Escuela de Tecnologa Mdica

Universidad Santo tomas

Via del Mar
















GUIA DE LABORATORIO HEMATOLOGA CLNICA
2014

























Material recopilado y revisado por:
T.M. Paulina Lara S







2

I N D I C E



Estudios de correlacin......03
Mielograma segn Wintrobe..03
Precursores eritroides.....05
Precursores granulocitos...06
Precursores monociticos............06
Precursores linfociticos......07
Precursores megacariocitos y plaquetarios ...07
Ferremia08
Tincin de Perls...08
Clasificacin de anemia .. 09
Respuesta medular 10
Estudio de laboratorio anemias microcticas. 11
Macrocitosis y megaloblastosi, deficiencia de Vit B12 y folatos12
Diagnstico de las anemias megaloblsticas.13
Causas de anemia megalobalastica13
Anemias hemolticas: Extracorpusculares..14
Intracorpusculares...15
Hemoglobina fetal...15
Resistencia globular osmtica..16
Leucocitos18
Alteracin benignas de serie blanca....20
Leucemias crnicas22
Leucemias agudas..24
Clasificacin FAB LLA... 24
Clasificacin inmunofenotipo LLA... 25
Clasificacion LMA FAB..26
Citoqumica......27
Inmunofenotipo...28
Referencias bibliogrficas.29












3




ESTUDIO DE CORRELACIN:
Recuento de glbulos rojos x 3 = Hb (g/dl)
Hemoglobina (g/dl) x 3 = Hto (%)
Recuento de glbulos rojos x 9 = Hto (%)
1. Recuento de glbulos blancos
Estimacin al frontis (lente 40x)
N de clulas Estimacin
2 4 4 7 x 10 clulas / mm
4 6 7 - 10x10 clulas / mm
6 10 10 13x10 cls / mm
10 20 13 18x10 cls / mm
2. Recuento de plaquetas
Estimacin al frotis (lente inmersin 100x)
Nmero de plaquetas en 10 campos observados por 2.000 = Recuento de
plaquetas / mm.
MELOGRAMA SEGN WINTROBE
CELULARIDAD Aumentada, disminuida, normal

MEGACARIOCITOS Aumentados, ausentes, disminuidos o normales.
Inactivos o funcionalmente activos
SERIE ERITROIDE Rango X
Pro eritroblasto Basfilo 1 8 4
Eritroblasto Basfilo 1 4 2
Eritroblasto Policromtico 5 15 10
Eritroblasto Ortocromtico 3 12 6
TOTALO SERIE ERITROIDE 25%
SERIE MIELOIDE
Mieloblasto
Promielocito
Mielocito Neutrfilo
Juvenil Neutrfilo
Baciliforme Neutrfilo
Segmentado Neutrfilo
Mielocito Eosinfilo
Juvenil Eosinfilo
Baciliforme Eosinfilo
0.3 5
1 8
5 19
10 20
10 25
7 30
0.5 3
0.5 2
0.5 2
2
5
12
15
18
20
1.5
2
2
4

Segmento Eosinfilo
Basfilo
Linfocitos
Monocitos
Cl. Plasmticas
Cel. Reticulares
Megacariocitos
0.5 4
0.5 2
3 17
0.5 5
0 2
0.5 2
0 1.5
2
2
10
3
1
1
0.5
TOTAL SERIE MIELOIDE 75%
COMENTARIO
Relacin Mieloide / Eritroide 3 / 1
Tipo de maduracin Normoblstica o Megaloblstica
CONCLUSIN:


En el adulto, la hematopoyesis tiene lugar en la mdula sea roja localizada en los
huesos planos del esqueletos (crneo, costillas, esternn, vrtebras y pelvis) y en
algunas epfisis de los hueso largos. Previamente, en la vida fetal, los rganos
hematopoyticos han ido el saco vitelino, el hgado y el brazo.
Las clulas hematopoyticas se distribuyen en la mdula sea (M.O.) en dos
principales comportamientos morfolgicos - funcionales bien diferenciados:
a. Comportamiento de clula madre o de divisin.
b. Comportamiento de maduracin y diferenciacin celular

a. Compartimiento de
clulas madres: Desde el punto de vista morfolgico las clulas de este
comportamiento no son identificables, correspondiendo en todo caso a
clulas similares a linfocitos. La caracterstica funcional ms importante de
estas clulas en su capacidad de dividirse y de auto perpetuarse (mantener
su propio nmero), para finalmente en respuesta a un delicado equilibrio
entre factores simuladores e inhibidores dar lugar a las primeras clulas
reconocibles de cada serie, que se consideran ya en el comportamiento de
maduracin y diferenciacin.

NOMENCLATURA
CFC ML o CFU ML: (pluripotencial)
Clula madre pluripotencial mieloide - linfoide

CFC GEMM: (multipotencial)
Clula formada de colonias granulocticas, eritroides, monocticas y
megacariociticas

CFC GM: (bipotencial)
Clula formada de colonias o agregados grnulos monocticos (comprometida)

CFC E: (unipotencial)
Clula madre compromedita eritroide en tres fracciones (primitiva y ms madura).

CFC B*CFC EO: (unipotenciales)
Clulas madres comprometidas para basfilos, megacariocitos y eosinfilos.
5


CFC G: (unipotenciales)
Clula madre comprometida para granulocitos neutrfilos.

CFC M:
Clula madre comprometida para monocitos y macrfagos.

b. Comportamiento de maduracin y diferenciacin: A partir de las clulas
madres comprometidas o unipotenciales se producen las clulas precursoras
morfolgicamente reconocibles de cada lnea.
Precursores Eritroides:
Proeritroblasto
Eritroblastos basfilo
Eritroblasto policromtico
Eritroblasto ortocromtico
Reticulocito o policromtfilo

Precursores Granulocitos:
Mieloblasto
Promielocito
Mielocito
Metalielocito o juvenil*
Baciloforme*
Segmentado*
*Neutrfilos, Basfilos, Eosinfilos

Precursores Monocticos:
Monoblasto
Promonocito
Monocitos

Precursores de los Linfocitos:
Linfoblasto
Prolinfocitos
Linfocitos
Precursores Plaquetarios:
Megacarioblasto
Promegacariocito
Megacariocito
Plaquetas

A partir, de las clulas madres comprometidas o unipotenciales se producen las
clulas morfolgicas reconocibles de cada lnea.
PRECURSORES ERITROIDES: Los hechos que caracterizan la formacin de los
eritrocitos son bsicamente dos: Prdida de basofilia, la hemoglobinizacin
progresiva y la reduccin en el tamao nuclear hasta su picnosis y expulsin final,
para dar origen al eritrocito normal. Se distinguen cinco estados:
Proeritroblasto: tamao celular 20-25 u de dimetro, citoplasma escaso y
basofilia intensa, ncleo de cromatina laxa, algo gruesa, que por lo comn
aparece con aspecto punteado, debido a la condensacin de la cromatina.
Suele presentar dos o ms nuclolos.

6

Eritroblasto basfilo: tamao celular 16-18 u de dimetro con ncleo algo
menor y con basofilia intensa en citoplasma, generalmente no se observa el
nuclolo.

Eritroblasto policromtico: tamao celular 8-12 u de dimetro. Posee ya
cierta cantidad de hemoglobina, lo que motiva una coloracin intermedia
entre la basofilia de los precursores ms jvenes y la coloracin
hemoglobnica propia de las clulas maduras. La cromatina es ms
condensada o maciza.

Eritroblasto ortocromtico: tamao celular 7-10 u de dimetro, como
indica su nombre, la coloracin citoplasmtica es similar a la de la clula. El
ncleo es ya muy picntico.

Reticulocito o Policromatfilo: etapa anucleada, an persisten restos de
basofilia citoplasmtica, se llama reticulocitos, por el aspecto reticulado que
muestra con las coloraciones supravitales, debido a la presencia de restos
de organelos. De mayor volumen que los hemates adultos. Presentes en
sangre perifrica entre 0.5 a 2%.

PRECURSORES GRANULOCTICOS: Los hechos evolutivos de estas clulas
son reduccin de tamao y segmentacin nuclear, reemplazo de los grnulos
azurfilos por grnulos especficos. La secuencia es la siguiente:
Mieloblasto: tamao 14 18 u de dimetro con alta relacin ncleo
citoplasma. Cromatina laxa, posee dos a tres nuclolos, citoplasma basfilo
sin grnulos.

Promielocito: tamao 18 24 u de dimetro, con abundante granulacin
primaria o azurfila que tambin cubre el ncleo. Este a veces levemente
indentado con nuclolo.

Mielocito: tamao 15 18 u de dimetro, ncleo menor, redondeado,
aparece por primera vez la granulacin especfica o secundaria a partir de la
cual se diferencian en neutrfilos, eosinfilos o basfilos. No se observa el
nuclolo.

Metamielocito o juvenil: tamao 10 15 u de dimetro, el ncleo inicia el
proceso de segmentacin mostrndose hendido o arrionado. Citoplasma con
grnulos especficos.

Baciliforme: el ncleo adopta la forma de bastn o cinta ocupada escaso
volumen respecto del citoplasma. Es la primera clula que en condiciones
normales se encuentra en sangre perifrica. (1 a 5%).

Segmentado: el ncleo presente la tpica segmentacin de 2 a 5 lbulos (2
para los eosinfilos) y el citoplasma la caracterstica granulacin especfica o
secundaria (finas de color lila para los nueutrfilos, ms grande, gruesas,
redondas y de color naranja o pardo para los eosinfilos y gruesos irregulares
y de color azul oscuro para los basfilos.)





7

PRECURSORES MONOCTICOS:
Constituido por los monoblasto y promonocito.

Monoblastos: 18 25 u de dimetro, (> que el mieloblasto) ncleo grande con
nuclolo y el ncleo aparece plegado o mellado.
Promonocito: 15 20 u de dimetro, aparecen algunas granulaciones finas
azurfilas, citoplasma azul grisceo. Ncleo adquiere forma arrionada con
cromatina laxa.
Monocito: 18 22 u de dimetro la forma de la clula es irregular, cromatina laxa y
reticulada, el citoplasma abundante, color gris pizarra opaco, algunos presentan
granulaciones azurfilas, finas y abundantes.
PRECURSORES DE LINFOCITOS:
La clula ms inmadura es el linfoblasto. El ncleo ocupa casi toda la clula,
contiene 1 2 nuclolos. El citoplasma es azul profundo y no tiene grnulos.
Resulta difcil de distinguir de los mieloblastos.

El prolinfocitos (tamao 15 18 u de dimetro) contina con el citoplasma azul,
ncleo redondo, sin nuclolo visible, cromatina ms condensada. Tamao ms
pequeo que su antecesor.
El linfocito: es el ms pequeo de los mononucleares de acuerdo a la cantidad de
citoplasma stos pueden ser pequeos, medianos y grandes. El ncleo es
redondo u ovalado, levemente indentado, de cromatina compacta y se tie
intensamente. En el citoplasma de esta clula pueden contener granulaciones
azurfilas, gruesas y escasas.
PRECURSORES MEGACARIOCTICOS Y PLAQUETARIOS:
Megacarioblastos: tamao 50 u de dimetro, citoplasma basfilo, ncleo redondo
con varios nuclolos, cromatina laxa.
Promegacariocitos: 50 a 80 u de dimetro, citoplasma acidofilo y un ncleo
gigante esbozando globulaciones.
Por ltimo, el megacariocito formador de plaquetas es una clula de 80 100 u
de dimetro (+grande en M.O). El ncleo es poliploide y lobulado.
Plaquetas se forman por fraccionamiento del citoplasma del megacariocito











8

FERREMIA
Principio: Debido a que el Fierro circula en el plasma unido en su totalidad a la
transferrina (TF-Fe+++) puede ser cuantificado a partir de un extracto
desproteinizado del mismo. Aadiendo una sustancia precipitante y reductora se
produce la liberacin del hierro de la transferrina y su reduccin a Fe++, al cual se
le une posteriormente un derivado de la fenantrolina o compuesto cromgeno y
con ello se produce un cambio de color.
TF-Fe+++ Precipitacin Fe++ +TF CC+C
Reduccin +C
C= Cromgeno
CC= Compuesto coloreado
La densidad ptica o absorbancia (A) del compuesto coloreado es analizada en
fotocolormetro (filtro verde) o en espectrofotmetro a 535 nm.
Revisar inserto de Ferremia Y TIBC


TINCION DE PERLS, HEMOSIDERINA
FUNDAMENTO
Se basa en la produccin de ferrocianuro frrico (azul de Prusia) cuando los iones
(Fe+++) frricos, reaccionan con ferrocianuro en solucin cida.
Los eritroblastos con hemosiderina se denominan sideroblastos

REACTIVOS
1. Ferrocianuro de potasio al 2%........................................ 1 vol.
cido clorhdrico exento de Fe al 2%.............................. 1 vol.
2. Solucin de safranina al 0.5% en agua bicarbonatada a pH 7.5- 8.0
DESARROLLO
1. Fijacin: vapores de formol durante 10- 15 minutos o etanol o metanol absoluto
3 minutos.
2. Lavado por inmersin con agua destilada dos o tres veces.
3. Inmersin en el reactivo cido de ferrocianuro ( o recubrimiento en gradilla)
durante 30 minutos.
4. Lavar con agua destilada alcalinizada levemente con carbonato o bicarbonato
de sodio (pH 7.5- 8.0).
5. Controlar al microscopio con cubreobjetos interpuesto.
6. Si es necesario hacer reaccionar otros 30 minutos.
7. Lavar los extendidos con agua bicarbonatada.
8. Escurrir y sin lavar agregar solucin colorante de safranina. Dejar de 5 a 10
minutos.
Es importante mantener la alcalinidad del medio porque de lo contrario se disuelve
el precipitado de azul de Prusia. Secar en posicin vertical y observar con
9

inmersin directamente sobre el preparado. Resiste la conservacin de manera
indefinida.
Puede lavarse con xilol para quitar aceite.
RESULTADOS
Hierro no hemnico azul brillante.
En estado normal es pequea la cantidad de Fe no hemnico

UTILIDAD:
Estudio del Fe medular para conocer las reservas de Fierro
Valorar el Fe no hemnico del citoplasma de los eritroblastos.
Determinar el nmero de precipitados de hemosiderina (sideroblastos)
Se informa en grados:
Grado 0: Ausente Grado I: Disminuido
Grado II: Normal Grado III: Aumentado

Ferropenia: 0-I
Sobrecarga: II-III



CLASIFICACION DE LAS ANEMIAS
Anemia significa la disminucin del peso absoluto del eritrn perifrico, constituido
por la masa eritrocitaria circulante. As pues, anemia, como signo biolgico es la
disminucin de la hemoglobina de la sangre. En sentido fisiolgico clnico, anemia
es la disminucin de la capacidad de transporte de oxgeno por el eritn perifrico,
lo que genera signos y sntomas derivados fundamentalmente de la hipoxia.
CLASIFICACIN:
Premedulares: La mdula sea como rgano hematopoytico est sano, le falta
aporte para una normal hematopoyesis.
Dficit de fierro glbulos rojos tienen un VCM bajo < 80 fL y una CHCM
<32%.
Dficit de cido flico o de vitamina B 12: glbulos rojos tienen un VCM > 100 fL y
una CHCM normal.
Dficit de vitamina B6 alteracin en la sntesis, del grupo Hem de la
hemoglobina: CHCM <32% VCM dentro de valores normales alto.

Este grupo de anemias premedulares se caracteriza por:
Tener mdula sea sana
Tener alteraciones morfolgicas
10

Ser arregenerativas sin tratamiento
Buena respuesta al tratamiento

Medulares: Mdula sea daada como rgano formador de clulas:
Anemias aplsticas dao al Stem cell
Aplasia pura de serie roja
Metstasis
Fibrosis medular

Este grupo de anemias medulares se caracteriza por:
Tener la mdula sea daada o infiltrada, ya sea por clulas propias o extraas a
la mdula.
Ser los glbulos rojos normocticos normocrmicos salvo la fibrosis medular.
Ser arregenerativas.
Ser refractarias al tratamiento






Postmedulares:
Por prdidas: Hemorragias agudas
Mayor destruccin: (anemias hemolticas)
Intracorpsculares
Extracorpsculares
Intracorpsculares: Alteraciones de membrana
Alteracin de las enzimas
Alteracin de hemoglobina

Extracorpsculares: Inmunolgicas
No inmunolgicas
Este grupo de anemias se caracteriza por tener:
Mdula sea capaz de aumentar su produccin de 7 a 8 veces.
Ser regenerativa
Glbulos rojos con un VCM> 95 Fl si los reticulocitos estn muy aumentados.
Si es por hemlisis intracorpscular por alteracin de membrana encontramos:
Microesferocitos
Ovalocitos
Si es por destruccin mecnica en CID, o valvuloplasta
Esquistocitos
Poiquilocitos
Acantocitos

RESPUESTA MEDULAR
La respuesta medular se expresa indirectamente por el clculo del Valor absoluto
de reticulocitos o tambin calculando el ndice reticulocitario.
Valor absoluto: reticulocitos % x millones eritrocitos
Mdula sea regenerativa => 120.000 ret. /mm
Mdula sea arregenerativa = 120.000 ret. /mm
ndice Reticulocitario (I.R.)
11

CORRECCIN SEGN GRADO DE ANEMIA
Hto. PACIENTE
I.R. RETICULOCITS % X

Hto. IDEAL (45%)




CORRECCIN SEGN DAS DE MADURACIN
Hto. PACIENTE
I.R. RETICULOCITOS % X

Hto. IDEAL (45%)


2



Recuento Absoluto de Reticulocitos (R.A.R)
Ejemplo:
Hematocrito = 22%
Eritrocitos = 2.200.000 / mm
Ret. = 4%
R.A.R = 88.000/mm

ndice reticulocitario (I.R) o ndice de Produccin Reticulocitaria (I.P.R)
Ejemplo:
Mujer Hto. =25%
Ret. =16%

I.R. o I.P.R = 25 x 16
45

2

I.R. o I.P.R. = 5

ESTUDIO DE LABORATORIO DE LAS ANEMIAS HIPOCROMAS:
Basado en:
a) Morfologa: VCM
CHCM
b) Fierro circulante: Ferremia
Transferrina
Saturacin
Deposito: Ferritina (plasma)
Hemosiderina (M.O)

Hipocromas: Disminucin de Fe
Anemia secundaria a inflamacin, o inflamacin crnica.
Talasemia-anemia sideroblastica.
Distribucin del fierro:
a) Transporte: grupo Hem de la hemoglobina >%
12

b) Almacenamiento: Mioglobina.
c) Deposito: Hemosiderina.
d) Ferritina

Desarrollo de la anemia ferropriva:
Dieta pobre: 1 Disminuyen los depsitos.
2 Circulante
3Morfologa
Con tratamiento primero se corrige:
a) Morfologa
b) Circulante
c) Deposito


13

MACROCITOSIS Y MEGALOBLASTOSIS. DEFICIENCIA DE Vit B12 Y
FOLATOS

Entendemos por macrocitosis, el aumento patolgico del volumen eritrocitario que
se objetiva por el volumen corpuscular medio (VCM) superior a 100 fL.

El 95% de los macrocitos corresponden a megablastos (VCM > 110 fL) y se
traducen en un trastorno de la sntesis de ADN en las clulas hematopoyticas
con alteraciones madurativas del ciclo nuclear y de las mitosis eritroblsticas, sin
acortamiento del perodo madurativo citoplasmtico.

El 5% restante de anemias macrocticas se deben a trastornos diversos como por
ejemplo de una aceleracin de la eritropoyesis, con acortamiento del tiempo
madurativo y reduccin del nmero de mitosis, por demandas perifricas de
recuperacin o aumento del eritrn perifrico (macrocitosis hiperregenerativa)
(VCM habitual es de 100 110 fL).

El proceso fundamental e indispensable de la divisin celular es la sntesis de
nuevas molculas de ADN, y para ello es necesaria la presencia de una serie de
sustratos, entre los que se encuentra la cobalamina (vitamina B12) y el cido flico
y sus derivados metablicos.

La sensibilidad e intensidad de la lesin que estas deficiencias ocasionan estn en
relacin con la velocidad de divisin celular, son ms sensibles y por ende ms
lesionados aquellos tejidos con alto ndice mittico especialmente lneas celulares
en divisin de la M.O clulas epiteliales de los tractos gastrointestinales,
respiratorios y urogenitales.

Accin biolgica de la vit B12
Participa como metil cobalamina en el metabolismo del folato, desmetilando el 5N-
metil tetrahidrfilo (forma circulante del cido flico) y lo transforma en
tetrahidrofolato (forma activa intracelular).
Degradacin de cidos grasos de cadena impar. Propionil C. A. succinil Co. A.

Accin biolgica de cido flico
Metilacin de la homocistena a metionina. Proceso acoplado con la
transformacin del 5N-metil tetrahidroflico en tetrahidroflico siendo necesaria la
metilcobalamina o vitamina B12.
Sntesis del timidilato a partir de desoxiuridilato. Este proceso es esencial para la
sntesis de ADN.
Transformacin del cido formimino glutmico en cido glutmico

Aspectos nutricionales y metablicos de la Vit B12 y cido flico

Vit B12 cido Flico
Lugar de absorcin Ilin terminal Duodeno o yeyuno
Mecanismo absorcin F. Intrnseco / protena R Conversin a metil
tetrahidroflico
Requerimientos diarios 2 ug 100 ug
Reservas corporales 2000 a 4000 ug 10.000 a 15.000 ug
Fuentes alimentarias Origen animal Todo vegetal, fresco y
levaduras
Efecto del calor Estable Lbil

14

DIAGNSTICO DE LAS ANEMIAS MEGALOBLSTICAS:

Mdula sea: hiperplasia celular especialmente marcada de la serie eritroide
cuyos elementos aparecen francamente aumentados de tamao (megaloblastos).
Presentan asincrona madurativa ncleo citoplasmtica que es muy llamativa en
los megaloblastos poli y ortocromticos, los que adems pueden presentar uno o
ms corpsculos de Howell-Jolly, punteado basfilo grosero o anillos de Cabot.
Los elementos de la serie ganuloctica tambin aparecen aumentados de tamao
y con cierto asincronismo de maduracin en tanto que los megacariocitos
impresionan por la hipersegmentacin nuclear. En medio de las clulas
hematopoyticas frecuentemente se encuentran macrfagos cargados de restos
celulares en diverso estado de digestin. Esta fagia de eritrocitos, megaloblastos,
granulocitos y plaquetas es signo inequvoco de hematopoyesis ineficaz.

Hemograma: La anemia es macroctica (V.C.M. 110 140 fL) y normocroma. El
porcentaje de reticulocitos puede estar algo elevado pero el ndice reticulocitario
es menor de 1. Hay una franca anisocitosis sobre todo cuando la anemia es
severa. Los cambios observados en los neutrfilos son ms precoces. Aparece
algo aumentado de tamao y con clara tendencia a la hipersegmentacin nuclear.
Estos son los pleocariocitos, y son los ltimos en desaparecer con el tratamiento.
Hay adems leucopenia y trombocitopenia.

Como consecuencia de la eritropoyesis ineficaz el Fe srico sta aumentado y la
capacidad total de fijacin de Fe est norma o disminuida. El Fe medular y en
general el Fe de depsito est aumentado. La bilirrubina precoz aumentada, la
haptoglobina disminuida y la deshidrogenasa lctica aumentada.

Las anemias por dficit de vit B12 (cidos grasos anmalos seran incorporados
en los lpidos de membrana de las clulas neuronales provocando trastornos en la
conduccin nerviosa e interviniendo en el proceso de desmielinizacin).

CAUSAS DE ANEMIAS MEGALOBLSTICAS:

I.Deficiencias de Vit B12:
1. Ingreso inadecuado - Vegetarianos estrictos
2. Absorcin defectuosa:
- Anemia perniciosa
Dficit de F. Intrnseco (FI)- Gastrectoma parcial o total
- Dficit congnito FI
- Asas ciega

Malabsorcin en intestino delgado Sndrome Malabsorcin

Necesidades excesivas - Infestacin por parsitos

II.Deficiencias de cido flico:

- Aporte insuficiente - Alcoholismo
-Hemodilisis

- Absorcin defectuosa -Sndrome de. Malabsorcin
- Sndrome de asa ciega

- Utilizacin inadecuada -Dficit de cido ascrbico
15

-Terapia con antagonistas
-Terapia anti convulsionante

- Requerimientos excesivos -Embarazo, Lactancia
-Crecimiento
-Hemlisis

Causas de anemias macrocticas no megaloblsticas
- Alcoholismo crnico
- Enfermedad heptica crnica
- Reticulocitosis importante
- Insuficiencia respiratoria con hipoxia
- Recin nacidos


ANEMAS HEMOLTICAS Intracorpsculares

Tipo Cuadro Clnico Frotis Exmenes
complementarias
Microesferoctica
congnita
Ant. Familiares.
Crisis hemolticas
Esplenomegalia
Microesferocitosis
Predominante
Disminucin
Resistencia
globular.
Autohemlisis tipo
I
Ovalocitosis
Hereditaria
Ant. Familiares
Esplenomegalia
Ovalocitosis
Predominante
Disminucin
resistente globular.
Enzimopatias
G.G.P.D.
Ligado al sexo.
Crisis hemoltica
despus de
ingestin de
drogas, habas
Cuerpos de Heinz
espontneos y
provocados.
Autohemlisis tipo
I.
Piruvato kinasa Esquistocitos Autohemlisis tipo
II.
Hemoglobina
Inestable
Crisis hemolticas
despus de
drogas, orinas
oscuras.
Precipitacin de
Hb
Por calor.
Ant. Hereditarios y
tnicos.
Esplenomegalia
Alts. seas
Dianocitos
Hipocroma
Drepanocitos
Electroforesis Hb
Hemoglobinuria
Paroxstica
Hemoglubinuria en
la maanas
Test de Ham
Test de la sucrosa
Hemoglobinuria
Hemosiderinuria













16

ANEMAS HEMOLTICAS Extra corpusculares

Tipo Cuadro Clnico Frotis Exmenes
complementarias
Anemias e
isoinmunizacin
Rh ABO
Ictericia
Incompatibilidad
feto materna
Microesferocitos
(ABO)
Eritroblastosis (Rh)
Bilirrubina indirecta
Coombs (Rh)
Hemoglobinuria
Anemias
Autoinmunes
Idiopticas
Microesferocitos Coombs
Anemias
Autoinmunes
Secundarias
LEG: colgeno
Drogas, Neumona
atpica
Microesferocitos Crioaglutinina
Hemolisinas
Anemias
Hemolticas
Microangiopticas
Sndrome urmico
hemoltico.
Prtesis
cardacas.
Carcinomatosis
hemoglobinuria de
la marcha CID
Esquistocitos
Trombocitopenias
Signos patolgicos
de base
Anemias
hemolticas
Por txicos
Venenos animales
(IRA) Drogas
Microesferocitos
Esquistocitos
Hemoglobinuria
Cuerpos de Heinz
Por agentes fsicos Quemaduras Esquistocitos
LEG: Lupus eritematoso generalizado
IRA: Insuficiencia renal aguda


CUANTIFICACION DE HEMOGLOBINA FETAL
Normalmente, el ser humano posee varios tipos de hemoglobina (Hb) durante su
desarrollo. En la actualidad, se conoce muy bien la estructura molecular y las
funciones de la hemoglobina. Dentro de ellas, la hemoglobina fetal (Hb F) es la
predominante en el perodo fetal. El orden en que aparece y desaparece esta
hemoglobina en el ser humano constituye uno de los ejemplos conocidos de
laregulacin de la sntesis proteica. La persistencia de altos niveles de sntesis de
hemoglobina fetal en la poca postnatal en prematuros, es una clara indicacin de
que la transicin sinttica de Hb F a Hb A no est influenciada por la poca del
nacimiento. Por tal motivo, el grado de la transicin sinttica de Hb F a Hb A es
especie-especfica, lo cual quiere decir, al menos en los humanos, que el desvo
sinttico de una a otra est relacionado el grado de maduracin biolgica y por
tanto no se afecta por una exposicin precoz a su vida extrauterina.
La hemoglobina fetal es un tetrmero estructural de tipo alfa2 gama2, con
cualidades muy particulares. Se destaca su alta afinidad por el oxgeno dada por
su estructura y su baja interaccin con el 2,3 difosfoglicerato , caracterstica que le
confiere su importante papel funcional en la vida intrauterina, en donde existe una
baja tensin de oxgeno en el ambiente placentario. La observacin en 1968 de
una heterogeneidad de las cadenas gama, demostr que en la posicin 136 de las
mismas puede estar presente un residuo de glicina o de alanina. La terminologa
G y A se emplea cuando una glicina o alanina, respectivamente, ocupan
dicha posicin, variando la tasa de cada una de ellas segn la edad o el desorden
hereditario en que la Hemoglobina fetal se ve comprometida. Posteriormente, en
1976, se observ un nuevo tipo de cadenas gama con un residuo de treonina en
lugar de isoleucina en posicin 75.
17

Por analoga con la anterior nomenclatura, estas globinas se denominan T e
I.Por otra parte, la Hemoglobina fetal es la nica hemoglobina primaria en donde
se presenta isoleucina en sus cadenas gama.
En la actualidad, existen varios mtodos para la cuantificacin de la hemoglobina
fetal, basados la mayora en la caracterstica relevante de esta hemoglobina de
ser resistente a la desnaturalizacin por lcalis. Otros procedimientos son
cromatogrficos, por inmunodifusin radial (IDR) y radioinmunoensayo . Tambin
existen tcnicas citoqumicas, que permiten evaluar la presencia y distribucin de
esta hemoglobina en los eritrocitos. Una de ellas es de tipo eminentemente
fisicoqumico y otra lo es de carcter inmunocitolgico .Ambas se utilizan tanto
para la evaluacin de hemorragias materno-fetales , como para establecer
fenotipos en diversos trastornos hemoglobinopticos, tales como sndromes
talasmicos y los de la persistencia hereditaria de hemoglobina fetal.
Revisar inserto de hemoglobina fetal por radioinmunoensayo (IRD).


RESISTENCIA GLOBULAR OSMOTICA

Metodo: dacie
Muestra: sangre heparinizada (dos tubos, con 2 ml cada uno)
Filtro: verde (540 nm)
Materiales: 26 Tubos de ensayo limpios y secos
Pipetas de 10 ml
Pipetas de 1 ml (o micropipetas de los volmenes necesarios)

Reactivos: Agua destilada

Solucin Stock de NaCl al 10% (pH 7.4)
Na 2 HPO 4 : 13,65 gr
NaH2 PO4 : 2, 43 gr
Na Cl : 90 gr
Agua destilada csp 1000 ml
Solucin de trabajo de NaCl (1%):
Solucin Stock: 10
Agua destilada csp l00 ml

TECNICA:
1.- A partir de la solucin estndar, prepare las siguientes soluciones:
TUBO Concentracin
de NaCl (%)
Solucin de
trabajo (ml)
Agua
destilada
(ml)
1 0.90 9.0 1.0
2 0.85 8..0 1.5
3 0.75 7.5 2.5
4 0.65 6.5 3.5
5 0.60 6.0 4.0
6 0.55 5.5 4.5
7 0.50 5.0 5.0
8 0.45 4.5 5.5
18

9 0.40 4.0 6.0
10 0.35 3.5 6.5
11 0.30 3.0 7.0
12 0.20 2.0 8.0
13 0.10 1.0 9.0

2.- Tape con parafilm y mezcle por inversin varias veces.

3.- Agregue a cada tubo 0.1 ml de sangre (previamente mezclada).

4.- Mezcle suavemente, tape y deje los tubos a temperatura ambiente por 30
minutos

5.- Mezcle, nuevamente en forma suave los tubos y centrifugue por 5 minutos a
2000 rpm.

6.- Lea la absorbancia del sobrenadante de los tubos, tomando como blanco el
tubo de 0.85% o 0.90% de NaCl, y el tubo de 0.10 % de NaCl como 100% de
hemlisis.

7.- Repita la prueba luego de incubar la muestra a 37 C durante 24 horas.

8.- Calcule el porcentaje de hemlisis segn la absorbancia del 100 % de lisis,
mediante la siguiente frmula:

% de hemlisis = Abs. Tubo problema X 100
Abs. Tubo 12 o 13
9.- Dibuje la curva de fragilidad con los valores normales a las 0 y 24 horas:
0 horas:
% de NaCl % de
hemolisis
0.30 97 - 100
0.35 90 - 99
0.40 50 - 90
0.45 5 - 50
0.50 0 - 5
0.55 0%

24 horas:
% NaCl % de
hemlisis
0.20 100
0.30 80 - 100
0.35 72 - 100
0.40 65 - 100
0.45 54 - 96
0.50 36 - 88
0.55 5 - 70
19





RESULTADOS:

Interpole los resultados de los porcentajes de hemlisis a las 0 y 24 horas en las
curvas correspondientes.
Indique. 1: Lisis inicial o resistencia mnima
2: Lisis final o resistencia mxima.
VALORES DE REFERENCIA:

1.- Resistencia Globular osmtica a las 0 horas:
Hemlisis inicial: 0.5 - 0.55 % de NaCl
Hemlisis final : 0.3 - 0.40 % de NaCl

2.- Resistencia Globular osmtica a las 24 horas:

Hemlisis inicial: 0.6 - 0.75 % de NaCl

Hemlisis final : 0.2 - 0,40 % de NaCl



















0.60 0 - 40
0.65 0 - 19
0.70 0 - 9
0.75 0 - 2
0.85 0
20

LEUCOCITOS
Leucocitos: Constituyen un conjunto de clulas con funcin diversa, aunque
relacionada con la defensa del organismo frente a sustancias o agentes
patgenas. (Fagocitosis e inmunidad).
Leucocitos: Granulocitos
Agranulocitos

Granulocitos:
a) Se forman, maduran, almacenan y liberan en la medula osea
b) Slo permanecen brevemente en la sangre perifrica
c) Pasan a los tejidos y no vuelven a la sangre

Los granulocitos de cada compartimiento pueden pasar de uno a otro libremente.
Cinticamente se comportan como un caudal o reserva nica que ala ser
estimulado (adrenalina, ejercicio, susto), se produce un paso de clulas del
marginal al circulante.
Leucocitosis transitoria.
Produccin transitoria.
Produccin y almacenamiento en la M.O:
a) Proliferante: Mieloblasto, promielocito, mielocito.
b) No proliferante: Juvenil , baciliforme , segmentado
Reserva: se calcula que entre 25 a 30 Juveniles, Baciliformes y Segmentados
permanecen en M.O Por cada granulocito de la periferia, esto explica la
leucocitosis y desviacin izquierda que se produce ala inicio de una apendicitis.

Reserva medular: libera clulas por 9 a 10 das sin agotarse.
Funcin: Englobar y eliminar microorganismos.

Agranulocitos:
a) Monocitos.
b) Linfocitos:
Tejido linfoide en el hombre:
-Fuente medular clula inmunopotencial primitiva
- Tejido linfoide central asociado al epitelio intestinal
- Tejido linfoide periferico:ganglios linfticos y bazo

Existen valores: Absolutos por mm3
Relativos %

Recuento Absoluto de Neutrfilos (RAN)
RAN: Bc. + Seg
51 - 100
x- 4000
x- 2040
<2000 = Neutropenia Absoluta

70 100
X - 10.000
X = 7.000
>7.000 Neutrofilia absoluta
21


I. Ejemplos.
Leucocitos = 1.200 mm

Bs Eos S L M
0 1 20 71 8

20 seg. 100 Leucocitos
X seg 1.200 Leucocitos
X= 240 granulocitos
Neutropenia relativa (%) y absoluta
Linfocitos
71 Linfoc 100
X linfoc - 1200
X = 852 linf.
Linfocitosis slo relativa (%)
Leucocitos 15.200
Bs Go Bc S L M
0 2 8 32 46 12

Neutrfilo
40 Neutrfilos 100
X Neutrofilos - 15.200
= 6.080 neutrfilos

Linfocitos
46 Linfocitos 100
X 15.200
X = 6992
Neutropenia relativa (%) Linfocitosis absoluta

ALTERACIONES BENIGNAS SERIE BLANCA:

El recuento leucocitario normal oscila entre 5.000 y 10.000 clulas x mm
Se habla de:
a) Leucocitos cuando hay valores a 10.000 leucocitos/mm
b) Leucopenia cuando hay valores inferiores a 4.000 leucocitos/mm

LEUCOPENIA:
Infecciones:
a) Bacterianas: tifoidea, paratifoidea, brucelosis
b) Virales: gripe, sarampin, rubola, hepatitis
Drogas:
a) Antimitoticos: agentes alquilantes, antimetablicos.
22

b) Aminopirinas: antitirodes, enticonvulsivantes, sulfamidas, antihiataminas,
antibiticos; cursan con agranulocitosis.
Leucopenia con desviacin izquierda:
En ella se observa una disminucin del nmero de leucocitos por mm a menos de
5.000, pero con aparicin de elementos jvenes como son los baciliformes y en
ocasiones uno que otro mielocito juvenil, ejemplo gripe, tifoidea y paratifoidea,
sepsis grave, xantoma viral.

LEUCOCITOSIS:
Es el aumento por el nmero total de leucocitos, aunque tal aumento puede
deberse a preponderancia de cualquiera de los elementos.

Leucocitosis fisiolgica:
Es aquella que se produce sin infeccin asociada u otra lesin patolgica
demostrable como consecuencia de un Stress.
Causas:
Ejercicio intenso (30.000xmm)
Emocin
Inyeccin de adrenalina
Embarazo parto.

Leucotosis neutrfila:
a) Infecciones: pigenas, difteria, escarlatina, endocarditis, sepsis, infeccin
urinaria, salmonelosis.
b) Intoxicaciones:
1. Metablicas: uremia, acidosis diabtica, eclampsia, ataques de gota, como
heptico.
2. Otros como productos qumicos, drogas, venenos de insectos.
c) Otros: quemaduras, deshidratacin aguda, hemorragia aguda,
postoperatorio, hemlisis violenta, artritis reumatoide.

Eosinofilia moderada:
10 40 % eosinfilos y cifras absolutas de 1.000 a 5.000 por mm.
Causas
a) Infecciones parasitarias:
1. Helmintos: triquinosis, scaris, quiste hidatco
2. caros: sarna
3. Otros: amebiasis sistemtica, distomatosis
b) Enfermedades alrgicas: asma, urticarias, eczemas, fiebre de heno.
c) Infecciones bacterianas: escarlatina, estreptococias, fiebre reumtica.
d) Drogas: penicilinas, ampicilina, cefalosporinas, furadantina,
difenilhidantona, clorpromacina, etc.



Eosinofilia exagerada
50 90 % de eosinfilos con recuento leucocitario entre 30.000 a 100.000 por
mm.
Causas:
Leucemia Mieloide Crnica a eosinfilos
Larva migrans visceral

Linfocitosis:
23

a) Absoluta:
1. Coqueluche
2. MNI
3. Linfocitos infecciosa aguda
b) Relativa:
1. Infecciones virales: sarampin, rubola, varicela, parotiditis infecciosa,
hepatitis infecciosa.
2. Infecciones crnicas: TBC, sfilis, brucelosis.
3. Convalecencia.
4. Raquitismo.
5.
Aumento de los plasmazellen
Rubola, escarlatina, sarampin, varicela, meningitis, linfocitaria benigna, NNI.

Monocitosis
a) Infecciones bacterianas: TBC, EBSA brucelosis
b) Remisin de enfermedades agudas
c) Recuperacin de agranulocitosis
d) Intoxicaciones por tetracloroetano
.
Aumento de basfilos:
a) Varicela
b) Colitis ulcerosa

Reaccin leucemoide:
Se denomina as a una cifra de leucocitos mayor de 50.000 x mm con presencia
de clulas inmadura.
Causas:
Infecciones pigenas, sepsis
Hemorragias severas
Crisis hemoltica
Colitis ulcerosa
TBC miliar



LEUCEMIAS CRNICAS:
Granulociticas
Linfoctica
Plasmoctica
Clulas peludas
Prolinfoctica


LEUCEMIA MIELOIDE CRNICA (LMCr):
Enfermedad clonal adquirida del compartimiento hematopoytico de Stem Cell, en
la que el clon celular mutado en la mdula sea aumenta su proliferacin 5 a 10
veces ms que lo normal.
Ocurre adems una granulopoyesis extra medular en hgado y sinusoides de los
ganglios linfticos.
La L.M.Cr. constituye el 10 20% de todas las leucemias, con una mortalidad de
1.5 cada 100.000 habitantes.
Mayor incidencia entre los 40 - 60 aos 10% de los casos entre los 5 y 20 aos.
24

En el 95% de los casos es posible demostrar una alteracin citogentica en el
cariograma de la mdula sea denominada cromosoma Philadelphia (CrPh) se
trata de una translocacin recproca de la porcin distal del Cr 22 al brazo largo
del Cr.9. Se forma el gen de fusin BCR/ABL. Con actividad tirosin quinasa. Esta
condicin no es heredada, se encuentra en los granulocitos, eritroblastos,
megacariocitos y ocasionalmente en linfocitos B.
Aunque el Cr. Ph es considerado el marcador diagnstico de la LMCr. no es
exclusivo de ella, ya que se ha detectado su presencia en un 20 % de los adultos y
en una 5% de los nios portadores L.L.A., as como tambin en el 2% de los
pacientes con L.M.A.

Cuadro Clnico:
Fase crnica
Fase acelerada o de transformacin
Fase aguda o crisis blstica

Fase crnica
Se caracteriza por una superproduccin de leucocitos. El 20% de los pacientes
son asintomticos en el momento del diagnstico.

Fase acelerada
Aumento de Blastos.

Fase aguda:
En el 10% de los pacientes la aparicin de la crisis blstica es fulminante en das o
semanas.

LEUCEMIA LINFOIDE CRNICA:
La L.L.C. ha sido definida como una anormalidad proliferativa, generalizada
progresiva y autoperpetuante de los tejidos linfoides que afecta particularmente a
los linfocitos pequeos.
Este clon expansivo es bloqueado en un estadio relativamente uniforme de
diferenciacin, dando lugar a una gradual y progresiva aglomeracin de linfocitos
circulantes, adenopatas, infiltracin de la mdula sea y ocasionalmente de otros
rganos.
Es ms frecuente en pacientes mayores de 60 aos.

Hemograma: Anemia moderada Normoctica. Normocroma(NN), por infiltracin
medular.
Leucocitos: Oscila entre 15 x 10/L a 200 x 10/L con 70 a 95% de linfocitos.
Los linfocitos son pequeos de ncleo redondo, cromatina nuclear densa, sin
nuclolos visibles y escaso citoplasma, presencia en el frotis de restos nucleares o
sombras de Gumprecht que son restos de ncleos de linfocitos que se rompen al
realizar el frotis.
La hiperleucocitosis con linfocitosis absoluta, acompaada de neutropenia relativa
y trombocitopenia inmune por anticuerpos antiplaquetarios aparecen en fases
tardas, como tambin la anemia N.N. puede complicarse en una anemia
hemoltica autoinmune por anticuerpos IgG en el 8% de los casos; tiene un alto
recuento de reticulocitos y un Test de Coombs Directo positivo.

Mielograma: Infiltrado por linfocitos pequeos sobre un 40 a 50 %.
En los caso de anemia hemoltica autoinmune se puede observar hiperplasia con
algunos cambios megablsticos.
25

La trombocitopenia inmune perifrica se acompaa con un aumento de
megacariocitos en mdula sea.

TRICOLEUCEMIA HAIRY CELL LEUDEMIA
Habitualmente presenta esplenomegalia y pancitopenia con clulas linfoides
atpicas. Estas clulas velludas presentan prolongacin, filamento citoplasmticos.
Citoplasma es moderadamente abundante y cromatina nuclear homognea.
PAS
Fosf. cidas +++
Fsf. cidos tartrato resistente.

LEUCEMIAS AGUDAS

Clasificacin F.A.B.:
La ms usada corresponde a la clasificacin del grupo cooperativa FAB; que
considera tres grupos morfolgicos de leucemias linfoblsticas.

L.L.A. L.1:
Infiltracin medular por leucoblastos de talla relativamente pequea, cromatina
variable pero homognea, dentro de cada caso, nuclolo no visible o poco claro,
contorno nuclear regular y citoplasma escaso, sin granulacin ni visualizacin.
L.L.A.L.2:
Leucoblasto de mayor talla, cromatina variable, pero heterognea, dentro de un
mismo caso, con nuclolos prominentes, contorno nuclear irregular y citoplasma
relativamente abundante que puede presentar granulacin azurfila (peroxidasa
negativa).
L.L.A.3:
Talla celular relativamente grande pero homogneo, cromatina fina, nuclolos
prominentes, contorno nuclear regular, citoplasma escaso con marcada basofilia y
visualizacin (clula tipo Bur Kit).
Laboratorio:
Sangre perifrica: anemia normocitica, arregenerativa.
Leucocitos: en cantidad variable, con paso de formas inmaduras a la sangre.
Plaquetas: habitualmente disminuidas +++

L.L. Aguda: reacciones citoqumicas, clasificacin FAB
L1 L2 L3
Mieloperoxidasas

(Negro Sudn)
- - -
PAS (Glucgeno) -/- -/- -
A Naftil esterasas

(FL Na Sensible)
- - -
L.L. Aguda: Marcadores fenotpicos

SIg E CALLa % incidencia
Nula - - - 10-15
Comn - - + 70-85
T - + +/- 12-25
B - - - 2-4

Sig : Inmunoglobulinas de superficie
E : Receptor para hemates de cordero (rosetas)
26

CALLa: Antgeno comn de la leucemia linfoblsticas (suero de conejo inmunizado
con clulas LLA no B no T)


L.L.A. Anomalas cromosmicas ms frecuentes

Comn Nula Anomala chr 6
t (1;19); t (9;22);t (4;11)
Tipo T Anomala chr 6
t (1;14)
Tipo B Anomala chr 6
t (8;14); t (8;22);6 (2;8)

CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA LLA
Clasificacin de las leucemias agudas linfoblsticas de lnea B

FENOTIPO CD 19 CD 22c CD 10 clg-u slg TdT
B PRECOZ
(PRO-B)
+ + - - - +
B COMN + + + - - +
PRE-B + + + + - +
B + + +/- - + +/-

Citogentica de las leucemias agudas linfoblsticas de la lnea B:
t(9:22)
t(1:19)
t(4:11)
t(12:21)
Nota: en la citogentica el cromosoma Phyladelphia puede ser positivo si la
protena afectada ES LA 190

Clasificacin inmunolgica de las leucemias linfoblsticas de lnea T
FENOTIPO TDT CD7 CD3c CD2 CD3s CD1 CD4 CD8
PRE T + - + - - - - -
TIMOCITOS:
PRECOZ + + + + - - - -
CORTICAL + + + + - + + +
MEDULAR + + + + + - +/- 0+/-


Citogentica de las leucemias agudas linfoblsticas de lnea T
t(11:14)
t(1:14)
t(10:14)
TAL 1 del
Nota: en la citogentica de la lgc el cromosoma Phyladelphia es positivo si la
protena alterada es la 210.







27



LEUCEMIAS MIELOIDES AGUDAS: CLASIFICACIN FAB
Denominacin Hallazgos en
mdula
sea
Identificacin Caracteres
Clnicos
M 0 Sin diferenciacin
M1
L. Mieloblstica
Sin maduracin
>del 90% de los
blastos sin clulas
maduras.
Bastones de Auer.
Peroxidasas <3%
Esterasas (-)
Ac.Mo.
L. Granuloicticas++

M2
L. Mieloblstica
Con maduracin
30 90% blastos.
Cl.
Monoc. <20%
Cel. Madura >10$
Bastones de Auer
Peroxidasas ++Ac.
Mo.
L. Granulocticas++

M3
L. Promieloctica
Infiltracin
Promielocitos
atpicos.
B. Auer Mltiples.
Variente
mirogranular
Peroxidasas+++
Ac. Mo.
L. Granulocticas++
Cursan C/CID



M4
L.Mielomonocitica
>30%blastos
30-80%
Lnea
Granuloctico
>20%Lnea.
Monocticos
SPerifrica >5x10
Monocitos
Peroxidasas++
Esterasas++
Ac.Mo.
L.Granuloctico+
Ac. Mo.
L.Monoctica+
E.IFNa (-)

M5
L. Monoblsticas
>30% blastos
>80% Lnea.
Monocitica
Peroxidasas+
Esterasas +++
E. INFa+
Ac.Mo.
L.Monoctica++
Hipertrofia
Gingival
Infiltracin piel
Tubulopata
renal
M6
Eritroleucemia
>de 50 eritrocitos
Anmalos
(caractersticas
megaloblsticas)
>30% blastos
mieloides
Peroxidasas+
Ac.Mo.
Leritrob. - -

M7
Leucemia.
Megacarioblsticas
Fibrosis
medular+++
Megacariocitos
Dismrficos
Blastosis
Peroxidasas
Plaquetarias++
Ac.Mo.
L.Megacarioblsticas
++

Ac.Mo. = Anticuerpos monoclonales

L.M.A. Anomalas cromosmicas ms frecuentes
M1 t (9;22)
M2 t (8;21)
M3 t (15;17)
M4 t (Con esofinofilia) inv(16)
M5 t (9;11)
28

M6 Variables
M7 Variables
t=translocaciones

CITOQUMICA EN LEUCEMIAS AGUDAS
1. Fosfatasa alcalina
La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las
fosfomonoesterasas; hidroliza monosteres del cido fosfrico, actuando a un pH
del 9,1 a 9,6;
La actividad de la FA granuloctica se manifiesta en forma de un precipitado pardo
negruzco localizado en el citoplasma.
No todos los granulocitos presentan el mismo grado de positividad; en funcin de
este dato se establece un ndice de actividad de FAG.
Se realiza un recuento sobre 100 granulocitos asignando a cada uno un grado; y a
cada grado se la asocia un valor: grado 0=0, grado I=1, grado II=2. Se suman los
valores y el nmero obtenido es el nice de FAG, que tiene un valor mnimo de 0 y
mximo de 200. El ndice normal oscila entre 20 y 40.
Su mximo inters se centra en el estudio de los sndromes mieloproliferativos,
sobre todo para corroborar el diagnstico de la leucemia mieloide crnica (LMC)
para la que se designan valores muy bajos o nulos. Su determinacin es muy til
para establecer el diagnstico diferencial entre LMC y reacciones neutroflicas
secuendarias que cursan con valores elevadsimos.
2. P.A.S. c Perydico de Schiff
La reaccin de PAS o del cido peridico de Schiff se basa en la rotura de los
enlaces C-C- presentes en los carbohidratos por la accin del cido peridico,
potente agente oxidante, liberndose grupos aldehdo que al combinarse con el
reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo prpura intenso. Tie el
glucgeno citoplasmtico.
Linfoblastos 80% (+) grnulos o bloques de mayor tamao.
Mieloblastos (-) rara vez positivo dbil, granulacin fina. til (+) en M6
3. Mieloperoxidasa
Mieloperixoidasa oxida la bencidina en presencia de H2 O2.
Mieloblastos (++) 75% grnulos finos o gruesos color amarillo o verde intenso.
Linfoblastos, eritoblastos, megacariocitos (-)
4. Sudan negro
Tie los lpidos citoplasmticos de color negro.
Mieloblastos (++) dbil, linfoblastos y eritoblastos (-)
5. Esterasas Hidrolizan los esteres en sus componentes acidos y alcohol.
Se utilizan 4 substratos: naftol AS-C- cloroacetato, naftol AS-D- acetato, alfa-
naftil-acetato, alfa-naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una
sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reaccin.
Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una
esterasa que es especfica de la granulopoyesis neutrfila. Su aparicin es
ms tarda que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a sta en espcecificidad.
Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa
positividad en la serie monoctica que, a diferencia de las restantes clulas
hematopoyticas, es fluoruro sensible. Dada su positividad ms restrictiva es
preferente usar el substrato alta-naftil acetato o alfa-naftil-butirato para marcar la
serie monoctica y sus precursores, cuya positividad es intensa y se manifiesta en
forma de un precipitado por todo el citoplasma.
6. Fosfatasas cidas son enzimas hidroliticas del subgrupo de las
fosfomonoesterasas su accin es sobre los esteres del cido fosfrico a Ph
cido 4.7 5.5.
Linfoblastos (++) especialmente LcT 80% LcB (-) o (-+)
29

(+) Difuso en los grnulos primarios de los granulocitos.
Se forma un pp. Granular de color rojo anaranjado en el citoplasma celular.

Hairy Cells (++) de tipo granular difuso. Son tartrato cido resistente.

UTILIDAD
1. Las reacciones de esterasas sirven para diferenciar la leucemia monoctica
aguda de la mielomonoctica.
2. La reaccin de PAS resulta til para diferenciar las enfermedades
linfoproliferaticas benignas y malignas; para identificar las clulas eritroides
anormales de la eritroleucemia; para identificar la clula de Ssary
(Leucemia prolinfoctica T, clulas con ncleo cerebriforme).
3. El ndice de fosfatasa alcalina sirve para discernir las reacciones
leucemoides granulocticas de la leucemia granuloctica crnica.
4. Diferencian los bastones de Auer de otras inclusiones cristalinas (son
esterasa positivos, LMA).
5. Las reacciones de fosfatas cida sirven como marcadores para las clulas
vellosas de la reticuloendoteliosis leucmica.


INMUNOFENOTIPO:
La mayora de los estudios de marcadores celulares se realizan en suspensiones
de clulas de mdula sea o sangre perifrica. Las clulas se separan por
gradientes de densidad.
El mtodo ms usado es la tcnica de inmunofluorecencia directa o indirecta en
Ac. Mo, conjugados con fluorescencia y ledos en un microscopio de fluorescencia
o citmetro de flujo.


30


REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS



Gua de Tcnicas de reconocimiento morfolgico en Hematologa
Facultad de medicina U. Chile
T.M Marianela Cuneo. (2011)

Manual de tcnicas de laboratorio en Hematologa
Joan l.Vives Corrons. Tercera edicin 2006

Gua de laboratorio de hematologa, T.M. Mg Sp Eduardo Retamales Castelletto;
T.M. Mg Cs Andrs Aburto Almonacid.


31












32