriza para gerar um peso molecular de aproximadamente 390 kDa nas secrees. O anticorpo IgE associado hipersensibilidade do tipo imediata. Quando fixada a mastcitos tissulares, a IgE tem uma meia-vida muito mais longa do que sua meia-vida no plasma mostrada aqui.

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IgM

IgD

IgG

IgE

IgA

C C JH C C

C C C3 C 1 C2b C2a C C

Camundongo

JH

C 3

C 1

C1

C2

C4

C2

Homem

Figura 4.17 Os isotipos de imunoglobulinas so codificados por um agrupamento de genes de regio C de cadeia pesada de imunoglobulinas. A estrutura geral dos principais isotipos de imunoglobulinas (quadro superior) e seus domnios indicados como retngulos. Esses so codificados por genes de regio C de cadeia pesada, organizados em um agrupamento tanto em camundongos como no homem (quadro inferior). A regio constante de cada isotipo de cadeia pesada est indicada pela mesma cor do segmento gnico da regio C que o codifica. Tanto IgM como IgE no possuem a regio da dobradia, mas cada uma contm um domnio extra de cadeia pesada. Observe as diferenas no nmero e na localizao das pontes dissulfdricas (linhas pretas) unindo as cadeias. Os isotipos tambm diferem na distribuio dos grupos de carboidratos N ligados, como mostram os hexgonos. No homem, o agrupamento mostra evidncia da duplicao evolutiva de uma unidade consistindo em dois genes , um gene e um gene . Um dos genes tornou-se inativo e , agora, um pseudogene (); assim, somente um subtipo de IgE expresso. Por motivos de simplificao, outros pseudogenes no so ilustrados, e os detalhes dos xons dentro de cada gene C no so apresentados. As classes de imunoglobulinas encontradas em camundongos so chamadas de IgM, IgD, IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA e IgE.

ajuda de outras clulas e molculas para destruir e remover os patgenos ao qual o anticorpo se ligou. As regies C (pores Fc) de um anticorpo conferem molcula trs funes efetoras principais. Primeiro, as pores Fc de determinados isotipos so reconhecidas por receptores Fc especializados expressos pelas clulas imunes efetoras. Os receptores Fc presentes na superfcie de clulas fagocticas, como macrfagos e neutrfilos, ligam-se s pores Fc dos anticorpos IgG1 e IgG3, facilitando a fagocitose de patgenos recobertos com esses anticorpos. A poro Fc da IgE liga-se ao receptor Fc de alta afinidade dos mastcitos, dos basfilos e dos eosinfilos ativados, permitindo que essas clulas respondam ligao de antgenos especficos pela liberao de mediadores inflamatrios. Segundo, as pores Fc do complexo antgeno-anticorpo podem ligar-se ao complemento (ver Figura 1.24) e iniciar a cascata do complemento, que ajuda a recrutar e ativar fagcitos; podem auxiliar os fagcitos a engolfar os micrbios e tambm destruir diretamente os patgenos. Terceiro, a poro Fc pode liberar anticorpos em locais onde eles no poderiam atingir sem o transporte ativo. Estes incluem as secrees mucosas, as lgrimas e o leite (IgA) e a circulao fetal por transferncia a partir da me grvida (IgG). Em ambos os casos, a poro Fc do anticorpo se liga a um receptor especfico e transporta ativamente a imunoglobulina para alcanar diferentes compartimentos do organismo. O papel da poro Fc nessas funes efetoras pode ser demonstrado pelo estudo de imunoglobulinas que tiveram um ou outro domnio Fc clivado enzimticamente (ver Seo 3-3) ou, mais recentemente, pela engenharia gentica, que permite o mapeamento detalhado dos resduos de aminocidos da Fc que so necessrios para funes especficas. Muitos microrganismos respondem ao potencial destrutivo da poro Fc desenvolvendo protenas que tambm se ligam ou clivam os anticorpos evitando sua ao. Exemplos disso so a Protena A e a Protena G, produzidas pelo Staphylococcus, e a Protena D, produzida pelo Haemophilus. Pesquisadores tm explorado essas protenas para ajudar a mapear a Fc e os reagentes imunolgicos (ver Apndice I, Seo A-10). Nem todas as classes de imunoglobulinas possuem a mesma capacidade de exercer cada uma das funes efetoras. As diferentes propriedades funcionais de cada isotipo de cadeia pesada esto resumidas na Figura 4.16. Por exemplo, a IgG1 e IgG3 possuem maior afinidade do que a IgG2 para o tipo mais comum de receptor Fc.

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4-14 Clulas B virgens maduras expressam tanto IgM quanto IgD na sua superfcie
Os genes CH das imunoglobulinas formam um grande conjunto, alcanando cerca de 200 kilobases (kb) na extremidade 3 do segmento gnico JH (Figura 4.17). Cada gene CH dividido em vrios xons (no apresentados na figura), cada um correspondendo a um domnio especfico da imunoglobulina na regio C dobrada. O gene que codifica a regio C da cadeia est prximo aos segmentos gnicos JH e, portanto, prximo aos xons da regio VH (xon VDJ) aps o rearranjo do DNA. Uma vez finalizado o rearranjo, um transcrito de cadeia pesada completo produzido. Qualquer segmento gnico JH remanescente entre o gene V reunido e o gene C removido durante o processamento do RNA para gerar o mRNA maduro. Cadeias pesadas so, portanto, as primeiras a serem expressas, e a IgM a primeira imunoglobulina a ser produzida durante o desenvolvimento da clula B. Imediatamente 3 do gene , localiza-se o gene , que codifica a regio C da cadeia pesada da IgD (ver Figura 4.17). A IgD coexpressa com a IgM na superfcie de quase todas as clulas B maduras, embora esse isotipo seja secretado somente em pequenas quantidades pelas clulas plasmticas e sua funo seja desconhecida. Na verdade, camundongos que no possuem os xons C parecem ter o sistema imune essencialmente normal. Clulas B expressando IgM e IgD no sofrem mudana de classe, o que acarreta, necessariamente, uma mudana irreversvel no DNA. Em vez disso, essas clulas produzem um longo transcrito primrio de mRNA que diferencialmente clivado e processado para produzir uma de duas molculas de mRNA distintas. Em uma dessas, o xon VDJ unido ao xon C para codificar uma cadeia pesada , e, em outra, o xon VDJ unido aos xon C para codificar uma cadeia pesada (Figura 4.18). O processamento do longo transcrito de mRNA regulado durante o desenvolvimento, com as clulas B imaturas fazendo, em sua maioria, transcritos , e as clulas B maduras produzindo, em sua maioria, transcritos com alguns transcritos . Quando uma clula B ativada, ela para a coexpresso de IgD junto com IgM, seja porque as sequncias e foram removidas como consequncia da troca de classe, seja em clulas plasmticas secretoras de IgM, porque a transcrio a partir do promotor VH no suficientemente longa at o xon C.

4-15 As formas secretadas e transmembrana das imunoglobulinas so geradas de transcritos alternativos de cadeia pesada
Imunoglobulinas de todas as classes podem ser produzidas, seja como receptores ligados membrana ou como anticorpos secretados. Todas as clulas B inicial-

Figura 4.18 A coexpresso de IgD e IgM regulada pelo processamento do RNA. Em clulas B maduras, a transcrio iniciada no promotor VH estende-se atravs dos xons C e C. Esse longo transcrito primrio , ento, processado por clivagem, poliadenilao (AAA) e processamento. A clivagem e a poliadenilao no stio (pA1) e o processamento entre os xons C geram um mRNA que codifica a cadeia pesada (quadro esquerda). A clivagem e a poliadenilao no stio (pA2) e um padro diferente de processamento que remove os xons C geram um mRNA que codifica a cadeia pesada (quadro direita). Para simplificar, no apresentamos todos os xons individuais da regio C.

Expresso de IgM
VDJ DNA RNA AAA mRNA AAA mRNA C pA1 C pA2 DNA RNA VDJ

Expresso de IgD
C pA1 C pA2

AAA AAA

Protena

IgM

Protena

IgD

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mente expressam a forma transmembrana de IgM; aps o estmulo antignico, uma parte de sua prognie diferencia-se em clulas plasmticas produtoras de anticorpos IgM, ao passo que outras sofrem mudana de classe para expressar imunoglobulinas transmembrana de uma classe diferente seguido pela produo de anticorpos secretados de uma nova classe. As formas da membrana de todos as classes de imunoglobulinas so monomricas, possuindo duas cadeias leves e duas cadeias pesadas. A IgM e a IgA polimerizam somente quando secretadas. Em sua forma ligada membrana, a cadeia pesada de imunoglobulina possui um domnio transmembrana hidrofbico, de aproximadamente 25 resduos de aminocidos na extremidade carboxiterminal, que a ancora superfcie do linfcito B. Esse domnio transmembrana est ausente na forma secretada, cuja regio carboxiterminal uma cauda secretora hidroflica. As duas regies carboxiterminais, das formas transmembrana e secretada da cadeia pesada da imunoglobulina, so codificadas por dois xons diferentes, e a produo das duas formas obtida pelo processamento alternativo do RNA (Figura 4.19). Os ltimos dois xons de cada gene CH contm as sequncias que codificam as regies secretadas e transmembrana, respectivamente. Se o transcrito primrio clivado e poliadenilado no stio aps esses xons, a sequncia codificadora da regio carboxiterminal da forma secretada removida por processamento, e a forma de superfcie celular da imunoglobulina produzida. Alternativamente, se o transcrito primrio clivado no stio de poliadenilao, localizado antes dos dois ltimos xons, somente a molcula secretada pode ser produzida. Esse processamento diferencial de RNA ilustrado para o gene C na Figura 4.19, mas ocorre da mesma maneira em todos os isotipos. Nas clulas B ativadas que diferenciam se tornando clulas plasmticas secretoras de anticorpos, a maioria dos transcritos processado para expressar a forma secretada, ao invs da forma transmembrana, a qual pode ser qualquer isotipo de cadeia pesada expresso pela clula B.

4-16 IgM e IgA podem formar polmeros


Embora todas as molculas de imunoglobulinas consistam em uma unidade bsica formada por duas cadeias pesadas e duas cadeias leves, tanto IgM quanto IgA podem formar multmeros a partir dessas unidades bsicas (Figura 4.20.) As regies C da IgM e da IgA incluem um apndice de 18 aminocidos que contm um resduo de cistena essencial polimerizao. Uma cadeia polipeptdica adicional isolada de 15 kDa chamada de cadeia J promove a polimerizao pela sua ligao s cistenas do apndice, que encontrado somente na forma secretada das cadeias e . (Essa cadeia J no deve ser confundida com a regio J da imunoglobulina codificada pelo segmento gnico J; ver Seo 4-2.) No caso da IgA, a polimerizao necessria ao transporte atravs do epitlio, como ser discutido no Captulo 9. As molculas de IgM so encontradas como pentmeros e, ocasionalmente, como hexmeros (sem a cadeia J) no plasma, ao passo que a IgA encontrada principalmente como um dmero nas secrees mucosas, mas como um monmero no plasma. Acredita-se que a polimerizao das imunoglobulinas seja importante na ligao do anticorpo a eptopos repetitivos. Uma molcula de anticorpo tem pelo menos dois stios idnticos de ligao do antgeno, cada um com uma determinada afinidade, ou fora de ligao para o antgeno (ver Apndice I, Seo A-9). Se o anticorpo se liga a mltiplos eptopos idnticos no antgeno-alvo, ele dissociar somente quando todos os stios dissociarem. A taxa de dissociao de todo anticorpo do antgeno ser, portanto, mais lenta do que a taxa de dissociao para um nico stio de ligao. Assim, mltiplos stios de ligao proporcionam ao anticorpo uma maior fora total de ligao, ou avidez. Essa considerao especialmente relevante para a IgM pentamrica, que tem 10 stios de ligao com o antgeno. Os anticorpos IgM frequentemente reconhecem eptopos repetitivos, como os polis-

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IgM transmembrana
L VDJ C 1 C 2 C 3 C 4 SC pA s MC pA m

DNA rearranjado Transcrio Transcrito primrio de RNA

AAA

Clivagem no segundo stio de adio de poli (A) (pAm) e processamento


mRNA Traduo, processamento proteico Protena Terminal C para a IgM transmenbrana
AAA

Figura 4.19 As formas transmembrana e secretada de imunoglobulinas derivam da mesma sequncia de cadeia pesada por processamento alternativo do RNA. Cada gene C de cadeia pesada possui dois xons (codificador da membrana (MC), amarelo) que codificam a regio transmembrana e a cauda citoplasmtica da forma transmembrana, e uma sequncia SC (laranja) que codifica a regio carboxiterminal da forma secretada. No caso da IgD, a sequncia SC est presente em um xon separado, mas, para outros isotipos, incluindo a IgM aqui ilustrada, as sequncias SC so contguas ao ltimo xon do domnio C. Os eventos que determinam se um RNA de cadeia pesada resultar em uma molcula secretada ou transmembrana ocorrem durante o processamento do transcrito primrio. Cada gene C de cadeia pesada tem dois stios de poliadenilao potenciais (indicados como pAs e pAm). No quadro superior, o transcrito clivado e poliadenilado (AAA) no segundo stio (pAm). O processamento entre o stio localizado entre o xon C4 e a sequncia SC e um segundo stio na extremidade 5 dos xons MC resulta na remoo da sequncia SC e juno dos xons MC sequncia C4. Isso gera a forma transmembrana da cadeia pesada.

IgM secretada
L VDJ C 1 C 2 C 3 C 4 SC pA s MC pA m

DNA rearranjado Transcrio Transcrito primrio de RNA

AAA

Clivagem no primeiro stio de adio de poli (A) (pAs) e processamento


mRNA Traduo, processamento proteico Protena Terminal C para a IgM secretada
AAA

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Figura 4.20 As molculas de IgM e IgA podem formar multmeros. IgM e IgA so usualmente sintetizadas como multmeros em associao a uma cadeia polipeptdica adicional, a cadeia J. Na IgM pentamrica, os monmeros so unidos por pontes dissulfdricas uns aos outros e cadeia J. O quadro superior esquerdo apresenta uma micrografia eletrnica de uma IgM pentamrica, mostrando o arranjo dos monmeros em um disco plano. A IgM pode tambm formar hexmeros que perdem a cadeia J, mas so mais eficientes na ativao do complemento. Na IgA dimrica, os monmeros tm ligaes dissulfdricas com a cadeia J, bem como entre si. O quadro esquerdo inferior apresenta uma micrografia eletrnica de uma IgA dimrica. (Fotografias [x 900.000] cortesia de K. H. Roux e J. M. Schiff.)

IgM pentamrica

Cadeia J

IgA dimrica

Cadeia J

sacardeos da parede celular bacteriana, mas stios de ligao individuais so, em geral, de baixa afinidade porque a IgM produzida no incio da resposta imune, antes de ocorrer hipermutao somtica e maturao de afinidade. A ligao a mltiplos stios aumenta dramaticamente a fora de ligao funcional total.

Resumo
As classes de imunoglobulinas so definidas pelas regies C de suas cadeias pesadas, com diferentes isotipos de cadeia pesada codificados por diferentes genes da regio C. Os genes da regio C de cadeia pesada localizam-se em um agrupamento 3 dos segmentos gnicos V e J. Um xon de regio V rearranjado produtivamente inicialmente expresso em associao s cadeias pesadas dos genes CH e , o qual coexpresso nas clulas B virgens pelo processamento alternativo de um transcrito de mRNA que contm os dois xons CH e . Alm disso, as clulas B podem expressar qualquer classe de imunoglobulina como um receptor de ant-

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geno ligado membrana, ou como anticorpo secretado. Isto obtido pelo processamento diferencial do mRNA para incluir xons que codificam o ancoramento hidrofbico da membrana ou a cauda secretora. O anticorpo secretado pela clula B ativada reconhece o antgeno que inicialmente ativou a clula B atravs do seu receptor de antgeno. O mesmo xon da regio V pode subsequentemente ser associado a qualquer um dos outros isotipos para levar produo de anticorpos de diferentes classes. Este processo de troca de classe ser descrito na prxima parte deste captulo.

Diversificao secundria do repertrio de anticorpos


A recombinao V(D)J mediada por RAG descrita na primeira parte deste captulo responsvel pelo repertrio inicial de anticorpos das clulas B desenvolvidas na medula ssea. Essas mutaes somticas que ocorrem na forma de rearranjo dos segmentos gnicos renem os genes que produzem o repertrio primrio de imunoglobulinas e ocorre sem a interao das clulas B com o antgeno. Embora esse repertrio primrio seja grande, pode ocorrer uma diversificao posterior para aumentar a capacidade da imunoglobulina de reconhecer e de ligar-se aos antgenos estranhos e aumentar a capacidade efetora do anticorpo expresso. Essa segunda fase de diversificao ocorre nas clulas B ativadas e principalmente dirigida pelo antgeno. Essa diversificao obtida atravs de trs mecanismos: hipermutao somtica, converso gnica e troca de classe ou recombinao de troca de classe, que alteram a sequncia da imunoglobulina secretada de formas distintas (Figura 4-21). A recombinao de troca de classe envolve somente a regio C e substitui a regio C de cadeia pesada C por uma regio C alternativa, aumentando a diversidade funcional do repertrio de imunoglobulinas. A hiper-

Converso gnica

V C C Hipermutao somtica

V C Troca de classe

C C

Hipermutao somtica

Converso gnica

Troca de classe

Figura 4.21 O repertrio primrio de anticorpos diversificado por trs processos que modificam os genes de imunoglobulinas rearranjados. O repertrio primrio de anticorpos inicialmente composto por IgM contendo regies variveis produzidas pela recombinao V(D)J. Esta ampla variao de reatividade pode ser modificada posteriormente pela hipermutao somtica, pela converso gnica e pela recombinao para troca de classe no lcus das imunoglobulinas. A hipermutao somtica resulta em mutaes (representado em azul) introduzidas nas regies V (vermelho) de cadeias leves e pesadas, alterando a afinidade do anticorpo pelo antgeno. Na converso gnica, a regio V rearranjada modificada pela introduo de sequncias derivadas dos segmentos gnicos V dos pseudogenes, criando uma especificidade adicional no anticorpo. Na recombinao para troca de classe, a regio C de cadeia pesada (azul) inicial substituda por regies de cadeia pesada de um outro isotipo (representado em amarelo), modificando a atividade efetora do anticorpo, mas no a sua especificidade antignica.

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DNA de fita simples atacado pela AID

AID

Zn OH OH O N

NH2

Citidina N DNA

mutao somtica e a converso gnica afetam a regio V. A hipermutao somtica diversifica o repertrio de anticorpos, introduzindo mutaes pontuais nas regies V das duas cadeias e alterando a afinidade do anticorpo pelo antgeno. A converso gnica diversifica o repertrio de anticorpos primrios em alguns animais, substituindo blocos de sequncias da regio V por sequncias derivadas de regies V de pseudogenes. Assim como a recombinao V(D)J mediada por RAG, esse processo envolve mutao somtica dos genes de imunoglobulinas, mas, diferentemente da recombinao V(D)J, todas so iniciadas por uma enzima denominada citidina desaminase induzida por ativao (AID), a qual expressa especificamente nas clulas B e no ocorrem nos genes dos receptores de clulas T. O mecanismo de iniciao responsvel por todo esse processo similar e iniciaremos com a descrio geral das enzimas envolvidas.

Estado de transio da AID

4-17 A citidina desaminase induzida por ativao introduz mutaes nos genes transcritos nas clulas B
A enzima AID foi inicialmente identificada como um gene expresso especificamente durante a ativao das clulas B. Sua importncia para a diversificao de anticorpos foi revelada pela anlise de camundongos engenheirados para ausncia de expresso da AID, a qual mostrou ausncia de hipermutao somtica e de recombinao para troca de classe. A ausncia de hipermutao somtica e de troca de classe tambm foi identificada em seres humanos com mutaes na AID. A sequncia da AID est relacionada a uma protena conhecida pelo apelido APOBEC1 (Polipeptdeo cataltico de editorao do mRNA da apoliprotena B, apoliprotein B mRNA editing catalytic polipeptide 1), que converte a citosina do mRNA da apoliprotena B em uracila por desaminao e, assim, inicialmente se acreditava que a AID atuava como uma citidina desaminase de mRNA. Embora esta possibilidade ainda exista, evidncias atuais sugerem que a AID tambm pode atuar como uma citidina desaminase de DNA, desaminando diretamente resduos de citidina dos genes de imunoglobulinas para uridina. A AID pode ligar-se e desaminar o DNA de fita simples, mas no o DNA de fita dupla. Assim, o DNA de fita dupla deve estar temporariamente desenrolado localmente, para que a AID possa atuar, e isso parece ocorrer como resultado da transcrio de sequncias vizinhas. Por analogia com outras citidinas desaminases, acredita-se que a AID inicie um ataque nucleoflico no anel de pirimidina da citidina exposta (Figura 4.22). Enzimas de reparo de DNA nicas adicionais cooperam com a AID para alterar ainda mais a sequncia de DNA de fita simples (Figura 4.23). O resduo de uracilo produzido pela AID pode ser o substrato para a enzima de reparo por exciso de base uracil DNA glicosilase (UNG), a qual remove uma base pirimidina para formar um stio sem uma base no DNA. A endonuclease 1 apurnica/apirimidnica (APE1) pode excisar o restante do resduo introduzindo um corte na fita simples de DNA no local do stio original da citosina. A UNG e a APE1 atuam em todas as clulas para reparar eficientemente as frequentes converses citosina para uracila, e os stios sem uma base que ocorrem como resultado de danos espontneos ao DNA. A AID ativa somente em clulas B ativadas e, devido ao aumento substancial da quantidade de danos no DNA que ocorre nos genes de imunoglobulinas, h uma chance muito maior de que este dano seja incorretamente reparado e leve a mutaes. Os trs tipos de alteraes podem levar a tipos bem distintos de mutaes nos genes de imunoglobulinas com a intensidade da mudana inicial no DNA aproximadamente correspondente ao tipo de mutao final (Figura 4.24). Estas mutaes so descritas com mais detalhes nas prximas trs sees. Se o DNA for atingido somente pela AID, somente hipermutaes somticas ocorrero. Stios sem uma base produzidos pela UNG tambm podem originar hipermutao somtica por substituio de nucleotdeos durante a replicao. Acredita-se que cortes na fita simples produzidos pela APE1 sejam um sinal necessrio para iniciar o processo de replicao do molde utilizando-se sequncias homlogas que ocorrem na converso gnica. Finalmente, acredita-se que a alta densidade de cortes na

AID

Zn

O OH HN O

NH2

Regenerao da AID e de uridina

AID

O Zn OH OH HN Uridina O N

Figura 4.22 A citidina desaminase induzida pela ativao (AID) responsvel pela introduo de mutaes na hipermutao somtica, na converso gnica e na troca de classe. A atividade da AID, a qual expressa somente em clula B, requer o acesso cadeia lateral da citidina de uma molcula de DNA de fita simples (primeiro quadro), que normalmente est impedida por uma ponte de hidrognio da dupla fita de DNA. A AID inicia o ataque nucleoflico no anel de citosina (segundo quadro), finalizado pela desaminao da citidina para formar uma uridina (terceiro quadro).

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Figura 4.23 Produo de quebra na fita simples de DNA pela ao sequencial da AID, da uracil-DNA-glicosilase (UNG) e da endonuclease 1 apurnica/apirimidnica (APE1). O DNA de dupla fita (primeiro quadro) torna-se acessvel AID pela transcrio localizada que desenrola a hlice de DNA (segundo quadro). A AID, a qual somente expressa nas clulas B ativadas, atua convertendo resduos

de citidina em uridina (terceiro quadro). A enzima de reparo de DNA, presente em todas as clulas, UNG e APE1 podem ento atuar na primeira uridina para remover o anel uracila, formando um stio sem uma base (quarto quadro) e excisando o resduo de ribose sem base da fita de DNA (quinto quadro), levando formao de uma quebra na fita simples de DNA (sexto quadro).

DNA da regio varivel ou da regio de troca de classe

A transcrio produz fita simples de DNA em alguns locais

fita simples em regies especficas que flanqueiam os genes da regio C produza as quebras na dupla fita necessrias para a troca de classe.

4-18 Os genes da regio V rearranjados so posteriormente diversificados por hipermutao somtica


A hipermutao somtica atua nas clulas B dos rgos linfoides perifricos aps a reunio dos genes de imunoglobulinas funcionais. Ela introduz mutaes de ponto em altas taxas em todo o xon da regio V rearranjada, dando origem a receptores de clulas B mutantes na superfcie das clulas B (Figura 4.25). Em camundongos e seres humanos, a hipermutao somtica ocorre nos centros germinais somente aps as clulas B maduras terem sido ativadas por seu antgeno correspondente e terem recebido os sinais das clulas T ativadas. A hipermutao somtica tem como alvo preferencial as regies V rearranjadas, as quais esto sendo ativamente transcritas nas clulas B, e no ocorrem em loci inativos, porque a AID requer um substrato de fita simples de DNA. Outros genes transcritos expressos nas clulas B como os das regies C no so afetados, ao passo que que os

A AID ataca uma citidina da fita simples de DNA produzindo uma uridina nas clulas B AID
U

A uracil-DNA-glicosilase (UNG) remove uma uracila formando um resduo apirimdico UNG

Figura 4.24 A AID inicia o processo que leva hipermutao somtica, converso gnica e troca de classe. A hipermutao somtica ocorrer por mutaes de transio (C para T ou G para A) quando uma uracila produzida pela ao da AID reconhecida como uma T pela DNA polimerase. Se a UNG produz um stio sem a base, a replicao neste local pode gerar mutaes de transio ou de transverso. A converso gnica parece ser ativada
A AID expressa nas clulas B ativadas dos centros germinais AID

pela presena de quebras na fita simples seguida da replicao do DNA que usa pseudogenes homlogos como molde para o reparo. Se as quebras na fita simples so simultaneamente convertidas a quebras dispersas na fita dupla em duas regies que flanqueiam os genes C (regies de troca), a maquinaria celular de reparo das quebras na fita dupla pode levar religao das regies quebradas, causando uma troca de classe.

A endonuclease apurnica/apirimidnica (APE1) retira a ribose formando uma quebra na fita simples de DNA

APE1

Quebra na fita simples de DNA

Citosina para uridina

Mutao de transio

UNG

Hipermutao somtica

Uridina para sem base

Mutao de transverso

APE1 Replicao do molde Quebras na fita simples Quebras dispersas na fita dupla Recombinao para troca de classe Converso gnica

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Figura 4.25 A hipermutao somtica introduz mutaes nas regies variveis das imunoglobulinas rearranjadas que aprimora a ligao do antgeno. Em algumas circunstncias, possvel seguir o processo de hipermutao somtica pelo sequenciamento das regies variveis das imunoglobulinas em momentos diferentes aps a imunizao. O resultado desses experimentos mostrado nesta figura. Cada regio varivel est representada por uma linha horizontal, nas quais as posies das regies determinantes de complementaridade, CDR1, CDR2 e CD3, esto representadas por regies sombreadas. As mutaes esto representadas por barras coloridas. Poucos dias aps a imunizao, as regies V de um determinado clone de clula B respondedora (quadro superior) comea a adquirir mutaes, e na semana seguinte, mais mutaes so acumuladas, (quadros superiores). Aquelas clulas B cujas regies variveis adquiriram mutaes deletrias e no podem mais ligar o antgeno morrem. As clulas B cujas regies variveis adquiriram mutaes que resultaram na melhora da ligao do antgeno so capazes de competir efetivamente para a ligao ao antgeno e recebem sinais que levam proliferao e expanso. Esse processo de mutao e seleo pode continuar nos centros germinais dos linfonodos por vrios ciclos (no mostrado) durante a resposta imune secundria e terciria (quadro do centro e inferior). Dessa forma, com o tempo, a eficincia de ligao ao antgeno da resposta do anticorpo melhorada.

Regio de cadeia pesada


CDR1 CDR2 CDR3

Regio de cadeia leve


CDR1 CDR2 CDR3

Dia 7 Resposta primria

Dia 14 Resposta secundria

Dia 21 Resposta terciria

Aumento da afinidade

genes VL e VH rearranjados so mutados, mesmo se o rearranjo no for produtivo, e que estejam sendo transcritos, mas no expressos como protenas. Os genes da regio C da imunoglobulina e outros genes expressos nas clulas B no so afetados, ao passo que todos os genes rearranjados da regio V so mutados, mesmo se forem o resultado de rearranjos no-produtivos e no forem expressos. Mutaes que alteram a sequncia de aminocidos nas regies conservadas de pauta de leitura tendem a alterar a estrutura bsica dos anticorpos e, devido a isso, so selecionados contra, porque o processo ocorre nos centros germinais onde os clones de clulas B competem uns com os outros pela interao com o antgeno. Os clones com maior afinidade pelo antgeno so favorecidos para sobreviver. Algumas das molculas de imunoglobulinas mutantes se ligam melhor ao antgeno do que os receptores originais da clula B, e as clulas B que expressam esta imunoglobulina so preferencialmente selecionadas para maturar em clulas secretoras de anticorpos. Isto d origem ao fenmeno de maturao da afinidade da populao de anticorpos, que ser discutida com mais detalhes nos Captulos 9 e 10. O resultado final da seleo para o aumento da ligao ao antgeno que mudanas de base que alteram sequncias de aminocidos e, portanto, a estrutura da protena, tendem a ser agrupadas nas regies CDR, e as mutaes silenciosas que preservam as sequncias de aminocidos e no alteram a estrutura da protena esto dispersas em toda a regio V. O padro de troca de bases nos genes de regies V no-produtivas, por outro lado, ilustra o resultado da hipermutao somtica sem seleo para aumento da ligao ao antgeno e pode revelar melhor o processo bsico. As trocas de bases so distribudas por toda a regio V, mas no completamente ao acaso. H determinados pontos preferenciais (hot spots) que indicam uma preferncia para pequenos motivos caractersticos de quatro ou cinco nucleotdeos e talvez de determinadas caractersticas estruturais secundarias mal-definidas. Como discutido na Seo 4-17, acredita-se que a desaminao da citidina pela enzima AID seja o principal mecanismo bsico da hipermutao somtica. A desaminao da citidina para uracila explica alguns dos desvios conhecidos na hipermutao somtica, como as mutaes do tipo transio de C para T ou de G para A. A mais difcil de explicar como a desaminao dos resduos C pode dar origem a mutaes de pares de base A-T, as quais tambm so comuns na hipermutao somtica. possvel que, quando os mecanismos de reparo so ativados por um pareamento errado U-G, sejam criados cortes no DNA, e que ocorram reparos propensos a erros durante a replicao do DNA, que levam a mutaes nos pares de bases A-T adjacentes. Quando um nico corte criado pela APE1, ocorre uma replicao relaxada similar que pode tambm

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levar a uma mutao por transverso sem molde. A relao entre estes mecanismos de mutaes e o reparo nas quebra da dupla fita de DNA, os quais tambm esto associados s mutaes nas regies V, ainda no so conhecidos. Diferentemente das clulas B, toda a diversidade dos receptores de clulas T produzida durante o rearranjo gnico e a hipermutao somtica das regies V rearranjadas no ocorre nas clulas T. Este meio de variabilidade das regies CDR1 e CDR2 est limitado aos segmentos gnicos V geminais, e a maioria da diversidade est focalizada nas regies do CDR3. Um forte argumento sobre o porqu de as clulas T no sofrerem hipermutao somtica que a hipermutao seria simplesmente uma especializao adaptativa das clulas B para a produo de anticorpos secretados de maior afinidade e que iro desempenhar melhor suas funes efetoras. Considerando que as clulas T no precisam desta capacidade, e devido ao fato de que as mudanas deletrias nas especificidades de ligao do receptor nas clulas T maduras so potencialmente mais prejudiciais para a resposta imune do que as das clulas B, a hipermutao somtica nas clulas T nunca evoluiu. Determinadas questes a respeito da hipermutao somtica ainda no foram resolvidas. Por exemplo, no est claro por que as mutaes somticas tem como alvo os genes de imunoglobulinas, embora se suspeite do envolvimento dos promotores e intensificadores. Entretanto, sequncias especficas nessas regies que tm um gene-alvo para mutao ainda precisam ser definidas. Alm disso, os promotores de imunoglobulinas podem recrutar polimerases de reparo propensas a erro que podem replicar regies danificadas do DNA.

4-19 Em algumas espcies, a maioria da diversificao gnica nas imunoglobulinas ocorre aps o rearranjo gnico
Pssaros, coelhos, vacas, porcos, ovelhas e cavalos possuem pouca ou nenhuma diversidade nos segmentos gnicos V, D e J das linhagens germinais que so rearranjados para formar os genes do receptor de clulas B iniciais, e as sequncias da regio V rearranjadas so idnticas ou similares maioria das sequncias das clulas B imaturas. Essas clulas B, ento, migram para microambientes especializados, dentre eles o mais conhecido a bursa de Fabricius nas aves. Nesse microambiente, as clulas B proliferam rapidamente, e os genes das imunoglobulinas rearranjados sofrem diversificao adicional. Em pssaros e coelhos, isso ocorre principalmente por converso gnica, processo pelo qual pequenas sequncias do gene da regio V rearranjado e expresso so substitudas por sequncias de um segmento gnico V de um pseudogene localizado sua esquerda (Figura 4.26). Parece que a converso gnica est relacionada hipermutao somtica em seu mecanismo, pois a converso gnica em linhagens de clulas B de galinha requer a AID. Acredita-se que os cortes nas fitas simples de DNA produzidos pela APE1 aps a desaminao da citosina seja um sinal que inicia o processo de reparo dirigido por homologia nos quais segmentos gnicos V homlogos so usados como molde para a replicao do DNA que repara os genes da regio V. Em ovelhas e vacas, a diversificao o resultado de hipermutao somtica, a qual ocorre em um rgo conhecido como placas de Peyer ilacas. A hipermutao somtica, independentemente das clulas T e de um determinado antgeno, tambm contribui para diversificao das imunoglobulinas nos pssaros, nas ovelhas e nos coelhos.

4-20 A troca de classe permite que o mesmo xon VH se associe a diferentes genes CH durante a resposta imune
Os xons da regio VH expressos por uma clula B qualquer so determinados durante sua diferenciao inicial na medula ssea e, embora possam ser subsequentemente modificados por hipermutao somtica, no ocorre mais nenhu-

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Figura 4.26 A diversificao das imunoglobulinas de galinha ocorre por meio de converso gnica. Em galinhas, a diversidade de imunoglobulinas que pode ser criada pela recombinao V(D)J muito limitada. Inicialmente, h somente um segmento gnico V, um segmento gnico J e 15 segmentos gnicos D ativados para os genes de cadeia pesada, e um segmento gnico V e um J ativado no lcus de cadeia leve (quadro superior esquerda). O rearranjo gnico pode produzir somente um nmero limitado de especificidade de receptor (segundo quadro). Clulas B imaturas expressando esse receptor migram para a bursa de Fabricius, onde a ligao cruzada da imunoglobulina de superfcie (sIg) induz a proliferao celular (segundo quadro). Os eventos de converso gnica introduzem sequncias de segmentos gnicos V de pseudogenes adjacentes no gene expresso, criando diversidade nos receptores (terceiro quadro). Algumas dessas converses gnicas iro inativar o gene previamente expresso (no mostrado). Se uma clula B no pode mais expressar a sIg aps tal converso gnica, ela eliminada. Eventos repetidos de converso gnica podem diversificar ainda mais o repertrio (quadros inferiores).

Linhagem germinal dos genes de imunoglobulina de galinha


Pseudogenes VH

Clula B progenitora de galinha

VH

D J

C
RAG-1 RAG-2

Pseudogenes V

Clulas B imaturas de galinha Todas rearranjaram os mesmos genes VH e V

Todas as clulas B imaturas na bursa expressam o mesmo receptor. A expresso da sIg induz proliferao

VDJ

VJ

Sequncias de pseudogenes V so introduzidas nos genes V rearranjados por converso gnica

A converso gnica cria um receptor de especificidade varivel. As clulas B que no expressam a sIg morrem

VDJ

VJ

Mltiplos ciclos de converso gnica podem alterar a afinidade do anticorpo pelo antgeno

Repertrio diverso de especificidades antignicas das clulas B

VDJ

VJ

ma recombinao no segmento gnico V(D)J. Toda a prognie dessa clula B ir, portanto, expressar os mesmos genes VH. Por outro lado, vrios isotipos da regio C diferentes podem ser expressos pela prognie das clulas B durante maturao e proliferao no curso de uma resposta imune. Os primeiros receptores de antgenos expressos pelas clulas B so IgM e IgD, e o primeiro anticorpo produzido durante a resposta imune sempre IgM. Mais tarde, na resposta imune, entretanto, a mesma regio V unida pode ser expressa em anticorpos IgG, IgA ou IgE. Essa troca conhecida como troca de classe (ou troca de isotipo) e, diferentemente da expresso de IgD, envolve uma recombinao irreversvel do DNA. Isso estimulado durante uma resposta imune por sinais externos, como citocinas liberadas por clulas T ou sinais mitognicos liberados por patgenos, como ser discutido em detalhes no Captulo 9. Aqui estamos preocupados com a base molecular da mudana de isotipo. A troca de IgM para outra classe de imunoglobulina ocorre somente aps as clulas B terem sido estimuladas pelo antgeno. Isso se d por meio de um mecanismo de recombinao com troca de classe no qual um tipo de recombinao de DNA

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no-homlogo guiado por fragmentos de DNA repetitivo conhecidos como regies de troca. As regies de troca localizam-se em um ntron entre os segmentos gnicos JH e o gene C e em stios equivalentes antes dos genes C que codificam cada um dos outros isotipos de cadeia pesada, com exceo do gene (Figura 4.27, primeiro quadro). Quando uma clula B troca a coexpresso de IgM e IgD para expressar um outro subtipo, ocorre recombinao do DNA entre S e a regio S imediatamente anterior ao gene desse isotipo. Em tal evento de recombinao, a regio C e todo o DNA interveniente deletado entre ela e a regio S que sofreu o rearranjo. A Figura 4.27 ilustra a troca de C para C em camundongos. Todo o

VDJ

C S

C3 S3

C1 S1

C2b S2b

C2a S2a S

C S

A transcrio na regio de troca iniciada pela ativao do promotor anterior ao gene C C C

AID, UNG e APE1 introduzem grupos de quebra nas duas fitas de DNA
APE1 UNG
C C

AID
C C C C C C C C C C

mRNA

mRNA

A DNA-PK e outras protenas de reparo atuam para iniciar o reparo das quebras na fita dupla (DSBR)
Protenas de reparo

DNA-PK

A maquinaria DSBR liga as duas regies de troca e elimina a sequncia interveniente C3 S3 C C Maquinaria DSBR S VDJ S S C S C

A regio constante selecionada agora est localizada ao lado da regio VDJ VDJ S/S C S C

Figura 4.27 A troca de classe envolve recombinao entre sinais de troca especficos. A troca entre isotipos e no lcus da cadeia pesada de camundongo est ilustrada nesta figura. Sequncias repetidas de DNA, regies de troca (S), que orientam a troca de classe so localizadas antes de cada gene de regio C de imunoglobulina, com a exceo do gene . A troca guiada pelo incio da transcrio por essas trs regies de promotores (setas) localizados antes de cada S. Devido natureza das sequncias repetidas, a transcrio da regio S produz alas R (regies estendidas de DNA de fita simples formadas pela fita nomolde), que atuam como substrato para a AID e, subsequentemente, para a UNG e a APE1. Estas atividades introduzem uma alta densidade de quebras na fita simples na fita de DNA no-molde, bem como presumivelmente um menor nmero de quebras na fita molde. As quebras dispersas so convertidas em quebra na fita dupla por um mecanismo ainda no compreendido. Essas quebras so, possivelmente, reconhecidas pela maquinaria celular de reparo da fita dupla, que envolve a participao das DNA-PKcs e outras protenas de reparo. As duas regies de troca, neste caso S e S, so aproximadas por esta maquinaria, e a troca de classe finalizada pela exciso do DNA interveniente (incluindo C e C) e pela ligao das regies S e S.

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evento de recombinao produz genes que podem codificar uma protena funcional j que a mudana na sequncia se localiza em ntrons e, portanto, no pode causar mutaes de troca de pauta de leitura. Como observado na Seo 4-17, a AID pode atuar somente em DNA de fita simples. Sabe-se que a transcrio de regies de troca necessria para uma troca de classe eficiente, e essa transcrio necessria para abrir o DNA e permitir o acesso da AID aos resduos de citidina nas regies de troca. As sequncias nas regies de troca possuem caractersticas que promovem o acesso da AID a um DNA desenrolado quando este est sendo transcrito. Primeiro, a fita no-molde rica em G. A regio de troca S consiste em aproximadamente 150 repeties da sequncia (GAGCT)n(GGGGGT), onde n , em geral, trs, mas pode ser at sete. As sequncias de outras regies de troca (S, S e S) diferem em detalhes, mas todas contm repeties das sequncias GAGCT e GGGGGT. Acredita-se que as estruturas semelhantes a bolhas dos produtos da transcrio, denominadas alas R, so formadas quando o RNA transcrito desloca a fita no-molde da dupla fita de DNA (ver Figura 4.27). Foi sugerido que o hbrido DNA-RNA formado durante a transcrio das regies de troca favorece a formao das alas R, embora haja outras estruturas tericas que a fita molde pode adotar para promover a troca. Seja qual for o caso, parece que a fita no-molde deslocada e adota uma configurao que torna a regio um bom substrato para a AID, a qual inicia a formao de quebras na fita simples nos locais dos resduos C. Alm disso, determinadas sequncias, como AGCT, podem ser substratos particularmente adequados para a AID, e por serem palindrmicos, podem permitir a ao da AID nos resduos de citidina das duas fitas ao mesmo tempo, introduzindo mltiplas quebras nas duas fitas que, eventualmente, leva quebra na dupla fita. Seja qual for o mecanismo preciso, acredita-se que a transcrio nas regies de troca parece induzir a gerao de quebras nesta dupla fita nestas regies. Mecanismos celulares para o reparo da quebra na dupla fita podem, ento, levar recombinao no-homloga entre as regies de troca que resultam na troca de classe, com a aproximao das extremidades a serem ligadas pelo alinhamento das sequncias repetitivas comuns para as diferentes regies de troca. A religao das extremidades do DNA leva exciso de todo o DNA entre as duas regies de troca e a formao de uma regio quimrica na juno. A completa ausncia da AID bloqueia a troca de classe. A deficincia nessa enzima em humanos tem sido associada a uma forma de imunodeficincia conhecida como sndrome de Hiper IgM do tipo 2, a qual caracterizada pela ausncia de imunoglobulinas, com exceo do isotipo IgM, como discutido no Captulo 12. A deficincia da UNG tanto no homem quanto em camundongos tambm prejudica severamente a troca de classe, que fica evidenciada pelas aes sequenciais da AID e UNG descrito na Seo 4-17. O envolvimento do reparo na quebra da dupla fita demonstrado pelo fato de que a troca marcantemente reduzida em camundongos que no possuem a protena Ku. Essa protena tambm essencial para a juno do DNA durante a unio V(D)J (ver Seo 4-5). Os experimentos para demonstrar o envolvimento da troca de classe foram realizados em camundongos com transgenes de cadeia leve e pesada rearranjadas. Deficincias em outras protenas de reparo do DNA, como as DNA-PKcs, tambm impedem a troca de classe, mais provavelmente devido ao fato de serem necessrias para o pareamento do DNA no processo de ligao das extremidades. Embora ambas envolvam tanto o rearranjo de DNA quanto parte da mesma maquinaria enzimtica, a recombinao por troca de classe diferente da recombinao V(D)J em vrios aspectos. Primeiro, toda recombinao por troca de classe produtiva; segundo, ela usa sequncias sinalizadoras de recombinao e no necessita da enzima RAG; terceiro, ela ocorre aps o estmulo antignico e no durante o desenvolvimento da clula B na medula ssea; e quarto, o processo de troca no ocorre ao acaso, mas regulado por sinais externos, como aqueles emitidos pelas clulas T, como ser descrito no Captulo 9.

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Resumo
Os genes de imunoglobulinas rearranjados pela recombinao V(D)J podem ser ainda mais diversificados pela hipermutao somtica, pela converso gnica e pela troca de classe, ocorrendo todos com base nos processos de recombinao e de reparo do DNA iniciado pela citidina desaminase induzida pela ativao (AID). Diferentemente da recombinao V(D)J, esta diversificao secundria ocorre somente nas clulas B, e no caso da hipermutao somtica e troca de classe, apenas nas clulas B aps ativao pelo antgeno. A hipermutao somtica diversifica a regio V pela introduo de mutaes de ponto. Quando isso resulta em um aumento da afinidade para o antgeno, a clula B ativada produzindo a imunoglobulina mutada selecionada para sobreviver, resultando no aumento da afinidade dos anticorpos pelos antgenos com o decorrer da resposta imune. A troca de classe no afeta a regio V, mas aumenta a diversidade funcional das imunoglobulinas substituindo a regio C do primeiro gene expresso de imunoglobulina por outra regio C de cadeia pesada para produzir anticorpos IgG, IgA ou IgE. A troca de classe fornece ao anticorpo a mesma especificidade antignica, mas diferente capacidade efetora. A converso gnica o principal mecanismo usado para proporcionar um repertrio diverso de imunoglobulinas em animais nos quais apenas uma limitada diversidade pode ser gerada pela recombinao V(D)J dos genes da linhagem germinal. Esta envolve a substituio de segmentos da regio V rearranjada por sequncias derivadas de pseudogenes.

Resumo do Captulo 4
A diversidade dos receptores de linfcitos extraordinariamente grande, e as clulas B e T em desenvolvimento utilizam os mesmos mecanismos bsicos para obter essa diversidade. Em cada clula, os genes funcionais das cadeias de imunoglobulinas e dos receptores de clulas T so montados por meio da recombinao somtica de grupos de segmentos gnicos separados e que juntos codificaro a regio V. Os substratos para esse processo de juno so arranjos de segmentos gnicos V, D e J, os quais so similares entre todos os loci gnicos dos receptores de antgeno, embora existam algumas diferenas importantes nos detalhes de seus rearranjos. As protenas linfoide-especficas RAG-1 e RAG-2 dirigem o processo de recombinao V(D)J tanto em clulas B quanto em clulas T. Essas protenas atuam em conjunto com outras enzimas modificadoras de DNA presentes em todas as clulas e, no mnimo, com uma outra enzima linfoide-especfica, a TdT, para completar o rearranjo gnico. Como cada tipo de segmento gnico est presente em mltiplas verses levemente diferentes, a seleo ao acaso dos segmentos gnicos de cada grupo para a montagem a fonte da tremenda diversidade. Durante o processo de montagem, uma importante diversidade funcional introduzida nas junes dos segmentos gnicos por meio de mecanismos imprecisos de unio. Essa diversidade est concentrada na regio do DNA que codifica as alas CDR3 do receptor, a qual est localizada no centro do stio de ligao do antgeno. A associao independente de duas cadeias de imunoglobulinas ou de receptores de clulas T para formar um receptor de antgeno completo multiplica a diversidade global disponvel. Alm disso, as clulas B maduras que so ativadas pelo contato com o antgeno iniciam um processo de mutao somtica de ponto no DNA da regio V, originando uma srie de variantes da regio V inicialmente reunidas. Uma diferena importante entre as imunoglobulinas e os receptores de clulas T que as imunoglobulinas existem na forma secretada (anticorpos) e a na forma ligada membrana (receptores de clulas B). A habilidade de expressar ambas as formas de uma mesma molcula devida ao processamento diferencial do mRNA de cadeia pesada, incluindo xons que codificam diferentes formas da regio carboxiterminal. As regies C da cadeia pesada so formadas por trs ou quatro domnios de imunoglobulina, e as cadeias do receptor de clulas T possuem somente um. Finalmente, as clulas B so capazes de aumentar a

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Figura 4.28 Mudanas nos genes das imunoglobulinas e dos receptores de clulas T, que ocorrem durante o desenvolvimento e a diferenciao das clulas B e T. Aquelas mudanas que estabelecem a diversidade imunolgica so todas irreversveis porque envolvem mudanas no DNA das clulas B ou T. Certas mudanas na organizao do DNA, ou na sua transcrio, so nicas das clulas B. A hipermutao somtica ainda no foi detectada em receptores funcionais de clulas T. Os processos especficos de clulas B, tais como a recombinao para a mudana de classe, permitem que a mesma regio varivel se ligue a distintas regies C de cadeia pesada, criando uma diversidade funcional irreversvel. Por outro lado, a expresso de IgM versus IgD e das formas secretadas versus de membrana de todos os tipos de imunoglobulinas pode, a princpio, ser reversivelmente regulada.

Processos ocorrem em: Evento Ligao da regio V Diversidade juncional Ativao transcricional Recombinao de troca Hipermutao somtica Expresso de IgM e IgD na superfcie Formas de membrana versus secretada Processo Recombinao somtica do DNA Juno imprecisa, insero da sequncia N no DNA Ativao do promotor pela proximidade do ativador Recombinao somtica do DNA Mutao de ponto no DNA Processamento diferencial do RNA Processamento diferencial do RNA Natureza da mudana Irreversvel Irreversvel Irreversvel, mas regulada Irreversvel Irreversvel Irreversvel, mas regulada Irreversvel, mas regulada Clulas B Sim Sim Sim Sim Sim Sim Sim Clulas T Sim Sim Sim No No No No

diversidade das imunoglobulinas por trs mecanismos que envolvem a mutao somtica do repertrio primrio dependente da AID: hipermutao somtica, converso gnica e troca de classe. A hipermutao somtica e a converso gnica aumentam a diversidade por alterar as regies V dos genes de imunoglobulinas. Os anticorpos tambem possuem vrias funes efetoras que so mediadas por suas regies C. A troca de classe permite o uso de vrias regies C de cadeia pesada da mesma regio V, produzindo anticorpos com a mesma especificidade, mas diferentes funes efetoras. Dessa forma, a prognie de uma nica clula B pode expressar diferentes classes de anticorpos, maximizando as possveis funes efetoras de um determinado anticorpo antgeno-especfico. As mudanas nos genes de imunoglobulinas dos receptores de clulas T que ocorrem durante o desenvolvimento das clulas B e T esto resumidos na Figura 4.28.

Teste seu conhecimento


4.1 (a) Quais so os dois tipos de rearranjos somticos do DNA que ocorrem no lcus gnico das imunoglobulinas? (b) Compare e diferencie o mecanismo que produz esses tipos de rearranjos. (c) Quais desses tipos de rearranjos tambm ocorrem nos loci que codificam os receptores de clulas T? (d) Quais seriam as consequncias da atividade da AID nas clulas T? (a) Quais so os genes cruciais linfcito-especficos envolvidos na recombinao V(D)J? (b) Quais so suas principais atividades enzimticas? (c) Quais dessas atividades so preferencialmente usadas na formao dos genes de cadeia pesada rearranjados em comparao aos genes de cadeia leve? (d) Qual, se existe alguma, dessas atividades usada somente no processamento das junes codificadoras? E nas junes de sinais? (e) Como isso explica a ligao de sinal precisa comparada com as junes codificadoras imprecisas? O processo completo de recombinao V(D)J usa atividades enzimticas tecido-especficas (clulas B e T) e tecido no-especficas (expressas em todas as clulas). (a) Discuta

4.2

4.3

Imunobiologia de Janeway

177

duas atividades enzimticas no-especficas necessrias finalizao da unio V(D)J. (b) Por que essas atividades no resultam em rearranjos de DNA V(D)J inadequados em outros tecidos? 4.4 (A) Discuta os quatro processos principais de gerao de diversidade do repertrio de linfcitos. (b) Quais destes processos no so compartilhados por clulas T e B? (c) Como esta diferena est relacionada aos tipos de rearranjos e DNA que ocorrem nas clulas B e T? (d) Que outros processos ocorrem nas clulas B que no ocorrem nas clulas T e por qu? Quais so as funes fisiolgicas de troca de classe dos genes de anticorpos? (b) Como esta troca de classe regulada pelo ambiente ou por interaes com patgenos?

4.5

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Imunobiologia de Janeway

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Apresentao de Antgenos para os Linfcitos T

Na resposta imune adaptativa, o antgeno reconhecido por dois grupos distintos de receptores moleculares altamente variveis as imunoglobulinas, que servem como receptores de antgeno nas clulas B, e os receptores antgeno-especficos das clulas T. Conforme vimos no Captulo 3, as clulas T somente reconhecem antgenos que so apresentados nas superfcies celulares. Esses antgenos podem derivar de microrganismos que se replicam no interior das clulas, como vrus ou bactrias intracelulares, ou patgenos e seus produtos que foram internalizados por endocitose a partir do fluido extracelular. As clulas infectadas expem em suas superfcies fragmentos peptdicos oriundos das protenas dos patgenos, podendo, assim, ser detectadas por clulas T. Esses peptdeos estranhos so colocados na superfcie da clula por intermdio de glicoprotenas celulares especializadas as molculas do MHC tambm descritas no Captulo 3. As molculas do MHC so codificadas em um grande grupo de genes, primeiramente identificados por seus fortes efeitos na resposta imune contra tecidos transplantados. Por esse motivo, o complexo gnico foi chamado de complexo de histocompatibilidade principal (MHC). Discutiremos, primeiramente, os mecanismos por meio dos quais os antgenos proteicos so degradados em peptdeos no interior das clulas, e estes so carregados para a superfcie, estavelmente ligados s molculas do MHC. Veremos que h duas classes diferentes de molculas do MHC, conhecidas como MHC de classe I e de classe II, sendo que cada uma obtm peptdeos de compartimentos celulares diferentes. Peptdeos do citosol so ligados s molculas do MHC de classe I e reconhecidos por clulas T CD8, e peptdeos gerados em vesculas intracelulares so ligados s molculas do MHC de classe II e reconhecidos por clulas T CD4. Os dois subgrupos funcionais de linfcitos T so assim ativados para iniciar a destruio dos patgenos residentes nesses dois compartimentos celulares. Algumas clulas CD4 podem ativar clulas B virgens que tenham internalizado antgenos especficos e, portanto, estimulam a produo de anticorpos contra patgenos extracelulares e seus produtos. A segunda parte deste captulo focaliza os genes de MHC I e II e sua notvel variabilidade gentica. Existem vrias molculas diferentes de MHC em cada classe e cada um dos seus genes altamente polimrfico, com muitas variantes na populao. O polimorfismo desse complexo tem um impacto profundo sobre o reconhecimento do antgeno pelas clulas T, e a combinao de mltiplos genes e de seu polimorfismo aumenta grandemente a gama de peptdeos que podem ser apresentados s clulas T por indivduo e por uma populao em risco de infeco por um patgeno. Veremos ainda que o MHC contm outros genes que no aqueles que codificam as molculas do MHC, e que o produto de muitos desses genes est envolvido na gerao de complexos MHC:peptdeo. Consideraremos tambm um grupo de protenas codificadas tanto dentro como fora do MHC, similares s molculas do MHC de classe I, mas que possuem polimorfismo limitado. Elas possuem uma variedade de funes, uma das quais a apresentao de antgenos lipdicos microbianos para clulas T e clulas NK.

182

Kenneth Murphy, Paul Travers & Mark Walport

A produo dos ligantes dos receptores de clulas T


A funo protetora das clulas T depende de sua habilidade em reconhecer clulas que contm agentes patognicos ou que internalizaram tais microrganismos ou seus produtos. Os linfcitos T fazem isso mediante o reconhecimento de fragmentos peptdicos de protenas patognicas, ligadas s molculas do MHC na superfcie dessas clulas. A produo de peptdeos de um antgeno intacto envolve a modificao da protena nativa e comumente chamada de processamento do antgeno. A exposio do peptdeo na superfcie celular pelas molculas do MHC denominada apresentao do antgeno. J descrevemos a estrutura das molculas do MHC e vimos como elas ligam os antgenos peptdicos em uma fenda na sua superfcie externa (ver Sees 3-13 a 3-16). Neste captulo, veremos como os peptdeos so gerados, a partir de patgenos presentes no citosol ou nos compartimentos vesiculares das clulas, e carregados nas molculas do MHC de classes I e II, respectivamente.

5-1 As molculas do MHC de classe I e de classe II carregam peptdeos para a superfcie celular a partir de dois compartimentos intracelulares distintos
Os agentes infecciosos podem replicar-se em qualquer um dos dois compartimentos distintos dentro das clulas (Figura 5.1). Vrus e algumas bactrias se multiplicam no citosol ou nos espaos contguos ao ncleo (Figura 5.2, primeiro quadro), ao passo que muitas bactrias patognicas e alguns parasitas eucariticos se replicam nos endossomas e lisossomas que fazem parte do sistema vesicular das clulas (Figura 5.2, terceiro quadro). Antgenos exgenos derivados de patgenos extracelulares ou outras clulas infectadas por patgenos tambm podem entrar no citosol de clulas apresentadoras de antgeno especializadas (Figura 5.2, segundo), como descreveremos mais adiante. O sistema imune dispe de diferentes estratgias para eliminar patgenos do citosol ou sistema endossomal. As clulas infectadas por vrus ou bactrias citoslicas so eliminadas por clulas T citotxicas; essas clulas T so caracterizadas pelo correceptor CD8 (ver Seo 3-17). A funo das clulas T CD8 matar as clulas infectadas, o que representa um importante meio de eliminao das fontes de novas partculas virais ou bactrias citoplasmticas, libertando o hospedeiro da infeco. Os patgenos e seus produtos so detectados nos compartimentos vesiculares das clulas por uma classe diferente de clulas T, caracterizada pela molcula correceptora CD4 (ver Seo 3-17). As clulas T CD4 possuem vrias atividades distintas, que so apresentadas pelas diferentes subpopulaes efetoras CD4. A primeira subpopulao a ser identificada foi a das clulas TH1, que ativam os macrfagos para a eliminao dos patgenos intravesiculares e tambm fornecem ajuda s clulas B para produo de anticorpos, e as clulas TH2, que atuam na resposta a parasitas e auxiliam na produo de anticorpos. Uma subpopulao recentemente isolada de clulas T CD4 chamada TH17 nomeada por produzir a citocina pr-inflamatria, a interleucina 17. Em algumas situaes, as clulas CD4 possuem atividade citotxica como a das clulas T CD8. Por exemplo, clulas T CD4 humanas especficas para o vrus Epstein-Barr (EBV) podem matar clulas B infectadas com o vrus. Outras subpopulaes incluem pelo menos dois tipos de clulas reguladoras T CD4. Uma derivada durante o desenvolvimento tmico, e as outras so geradas na periferia, durante uma resposta imune. Antgenos microbianos podem chegar ao compartimento vesicular por dois caminhos. Algumas bactrias, incluindo as micobactrias que causam a tuberculose e a lepra, invadem os macrfagos e se multiplicam em vesculas intracelulares. Outras bactrias proliferam fora das clulas, onde causam patologia por meio da secreo de toxinas e outras protenas. Essas bactrias e seus produtos txicos

Vescula secretora

Citosol

Ncleo

Endossoma Lisossoma Complexo de Golgi

Retculo endoplasmtico

Figura 5.1 Existem dois principais compartimentos intracelulares separados por membranas. O primeiro o citosol, que tambm se comunica com o ncleo atravs dos poros nucleares na membrana nuclear. O segundo o sistema vesicular, que compreende o retculo endoplasmtico, o complexo de Golgi, os endossomas, os lisossomas e outras vesculas intracelulares. O sistema vesicular pode ser visto como em continuidade com o fluido extracelular. As vesculas secretoras brotam do retculo endoplasmtico e transportam, via fuso com as membranas do Golgi, seus contedos para fora da clula, enquanto o material extracelular incorporado por endocitose para dentro dos endossomas.

Imunobiologia de Janeway

183

Patgenos citoslicos

Apresentao cruzada de antgenos exgenos

Patgenos intravesiculares

Patgenos e toxinas extracelulares

Qualquer clula

Macrfago

Clula B

Degradado no Peptdeos ligam-se a Apresentado a

Citosol MHC de classe I Clulas T CD8 efetoras

Citosol (por retrotranslocuo) MHC de classe I Clulas T CD8 virgens A clula apresentadora, normalmente uma clula dendrtica, ativa a clula T CD8

Vesculas endocticas (baixo pH) MHC de classe II Clulas T CD4 efetoras Ativao para destruir bactrias e parasitas intravesiculares

Vesculas endocticas (baixo pH) MHC de classe II Clulas T CD4 efetoras Ativao de clulas B para a secreo de Ig para eliminao de bactrias e toxinas extracelulares

Efeito sobre a clula apresentadora

Morte celular

podem ser internalizados por fagocitose, endocitose ou macropinocitose para dentro de vesculas intracelulares que, ento, apresentam antgeno para as clulas T. Estas incluem as clulas dendrticas especializadas em iniciar as respostas de clulas T (ver Seo 1-7), os macrfagos especializados em absorver material particulado (ver Seo 2-4) e as clulas B, que internalizam eficientemente o antgeno especfico pela endocitose mediada pelo receptor do antgeno ligado sua imunoglobulina de superfcie (Figura 5.2, quarto quadro). As molculas do MHC de classe I apresentam peptdeos originados no citosol para a superfcie celular, onde so reconhecidos pelas clulas T CD8, ao passo que as molculas do MHC de classe II apresentam os peptdeos provenientes do sistema vesicular para a superfcie celular, onde so reconhecidos pelas clulas T CD4. Como vimos na Seo 3-17, a especificidade dessa reao deve-se ao fato de que as molculas CD8 e CD4 ligam molculas do MHC de classe I e de classe II, respectivamente. As diferentes atividades das clulas T CD4 e CD8 podem ser basicamente vistas como adaptadas para lidar com patgenos encontrados em diferentes compartimentos celulares, mas, como veremos, existe uma comunicao significativa entre esses dois caminhos.

5-2 Os peptdeos que se ligam s molculas do MHC de classe I so transportados ativamente do citosol para o retculo endoplasmtico
As cadeias polipeptdicas de protenas destinadas superfcie celular, incluindo as cadeias de molculas do MHC, so translocadas durante a sntese para o lmen do retculo endoplasmtico. Ali, as duas cadeias de cada molcula do MHC dobram-se corretamente e liam-se uma outra. Isso significa que o stio de ligao do peptdeo da molcula do MHC de classe I formado no lmen do retculo endoplasmtico e nunca exposto ao citosol. Os fragmentos antignicos que se ligam s molculas de classe I, contudo, so derivados tipicamente de protenas virais degradadas no citosol. Isso levantou a questo: como os peptdeos derivados de protenas virais no citosol so capazes de se ligar s molculas do MHC de classe I para sua apresentao na superfcie celular? A resposta que os peptdeos so transportados do citosol para o retculo endoplasmtico. As primeiras pistas para esse mecanismo de transporte provem de clulas mutantes, portadoras de um defeito na apresentao dos antgenos pelas

Figura 5.2 Os patgenos e seus produtos podem ser encontrados no compartimento citoslico ou no compartimento vesicular das clulas. Primeiro quadro: todos os vrus e algumas bactrias se replicam no compartimento citoslico. Seus antgenos so apresentados por molculas do MHC de classe I s clulas T CD8. Segundo quadro: antgenos exgenos de uma clula moribunda infectada por um vrus que fagocitada por uma clula dendrtica podem ser retrotransportados para o citosol, onde podem ser degradados e colocados em molculas do MHC classe I. Essa apresentao cruzada importante para capacitar as clulas dendrticas a ativarem clulas virgens T CD8 especficas para vrus que no infectam as prprias clulas dendrticas. Terceiro quadro: outras bactrias e alguns parasitas so capturados para dentro dos endossomas, normalmente por clulas fagocticas especializadas, como os macrfagos. Ali, eles so mortos e degradados, ou, em alguns casos, sobrevivem e proliferam dentro das vesculas. Seus antgenos so apresentados por molculas do MHC de classe II para clulas T CD4. Quarto quadro: protenas derivadas de patgenos extracelulares podem entrar no sistema vesicular das clulas ao se ligarem a receptores de superfcie e, a seguir, serem endocitadas. Isso est ilustrado por protenas que se ligaram imunoglobulina de superfcie da clula B (o retculo endoplasmtico e o complexo de Golgi foram omitidos para simplificao). As clulas B apresentam esses antgenos s clulas T CD4, que podem, ento, estimular as clulas B a produzirem anticorpos. Outros tipos de clulas que possuem receptores para as pores Fc das molculas de anticorpo podem tambm internalizar antgenos dessa forma e so capazes de ativar as clulas T.

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molculas do MHC de classe I. Embora as duas cadeias das molculas do MHC de classe I sejam normalmente sintetizadas nessas clulas, existem muito menos protenas do MHC de classe I do que o normal na superficie celular. Esse defeito pode ser corrigido pela adio de peptdeos sintticos ao meio de cultura das clulas, sugerindo que a mutao afeta o suprimento de peptdeos para as molculas do MHC de classe I. Essa mutao tambm significa que o peptdeo necessrio ao aparecimento e manuteno das molculas do MHC classe I na superfcie celular, e foi a primeira indicao de que as molculas do MHC so instveis na ausncia do peptdeo ligado. A anlise do DNA das clulas mutantes mostrou que dois genes codificadores dos membros da famlia de protenas do cassete de ligao de ATP, ou ABC, eram mutantes ou ausentes nessas clulas. As protenas ABC fazem o transporte de ons, acares, aminocidos ou peptdeos atravs da membrana de vrios tipos celulares, incluindo as bactrias. As duas protenas ABC ausentes nas clulas mutantes esto normalmente associadas membrana do retculo endoplasmtico. A transfeco das clulas mutantes com ambos os genes restaura a capacidade de apresentao de peptdeos das molculas do MHC de classe I. Essas protenas so atualmente chamadas de transportadores associados com processamento do antgeno 1 e 2 (TAP-1 e TAP-2). Essas duas molculas TAP formam um heterodmero (Figura 5.3), e mutaes em qualquer um dos genes TAP impedem a apresentao de antgenos pelas molculas do MHC de classe I. A infeco viral da clula aumenta a chegada de peptdeos citoslicos no retculo endoplasmtico. Os genes TAP-1 e TAP-2 mapeiam dentro do prprio MHC (ver Seo 5-11) e so induzidos por interferons, os quais so produzidos em resposta infeco viral. Em testes in vitro, usando fraes de clulas normais, as vesculas microssmicas que mimetizam o retculo endoplasmtico internalizam peptdeos, que se ligaro a molculas do MHC de classe I, j presentes no lmen do microssoma. Vesculas provenientes de clulas deficientes de TAP-1 ou TAP-2 no transportam peptdeos. O transporte peptdico para microssomas normais requer a hidrlise do ATP, comprovando que o complexo TAP-1 e TAP-2 um transportador de peptdeos dependente de ATP. Experimentos semelhantes mostram que o complexo TAP possui alguma especificidade para os peptdeos que transportar. Ele prefere peptdeos entre oito e dezesseis aminocidos, portadores de resduos hidrofbicos ou bsicos no terminal carboxila caractersticas exatas dos peptdeos que se ligam a molculas do MHC de classe I (ver Seo 3-14) e tem uma tendncia para resduos prolina nos primeiros trs aminocidos aminoterminais. A descoberta da TAP explicou como os peptdeos virais ganham acesso ao lmen do retculo endoplasmtico e se ligam a molculas do MHC de classe I, mas fica em aberto a questo de como esses peptdeos so gerados.

Diagrama esquemtico da TAP

Lmen RE

TAP1
Membrana do RE

TAP2

Domnio transmembrana hidrofbico Domnio ABC (cassete de ligao ao ATP)

Citosol

Figura 5.3 TAP-1 e TAP-2 formam um transportador de peptdeos na membrana do retculo endoplasmtico. Todas as transportadoras da famlia cassete que se liga ao ATP (ABC-ATP binding cassete) so compostas de quatro domnios, como mostra o quadro superior desta figura. Dois domnios transmembrana hidrofbicos que possuem mltiplas regies transmembrana e dois domnios de ligao ao ATP. TAP-1 e TAP-2, cada uma, codifica uma cadeia polipeptdica com um domnio hidrofbico e um domnio que se liga ao ATP, e as duas cadeias juntam-se para formar um heterodmero formando um transportador de quatro domnios. A partir de similaridades entre as molculas TAP e outros membros da famlia transportadora ABC, acredita-se que domnios de ligao ao ATP ficam dentro do citosol, ao passo que os domnios hidrofbicos se projetam atravs da membrana para dentro do lmen do retculo endoplasmtico (RE), formando um canal atravs do qual os peptdeos podem passar, como mostra, no quadro inferior, uma reconstruo por microscopia eletrnica da estrutura do heterodmero TAP-1:TAP-2. Em a, vemos a superfcie da TAP que fica no lmen do retculo endoplasmtico, e em b, vemos a parte que fica no plano da membrana do RE. Os domnios de ligao ao ATP formam dois lobos abaixo dos domnios transmembrana e no so visveis aqui. (Quadro inferior cortesia de G.Velarde.)

5-3 Os peptdeos para transporte dentro do retculo endoplasmtico so gerados no citosol


As protenas celulares so continuamente degradadas e substitudas por outras protenas recentemente sintetizadas. Grande parte da degradao proteica citoplasmtica realizada por um grande complexo de proteases multicatalticas chamado de proteossoma. Este um grande complexo cilndrico de 28 subunidades, arranjadas em quatro anis empilhados, cada um com sete subunidades. Ele possui um centro vazio circundado pelos stios ativos das subunidades proteolticas. As protenas a serem degradadas so introduzidas no centro do proteossoma e ali degradadas em pequenos peptdeos, que so ento liberados. Diversas linhas de evidncia sugerem o proteossoma na produo de peptdeos ligantes para molculas do MHC de classe I. O proteossoma participa da via de degradao de protenas citoplasmticas dependente de ubiquitina, e, experimentalmente, a marcao de protenas com ubiquitina tambm resulta em uma apresentao mais eficiente de seus peptdeos pelas molculas do MHC de classe

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I. Inibidores da atividade proteoltica do proteossoma tambm inibem a apresentao de antgenos pelas molculas do MHC de classe I. No se sabe se o proteossoma a nica protease citoplasmtica capaz de executar essa tarefa. Duas subunidades de proteossoma, chamadas LMP2 (ou b1i) e LMP7 (ou b5i), so codificadas no MHC, perto dos genes TAP-1 e TAP-2. Da mesma maneira que as molculas do MHC de classe I e TAP, elas so induzidas por interferons, os quais so produzidos em resposta infeco viral. LMP2 e LMP7 substituem as duas subunidades expressas constitutivamente do proteossoma. Uma terceira subunidade, MECL-1 (tambm conhecida como b2i), a qual no codificada no MHC, tambm induzida pelo interferon e tambm desloca uma subunidade proteossmica constitutiva. O proteossoma, portanto, pode existir em duas formas o proteossoma constitutivo, encontrado em todas as celulas, e o imunoproteossoma, encontrado nas celulas estimuladas com interferons. As trs subunidades induzveis do imunoproteossoma e suas contrapartidas constitutivas podem ser as proteases ativas dos proteossomas. A substituio dos componentes constitutivos por suas contrapartidas no imunoproteossoma parece modificar a especificidade do proteossoma, de modo a aumentar a clivagem de polipeptdeos aps os resduos hidrofbicos e reduzir a clivagem aps os resduos cidos. Isso produz peptdeos com resduos carboxiterminais, que so os resduos de ancoramento preferidos para a ligao peptdica pela maioria das molculas do MHC de classe I, sendo tambm as estruturas preferidas para o transporte pelo TAP. A produo de peptdeos antignicos pelo proteossoma aumentada por uma modificao posterior no proteossoma induzida pelo interferon- (IFN-). Isto a ligao do proteossoma a um complexo proteico chamado de complexo ativador do proteossoma PA28. PA28 um anel de seis ou sete membros composto por duas protenas PA28 e PA28, ambas induzidas pelo IFN-. Os anis da PA28

PA28

Cmara cataltica

b
Figura 5.4 O ativador PA28 do proteossoma liga-se a ambas as terminaes do proteossoma. Quadro a: os anis heptamricos do ativador de proteossoma PA28 (em amarelo) interage com as subunidades (rosa) em ambas as terminaes do proteossoma central (as subunidades que formam o domnio cataltico do cerne esto em azul). Dentro desta regio, est o anel- (verde), uma estreita abertura anelar, que est normalmente bloqueada por outras -unidades (mostradas em vermelho). Quadro b: vista de perto do anel-; Quadro c: ligao do PA28 (no mostrado) ao proteossoma muda a conformao das subunidades , movendo as partes da molcula que bloqueiam o anel- e, abrindo, assim, o final do cilindro. (Cortesia de F. Whitby.)

PA28

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podem ligar-se a qualquer das extremidades do cilindro proteossmico e, ao abrir as extremidades, aumentam a taxa de liberao dos peptdeos pelo proteossoma (Figura 5.4). Alm de simplesmente garantir mais peptdeos, o aumento de efluxo permite que peptdeos potencialmente antignicos escapem desse processamento adicional que pode destruir sua antigenicidade. A traduo de mRNAs prprios ou derivados de patgenos no citoplasma no apenas gera protenas apropriadamente dobradas, mas tambm uma quantidade significativa possivelmente at 30% de peptdeos e de protenas conhecidos como produtos ribossomais defeituosos (DRiPs). Estes incluem peptdeos traduzidos de ntrons em mRNAs impropriamente editados, tradues de troca de fase de leitura e protenas dobradas impropriamente. DRiPs so reconhecidos e marcados pela ubiquitina para degradao rpida pelo proteossoma. Esse processo, aparentemente tendendo ao desperdcio, assegura que tanto protenas prprias quanto derivadas de patgenos gerem abundantes peptdeos para entregar ao proteossoma para apresentao por protenas MHC classe I. O proteossoma tambm pode aumentar a variedade de peptdeos atravs de um processo de exciso, no qual um segmento interno de uma protena removido, e os peptdeos no-contguos so reunidos e usados como peptdeo apresentado pelo MHC I. Apesar de no estar claro quo frequentemente esse processo ocorre, h vrios exemplos de clulas T CD8 especficas para tumores que reconhecem peptdeos antignicos formados dessa maneira. O proteossoma produz peptdeos que esto prontos para serem colocados no retculo endoplasmtico. Neste estgio, as chaperonas celulares, como o complexo anel TCP-1 (TRiC), uma chaperona grupo II, protegem esses peptdeos da degradao completa no citoplasma. Muitos desses peptdeos so, contudo, mais longos dos que os que podem ligar-se a molculas do MHC classe I. Assim, a clivagem no proteossoma pode no ser o nico processamento de antgenos de molculas do MHC classe I. Existe boa evidncia de que as extremidades carboxiterminais dos antgenos peptdeos so de fato produzidas nos proteossomas. As extremidades amino podem ser produzidas por outro mecanismo. Os peptdeos longos demais para ligarem-se a molculas do MHC classe I podem ainda ser transportados para o retculo endoplasmtico, onde suas extremidades amino podem ser aparadas por uma aminopeptidase chamada de aminopeptidase associada com processamento antignico no retculo endoplasmtico (ERAAP). Como outros componentes do caminho de apresentao de antgeno, ERAAP tem sua produo aumentada por IFN-. Camundongos deficientes em ERAAP tm dificuldade em colocar peptdeos nas molculas do MHC classe I e tm as respostas T CD8 defeituosas, indicando que ERAAP uma aminopeptidase essencial e nica nesse caminho de processamento antignico.

5-4 O transporte retrgrado do retculo endoplasmtico para o citosol permite que as protenas exgenas sejam processadas para apresentao cruzada por molculas do MHC de classe I
As molculas do MHC de classe I tambm apresentam peptdeos derivados de protenas de membrana e protenas secretadas, por exemplo, as glicoprotenas dos envelopes virais. As protenas secretadas e de membrana so, normalmente, translocadas para o lmen do retculo endoplasmtico durante sua biossntese, e no entanto, os peptdeos ligados por molculas do MHC de classe I sugerem que tais protenas so degradadas no citosol. Carboidratos ligados asparagina, normalmente presentes em protenas ligadas membrana ou secretadas, podem ser removidos do citosol por reaes enzimticas que mudam um resduo de asparagina para cido asprtico, e essa mudana diagnstica na sequncia pode ser observada em alguns peptdeos apresentados por molculas do MHC de classe I. Atualmente, parece que as protenas do retculo endoplasmtico podem retornar ao citosol pelo mesmo sistema de translocao pelo qual elas foram inicialmente transportadas para o retculo pela primeira vez. Esse mecanismo recm-descoberto, conhecido como translocao retrgrada (retrotranslocao), pode ser o

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mecanismo normal pelo qual as protenas do retculo so renovadas, e protenas incorretamente pregueadas no retculo endoplasmtico so removidas e degradadas. Uma vez no citosol, os polipeptdeos so degradados nos proteossomas. Os fragmentos peptdicos resultantes podem, ento, ser transportados de volta ao lmen do retculo via TAP e ligados s molculas do MHC de classe I. Devido a esse mecanismo de retrotranslocao, as molculas do MHC classe I podem tambm apresentar peptdeos derivados de protenas de outras clulas que foram endocitadas para dentro do sistema vesicular a partir do ambiente extracelular. Estas incluem, por exemplo, protenas de clulas infectadas por vrus ou de um tecido transplantado. A apresentao de antgenos exgenos por molculas do MHC classe I para clulas T CD8 chamada de apresentao cruzada (ver Figura 5.2) e foi primeiramente reconhecida em meados dos anos 1970, muito antes do mecanismo ser compreendido. Em um experimento antigo documentando a apresentao cruzada, clulas de bao de um camundongo de um tipo de MHC, H-2b, foram injetadas em um receptor H-2bd (que expressa ambos os tipos de MHC b e d). Os camundongos tambm diferiam nos genes fora do MHC. Supreendentemente, algumas clulas T CD8 responderam aos antgenos estranhos expressos pelas clulas imunizantes, apesar de que se esperaria apenas uma resposta T CD4 a esses antgenos exgenos. Essas respostas foram restritas s molculas do MHC classe I H-2d. Esse resultado foi interpretado como significando que as clulas T CD8 podiam reagir contra peptdeos que eram derivados de clulas imunizantes, mas eram apresentados por uma molcula do MHC classe I do hospedeiro. O reconhecimento da apresentao cruzada precedeu o reconhecimento de que a retrotranslocao estava envolvida. Como as protenas derivadas exogenamente eram colocadas no citosol das clulas do hospedeiro era, no incio, um quebra-cabea. O maquinrio bioqumico preciso envolvido na retrotranslocao o objeto de pesquisas atuais, mas uma vez que as protenas exgenas alcanam o citosol, elas podem ser degradadas pelo proteossoma, e seus peptdeos, transportados de volta no retculo endoplasmtico e colocados de volta em molculas do MHC classe I. A apresentao cruzada ocorre no apenas para antgenos em tecidos ou clulas enxertadas, como no experimento original descrito, mas tambm em resposta a antgenos virais, bacterianos e tumorais. A apresentao cruzada ocorre particularmente bem em uma subpopulao de clulas dendrticas que expressam CD8 na sua superfcie; elas so particularmente eficientes em adquirir antgenos exgenos para dentro do sistema endossomal por fagocitose e transloc-los dali para o citosol para processamento e subsequente apresentao por molculas do MHC classe I. Este caminho importante para ativar clulas T CD8 virgens contra vrus que no infectam clulas apresentadoras de antgeno, como clulas dendrticas.

5-5 Molculas do MHC de classe I recm-sintetizadas so retidas no retculo endoplasmtico at que se liguem a peptdeos
A ligao do peptdeo um passo importante na aquisio de um estado estvel pelas molculas do MHC de classe I. Quando o suprimento de peptdeos para o retculo interrompido, como nas clulas TAP mutantes, molculas do MHC de classe I so mantidas no retculo em um estado parcialmente pregueado. Isso explica por que as clulas mutantes em TAP-1 e TAP-2 falham na expresso de molculas do MHC de classe I em sua superfcie. O dobramento e a montagem de uma molcula completa do MHC de classe I (ver Figura 3.20) depende da associao da cadeia do MHC de classe I com a 2-microglobulina, e depois com o peptdeo. Esse processo envolve inmeras protenas acessrias com funo de chaperonas. Somente quando um peptdeo se liga molcula do MHC de classe I que ela liberada do retculo e pode migrar para a superfcie celular. No homem, as cadeias do MHC de classe I que entram no retculo endoplasmtico se ligam a uma chaperona, chamada calnexina, capaz de reter a molcula do MHC de classe I em um estado parcialmente pregueado no retculo endoplas-

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Figura 5.5 Molculas do MHC de classe I no deixam o retculo endoplasmtico a menos que estejam ligadas a peptdeos. As cadeias do MHC de classe I recm-sintetizadas so organizadas no retculo endoplasmtico com uma protena que se liga membrana, a calnexina. Quando este complexo se liga 2-microglobulina (2m), o dmero cadeia do MHC classe I: 2m dissocia-se da calnexina, e a molcula de classe I parcialmente dobrada, ento, liga-se ao transportador de peptdeos TAP, interagindo com a molcula associada a TAP, a tapasina. As molculas chaperonas, calreticulina e Erp57 tambm se ligam para formar parte desse complexo. A molcula MHC de classe I retida dentro do retculo endoplasmtico at ser liberada pela ligao a um peptdeo, o que completa a organizao da molcula de classe I. Mesmo na ausncia de infeco, existe um fluxo contnuo de peptdeos do citosol para dentro do retculo endoplasmtico. Produtos ribossomais defeituosos (DRiPs) e protenas velhas marcadas para destruio so degradadas no citoplasma pelo proteossoma para gerar peptdeos que so transportados para o lmen do retculo endoplasmtico pela TAP, como mostrado aqui, e alguns ligaro as molculas do MHC classe I. Uma vez que o peptdeo se ligou molcula do MHC, o complexo peptdeo:MHC deixa o retculo endoplasmtico e transportado atravs do complexo de Golgi para a superfcie celular.

mtico (Figura 5.5). A calnexina tambm se associa com receptores de clulas T, com imunoglobulinas e molculas do MHC de classe II parcialmente dobradas, possuindo, assim, um papel central na montagem de muitas molculas imunolgicas. Quando a 2-microglobulina se liga cadeia , o complexo do heterodmero parcialmente pregueado :2-microglobulina se dissocia da calnexina e se liga a um complexo de protenas de chamado complexo de carregamento do MHC de classe I. Um componente desse complexo calreticulina similar calnexina e provavelmente exerce funes de chaperona. Um segundo componente do complexo a tapasina associada protena TAP-1, codificada por um gene dentro do MHC. A tapasina forma uma ponte entre a molcula do MHC de classe I e a TAP, permitindo que o heterodmero parcialmente pregueado da :2-microglobulina espere o transporte do peptdeo adequado do citosol. Um terceiro componente desse complexo a chaperona Erp57 uma tiol-oxirredutase que possui a funo de quebrar e corrigir pontes de dissulfeto no domnio 2 do MHC de classe I durante a ligao com o peptdeo. A calnexina, a Erp57 e a calreticulina se ligam a vrias glicoprotenas durante sua montagem no retculo e talvez faam parte de um mecanismo geral de controle de qualidade celular. O componente final desse complexo a prpria molcula TAP, cujo papel como transportadora tambm o mais compreendido. Os outros componentes parecem ser essenciais, tanto para manter a molcula do MHC de classe I em um estado receptivo para o peptdeo quanto para desempenhar um papel na edio do peptdeo, permitindo a substituio de peptdeos com baixa afinidade ligados molcula do MHC de classe I por peptdeos com alta afinidade. Certamente, clulas deficientes em tapasina ou em calreticulina mostram defeitos na montagem de molculas do MHC de classe I e expressam molculas do MHC de classe I na superfcie de clulas contendo peptdeos de baixa afinidade e em quantidade abaixo do ideal. A ligao de um peptdeo ao heterodmero parcialmente dobrado por fim libera-o do complexo TAP:tapasina:calreticulina:Erp57. A molcula do MHC de classe I completamente dobrada e o peptdeo a ela complexado podem agora deixar o retculo endoplasmtico e ser transportados superfcie celular. No est claro ainda se o

As cadeias do MHC de classe I, parcialmente dobradas, ligam-se calnexina at que a 2-microglobulina se ligue

O complexo MHC de classe I :2m liberado da calnexina, liga-se a um complexo de protenas chaperonas (calreticulina, Erp57) e liga-se TAP via tapasina

As protenas citoslicas e os produtos ribossomais defeituosos (DRiPs) so degradados em fragmentos peptdicos pelo proteossoma TAP leva o peptdeo at o RE

Um peptdeo se liga molcula do MHC de classe I e completa seu dobramento. A molcula do MHC de classe I completamente dobrada liberada do complexo TAP e exportada

Calreticulina

RE
Calnexina

MHC de classe I 2m

Erp57 Tapasina

TAP TAP

Protenas normais (>70%)

Citosol
Fragmentos peptdicos

DRiPs (<30%) Ribossoma

Proteossoma

Ncleo

Protena velha

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complexo exerce um papel no carregamento direto dos peptdeos s molculas do MHC de classe I, ou se a ligao apenas permite que a molcula do MHC de classe I procure os peptdeos transportados pela TAP antes que se difundam pelo lmen do retculo endoplasmtico e sejam levados de volta ao citosol. A maioria dos peptdeos transportados pela TAP no se associaro a molculas do MHC naquela clula e sero rapidamente retirados do retculo endoplasmtico. H evidncias de que eles so transportados de volta para o citosol por um mecanismo de transporte dependente de ATP, diferentemente do transportador TAP, conhecido como o complexo Sec61. Em clulas com genes TAP mutantes, as molculas do MHC de classe I no retculo so instveis e so eventualmente translocadas de volta ao citosol, onde so degradadas. Dessa forma, a molcula do MHC de classe I deve-se ligar no peptdeo para completar o pregueamento e ser transportada a seguir. Em clulas noinfectadas, os peptdeos derivados de protenas prprias se encaixam no sulco de ligao peptdica de molculas maduras do MHC de classe I e so levados para a superfcie celular. Em clulas normais, as molculas do MHC de classe I so retidas no retculo por algum tempo, sugerindo que um excesso de peptdeos est sendo apresentado a elas. Isso muito importante para as molculas do MHC de classe I, porque elas devem estar imediatamente disponveis para o transporte de peptdeos virais para a superfcie celular se a clula for infectada.

5-6 Muitos vrus produzem imunoevasinas que interferem na apresentao de antgeno por molculas do MHC de classe I
A apresentao de peptdeos virais por molculas do MHC de classe I sinaliza para as clulas T CD8 que elas matem as clulas infectadas. Alguns vrus produzem protenas, chamadas imunoevasinas, permitindo ao vrus escapar desse reconhecimento ao impedir o aparecimento de complexos peptdeo:MHC de classe I na superfcie da celula infectada (Figura 5.6). Algumas imunoevasinas virais bloqueiam a entrada de peptdeos no retculo endoplasmtico tendo como alvo a transportadora TAP (Figura 5.7, primeiro quadro). O vrus do herpes simples,

Vrus

Protena

Categoria

Mecanismo

Herpes simples vrus 1 Citomegalovrus humano (HCMV) Vrus herpes bovino

ICP47 Bloqueia entrada do peptdeo ao retculo endoplasmtico

Bloqueia a ligao do peptdeo na TAP

US6

Inibe a atividade ATPsica da TAP

UL49.5

Inibe o transporte de peptdeo pela TAP

Adenovrus

E19 Reteno do MHC de classe I no retculo endoplasmtico

Inibidor competitivo da tapasina

HCMV Citomegalovrus murino (CMV) HCMV Gama herpes vrus 68 murino CMV murino

US3

Bloqueia a funo da tapasina

M152

Desconhecida Transporta algumas molculas de classe I recm-sintetizadas para o citosol Atividade de ligase da E3-ubiquitina Interfere no reconhecimento por linfcitos T citotxicos por um mecanismo desconhecido

US2 Degradao do MHC de classe I (deslocamento)

mK3

m4

Liga-se ao MHC de classe I na superfcie

Figura 5.6 As imunoevasinas produzidas por vrus interferem no processamento do antgeno que se liga s molculas do MHC de classe I.

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Evasinas virais US6 e ICP-47 bloqueiam a apresentao de antgeno, evitando movimentos do peptdeo atravs da transportadora TAP
Calreticulina Erp57 MHC I Tapasina

RE

US6

por exemplo, produz uma protena, ICP47, que se liga superfcie citoslica da TAP e evita que peptdeos entrem pela transportadora. A protena US6 do citomegalovrus humano evita o transporte de peptdeos ao inibir a atividade ATPsica da TAP, e a protena UL49.5 do vrus do herpes bovina inibe o transporte de peptdeos pela TAP. Os vrus podem ainda evitar que complexos MHC:peptdeo cheguem superfcie celular ao reter molculas de MCH classe I no retculo endoplasmtico (Figura 5.7, segundo quadro). A protena E19 do adenovrus interage com certas protenas MHC classe I e contm um motivo que retm o complexo proteico no retculo endoplasmtico. E19 tambm evita a interao TAP-tapasina requerida para a colocao de peptdeos na molcula do MHC classe I. Vrias protenas virais podem catalisar a degradao de molculas do MHC classe I recm-sintetizadas por um processo conhecido como deslocamento, que inicia a rota normalmente utilizada para degradar protenas maldobradas do retculo endoplasmtico, direcionando-as de volta ao citosol. Por exemplo, a protena US11 do citomegalovrus humano liga-se a molculas do MHC classe I nascentes e em conjunto com uma protena ubiquita do retculo endoplasmtico, derlin-1, entrega-os ao citosol, onde so degradadas (Figura 5.7, terceiro quadro). A maioria das imunoevasinas vm de vrus de DNA como a famlia dos herpesvrus, que possuem genomas extensos e cuja estratgia de replicao no hospedeiro envolve um perodo de latncia ou quiescncia.

TAP

Calnexina

ICP 47

5-7 Os peptdeos apresentados pelas molculas do MHC de classe II so produzidos em vesculas endocticas acidificadas
Citosol

Protena do adenovrus E19 compete com a tapasina e inibe a ligao do peptdeo com as molculas do MHC de classe I nascentes

E19

E19

Vrias classes de patgenos, incluindo o protozorio Leishmania e as micobactrias que causam a lepra e a tuberculose, replicam-se em vesculas intracelulares em macrfagos. Como residem em vesculas circundadas por membranas, as protenas desses patgenos no so normalmente acessveis aos proteossomas no citosol. Em vez disso, aps a ativao do macrfago, as protenas nas vesculas, que so normalmente protenas globulares estabilizadas por ligaes dissulfeto intermoleculares, so reduzidas e degradadas por proteases em fragmentos peptdicos que se ligam a molculas do MHC de classe II. Dessa forma, elas so enviadas para a superfcie celular, onde so reconhecidas pelas clulas T CD4. Os patgenos extracelulares e as protenas que so internalizadas nas vesculas endocticas so tambm processadas por esta rota, e seus peptdeos so apresentados para as clulas T CD4 (Figura 5.8). A maior parte do que sabemos sobre o processamento de protenas nas vesculas provm de experimentos nos quais protenas simples so fornecidas a macrfagos que as capturam por endocitose; assim, o processamento do antgeno adicionado pode ser quantificado. As protenas que se ligam a imunoglobulinas de superfcie nas clulas B e que so internalizadas por endocitose mediada pelo receptor so processadas pela mesma via. As protenas que entram nas clulas por endocitose so apresentadas aos endossomas, os quais se tornam progressivamente cidos medida que avanam no interior da clula, eventualmente se fusionando com lisossomas. Os endossomas e os lisossomas contm proteases, conhecidas como proteases cidas, que so ativadas em pH baixo e eventualmente degradam os

Proteossoma

A protena US11 do citomegalovrus, em conjunto com a derlina, causa deslocamento das cadeias nascentes MHC de classe I para o citosol para degradao

MHC I

US11

Derlina

Figura 5.7 O complexo carregador de peptdeos no retculo endoplasmtico alvo das imunoevasinas virais. O primeiro quadro mostra o bloqueio de entrada no retculo endoplasmtico (RE). A protena ICP47 citoslica do vrus HSV-1 evita que os peptdeos se liguem TAP no citosol, enquanto que a protena US6 do CMV humano interfere com a transferncia dependente dos peptdeos atravs da TAP. O quadro do centro mostra a reteno das molculas do MHC de classe I no RE pela protena do adenovrus E19.

Esta liga-se a certas molculas do MHC e as retm no RE atravs de uma sequncia motivo de reteno no RE, competindo ao mesmo tempo com a tapasina para evitar a associao com a TAP e a ligao ao peptdeo. O quadro de baixo mostra a protena US11 do CMV humano associando-se a novas molculas do MHC de classe I recm-sintetizadas e as direciona de volta para o citosol atravs de um canal de membrana, o derlin-1. Uma vez no citosol, a protena MHC marcada para degradao no proteossoma.

Imunobiologia de Janeway

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O antgeno capturado nas vesculas intracelulares Espao extracelular

Nos endossomas iniciais, as proteases endossmicas de pH neutro esto inativas

A acidificao das vesculas ativa as proteases que iro degradar o antgeno em fragmentos peptdicos

Vesculas contendo peptdeos fusionam-se com vesculas contendo as molculas do MHC de classe II

Citosol

antgenos proteicos localizados nas vesculas. Partculas de maior tamanho, internalizadas por fagocitose ou micropinocitose, tambm utilizam essa via de processamento de antgeno. Drogas como a cloroquina, que eleva o pH dos endossomas, tornando-os menos cidos, inibem a apresentao de antgenos que entram nas clulas por essa via, sugerindo que as proteases cidas so responsveis pelo processamento do antgeno internalizado. Entre essas proteases cidas esto as cistenas proteases catepsinas B, D, S e L, sendo esta ltima a enzima mais ativa dessa famlia de proteases. O processamento de antgenos pode ser mimetizado, de certa forma, pela digesto de protenas com essas enzimas in vitro, em pH cido. As catepsinas S e L podem ser as proteases predominantemente envolvidas no processamento de antgenos vesiculares; camundongos que no expressam as catepsinas B ou D fazem apresent