Muitas Prat

Cristina Pacheco Soares
Newton Soares da Silva

PRTICAS DE BIOLOGIA CELULAR
SUMRIO
Consideraes Gerais sobre a utilizao do Laboratrio.............................................01
Dimenses em Biologia, Instrumentos e Tcnicas Usadas em Citologia.................... 04
Microscopia ..................................................................................................................... 07
Observao do Microscpio ptico Comum.................................................................26
Utilizao do Microscpio ptico Comum....................................................................30
Diversidade Celular..........................................................................................................31
Observao de Clulas Vegetais......................................................................................34
Dissociao do Epitlio da Mucosa Oral.........................................................................35
Observao dos Componentes em Clula Vegetal Viva.................................................36
Observao de Vacolos e Leucoplastos..........................................................................38
Observao de Clulas de Eldea.....................................................................................40
Movimento da gua Atravs da Membrana...................................................................41
Prova da Permeabilidade Seletiva na Membrana...........................................................43
Permeabilidade Diferencial em Clulas Vivas.................................................................44
Observao de Estmatos..................................................................................................47
Observao de Mitocndrias em Clulas Vivas..............................................................51
Classificao dos Cromossomos Humanos e Montagem de Caritipo.........................53
Simulao da 1 Lei de Mendel ......................................................................................57
Estudo dos Tecidos Animais.............................................................................................59
Bibliografia Recomendada...............................................................................................60

AULAS PRTICAS BIOLOGIA FACULDADE DE CINCIAS DA SADE
Professores: Dr. NewtonSoares da Silva e Dra. Cristina Pacheco-Soares

1

ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA N.
Prof.: ........................................................................... Data: ............/............./............
Consideraes gerais sobre a utilizao do laboratrio
a) Os horrios de aula devero ser obedecidos com rigor.
b) aconselhvel o uso de avental, pois alm de proteger a roupa, condiciona o aluno limpeza e
disciplina.
c) O aluno que danificar o material permanente ou de consumo, mesmo casualmente, dever
indenizar a Escola, a critrio do professor.
d) No jogue lixo nas pias, mas em cestos apropriados e embrulhados em papel.
e) No risque as bancadas. O aluno dever encontrar seu lugar limpo e assim deix-lo para o
colega seguinte. Se observar algo errado comunique ao professor assim que chegar, pois o
professor ter condies de localizar o grupo desordeiro. Limpe seu lugar quando terminar o
trabalho.
f) Observe, ao sentar-se, se as torneiras de gs frente esto fechadas e desobstrudas, pois
qualquer alterao pode causar vazamento que voc estar inspirando.
g) No permitida a passagem de alunos para o laboratrio de microbiologia pelo interlab. Mude
de sala pelo corredor de fora.
h) Voc ir trabalhar em grupos formados sob seu critrio. Portanto escolha bem seus
companheiros de trabalho.
Como documentar o curso
Todo trabalho cientfico precisa ser documentado. No caso de Biologia o desenho
esquemtico muito importante desde que seja realizado com honestidade, isto , sem criaes,
sem a influncia do esquema do professor, com ateno e sem pressa.

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1. Leia todo o roteiro da experincia que vai fazer, antes de iniciar o trabalho para ficar claro o
que vai ser realizado.
2. Separe todo o material necessrio antes de comear o trabalho.
3. Siga especificamente as indicaes de tempo, material, etc. como o roteiro indica.
4. Aps usar, coloque cada material no local indicado para no misturar componentes.
5. S esquematize o que voc de fato v. No d asas a sua imaginao. Isto um trabalho
cientfico e no uma obra de arte. Se alguma estrutura deveria ser exibida e no aparece, anote o
sucedido por escrito em seu roteiro, porm procure bem antes de proceder desta forma. A
qualidade dos esquemas importante para sua compreenso.
6. Leia o roteiro com ateno. Solicite auxlio do professor s em ltimo caso.
7. Anote todos os dados. Na hora eles podem no parecer importantes, mas o sero para as
concluses.
8. Escreva em linguagem simples e clara e evitar enganos.
9. No use lpis de cor ou similar, rgua a menos que o roteiro instrua em contrrio. Os desenhos
sero feitos a lpis, a mo livre.
10. Coloque o nome, nmero e a turma a tinta e no lugar indicado. No se esquea que os
relatrios so individuais.
11. Os esquemas devem ser acompanhados de legendas e explicaes por escrito e eventualmente
grficos. Tudo que voc desenhou tem nome.
12. Quando o roteiro solicitar que voc faa o mesmo esquema com diferentes aumentos, note que
os desenhos no tero tamanhos diferentes, tero detalhes a mais ou menos.
13. O roteiro foi programado para ser executado durante a aula. Habitue-se a trabalhar com regra
e horrio, pois caso voc no termine, no poder faz-lo em casa, uma vez que voc no dispe
do material necessrio. No passe a limpo, pois isso o mesmo que copiar figuras e os esquemas
devem partir do natural.
14. Lembre-se que o relatrio deve estar correto e agradar aos olhos (esteticamente falando).

3
Do seu desempenho e comportamento depende a sua nota de laboratrio. Seja objetivo,
consciente e responsvel.


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Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: DIMENSES EM BIOLOGIA, INSTRUMENTOS E TCNICAS USADOS EM
CITOLOGIA, DIMENSES EM BIOLOGIA
As dimenses das estruturas biolgicas podem agrupar-se em dois grandes grupos,
macroscpicas, isto , visveis ao olho humano e microscpicas, isto , invisveis ao olho humano,
tendo como fronteira o poder de resoluo do olho humano. As unidades de medida utilizadas
nestas dimenses esto, assim, adaptadas sendo as mais freqentemente utilizadas o micrmetro
(m) para a microscopia ptica e o nanmetro (nm) e o angstrom () para a microscopia
eletrnica. A sua relao com a unidade fundamental do sistema mtrico, o metro (m) e com o
milmetro (mm) a seguinte:
1 m = 10
-6
m = 10
-3
mm (0,001 mm)
1 nm = 10
-9
m = 10
-6
mm (0,000001 mm)
1 = 10
-10
m = 10
-7
mm (0,0000001 mm)
Nesta disciplina iremos falar muito em especial do mundo microscpico e como tal face s
dimenses das estruturas celulares que, salvo raras excees como o caso da acetabulria, da
gema do ovo e de alguns feixes lberos-lenhosos, so invisveis ao olho humano, por demais
bvio a necessidade de utilizao do microscpio uma vez que o limite de resoluo do olho
humano de 100 m (0,1 mm). Em termos de formao de imagem fundamental percebermos o
significado de trs conceitos muito importantes, que so o poder de ampliao, o poder de
resoluo e o de limite de resoluo.
Poder de ampliao: capacidade de um aparelho aumentar n vezes uma imagem. Na microscopia
dado pelo produto entre a ampliao das oculares e a ampliao das objetivas.
Poder de resoluo: capacidade de um aparelho fornecer imagens distintas de dois pontos
distintos.
Limite de resoluo: distncia mnima a que dois pontos podem estar para o aparelho os
mostrar individualizados.
O que determina pois a riqueza dos detalhes da imagem fornecida por um sistema de
imagens o seu poder de resoluo e no o seu poder de ampliar o tamanho dos objetos. A
capacidade de aumentar s tem valor prtico se for acompanhado de um aumento do poder de
resoluo. Este limite de resoluo depende essencialmente da objetiva, j que as oculares no

5
podem acrescentar detalhes imagem, pois a sua funo aumentar de tamanho essa imagem,
que projetada no seu plano de focagem pela objetiva.
INSTRUMENTOS USADOS EM CITOLOGIA
Microscopia:
ptica:
Campo luminoso
Campo escuro
Ultravioleta
Fluorescente
Contraste de fase
Eletrnica:
Transmisso
Varredura

TCNICAS USADAS EM CITOLOGIA
Citoqumicas
Permitem estudar a localizao intracelular das diversas substncias que compem as
clulas, atravs de tcnicas in situ, nas quais as clulas so preservadas intactas e as substncias
detectadas por tcnicas que do reaes coradas ou cujo produto eletrondenso, ou extra situ, que
se baseiam no fracionamento celular e no estudo dos componentes isolados.
No primeiro caso procede-se execuo de preparaes definitivas com coloraes
especficas, no segundo caso recorre-se a outras tcnicas laboratoriais, tais como, centrifugao,
filtrao, com posterior utilizao dos produtos obtidos para identificao e quantificao por
tcnicas de cromatografia, espectrofotometria entre outras.
Imunocitoqumicas
As tcnicas de imunocitoqumica permitem o estudo da localizao intracelular de
protenas especficas, sendo estas tcnicas muito superiores s tcnicas de identificao de
protenas baseadas na verificao de aminocidos. Estas tcnicas baseiam-se na reao
antigeno-anticorpo.

Radiofotografia

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A radiofotografia aplicada como uma tcnica citoqumica in situ para a deteco de istopos
radioativos e baseia-se na sensibilidade das emulses fotogrficas s radiaes ionizantes. Como
no existem nas clulas elementos radioativos, podemos seguir pela radiofotografia a
incorporao e a movimentao de compostos radioativos, introduzidos nas clulas com
finalidades experimentais.

ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA - N.

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Prof.: ........................................................................... Data: ............/............./............
MICROSCOPIA
A microscopia tem a maior importncia no estudo das clulas. Muitas
caractersticas importantes de interesse nos sistemas biolgicos so demasiado
pequenas para serem vistas a olho nu, s podendo portanto, ser observadas
com o microscpio.
Nos anos mais recentes, tem-se notado um grande desenvolvimento em
microscpios, corantes, protocolos de colorao e tcnicas de preparao para
ajudar a esclarecer melhor a estrutura e funo das clulas.
Descreveremos as capacidades e aplicaes das vrias tcnicas de microscopia
usadas para visualizar as clulas, as suas estruturas subcelulares e ainda as
suas molculas.
As estruturas celulares que necessitamos de estudar tm dimenses que, em
regra, so invisveis vista desarmada. 1mm (milmetro) = 1 000 m
(micrmetro) = 1 000 000 nm (nanmetro) = 10 000 000 (Angstrom).
O olho humano s consegue formar imagens de objetos com dimenses
superiores a cerca de 0,2mm. Para observar objetos menores necessrio
formar deles uma imagem ampliada.
Os microscpios so os aparelhos utilizados para formar essas imagens.
Radiao eletromagntica
Os microscpios usam radiaes eletromagnticas para formar imagens
ampliadas dos objetos a observar.
O microscpio ptico usa a luz visvel (radiao eletromagntica com
comprimento de onda compreendido entre 400 e 800 nm).
O microscpio eletrnico usa raios catdicos (feixe de eltrons) cujo
comprimento de onda inversamente proporcional voltagem de acelerao dos
eltrons usados no microscpio, sendo de 0,0037nm para uma voltagem de
100KV.
Resoluo e ampliao
H um limite mnimo para a dimenso dos objetos que podem ser observados
com um determinado sistema ptico, limite esse que se denomina resoluo do
sistema.

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Por exemplo, a resoluo do olho humano de cerca de 0,2mm, e determinada
pela estrutura celular da retina. A de um microscpio ptico de 0,2mm e
limitada pelo comprimento de onda da luz visvel.
A ampliao da imagem produzida pelo sistema ptico permite observar objetos
de dimenses inferiores a 0,2 mm (resoluo do olho humano), mas apenas at
ao limite de resoluo do sistema ptico. Objetos menores que este limite no
podem formar imagens, por maior que seja a ampliao utilizada.
A ampliao til a ampliao necessria para que a imagem do objeto se torne
visvel, ou seja, para que atinja dimenses iguais ou superiores ao limite de
resoluo do olho humano. Para conforto do observador, as imagens so
ampliadas at dimenses que tornam a sua observao confortvel. O fator de
ampliao adicional a ampliao vazia.
Exemplo: Para que um objeto no limite de resoluo do microscpio ptico se
torne visvel necessrio ampli-lo: 0,2mm / 0,2 m = 200 m / 0,2 m = 1000
x. Para uma observao confortvel, podemos ampli-lo at 1mm, utilizando um
fator de ampliao adicional de 1mm/0,2mm=5.
V-se assim que a ampliao til de um microscpio ptico no excede as
1000x
Tipos de microscpio
O limite de resoluo de um microscpio depende do comprimento de onda da
radiao eletromagntica usada para formar a imagem e de aberraes das
lentes.
Deste modo, pode-se melhorar a resoluo construindo microscpios que
utilizem
radiaes de comprimento de onda menor que o da luz visvel. A construo
deste tipo de microscpios depende da capacidade de produzir lentes para a
radiao em causa. A radiao ultravioleta permite algum ganho de resoluo,
mas usada principalmente nos microscpios de fluorescncia. Os raios-X
comeam a poder ser usados com lentes especiais, e raios-gama no foram
ainda usados por falta de dispositivos que possam funcionar como lentes. Os

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raios catdicos (feixes de eltrons) utilizam ++ e so usados nos microscpios
eletrnicos.

Nos microscpios mais comuns, o feixe de radiao esttico e irradia
simultaneamente toda a rea observvel da amostra. Noutros aparelhos
(microscpios de varredura), o feixe possui dimenses muito reduzidas
irradiando apenas um ponto da amostra, e dotado de um movimento
relativamente quela, irradiando em seqncia todos os pontos do objeto
(varredura).
O microscpio ptico usa a luz visvel como radiao eletromagntica.
Os componentes principais do microscpio ptico so:
Fonte luminosa:
Condensador
Diafragmas de campo e do condensador
Platina
Objetiva
Tubo
Oculares
MICROSCPIO PTICO FOTNICO COMUM
No microscpio ptico de transmisso a luz emitida pela fonte luminosa e
concentrada pelas lentes condensadoras, atravessa a amostra e penetra na
objetiva. A objetiva forma uma imagem real, ampliada, do objeto e as oculares
formam uma imagem virtual, tambm ampliada, da imagem real produzida
pela objetiva. A imagem virtual situa-se distncia de 25cm do olho do
observador, e a imagem que pode ser observada. A ampliao total o produto
dos fatores de ampliao da objetiva e das oculares, podendo existir outros
dispositivos no trajeto da luz que introduzam fatores multiplicativos adicionais.
O feixe luminoso que atravessa a amostra modificado por interaes com esta,
que consistem na absoro de certos comprimentos de onda produzindo cor,
difrao, refrao, reflexo, diferena de fase etc. Estas interaes vo-se

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traduzir na produo de diferenas de cor ou de intensidade luminosa na
imagem do objeto, que podem ser percebidas pelo olho humano.

MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE
Ambos os microscpios usam a propriedade de dar contraste a estruturas
biolgicas transparentes luz visvel, visto que fazem mudanas de fase e/ou
atrasos nas radiaes que atravessam essas estruturas.
O microscpio de contraste de fase usa um condensador e objetivas especiais. O
condensador est provido de um diafragma em forma de anel (diafragma anular)
que produz um cone oco da luz que o atravessa.
A luz ilumina o objeto e o que o rodeia. A luz que passa o objeto desviada em
relao que passa diretamente o meio que o rodeia. O efeito de fase depende
da interferncia entre a imagem geomtrica direta e a imagem difratada lateral.
Se os dois grupos de raios se somam em contraste brilhante ou negativo o
objeto aparecer mais brilhante que o meio. Quando o contraste positivo ou
escuro os jogos de raios experimentam uma interferncia subtrativa sendo a
imagem do objeto mais escura que o meio. Deste modo, pequenas mudanas de
fase so transformadas em diferenas de amplitude (intensidade).


11

Para obter os dois tipos de contrastes o microscpio provido de objetivas com
dispositivos de fase especficos:

Conforme os fabricantes de microscpios o contraste escuro pode ser obtido
com dois dispositivos diferentes (ver Figuras A e B). Utilizando o dispositivo A, a
luz direta


12

levada ao foco da objetiva onde est colocada placa de fase. Esta, tem uma
ranhura em forma de anel que coberta por uma fina camada de metal que tem
por fim fazer avanar os sados comparativamente luz da da do objecto.
Os esquemas mostram a passagem da luz atravs da preparao, e os
dispositivos de fase. Os esquemas mostram a passagem da luz atravs da
preparao, e os dispositivos de fase.

A microscopia de interferncia tem por base princpios semelhantes ao
microscpio de contraste de fase, mas tem a vantagem de fornecer dados
quantitativos. Este microscpio permite a deteco de variaes pequenas e
contnuas de ndice de refrao, enquanto que objeto, e porque o aumento
refrativo quase o mesmo para todas as molculas o microscpio de fase s
revela variaes acentuadas.
Porque o atraso de fase conseqente da diferena entre o ndice de refrao do
meio e do biolgicas, possvel avaliar a quantidade de massa seca por unidade
de rea do objeto, medindo o atraso de fase.


13
A quantificao do atraso de fase feita usando um compensador que reduz o
brilho do objeo a negro. Embora o seu uso seja remoto, pode ser empregue no
futuro com sistemas analisadores de imagem.
MICROSCOPIA DE CAMPO ESCURO
No microscpio de fundo escuro, a luz dirigida do condensador amostra num
ngulo oblquo de maneira a que nenhuma luz incidente entre nas lentes da
objetiva (criando um campo escuro se nenhuma amostra estiver presente).
Nestas condies, s a luz refratada ou difratada pela amostra entra nas lentes
da objetiva para formar a imagem.
A resoluo no muito boa, mas com este mtodo podemos observar objetos
pequenos que refratam a luz incidente. usado na microbiologia, para detectar
bactrias ou na auto-radiografia, para detectar gros de prata produzidos na
emulso fotogrfica por radiao.
A Figura mostra um esquema deste tipo de microscpio.

Uma das grandes vantagens dos microscpios de contraste de fase, interferncia
e de fundo escuro que eles tornam possvel a observao dos movimentos
envolvidos em processos como, mitose e migrao celular. Como muitos
movimentos so demasiado


14

lentos para observar em tempo real til fotografar (microcinematografia) ou
filmar em sistema de vdeo.
Ultimamente, as cmaras de vdeo e a tecnologia associada do processamento
de imagem tm tido maior impacto na microscopia ptica. Alm de
possibilitarem a resoluo de certas imperfeies do microscpio, resolveram de
igual modo as limitaes do olho humano, tais como a percepo de pequenas
diferenas na intensidade da luz contra um fundo brilhante.
Como as imagens dadas pelas cmaras de vdeo so em forma eletrnica, elas
podem ser digitalizadas e processadas por um computador. Este fato tornou
possvel, atingir o limite de resoluo terico do microscpio ptico e aumentar
o contraste das imagens. Um dos exemplos a observao de microtbulos,
com dimetros de dimenso inferior ao da luz (0,025 m) no microscpio de
interferncia assistido por um computador.
MICROSCOPIA DE FLUORESCNCIA
um microscpio de luz incidente (epi-iluminao), como o microscpio de
reflexo. O feixe luminoso tem, no entanto um comprimento de onda apropriado
(habitualmente na regio azul ou ultravioleta) para excitar substncias
fluorescentes (fluorocromos) que se encontram na amostra. Estas substncias
podem fazer parte da composio natural amostra ou ser introduzidas pelo
processamento tcnico como corantes.
A luz emitida pelos fluorocrmos excitados pelo feixe luminoso entra na objetiva
para formar a imagem.
Mecanismo da fluorescncia
Quando certas substncias como o vidro, gotas de gordura e diversos corantes
so expostos s radiaes UV, modificam o comprimento de onda destas
radiaes e tornam-se luminosas, isto , so fluorescentes. Se tratarmos
tecidos, clulas, bactrias com um corante
fluorescente e as examinarmos ao microscpio com luz UV, elas tornam-se
luminosas e aparecem como corpos brilhantes num fundo escuro.
A fluorescncia data de 1904 com Kohler e foi usada mais freqentemente com
Coons que introduziu a tcnica dos anticorpos fluorescentes em 1941.

15
A fluorescncia um fenmeno ptico no qual a luz absorvida por uma
substncia chamada fluoroforo e quase instantaneamente re-emitida com luz
dum maior. Como resultado da absoro da luz, as molculas de fluorforo
tornam-se excitadas, quer dizer, absorvem a energia da luz e o seu estado
eletrnico mudado para um estado excitado no qual a energia de cada
molcula maior do que o seu estado normal.
A energia excedente dissipada em calor, emitida em fluorescncia, ou usada
numa reao fotoqumica.
No primeiro caso, a luz meramente absorvida sem fluorescncia. No segundo,
a
fluorescncia ocorre. No terceiro, a reao fotoqumica induzida pela luz apagar-
se-. Esta tcnica no s utilizada quando se pretende detectar substncias
em concentraes mnimas, mas tambm se usa para observaes depois de
tratamentos qumicos. Quando surgem mudanas de excitao ou emisso do
espectro de substncias fluorescentes devido sua unio ao substrato, tambm
se podem obter informaes a respeito da conformao das molculas do
substrato.


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No
Quadro, podem ver-se os tipos de fluorescncia e os materiais a observar no
microscpio de fluorescncia.
Autofluorescncia
A autofluorescncia predominante nos tecidos vegetais. Nos tecidos animais,
podemos encontr-la nas fibras do tecido conjuntivo (colgeno e elastina) e nas
lipofucsinas. No interior celular, a maior parte da autofluorescncia devida
presena do NADH unido a uma desidrogenase mitocondrial.
Todas as protenas fluorescem quando so excitadas a 250-280 nm (UV), devido
presena do triptofano, tirosina e fenilalanina.
As gotas lipdicas tambm podem ser observadas no microscpio de
fluorescncia.
Fluorescncia induzida
Algumas substncias podem ser convertidas a fluorescentes por tratamento
qumico. Ex o formol reage com as ariletilaminas por reaes de condensao
levando formao de isoquinolinas e outros compostos fluorescentes.


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Fluorocromia
Os corantes fluorescentes so conhecidos por fluorocromos em contraste com os
que so visualizados no microscpio de luz que so chamados diacromos.
Muitos corantes podem ser usados como diacromos e fluorocromos: Vermelho
Congo, Vermelho neutro, Eosina e Fucsina Bsica. A maioria dos corantes
amarelos, laranja, e vermelhos so de fato, fluorescentes, (laranja de acridina e
quinacrina, esto entre eles).
A colorao do DNA com fluorocromos importante, principalmente, devido aos
estudos
fluorimtricos. Primeiro, foi usada para o estudo da conformao do DNA, mas
agora utilizada para a quantificao do contedo em DNA. Usam-se Laranja
de Acridina, reao de Feulgen, Brometo de etdio, etc.
Fluorescncia Metacromtica
Alguns fluorocromos so metacromticos, isto , fluorescem com mais de uma
cor. Com os fluorocromos metacromticos, assim como os diacromos, a
mudana da ortocromasia para metacromasia envolve um aumento no pico de
excitao (absoro) em direo a curtos comprimentos de onda, e um
decrscimo na absoro mxima. Adicionalmente, existe um correspondente
aumento do espectro de emisso em direo a grandes . Resumindo, a cor
emitida pela fluorescncia muda para uma de maior, e o brilho da
fluorescncia diminui.
A fluorescncia metacromtica devida formao de dmeros e polmeros
como resultado duma agregao das molculas do corante.
Dos corantes fluorescentes metacromticos, o mais conhecido a Laranja de
Acridina, verde na sua forma ortocromtica, cora o DNA, e vermelho na forma
metacromtica, cora o RNA, DNA desnaturado e polissacardeos.


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Imunofluorescncia
Certos corantes fluorescentes podem utilizar-se para marcar os anticorpos do
soro. Eles so adicionados s gamaglobulinas custa de determinados radicais
e tornam fluorescente o conjugado resultante. Pode empregar-se o isotiocianato
de fluorescena.
As figuras 1 e 2 apresentam, respectivamente, as estruturas da fluorescena e
tetrametilrodamina, dois corantes usados em imunofluorescncia. O 1 emite
luz amarela esverdeada quando ativado por luz de comprimentos de onda
prprios, enquanto que o 2 emite luz vermelha. Na zona sombreada onde
esto localizadas os grupos reativos quimicamente. Nesta posio vai ser
formada uma ligao covalente entre o corante e a protena ou outra molcula.
Quando se ligam a protenas a ligao feita ao grupo SH ou ao NH2.

Fluorescncia produzida enzimaticamente
A atividade enzimtica nas clulas (vivas ou fixadas) pode ser estudada em
sistemas onde a enzima produz uma mudana de fluorescncia pela ao num
substrato ou co-enzima.


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Microtublos

Rat aortic smooth muscle cells stained with an anti-tubulin antibody and FITC-conjugated
secondary antibody (green). (Omega Optical Filter Set # XF71). hotograph by Jim San Fillipo
Aplicaes
As tcnicas de fluorescncia podem ser aplicadas a todas as espcies de
material biolgico.
O microscpio de fluorescncia tem grande sensibilidade tornando possvel
detectar pequenas quantidades de substncia ou partculas de tamanhos
abaixo da resoluo do microscpio de luz. Podem ser visualizadas as mesmas
preparaes que no MO de luz e tem a vantagem de observar os corantes que
absorvem na regio do UV fluorescendo no
visvel.
MICROSCOPIA DE POLARIZAO
Este mtodo baseia-se no comportamento de certos componentes de clulas e
tecidos, quando so observados com luz polarizada. Se o material for isotrpico,
a luz polarizada propaga-se atravs dele com a mesma velocidade,
independentemente da direo do plano de incidncia. Estas substncias
caracterizam-se por terem o mesmo ndice de refrao em todas as direes. Por
outro lado, num material anisotrpico a velocidade de propagao da luz
polarizada varia. Este material tambm chamado birrefringente, porque

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apresenta dois ndices de refrao diferentes, correspondentes a diferentes
velocidades de transmisso.
Nas fibras biolgicas, a birrefringncia positiva se o ndice de refrao for
maior ao longo do comprimento da fibra, do que no plano perpendicular, e
negativa no caso oposto.
A birrefringncia (B) pode ser expressa quantitativamente como a diferena
entre os dois ndices de refrao (Ne N0) associados com os raios de maior e
menor velocidade.
Na prtica, com o microscpio de polarizao, mede-se o atraso (T) que a luz
sofre num plano, relativamente velocidade que a luz apresenta num plano
perpendicular a este. O atraso est relacionado com a espessura do espcime (t)
da seguinte maneira:
B = Ne - N0 = T/ t
O microscpio de polarizao difere do microscpio vulgar pela presena de dois
elementos de polarizao: o polarizador e o analisador, que consistem de folhas
Polaroid ou de prismas de Nicol em calcita. O polarizador monta-se por baixo do
condensador e o analisador por cima da objetiva.
O microscpio de polarizao, tal como o microscpio de interferncia, pode ser
acoplado a uma cmara de vdeo, o que melhora consideravelmente o contraste
e a qualidade de imagem.

Microscpio confocal
Trata-se de um microscpio ptico que funciona em modo de varredura.
Portanto o feixe luminoso irradia apenas um ponto da preparao, sendo
produzido por um laser. Do mesmo modo que no MEV, o feixe de radiao
percorre a preparao.

Microscpio invertido
um microscpio ptico de transmisso, em que as posies da objetiva e do
condensador se encontram invertidas relativamente platina.
O aparelho usado para observar o fundo dos frascos de cultura de clulas, que
no podem ser facilmente estudados com os microscpios normais.

21
MICROSCOPIA ELECTRNICA DE TRANSMISSO
Interpretao da imagem em microscopia eletrnica de transmisso
As imagens observadas com um microscpio eletrnico de transmisso (TEM
).
(Transmission Electron Microscope) so imagens de cortes de objetos
tridimensionais. A formao das imagens no microscpio depende de mtodos
de contrastao que introduzem nos cortes metais pesados que, ao interagir
com o feixe de eltrons, do origem imagem. Na interpretao destas imagens
h que atender, portanto a estes dois fatores:
1. Em que medida que a imagem produzida pelo mtodo de contrastao
corresponde realidade estrutural, e que dados sobre a sua composio
qumica se podem recolher por manipulao dos mecanismos de contrastao.

2. Que se pode inferir relativamente estrutura do objeto tridimensional que se
pretende compreender, do estudo das seces bidimensionais, em termos
qualitativos e quantitativos.
O contraste
Para compreender a primeira questo necessrio conhecer o mecanismo da
formao do contraste no TEM. O feixe de eltrons, acelerado por um potencial

22
de vrias dezenas de kilovolts (tipicamente 60-80 KV em estudos de materiais
biolgicos), atravessa a amostra interagindo com os seus tomos.
As colises dos eletros do feixe com os tomos da amostra processam-se
segundo dois processos essenciais:
1) colises dos eltrons do feixe com os eltrons dos tomos da amostra.
2) colises com os respectivos ncleos.
No primeiro caso, o electron do feixe transmite parte da sua energia ao electron
do tomo da amostra e pouco desviado da sua trajetria. Trata-se de uma
coliso no elstica. Estas colises reduzem a energia dos eltrons do feixe, que
podem produzir contraste por interfncia com os eltrons do feixe que no
sofreram colises. Este mecanismo de formao do contraste tem importncia
sobretudo para o detalhe mais fino, perto do limite de resoluo do microscpio.
No segundo caso, os eltrons do feixe no perdem energia, mas so desviados
da sua trajetria segundo ngulos elevados, quando colidem com ncleos de
tomos pesados.
Estes eltrons podem ser seletivamente removidos pela introduo de
diafragmas que s deixam passar os eltrons no desviados (fig).
Conseqentemente, nas regies da amostra onde h maior concentrao de
tomos pesados, h uma maior frao de eltrons desviados e removidos do
feixe, gerando regies deficientes em eltrons.

Microscopia eletrnica de varredura
Enquanto que nos microscpios de transmisso convencionais o feixe irradia
toda a amostra, e so as alteraes produzidas no feixe por interao com esta
que vo ser convertidas na imagem, nos microscpios de varredura o feixe
irradia apenas um ponto da amostra. O feixe percorre sistematicamente toda a
amostra por um processo de varredura, e a interao do feixe com a amostra
gera sinais que podem ser medidos por detectores apropriados. A imagem
forma-se ponto por ponto em tubos de raios catdicos nos quais o feixe de
eltrons se move de um modo sincronizado com o movimento do feixe de
radiao do microscpio de modo que a cada ponto do objeto corresponde um
ponto da imagem. A intensidade e/ou cor do ponto imagem so moduladas pelo

23
sinal recolhido pelo detector. A resoluo deste tipo de aparelhos depende
principalmente do tamanho da rea do objeto irradiada pelo feixe O modo de
varredura pode ser implementado quer em microscopia de transmisso quer em
microscopia de reflexo quer ptica quer eletrnica. As implementaes
atualmente mais importantes em biologia so o microscpio eletrnico de
varredura (MEV ).
scanning electron microscope), que essencialmente um microscpio eletrnico
de reflexo, e o microscpio confocal, que um microscpio ptico funcionando
tambm em modo de reflexo (fazendo uso principalmente de tcnicas de
imunofluorescncia). Merece tambm referncia o microscpio eletrnico de
varredura-transmisso (STEM Scanning-transmission electron microscope)
que um microscpio eletrnico funcionando em modo de transmisso.
MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA - MEV
Funcionamento do instrumento
No microscpio eletrnico de varredura o feixe de radiao um feixe de
eltrons que focado num ponto da amostra pelas lentes eletromagnticas do
microscpio.A interao do feixe de eltrons com a amostra gera um conjunto
de sinais em que se contam eltrons secundrios, eltrons retrodifundidos,
raios-X, etc. Estes sinais podem ser medidos por detectores apropriados,
respectivamente para eltrons de baixa energia (eltrons secundrios), de alta
energia (eltrons retrodifundidos), e raios-X. Estes sinais so convertidos pelo
detector em correntes eltricas de maior ou menor intensidade que vo modular
a intensidade do feixe de eltrons que forma a imagem no tubo de raios
catdicos. As amostras estudadas no MEV so amostras espessas, como dentes
inteiros, no sendo importante que o feixe de eltrons seja capaz de a atravessar
uma vez que os sinais recolhidos dizem respeito, em regra, apenas iterao
com a superfcie da amostra. Portanto estes instrumentos esto particularmente
adaptados ao estudo das superfcies das amostras e no da estrutura interior.
Preparao das amostras para o MEV
Uma vez que interessa estudar a superfcie de amostras inteiras, os mtodos de
preparao tm por objetivo preservar as superfcies, de um modo to fiel
quanto possvel. Quando se torna necessrio estudar o interior das amostras,

24
estas podem ser cortadas ou fraturadas de modo a expor o interior. Como as
amostras so observadas no vcuo do microscpio, elas tm de ser fixadas e
secas. secagem habitualmente o passo mais delicado, uma vez que no seu
decurso, os fenmenos de tenso superficial exercem foras capazes de destruir
a maior parte da estrutura biolgica observvel. Para evitar estes efeitos recorre-
se secagem por mtodos de ponto crtico ou a partir de lquidos de tenso
superficial muito baixa.
Modernamente tm vindo a ser desenvolvidos microscpios eletrnicos de
varredura ambientais nos quais a cmara que contm a amostra pode ser
mantida a uma presso elevada, prxima da presso atmosfrica, permitindo a
observao de amostras no desidratadas.
Imagens produzidas pelos eltrons secundrios
Trata-se do modo de observao mais utilizado no MEV. Os eltrons
secundrios so os eltrons ejetados dos tomos da amostra pelas colises no
elsticas com os eltrons do feixe. Estes eltrons so ejetados direcionalmente
em funo da topografia da amostra.
A intensidade da emisso depende da natureza qumica da amostra. Os metais,
que possuem eltrons mais fracamente ligados, emitem melhor que as
substncias em que os eltrons se ligam mais firmemente aos tomos, caso dos
compostos orgnicos. Por este motivo, a superfcie das amostras recoberta
com finas pelculas metlicas. Como o detector se localiza num dos lados da
cmara de observao, a intensidade do sinal recolhido maior para os pontos
das superfcies viradas para o detector. Por este motivo, o mtodo ideal para
revelar a topografia das superfcies.
Imagens produzidas pelos eltrons retrodifundidos
Estes eltrons so os eltrons do feixe que, atravs de sucessivas colises
elsticas com os tomos da amostra so desviados do seu trajeto o suficiente
para se libertar da amostra e re-entrar no vcuo da cmara de observao
(retro-difuso). Como se trata de eltrons do feixe de radiao do microscpio,
desviados por colises elsticas, a sua energia muito maior que a dos eltrons
secundrios. A sua emisso tambm direcional como a dos eltrons
secundrios. No entanto trata-se de eltrons que penetram na amostra a maior

25
profundidade e que so defletidos mais intensamente nas regies de maior
densidade de massa ( semelhana do que se passa no mecanismo de formao
de contraste do TEM).
Portanto, a intensidade do sinal reflete no apenas a topografia da amostra
como a sua composio qumica.


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ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA N-
Prof.: ........................................................................... Data: ............/............./............
Tema: Observao do Microscpio ptico Comum (M.O.C.)

Material: Microscpio, lminas prontas.

Construo do Microscpio ptico
O microscpio um aparelho destinado a ampliar a imagem das micro estruturas observadas,
utilizando para isso, a luz.
1. Base ou p: d ao instrumento boa estabilidade e usado para o repouso do aparelho na mesa
de trabalho. Nele est um boto que d controle intensidade luminosa.
2. Brao: sustenta a parte ptica (lentes) e serve para o transporte do aparelho.
3. Tubo ou canho: contm em uma das extremidades a lente e na outra, o revlver que uma
pea giratria a qual se prendem as lentes objetivas.
4. Platina: sobre esta se coloca a lmina preparada, exatamente sobre uma abertura central que d
passagem aos raios de luz.
5. Charriot: serve para locomover a lmina para a direita ou esquerda e para cima ou para baixo.

27
6. Parafuso macro e micromtrico: abaixam e elevam a platina. O micromtrico permite um
ajuste grosseiro da imagem. O micro permite uma melhor focalizao.
7. Revlver: local onde so inseridas as objetivas.
8. Objetivas: Conjunto de lentes que ampliam a imagem. Esto presas ao revlver, que ao ser
girado vai mudando as objetivas. Ela projeta uma imagem real, ampliada e invertida. O aumento
da objetiva gravado na sua lateral. Para uso da objetiva de imerso (100 x) utilizar, inicialmente,
o menor aumento e focalizar. Colocar ento uma gota de leo de cedro sobre o centro iluminado
da lmina lateralmente e controlando o abaixamento at que a objetiva toque o leo. Observar
pela ocular e girar o micro at que a focalizao seja ntida. Terminando o estudo, limpar a lmina
e a lente usando um pano macio molhado em xilol, em seguida com flanela limpa.
9. Ocular: Conjunto de lentes sobre as quais voc coloca o olho. D imagem virtual, ampliada e
direta. O aumento est gravado na sua extremidade superior. Para clculo da ampliao total,
multiplica-se a ampliao da ocular pela da objetiva. Exemplo: ocular = 10x e objetiva = 40x ---
ampliao total de 400x.
10. Condensador: est por baixo da platina. o conjunto de lentes cuja funo concentrar a luz.
11. Lmpada
Recomendaes
O M.O.C. deve ser transportado cuidadosamente com as duas mos, pelo brao e pela base.
Aps o uso, o microscpio deve ser guardado livre de poeira e/ou leo. Sempre com a menor
objetiva e a platina totalmente levantada.
Como utilizar o microscpio
1. Coloque a lmina com o material a ser observado no orifcio da platina.
2. Gire o boto que est no p do microscpio e d a intensidade luminosa. No precisa girar at o
fim e no force o boto.
3. Olhando por fora e nunca pela ocular, e com a objetiva de menor capacidade gire o parafuso
macromtrico, at que a objetiva se aproxime da lmina.

28
4. Com os olhos na ocular, gire o macro no sentido inverso, bem devagar at ver o material no
campo com relativa nitidez.

5. Focalize melhor com o micro, para conseguir uma boa imagem. Para uma ampliao maior,
gire o revlver e utilize imediatamente uma objetiva mais poderosa. Corrija o foco com o
micromtrico. Cada vez que mudar a objetiva, repita essa operao.
6. Para pessoas destras, a mo esquerda deve estar presa ao macro e a direita livre para desenhar,
escrever, etc.
Unidades de Medida
O estudo das estruturas celulares exige a utilizao de medidas adequadas ao material estudado.
Na tabela seguinte, fornecemos algumas dessas dimenses.
Unidade Smbolo Referncia Dimenses citolgicas
milmetro mm
0,001
metros
vista desarmada
tecidos, clulas grandes

micrmetro m- 0,001 mm
microscopia ptica
maioria das clulas e
organelas maiores

nanmetro nm 0,001 m-
microscopia eletrnica
organelas menores


29
ngstrn 0,1 nm
microscopia eletrnica
molculas.

O olho humano capaz de distinguir dois pontos distantes 0,1 mm um do outro. Se a distncia for
menor, eles sero vistos como um ponto apenas. A capacidade de distinguir dois pontos muito
prximos chamada poder de resoluo. O poder de resoluo de um microscpio ptico de
cerca de 225 nm e do eletrnico de at 0,5 nm

Procedimento
1. Reconhea cada pea do microscpio, colocando os nomes de suas partes.
2. Utilize uma lmina fornecida pelo professor para ter o mecanismo de focalizao em 40x, 100x
e 400x. No precisa esquematizar.


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ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA N. .
Prof.: ........................................................................... Data: ............/............./............

Tema: Utilizao do Microscpio ptico Comum (M.O.C.)
Material: M.O.C., lminas, lamnulas, letras recortadas de jornal, gua e papel de filtro.

Procedimento: Limpe bem a lmina , coloque a letra, duas gotas de gua e a lamnula por cima.

Observaes:
Para evitar a formao de bolhas de ar, coloque a lamnula com o polegar e indicador da mo
direita de maneira a formar um ngulo entre lmina e lamnula de 45. Deixe a lamnula cair sobre
a letra de uma s vez. Enxugue o excesso de gua com papel de filtro.
Esta aula tem como objetivo exercit-lo para o uso do M.O.C. bem como provar o que foi dito no
roteiro anterior sobre as objetivas. Portanto, se voc enxergar a imagem invertida, desenhe-a
como a v.


31
Esquematizar: a letra em aumento de 40x, 100x e 400x. Atente para as sensveis diferenas de
detalhes. No se esquea que isso um trabalho cientfico, por isso, merece uma boa observao e
um bom relato.

Nome: ......................................................................... N.: ....... Turma: ...........
Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............

Tema: Diversidade Celular
Os antigos filsofos e naturalistas chegaram concluso de que "todos os animais e
vegetais, por mais complicados que fossem, eram constitudos por uns poucos elementos que se
repetiam em cada um deles". Referiam-se s estruturas macroscpicas de um organismo, tais
como as razes, os caules ou os segmentos de rgos que se repetem no mundo animal. Muitos
sculos mais tarde, graas ao invento e posterior aperfeioamento dos microscpios, foi
descoberto que por detrs desta estrutura macroscpica, existe tambm um mundo de dimenses
microscpicas.
As clulas so as unidades estruturais e funcionais dos seres vivos. Apesar da grande
diversidade existente entre os seres vivos consideram-se apenas dois tipos celulares bsicos: as
clulas procariotas e as eucariotas. As clulas procariotas apresentam menores dimenses e
caracterizam-se por no possurem um sistema de membranas que divida a clula em
compartimentos funcionais. Nestas o genoma est em contacto direto com a poro plasmtica.
As clulas eucariotas apresentam-se divididas em compartimentos funcionais graas
presena de um complexo sistema de membranas. Os principais componentes das clulas

32
eucariotas so o ncleo, o invlucro nuclear, o retculo endoplasmtico, o aparelho de Golgi, os
lisossomas, as mitocndrias e, nas clulas vegetais, os cloroplastos.
Atendendo diversidade existente entre os seres vivos, desde muito cedo houve a
preocupao de os classificar em grupos de identidade. O sistema de classificao de cinco
Reinos foi proposto por Whittaker em 1969, baseando-se no s nos diferentes nveis de
organizao celular, mas tambm nos principais tipos de nutrio. Assim, enquanto o Reino
Monera inclui o nvel de organizao procaritico, o Reino Protista corresponde ao nvel
eucaritico unicelular e os Reinos Plantae, Fungi e Animalia traduzem o nvel eucaritico e
multicelular.

2. MATERIAL
- Microscpio - Infuso de palha
- Lminas e lamnulas - Tradescantia sp.
- Lminas escavadas - Cebola
- Pinas e bisturis - Preparaes definitivas de bactrias
- Azul de metileno Iogurte
- Varetas de vidro - leo de imerso
- Lamparina

3. TCNICA

3.1 - Observao de clulas da epiderme do bulbo da cebola (Allium cepa L.)

1. Retire com uma pina, uma poro da epiderme interna de uma escama do bolbo da cebola.
2. Coloque-a sobre uma lmina com uma gota de gua.
3. Cubra com lamnula.
4. Observe ao microscpio e registe.
5. Deite uma ou duas gotas de azul de metileno ao longo de um dos bordos da lamnula. Com
papel de filtro, aspire na margem oposta at infiltrao do corante.

3.2 - Observao de clulas da epiderme do caule de Tradescantia sp.

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1. Corte um fragmento de caule com cerca de 3 cm.
2. Com a ajuda de uma pina retire uma poro da pelcula epidrmica.
3. Coloque-a sobre uma lmina com cuidado por forma a no dobrar.
4. Adicione uma gota de gua.
5. Coloque a lamnula.
6. Observe e registe.

3.3 - Observao de clulas do epitlio bucal

1. Desinfete o dedo indicador com lcool.
2. Raspe a parte interna da bochecha com a ponta do dedo.
3. Esfregue a ponta do dedo numa lmina e cubra-a com a lamnula.
4. Observe ao microscpio.
5. Deite uma ou duas gotas de azul de metileno ao longo de um dos bordos da lamnula. Com
papel de filtro, aspire na margem oposta at infiltrao do corante.

3.4 - Observao de bactrias do iogurte

1. Coloque um pouco de iogurte sobre uma lmina com o auxlio de uma vareta de vidro.
2. Passe a lmina trs ou quatro vezes sobre a chama da lamparina. Deixe arrefecer.
3. Deite uma ou duas gotas de azul de metileno e deixe atuar durante alguns minutos.
4. Lave a lmina com gua destilada e deixe secar.
5. Coloque uma gota de leo de imerso e cubra com lamnula
6. Observe e registe (utilize a objetiva de imerso - 100 X - colocando uma gota de leo).
(de imerso sobre a lamnula).


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Nota: No final desta sesso dever ficar completamente elucidado sobre o significado dos
termos como clulas procariotas e eucariotas, seres unicelulares e pluricelulares, seres
unicelulares procariotas e eucariotas, seres pluricelulares eucariotas, clulas animais e vegetais,
entre outros, bem como ficar com uma viso global sobre a grande diversidade celular que
constitui o mundo vivo.

Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Observao de clulas vegetais.

Material: Elodea (planta aqutica), lmina, pina, lamnula, conta-gotas, microscpio.

Procedimento:
1. Destaque uma folha inteira da planta, coloque-a no centro de uma lmina bem limpa.
2. Pingue uma gota de gua sobre a folha, ento a lamnula por cima sem deixar bolhas (vide aula
Utilizao do M.O.C.).
3. Focalize em 40x, 100x e 400x.
4. Note as clulas, seu formato, tamanho, membranas, cloroplastos.
5. Observe o movimento dos cloroplastos. O movimento realizado pelos orgnulos e hialoplasma
uma das propriedades do citoplasma que recebe o nome de ciclose.

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Esquematizar: Desenhe em 100x e 400x. No caso de dvidas, solicite o professor.

Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Dissociao do epitlio da mucosa oral.

Material: esptulas, lminas, lamnula, azul de metileno, conta-gotas.

Procedimento:
1. Com uma esptula especial, raspe a mucosa de dentro da bochecha.
2. Espalhe o material sobre o centro da lmina.
3. Acrescente uma gota de azul de metileno.
4. Coloque a lamnula (siga a mesma tcnica da aula anterior).
Esquematizar:
Voc vai fazer esquemas nos crculos correspondentes em 100x e 400x. No esquecer de colocar
legendas. Seu desenho deve se aproximar o mximo do real. No desenhe o que voc no v.

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Observaes:
Voc notar a presena de clulas epiteliais vistas de perfil, frente, isoladas e aglomeradas. Em
todas, possvel identificar o ncleo como uma pequena esfera intensamente corada em azul de
posio central. O citoplasma apresenta-se corado de azul mais claro e com presena de
minsculas granulaes. Quando voc for esquematizar, procure um grupo de clulas onde voc
possa isolar algumas para poder observar bem os detalhes citados acima.
Nome: ......................................................................... N. : ....... Turma: ...........
Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Observao dos componentes em clula vegetal viva.
Material: Cebola, vermelho neutro, gilete, vidro de relgio, pina, gua destilada, bequer, lmina,
lamnula, leo de imerso, M.O.C.
Procedimento:
1. Cortar longitudinalmente uma cebola.
2. Separar uma das camadas internas.
3. Retirar a epiderme externa (pelcula que envolve a camada).
4. Dividir a epiderme em 4 pedaos quadrados de mais ou menos 3 mm de lado.
5. Mergulhar os cortes em 1 ml de soluo de vermelho neutro contido em um vidro de relgio.
6. Passando um minuto, com a pina, retirar um dos pedaos da epiderme.
7. Lave-o em gua destilada dentro do bquer.
8. Coloc-lo entre lmina e lamnula.
9. Observe em 400x.
10. Passados cinco, dez e quinze minutos, observar, sucessivamente os cortes.

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Esquematizar: Desenhe em 1000x os 4 cortes. Responda as questes.
Observao:
* Corantes vitais so utilizados para observao de clulas vivas.
* Neste relatrio voc poder identificar parede celular, citoplasma, vacolo e ncleo.
Responda:
1. Ocorreu mudanas de cor em diferentes partes da clula? Por qu?
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
2. O tempo de imerso no corante teve algum efeito na distribuio da intensidade da cor?
________________________________________________________________
________________________________________________________________


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Nome: ......................................................................... N. : ....... Turma: ...........
Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Observao de vacolo e leucoplastos.
Material: Folha de Zebrina pndula, lmina, lamnula, conta-gotas, gua e M.O.C.

Procedimento:
1. Retire a epiderme inferior de uma folha de Zebrina e coloque-a numa lmina com 1 (uma) gota
de gua. Cubra com a lamnula.
2. Observe e esquematize utilizando as objetivas de 40x e 400x.
Observao:
Nas clulas de razes de plantas, por exemplo, as molculas de glicose provenientes das folhas
(sede da fotossntese) penetram nos leucoplastos, onde se transformam em amido.
Os leucoplastos repletos de amido passam a ser chamados de amiloplastos ou de gros de amido.
Sua funo servir de organela armazenadora de alimento para situaes de necessidade.

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Responda:
1. Que estruturas so visveis nas clulas de Zebrina?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________

2. Em que essas clulas diferem das clulas j observadas?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
____________________________________
3. Faa uma tabela comparativa das estruturas de uma clula animal e vegetal e assinale com (X)
quando a estrutura estiver presente .
Nome das estruturas clula animal clula vegetal
1-
2 -
3-
4-
5-
etc


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ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA N. .
Nome: ......................................................................... N. : ....... Turma: ...........
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Tema: Observao de clulas de Eldea

Material: Folha de eldea, lmina, lamnula, conta-gotas, lugol, microscpio
Procedimento:
1. Tome uma folha nova de eldea do pice do ramo, e coloque-a numa lmina.
2. Core com Lugol, espere alguns minutos
3. Observe no microscpio com aumento de 40x a 400x.
Que estruturas tornam-se visveis nas clulas coradas?
_________________________________________________________________
Essas clulas tm vacolo? Em que voc se baseia para responder?

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______________________________________________________________________________
____________________________________________________
O que limita as clulas de cebola, eldea e zebrina?
_________________________________________________________________
H diferenas entre o ncleo dessas clulas e os ncleos das clulas da cebola e zebrina?
_________________________________________________________________
H nuclolo nos ncleos das clulas dos trs materiais?
________________________________________________________________
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Tema: Movimento da gua atravs da membrana.
Material: Ramo de Eldea, gua destilada, 5 g de sal em 100 ml de gua (5%), lmina, lamnula,
papel de filtro, microscpio.
Procedimento:
1. Retire uma folha jovem de eldea (da ponta onde h crescimento).
2. Coloque sobre uma lmina com uma gota de gua e cubra com a lamnula.
3. Observe a folha em aumento de 40x, focalizando prximo nervura central, coloque em 400x e
desenhe a clula.
4. Pingue uma gota de soluo salina a 5% em um dos lados da lamnula e absorva com papel de
filtro no lado oposto. Observe pela ocular o que acontece s clulas. Aguarde alguns minutos e
desenhe a clula nesta situao.
5. Repita o experimento usando gua destilada no lugar da soluo.
6. Aguarde e desenhe.

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Responda:
1. Quando a folha de eldea est em soluo salina, qual o movimento da gua?
__________________________________________________________________
2. Quando em gua destilada, qual o sentido do movimento da gua?
__________________________________________________________________
3. Explique as modificaes observadas usando os termos hipotnica, hipertnica e osmose.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________
4. Certas conservas so feitas com salmoura. Voc capaz de explicar por que no ocorre ataques
dos microorganismos nesses alimentos?
______________________________________________________________________________
__________________________________________________________


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ROTEIRO PRTICO DE BIOLOGIA N. ................
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Tema: Prova de Permeabilidade seletiva na membrana.

Material: Suspenso de levedo em gua, soluo de vermelho congo, formol a 40%, 3 tubos de
ensaio, e lmina, conta-gotas, pina de madeira, bico de bunsen, M.O.C.
Procedimento
1. Colocar 2 ml de suspenso de levedo em cada um dos 3 tubos de ensaio.
2. Adicionar seis gotas de vermelho congo em cada um dos 3 tubos.
3. Somente no segundo adicionar 8 gotas de formol.
4. Somente o terceiro levar chama do bico de bunsen at ferver.
5. Preparar 3 lminas com uma gota do material sendo uma para cada um dos tubos preparados.
Esquematizar: Observar em 400x cada lmina.

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Responda:
1. O que Permeabilidade seletiva da membrana plasmtica?
2. Em que tubo houve mudana de colorao? Por qu?
3. Qual a influncia do formol?
4. Antes de findar a aula, observe novamente o 1 tubo. Houve alguma mudana? Explique.

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Tema: Permeabilidade Diferencial em Clulas Vivas

1. INTRODUO
A permeabilidade diferencial fundamental para a fisiologia da clula e para a
manuteno de condies fisiolgicas intracelulares adequadas, pois condiciona a entrada de
certas substncias, muitas das quais so necessrias para manter os processos vitais e a sntese de
novas substncias vivas, para alm de regular a sada de gua e de produtos de excreo, que
devem ser eliminados da clula.
Os estudos da permeabilidade so baseados na composio qumica e na organizao
molecular da membrana plasmtica, a qual estabelece uma clara diferenciao entre o lquido
intracelular e o extracelular, no qual a clula est imersa.
A membrana plasmtica e de uma maneira geral todas as membranas celulares so
constitudas por uma bicamada lipdica e por protenas que apresentam uma organizao vectorial
(fig. 1). Os lpidios das membranas so molculas anfipticas com as regies polares ou hidrfilas
orientadas para as superfcies interna e externa, enquanto que as regies apolares ou hidrfobas se
localizam no interior das membranas. As membranas apresentam natureza fluda gozando as

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molculas proticas de mobilidade lateral, no plano da membrana. As protenas so os principais
componentes funcionais das membranas celulares.

Fig. 1- Modelo de organizao das membranas biolgicas em mosaico fluido.

2. MATERIAL
- Folhas de Elodea sp. - Vermelho de Congo
- Lminas - Lamparinas
- Lamnulas - Pinas
- Papel de filtro - Copos de precipitao com gua
- Soluo de cloreto de sdio a 5% - Vidro de relgio
- Suspenso de leveduras - Tubos de ensaio

3. TCNICA
Exp.1
1. Coloque uma folha de Elodea sp. numa gota de gua numa lmina.
2. Coloque a lamnula e observe ao microscpio.
3. Coloque um pedao de papel de filtro em contacto com uma aresta da lamnula.
4. Adicione na outra extremidade da lamnula uma soluo de cloreto de sdio (NaCl) a 5%.

46
6. Retire a folha de Elodea sp. e coloque-a num copo de gua durante 5 minutos.
7. Volte a observ-la ao microscpio e registe as alteraes que observar.
8. Coloque agora a folha de Elodea sp. num vidro de relgio com uma soluo de NaCl a
5% durante 15 minutos.
9. Retire a folha e coloque-a numa lmina com uma gota da mesma soluo.
10. Observe e registe.

Exp.2
1. Coloque 1 ml de uma suspenso de leveduras em dois tubos de ensaio.
2. Adicione trs gotas de uma soluo de vermelho de Congo a cada um dos tubos.
3. Aquea at fervura a soluo de um dos tubos (faa esta operao com muito cuidado).
para no deixar "espirrar" a soluo).
4. Coloque uma gota de cada uma das solues em duas lminas e cubra com lamnula.

4. TPICOS DE DISCUSSO

Exp.1
1. Como explica as alteraes registadas nas clulas da folha de Elodea at ao passo 4?
2. Como explica as alteraes registadas no passo 6?
3. Como explica as alteraes registadas nas clulas da folha da Elodea aps 15 minutos na
soluo de cloreto de sdio a 5% ? (passo 9)

Exp.2
1. Que diferenas observou nas duas suspenses ?
2. Como explica esses resultados ?


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Tema: Observao de estmatos
Material: Folhas de Rhoeo ou Zebrina (planta terrestre), pina, lmina, lamnula, conta-gotas,
gua destilada e soluo salina.

Procedimento I:
1. Destaque uma folha, e retire com auxlio de pina um delgado fragmento da epiderme inferior.
2. Coloque-a na lmina limpa, pingue uma gota de gua destilada e coloque a lamnula.

Esquematizar:
Desenhe em 400x. Responda as questes depois de ler as observaes e ver o material no
microscpio.
Observaes:
Observe o contorno poligonal das clulas e o contedo avermelhado devido antocianina. Atente
para a disposio regular das clulas que no seu conjunto constituem o tecido epitelial de
revestimento.
Os estmatos so estruturas da epiderme especfica das folhas, responsveis pelas trocas gasosas e
transpirao. Cada estmato tem duas clulas guarda onde fica o ostolo cuja abertura depende da
turgescncia celular.


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Planta Face inferior Face superior
Cedrella 600 0
Ficus 145 0
Nymphaea (aqutica) 0 460
Helianthus (girassol) 325 175
Zea (milho) 68 52
A tabela nos d uma idia do nmero mdio de estmatos por mm2 de superfcie da folha.

Mecanismos de abertura e fechamento dos estmatos
Os estmatos permanecem abertos quando a folha est em presena de luz e h um bom
suprimento de gua. noite, ou quando h deficincia de gua, os estmatos se fecham..
Existe um mecanismo dependente do suprimento de gua (hidroativo) e outro dependente da luz
(fotoativo). Em qualquer caso, sabe-se que os estmatos abrem-se quando as clulas-guardas
esto trgidas, fechando-se quando elas perdem gua.
Quando est trgida, a clula-guarda fica arqueada devido ao reforo existente apenas na parede
interna (voltada para o ostolo). O aumento do volume da clula provoca a expanso da parede
oposta ao ostolo, o que puxa a parede interna pouco elstica, abrindo o estmato. A sada de gua
das clulas-guardas leva ao fechamento do estmato.
O mecanismo hidroativo devido ao suprimento hdrico disponvel, quando houver um bom
suprimento os estmatos estaro abertos Se houver deficincia estaro fechados. Esse mecanismo
protege o vegetal de uma transpirao excessiva, porm quando fechados fotossntese
prejudicada devido a maior dificuldade para absoro de gs carbnico.
O mecanismo fotoativo est ligado a fotossntese. De todas as clulas da epiderme, as nicas que
possuem cloroplastos so as clulas-guardas dos estmatos.

49
Quando a luz incide sobre as clulas-guardas, ocorre a realizao de fotossntese. Os cloroplastos
presentes nessas clulas retiram o CO
2
dissolvido no suco celular, o que o torna mais alcalino
(bsico). Assim as enzimas transformam o amido (insolvel) armazenado em glicose (solvel),
aumentando a concentrao celular. Logo a clula-guarda passa a absorver gua das clulas
anexas vizinhas, aumentando seu volume e abrindo os estmatos.
No escuro ocorre a respirao celular, consequentemente h a eliminao de CO2 e o processo
que ocorre o contrrio do citado acima, o que leva a diminuio da concentrao das clulas-
guardas e a perda de gua para as clulas anexas vizinhas.
Procedimento II
1. Introduza uma gota de soluo salina, encostando um papel de filtro do lado oposto. Observe ao
microscpio e anote o que acontece.
2. Substitua a soluo salina por gua destilada. Observe e anote o que acontece.
Responda
1. Por que a soluo salina muda o estado do estmato ? E a gua destilada?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________
2. Se um vegetal se encontra num local que possui grande umidade no solo e na atmosfera, e boa
iluminao, espera-se encontrar seus estmatos com ostolos abertos ou fechados?
_________________________________________________________________________
3. Explique com as suas palavras os fenmenos fotoativo e hidroativo dos estmatos.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
_____________________________________________________

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4. No que o pH interfere nesse processo?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________


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Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Observao de mitocndria em clulas vivas.
Material: Leveduras, lmina, lamnula, verde janus, conta-gotas, leo de imerso, , M.O.C.

Procedimento:
1. Preparar uma soluo de leveduras (fermento de po) e colocar uma gota sobre a lmina
2. Colocar uma gota de verde janus,
4. Cobrir com a lamnula.
Esquematizar: Desenhar o conjunto de clulas, observe no aumento de 1000x. Responder as
questes.

Observaes:
As mitocndrias so orgnulos citoplasmticos importantssimos (vide apostila de teoria ou livro).
Esta observao feita com corante vital (no mata a clula) especfico: o verde janus.
As mitocndrias so muito pequenas e a observao de tais orgnulos relativamente difcil e vai
precisar de muito empenho e boa vontade. Esta aula muito bonita. Vai valer a pena. Boa aula!


52

Responda:
1. Qual a funo da mitocndria?
________________________________________________________________________
2. Por que se utiliza o verde janus nessa prtica?
________________________________________________________________________


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Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............

Tema: Classificao dos cromossomos humanos e montagem do caritipo.

Material: fotografia de cromossomos humanos em metfase, tesoura, cola e lpis.

Procedimento:
1. Conte os cromossomos da pgina avulsa, fazendo um contorno em cada grupo de 10
cromossomos (aleatoriamente), deve sobrar alguns;
2. Anote o total de cromossomos encontrados
3. Os cromossomos so classificados de acordo com o tamanho e a morfologia, que est
relacionada com a posio do centrmero, e esto divididos em 7 grupos representados de A a G,
e ordenados decrescentemente.
4. Identifique os cromossomos do grupo A:
o par A1 o maior metacntrico,
o par A2 o maior submetacntrico
o par A3 metacntrico, o maior que sobrou.
5. Identifique os cromossomos do grupo B:
o par B4 o maior submetacntrico
o par B5 o maior submetacntrico - menor que o B4

54
6. Identifique os cromossomos do grupo D:
correspondem aos pares 13,14 e 15. Os trs pares so compostos pelos maiores acrocntricos, faa
um contorno em verde ao redor dos cromossomos;
7. Identifique os cromossomos do grupo F:
correspondem aos pares 19 e 20, so os menores metacntricos, faa um contorno em amarelo ao
redor deles;
8. Identifique os cromossomos do grupo G:
correspondem aos pares 21 e 22, que so os menores acrocntricos, faa um contorno em
vermelho ao redor deles. Se o caritipo pertencer ao sexo masculino, voc dever encontrar mais
um cromossomo, o cromossomo Y.
9. Identifique os cromossomos do grupo E:
o par E 16 o menor metacntrico que restou,
os pares 17 e 18 so os menores submetacntricos que restaram;
10. Identifique os cromossomos do grupo C:
so todos que restaram correspondem aos pares de 6 a 12, e mais o cromossomo sexual X, se for
um indivduo do sexo masculino haver um a mais se for do feminino ter dois a mais. Nesse
grupo basta apenas cont-los, deixe para separar os pares na hora que voc cort-los.


55

Ex


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Responda:
O caritipo preparado corresponde a qual sexo?

___________________________________ ______________
1 2 3 4 5
A B
_________________________________________________________________
6 7 8 9 10 11 12
C + 2X
__________________________________ _____________________________
13 14 15 16 17 18
D E
________________ _________________
19 20 21 22
F


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Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Simulao da 1 lei de Mendel
Material: Recipiente I e II contendo 20 pedras cada um (10 pedras marcadas com a letra A
maiscula e 10 com a letra a minscula).
Procedimento:
1. Sortear uma pedra do recipiente I e outra do recipiente II. Cada pedra corresponder a um gene
dos possveis gametas, e o par (um de cada recipiente) corresponder ao zigoto.
2. Fazer 100 sorteios tomando cautela de repor as pedras e de anotar os resultados.
3. Preencha a tabela abaixo e responda s questes propostas.

Indivduo X Indivduo Y
10 A 10 A
10 a 10 a
(A) gameta sorteado (a) gameta sorteado
(A a) zigoto formado
Probabilidades
Grupo I
Grupo II
Grupo III
Grupo VI

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Grupo V
Total Absoluto
Total Relativo
Responda:
1. Em que princpio baseia-se a primeira Lei de Mendel?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
_________________________________________________________
2. O resultado esperado, foi o obtido? Justifique.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
__________________________________________________________
3. Se A condicionasse um gene dominante e a um recessivo, qual a porcentagem fenotpica obtida
no final dessa experincia?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
_______________________________________________________________


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Prof.: ........................................................................... Data: ............/.............
Tema: Estudo dos tecidos animais
Material: Lminas prontas, M.O.C., leo de imerso.
Procedimento:
Leia o texto abaixo, esquematizando o que se pede nos aumentos determinados pelo professor.
Os animais possuem em sua organizao 4 tipos bsicos de tecidos.
1. Tecido epitelial: constitudo por clulas de forma regular encostadas umas s outras com
funo de revestimento e secreo. Utilize uma lmina de intestino para conhecer esse tipo de
tecido.
2. Tecido de sustentao: que subdividido em vrios tipos, sendo esta diviso referente ao
material que se localiza entre as clulas do tecido, como segue.
conjuntivo, para preencher espaos no organismo.
adiposo, constitudo por clulas que armazenam gordura.
hematopoitico, o que produz as clulas do sangue.
cartilaginoso, o material entre as clulas consistente.
sseo, o material entre as clulas rgido. Este tipo de tecido, voc vai conhecer observando
lminas de articulao de joelho onde aparecem cartilagem e osso.
3. Muscular: Este tecido constitudo por clulas alongadas, cuja caracterstica principal e a
capacidade de contrao. Voc ir conhec-lo observando lminas do corao.
4. Nervoso: constitudo por clulas com abundante prolongamento especializados em receber
estmulos e transmitir impulsos. Esse tecido tem funo de coordenao e ser observado na
lmina do crebro.

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BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA

ALBERTS, B., BRAY, D., LEWIS, J., RAFF, M., et al. Biologia Molecular da Clula. 4 ed.,
Porto Alegre: ARTMED, 2004.
JUNQUEIRA, L.C.U., CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 7 ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2000.
DE ROBERTIS, E.D.P., DE ROBERTIS, E.M.F. Bases da Biologia Celular e Molecular. 3
ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000.

Muitas Prat

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