Apostila de Parasitologia Clnica

Apostila Parasitologia Clnica 2009
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SUMRIO

Introduo ................................................................................... 2
Mtodo da gota espessa.............................................................. 3
Exame direto a fresco ................................................................. 4
Tcnica de Hoffmann .................................................................. 4
Tcnica de Faust ......................................................................... 5
Tcnica da hematoxilina frrica .................................................. 6
Tcnica de Willis ..........................................................................8
Tcnica de Kato ........................................................................... 9
Exame parasitolgico de fezes (rotina do LAC-USP) .................. 10
Tcnica de Stoll .......................................................................... 12
Tcnica de Ritchie ..................................................................... 13
Tcnica de Rugai ........................................................................ 14
Tcnica de colorao de Kynion ................................................ 15
Tcnica do Swab (VASPAR) ........................................................ 19
Bibliografia recomendada para estudo ...................................... 20


2

INTRODUO

A Parasitologia Clnica na prtica, consiste no aprendizado de tcnicas
mais utilizadas no diagnstico das principais parasitoses intestinais e
sanguneas, preparando o aluno para atuar em sade pblica, educao e
pesquisa.
Sejam bem vindos !

Professoras: LUCIA MARIA BRAGAZZA e SORAYA EL KHATIB


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MTODO DA GOTA ESPESSA

1. Usar luvas durante todas as etapas do procedimento.
2. Colocar em Lmina de microscopia trs a quatro gotas de sangue fresco,
colhidas por puno venosa ou da polpa digital.
3. Com a ponta de outra lmina e com movimentos circulares, contnuos,
reunir as gotas, criando uma rea de aproximadamente 2 cm de dimetro.
Continuar com movimentos circulares, do centro para a periferia, durante
30 segundos para evitar a formao de fibrina, a qual poder obscurecer
as preparaes coradas.
4. Terminar os movimentos circulares no centro do crculo de sangue; por
meio desse procedimento o esfregao apresenta a borda fina e o centro
espesso.
5. Deixar secar temperatura ambiente e, aps, mergulhar a preparao
em gua corrente ou em soluo salina a 0,85%, para que se produza a
hemlise. Secar temperatura ambiente.


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EXAME DIRETO A FRESCO DE SUSPENSO DE FEZES

1. Suspender por meio de um palito, pequena poro de fezes em gota
salina previamente colocada sobre uma lmina.
2. Examinar ao microscpio

TCNICA DE HOFFMANN

1. Colocar aproximadamente 2 g de fezes num copo descartvel.
2. Acrescentar aproximadamente 20 ml de gua morna aos poucos.
3. Homogeneizar as fezes totalmente com o auxlio de um palito.
4. Transferir para um clice afunilado coando em filtro para fezes.
5. Acrescentar gua da torneira at encher o clice.
6. Deixar em repouso at a sedimentao (2 a 24 horas).
7. Com o auxlio de uma pipeta Pasteur recolher o sedimento, gotejar
sobre uma lmina e adicionar uma gota de lugol, homogeneizar o
preparado com uma lamnula e cobrir com a prpria lamnula.
8. Examinar ao microscpio.


5

TCNICA DE FAUST

3. Homogeneizar totalmente as fezes com o auxlio de uma esptula.
4. Coar a suspenso de fezes em filtro prprio para fezes ou gaze.
5. Recolher o filtrado em tubo de centrfuga e centrifugar a 2500 rpm
durante 01 minuto.
6. Decantar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua
7. Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto e desprezar o sobrenadante,
8. Se necessrio repetir a lavagem at que o sobrenadante fique claro.
9. Ressuspender o sedimento com sol. de sulfato de zinco (d= 1.180)
completando o volume do tubo at 1 cm da boca do mesmo.
10. Centrifugar a 2500 rpm por 01 minuto.
11. Retirar a pelcula da superfcie delicadamente com o auxlio de uma
ala dobrada em anel.
12. Colocar as gotas obtidas com a ala de anel para uma lmina com lugol
13. Cobrir com uma lamnula


6

TCNICA DE HEMATOXILINA FRRICA ( segundo Cludio Santos Ferreira)

1. Fazer o esfregao bem fino em lmina misturando fezes com uma
pequena gota de soro (usar de preferncia muco e fezes lquidas para
a pesquisa de trofozotos).
2. Fixador de Bouin - 1 a 2 minutos.
3. Lavar em lcool.
4. Lavar em gua corrente - 2 minutos.
5. Mordente (almen frrico a 2%) - 5 minutos.
6. Hematoxilina - 5 minutos.
Controlar a colorao, observando o esfregao at atingir a cor azul
cinzenta.
7. gua corrente - 1 minuto.
8. Diferenciador (almen frrico a 2%) se necessrio.
9. gua corrente.
10. Montar em Blsamo do Canad.


7

Sol. de Almen Frrico.

Mordente
Almen de ferro puro.....................................................2.0 g.
(Sulfato de amnio e ferro III)
gua destilada..............................................................100 ml.
Diferenciador
Almen de ferro puro.....................................................0.5 g.
gua destilada...............................................................100 ml.
Triturar em almofariz e dissolver a frio.
A sol. se conserva por perodos curtos, por isso deve-se preparar
pequenas quantidades de cada vez.
Guardar em frasco mbar.

Soluo de Hematoxilina
Cristais puros de hematoxilina...............................................0.5 g.
lcool a 95%...........................................................................10 ml.
gua destilada q.s.p. .............................................................100ml.
Deixar em recipiente de boca larga, tampado com gaze durante
alguns dias ( no mnimo 2 dias).
Completar at o volume original.
Acrescentar 0.02 g. de c. ctrico puro.

TCNICA DE WILLIS

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Colocar aproximadamente 2 g de fezes num copo descartvel.
Acrescentar aproximadamente 20 ml de gua morna aos poucos.
Homogeneizar totalmente as fezes com o auxlio de um palito.
Transferir para um clice afunilado coando em filtro prprio para fezes.
Transferir para um tubo de centrfuga e centrifugar a 2500 rpm por 02
minutos.
Desprezar o sobrenadante
Ressuspender o sedimento em sol. saturada de NaCl, completando o
volume do tubo com esta soluo at formar um menisco.
Colocar uma lmina sobre a boca do tubo.
Deixar em repouso durante 15 a 45 minutos (no ultrapassar os 45
minutos, pois os ovos comeam a descer).
Retirar a lmina virando bruscamente.
Examinar ao microscpio.


9

TCNICA DE KATO (modificado por KATZ e cols.)

Preparar uma sol. de verde de malaquita (esse produto tem a finalidade
de conservar e clarificar as fezes a serem examinadas ) usando as
seguinte frmula:

glicerina............................................100 ml
gua dest. ........................................100 ml
verde de malaquita a 3%..................1 ml

Cortar papel celofane semi-permevel (molhvel) em pedaos de 24
mm por 30 mm e deix-los mergulhados na sol. de verde de malaquita
por 24 horas.
Colocar sobre um pedao de papel higinico uma poro de fezes a ser
examinada.
Comprimir a parte superior com um pedao de tela metlica. Nessa
malha s passam ovos de helmintos e detritos menores do que eles.
Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e transfer-
las com o auxlio de uma esptula, para um carto retangular, contendo
no seu centro um orifcio de 6 mm de dimetro ( as fezes so colocadas
nesse orifcio).
Aps encher completamente o orifcio, retirar o carto cuidadosamente
deixando as fezes sobre a lmina de vidro.
Cobrir as fezes com a lamnula de papel celofane, comprimindo-a aps
t-la invertido contra uma folha de papel absorvente.
Aguardar 1 a 2 horas e examinar ao microscpio (todos os campos)
O nmero de ovos encontrados no esfregao fecal, multiplicado por 23
corresponder ao nmero de ovos por grama de fezes.


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EXAME PARASITOLGICO DE FEZES (ROTINA do LAC -USP)
Tcnicas de Hoffmann, Ritchie, Faust

1. Enumerar o material
2. Colocar aproximadamente 5 g de fezes no copo descartvel
3. Acrescentar aproximadamente 50 ml de gua morna aos poucos
4. Homogeneizar totalmente as fezes com o auxlio de uma esptula
5. Transferir para um clice afunilado coando em filtro prprio para
fezes
6. Acrescentar gua de torneira at 2/3 do clice
7. Transferir para 2 tubos de centrfuga quantidade suficiente do
filtrado para atingir aproximadamente 1 cm abaixo da borda do
tubo. Um dos tubos ser utilizado para execuo da tcnica de Faust
(1) e o outro tubo ser utilizado para a execuo da tcnica de
Ritchie (2)
8. Acrescentar gua de torneira no clice at atingir o volume inicial (
2/3 do clice), a fim de executar a tcnica de Hoffmann
9. Deixar em repouso at a sedimentao - de 2 a 24 horas
10. Com o auxlio de uma pipeta tipo Pasteur, recolher o sedimento e
gotejar sobre uma lmina e adicionar uma gota de lugol,
homogeneizar o preparado com uma lamnula e cobrir com a mesma

( 1 )
1. Tarar o tubo e centrifugar a 2500 rpm durante 1 minuto
2. Decantar o sobrenadante e agitar at que o sedimento se
desprenda do fundo do tubo.
3. Lavar o sedimento com gua at que o sobrenadante fique claro.
4. Ressuspender o sedimento com sol. de sulfato de zinco (d= 1.180)
completando o volume at 1 cm da boca do tubo e centrifugar a
2500 rpm por 01 minuto.
5. Retirar a pelcula da superfcie delicadamente com o auxlio de uma
ala dobrada em anel.
6. Passar a gota do anel para uma lmina com lugol

11

7. Cobrir com uma lamnula

( 2)
1. Tarar o tubo e centrifugar a 2500 rpm durante 2 minutos
2. Decantar e agitar at que o sedimento se desprenda do fundo
3. Adicionar ao sedimento 5 ml de formol a 10%
4. Deixar em repouso por no mnimo 5 minutos
5. Adicionar 2 ml de ter
6. Tapar o tubo e agitar vigorosamente
7. Tarar os tubos e centrifugar a 2500 rpm durante 2 minutos
8. Decantar e agitar para desprender o sedimento do fundo do tubo
9. Adicionar 2 gotas de lugol e agitar novamente
Preparar uma lmina do sedimento e examinar


12

TCNICA DE STOLL

uma tcnica quantitativa , na qual as fezes so ressuspensas em NaOH
0,1N que tem a finalidade de desagregar e clarificar o material. A
suspenso feita em um frasco tipo Erlenmeyer , cujo gargalo traz duas
marcas, uma indicando 56 cm e a outra 60 cm .

TCNICA:

1. Encher o frasco at a marca 56 com NaOH 0,1N.
2. Colocar fezes at o nvel atingir a marca 60.
3. Introduzir no frasco cerca de 10 prolas de vidro, tampar com rolha
de borracha e em seguida agitar vigorosamente, para se obter uma
suspenso homognea.
4. Retirar 0,15 ml da suspenso e colocar em uma lmina. Cobrir com
uma lamnula e examinar ao microscpio , sob o aumento de 100
vezes.
5. Contar o nmero de ovos em toda a preparaco.
6. O nmero de ovos contados multiplicado por 100, d o nmero de
ovos por grama de fezes.


13

TCNICA DE RITCHIE

9. Homogeneizar totalmente as fezes com o auxlio de um palito.
10. Transferir para um clice afunilado coando em filtro para fezes.
11. Transferir para um tubo de centrfuga e centrifugar a 2.500 rpm
durante 2 min.
12. Decantar e agitar at que o sedimento se desprenda do fundo do
tubo.
13. Acrescentar 5 ml de formol a 10%.
14. Acrescentar 2 ml de ter.
15. Tapar o tubo e agitar vigorosamente.
16. Centrifugar novamente a 2.500 rpm durante 2 min.
17. Decantar e agitar at que o sedimento se desprenda do fundo do
tubo.
18. Adicionar 2 gotas de lugol e agitar novamente.
19. Preparar uma lmina do sedimento e examinar ao microscpio.


14

TCNICA DE RUGAI

1. Remover a tampa do recipiente contendo as fezes e envolver em
pedao de gaze dupla (dobrada em duas partes) repuxando as
bordas para trs.
2. Embocar os recipientes no interior de um clice cnico, fixando-o
por presso contra as paredes, em posio levemente inclinada.
3. Colocar gua morna pelas paredes do clice aproveitando a
abertura restante da posio inclinada do recipiente metlico. O
lquido deve alcanar toda a extenso da abertura do recipiente.
Evitar a formao de bolhas de ar.
4. Deixar em repouso por 90 min.
5. Sem retirar o recipiente, introduzir uma pipeta at o fundo do
clice. Retirar o sedimento e colocar em uma lmina ou vidro
relgio.
6. Examinar ao microscpio.


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TCNICA DE COLORAO DE KYNION PARA PESQUISA DE
CRYPTOSPORIDIUM PARVUM E ISOSPORA BELLI

1
a
fase

Material utilizado

-Soluo de formalina tamponada a 10%, pH 7.2 em PBS
-Gaze ou coador de nylon
-Copo descartvel e clice

Descrio

- Homogeneizar 1 g. de fezes em 4 ml. de soluo de formalina
tamponada
-Filtrar em gaze ou coador de nylon
-Transferir o material filtrado para os clices e manter em geladeira por 24
horas, no mnimo


16

2
a
fase

Material utilizado

-Centrfuga
-Tubos de centrfuga
-Tampas de borracha
-ter sulfrico

Descrio
- Colocar no tubo de centrfuga 4 ml do material contido nos clices e
adicionar 2 ml de ter sulfrico
-Agitar o tubo ( tampado) vagarosamente

-Centrifugar por 8 minutos a 1500 rpm
-Desprezar o sobrenadante e limpar os detritos superficiais com um
bastonete
-Fazer o esfregao com o sedimento

Colorao
-Deixar secar o esfregao
-Fixar com metanol por 5 minutos
-Cobrir o esfregao com sol. de fucsina carblica de Kynioun por 30
minutos temperatura ambiente

17

-Lavar com gua
-Lavar com lcool cido por 2 minutos. Caso o esfregao tenha ficado
muito espesso e a colorao vermelha no tenha sido removida, repetir o
procedimento
-Lavar com gua
-Cobrir toda a lmina com azul de metileno ou verde de malaquita por 1 a
2 minutos, lavar com gua e deixar secar

Reagentes
Formalina
Formol....................................................................................10 ml
PBS pH 7.2 q.s.p. ..................................................................100ml

Fucsina carblica de Kynioun
Fucsina bsica.....................................................................4 g.
Cristais de fenol ou c. fnico.............................................8 g.
lcool 95%...........................................................................20 ml
gua dest. q.s.p. .................................................................100 ml

lcool- cido
cido sulfrico conc............................................................5 ml
lcool 70% q.s.p. ...............................................................100 ml


18

Verde de malaquita
Verde de malaquita ............................................................3 g.
gua dest. ..........................................................................100 ml

Azul de metileno
Azul de metileno..................................................................1 g.
gua dest. ..........................................................................100 ml


19

MTODO DO SWAB DE VASELINA E PARAFINA (VASPAR)
1. Mergulhar o swab de algodo em mistura de quatro partes de
vaselina e uma parte de parafina (4:1).
2. Colocar o swab de algodo revestido com uma camada de vaselina-
parafina em tubo de ensaio fechado com uma bucha de algodo.
Armazenar no refrigerador .
3. Esfregar sutilmente o swab na superfcie perianal e introduzir
pequena poro no orifcio anal.
4. Repor o swab no tubo.
5. Encher 1/3 do tubo com xilol ou com quantidade suficiente para
cobrir o swab. Deixar em repouso por 5 minutos.
6. Remover o swab e centrifugar (500 x g/1min)
7. Com a pipeta capilar, colher o sobrenadante. Transferir vrias gotas
para uma lmina de microscopia. No necessrio cobrir a
preparao com lamnula. Para evitar a expanso do material em
uma grande rea, colocar as gotas no centro de um anel desenhado
com lpis de cera e examinar imediatamente. O anel pode ser
dissolvido com xilol.
Observao: Este exame deve ser realizado pela manh, antes do
paciente defecar ou banhar-se.


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BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA PARA ESTUDO

DE CARLI, G. A. Parasitologia Clnica. Seleo de mtodos e tcnicas de
laboratrio para o diagnstico das parasitoses humanas. Ed. Atheneu,
2001.
HENRY, J.B. Diagnsticos clnicos e tratamento por mtodos laboratoriais.
So Paulo: Manole, 2007.
MELO, A. L., LINARDI, P.M., VITOR, R.W.A. Parasitologia Humana. 11
Edio. Ed. Atheneu, 2005.
Pranchas para o Diagnstico de Parasitas Intestinais. Organizao Mundial
de Sade. Ed. Livraria Santos, 2005.

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