El PCR utiliza la capacidad de las Enzimas polimerasas que

catalizan la formacin y reparacin de ADN (y ARN), mediante

un mecanismo que permite iniciar y parar su actividad en un
punto especfico de una hebra de ADN, para lo cual se emplean
polimerasas obtenidas de arqueobacterias como Termophillus
aquaticus que resisten temperaturas arriba de los 100C.

PCR - REACCIN EN
CADENA DE LA POLIMERASA

Polymerase chain reaction (PCR)


Inventada en 1985 por Kary B. Mullis (Premio Nobel
de Qumica, 1993)
Se usa en criminologa/medicina forense (identificar
personas a travs de muestras de sangre, cabellos, por
comparacin de DNA)
En el rea de evolucin (obtener enormes cantidades
de DNA a partir de fsiles que contienen trazas de
DNA).
Revolucion el diagnstico de defectos genticos,
(mutaciones), la deteccin de virus (HIV, HCV).
Permite hacer millones de copias de una muestra
nfima de DNA.

Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Si repetimos este ciclo (desnaturalizacin, annealing,
extensin) muchas veces logramos una amplificacin
exponencial
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
EL PRODUCTO FORMADO A PARTIR DE LA PCR SE PUEDE LLAMAR
AMPLICON. ES ESPECIFICO Y SOLO DEBE VERSE UNA BANDA POR
AMPLIFICACION CON PRIMERS ESPECIFICOS.
Polymerase chain reaction (PCR)
CONCEPTOS BASICOS:

ESPECIFICIDAD: GENERACION DE UN UNICO PRODUCTO DE
AMPLIFICACION

EFICIENCIA: MAXIMA PRODUCCION DE AMPLIFICACION EN
FUNCION DEL NUMERO DE CICLOS

FIDELIDAD: NUMERO DE ERRORES QUE COMETE LA DNA
POLIMERASA DURANTE LA COPIA

SENSIBILIDAD: MINIMA CANTIDAD DE DNA QUE SE NECESITA
PARA OBTENER UNA GRAN CANTIDAD DE COPIAS
VARIANTES DE PCR:

NESTED PCR:
SE REALIZA UNA SEGUNDA REACCION DE PCR A PARTIR DEL
AMPLICON, USANDO PRIMERS INTERNOS A LA 1
AMPLIFICACION
AUMENTA LA SENSIBILIDAD : SE REALIZAN 2 REACCIONES
CONSECUTIVAS DE PCR
AUMENTA LA ESPECIFICIDAD: SE UTILIZAN OTROS PRIMERS
INTERNOS ESPECIFICOS

PCR MULTIPLEX:
UNA REACCIN DE PCR CON VARIOS PARES DE PRIMERS QUE
AMPLIFICAN DIFERENTES SECUENCIAS

Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
Polymerase chain reaction (PCR)
RESUMEN

LONGITUD DE 18 a 24 d NTP
ESPECIFICOS
Tm = 55 a 75 C, CON Tm SIMILARES ENTRE SI
DISEAR PRIMERS CON CANTIDAD APROXIMADAMENTE 50% DE GC Y
DISTRIBUCION AL AZAR
EVITAR PRIMERS CON SECUENCIAS DE POLIPURINAS Y/O
POLIPIRIMIDINAS (Poly GC: DISMINUYE ESPECIFICIDAD - Poly AT:
DISMINUYE EFICIENCIA)
EVITAR SECUENCIAS QUE FORMEN ESTRUCTURAS SECUNDARIAS
CONTROLAR QUE LOS PRIMERS NO HIBRIDICEN ENTRE SI
EVITAR MAS DE 3 CG SEGUIDAD EN EL EXTREMO 3
COMENZAR Y TERMINAR CON PURINAS

EXISTEN PROGRAMAS DNAstar PARA DISEO DE PRIMERS
PRIMERS DEGENERADOS:

SE USAN SECUENCIAS QUE ESTEN
CONSERVADAS PARA UNA FAMILIA DE
PROTEINAS
SE USA SECUENCIA CON MENOR
CANTIDAD DE CODONES POSIBLES
SE INCLUYEN SITIOS DE RESTRICCION
PARA CLONAR POSTERIORMENTE
Polymerase chain reaction (PCR)
APLICACIONES DE PCR
MUTAGENESIS
RT-PCR
PRODUCCION DE SONDAS
DETECCIN DE INFECCIONES BACTERIANAS Y
VIRALES
DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES HEREDITARIAS
ESTUDIOS DE EVOLUCIN MOLECULAR
ESTUDIOS DE MEDICIDNA FORENSE
ESTUDIOS DE FILIACIN
Polymerase chain reaction (PCR)
PCR o RT-PCR CUANTITATIVA:
SE REALIZA UN CONTROL INTERNO QUE
SE UTILIZA PARA RELATIVIZAR LA
CANTIDAD DE AMPLICON OBTENIDA
DEL GEN DE INTERES
SE REALIZA LA DETECCION DEL
CONTROL INTERNO Y DEL GEN DE
INTERES CON SONDAS ESPECIFICAS Y
DIFERENTES



Polymerase chain reaction (PCR)