MATERIAIS E MTODOS

Materiais Tubos de ensaio; Pipetas 1,2,5 mL; Soluo Tampo Citrato-Fosfato 0,1 ol!L p" #,5; Soluo da $n%ima &n'ertase (100 m)!100 mL*; Soluo 1+ de Sa,arose em soluo Tampo Citrato-Fosfato 0,1 p" #,5; -ea)ente de Somo).i /elson (S/ &*; -ea)ente de Somo).i /elson (S/ &&*; 0an1o de )elo; 0an1o-maria #02C; 0an1o-maria em ebulio; $spe,trofot3metro &&& 4 ,omprimento de onda5 5#0 nm; Pina de madeira; 6)ua destilada7

ol!L

Mtodos 8e% tubos de ensaio possu9am 0,1 mL de soluo de in'ertase pr:in,ubada em diferentes 'alores de p" a 502C durante 1 1ora7 $ssa soluo foi preparada atra':s da mistura de 5 mL de soluo de in'ertase (100m)!100mL* e 10 mL de soluo tampo 0,1 ol!L de diferentes 'alores de p" depois se)uiu-se a in,ubao7 /os tubos foram adi,ionados 2,0 mL de soluo Tampo Citrato-Fosfato 0,1 ol!L7 Foram numerados no'os tubos de p" 2,; a 10 e um tubo <bran,o=7 /esses no'os tubos foram adi,ionados # mL de soluo 1+ de sa,arose em tampo Citrato-Fosfato 0,1 ol!L p" #,5 e se)uiram para a in,ubao em ban1o-maria a #02C durante 10 minutos7 8a soluo preparada nos primeiros tubos, isto :, a soluo en%im>ti,a dilu9da, foram retirados 1 mL e ,olo,ados nos respe,ti'os tubos de ensaio ,ontendo substrato7 /o tubo <bran,o=, em 'e% de adi,ionar a en%ima dilu9da, foi ,olo,ado 1 mL de >)ua destilada7 $ estes tubos foram dire,ionados para o ban1o-maria a #02C sendo in,ubados por mais 20 minutos7 ?p@s o tempo eAato, foram retirados os tubos e ,olo,ados em ban1o de )elo7 -etirou-se 0,5 mL de amostra de ,ada p" e do <bran,o= e adi,ionou-se 1 mL de rea)ente de Somo).i /elson (S/ &*7 $stes tubos foram a)itados e le'ados ao ban1o-maria em ebulio onde permaneram por ; minutos7 Feito isso, os tubos foram dire,ionados a um ban1o de )elo at: atin)irem temperatura ambiente7 ?di,ionou-se 1 mL de rea)ente de Somo).i /elson (S/ &&*, a)itou-se e os tubos permane,eram em repouso por 5 minutos7 8epois do repouso, ,olo,ou-se 10 mL de >)ua destilada e misturou-se por in'erso7 B espe,trofot3metro &&& foi ,alibrado ,om a soluo <bran,o= e foi medida a absorbCn,ia de todas as soluDes em um ,omprimento de onda i)ual a 5#0 nm7