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Resumo Micro
Resumo Micro
) e Rugai (Newprov
).
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
EPM-MILI (Probac
)
Meio EPM: este meio uma modificao do meio de Rugai e Arajo, e contm os testes de
produo de gs por fermentao da glicose, produo de H
2
S, metabolizao da uria e do
triptofano (LTD).
Meio MILI: so determinadas a motilidade, produo de indol e metabolizao da lisina.
Os sete testes do EPM-MILI associados fermentao da lactose, observada nas placas de
isolamento (gar SS ou MacConkey), permitem a identificao presuntiva das seguintes
enterobactrias: E. coli, Salmonella sp, Shigella sp e Yersinia enterocolitica.
Semeadura: Tocar com o fio de platina uma colnia bem isolada e inocular nos 2 meios. Para
inocular o meio EPM, introduzir at o fundo do tubo e ao retir-la, semear a superfcie do meio. A
inoculao do meio MILI deve se feita por picada central, introduzindo o fio de platina at o fundo
do tubo. Incubar os tubos com as tampas semi-rosqueadas a 37C e fazer leitura aps 18 a 24
horas.
Leitura e Interpretao:
Meio EPM:
- Produo de gs: aparecimento de bolhas ou deslocamento do meio de cultura para cima.
- Produo de H
2
S: enegrecimento do meio em qualquer grau.
- Metabolizao da uria: aparecimento de cor azul ou verde-azulada (reao fraca) que estende
para a base do meio, envolvendo-o totalmente ou no.
- LTD: aparecimento de cor verde-escuro na superfcie do meio; quando a reao negativa, a
superfcie do meio adquire colorao azul ou amarela (rara).
Meio MILI:
- Motilidade: a bactria mvel cresce alm da picada, turvando parcial ou totalmente o meio; a
bactria imvel cresce somente na linha de semeadura.
- Metabolizao da lisina: se a lisina metabolizada, o meio adquire colorao arroxeada;
quando o aminocido no metabolizado, o meio se torna amarelo nos seus 2/3 inferiores.
- Produo de indol: aps a leitura dos testes de motilidade e lisina, adicionar 3 a 4 gotas do
reativo de Kovacs superfcie do meio e agita levemente; quando a bactria produz indol, o
reativo adquire cor rosa ou vermelha; quando no produz, o reativo mantm sua cor original.
Caractersticas das enterobactrias nos meios EPM-MILI
Meio EPM Meio MILI
Lactose
(placa de
isolamento)
Aspecto geral Gs H2S Urease LTD Motili-
dade
Indol Lisina
Shigella
(dysenteriae,
flexneri e boydii)
-
Base amarela e superfcie azul.
Ausncia de bolhas de gs e de
enegrecimento.
- a - - - - +/- -
Shigella sonnei
-
Base amarela e superfcie azul.
Ausncia de bolhas de gs e de
enegrecimento.
- - - - - - -
EIEC
+/-
Base amarela, superfcie azul, com ou
sem bolhas de gs. Ausncia de
enegrecimento.
+/- - - - - + -
EPEC, ETEC e
outras +
Base amarela, superfcie azul. Presena
de bolhas de gs. Ausncia de
enegrecimento.
+/- - - - +/- + +
Salmonella sp
- b
Base amarela, superfcie azul. Presena
de bolhas de gs e de enegrecimento.
+ + - - + - +
Yersinia
enterocolitica -
Meio azul na base e na superfcie.
Ausncia de bolhas de gs e de
enegrecimento.
- - + - - +/- -
a) Alguns sorotipos de Shigella flexneri e Shigella boydii produzem gs.
b) A S. typhimurium lactose (+) raramente isolada atualmente.
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Meio de Rugai (Newprov
)
Inoculao: Com o auxlio de um fio de platina, coletar a amostra da colnia a ser pesquisada e
inocular atravs de picada at o fundo do tubo, realizando estrias na superfcie do meio de Rugai.
Incubar em estufa a 36C por 24 horas.
Leitura e Interpretao dos Resultados das Provas
1. Parte Superior (Meio de Rugai): cor original azul-esverdeada.
pice podem ser realizadas as seguintes leturas:
- LTD - Reao positiva:
Cor verde garrafa (o microrganismo LTD negativo)
Cor marrom (o microrganismo LTD positivo)
- Fermentao da sacarose Reao positiva: cor amarela
- Produo de gs Reao positiva: formao de bolhas e/ou arrebentamento do meio
- Uria Reao positiva: cor azul intensa
- Produo de H
2
S Reao positiva: cor negra
2. Parte Inferior (Meio de Lisina): cor original ppura.
Podem ser realizadas as seguintes leituras:
- Lisina:
Reao positiva: qualquer cor diferente do amarelo
Reao negativa: cor amarela
- Motilidade:
Reao positiva: turvao do meio, qualquer crescimento alm da picada
Reao negativa: crescimento apenas na picada
3. Tampa: pode ser realizada a seguinte leitura:
- Indol Reao positiva: cor vermelha aps adio de uma gota de reativo de Kovacs no papel
de filtro existente na parte interna da tampa. OBS.: Esta leitura deve ser realizada aps
incubao.
Aspecto bioqumico presuntivo (principais cepas)
Microrganismo Indol LTD Sacarose Glicose Gs Uria H
2
S Lisina Mot
E. coli + - + + + - - + +
Shigella sp +/- - - + - - - - -
Salmonella sp - - - + + - + + +
Proteus sp -/+ + - + - + + + +
Enterobacter sp - - + + + - - - +
Citrobacter sp -/+ - V + + - +/- - +
Klebsiella sp - - + + + + - + -
Serratia sp - - + + - - - + +
Providencia sp + + V + V - - - +
+ = prova positiva +/- = para a maioria das cepas a prova positiva
- = prova negativa -/+ = para a maioria das cepas a prova negativa
V = prova varivel podendo ser positiva ou negativa
Esta tabela vlida somente para o meio de Rugai e este aspecto apresentado refere-se a
amostras de perfil bioqumico tpico.
Outros fatores como procedncia do material, resistncia a antimicrobianos, sorologia e provas
bioqumicas adicionais devem ser necessrias para a o identificao final do microrganismo em
questo.
Neste meio, devido grande diversidade de substratos, pode ocorrer interferncia entre as reaes
observadas. O microbiologista deve estar atento a este fato.
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ANTIBIOGRAMA (ATB)
Antibiogramas so bioensaios conduzidos in vitro que visam testar a
sensibilidade de bactrias frente aos antimicrobianos. A proposta primria deste teste
guiar o clnico na escolha do agente apropriado para a terapia. Alm disso, estes testes
so utilizados para avaliar in vitro a atividade de novos agentes.
ANTIMICROBIANOS
Os antimicrobianos compreendem:
- Agentes quimioterpicos: substncias qumicas sintetizadas em laboratrio
- Agentes antibiticos: molculas produzidas por seres vivos como bactrias e
fungos. (Ex: Penicilinas, produzidas pelo Penicillium sp e Cefalosporinas produzidas
pelo Cephalosporium sp)
- Agentes antibiticos semi-sintticos: molculas parcialmente sintetizadas por
microrganismos, concludas em laboratrio
Os quimioterpicos e antibiticos podem ter ao antibacteriana, antifngica e
antiviral. Esta ao pode levar inibio do crescimento, inativao ou morte do
agente infeccioso.
MECANISMOS DE AO DOS ANTIBACTERIANOS
Os antibiticos e os quimioterpicos interferem com diferentes atividades da
clula bacteriana, possuindo efeito bactericida ou bacteriosttico, sendo ambos efeitos
extremamente eficientes. As interaes dos antibacterianos com a clula bacteriana
podem ocorrem no nvel da parede celular, membrana citoplasmtica, ribossomos, DNA e
metabolismo intermedirio.
- Antibacterianos que atuam na parede celular - agem bloqueando a etapa final
da sntese da parede celular, o que quase sempre resulta na morte da bactria. Alm
disso, eles aumentam indiretamente a sntese das autolisinas.
- Antibacterianos que atuam na membrana citoplasmtica - estes antibiticos se
intercalam com as molculas da membrana e a desorganizam. Isso permite a sada
de componentes celulares e a morte da bactria.
- Antibacterianos que atuam nos ribossomos - agem impedindo a sntese protica
da clula bacteriana, ou provocando a sntese de protenas no-funcionais.
- Antibacterianos que atuam no DNA - agem quebrando a molcula de DNA,
bloqueando sua transcrio, ou inibindo a enzima DNA girase (promove o
enrolamento da molcula de DNA, para que ocupe menos espao na clula).
- Antibacterianos que atuam no metabolismo intermedirio - atuam bloqueando
processos metablicos da clula bacteriana.
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PRINCIPAIS GRUPOS DE ANTIMICROBIANOS
BETALACTMICOS - Nesta categoria so includas as Penicilinas, as Cefalosporinas, os
Monobactmicos e as Carbapenemas. Todos estes possuem em comum o anel betalactmico
(composto por 3 tomos de carbono e 1 de nitrognio). As Betalactamases so enzimas que
degradam os antibiticos da classe dos betalactmicos. Essas enzimas so produzidas por
vrios grupos de bactrias, conferindo-lhes resistncia aos antibiticos desse grupo.
- Penicilinas Foi o primeiro antibitico descoberto (Fleming, 1929), e continua sendo at
hoje um dos melhores antibacterianos disponveis, se considerarmos sua alta atividade em
bactrias sensveis e sua baixa toxicidade para o ser humano. Exemplos de Penicilinas:
Ampicilina e Amoxacilina (largo espectro), Meticilina e Oxacilina (pequeno espectro,
resistentes as betalactamases), Carbenicilina e Piperacilina (Penicilinas Antipseudomonas
ativas sobre P. aeruginosa, Proteus sp indol-positivos, Klebsiella sp e Enterobacter sp.
- Cefalosporinas So divididas em 3 grupos: Cefalosporinas de primeira gerao (ativas
contra bactrias G+ e G-, com algumas excees); Cefalosporinas de segunda gerao
(mais resistentes as betalactamases das bactrias G- e boa atividade sobre
enterobactrias) e Cefalosporinas de terceira gerao (ainda mais resistentes inativao
pelas betalactamases das bactrias G-; so muito utilizadas em infeces intra-
hospitalares).
- Carbapenemas A Imiprenema tem praticamente atividade contra todos os cocos G+ e
G- e contra bacilos G+ e G-, aerbios e anaerbios.
- Monobactmicos O mais utilizado o Aztreonama. Ele possui grande atividade sobre
G- e nenhuma atividade sobre G+ e anaerbios.
AMINOGLICOSDEOS - Possuem atividade contra bactrias G- aerbias e contra
estafilococos. Principais agentes: Estreptomicina, Canamicina, Neomicina e Gentamicina.
GLICOPEPTDEOS - So ativas sobre bactrias G+, tendo maior indicao no tratamento de
infeces provocadas por S. sureus e S. epidermidis resistentes a oxalicina. A resistncia
adquirida a esses medicamentos um fato raro, e por isso so muito utilizadas em infeces
hospitalares. Principais agentes: Vancomicina e Teicoplanina.
TETRACICLINAS - Antibacterianos de largo espectro, embora a resistncia adquirida seja
um fato muito freqente hoje em dia.
CLORANFENICOL - Possui amplo espectro de ao, embora seja alto o ndice de G+ e G-
resistentes ao Cloranfenicol. altamente ativo frente bactrias anaerbias estritas. a droga
de primeira escolha no tratamento da febre tifide, e na meningite causada pelo Haemophilus
influenzae.
MACROLDEOS Age sobre G+, cocos G-, espiroquetas e alguns bacilos G-. Principal
agente: Eritromicina.
LINCOSAMINAS - Ativas sobre estafilococos e estreptococos. Principais agentes: Lincomicina
e Clindamicina.
QUINOLONAS - Ativas sobre enterobactrias, principalmente as que causam infeces no
trato urinrio. Principais agentes: cido Nalidxico e Oxolnico, bem como os Flor Derivados,
Norfloxacino e Ciprofloxacino.
SULFONAMIDAS - Drogas de largo espectro que so pouco utilizadas devido existncia de
agentes antimicrobianos mais eficazes. utilizada em associaes.
POLIPEPTIDEOS Principais agentes: Bacitracina e Polimixina
METRONIDAZOL - Quimioterpico que vem sendo utilizado no tratamento de infeces por
germes anaerbios. efetivo contra Gardnerella vaginalis, Campylobacter fetus e Helicobacter
pylori.
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
RESISTNCIA BACTERIANA A DROGAS
As bactrias podem ser classificadas em sensveis e resistentes aos
antimicrobianos. A resistncia de uma bactria pode ser:
- Natural: Todas as amostras de uma espcie so resistentes.
- Adquirida: Somente parte das amostras de uma espcie so resistentes. A
resistncia adquirida um fenmeno espontneo da bactria, sendo os
antimicrobianos apenas agentes seletores de amostras resistentes. Geralmente a
resistncia adquirida d-se por alteraes genticas ou alteraes dos mecanismos
qumicos das bactrias.
A capacidade de adquirir resistncia, bem como o grau de resistncia adquirida,
propriedade bastante varivel entre as bactrias. Algumas raramente adquirem
resistncia e outras adquirem com grande freqncia, podendo a resistncia ser
moderada ou intensa. Quando moderada, a bactria pode ser eliminada do organismo
por um simples aumento da dose de antimicrobiano; quando intensa, o antimicrobiano
no pode ser utilizado. A capacidade das principais bactrias patognicas de adquirirem
resistncia apresentada na tabela abaixo:
Bactria Grau de
capacidade
Staphyococcus sp +++
Streptococcus pyogenes
a
Streptococcus pneumoniae
a
Neisseria gonorrhoeae ++
Neisseria meningitidis
Enterobacteriaceae ++++
b
Pseudomonas sp +++
Haemophilus influenzae ++
Anaerbios
c
Micobactrias ++
Espiroquetdeos
a. Adquirem resistncia com alguma facilidade para certos
Antibiticos, mas no para as penicilinas.
b. A S. typhi raramente se torna resistente.
c. O Bacteroides fragilis adquire resistncia com facilidade.
a ++++, graus de capacidade.
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
DETERMINAO DA SENSIBILIDADE DAS BACTRIAS
AOS ANTIMICROBIANOS
Uma bactria considerada sensvel a um antimicrobiano quando seu crescimento
inibido in vitro por uma concentrao 3, ou mais vezes, inferior quela que o
antimicrobiano atinge no sangue. Se a concentrao inibitria in vitro igual ou
superior quela que o antimicrobiano atinge no sangue, a bactria considerada
resistente. A bactria moderadamente resistente aquela cujo crescimento inibido por
concentraes intermedirias.
A concentrao inibitria dos antimicrobianos pode ser determinada atravs de
mtodos diretos (mtodos de diluio) ou indiretos (difuso em placa).
O mtodo de difuso em placa tem por base dois fatos bem estabelecidos:
1- Quando se coloca um disco de papel impregnado com um antimicrobiano na
superfcie de um meio de cultura slido, j semeado com uma bactria, o
crescimento bacteriano poder ser inibido formando-se um halo de inibio em torno
do disco, cujo dimetro varia de acordo com a velocidade de difuso do
antimicrobiano e a sensibilidade da bactria. Se a bactria for muito resistente, no
haver halo de inibio.
2- O dimetro do halo de inibio inversamente proporcional concentrao inibitria
mnima do antimicrobiano, isto , quanto maior o dimetro do halo, menos a
concentrao inibitria.
Em concluso, tomando-se por base o tamanho do halo de inibio, possvel
inferir se a bactria sensvel, moderadamente resistente ou resistente a este
antimicrobiano, comparando-se os halos obtidos com tabelas padronizadas
internacionalmente.
Tcnica do Mtodo de Difuso em Placa:
1- Sature um swab de algodo com a suspenso bacteriana.
Remova o excesso de umidade girando o swab contra a parede do tubo.
2- Semeie a suspenso sobre a superfcie estril de uma placa contendo gar Meller-
Hinton, utilizando sucessivamente trs direes para obter um inculo uniformemente
espalhado sobre toda a superfcie do gar.
3- Distribua os discos de antibitico, sendo cada um de um antimicrobiano diferente, sobre
a superfcie do gar inoculado. Deixe uma distncia de aproximadamente 1 cm entre a
borda da placa e o disco.
4- Pressione levemente os discos para que no se desprendam durante a incubao.
5- Incube as placas por 24 horas a 37C.
Atravs da anlise dos resultados poderemos classificar os
microrganismos testados em: resistente, intermedirio,
moderadamente sensvel, e sensvel, dependendo da formao ou
no de halo inibitrio e tambm de seu dimetro.
No caso de formao de um halo inibitrio, este deve ter seu dimetro
medido, e a medida encontrada deve ser comparada com tabelas
padronizadas. De modo geral, estas tabelas determinam medidas de
dimetro, e dessa forma a medida encontrada em cada caso pode
ento ser enquadrada em uma das quatro categorias supracitadas.
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
MICOLOGIA
Os fungos so seres eucariticos pertencentes ao Reino Fungi, que podem possuir um
s ncleo (leveduras) ou vrios ncleos (filamentosos ou bolores). Eles podem ser saprfitas
(nutrem-se de matria orgnica morta) ou parasitrios (nutrem-se de matria orgnica viva).
Um fungo formado estruturalmente por:
- Parede celular: estrutura rgida que protege a clula de choques osmticos e mantm
sua forma.
- Membrana citoplasmtica: atua como uma barreira entre os meio exterior e interior da
clula fngica, e realiza o transporte de solutos alm de outras funes.
- Ncleo: contm genoma fngico composto por DNA, RNA e protenas.
- Ribossomos: sntese protica.
- Mitocndria: produo de energia.
- Retculo endoplasmtico: produo de protenas e lipdeos.
- Aparelho de Golgi: armazenam substncias desprezadas pela clula, glicognio e
lipdeos.
- Lomassomos: corpculos de funo ainda desconhecida.
Para que um fungo se desenvolva, eles necessitam de algumas substncias como: O
2
,
H
2
O, carboidratos simples (glicose, sacarose, maltose, amido, celulose), substncias
nitrogenadas e vitaminas. Os meios de cultura fngica mais utilizados so o gar Sabouraud e
o gar batata. Em meios de cultura, dependendo das condies nutricionais e de
temperatura, os fungos podem se desenvolvem e obter morfologias diferentes, como
acontece no dimorfismo fngico (capacidade fngica de se desenvolver sob a forma de
levedura e/ou bolor).
Podem ser encontradas duas formas de manifestao fngica:
- Leveduriforme: colnias pastosas ou cremosas, formadas por microorganismos
unicelulares que cumprem funes vegetativas e reprodutivas.
- Filamentosas / bolores: colnias algodanosas, aveludadas e pulverulentas, formadas
por microorganismos multicelulares em forma de hifas (conjunto de hifas = miclio).
Colnias leveduriformes Leveduras
Colnias filamentosas Hifa septada e condios
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
MICOSES
MICOSES SUPERFICIAIS e CUTNEAS
Ptirase Versicolor (micose de praia) dermatose
cosmopolita, que produz aparecimento de manchas
esbranquiadas pela pele, principalmente no tronco e
abdmen. causada pela Malassezia furfur.
Tneas (Tinhas) causadas pelos gneros Microsporum sp, Trichophyton sp e
Epidermophyton sp. Dependendo do local onde o dermatfito se instala, esse tipo de
micose recebe um nome (Tinea cruris regio inguinal; Tinea corporis corpo; Tinea
barbae barba; Tinea manus mos; Tinea pedis ps; Tinea unguium unha; Tinea
capitis couro cabeludo).
Candidase pode acometer boca, garganta, couro cabeludo, vagina, dedos, unhas,
brnquios, pulmes, trato gastrintestinal ou fungemia. Seu principal agente a espcie
Cndida albicans.
MICOSES SUBCUTNEAS
Os agentes de micoses subcutneas vivem em estado saproftico no solo, nos
vegetais e nos animais de vida livre, sendo parasitas acidentais do homem e dos
animais, que se infectam por ocasio de um traumatismo na pele, com material
contaminado. Em geral, a micose se localiza na pele e tecido subcutneo, prximo ao
ponto de inoculao, sendo rara sua disseminao.
Esporotricose Causada pelo Sporothrix
schenkii, gera formao de pequenos tumores
ao longo dos vasos linfticos, com supurao e
ulcerao.
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
Cromomicose Causada por vrios
fungos, dentre os quais, o mais comum
o Fonsecaea pedrosoi. Gera formao de
ndulos, leses papulosas, eritmato-
descamativas, verrucosas, com ou sem
ulcerao.
Doena de Jorge-Lobo
Causada pelo Lacazia loboi,
que ainda no foi cultivado.
Gera leses quelides,
multilobuladas, ulceradas,
endurecidas, localizadas ou
disseminadas.
MICOSES PROFUNDAS
Criptococose infeco subaguda ou crnica de comprometimento pulmonar, sistmico
e, principalmente, do sistema nervoso central, causada pelo Cryptococcus neoformans
Paracoccidioidomicose doena de localizao sistmica, grave, que se manifesta por
diversas formas clnicas, causada pelo Paracoccidioides braziliensis.
Histoplasmose - uma doena fngica granulomatosa, causada pelo Histoplasma
capsulatum.
Colgio Dr. Clvis Bevilcqua Tcnico em Patologia Clnica
DIAGNSTICO LABORATORIAL MICOLGICO
EXAME DIRETO - Recomendado para a maioria das amostras.
- As amostras de consistncia lquida e clara devero so examinadas ao MO, com
soluo salina.
- Os materiais densos ou opacos (escamas de pele, raspados de unhas e plos),
devero ser emulsionados em uma gota de KOH a 10% sobre lmina de vidro.
Aquecer a mistura suavemente ao bico Bunsen. Cobrir com lamnula e examinar aps
15 minutos.
As hifas e leveduras resistem digesto do KOH. A observao deve ser feita
contra fundo homogneo. O KOH dissolve a queratina e intensifica o contraste das
estruturas fngicas com outros materiais presentes na preparao.
MICROCULTIVO DE BOLORES Recomendado para a identificao e diferenciao
fngica, atravs da visualizao de hifas.
Utilizar placas de Petri contendo lminas dispostas sobre um basto de vidro. Com
todo cuidado de assepsia, coloque um pequeno quadrado (1 cm) de gar Sabouraud,
sobre a lmina. Com ala de platina, retire um pequeno fragmento de uma colnia
escolhida (placa de fungo do ambiente) e semeie os lados do gar. Coloque uma lamnula
estril sobre o gar e gua destilada estril na placa para evitar dessecamento do meio.
Feche a placa e deixe temperatura ambiente. Quando houver desenvolvimento
satisfatrio, retire a lamnula e o fragmento do meio de cultura. Coloque numa lmina,
uma gota de corante lactofenol azul algodo e a lamnula em cima. Examinar ao
microscpico e identificar as hifas.
AULA PRTICA MICOLOGIA:
Pegar uma placa de Petri (j preenchida com o meio de cultura) e lev-la para
casa. Deixar essa placa aberta durante 24 horas em um local da casa (que seja escolhido
pelo estudante), fechando-a e lacrando-a com a fita adesiva logo que o tempo se
esgotar.
Aps aproximadamente uma semana, deve-se retornar ao laboratrio com a
placa, e realizar os seguintes procedimentos:
Procedimento 1 Exame macroscpico das colnias, com descrio.
Procedimento 2 Exame direto.
Procedimento 3 Microcultivo.