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Imunofluorescncia

na deteco da AIDS
causada pelo vrus da Imunodeficincia Humana
(HIV)

O vrus ataca e destri os glbulos brancos do
sangue, causando um defeito no sistema imunolgico
do corpo

A doena caracteriza-se por contagens de linfcitos
T CD4+ abaixo do normal








Tcnica utilizada para pesquisa
de anticorpos ou antgenos em
amostras sorolgicas, utilizando
anticorpos especficos marcados
com fluorocromos, que ao se
complexarem permite a
visualizao atravs do microscpio
de fluorescncia.

Existem dois mtodos :
Imunofluorescncia Direta
Imunofluorescncia Indireta


Imunofluorescncia
Detecta a presena de anticorpos na amostra sorolgica


Antgenos padronizados so fixados a lminas de vidro

Esfregao contendo antgeno
A amostra diluda colocada sobre o antgeno e incubada para permitir a
formao do complexo antgeno-anticorpo.
Lavagem para retirada de anticorpos no fixados:

Adiciona-se o anti-anticorpo contendo fluorocromo

esfregao contendo antgeno
Lavagem para retirada de anticorpos no fixados:
Esfregao contendo antgeno
Formao do complexo antgeno anticorpo - anti-anticorpo.
Anlise da lmina atravs do microscpio de imunofluorescncia
Reao positiva
Reao Negativa
Reao Positiva
Fatores que interferem no resultado
Falso-positivo:

Tcnicos:

contaminao de ponteiras;
contaminao da reao por soros vizinhos fortemente positivos;
troca de amostras;
ciclos repetidos de congelamento e descongelamento das amostras;
pipetagens de baixa acurcia;
inativao da amostra a 56C;
transporte ou armazenamento inadequado das amostras ou dos kits.

Biolgicos

semelhanas antignicas entre microrganismos;
doenas auto-imunes;
infeces por outros vrus;
uso de drogas endovenosas;
aquisio de anticorpos anti-HIV passivamente.

Falso-negativos:

Sensibilidade do teste

diferentes capacidades de deteco dos kits;
ocorrncia do perodo de janela imunolgica ou da variabilidade na
constituio antignica dos conjuntos de diagnstico.

Tcnicos:

troca da amostra;
uso de reagentes fora do prazo de validade;
utilizao de equipamentos desajustados;
pipetagem incorreta;
transporte ou armazenamento inadequado das amostras ou dos kits.

Vantagens
Sensibilidade

Especificidade

Reprodutibilidade

Simples padronizao e execuo

Para cada classe e subclasse de Anticorpo
so utilizados conjugados especfico,
Desvantagens
Necessidade de microscpio
de fluorescncia

Subjetividade na leitura

No-automao