52 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.

u~uI - u 2I - uIIng:I 2UUI

2HEAEHI F=III
2-53715)
K|!!ON/NCl/ /ON|!lC/
NUCL|/K /H=@KI 2HEKI
1Tud1a Joryc do Aac1ncr1o
1:J~:::n u 1u:I.IuI u~ _u.u.n - Uu1
1arTo LTocL Jr.
1:J~::: u 1u:I.IuI u~ _u.u.n - Uu1
1~:gu.:nu: un 1M1R1 R~u:::
~u~I.: ~ 1.I~uIg.n
II6~un:g~u~u:njn:
INTRODUO
Por quaso moio sculo, a dotormi-
naao do ostrutura tridimonsional t3D)
do protonas vom sondo loita por
mtodos do cristalogralia o dilraao
do raio-X, inquostionvol a impor-
tncia o a contriluiao quo aplica-
os dossa tcnica tm proporciona-
do Bioqumica. Introtanto, h mais
ou monos vinto anos, a Rossonncia
Vagntica Nucloar tRVN), quo j
ocupava um local do dostaquo nos
ostudos ostruturais do poquonas mo-
lculas, comoou a sor utilizada na
dotorminaao da ostrutura tridimonsi-
onal do poptdoos o protonas om
soluao, indopondontomonto do da-
dos cristalogrlicos. Para quo isso
losso possvol, sonsvois avanos na
instrumontaao o na motodologia
dossa tcnica tivoram quo ocorror,
incluindo-so, ontro os mais importan-
tos, o uso do campos magnticos
homognoos do alta intonsidado,
novas tcnicas do pulso o a introdu-
ao do mtodos computacionais mais
avanados para a produao o a intor-
protaao dos dados do RVN do ma-
cromolculas.
Atualmonto, mais do duas mil os-
truturas 3D do protonas dotormina-
das por RVN tm suas coordonadas
atomicas dopositadas no 1:In:~u
1:I~.u 1nIn 1nu thttp:
vvv.rcsl.orgpdl) o osso numoro
vom croscondo rapidamonto. Vorili-
caram-so tamlm signilicativos pro-
grossos na dotorminaao ostrutural
do outros liopolmoros por RVN,
como o caso dos cidos nuclicos o
dos oligossacardoos, antos oltidos
aponas por dilraao do raio-X.
om a chogada da ora ps-gono-
mica, nunca so oxigiu tanto dos m-
todos para oltonao do ostruturas 3D
do liomolculas. Tradicionalmonto,
osso tralalho tom sido olotuado com
caractorsticas quaso artosanais` do-
vido alta comploxidado da tarola,
ao tompo nocossrio para a oltonao
do aponas uma ostrutura tvrios mo-
sos) o aos olovados custos com inlra-
ostrutura o manutonao. Por ossas o
por outras razos quo o uso da RVN
om Bioqumica ainda so oncontra
rostrito a poucos grupos do oxcoln-
cia ospalhados polo mundo o quo
sous lundamontos toricos pormano-
com olscuros para a maioria daquo-
los quo tm algum intorosso nos mais
rocontos avanos dossa nova ora do
doscolortas ciontlicas.
O prosonto artigo tom como oljo-
tivo primordial olorocor a loitoros
quo nao sojam da roa do RVN, mas
quo possuam noos lsicas om lsica
o om qumica, uma visao glolal dos
lonomonos quo lundamontam ossa
tcnica, o da manoira como tais lono-
monos sao utilizados no procosso do
dotorminaao ostrutural do sulstnci-
as rolativamonto simplos, pormitindo-
lhos dar os primoiros passos para uma
molhor comproonsao das motodolo-
gias dosonvolvidas na oltonao do
ostruturas 3D do moloculas lom mais
comploxas tpoptdoos, protonas o ci-
dos nuclicos) disponvois na litoratu-
ra.
importanto rossaltar quo a alor-
dagom oscolhida sor lastanto simpli-
licada, uma voz quo para uma vorda-
doira comproonsao do lonomono quo
roprosonta a Rossonncia Vagntica
Nucloar soria nocossria uma doscri-
ao om tormos do Vocnica Quntica,
com a utilizaao do oporadoros qun-
ticos o matrizos do donsidado,
1-4
o quo
ost lora dos oljotivos dosto artigo.
FIgura 1: A Radiaao Ilotromagntica
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I- uIIng:I 2UUI 53
PRINCIPIOS BSICOS DA
ESPECTROSCOPIA DE
RESSONNCIA
MAGNETICA NUCIEAR
A Ispoctroscopia o ostudo da
intoraao da radiaao olotromagntica
tRIV) com a matria. Issa radiaao
podo sor vista como uma onda com
duas componontos, uma oltrica o ou-
tra magntica, quo oscilam porpondi-
cularmonto ontro si, sondo amlas tam-
lm porpondicularos diroao do pro-
pagaao da luz (FIgura 1). A intoraao
ontro a radiaao olotromagntica o a
matria podo ocorror do duas lormas:
pola sua compononto oltrica ou pola
sua compononto magntica.
Uma das diloronas lundamontais
ontro a RVN o as outras lormas do
ospoctroscopia rosido no lato do quo,
na RVN, ossa intoraao so d com o
campo magntico da RIV o nao com o
campo oltrico, como o caso, por
oxomplo, do inlravormolho ou do ul-
traviolota.
A RIV do intorosso om anlisos
qumicas vai dosdo os raios gama talta
onorgia) at as ondas do rdio tlaixa
onorgia). Para cada tipo do ospoctros-
copia oxigido um tipo do oxcitaao o,
para cada uma dolas, oxisto uma quan-
tidado dolinida do onorgia, ou soja,
ossos lonomonos sao quantizados. lsso
quor dizor quo uma radiaao do lro-
quncia dotorminada o caractorstica
alsorvida para uma dotorminada tran-
siao.
A RVN oncontra-so na rogiao das
ondas do rdio tradiolroquncias). Im
princpio, podo-so dizor quo a RVN
uma outra lorma do ospoctroscopia do
alsorao. Im um campo magntico,
sol dotorminadas condios, uma
amostra podo alsorvor RIV na rogiao
da radiolroquncia trl), alsorao ossa
govornada por caractorsticas da amos-
tra. Issa alsorao lunao do dotormi-
nados nucloos prosontos na molcula,
quo sao sonsvois radiaao aplicada o,
por isso, ossos nucloos sao alvo do
ostudo para a comproonsao da RVN.
1- A DIllNl(AO DI
SPlN NUlIAR
A grandoza lsica onvolvida om
RVN o spin nucloar. O concoito do
spin nucloar provm da Vocnica Qu-
ntica, nao possuindo concoito oqui-
valonto na Vocnica lssica. Isso con-
coito lundamontal para a comproon-
sao do lonomono o podo sor compro-
ondido como uma propriodado quo
dotorminados nucloos aprosontam. Tais
nucloos, dovido sua conliguraao
nucloar, assumom um comportamonto
caractorstico do momonto angular,
capaz do gorar um momonto magnti-
co (FIgura 2), pois uma carga om
movimonto gora um campo magnti-
co. O momonto magntico gorado
podo sor doscrito om tormos do numo-
ro do spin l, cujos valoros, calculados
pola mocnica quntica
5,6
, podom sor
0, 12, 1, 32 otc. omo so salo,
nucloos quo aprosontam tanto massas
atomicas quanto numoros atomicos
paros nao possuom spin, sondo, conso-
quontomonto, o numoro do spin igual
a zoro. o caso do
12
,
16
O,
32
S otc.
(TabcIa 1). Issos nucloos nao tm
momonto angular associado o, portan-
to, nao oxilom propriodados magnti-
cas, o quo implica a ausncia do sinais
dotoctvois por RVN. Nucloos com
spin l 0 sao, om princpio, dotoctvois
por RVN. A dotocao dossos nucloos
ost rolacionada a condios oxpori-
montais ospociais, quo nao sorao aqui
alordadas.
Dontro os dilorontos nucloos dotoc-
tvois por RVN, nucloos com l sao
lastanto apropriados para uma com-
proonsao mais simplilicada da tcnica.
2- APllA(AO DI UV AVPO
VAGNTlO: A INIRGlA I A
lRIQUNlA IV RVN
Na ausncia do um campo magn-
tico, os spins nucloaros ostao orionta-
dos randomicamonto, nao aprosontan-
do nonhuma oriontaao dolinida (FI-
gura 3). Introtanto, quando uma amos-
tra sulmotida a um campo magntico
oxtorno B
0
, do alta intonsidado o ho-
mognoo, os spins nucloaros tondom a
assumir dotorminadas oriontaos. So-
gundo a mocnica quntica, o numoro
do spin l dotormina o numoro do
oriontaos quo um nucloo podo assu-
mir dianto do um campo magntico
oxtorno pola rolaao

:
numcro dc orIcntacs possIvcIs = 2I + 1
No caso do um nucloo com numoro
do spin l , aponas duas oriontaos
sao possvois, quando h aplicaao do
um campo magntico: uma parcial-
monto alinhada` com o campo magn-
tico aplicado o outra parcialmonto
contra` o campo magntico (FIgura
TabcIa 1: Vostra a corrolaao oxistonto ontro o numoro atomico tZ) o o
numoro do massa tA) com o numoro do spin tl)
I
Voio intoiro
lntoiro
Zoro
A
lmpar
Par
Par
Z
Par ou mpar
lmpar
Par
ExcmpIos
1
Ht12),
1
O t52),
15
N t12)
2
H t1),
14
N t1),
10
B t3)
12
t0),
16
O t0),
32
S t0)
O numcro cntrc parcntcscs IndIca o numcro dc spIn I do nucIco
cxcmpIIIIcado
FIgura 2: Vomonto magntico
gorado a partir do momonto
angular
54 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I - uIIng:I 2UUI
4). O ngulo quo dolino a oriontaao
do votor com rolaao a B
0
tamlm
dotorminado pola mocnica quntica
tsous valoros aproximados sao 55 o
125). As duas oriontaos roproson-
tam dilorontos ostados onorgticos. lsso
acontoco porquo um nucloo com spin
cria sou prprio campo magntico,
como j moncionado. Quanto mais
paralolo` lorom ossos dois campos to
do nucloo o o campo magntico oxtor-
no), monor sor a onorgia dosso osta-
do. Assim, o ostado do monor onorgia
aquolo quo so oncontra parcialmon-
to alinhado` com o campo o donomi-
nado ostado tou +), o o ostado do
maior onorgia, o parcialmonto con-
tra`, donominado ostado tou -)
(FIgura 5). As onorgias dossos nvois
podom sor doscritas como I

- B
0
o
I

B
0
, o quo oquivalo a dizor quo a
dilorona do onorgia ontro os dois
nvois podo sor oxprossa por
8
: I tI

- I

) 2B
0
, dosdo quo l .
A dilorona do onorgia E quo
surgo ontro os dois nvois ost rolacio-
nada com vrios latoros, dontro olos,
sogundo a oquaao antorior, a intonsi-
dado do campo magntico B
0
aplicado:
quanto maior lor o campo magntico
aplicado, maior sor a dilorona do
onorgia ontro os dois nvois (FIgura 6)
o maior a dilorona do populaao asso-
ciada a ossos nvois. lsso signilica quo,
para uma molhor rosoluao do spins
nucloaros om amliontos qumicos so-
molhantos, sao dosojvois ospoctromo-
tros com campos cada voz mais inton-
sos.
intorossanto olsorvar quo a dilo-
rona ontro nvois do onorgia - inicial-
monto inoxistonto - surgo dovido ao
oloito do campo magntico oxtorno B
0
aplicado solro o sistoma do spins om
ostudo. Issa mais uma das diloronas
lsicas ontro a RVN o outros tipos do
Ispoctroscopia: om inlra-vormolho o
ultra-violota, por oxomplo, j oxistom
dilorontos nvois onorgticos tvilracio-
nais o olotronicos, rospoctivamonto),
lastando a aplicaao do uma radiaao
do lroquncia apropriada para quo
uma transiao tvilracional ou olotroni-
ca) ocorra. No caso da RVN, os dilo-
rontos nvois onorgticos dovom sor
primoiramonto criados pola aplicaao
do um campo magntico do alta inton-
sidado tB
0
), s assim quo so podo
procodor Ispoctroscopia, aplicando-
so, ontao, a radiaao do lroquncia
apropriada para cada nucloo.
O lonomono da RVN ocorro na
rogiao das radiolroquncias tVHz) o a
intoraao da radiaao olotromagntica
com a matria d-so com a sua compo-
nonto magntica. Portanto, para so
procodor a RVN, dovo sor aplicado um
sogundo campo magntico tchamado
do B
1
), provonionto do uma lonto do
radiolroquncia aplicada porpondicu-
larmonto ao campo B
0
. osso sogundo
campo magntico quo pormito a olsor-
vaao do alsoros om RVN.
3- O ONIlTO DI ONSTANTI
GlROVAGNTlA - A IQUA(AO
lUNDAVINTAl DA RVN
Na ausncia do campo magntico
oxtorno B
0
, os ostados o sao dogo-
norados, uma voz quo nao h distinao
do onorgia. Aplicando-so o campo B
0
,
ontrotanto, um ostado mais ostvol
quo o outro, dovido a uma intoraao
ontro o campo o o momonto magntico
associado ao spin nucloar. A alsorao
om RVN , portanto, uma consoqun-
cia das transios ontro o nvol do
monor onorgia o o do maior onorgia,
possvois pola aplicaao do um sogun-
do campo magntico na rogiao da
radiolroquncia.
O momonto angular I o o momonto
magntico podom sor roprosontados
por votoros o a proporcionalidado on-
tro olos chamada do constanto tou
razao) giromagntica. Issa constanto,
quo dotormina a lroquncia do rosso-
nncia do nucloo, constitui um par-
motro muito importanto om RVN o
roprosontada por , aprosontando um
valor prprio para cada nucloo, podon-
do sor oxprossa pola rolaao:
2 hl
ondo h a constanto do Plank tI
h).
So a constanto giromagntica lor
positiva, como o caso dos nucloos do
1
H o
13
, o ostado + roprosonta um
nvol do monor onorgia. aso a cons-
tanto giromagntica soja nogativa, como,
por oxomplo, para o
15
N, ocorro o
oposto.
9
Alm do sor rosponsvol pola lro-
quncia do rossonncia do cada nu-
cloo, a constanto giromagntica inllu-
oncia outros lonomonos importantos
da Rossonncia Vagntica Nucloar,
10
como o caso do acoplamonto do
spins tquo sor alordado mais adian-
to), da sonsililidado dos nucloos, om
procossos do polarizaao cruzada, on-
tro outros.
FIgura 3: Spins randomica-
monto oriontados
FIgura 4: Diroos quantizadas
assumidas polos spins sol aao
do um campo magntico B
0
FIgura 5: Nvois onorgticos
criados pola aao do campo
magntico B
0
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I- uIIng:I 2UUI 55
Sulstituindo-so as oquaos an-
torioros tI h o 2 hl) , podo-
so chogar a:
= B
0
2
quo a oquaao lundamontal utilizada
om RVN o quo dolino a condiao do
rossonncia para um nucloo com spin
l .
4- A VAGNITlZA(AO llQUlDA
Im um campo magntico oxtorno,
o momonto magntico aprosonta um
ngulo com a diroao do campo
magntico B
0
aplicado (FIgura 4). So-
gundo a Vocnica lssica, lastanto
util para a visualizaao do muitos con-
coitos do RVN, a intoraao ontro um
nucloo com um momonto magntico
o o campo B
0
laz com quo o momonto
magntico procosso om torno daquolo
oixo (FIgura 7). A lroquncia dosso
movimonto chamada lroquncia do
larmor, o sou valor dado pola oxpros-
sao antorior = B
0
2 em Hortz.
Os dois ostados onorgticos corros-
pondom, ontao, procossao do em
torno do oixo, alinhado tmonor onor-
gia, so lor positiva) ou oposto ao
campo magntico aplicado B
0
. onsi-
dorando quo o campo B
0
ostoja aplica-
do na diroao z, no oquillrio, os
votoros dos momontos magnticos os-
tarao distriludos om dois conos, om
torno dos oixos +z o -z (FIgura 8).
11
A populaao dos dois dilorontos
ostados onorgticos o trospoctiva-
monto n

o n

) podo sor oltida a partir

da oquaao do Boltzmann:

= o
IkT
ondo k a constanto do Boltzmann o T,
a tomporatura oxprossa om oscala Kol-
vin.
Podo-so doduzir quo, tomporatu-
ra amlionto, como a dilorona do onor-
gia E muito monor quo kT tI <<
kT), havor um poquono oxcosso do
populaao do spins no ostado monos
onorgtico. Assim, para um valor posi-
tivo do , havor um ligoiro oxcosso do
populaao para o ostado , ou soja,
para os nucloos quo ostao alinhados
com o campo magntico. Isso oxcosso
do populaao rosulta om uma magno-
tizaao lquida na diroao +z, uma voz
quo no plano .,, a rosultanto nula
(FIguras 9, 10).
5- O IlIlTO DA APllA(AO DI B
1
SOBRI A VAGNITlZA(AO
Im RVN, a aplicaao do campo B
1
loita porpondicular ao campo B
0
aplicado tportanto, na diroao . ou ,).
Assumindo quo B
1
soja aplicado na
diroao ., o campo oscilanto nossa
diroao oquivalonto soma votorial
do dois votoros do igual amplitudo,
movondo-so om diroos opostas no
plano ., (FIgura 11). A magnitudo do
cada uma dossas componontos corros-
pondo motado do votor B
1
o somonto
uma dolas tom oloito no votor magno-
tizaao. A outra podo, portanto, sor
nogligonciada.
12,13
O campo B
1
aplicado na lorma do
um pulso, ou soja, a lonto do r.l.
pormanoco ligada por porodos con-
trolados da ordom do microssogundos
ts) a milissogundos tms). O pulso
olotromagntico criado por manipu-
laao da lonto do radiaao olotromag-
ntica, ligando-a ou dosligando-a, o a
duraao do pulso ts a ms) o tompo
para o qual a lonto do radiaao so
oncontra ligada.
No mtodo pulsado, os nucloos sao
oxcitados om uma rogiao do lroqunci-
as por um ou mais pulsos. Na rosso-
nncia, o campo B
1
, aplicado na lorma
do um pulso, laz com quo alguns
nucloos - quo so oncontravam om
situaao do oquillrio tmagnotizaao
lquida om z), aponas sol inlluncia do
B
0
- alsorvam onorgia o sous momon-
tos magnticos nucloaros passom a
procossar no plano ., (FIgura 12).
14
Ou soja, o campo B
1
altora a diroao do
procossao da magnotizaao, acarrotan-
do, portanto, uma porturlaao do sis-
toma, rotirando-o do oquillrio.
A nova compononto gorada no pla-
no ., podo sor olsorvada com auxlio
do um dotoctor no mosmo plano do
procossao. Para isso, a lonto do r.l.
dovo sor dosligada. Quando isto ocor-
ro, o sistoma tondo a rotornar situaao
original do oquillrio. Isto rotorno
conhocido por procosso do rolaxaao,
quo laz com quo os nucloos porcam o
oxcosso do onorgia o rotornom s suas
posios originais do oquillrio.
O docaimonto da magnotizaao .,
- quo d origom ao sinal do RVN - para
rotornar sua posiao do oquillrio
oxpononcial o d origom ao chamado
sinal llD t1:~~ 1uuuI.u 1~n,). Os
FIgura 6: Iloito do campo B
0
na dilorona do onorgia ontro
os ostados o
FIgura 7: Procossao nucloar
FIgura 8: ono do procossao
nucloar
56 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I - uIIng:I 2UUI
sinais da llD tFIgura 13) sao dotocta-
dos como uma lunao do tompo, on-
contrando-so a todas as inlormaos
solro acoplamonto o doslocamonto
qumico tlonomonos quo sorao vistos a
soguir) contidos om um ospoctro do
RVN. omo oxistom vrios nucloos om
uma amostra, tamlm sao originados
vrios sinais do llD quo so suporpom,
do lorma quo so torna muito dilcil a
oxtraao das inlormaos dosojadas
(FIgura 14). Para quo as inlormaos
so tornom acossvois ao usurio, ou
soja, para quo a intorprotaao do os-
poctro soja lacilitada, os sinais da llD
sao convortidos para um domnio do
lroquncias do rossonncia, caractors-
ticas do cada nucloo, atravs do uma
oporaao matomtica chamada trans-
lormada do lourior. A translormada do
lourior dos dilorontos sinais do llD d
origom ao ospoctro do RVN comumon-
to analisado
15
(FIgura 15). Im outras
palavras, um ospoctro do RVN consisto
om uma srio do rossonncias om dilo-
rontos lroquncias, donominadas dcs-
Iocamcntos quImIcos.
6- O DISlOAVINTO QUlVlO
Sogundo a oquaao lundamontal
da RVN j aprosontada t B
0
2),
om um ospoctro do RVN, todas as
alsoros dovidas a um mosmo tipo do
nucloo dovoriam ocorror a uma mosma
lroquncia, uma voz quo, sogundo
ossa oquaao, a lroquncia dopondo
aponas do campo B
0
aplicado o da
constanto giromagntica do cada nu-
cloo. O ospoctro oltido oxporimontal-
monto, no ontanto, mostra quo a situ-
aao nao oxatamonto assim, podon-
do sor olsorvadas dilorontos alsor-
os a dilorontos lroquncias (FIgura
15).
O lator quo rogo ossa dilorona do
lroquncias do alsorao donomina-
do llindagom. Isso lonomono podo
sor comproondido lovando-so om con-
ta a vizinhana tnucloos o oltrons) na
qual so oncontra o nucloo quo ost
sondo oljoto do anliso.
ada uma dossas partculas carro-
gadas ost sujoita inlluncia do cam-
pos magnticos. Tomando como oxom-
plo um tomo do hidrognio om uma
molcula, olsorva-so quo, quando ola
sulmotida a um campo magntico, o
campo induz uma circulaao dos ol-
trons om torno do hidrognio, om um
plano porpondicular ao campo oxtor-
no. Issa carga circulanto gorada tal
quo o campo magntico gorado tcha-
mado induzido) podo so opor ou nao
ao campo oxtorno. No primoiro caso,
diz-so quo os oltrons produzom um
oloito do llindagom solro o hidrog-
nio, no sogundo, o oloito do dosllin-
dagom dosso nucloo (FIgura 16). Dos-
sa lorma, o nucloo lica sujoito a um
campo magntico olotivo tB
olot
B
0
-
B
induzido
), o o grau do llindagom ou
dosllindagom dopondor da donsida-
do olotronica prxima dolo, ou soja, do
amlionto qumico om quo olo so on-
contra. lsso justilica dilorontos alsor-
os para nucloos prximos a tomos
olotronogativos, ondo a dosllindagom
maior, uma voz quo tomos olotrono-
gativos diminuom a donsidado olotro-
nica dos tomos do hidrognio quo
ostojam om suas vizinhanas. Para o
otanol (FIgura 15), por oxomplo, os
tomos do hidrognio do grupo -H
2
oncontram-so mais prximos do to-
mo do oxignio do quo os do grupo -
H
3
. Por isso, a donsidado olotronica
na rogiao prxima ao grupo -H
2
sor
monor quo na rogiao prxima ao grupo
-H
3
, o quo torna os primoiros mais
dosllindados com rolaao a ossos ulti-
mos.
onclui-so, ontao, quo nucloos om
dilorontos amliontos qumicos apro-
sontarao dilorontos lroquncias do al-
sorao dovido a dilorontos graus do
llindagom ou dosllindagom. A dilo-
rona ontro ossa lroquncia do alsor-
FIgura 9: Rosultanto no plano xy
FIgura 10: Vagnotizaao lquida
FIgura 11: Im vormolho ostao mostradas as componontos do B
1
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I- uIIng:I 2UUI 57
ao com rolaao a um dotorminado
nucloo-rolorncia tchamado padrao)
donominada dcsIocamcnto quImIco.
Assim, nucloos quimicamonto oquiva-
lontos tom somolhantos amliontos olo-
tronicos) aprosontam o mosmo doslo-
camonto qumico. No otanol, todos os
trs nucloos do hidrognio do grupo -
H
3
aprosontam o mosmo dosloca-
monto qumico, ocorrondo a mosma
coisa com os dois nucloos do hidrog-
nio do grupo -H
2
.
Os valoros do doslocamonto qumi-
co om unidados do lroquncia sao
valoros muito prximos. Por isso,
muito usual a chamada oscala dolta t ),
dada pola rolaao:
=
amostra
x 10
6

ospoctromotro
ondo
amostra
dada om Hortz o
ospoctro-
motro
om VHz. A oscala , portanto,
adimonsional com valoros oxprossos
om ppm. Os nucloos mais llindados
aprosontam valoros do monoros, on-
quanto os mais dosllindados aproson-
tam valoros do maioros. No ospoctro
do RVN do hidrognio tRVN-
1
H) do
otanol (FIgura 15), podom sor olsor-
vados dois valoros do doslocamonto
qumico: um primoiro, prximo a 1
ppm, mais llindado om rolaao ao
sogundo, prximo a 3,5 ppm. omo os
nucloos do hidrognio da -H
3
sao
mais llindados quo os do -H
2
, os
primoiros alsorvom a 1 ppm o ossos
ultimos a 3,5 ppm.
- AOPlAVINTO SPlN-SPlN
Olsorvando-so um ospoctro do
RVN, podo-so vor quo os sinais origi-
nados das alsoros nom sompro apa-
rocom como picos unicos ou singlotos,
mas podom aparocor tamlm como
duplotos, triplotos, quartotos otc. (FI-
gura 15), o quo ost rolacionado com
o quo so chama acoplamonto spin-
spin. Isso lonomono originado quan-
do nucloos om dilorontos amliontos
olotronicos ostao prximos ontro si
tnormalmonto o oloito olsorvado om
at trs ligaos, oxcoto quando oxisti-
rom duplas ou triplas ligaos).
Basicamonto, oxistom dois tipos do
acoplamonto spin-spin: o acoplamon-
to homonucloar, quando o acopla-
monto ocorro ontro o mosmo tipo do
nucloos, como, por oxomplo, quando
hidrognios om dilorontos amliontos
qumicos acoplam ontro si, o o acopla-
monto hotoronucloar, quo ocorro ontro
nucloos dilorontos, como, por oxom-
plo, ontro hidrognio o carlono.
Por moio da Vocnica Quntica,

salo-so quo o dosdolramonto do um

sinal do singloto para duploto, triploto,
otc. tchamado do multiplicidado) podo
sor dado pola rolaao 2nI+1, ondo n
o numoro do nucloos vizinhos om
dilorontos amliontos qumicos o I o
numoro do spin do nucloo quo ost
sondo analisado. Para nucloos com
spin l , a multiplicidado sor dada
simplosmonto por (n+1).
Assim, no ospoctro do hidrognio
do otanol (FIgura 15), dosprozando-
so o hidrognio do grupo -OH, dovido
ao procosso do troca qumica, tnao
alordado aqui), sorao olsorvados dois
sinais dovidos a acoplamonto homo-
nucloar: um rolativo aos hidrognios
da motila o outro aos hidrognios do
grupo -H
2
, uma voz quo so oncon-
tram om dilorontos amliontos olotroni-
cos o quo, portanto, aprosontarao dilo-
rontos doslocamontos qumicos. Issos
sinais, ontrotanto, nao aparocom como
singlotos (FIgura 15). A multiplicida-
do dada por (n+1): os trs hidrog-
nios da motila tm dois vizinhos tos
dois hidrognios do grupo -H
2
), logo,
o sou sinal aparocor no ospoctro como
um triploto t2 + 1 3), olsorvado om
torno do 1 ppm. Analogamonto, os dois
hidrognios do grupo -H
2
tm como
vizinhos os trs hidrognios da motila
o sou sinal sor um quartoto t3 + 1 4),
cuja alsorao olorvada om torno do
3,5 ppm.
A intonsidado dos picos do um
multiploto nao a mosma. Ila ost
associada ao numoro do transios
naquola dotorminada lroquncia do
cada um dos picos olsorvados. Para
nucloos com l , a intonsidado dos
picos do multiploto podo sor oltida a
partir do tringulo do Pascal (FIgura
17), disponsando o clculo dos numo-
ros do transios associadas a cada um
dos picos. Assim, para um duploto, por
oxomplo, a intonsidado dos sinais sor
do 1:1, para um triploto, do 1:2:1, para
um quartoto, do 1:3:3:1, o assim por
dianto, sogundo os valoros oxprossos
no tringulo do Pascal.
A distncia ontro cada um dos picos
do um multiploto chamada do cons-
tanto do acoplamonto J tFIgura 18), o
FIgura 12: lnlluncia do B
1
na magnotizaao lquida
FIgura 13: Docaimonto oxponon-
cial do sinal do RVN
FIgura 14: llD do otanol
58 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I - uIIng:I 2UUI
indica o quanto um acoplamonto ontro
nucloos olotivo: uma maior constanto
do acoplamonto signilica um acopla-
monto mais olotivo.
Alm disso, a constanto do acopla-
monto tamlm podo sorvir para idon-
tilicar dilorontos acoplamontos no os-
poctro. Issa idontilicaao lacilitada
tondo-so om conta quo, so um nucloo
A acopla-so a um nucloo B com uma
constanto do acoplamonto J
AB
, a cons-
tanto do acoplamonto do B com A tJ
BA
)
dovo sor igual a J
AB
tJ
AB
= J
BA
). Talolas
contondo dilorontos valoros do cons-
tantos do acoplamonto para dilorontos
grupos luncionais o molculas podom
sor oncontradas na litoratura,
-10
o quo
lacilita a intorprotaao dos sinais om
um ospoctro do RVN do uma manoira
inoquvoca. Os valoros das constantos
do acoplamonto J sao dados om unida-
dos do lroquncia tHz) o sao chamadas
1
J,
2
J,
3
J,.,
n
J, dopondondo do numoro
do ligaos oxistontos ontro os nucloos
quo acoplam t1, 2, 3, ., n ligaos,
rospoctivamonto).
A RESSONNCIA MAGNETICA
NUCIEAR EM DUAS
DIMENSES
Nas ultimas quatro dcadas, a roa-
lizaao do oxporimontos do RVN om
vrias dimonsos olovou solromanoira
a capacidado do rosoluao dossa tcni-
ca, ampliando, consoquontomonto, os
sous horizontos do aplicaao. A RVN
om duas dimonsos tRVN-2D) loi pro-
posta om 191,
16
o hojo roprosonta uma
podorosa tcnica para a olucidaao
ostrutural do molculas orgnicas, inor-
gnicas o principalmonto do liomol-
culas. Issas molculas aprosontavam
ospoctros do dilcil intorprotaao dovi-
do, principalmonto, suporposiao do
sinais ao longo do toda a laixa ospoctral
oou om uma dada rogiao do lroqun-
cia
1
(FIgura 19). A RVN-2D possilili-
tou a intorprotaao dos ospoctros dos-
sas molculas, antos dilicilmonto idon-
tilicadas polos mtodos om uma di-
monsao.
Para ontondor as razos disso o o
quo um ospoctro do RVN om duas
dimonsos, assim como o sou procos-
samonto, nocossrio comproondor
concoitos como I~uj u~ j:~jn:nn,
I~uj u~ ~:Iun o I~uj u~ u~I~-
n.
T~uj u~ j:~jn:nn o porodo
duranto o qual um sistoma do spins
proparado para atingir o oquillrio tr-
mico. Isso tompo podo incluir a aplica-
ao do um ou mais pulsos ou, simplos-
monto, sor um porodo t 0, podo at
mosmo nom oxistir, dopondondo do
oxporimonto quo ost sondo roalizado.
O importanto quo o sistoma do spins
so oncontro om oquillrio antos quo o
oxporimonto soja iniciado.
O I~uj u~ ~:Iun tchamado t
1
)
constitui o oxporimonto do RVN pro-
priamonto dito, duranto o qual o sisto-
ma do spins ovolui lora da situaao do
oquillrio pola aplicaao do um ou
mais pulsos, dopondondo da inlorma-
ao quo so dosoja oltor. O I~uj u~
u~I~n tou tompo do aquisiao, cha-
mado t
2
) o porodo duranto o qual so
adquiro o sinal do llD.
Um oxporimonto unidimonsional
podo aprosontar ossos trs tompos (FI-
gura 20). O tompo do ovoluao tt
1
)
lixo o o sinal rocolido aponas lunao
do tompo do dotocao tt
2
), quo
varivol. Im um oxporimonto convon-
cional om uma dimonsao, o tompo do
ovoluao t
1
zoro o a dotocao
roalizada imodiatamonto aps o pulso
do radiolroquncia (FIgura 21). Os
spins solrom aao do campo B
1
o o
rosultado , ontao, dotoctado. O sinal
FIgura 15: Ispoctro do hidrognio do otanol
FIgura 16: Blindagom o dosllindagom do um nucloo
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I- uIIng:I 2UUI 59
dotoctado no domnio tomporal tllD)
translormado para o domnio das
lroquncias modianto a translormada
do lourior o o ospoctro rosultanto um
grlico` do amplitudo x lroquncia,
chamado unidimonsional porquo apo-
nas um dos oixos corrospondo a lro-
quncias do alsorao (FIgura 15).
Im um oxporimonto lidimonsio-
nal, vlido o mosmo diagrama tom-
poral (FIgura 20). A principal diloron-
a quo oxistom olrigatoriamonto dois
porodos varivois: o tompo do ovolu-
ao tt
1
, quo om um oxporimonto 1D
podo sor zoro) o o tompo do aquisiao
tt
2
). lazondo-so uma srio do oxpori-
montos nos quais variom progrossiva-
monto os valoros do tompo do ovolu-
ao, dosdo zoro at t
1
, tom-so duas
variaos no domnio tomporal: uma
dovida a t
1
o outra dovida a t
2
. So uma
srio do llDs lor dotoctada a partir
dossos oxporimontos nos quais so vari-
am os valoros do t
1
, a translormada do
lourior ao longo do t
2
dossas dilorontos
llDs lornocor uma srio do ospoctros
1D. So uma outra translormada do
lourior lor roalizada ao longo do t
1
,
ontao podoromos oltor um ospoctro
lidimonsional, com sinais olsorvados
ao longo do duas dimonsos, l
1
o l
2
.
18
Dossa lorma, inlormaos complo-
xas, quo antos aparociam om aponas
uma dimonsao tpor oxomplo, hidrog-
nios om amliontos qumicos somo-
lhantos quo aprosontam doslocamon-
tos qumicos muito prximos, o quo
podo lovar suporposiao do sinais),
aparocom agora om duas dimonsos,
lacilitando a intorprotaao do ospoctro
para dotorminaao da ostrutura molo-
cular.
O ospoctro lidimonsional rosultan-
to podo sor roprosontado do duas lor-
mas: o grlico suporposto t:In~u),
quo mostra o ospoctro om trs dimon-
sos tl
1
, l
2
o intonsidado), o o grlico
do contorno, quo roprosonta um corto
horizontal do grlico :In~u. Isso
corto solocionado polo prprio usu-
rio do acordo com a intonsidado quo
so dosoja oltor. O corto lova a um
grlico lidimonsional l
1
x l
2
(FIguras
22, 23).
Imlora o grlico :In~u soja mais
lcil do sor visualizado, , ontrotanto,
mais dilcil do sor analisado, uma voz
quo intorprotaao om trs dimonsos
so torna mais comploxa. Por isso, um
corto transvorsal quo gora um grlico
FIgura 17: Tringulo
do Pascal mostrando a
intonsidado rolativa dos
picos para dilorontos
valoros do multiplicida-
do tn+1): para um
triploto, n2, para um
quartoto, n3, o assim
por dianto.
FIgura 18: onstanto do Acoplamonto tJ)
do contornos (FIguras 22, 23)
muito mais utilizado, j quo com olo
so oltm um diagrama lastanto cla-
ro, constitudo por linhas do contor-
no quo sao lom mais convoniontos
do sor analisadas.
Ixistom hojo dilorontos tipos do
oxporimontos om RVN multidimon-
sional t2D o 3D) quo utilizam dilo-
rontos rocursos tanto om tormos do
:JIun:~ como do In:uun:~.
13
Ixporimontos monos rocontos
tamlm continuam sondo muito uti-
lizados para olucidaao ostrutural.
Os oxporimontos OS\ t::~InI~u
Sj~I::j) o HITOR tH1T~:-
uuI~n: R:~InI.u) sao oxomplos
disso. O ospoctro OS\ lornoco cor-
rolaos para o mosmo nucloo tpor
oxomplo,
1
H com
1
H, FIgura 22). O
ospoctro do
1
H aparoco ao longo da
diagonal. Os pontos lora dossa dia-
gonal roprosontam corrolaos ontro
hidrognios nao-oquivalontos o sao
donominados :::-j~n:.
Os :::-j~n:, como mostra a
FIgura 22, dovom, olrigatoriamon-
to, lormar um tringulo rotngulo
com rolaao aos picos corrospon-
dontos na diagonal, om razao da
simotria do ospoctro, dado do grando
importncia na intorprotaao do os-
poctro, pois uma garantia do quo os
picos roalmonto ostao acoplando.
aso nao soja lormado um tringulo
rotngulo, podo-so garantir quo os
picos om anliso nao ostao acoplan-
do. Alm disso, o oxporimonto OS\
aprosonta tamlm a vantagom do
oltor os valoros das contantos do
acoplamonto J om unidados do lro-
quncia Hz, o quo roprosonta mais
uma garantia do acoplamonto ontro
os picos quo ostao sondo analisados.
No caso do ospoctro oltido polo
oxporimonto HITOR (FIgura 23),
o ospoctro nao aparoco na diagonal.
Im uma dimonsao, aparoco o ospoc-
tro do hidrognio, por oxomplo, on-
quanto om outra dimonsao aparoco
o ospoctro do outro nucloo tno caso
do ospoctro da FIgura 23, o outro
nucloo o do carlono-13). O ospoc-
tro lidimonsional mostra as corrola-
os oxistontos ontro os dois nucloos
como om um grlico do tipo .,.
60 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I - uIIng:I 2UUI
CONCIUSO
Aposar do rolativamonto roconto, a
Rossonncia Vagntica Nucloar j
rolorncia mundial para a anliso do
ostruturas molocularos om divorsas roas
do conhocimonto. Na Bioqumica mo-
dorna, ossa tcnica pormitiu, do lorma
indita, a invostigaao do ostruturas
tridimonsionais do liomolculas om
condios prximas do ostado lisiol-
gico tsoluos aquosas). Tal lato pos-
sililitou um considorvol avano nos
ostudos do dinmica molocular quo,
antos da RVN, limitavam-so quaso quo
oxclusivamonto a dados cristalogrli-
cos. Vosmo com todo o avano tocno-
lgico rogistrado ultimamonto nosso
campo, a dotorminaao da ostrutura
tridimonsional do uma liomolcula
ainda nao podo sor considorada uma
tarola trivial. As limitaos o poculiari-
dados dossa tcnica, lom como a gi-
gantosca domanda imposta polos vri-
os projotos gonomas concludos nosto
comoo do sculo, alm daquolos quo
ainda ostao por vir, indicam as dimon-
sos do tralalho quo so tom pola
lronto.
Do lato, vrios grupos do posquisa
tm-so unido om consrcios tTI~ R~:~-
n:I IIn:nI:, J: SI:uIu:nI 1.-
.uJ:unI.:, http:vvv.rcsl.org
indox.html), assim como omprosas do
liotocnologia t~I~:n ~uu.:, http:
vvv.colora.com), para atacar do lor-
FIgura 19: Ispoctro do RVN-2D do uma protona tBloch Jr. ., ot al. 1998)
FIgura 20: Tompos
possvois om um oxpori-
monto do RVN
FIgura 21: Ixporimonto do RVN om uma dimonsao
1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2I- uIIng:I 2UUI 61
ma mais olicionto a otapa considorada
mais lascinanto o dosaliadora dossos
vrios projotos, quo a dotorminaao
das ostruturas tridimonsionais do todas
as protonas sintotizadas por um dado
sor vivo, ao longo do todas as otapas
motallicas do sou dosonvolvimonto.
possvol quo os prximos anos
tostomunhom iniciativas ousadas, a
oxomplo do projoto gonoma humano,
na roa do dotorminaao ostrutural do
protonas, nos quais, tanto a cristolo-
gralia do raio-X quanto a RVN multidi-
monsional dovorao ocupar papis do-
cisivos na oltonao do ostruturas 3D
om larga oscala. Ispora-so quo o pro-
sonto artigo possa dar uma contrilui-
ao, por monor quo soja, nossa diroao
a partir da dilusao dos lundamontos
aqui aprosontados o como introduao
a uma prxima pullicaao dodicada
oxclusimonto RVN do protonas.
AGRADECIMENTOS
Ao Prolossor Jos Daniol liguoroa
Villar polos ospoctros do otanol gontil-
monto lornocidos o a Rodrigo A.V.
FIgura 22: Ispoctro OS\ do otanol
Voralos, polos olaloraao o arto do
vrias liguras aprosontadas nosto artigo.
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FIgura 23: Ispoctro HITOR do otanol