Este documento describe un experimento para estudiar la solubilidad de las proteínas del huevo mediante la adición de diferentes solventes. El objetivo es observar cómo reaccionan las proteínas de la clara de huevo al añadir agua, sales y ácidos, y clasificar las proteínas según su solubilidad. Se prepara una solución de albúmina al 25% y se añaden diferentes reactivos para inducir la precipitación. Los resultados muestran que la albúmina precipita con sulfato de amonio, iones de plomo, y vari
Este documento describe un experimento para estudiar la solubilidad de las proteínas del huevo mediante la adición de diferentes solventes. El objetivo es observar cómo reaccionan las proteínas de la clara de huevo al añadir agua, sales y ácidos, y clasificar las proteínas según su solubilidad. Se prepara una solución de albúmina al 25% y se añaden diferentes reactivos para inducir la precipitación. Los resultados muestran que la albúmina precipita con sulfato de amonio, iones de plomo, y vari
Este documento describe un experimento para estudiar la solubilidad de las proteínas del huevo mediante la adición de diferentes solventes. El objetivo es observar cómo reaccionan las proteínas de la clara de huevo al añadir agua, sales y ácidos, y clasificar las proteínas según su solubilidad. Se prepara una solución de albúmina al 25% y se añaden diferentes reactivos para inducir la precipitación. Los resultados muestran que la albúmina precipita con sulfato de amonio, iones de plomo, y vari
Observar las distintas reacciones de las protenas de la clara de huevo disuelta en agua ante la adicin de solventes. Clasificar las protenas de la clara para su posterior aplicacin en la industria.
II. FUNDAMENTO
El mtodo se basa en la capacidad de solubilizacin de las protenas ante la adicin de sales, como de tipo metlico, que tienen la capacidad de formar agregados con las protenas.
III. PARTE EXPERIMENTAL
MUESTRA: - Huevo MATERIALES: - Tubos de ensayo - Beackers - Bagueta - Pipetas - Piscetas - Pinza de tubo - Bombilla - Mechero - Rejilla de asbesto - Soporte metlico REACTIVOS: - Cloruro de sodio al 10% - Acetato de plomo (saturado) - cido tricloroactico al 10% - Sulfato de amonio (saturado) - cido tnico al 5% - cido actico 0.05N - cido clorhdrico (concentrado) - cido sulfosaliclico PROCEDIMIENTO:
PREPARACIN DE ALBMINA AL 25%:
- Se separaron las claras de la yema del huevo y se realiz un batido ligero. - Se diluy la clara agregando el 75% de agua destilada, se midi el pH y se procedi a filtrar.
REACCIONES REVERSIBLES E IRREVERSIBLES PRECIPITACIN DE ALBMINAS a) Tubo N1: - Se agreg a 5 ml de solucin de albmina, 1.5 g de sulfato de amonio. Y se agit enrgicamente hasta disolver la sal.
b) Tubo N2: - Se agreg a 5ml de solucin de albmina, 5ml de solucin de sulfato de amonio saturada.
Observacin: No se procedi a filtrar debido a que no se formaron los copos de albmina.
COAGULACIN DE ALBMINAS
- Se coloc en un tubo de ensayo 5ml de solucin de albmina y se agreg agua destilada. - Se coloc el tubo en un vaso de precipitado con contenido de agua y se somet a calentamiento.
PRECIPITACIN POR ACCIN DE IONES PESADOS - Se coloc en un tubo de ensayo 2 ml de solucin de albmina. - Se agregaron 3 gotas de Acetato de plomo (CH 3 COOPb) saturado.
Observacin: Se form precipitado de color blanco lechoso con puntos amarillos. - Se agreg una lenteja de hidrxido de sodio (NaOH) concentrado y se someti a calentamiento.
Observacin: Se form precipitado de color blanco lechoso con puntos amarillos.
1. Precipitacin por accin de cidos: Colocamos 4 tubos de ensayos con 2 ml de solucin de albumina y a continuacin agregar: 4 ml de acido tricloroacetico al 10% :
4 ml de acido tnico al 5% :
1 ml de acido clorhdrico c.c. :
4 ml de acido sulfosalicilico :
2. Precipitacin por alcohol : Colocamos en 2 tubos de ensayo, 3ml de solucin de albumina. Le agregamos solo alcohol.
Le agregamos ClNa y Alcohol
IV. RESULTADOS: A: solucin albumina 25% NOMBRE DE LA RX. REACCIN RESULTADO Pp de albmina 5ml A + 1.5g (NH 4 ) 2 SO 4 agitar Cogulos blanco lechoso Coagulacin de albmina 5ml A + 5ml(NH 4 ) 2 SO 4 filtar, agregar agua Pequeos cogulos blancos Coagulacin de albmina 5ml A+ H 2 O calentar No se dio la coagulacin Pp iones pesados 5ml A+Pb(C 2 H 3 O 2 ) 4 +NaOH calentar Precipitado color negro (SPb) Pp por cidos 2ml A+4 ml a. tricloroactico (10%) Cogulos blanco lechoso 2ml A+4 ml a. tnico (5%) Precipitado color maz 2ml A+1 ml HCl (cc) Precipitado 2ml A+4 ml a. sulfosaliclico (5%) Precipitado translcido Pp por alcohol 3ml A+ClK+ 3 ml OH Presencia de dos fases Precipitado transparente 3ml A + 3 ml OH Formacin de un anillo en el centro del tubo
V. CUESTIONARIO: a) Qu entiendes por solubilidad de las protenas? Se entiende que la solubilidad de las protenas se ven afectadas por la composicin Inica y pH del medio, as mismo ante la presencia de otros solventes. Puesto que las protenas son electrolitos (multivalente) se comportan de modo similar a los electrolitos simples, y por lo tanto, son susceptibles a la concentracin inica del medio. Teniendo en cuenta que Diferentes protenas tienen diferentes propiedades de solubilidad, por lo que cuando una protena es soluble las otras precipitan. b) Qu factores pueden afectar la solubilidad de las protenas? La Concentracin inica del medio, debido a que las protenas son electrolitos multivalente, se comportan como electrolitos simples, y por lo tanto son sensibles a la concentracin inica del medio, a medida que esta aumenta, mayor es la solubilidad de las protenas porque las cargas elctricas de esta se estabilizan. Sin embargo en concentraciones bastantes altas, la solubilidad de las protenas disminuyen hasta hacerse tan bajas que precipitan. El pH del medio, cuando este es igual al punto isoelctrico de la protena, esta pierde su carga elctrica neta y con ello su solubilidad, llegando a precipitar en algunos casos. La presencia de solventes orgnicos como la cetona, etanol, metanol, entre otras; disminuyen la capacidad de los solventes acuosos para separar y solubilizar a los grupos cargados de las protenas. La temperatura del medio (del solvente), al aumentar la temperatura de los solventes y en las molculas de la protena, la agitacin trmica es tal, que la organizacin espacial caracterstica de las molculas de las protenas se modifica, llegando a ser un arreglo anormal perdiendo sus propiedades como la actividad biolgica, enzimtica y/ fisicoqumicas. c) Indique otro tipo de factores de clasificacin de protenas. Sealar la clasificacin. Desde un punto de vista qumico, podemos distinguir protenas simples y protenas conjugadas. En la primera toda estructura es polipeptidica, en la segunda existe adems un grupo no peptidico llamado grupo prosteico ( en este segundo caso se emplea tambin la siguiente nomenclatura: apoproteina a la parte polipeptidica de la molecula y holoproteina1 a la protena entera; es decir, al conjunto de la apoproteina mas el grupo prottico. En cuanto a su forma molecular, las protenas pueden ser globulares, en las que la cadena polipeptidica aparece enrollada sobre si misma dando una estructura ms o menos esfrica y compacta; y fibrosas, en las que una dimensin es predominante sobre las dems. Estas ltimas suelen tener ante todo funciones estructurales. Existen protenas que constan de varias cadenas polipeptdicas: son las protenas oligomricas (de las que tambin decimos que tienen estructura cuaternaria). otras por el contrario, constan de un solo polipptido: son las protenas monomricas Asi mismo hay que indicar, que la primera clasificacin que se intento aluda a caractersticas de solubilidad. No ha persistido esta clasificacin, pero sin embargo conservamos de ella algunos nombres comunes de protenas. As, un grupo estaba constituido por las albuminas, que son la categora mas soluble de las protenas, sindolo por ejemplo en agua destilada. Las globulinas tienen una solubilidad parecida, pero no es en agua destilada. Las prolaminas son protenas solubles en alcohol, y las glutelinas solo son solubles en acido o base. Las escleroproteinas son aquellas protenas insolubles en la gran mayora de los solventes. Cabe mencionar que tambin se clasifican por: Por su composicin (simples o conjugadas) -simples u Holoproteinas: son aquellas que por hidrlisis total dan solo aminocidos. - conjugadas o heteroproteinas, son aquellas que por hidrlisis producen no solamente aminocidos, sino tambin otros componentes organicos o inorgnicos. Por su conformacin de la protena, es la forma tridimensional caracterstica que posee en su estado nativo. (fibrosa, globulares) Por su grupo prosttico, son las protenas conjugadas que se clasifican atendiendo a la naturaleza de su grupo prosttico. Por su funcin biolgica: - Enzimas, son catalizadores biolgicos muy especficos. Algunas enzimas son ms especializadas y adems de su actividad cataltica tienen funcin reguladora, son las enzimas alostericas. - Protenas de reserva, almacenan aminocidos como elementos nutritivos, como la casena y la ovoalbmina. - Protenas transportadoras: capaces de unirse y tranpostar tipos especficos de molculas como la: seroalbumina, hemoglobina y la mioglobina. - Protenas protectoras: tienen funcin de defensa como los anticuerpos y fibringeno. - Protenas contrctiles: actan como elementos esenciales en sistemas motiles y contrctiles como la miosina y actina. - Hormonas: son moduladoras de las funciones organismo: insulina y la hormona del crecimiento. - Protenas estructurales: actan como elementos estructurales, son las escleroproteinas como el colgeno, elastina y queratina.
d) Qu es lo que demuestra la reaccin de color negro producida durante la precipitacin por accin de iones pesados? Demuestra que es una reaccin caracterstica para grupos sulfhidrilos, esta reaccin de plomo da positivo para CISTEINA. Los metales pesados forman proteinatos metlicos insolubles por la combinacin de la protena en el lado alcalino de su punto isoelctrico. VI. DISCUSIONES: La desnaturalizacin representa una prdida de la conformacin original de la molcula y un cambio desde un orden muy especfico a un estado de ordenacin ms al azar. Esta transformacin se logra por calentamiento y adicin de alcohol etlico (Qumica orgnica experimental. Durts D). Durante la experiencia realizamos dos reacciones: en la primera se emple alcohol etlico con ClK y se produjo un precipitado transparente, en la segunda se emple alcohol y se produjo una coagulacin; esto sucedi debido a la desnaturalizacin de la protena del huevo. Durante la experimentacin realizamos la reaccin de precipitado por accin de iones pesados y se produjo un precipitado de color negro. Esto se forma debido a que los metales pesados forman proteinatos metlicos insolubles por la combinacin de la protena en el lado alcalino de su punto isoelctrico. (Qumica orgnica experimental. Durts D) Se ha comprobado que cada una de las fracciones de protenas de la clara de huevo presenta una determinada suceptibilidad al pH y a los tratamientos trmico; a medida que aumenta la cidez, la ovotransferrina, la ovomacroglobulina, la ovoalbmina y las globulinas se vuelven ms inestables a las altas temperaturas (Qumica orgnica experimental. Durts D). Durante la experimentacin en las reacciones de precipitados por acciones de cidos se formaron cogulos blancos en la reaccin de cido tricloroactico al 10% y cogulos naranja claro en la reaccin de cido tnico; esto debido a la suceptibilidad de las protenas frente a los cidos. La presencia de solventes orgnicos como la acetona, etanol, metanol, etc., afecta tambin la solubilidad de las protenas, porque en su presencia disminuye la capacidad de los solventes acuosos para separar y solubilizar a los grupos cargados de las protenas. (Bioqumica. Pea A). Pudimos evidenciar lo expuesto por el autor en la experiencia realizada en el laboratorio agregando ClK y alcohol observando un precipitado mientras que el tubo que solo contena la muestra y OH no precipito ya que el alcohol necesita una sal inorgnica para precipitar la protena. Al aumentar la temperatura, en las molculas del solvente y en las molculas de la protena la agitacin trmica es tal, que la organizacin espacial caracterstica de las protenas se modifica, muchas de las propiedades de la protena se pierden totalmente, desde la actividad biolgica, la enzimtica; hasta sus propiedades fisicoqumicas, como su forma, solubilidad, etc. (Bioqumica. Pea A). En la prctica de laboratorio no pudimos observar esta reaccin ya que al agregarle agua a la solucin de albmina esta estuvo muy diluida y no pudo darse la coagulacin de la protena por efecto de la temperatura.
VII. CONCLUSIONES: Se ha comprobado que el pH, la temperatura y las sales influyen en el proceso de agregacin y coagulacin de las protenas. En la primera reaccin: precipitacin de la albmina observamos que se formaron cogulos de color blanco, la teora nos dice que debe precipitar, puede que en un tiempo mayor estos cogulos formen un precipitado blanco. La protena del huevo se coagul debido a que en su composicin tenemos presencia de la ovomucina, que conforma el 2% de la clara de huevo.
VIII. BIBLIOGRAFA: Pea, A. (2004) Bioqumica. Editorial Limusa. Mxico. Badu, S. (1999) Qumica de los alimentos. Editorial Longmann. Mxico. Durts D. (2007) Qumica orgnica experimental. Editorial Reverte. Espaa.
IX. LIBROS DE INTERNET: (LINKS) http://books.google.com.pe/books?id=BPOTvYykfwAC&pg=PA87&dq=proteinas+precipitacion+po r+iones+pesados&hl=es&sa=X&ei=FnKVT4qYBsWugwfoi8n3BA&ved=0CC0Q6AEwAA#v=onepage& q=proteinas%20precipitacion%20por%20iones%20pesados&f=false