ANALISIS KEHALALAN OBAT DAN KOSMETIK

MENGGUNAKAN
FOURI ER TRANSFORM I NFRARED SPECTROMETRY
(FTIR)
Makalah ini diajukan untuk memenuhi tugas Mata Kuliah Analisis Kehalalan Obat dan Makanan II


Disusun oleh:
Rahmi Sertiana N. A. 1111102000085
Rizka Nurbaiti 1111102000091
Nindya Nur F. 11111020000
Ana Yuliana 1111102000109
Raaflyan Wahyu 1111102000112
Ahmad Rifqi 1111102000
Farmasi 6-D

PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2014
A. TEORI FTIR (FOURI ER TRANSFORM I NFRARED SPECTROMETRY)

1. Prinsip Kerja

FT-IR merupakan singkatan dari Fourier Transform InfraRed, metode yang disukai
pada spektroskopi inframerah. Dalam spektroskopi inframerah, radiasi IR dilewatkan melalui
sampel. Beberapa radiasi inframerah diserap oleh sampel dan sebagian dilewatkan
(ditransmisikan). Spektrum yang dihasilkan merupakan penyerapan molekul dan transmisi,
menciptakan sidik jari (finger print) molekul sampel. Seperti sidik jari (finger print), tidak
ada dua struktur molekul yang unik menghasilkan spektrum inframerah yang sama.

Spektroskopi inframerah telah menjadi teknik yang menarik untuk analisis suatu
bahan di laboratorium selama 70 tahun. Spektrum inframerah menghasilkan sidik jari (finger
print) pada sampel dengan puncak absorbsi yang berhubungan dengan frekuensi vibrasi
antara ikatan atom-atom yang membentuk senyawa tersebut. Karena masing-masing senyawa
terdiri dari kombinasi beberapa atom yang unik, sehingga tidak ada dua senyawa yang
menghasilkan spektrum inframerah yang tepat sama.
Instrumen inframerah yang asli merupakan tipe dispersi. Instrumen ini memisahkan
frekuensi masing-masing energi yang diemisikan dai sumber inframerah. Hal ini tercapai
dengan penggunan sebuah prisma atau kisi. Sebuah prisma inframerah bekerja tepat sama
seperti prisma visible yang memisahkan cahaya yang terlihat kedalam warnanya (frekuensi).
Kisi merupakan elemen dispersi yang lebih modern yang memiliki daya pemisahan frekuensi
energi inframerah yang lebih baik. Detektor mengukur sejumlah energi pada masing-masing
frekuensi yang telah melewati sampel. Hasil ini dalam spektrum yang merupakan plot dari
intensifitas vs. frekuensi.
Fourier Transform Infrared (FT-IR) spektrometri dikembangkan dalam rangka untuk
mengatasi keterbatasan yang dihadapi dengan instrumen dispersif. Kesulitan utama adalah
proses scanning yang lambat. Sebuah metode untuk mengukur semua frekuensi inframerah
secara bersamaan, bukan secara individual, diperlukan. Sebuah solusi dikembangkan
menggunakan perangkat optik yang sangat sederhana disebut interferometer. Interferometer
menghasilkan sinyal dengan jenis yang unik yang semua frekuensi inframerah "dikodekan"
ke dalamnya. Sinyal dapat diukur dengan sangat cepat, biasanya pada urutan kedua atau lebih.
Dengan demikian, elemen waktu per sampel direduksi menjadi hitungan beberapa detik lebih
dari beberapa menit.
Kebanyakan interferometer menggunakan beamsplitter yang mengambil sinar
inframerah yang masuk dan membaginya menjadi dua balok optik. Satu balok mencerminkan
satu cermin datar yang tetap di tempatnya. Sinar lain mencerminkan cermin datar yang pada
mekanismenya dapat bergerak mendekat ataupun menjauh dari beamsplitter. Kedua balok
kemudian digabungkan ketika mereka bertemu kembali di beamsplitter. Karena panjang
jalannya salah satu berkas adalah tetap dan yang lainnya terus berubah, sinyal yang keluar
dari interferometer adalah hasil dari dua berkas tersebut. Sinyal yang dihasilkan disebut
interferogram yang memiliki sifat unik yang setiap titik data (fungsi dari posisi cermin
bergerak) yang membentuk sinyal memiliki informasi tentang setiap frekuensi inframerah
yang berasal dari sumber.

Hal ini berarti bahwa semua frekuensi sedang diukur secara bersamaan. Dan akan
terukur pada interferogram Dengan demikian, penggunaan interferometer menghasilkan
pengukuran yang sangat cepat.
Karena memerlukan spektrum frekuensi (plot intensitas pada masing-masing
frekuensi individual) untuk membuat identifikasi, sinyal interferogram yang diukur tidak
dapat ditafsirkan secara langsung. Sebuah cara "decoding" frekuensi individu diperlukan. Hal
ini dapat dicapai melalui teknik matematika terkenal yang disebut Fourier Transformation.
Transformasi ini dilakukan oleh komputer yang kemudian menyajikan pengguna dengan
informasi spektral yang diinginkan untuk analisis.

2. Proses Analisis Sampel

a. Sumber energi
Energi inframerah dipancarkan dari sumber benda hitam bercahaya. Sinar ini
melewati lobang yang mengontrol jumlah energi yang disampaikan kepada
sampel, sebelum akhirnya menuju detektor.
b. Interferometer
Sinar memasuki interferometer dimana "spectral encoding" terjadi. Sinyal
interferogram yang dihasilkan kemudian keluar interferometer.
c. Tempat sampel
Sinar memasuki kompartemen sampel dimana sinar akan ditransmisikan atau
terpantul dari permukaan sampel, tergantung pada jenis analisis yang
dilakukan. Di sinilah frekuensi energi tertentu yang unik akan diserap oleh
sampel.
d. Detektor
Sinar akhirnya menuju detektor untuk pengukuran akhir. Detektor yang
digunakan secara khusus dirancang untuk mengukur sinyal interferogram.
e. Komputer
Sinyal yang diukur adalah digital dan dikirim ke komputer dimana
Transformasi Fourier terjadi. Spektrum inframerah yang terakhir ini kemudian
disajikan kepada pengguna untuk interpretasi dan tindakan lebih lanjut.

Karena perlu ada skala relatif untuk intensitas absorpsi, spektrum background juga
harus diukur. Hal ini biasanya pengukuran tanpa sampel dalam berkas. Hal ini dapat
dibandingkan dengan pengukuran sampel dalam berkas untuk menentukan persen
transmitansi. Dengan demikian, semua fitur spektral yang hadir murni karena sampel. Sebuah
pengukuran background tunggal dapat digunakan untuk berbagai pengukuran sampel karena
spektrum ini adalah karakteristik dari instrumen itu sendiri.

3. Keuntungan dan Kekurangan

- Kecepatan, karena semua frekuensi diukur secara bersamaan. Kebanyakan
pengukuran oleh FT-IR dilakukan dalam hitungan detik bukan beberapa menit.
- Sensitivitas. Sensitivitas secara dramatis ditingkatkan dengan FT-IR karena berbagai
alasan. Detektor yang digunakan jauh lebih sensitif, throughput optik jauh lebih tinggi
tetapi menghasilkan tingkat kebisingan yang lebih rendah, dan scan yang cepat.
- Teknik yang sederhana. Hanya cermin bergerak dalam interferometer yang
merupakan bagian yang terus bergerak dalam instrumen. Dengan demikian, hanya
sedikit kemungkinan terjadinya kerusakan mekanis.
- Kalibrasi Internal. Instrumen ini menggunakan laser HeNe sebagai panjang
gelombang internal yang telah terkalibrasi standar. Instrumen ini akan mengkalibrasi
diri dan tidak perlu dikalibrasi oleh pengguna .
Keuntungan ini, membuat pengukuran yang dilakukan oleh FT-IR sangat akurat dan
reproducible. Dengan demikian, teknik ini merupakan teknik yang sangat handal untuk
identifikasi hampir semua sampel. Manfaat sensitivitas memungkinkan identifikasi bahkan
kontaminan terkecil. Hal ini membuat FT-IR alat yang sangat berharga untuk pengendalian
kualitas atau aplikasi jaminan kualitas.

































































APLIKASI FTIR (FOURI ER TRANSFORM I NFRARED SPECTROMETRY)









Analisis Potensi Pemalsuan Lemak dalam Coklat dan
Produk Coklat Menggunakan Fourier Transformasi
Inframerah Spektroskopi
Y.B. Che Man, Z.A. Syahariza, M.E.S. Mirghani, S. Jinap, J. Bakar

ABSTRAK
Transformasi Fourier inframerah (FTIR) spektroskopi, dalam kombinasi dengan reflektansi total
dilemahkan (ATR) dan parsial kuadrat terkecil (PLS) regresi, digunakan untuk mendeteksi
keberadaan lemak babi dalam formulasi coklat. Ikatan spektral yang berhubungan dengan lemak babi,
cocoa butter dan campurannya (berkisar antara 0% sampai 15% dari lemak babi dalam cocoa butter)
telah tercatat, ditafsirkan dan diidentifikasi. Pendekatan semi-kuantitatif diusulkan untuk mengukur
persentase lemak babi dalam campuran berdasarkan data spektral pada daerah frekuensi 4000-650 cm
-
1
, menggunakan persamaan y = 0.9225x 0,5539. Koefisien determinasi (R2) adalah 0,9872 dengan
standard error (SE) dari 1.305. Dalam tulisan ini, potensi spektroskopi FTIR sebagai alat analisis
cepat untuk penentuan kuantitatif pemalsuan, terutama lemak babi, dalam cokelat, telah ditunjukkan.
1. Pendahuluan
Penentuan keaslian makanan dan deteksi pemalsuan merupakan isu utama dalam industri
makanan, dan menyebabkan kekhawatiran di kalangan konsumen dan perhatian khusus antara
produsen makanan. Masalah keaslian utama menyangkut pelabelan makanan dengan benar dimana
substitusi bahan baku bernilai tinggi dengan bahan yang lebih murah adalah praktek yang umum (Al-
Jowder, Kemsley, & Wilson, 1997). Hal ini terutama untuk peningkatan harga produk, dimana
diperoleh imbalan keuangan yang potensial sebagai ganti dari bahan baku yang murah (Lai, Kemsley,
& Wilson, 1995). Pemalsuan lemak terbagi dalam dua kategori utama: minyak nabati dan lemak, dan
lemak tubuh hewan. Pemalsuan dengan lemak dan minyak nabati dapat dideteksi dengan beberapa
teknik kromatografi lapis tipis sementara hewan pemalsuan lemak tubuh lebih sulit untuk dideteksi.
Di beberapa negara, produsen makanan memilih untuk campuran minyak nabati dengan
lemak babi untuk mengurangi biaya produksi karena lemak babi adalah lemak termurah saat ini dan
biasanya tersedia untuk industri makanan. Lard atau lemak babi industri dimodifikasi bisa secara
efektif dicampur dengan minyak nabati lain untuk menghasilkan shortening, margarin dan minyak
makanan khusus lainnya (Marikkar, Lai, Ghazali, & Che Man, 2002). Daging babi dan lemak babi
dalam makanan adalah masalah serius dalam pandangan keprihatinan agama, komplikasi biologis dan
risiko kesehatan yang berhubungan dengan asupan harian (Rashood, Abdel-Moety, Rauf, Abou
Shaaban, & Al-Khamis, 1996). Dari sudut pandang agama, Islam, Yahudi dan Hindu melarang
pengikutnya dari mengkonsumsi setiap makanan yang mengandung bahan babi (Al-Qaradhawi, 1995).
Cokelat adalah salah satu makanan ringan dan minuman paling populer di seluruh dunia.
Chocolate didefinisikan sebagai produk homogeny yang diperoleh dari campuran satu atau lebih dari
komponen-komponen berikut: cocoa nib, massa kakao, cocoa press cake, coklat bubuk, dengan atau
tanpa penambahan cocoa butter dan bahan opsional dan / atau agen penyedap yang diperbolehkan
(Codex Alimentarius, 1981). Selain cocoa butter, penambahan yang terbatas (hingga 5%) dari lemak
nabati lainnya juga diperbolehkan. Lemak asing biasanya ditambahkan ke coklat adalah cocoa butter
equivalent (CBE), cocoa butter substitutes (CBS), dan cocoa butter replacers (CBR) (Simoneau,
Hannaert, & Anklam, 1999). Untuk alasan ekonomi, beberapa industri kecil dan menengah di negara-
negara berkembang menambah lemak babi cokelat dan produk cokelat.
Di bidang analitis, spektroskopi FTIR telah mendapat perhatian untuk digunakan dalam
analisis kuantitatif lemak dan minyak (Guillen & Cabo, 1997b). Penelitian sebelumnya juga telah
menunjukkan potensi spektroskopi FTIR sebagai metode untuk mendeteksi pemalsuan. Lai et al.
(1995) melaporkan bahwa analisis kuantitatif pemalsuan potensi extra virgin minyak zaitun dapat
dilakukan dengan menggunakan spektroskopi FTIR. Guillen dan Cabo (1997a) juga menggunakan
spektroskopi FTIR untuk mengkarakterisasi minyak nabati dan lemak babi. Baru-baru ini, Che Man
dan Mirghani (2001) mengembangkan metode spektroskopi FTIR untuk mendeteksi lemak babi
dalam campuran lemak hewan lain, seperti ayam, domba dan sapi. Selain itu, spektroskopi FTIR juga
digunakan sebagai alat untuk deteksi cepat lemak nabati lainnya dicampur dalam cocoa butter
(Goodacre & Anklam, 2001).
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki penggunaan spektroskopi FTIR untuk
mendeteksi keberadaan potensi lemak dalam coklat dan coklat produk yang tersedia di pasar, fokus
pada penambahan lemak babi untuk cocoa butter, sebagai bahan utama dalam formulasi coklat.

BAHAN DAN METODE
2.1. PREPARASI SAMPEL
Sampel Lard diekstraksi dengan rendering (proses pemurnian lemak) adiposa jaringan dari
berbagai bagian dari babi yang disembelih, yang diperoleh dari Seri Kembangan, Selangor, Malaysia.
Rendering dilakukan pada 90-100
0
C selama 2 jam di oven. Lemak mencair di letakan pada
triplefolded kain kasa, dikeringkan dengan penambahan anhidrat Na
2
SO4 dan kemudian disentrifugasi
pada 3000 rpm (Kubota Model 2010, Tokyo, Jepang) selama 20 menit. Lapisan lemak didekantasi,
kemudian dikocok dengan baik dan disentrifugasi lagi kemudian disaring melalui kertas saring
Whatman. Sampel yang disaring disimpan dalam wadah tertutup rapat di bawah blanket nitrogen
dalam lemari es. Sepuluh merek susu coklat dan coklat produk yang dibeli dari supermarket lokal.
Ekstraksi lemak dilakukan dengan menggunakan metode Soxhlet (PORIM, 1995).
2.2. STANDAR KALIBRASI
Sampel Cocoa butter diperoleh dari premium vegetable oil. Kalibrasi disiapkan dengan standar
lemak babi dengan rasio tertentu, terdiri dari rentang 0-15%. Semua campuran disiapkan pada basis
dan dihitung penambahan konsentrasi lemak yang tepat . Lemak murni (standar) dan sampel
dianalisis dengan menggunakan spektroskopi FTIR.
2.3. AKUISISI SPECTRA
Spektrum FTIR yang digunakan adalah Perkin Elmer- 1725 series FTIR spektrofotometer
(Perkin Elmer-Corporation, Norwalk, Connecticut, USA) dilengkapi dengan deuterated triglycine
sulphate (DTGS) detector dan terhubung ke model PerkinElmer model 7300 PC operating under
Infrared data System (IRDM) software. Sampel Itu ditempatkan pada ATR element (ZnSe crystal, 45
o

ends) pada suhu kamar. Sampel dibaca pada range 4000-650 cm
- 1
dengan 32 scan pada resolusi 4
cm
- 1
dengan apodisasi kuat. Semua Spektrum dibandingkan terhadap spectrum blanko dan setiap
nilai absorbansi disimpan sebagai data. Semua sampel discan dua kali.
2.4. ANALISIS STATISTIK
Program software Spectrum QUANT + versi 4.1 (Perkin-Elmer) digunakan untuk membuat
kalibrasi. adekuasi kalibrasi pertama dinilai untuk menentukan kesesuaian nilai stadar dan nilai
prediksi 25 sampel pada FTIR yang digunakan selama proses kalibrasi. Pendekatan partial least
squares (PLS) dikembangkan sebagai perlakuan data FTIR secara matematis. Untuk persamaan PLS,
penilaian akurasi didasarkan pada standard error (SE) terkecil dan koefisien determinasi (R2).
2.5. VALIDASI
The leave-one-out cross validation procedure digunakan untuk mem-verifikasi model kalibrasi.
Standard error dari prediksi dan R2 digunakan sebagai kriteria validitas untuk kalibrasi. Langkah
validasi Lebih lanjut diamati menggunakan mean difference (MD) dan standard deviation of
difference (SDD) untuk mengetahui reproduksibilitas dan akurasi.
HASIL DAN DISKUSI
3.1 . Spectra
Dua puluh lima sampel digunakan untuk kalibrasi dan validasi untuk PLS metode kuantitatif.
Gambar. 1 menunjukkan spektrum untuk cocoa butter murni dan lemak babi pada rentang frekuensi
4000-650 cm
-1
. Spektrum cocoa butter menunjukkan karakteristik pita serapan untuk minyak nabati
pada umumnya (Safar, Bertrand, Robert, Devaux, & Genot, 1994).




Perbedaan terbesar antara spektrum dari dua sampel tersebut, karena intensitas ikatan, sehingga
dapat diamati dengan mata telanjang, pada serapan sekitar 3006 cm
-1
(pita b), 1238 cm
-1
(pita i),
1163 cm
-1
(pita j), 1118 cm
-1
(pita k), 1097 cm
-1
(pita l), dan 723 cm
-1
(pita m) (Guillen & Cabo,
1997a).
Kedua spektrum menunjukkan sebuah pita kecil, a, dekat 3464 cm
-1
, yang berhubungan dengan
overtone serapan karbonil ester gliserida. Sebuah puncak, b, kira-kira 3006 cm
-1
, teramati di kedua
spektrum. Hal ini dikarenakan peregangan getaran ikatan rangkap cis olefin. Kedua peregangan pita
metilen asimetris, c, kira-kira 2924 cm
-1
dan pada pita simetris metilen, d, pada 2853 cm
-1
, jelas
terdapat pada kedua sampel.
Kelompok C=O trigliserida menunjukkan peregangan getaran pita, e, kira-kira 1746 cm
-1
.
Peregangan modus C=C olefin tak terkonjugasi biasanya menunjukkan moderat untuk penyerapan
lemah pada 1667-1640 cm
-1
. Dalam contoh, salah satu pita kecil, f, terdeteksi pada 1648 cm
-1
.
Pita antara 1400 cm
-1
dan 1000 cm
-1
adalah yang paling sulit untuk ditetapkan. Namun, di
wilayah ini, perbedaannya pada mata pada Gambar. 1 juga yang paling signifikan. Pada sekitar 1465
cm
-1
, g, masing-masing spektra menunjukkan pita scissoring, pada getaran lentur dari kelompok
metilen.
Sebuah pita, h, pada 1377 cm
-1
bisa disebabkan oleh getaran lentur simetris kelompok metil.
Kelompok pita berikut, i, j, k, dan l, pada sekitar 1238, 1163, 1118 dan 1097 cm
-1
, masing-masing,
dan bahu, m, kira-kira 723 cm
-1
hasil dari tumpang tindih metilen getaran rocking dan out-of -plane
bending getaran olefin cis - disubstitusi.
Region 4000-650 cm
-1
digunakan untuk prediksi menggunakan teknik statistik PLS untuk
mengembangkan kalibrasi dari spektra FTIR dan data aktual. Gambar. 2 menunjukkan spektra FTIR
untuk cocoa butter, lemak babi dan beberapa campuran cocoa butter - lard dengan rasio tertentu.

3.2. PLS kalibrasi dan cross- validasi
Kekuatan PLS didasarkan pada kemampuannya untuk menggunakan informasi spektral dari
daerah spektral yang luas dan untuk mengkorelasikan perubahan spektral dalam konsentrasi
komponen yang menarik sekaligus akuntansi untuk kontribusi spektral lain yang mungkin
mengganggu spektrum. Sebuah model kalibrasi PLS dikembangkan berdasarkan standar kalibrasi
yang termasuk perbedaan berat yang tertimbang dari campuran lemak babi dan cocoa butter.
Gambar. 3 memplot data dari data aktual terhadap PLS FTIR diprediksi data untuk konten
lemak babi dalam cocoa butter menggunakan tipe tanpa dasar. Sebuah regresi linear yang baik dari
nilai aktual terhadap FTIR diprediksi nilai diperoleh (y = 0.9225x 0,5539) dengan standar deviasi
(SD) 3,7875.

Tabel 1 membandingkan nilai prediksi FTIR dan nilai yang sebenarnya dari konten lemak babi
dalam hal MD dan SDD untuk akurasi keseluruhan (a) dan pengulangan (r). Keakuratan Istilah
didefinisikan sebagai kesepakatankedekatan antara data aktual dan hasil FTIR yang diprediksi. Low
MDA dan SDDa (0,2325, 0,3923), masing-masing, menunjukkan bahwa FTIR bagus dalam
menentukan pemalsuan lemak babi. Sementara itu, MDR rendah dan SDDr (0,2072, 0,4064), masing-
masing, menunjukkan bahwa metode FTIR memiliki pengulangan yang cukup tinggi. SD-nya yang
relatif terhadap rata-rata dari metode analisisnya dinyatakan sebagai koefisien variasi (CV). Telah
dikemukakan bahwa CV <20 % sudah cukup untuk sebagian besar tujuan analisis. CV yang diperoleh
dari data prediksi PLS FTIR dan data aktual adalah 5,209 %.


KESIMPULAN
Dari studi ini, kami menyimpulkan bahwa spektroskopi FTIR, dikombinasikan dengan
ATR dan regresi PLS, dapat digunakan untuk menentukan kandungan lard (lemak babi) yang
tercampur dalam cocoa butter. Hasil dari pekerjaan ini memberikan beberapa informasi dasar
tentang deteksi lemak babi di sampel cokelat di masa mendatang. Deteksi lard campuran akan
diperluas ke berbagai jenis lemak yang biasa digunakan dalam produksi cokelat, cocoa butter
substitutes (CBS), cocoa butter equivalents (CBE) dan cocoa butter replacers (CBR).
Dengan total waktu analisis kurang dari 2 menit dan sampel kurang dari 2 ml, spektroskopi
FTIR menawarkan kecepatan, akurasi, biaya yang murah dan alat yang ramah lingkungan
dalam analisis kuantitatif dari pemalsuan produk.









































DAFTAR PUSTAKA


ThermoNIcolet. 2001. Introduction to Fourier Infrared Spectrometry. ThermoNIcolet:USA.