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NBR 11818

ABNT-Associago
Brasileira de
Normas Tknicas
Rb de Janeim
Av. Treze de Ma& 13 - 2&P andar
CEP20003-CaixaPoatal1680
RbdeJanaIro-t?J
Td: PAM (021) 21 O-3122
Tebx (021) 34333 ABNT-ER
Enderqe Teb&fkx
NORMAT~CNlCA
Copytight Q 1990.
ABNT-m Bresibira
de Norman T6cnk.a~
Printed in BrazlU
lmpresso no Brasil
Todos os direllos -ados
FEVJ1991 1 EB-2117
Recipientes pbticos para solu#es
parenterais de grandes volumes
EspecificaqZo
Origem: Projeto 23:OS.l O-001/90
CB-23 - Cornit Brasileiro de Embaiagem e Acondicionamento
CE-23:05.10 - Comissgo de Estudo de Recipientes Pksticos para Solugdes
Parenterais de Grandes Volumes
EB-2117 - Flexible bottle for large volume parenterai solution
Palavras-chave: Recipiente plktico. Embalagem
I
11 pdginas
SUM&II0 d) evitar intera@es fisicas, quimicas e biok5gicas entre
0 recipiente 8 a soluf$o;
I Objetivo
2 Documentos complementares
3 Defini@es
4 Condi@es gerais
5 Cond@es especifkas
6 Inspe+o
7 Aceita@o e rejei#io
e) garantir que nao sejam liberadas, para a solu@io,
substlncias, em quantidade suficiente para afetar
a estabilidade da preparacao e apresentar risccs
de toxicidade para o usuario;
9 assegurar compatibiliiade funcional corn OS equipos
de infusao.
1 Objetivo
2 Documentos complementares
1.1 Esta Norma fixa as condi@es exigiveis relatiias aos
aspectosfisicos, quimicos e biok5gicos paraos recipientes
plasticos, isentos de aditivos que interajam corn solu@es
aquosas, indicadas especifkamente para o envase de
solu@es parenterais de grandes volumes (SPGV).
Na aplicat@o desta Norma 6 necessario consultar:
Regulamento T&c&o - IN METRO - N* 011/89 - Soas
Praticas de Fabrica@o de Solu@es Parenterais de
Grandes Volumes
1.2 Estas exigQncias para 0s recipientes plisticos para
solu@es parenterais de grandes volumes sao news&as
para:
NB-309/01 - Planos de amostragem e procedimentos
na inspe@o par atributos - Procedimento
USP XXI - United States Pharmacopeia XXI
a) assegurar que a qualidade da Solu~o Parenteral
seja mantida;
DIM 58383 parte 15 - Infusion Containers and
Accessories
b) possibilttar o envasamento, a e.steriliza@o, a
embalagem, a estocagem, 0 transporte, 0 manuseio
e a administracao da solu~o parenteral de forma
segura 8 eficiente;
DIN 68362 pane 1 - Infusion Equipment
3 Defini+es
c) evitar OS riscos de contaminago microbiokjgica Para OS efeitos desta Norma sao adotadas as defini@es
da solu@o; de 3.1 a 3.8.
Cpia no autorizada
2
E&2117/1991
3.1 Recipient8 pi&tic0
Recipiente constltuldo de polimero isento de aditlvos que
interajamcomsolu@es aquosas, paraenvase desolu@es
parenterais de grandes volumes.
3.1.1 Recipient0 plWJco vazio
Recipiente pronto, corn marca@o, aproprkido para receber,
guardar e administrar solu@es para infusgo.
3.1.2 Recipients plsrtlco ckio
Recipiente preenchldo corn SPGV ou corn agua para
injetiveis e esterillzado.
3.2 Solufio Parenteral de Grand8 Volume (SPGV)
Solur$io aquosa, esteril, acondlcionada em recipientes de
dose unica corn a capacidade de 1OOmL ou mais.
Nota: Estio incluidas nesta defini@o as infus6es intravenosas,
soiu@o para itiga@o 8 as sulu@es para dihe peritonial.
3.3 Fabricaqdo
Todas as opera-s que intervenham na produfio do
recipiente plastico.
3.4 Fabricante
Pessoa jurfdics que realize as opera-s de fabrica@o ate
a obtentio do recipiente plistlco.
3.5 Matirias-primas
Polimeros, isentos deaditivosque interajam corn asolufio
aquosa, utilizados na fabrics@0 do recipiente pllstico.
3.6 Marcat$o
Grava@o no recipiente por processo de moldagem.
3.7 Agua pam injetiveis
Agua para fabrica$io de soluc@es parenterais, conforme
especifll~o da USP XXI.
3.6 Volume nominal
Volume previsto ou declarado de liquido.
4 Condiqijes gerais
Al OS recipientes plasticos devem ser:
a) transparentes e isentos de: pigmentos, corantes,
ranhuras, riscos, rebarbas ou materiais estranhos,
nas suas pa&es internas e externas;
b) resistentes a vazamento, queda e pressIo;
c) apresentar estanqueidade de paredes uniformes;
d) compativeis corn as SPGV durante a estocagem;
e) apirogQnicos, atoxicos e impermeaveis a0 vapor
ddgua;
9 fechados convenientemente a fim de evitar
contaminafio;
g) de alp de sustentaqio tesistente e escala graduada
4.2 Fabrica+o
A fabricaM e amtazenamento de recipientes pkkticos
devem ser realizados de modo a atender as boas praticas
de fabrica@o de SPGV (FIT-INMETRO N* 01 l/89).
A3 Marc@0
A marca@o dos recipientes deve seguir especifica@es
do fabricante e a escala graduada deve ser validada a
cada retffica do molde.
4.4 Embalagem
4.41 OS recipientes pllsticos produzidos devem ser
imedlatamente acondicionados em sistemas fechados,
de tal forma que r-60 prejudiquem as exigencias desta
Norma.
Nota: OS redpientes plhicos fabricados para terceiros devern
sBr acondicionados em sacos plAsticus fechados, corn
espessura minima de 0,14mm, e receber prote@o
adicional, tais coma: caixas de papel.50 ou pl~stiws,
contentores flexiveis, sacos de papel ou pllstico.
442Asembalagensdevemserdevidamenteidentificadas
no minim0 corn:
a) tipo de recipiente;
b) numero de bte;
c) quantidade;
d) materia-prima;
e) data de fabricatio.
5 Condiges especificas
5.1 Matiriaa-primas
0 recebimento e o controle das materias-primas devem
ser realizados de acordo corn OS procedimentos
estabelecidos pelas boas prkas de fabricatio de solu-
@es parenterais de grandes volumes (FIT-INMETPO
NQ 011/89).
Nota: As mat&ias-primas devem atender aos requisitos fisicos,
quimhs e biol6gico.s desta Norma.
5.2 Requisites fkioos
5.2.1 Controla visual
OS recipientes pllsticos retirados para o ensaiodevem ser
imediatamente observados quanto ao aspect0 geral, e
nao devem apresentar:
a) falhas de sopro (ranhuras, riscos, rebarbas,
escamas, bolhas);
b) inclusoes de material interna e ex-temamente;
Cpia no autorizada
EB-2117/1991
c) particulas estranhas;
d) sistema de fechamento deficiente;
e) falta de centrallza@o e falhas internas (ranhuras,
riscos) das paredes do bico, desde a sua base ate
o local de torte para utillza@o;
9 falta de uniformidade da jun@o do molde.
52.2 Massa e dimensiks
0 recipiente pl~sttco deve apresentar massa edlmekes
de acordo corn as especifica@es do fabricante e dentro
dos limites de tolerktcia estabelecidos.
5.2.3 Sddagem do bico
0 fechamento do bico, nas condl@es do processo, deve
garantir perfeita veda@o do recipiente.
5.2.4 Dlstribuit$o do materlal
0 recipiente plastic0 deve apresentar pa&es uniforme e
corn espessura que tome impossivel a penetra@o de
microorganismos.
5.2.5 Tmnsparhcia
0 recipiente plastic0 deve ter transpar6ncia que possibi-
lite a verffii@o do aspect0 e limpidez da solucSo nele
contida, permitindo a observatio de particulas, tutva@es
ou mudanqas de car da solut$o.
5.26 lmpermeabilldade ao vapor dhgua
0 recipiente pl&stico cheio nio deve perder mais que
2,5% da massa ao ano, quando estocado a 37C.
5.2.7 R8sisMncia da base do bico
A base do bico deve ser resistente a movimentos de flexlo
sem formar fiiuras, ttincas ou rasgos, mesmo superfiiais.
5.2.8 flesis~ncia iI temperatura, press& 8 8SbUIqU8idade
0 recipiente plastlco cheio deve suportar varia@es de
temperatura e press:o, sem perdada sua estanqueidade.
5.29 Fhn8za 8 eatanqueidade de conex&o do biro do
rsdpiente corn 0 equip0
0 bico do recipiente plastico cheio deve permitir uma
perfeita conexao corn a ponta perfurante do equip0 de
infusao, padronizado conforme DIN 58362 parte 1, de
modo que Go haja vazamento e que a ponta perfurante
permaneca segura quando submetida a tra@o.
5.2.10 FkSlsthcia da alw de sustenta@o
A a@ deve permitir a utilizar$o do recipiente pendurado,
nas condi@es de uso e durante o tempo de infusso da
solu~o, sem apresentar sinais de ruptura ou deformaeo.
5.211 Resisthcia B queda
OS recipientes cheios devem resistir a impactos, sem
apresentar ruptura, fissura ou vazamento.
5.2.12 Estanqueidade do local da infecti
Se for previsto urn local de injer$io no recipiente pl&stico,
este deve permanecer estanque depois de puncionado e
retlrada a agulha.
5.3 Requlsitos quimicos
53.1 OS requisites quimicos da mat&a-prima e do recipiente
vazio stio os descritos a seguir:
Cpia no autorizada
EB-2117/1991
An&es Especifica@es
-0
Asmcto do liaufdo extrator Limoido. incolor 8 praticamente inodoro 6.2.3.2
Acfdez ou afcalinfdade M&x. 1,5mL de NaOH 0,Ol N
SubstGtcias redutoras
Absoreo no utravioleta
Subst. solGveis no hexano
Cinzas sulfatadas
(residue por incinera@o)
Metais pesados
Mix. 1 ,OmL de HCl 0,Ol N
Mix. 0,5mL de NqS,O, 0,Ol N
Passa no ensaio
MAX. 3%
Mb. 0,02%
Ausente
6.2.3.3
6.2.3.4
6.2.3.5
6.2.3.6
6.2.3.7
6.2.3.8
Residues Go-volateis
Aminas aromaticas primarias
Mh. 0,02%
Max. 20ppm
6.2.3.9
6.2.3.10
Sulfato
I
Ausente
I
6.2.3.11
ion amonio
Cloreto
Ausente 6.2.3.12
Ausente 6.2.3.13
5.4 Requisites biotigicos
5.41 lmpermeabilidade a microorganismos
Apb a esteriiiza@io e durante a estocagem, o recipiente
pi&ii dew garantir a esterilidade da so&50 nele contida.
5.42 lnoculdade
0 recipiente plistico n5.o pode liberar, para a solucao nele
contiia, substktcfas em quantidades capazes de exefcerem
efeitos: pirogenico 8 toxico.
Nota: Componentes n.So-adesivos, de cola de r6tulos e de tintas
de impressh n&o podem atravessara parede do recipiente.
6 Inspe@es
Efetuadas por meio dos ensaios descritos neste Capitub,
em cada tipo ou bte de materia-prima. Uma matetia-prima
deve ser inspecionada sempre que houver alteraGo na
sua composi@o, ateratio no process0 de fabrica+io do
recjpiente pktfco ou altera@ do processo de esteriiiiar$o.
6.1 Ensaios fisicor
6.1 .l Amostmgem
0s recipientes pldsticos necessaries para OS ensaios sio
retirados de acordo corn as exigrkcias do Controle de
Qualidade Estatistico segundo NE-309-01, obedecendo a
. . *
sequencia:
Cpia no autorizada
EB-2117/1991
5
6.1.2
6.1.3
6.1.4
6.1.5
6.1.6
3
5
5 (provenientes de 6.1.8)
Permeabiiiiade ao
vapor d%gua 6.1.7
ResistGncia da
base do bico 6.1.8
Firmeza e estanquei-
dade da conexCio bi-
~/equip0
6.1.9
Estanqueidade do
local da inje@o 6.1.10
ResisSncia da sky
de sustentat$o 6.1.11
ResisGncia B queda 6.1.12
Resist&w% g tempe-
ratura, presGi0 8
estanqueidade 6.1.13
Notas: a) Para a realiza@o dos ensaios 6.1.2 a 6.1.4, devem ser utilizados recipientes vazios.
5 (provenientes de 6.1.9)
5
5 (provenientes de 6.1 .ll)
5 (provenientes de 6.1.12)
Quantidade de recipientes
Recipientes vazios - 10
10
5 (provenientes de 6.1.2)
5 (provenientes de 6.1.2)
Recipientes cheios e
esterilizados - 20
5
2
Ensaio
Controle visual
Massa e dimens&s
Soldagem prkvia do
bico
Dlstribui@io do
material
TransparGncia
Obsetva#o
(Ensaio
deswutivo)
(Ensaio
destrutivo)
(Ensaio
destrutivo)
7 dias
5 horas
48 horas
b) OS recipientes plAsticos dew ser envasados corn SPGV ou Agua para inje@ e esterilizados para a reaka@io dos ensaios
6.1.5a6.1.13.
6.1.2 Controle visual
Deve ser realizado para a aprova@o & moide em miquina
e a cada hora durante a fabrica@o do recipiente plkth.
As arncstras tie inspecionadas a olho nu e para apmva@o
Go devem apresentar os defeitos destacados em 5.2.1.
6.1.3 Massa e dimensi3es
Devem ser avaliados para a aprova@o do molde em
miquina e a cada hora durante a fabricaH e devem
situar-se dentro dos limites de toierdncia estabeiecidos
pelo fabricante.
Note: A8 especifica~s, espacialmente as do diZirnetro do bico,
devem ser estabelecidas pelo fabricante antes e ap& a
esterilizaq5o do recipiente plAstico.
6.1.4 Soldagwn p&via do bico
Deveser realizada para libera#io do mokie em miquina.
Osbixsdc6recipientespkWcoscha&devemser fecha-
dos, simulando 0 procedimento industrial 8 obsefvados se
hi petfeita soldagem corn fechamento hermktico do bico.
6.1.5 Dlstribui@o do material
6.1.5.1 Dew ser medida nas partes superior, mkiia e
inferior das paredes do recipiente pldstico.
6.1.5.2 Cortar cada recipiente pldstico em dez se@%
transversais, em intervalos regulares portoda asua altura.
Medir a espessura em todo o perimetro das se@es corn
urn micrbmetro.
6x5.3 A espessura da parede deve ser tal, que a penetra+o
de miaoorganismos se tome impossivel. Ela dew ser unifor-
ms 8 situar-se entre 35Opm a 45Opm. Limites de toler~ncia:
a) minimo: - 250pm;
b) mAximo: - 75Opm.
6.1.6 Transparhda
6.1.6.1 Esvaziar os recipientes plisticos e encher urn corn
uma suspensHo aquosa de formazina (1 :lOOO) e o outro
corn Sgua para inje@o. Comparar os dois recipientes
contra fundo escuro.
Cpia no autorizada
6 EB-2117/1991
6.1.6.2 No recipiente corn a suspenstio de formazina, a
tuwa@io dew ser nitfdamente reconhecfvel em cornpan@
corn o recipiente contend0 agua.
Nota: Preparaeo da suspens5o de formazina:
a) dissolver S,Og de sulfato de hidrazinaem 4OOmL de
@a pam inje@0;
b)dlssolver XI,OS de hexametilenotstramina em
400mL de @a para injew:
c) transferir as solu@es, uma ap& a outra, para urn
frascc graduado de 1 L, e completer o volume corn
@a psra inje@o;
d) deixar a solu&ic descansar durants 46h a (20 i
2)4: pera completa rea@o.
6.1.7 Pemwabilidade so vapor dAgua
Pesar OS recipientes plasticos cheios 8 consewa-los na
estufa a 37C durante 7 dias. Apirs este perfodo, deixar
esfriar a temperatura ambiente e pesar. Calcular a perda
referente a 365 dias. 0 valor encontrado nao pode ser
superior a 2,5%.
6.1.8 Resisthcia da bsse do bico
A parte superior dos recipientes piisticos 6 dobrada 10
vezes para a esquerda e para a din&a em cerca de 30.
Nota: Na bass dos bicos n&c devem ser formadas fissuras,
bincas ou rasgos, mesmo supetficiais.
6.1.9 Firmeza e estenqueidsde da ccnexdo do bico do
recipiente corn 0 equip0
6.1.9.1 Conectar as pontas perfurantes de equipos aos
bicos dos recipientes pllsticos cheios, simulando as
condi@es de uso.
6.1.9.2 Cobcar os recipientes entre duas placas paratelas
e planas e submet&las a uma pressao de 20kPa (XXImbar)
durante 15min. NBo pode haver vazamento e a ponta
perfurante nao pode escapar do bico do recipiente.
6.1.9.3 Pendurar OS conjuntos no suporte de infusao 8
aplicar nas Gmaras de gotejamento uma fotga de trac$io,
dirigida para baixo, de 1 ON (1 ,0197kgf) durante 5h. OS
equipos de infusdo nao podem escapare a estanqueidade
deve ser garantida.
6.1.10 Estanqueidsde do local da inie@c
6.1.10.1 Puncionar os bcais de inje@o dos recipientes
vazios e fechados corn uma agulha corn O&nm de dPmetro
externo.
6.1.10.2 Retirar a agulha 8 testar OS pontos de injego
imersos em agua, corn uma pressao interna de 20kPa
(2OOmbar), durante 15s. NBo deve haver vazamento de
ar.
6.1 .ll Resisttncia da a&a de sustenta@o
6.1.11.1 Aoa mcipientes plkstiax cheios pendurados, aplicar
uma f0rc.a longitudinal minima correspondente a 25N
G,=W9.
6.1.11.2 As a@s de sustenta@o n5o devem apresentar
sinaia de ruptura ou deforma@o.
6.1.12 Resistencia & queda
6.1.121 Deixar cair OS tecipientes plisticos cheios de uma
altura de 1 m a 2m sobre uma superficie lisa e rigida.
6.1.12.2 Este impact0 Go deve causar estouro, ruptura,
fissura ou vazamento em qualquer lugar dos recipientes.
6.1.13 Fksisthcia A temperatua, press&o e estanqueidade
6.1.13.1 Estocar os recipientes plisticos cheios durante
24h a (-5 f: 5)c 8, a seguir a (50 f 5)c. Apcis resfrfamento
a temperatura ambfente, cobcaros recipientes entreduas
placas paralelas e submeter a uma pressio interna de
1 bar. Manter esta pressao por 1 Omin.
6.1.132 OS recipientes devem ser aprovados se, visualmente,
nao houver vazamento de liquido.
6.2 Ensaios quimicos
6.2.1 Amostragem
6.2.1.1 A materia-prima deve ser amostrada segundo o
m&do estatistico n+l, onde n - numero de recipientes
pl&cos.
611.2 A quantidade coletada deve ser suficiente para OS
ensaiose uma partedesta deveserguardadadevidamente
identificada coma refer&rcia, no minimo ate a data da
validade do ultimo lote do produto corn ela fabricado.
6.2.1.3 A amostragem dos recipientes pl6stfcos vazios
deve serfeita de acordo corn as exigQncias da N&309-01.
6.22 Resgentes
6.22.1 Corante BVF
Dissolver 0,l g de azul-de-bromotimol, 20mg de vermelho-
de-metila e 0,2g de fenolftaleina em alcool etilico, diluir
para 1 OOmL corn 0 mesmo sojvente 8 filtrar.
6.222 Soiu@o de alaranjado-de-metila
Dissolver 0,l g de alaranjadode-metila em 80mL de dgua
e diluir para 1OOmL corn al~l etilico. Fazer ensaio de
sensibilidade, todas as vezes que o reagente for usado.
Nota Ensaio de sensibilidade: a mistura de 0,l mLdasolu@o e
1OOmL de Agua isenta de di6xido de carbon0 6 amarela.
N&~maisqueO,lmLde fiddocloridricoO,lN Brequerido
para mudar a colora@o para vermelho. tvludanq de
w-0:
a) pH 3,0 (verkelho);
b) pH 494 (amarelo).
6.2.2.3 hdo suifkicc diluido
Adicionar 5,5mL de acid0 sulfurico para 6OmL de agua,
resfriar e diluir para 1 OOmL corn o mesmo solvente.
Cpia no autorizada
EB-2117/1991
6.224 Qoma de amide
Trfturar 1 g de amido corn 5mL de agua e derramar corn
agRa@o em uma mistura de 1OOmL de Bgua fervente
contend0 10mg iodeto de mercurfo. Fazer ensaio de
sensibilidade todas as vezes que o reagente for usado.
Nota: Ewaio de sensibilidade: a mistura de ImL da goma de
emklo, 2OmL de @a, c8fca de 5Omg de iodeta de pot&&
e 0,05mL de solu@o de iodo 6 azul.
6.225 Solur#o de lodo
A 1 OmL de iodo 0,l N adicionar 0,6g de iodeto de potissio
e diluir para 1OOmL corn agua. Preparar imediatamente
antes do uso.
6.2.26 Solu@o-tam@o de scetato
Dissolver 259 de acetato de am&Go em 45mL de solu@o
de dcido cbridrico 6N e diiuir para 1 OOmLcom agua. 0 pH
da solur$o deve estar em tomo de 35.
6.227 Solugito de tbacetamlda
6.227.1 Dissoiver4g de tioacetamida em dgua ediluir para
1 OOmL corn 0 mesmo solvente.
6.2.27.2 A 0,2mL da solu#io acima adicionar 1mL da
mistura, 75mLde solu@o de hidroxido de s&Go 1 N, 25mL
de dgua e 1 OOmL de glicerina 87%. Aquecer por 20s em
banho-maria fervente (esta solu@o deve ser preparada
no dia do uso).
6.23 Ensaios na matktiaprima e no reciplente plaStico vazio
6.2.3.1 Pnpam@o do lfquldo extrator
6.23.1.1 lntroduzir em balgo 259 da amostra (quando
necessario, deve ser cortada em pedacos de (1 cm x 1 cm)
e adicionar 5OOmL de dgua. Aquecer sob refluxo durante
5h. Deixar resfrfar e decantar para balio volumetnco de
5OOmL, completando o volume corn dgua, se necessirio.
6.2X1.2 lntroduzir em baliio 1Og da amostra (quando
necessdrio deve ser cortada em pedaco de (1 cm x 1 cm)
e adicionar 50mL de hexano. Aquecer sob refluxo durante
4h. Resfriar em agua gelada e filtrar rapidamente por urn
cadinho de vidro de pciosidade fina 1 Opm a 16pm. Recolher
o filtrado em balHo volum&nco de 5OmL, compfetando o
volume corn hexano, se necessario, e tampar para evitar
evaporacao.
6.2.3.2 Aspect0 do llquldo extrator
0 liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1 .l deve ser limpido,
incobr e praticamente inodoro.
6.233 Acidez ou akalinidsde
Tomar 1OOmL do liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1.1 e
adicionar 0,15mL de corante BVF. A viragem do indicador
para azul ngo deve necessitar mats do que 1,5mL de
solu@ode hidroxidode&dioO,Ol N. Tomaroutros 1 OOmL
doliquidoextratorobtidoem6.2.3.1.1, adicionar0,2mLde
solu~o de alaranjado-dsmetila. 0 inicio da viragem do
indicador nHo deve gastar mais do que 1 mL de solut$o de
&ddo clorfdrico 0,Ol N.
6.23.4 Substbcias redutoms
A 20mL do liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1 .l adicionar
1mL de acid0 sulfdrico diluido e 20mL de solu@io de
permanganato de potksio 0,Ol N. Deixar em repouso por
1 Smin a temperatura ambiente. Adicionar 1 g de iodeto de
pot&sioetilarimediatamentecom solu#iodetiossulfato
de s&o 0,Ol N, usando 0,25mL de goma de amido coma
indicador. Efetuar ensaio em branco a partir de 20mL de
agua. A diferenca entre os volumes deve ser inferior a
0,5mL
6.2.3.5 Absoqiio no ultravioleta
Tracar o espectro de absorgo no ultravioleta entre 230nm
a 360nm do liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1.2. Utilizar
cubeta de silica de lcm. A absorbdncia no maxim0 de
absoeo nio deve superar 0,4.
6.23.6 Substancias soitivels no hexano
Transferir 1 g da amostra para balHo de vidro de 25OmL,
adicionar 100mL de hexano e aquecer sob refluxo em
banho-maria a 75C por 2h. Fitrar rapidamente a solut$o
quente, atraves de urn chumaco de k de vidro. Rinsar o
bal~oealIIdevfdrocomduas por@esdelOmLde hexano
quente. Combinar o fitrado e as dguas de lavagem e
evaporar em banho-maria, sob nitrogGnio, ate secura.
Secar o residuo a 11 c por 2h. A massa do residuo nHo
deve ser superior a 30mg (3%).
6.2.3.7 Clnzas sulfatadas (residue por lndnera@o)
Pesar exatamente cerca de log da amostra, transferir
para cadinho de platina previamente tarado e juntar cerca
de 2mL de lcido sufflirico diluido. Aquecer brandamente
sobre chapa quente ate carboniza@o e incinerar
cuidadosamente a cerca de 8ooc, ate desaparecimento
do catvao. Acrescentar pequena quantidade de carbonato
de amdnio (pat-a neutraiiia~o do acido residual) 8 incinerar
ate massa constante. 0 teor de cinzas sulfatadas nao deve
ser superior a 0,02%.
6.23.8 Metals pessdos
Marcar dois tubos de Nessler (1) e (2). Adicionar ao tuba
(1) 10mLdo liquidoextratorobtidoem 6.2.3.1.1. Adicionar
aotubo(2) 10mLdeigua. Aosdoistubosadicionar2mLde
sol~o-tam*0 acetato 8 1,2mL de soIt@ de tioacetamida
e homogeneizar. Decorridos 2min, a solu~o do tubo (1)
nio deve apresentar colora@o mais intensa que a do tubo
(2).
6.2.3.9 Residues n&c-vol&els
Tomar 1OOmL do liquido extrator obtido em 6.2.3.1.1,
transferir para capsula de porcelana previamente tarada,
evaporarem banho-maria atesecura, continuar asecagem
em estufa a 105c, ate massa constante. Fazer ensaio em
branco. A diferenca entre o liquid0 extrator e o branco nSo
deve ser superior a 1 mg (0,02%).
6.23.10 Amlnas aromitlcas primbias
A 2,5mL do liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1.2 adicionar
6mL de dgua e 4mL de acido cbridrico 0,lN. Agitar
vigorosamente e rejeitar a fase organica. Adicionar a fase
Cpia no autorizada
8 EB2117/t991
aquosa 0,4mL de soiu@o de nitrfto de skfio a l%,
recentemente preparada. Homogenebar e deixar em
repouso por 1 min. Adkionar 0,8mL de soiucSo de suffamato
de amdnia a 05% edebarem repouso por 1 min. Adicionar
2mL de solu@io de naftildietilpropiienodiamina a 05%.
Ap& 15min, a wlorat$io da solur$io Go deve ser mais
intensa que a do pad&o preparado nas mesmas wndi@es
da amostra usando a mistura de 1mL de solu~o de
naftilamina a O,OOl%, 5mL de agua e 4mL de dcido
cloridriw a 0,l N em vet da fase aquosa.
6.23.11 Suhto
Marcsr dois tubos de Nessler (1) e (2). Adicionar ao tubo
(1) 5mL de liquido extrator obtfdo em 6.2.3.1 .l e 5mL de
agua. Adicionar ao tubo (2) 1 OmL de dgua. Aos dois tubos
adicionar 1 mL de solt~#o de &do cioridrico 3N e 1 mL de
solu@io de cloreto de bario a 25% e homogeneizar.
Decorridos lOmin, o tubo (1) nao deve apresentar
opalesc&cia maior que a do tubo (2).
6.23.12 ion amdnio
Marcar dois tubos de Nessler (1) e (2). No tubo (1)
adicionar 1 OmLdo lfquido extrator obtido em 6.2.3.1 .l . No
tubo (2) adicionar 1 OmL de bgua. Adiciinar aos dois tubos
3mL de solu~o de hidroxido de s&fio 3N e 2mL do
reagente de Nessler. Dentro de 5min a solu@o do tubo (1)
deve apresentar o mesmo aspect0 que a solu@o do tubo
(2).
6.2213 Cloreto
Marcar dois tubos de Nessier (1) e (2). Adicionar ao tubo
(1) 5mL do liquid0 extrator obtido em 6.2.3.1 .l e 5mL de
agua. Adicionar ao tubo (2) 1 OmL de agua. Aos dois tubos
adicionar 1 mL de solu$io de dcido nitrico 6N e 1 mL de
soiu@o de nitmto de prata 0,l N e homogeneizar. Dewmdos
Smin o tubo (1) nao deve apresentar opalesckrcia maior
que a do tubo (2).
6.3 Ensaios biotigicos
6.3.1 Amostmgem
OS recipientes pldsticos necessaries para os ensabs sao
retirados de awrdo corn as exig&rcias da NE-309-01.
6.3.2 Ensalo de impermeabilidada a microorganlsmos
6.3.21 Encher quatro recipientes plisticos, ate o seu
volume nominal corn urn meio de cuitura (ex. tiogliwlato,
etc.), e esterilizar ou usar pmcesso de enchimento esteril.
63.2.2 Incubaros recipientes durante 48h a 37C de modo
que, em have& wntamina@o, esta pcssa ser visualizada
Cobcar OS recipientes em frasws de vidro, corn tampa e
wntendo o mesmo meio de cuttura usado anteriormente,
de modo que 3/4dos recipientes plisticosfiquem imersos.
6.3.23 Contaminar o meio de cultura do fiasco de vidro
corn uma cultura de 16 h de bacillu subtilis, estafikows
aureus e escherichia wli em caldo e incubar por 10 dias a
37C.
6XL4 Passado 0 perfodo de incubacZ0, retirar os recipientes
plasticos da cultura bactertana, deswntaminar a parte
externa, analisar o meio de cultura contido no seu interior,
quanto ao desenvolvimento de microorganismos.
63.225 Preparar, wmo wntrole positivo, urn recipiente
plistiw wmo indicado acima, inoculado corn 1mL da
cultura bacteriana utilizada no ensaio. 0 recipiente de
controle Go 6 coiocado no fiasco de video coma OS outros
quatro recipientes. lncubar durante 10 dias a 37C.
6.3.26 0 recipiente de wntrole deve apresentar uma nitida
turva@o.
6.3.3 Ensaio ds pirogdnio
6.3.3.1 Extr@o da amostra
6.3.3.1.1 Partindo do recipiente plastic0 vazio, separar para
ensaio uma area total de 1 250cmZ, wrtadas em pedacos
de aproximadamente 20cm2 (wnsiderar a superficie dos
dois lados do recipiente, ou seja, 1 Ocm* de csda lado).
63.3.1.2 Cobcar as pecas wrtadas em urn fiasco de
Erlenmeyer e lavar duas vezes corn 1 OOmL de agua para
inje@o, agitando durante 1 min. Desprezar, deixando escorrer
toda a ggua de lavagem.
633.13 Adicionar 250mL de solut$o fisiologica de cloreto
des&fio,est&ileapirog&Uca. Fecharofrascoeautoclavar
a (121 i 1)oC por 20min.
6.3.3.2 Ensaio
6.3.3.21 Utifizar animais sadios corn uma massa corporal
nio inferior a 1,5kg, corn veias auriculares boas e pouw
ramificadas, alimentados corn ratio isenta de antibiotiws
(0s welhos de rata pura distinguem-se peb seu
wmportamento quiet0 e uma relativa wnstdncia de massa)
e que dentro de uma semana nao perderam massa.
6.3.3.22 NHo utilizar animais para o ensaio de pirogQnio
corn urn intervab de, peb menos, tr& dias. Caso o animal
tenha apresentado rea#o pirogQnica, nlo votar a utilizd-
b antes de, peb menos, 14 dias.
6.3.3.2.3 OS coeihos destinados ao ensaio de pirogQnio que
nao perderam massa em uma semana sio wmpostos em
grupos de trQs, de preferencia do mesmo ~8x0 e
awndicionados em boxes apropriados, instalados em
ambiente livre de perturba@es de qualquer espkie que
possam exti-bs a temperatura que rdo apresente dbrenca
de @C em rela@o a temperatura da gaiola de origem,
suspendendo-se a sua alimentaM 12 h antes do inicio do
ensaio, podendo, entretanto, ter acesso a agua.
63324 lntroduzir 0 termcmetro cfinico ou sensor apropnado
para ensaio de pirogdnio no reto do animal a uma
profundidade nlo inferior a 7,5cm.
633.225 OS animais seiecionados para ensaio devem
apresentar a temperatura corporal entre 58,5c e 39,8c,
procedendo-se as medic&s 36min antes da realiza@o do
ensaio, corn o objetivo de verificar a sua wnstancia e
determinar a temperatura wntroie de cada coelho.
633.26 OS animais nio devem apresentar variaeo de
temperit:*rade loC, em relacaoaooutrodo mesmogrupo.
Cpia no autorizada
EB-211711991
6.3.3.2.7 Animais apresentando varia@es de temperatura
corporal de &0,X n?io devem ser empregados no ensaio
de pirog&-rlo.
83.33 Procedimento do hnsaio
Para ressaltar melhor as veias aurlculares 8 a0 mesmo
tempo promow a sua assepsia, friccbnar corn urn chumaco
de algodgo umedecido em solur$o alcoolii 70%. lnjetar
na veia marginal da orelha urn volume que Go exceda
1 OmL por kg da massa do animal em urn period0 de nHo
mais que 1 Omin. Ao tennino da inje@o, corn chumaco de
algod?io seco, comprfmir o local da inje@o para estancar
o sangramento e impedir a fomta@o de hematoma.
Registrar a temperatura uma, duas e tr&r horas ap& a
inHo.
6.3.3.4 Interpreta@o
A temperatura maxima registrada para cada c&ho B
considerada comosua resposta. Quandoastemperaturas
medidas apes a inje@o forem inferiores a temperatura de
controle, a resposta equivale a elevatio de temperatura
zero. Se nenhum dos tr&coelhos apresentar elevar$o de
temperatura de 0,6c ou mais sobre suas respectivas
temperaturas de controle, e se a soma das eleva@es de
temperaturados tr& animais Goexceder 1,4c, o material
em ensaio atende os requisitos quanto a au&ncia de
pircgcinio. Se algum coelho apresentar aumento de
temperatura de 0,6c, ou mars, ou se a soma das eleva@es
de temperatura exceder 1,4c, o ensaio deve ser repetido
usando cinco outros animais. Se nao mais que tr& dos oito
coelhos apresentarem elevat$o de temperatura de 0,6pC,
ou mais, e se a soma das eleva@es de temperatura dos
oito animais nao exceder 3,7@C, 0 material em ensaio
atende os requisitos quanto a aus&tcia de pirogbnio.
6.3.4 Ens&o de inocuidade
6.3.41 Extra#o da amostra para ensaio de inje@o sist6mica
e ensaio intradhnico
6.3.41.1 Amostragem para ensaio:
Espessura do material
ptiStiC0
(mm)
<0,5
Amostragem para cada 20mL de
solu*o extratiia
12Ocm* da superffcie total
(dois lados combinados)
SubdivisHo
@w
5 x 0,3
0,5 a 1 6Ocm* da superffcie total
(dois lados combinados)
5 x 0,3
6.3.41.2 !Solu@ea extrativas
Podem ser usadas alternativamente as seguintes:
a) solu@ofisiol&icadedoretodes&iioparainje@o;
b) polietilenoglicol400;
c) 6leo vegetal - coma oleo de dsamo ou bleo de
algodao;
d) solut$io de 120 de dlcool em solu@io fisiologica de
cbreto de &io para inje@o.
Nota: 06leodesbsamo ou 61eo de algod& dew aprasentar
exig6ncias adicionais coma:
a) ser refinado recentemente;
b) Gic provocar re@es no tecido, cOmo edema e/w
eritema maior que 5mm de digmetro, quando injetada
intradermicamente uma dose de 2OOpL em cada 10
pontos no dorsa de tr& animais, obserwndo 24h,
46h 8 72h apbs a in&So.
63.413 Extm@o da amostra
Cobcar a amostra subdividida em urn frasw de vidro
limpo e esteril, corn capacidade para 1OOmL Lavar duas
vezes corn cerca de 70mL de agua para inje@o, agitando
par 30s em cada lavagem e desprezando completamente
a igua de lavagem. As amostras a serem extraidas corn
6leo vegetal devem ser secas a uma temperatura nHo
superior a WC. Adicionar no fiasco de vidro contend0 a
amostra 20mL da solu~o extratiia. Em paralelo, preparar
urn controle negativo do mesmo modo, sem a amostra-
ensaio. Para cada solu@o extrativa requerida no ensaio,
preparar urn extrato corn a amostra-ensaio e urn extrato de
controle negatiio. Fazer a extra@0 por aquecimento em
autoclave a 121 c par 60min ou em estufa a 70C por 24h
ou a 50C por 72h. As condi@es de extra@0 nlo devem
causar altera@es fisicas corn0 fusio ou amolecimento
das pecas plasticas, o que deve resuitar em redufio da
area superficial. Uma leve aderhncia pode ser tolerada.
Resfriar a temperatura ambiente, mas nao inferior a 22C.
Agitar vigorosamente por alguns minutos e decantar,
imediatamente, cada extrato para urn recipiente seco e
esteril, usando tecnica asseptica. Estocar os extratos B
temperatura entre (22 a 3O)c 8 us&los no mhimo ate
24h.
63.4.2 Ensaio de Inje@o sist6mica
6.M.2.1 0 ensaio de inje#o sistGmica 6 designado para
anilii de extratce de redpientes pl6stlcos em camundongos.
Usar animais sadios, albinos, nao usados anteriormente e
corn massa entre 179 a 239. Para cada grupo de ensaio
usar camundongos da mesma origem. Fornecer dgua e
comida apropriada para animais de laboratorio e de
composi@o wnhecida. Agitar cada extrato e seu
correspondente controle negativo em grupo de cincc
camundongos cada, na quantidade e via para inmo,
conforme indicado a seguir:
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Sotu~o extratfva Dose p/k
Via
Inje@o
V&c. ml&.
Sol. fisioh5gica de
cbreto de sodi0
Sol. 120 dkool em
sol. fisblogica
Polletilenoglicol
!XmL
6OmL
1%
IV
IV
IP
091
091
de0 vegetal
IV - lntravenosa
IP - Maperitoneal.
Nota: 0 extrato da amostra e seu correspondentecontrole negative preparado corn polietilenoglicol400 deve ser diluido corn
4,6 volumes de solu~o fisiol6gica de doreto de sbdio para inje#io, obtendo uma solu@o corn a concentrs@o de
200mg de polietilenoglicol4OOmL
63.422 ObSWar OS anitIIaiS logo ap& a inje@o, e apcis
4h, 24h, 48h e 72h da inje#io. Se durante o period0 de
observa@o nenhum dos animais injetados corn o extrato
da an-rostra apresentar urn grau de reat$o maior que os
animais injetados corn o extrato de controle, a amostra d
considerada dentro das exig&cias deste ensaio. Se afgum
animal injetado corn o extrato da amostra apresentar urn
lem sinal de toxic&de 8 tie mais que urn anhal apresentar
grave sintoma de toxicidade ou morte, repetir o ensaio
usando grupo de dez camundongos cada. Apk a repetk#o
do ensaio a amostra B considerada dentro das exigQncias
deste ensaio, se nenhum dos animais injetados corn o
extrato da amostra apresentar urn grau de reago maior
do que os animais injetados corn o extrato controle.
63.43 Ensaio intradhnlco
0 ensaio intradermico d designado para analise de extrato
de recipientes plisticos em coelhos. Usar coelhos sad&,
albinos, de pele sensivel e nlo usados anteriormente para
ensaios. OS coelhos devem ser cuidadosamente depilados
no dia do ensaio, em ambos os lados da coluna vertebral,
corn Area suficiente para a realizac$io do ensaio e a pele
deve estar livre de irrita@es ou trauma. Remover OS pGlos
softos par meio de aspirac5i.o e, se necesskio, limpar a
pele corn urn chumaco de algodgo embebido corn alcool
diluido a 70% e deixar secar antes de iniciar a inje#o.
Agitar, vigorosamente, cada extrato preservado conforme
6.3.4.1, antes de preparar a dose a ser injetada. Diluir o
extrato da amcetra e o extrato de controle em poliitilenoglicol
400 corn 8,3 volumes de solut$o fisiokgica de cbreto de
s&Go, de modo a obter uma concentracHo de 120mg de
polietilenoglicol mL. Injetar, por via intraddrmica, 0,2mL do
extrato da amostra em 10 pontos de urn lado da coluna
vertebral, em cada dois coelhos. Similarmente injetar
0,2mL do correspondente extrato de controle em 5 pontos
do outm la& da coluna vertebral dos mesmos dois coelhos.
Examinar os locais injetados 24h, 48h e 72h apes a
inje@o, procurando evidenciar uma reac5.o do tecido
coma: eritema, edema ou ferida. Evitar tocar nos pontos
da injer@o durante a manipulat$o ou obsetvac5.o do
animal. Para facilitar a leitura, passar suavemente urn
algodHo embebido em alcool diluido a 70%. Medir as
rea@es do extrato da amostra em relaeo ao extrato de
controie sobre uma escala numerica, usando o esquema
a seguir:
Formar$o de eritema ou ferida Valor
AusGncia de eritema
Leve eritema
Eritema bem definido
Eritema de moderado a grave
Eritema grave corn leve ferida
Forma@0 de edema Valor
AusGncia de edema
Edema leve
Edema bem definido
Edema moderado (1 mm)
Edema grave
(major que 1 mm e extenso atim da
kea exposta)
Cpia no autorizada
EB-211?/1991
11
A media obtlda do extrato da amostra Go dew ser maior 7 Aceitat$io e rejei+o
do que a m4dia do extrato de controle. Se 0 resultado
obtfdo for duvidoso, repetir o ensaio usando extratos OS recipientes pl&Mcos devem ser acsitos, desde que
recentes em outms t&s animais. Se a mhdia obttia corn ate&am as exigkcias desta Norma; case contWo, devem
oextratodaamostranioformaiorqueam&iaobtidacom ser rejeitados.
o extrato de controle, a amostra apresenta-se dentro das
exighcias deste ensaio.
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