UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS DE

RIBEIRO PRETO
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS
FARMACUTICAS
CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA
Prof Dr Cristiane Masetto de Gaitani
2012
Evoluo da cromatografia em coluna clssica
tamanho das partculas da FE
maior eficincia e resoluo
maior presso equipamento
Desvantagens
Custo
Anlise qualitativa
CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA
Vantagens
Menor tempo de anlise
Quantificao
Anlise qualitativa
Detector universal sensvel
Treinamento
Quantificao
Detectabilidade
Versatilidade
Automatizao
Injetor
Cromatograma
Sistema de
Coluna
Reservatrio
de fase
mvel
Bomba
Sistema Isocrtico
Amostra
Detector
Descarte
Sistema de
aquisio
de dados
SEPARAO: depende da distribuio dos componentes
da amostra entre a fase estacionria e mvel
Arrasta os componentes da amostra
Participa do processo de separao
FASE MVEL
FILTRAO
Eliminao de material particulado
FASE MVEL
Pura, livre de partculas e gases
DEGASEIFICAO
Eliminao de gases
Ultra-som + vcuo
Hlio
on line
FASE MVEL
Pura, livre de partculas e gases
Solubilizar a amostra
No degradar e nem dissolver a fase estacionria
Baixa viscosidade
Compatvel com o detector usado
Solventes orgnicos
Hexano
Heptano
Clorofrmio
Isopropanol
Acetonitrila
Metanol
Solues aquosas de sais
Soluo tampo
mistura de dois ou mais solventes
solveis
ISOCRTICA
Composio da fase mvel constante durante a separao
VANTAGENS: simples, repetitivo, baixo custo
GRADIENTE
Composio da fase mvel varia durante a separao
DESVANTAGENS: limitao a alguns tipos de cromatografia,
rudos, incompatibilidade com alguns detectores
APLICAO: compostos com caractersticas qumicas variadas,
interferentes.
Observaes
Solventes puros
Solventes com fora de eluio diferente
Miscibilidade
Retorno s condies iniciais
COLUNA CROMATOGRFICA
Escolha da coluna cromatogrfica?
CORAO DO PROCESSO CROMATOGRFICO
Slica usada como suporte
Slica modificada (diferentes tipos e
COLUNA CROMATOGRFICA
Condicionamento da coluna
FM em vazo baixa (0,2 mL/min)
4-8 h colunas novas
2 h colunas armazenadas por alguns dias
15 min antes uso dirio
Slica modificada (diferentes tipos e
mecanismos de separao)