MINISTERE DE LENSEIGNEMANT SUPERIEUR

ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE BADJI MOKHTAR -ANNABA-
Facult des Sciences


Travaux pratiques sur
lextraction des substances
naturelles
Anne universitaire 2013-2014
Master Euro-Magrbin : Agro Ressources Fonctionnelles

TP1 : Extraction des huiles essentielles des feuilles du Rosmarinus
officinalis (Lamiaces)
Les huiles essentielles ou essences sont des substances huileuses, volatiles et odorantes,
produites par de nombreuses plantes aromatiques appartenant diffrentes familles comme :
composes, cupressaces, lamiaces, myrtaces, ombellifres et rutaces, etc.
Elles se trouvent dans les fleurs, la peau de fruits, les feuilles, la rsine, les branches et le bois
de diverses plantes mdicamenteuses sous forme de minuscules gouttelettes. Leurs chimie est
complexe mais, en gnrale, elles sont un mlange de terpne, dalcools, daldhydes, de
ctone et desters. Elles sont inflammables, solubles dans les huiles et les alcools mais ne le
sont pas dans leau, par ailleurs, elles transmettent leur parfum.
Il existe diffrentes techniques dextraction des essences soit par lentranement la vapeur,
par pression, avec des solvants ou par enfleurage.
Lentranement la vapeur est la mthode la plus populaire, elle convient aux huiles ayant
une forte composante volatile et elle se fonde sur la caractristique que possdent ces
composantes qui peuvent tre facilement transportes par des particules de vapeur deau en
mouvement.
Cette mthode consiste mlanger la matire vgtale avec de l'eau et chauffer jusqu
l'bullition. Les vapeurs mergentes sont recueillies et condenser par un rfrigrant, et l'huile
est spares de l'eau du fait de leurs poids spcifique.
A travers un robinet, on fait couler leau qui contiendra les composants hydrosolubles de
lessence (eau aromatique) et on obtient ainsi lhuile essentielle pure.









Appareil d'hydro-distillation circulatoire
de type Clevenger


TP2 : Extraction des huiles fixes des graines dOpuntia ficus indica
(Cactaces)
Les graisses se composent principalement de triglycrides d'acides gras et d'une faible
proportion de strols. Leurs consistance la temprature ambiante peut tre solide ou liquide
(appele huile fixe) selon la nature des acides gras (l'insaturation et la longueur de la chane),
cependant les graisses animales solides contiennent principalement des acides gras saturs,
mais les huiles vgtales contiennent de grandes quantits dacides gras insaturs.
O
C CH
2
CH
2
CH
2
.. CH
3
CH
2
O
O
C CH
2
CH
2
CH
2
.. CH
3
CH O
O
C CH
2
CH
2
CH
2
.. CH
3
CH
2
O 3 longues chaines carbones
issue des acides gras

Issue du glycrol

Lacide linolique (C18:2 -6) et lacide alpha-linolnique (C18:3 -3) sont des acides gras
essentiels parce que le corps ne peut pas les synthtiser partir de prcurseurs, ils doivent tre
inclus dans lalimentation
Les huiles fixes et les graisses sont non-polaire dans la nature et peuvent tre extraites de
manire efficace et peu slective l'aide de solvants tels que l'ther de ptrole ou l'hexane. Ils
peuvent galement se dissoudre dans le chloroforme, l'thanol ou mthanol, mais ces solvants
extraits galement d'autres types de composs phytochimiques.
A l'chelle industrielle, ces substances peuvent tre obtenues par le procd d'expression
plutt que l'extraction par solvant o la prsence de graisses et d'huiles interfre avec
l'extraction d'autres constituants, une tape de dgraissage impliquant l'extraction par solvant
des graisses est parfois utile.
Matriels :
- Erlenmeyer
- Ampoule dcanter
- Becher
- Eprouvette
- Entonnoir
- Papier filtre
- Ballon rod

Produits :
- Graine du figuier de Barbarie
- Mthanol, CH
3
OH
- Dichloromthane, CH
2
Cl
2

- Chlorure de sodium, NaCl
- Sulfate de sodium anhydre, Na
2
SO
4


Protocole dextraction selon la mthode de Folch
10g de matire vgtale broye sont mlangs avec 200ml chloroforme - mthanol (2 : 1) et
agits pendant 15 20 min dans un agitateur temprature ambiante, puis le mlange est
filtr.
Le filtrat est lav avec 40 ml de NaCl 0,9%, et spar dans une ampoule dcant. La
phase chloroformique infrieure contenant les lipides est sche sur Na
2
SO
4
, puis vapor
sous vide dans un vaporateur rotatif.
N.B : L'utilisation de dichloromthane la place de chloroforme a t value dans
l'extraction des lipides partir d'chantillons de diffrentes natures. Les rsultats indiquent
que le mlange dichloromthane-mthanol peut se substituer au chloroforme-mthanol,
couramment utilis.



















Huile
- Schage sur Na
2
SO
4
- Evaporation sous vide

Graines pulvrises
Marc Filtrat
CH
2
Cl
2
-MeOH (2 :1)
Agitation 20min
Phase aqueuse
Phase organique
Lavage avec
NaCl 0.9%

TP3 : Extraction de la cafine des feuilles du Camellia sinensis
(Theaces)
Beaucoup de composs organiques sont obtenus de sources naturelles par extraction. Cette
mthode utilise des caractristiques de la solubilit dune substance organique particulire
avec un solvant donn.
La cafine est classe comme un alcalode, ce qui signifie que la molcule a des
caractristiques basiques (par la prsence dazote), en plus elle possde un noyau purine qui
joue un rle important dans les systmes vivants.
N
H
N
N
N
H
N
N
H
N
N
CH
3
O
O
CH
3
C H
3
Purine
Caffeine

La cafine est aisment soluble dans leau chaude et cest comme a quelle est spare des
sources naturelles (caf ou th) mais on trouve aussi des substances complexes appeles
tanins soluble dans leau. Ce sont des composs phnoliques de haut poids molculaires (500
3000) qui ont un comportement acide. Pour cela on ajoute un sel basique tel que Na
2
CO
3

la solution deau pour ragir avec les tanins et former un sel qui est insoluble dans les
solvants organiques tels que le chloroforme ou le dichloromthane. Bien que la cafine est
soluble dans leau (2g/100g deau froide), elle est plus soluble dans le dichloromthane
(14g/100g). Donc la cafine peut tre extraite de leau par le dichloromthane, mais les sels
des tanins restent dans la solution aqueuse. Lvaporation du dichloromthane donne la
cafine brute.

Matriels :
- Papier filtre
- Plaque chauffante
- Ampoule dcanter
- Eprouvette
- Becher
- Erlenmeyer
- Ballon rod
- Entonnoir

Produits :
- Feuille du Th
- Dichloromthane, CH
2
Cl
2

- Carbonate de sodium anhydre, Na
2
CO
3

- Sulfate de sodium anhydre, Na
2
SO
4


Protocole dextraction
Dans un bcher, placez 10g du matriel vgtal. Ajoutez 50ml deau distille et 4g de
carbonate de sodium anhydre (Na
2
CO
3
) ; chauffez jusqu lbullition sur une plaque
chauffante pendant 20min.
Sparez le liquide chaud par filtration dans un erlenmeyer, puis lavez le marc avec
20ml deau chaude et filtr une autre fois. Laissez le filtrat refroidir la temprature
ambiante.
Transfrez le filtrat dans une ampoule dcanter et ajoutez lui 10ml de
dichloromthane. Procdez une extraction liquide-liquide.
Rptez lextraction de la phase aqueuse avec 10ml supplmentaire de
dichloromthane. Combinez-l la phase organique (du dichloromthane) obtenue
auparavant.
Ajoutez 1g Na
2
SO
4
aux extraits du dichloromthane combins puis tourbillonnez le
flacon. Le sel anhydre est un agent du schage, il enlve toute eau qui peut tre
prsente.
Filtrez le dichloromthane dans un ballon prs-pes. Rincez le sel sur le papier filtre
avec 2ml supplmentaire de dichloromthane.
Evaporez le dichloromthane au rotavapeur, le rsidu qui reste est la cafine brute.
Repesez le ballon refroidi puis calculez le poids de la cafine brute et dterminez le
rendement.












Feuille du Th
Marc
arc
Filtrat
- Schage sur Na
2
SO
4
-Evaporation sous vide
Cafine
-Eau
- Na
2
CO
3
- Chauffage
Sels de tanins dans
Leau

Cafine dans
CH
2
Cl
2

CH
2
Cl
2


TP4 : Extraction des alcalodes totaux des graines du Peganum
harmala (Zygophyllaces)

Les alcalodes sont des composs organiques dorigine naturelle, le plus souvent vgtale,
azots, plus ou moins basiques, de distribution restreinte et dots, faible dose, de proprits
pharmacologiques marqus mais fortes doses, ce sont des composs toxiques.

Lextraction des alcalodes est fonde, en rgle gnrale, sur le fait que ces derniers existent
habituellement dans la plante ltat de sels et sur leur basicit, c'est--dire sur la solubilit
diffrentielle des base et des sels dans leau dune part et dans les solvants organiques dautre
part. Do les alcalodes sont dplacs de leurs combinaisons salines, par lutilisation dune
base dilue : NH
4
OH, Ca(OH)
2
, Na
2
CO
3
puis extraits avec solvant organique peu polaire
comme dichloromthane, chloroforme, actate dthyle ou ther dithylique, et finalement
purifis par extraction liquide-liquide en utilisant des solvants non miscible aprs changement
du pH avec des acide dilu HCl ou H
2
SO
4
.
Le matriel vgtal renferme souvent des quantits apprciables des graisses, cest
particulirement vrai pour les graines mais aussi de cires, de terpnes, de pigments et
dautres substances lipophiles qui peuvent perturber le processus extractif, notamment en
induisant la formation dmulsion. On vitera plus au moins totalement ces problmes en
procdant une dlipidation pralable de la drogue broye avec lther de ptrole ou lhexane,
qui conviennent bien pour cette opration : il est exceptionnel que les alcalodes soient
extractibles par ces solvants lorsquils sont employs en milieu neutre.
Les graines du Harmel ou rue de syrie contiennent prs de 2 6% dalcalodes les plus actives
sont harmine et harmaline.

N
N
H
O
Harmaline

N
N
H
O
Harmine








Matriels :
- Papier filtre
- Ampoule dcanter
- Becher
- Erlenmeyer
- Eprouvette
- Ballon rod
- Entonnoir
- Tube essai
- Papier pH


1- Identification rapide des alcalodes
Dans un tube essai introduire 1g de poudre vgtale avec 5ml dacide sulfurique dilu 1%,
agiter pendant 2min puis filtrer et divis le filtrat sur 2 tubes.
Ajouter au 1
er
tube quelque goute du ractif de Mayer Formation dun prcipit blanc.
Observ le 2me tube sous lampe UV 365nm une intense fluorescence apparait due la
prsence du harmaline et harmine.

2- Protocole dextraction des alcalodes selon Stas-Otto

Dans un erlenmeyer de 100ml muni de son bouchon, placer 10g de graines sches
broys avec 50ml dhexane et laisser macrer pendant 24h puis filtrer.
Le marc obtenue est humect avec 20ml dammoniaque et laisser agir pendant au
moins 2min.
Ajouter 50ml de dichloromthane et agiter de faon manuelle pendant 10min
Filtrer sur papier filtre directement dans une ampoule dcant et extraire la phase
organique par 50ml dacide sulfurique 2%. Vrifier que le pH de la phase aqueuse
aprs extraction est bien acide (avec papier pH). Extraire une 2
me
fois la phase
organique avec 50ml dacide sulfurique 2%. Refaire lopration jusqu
lpuisement de la phase organique.
Runir les extraits aqueux puis les alcaliniss avec lammoniaque (vrifier avec papier
pH) ensuite r-extraire la phase aqueuse avec 25ml de dichloromthane. Refaire
lopration plusieurs fois. Lpuisement de la phase aqueuse est poursuivi jusqu ce
que tous les alcalodes soient repasss en phase organique ce qui peut se vrifier
aisment par la ngativit de la raction de Mayer effectue sur la phase aqueuse .
Scher les extraits organiques rassembls sur Na
2
SO
4
puis filtrer sur papier filtre
directement dans un ballon de 100ml col rod et vaporer sec sous pression
rduite (le rsidu obtenue est appel les alcalodes totaux)

Produits :
- Gaine du Harmel
- Hexane, C
6
H
14

- Dichloromthane, CH
2
Cl
2

- Ammoniaque, NH
4
OH
- Acide sulfurique, H
2
SO
4

- Sulfate de sodium anhydre, Na
2
SO
4

- Ractif de Mayer


























Plante pulvrise
-Hexane (24h)
-Filtration


Extrait lipophilique
Marc
Sels de
tanins
dans
Leau

Marc
Extrait CH
2
Cl
2
Cafine dans
CH
2
Cl
2

-NH
4
OH
-CH
2
Cl
2
-Filtration
Alcalodes totaux
Acidification, H
2
SO
4
2%
Phase organique
(Impurets lipophiles)


Phase aqueuse
(Alcalodes sels)


-Alcalinisation, NH
4
OH
- CH
2
Cl
2

Phase aqueuse
(Impurets hydrophiles)




Phase organique
(Alcalodes)


-Lavage avec H
2
O
- Schage sur Na
2
SO
4
-Evaporation sous vide


TP5 : Extraction des flavonodes des fleurs dAnthmis nobilis
(Astraces)
LAnalyse des flavonodes dans les plantes ncessite une prparation adquate de
l'chantillon pour assurer l'extraction quantitative des substances analyser en vitant la
dgradation ou la modification de leur structure chimique. Les premires tapes de l'isolement
et de l'extraction des flavonodes comprennent habituellement une homognisation des
chantillons, frais ou sec par broyage. En gnral, il est conseill d'viter les tempratures
leves qui pourraient conduire la dgradation thermique des flavonodes, ainsi que de
travailler avec des matriaux frais, puisque les flavonodes (particulirement les glycosides)
peuvent tre modifis lors de la manipulation en raison de leur sensibilit l'oxydation ou par
hydrolyse enzymatique.
La macration, lagitation, l'extraction assiste par ultrasons, Soxhlet, et l'extraction sous
reflux sont certains des procds d'extraction les plus courantes utilisant des solvants liquides.
Les conditions d'extractions appliques la prparation de l'chantillon peuvent avoir une
influence importante sur le type de flavonodes isols, ainsi que sur le rendement d'extraction,
et donc les facteurs tels que le pH, la temprature d'extraction, et le type de solvant utilis
doivent tre choisi avec soin.
Le type de solvant utilis pour l'extraction des flavonodes dpend principalement du type de
composs extraire, c'est de savoir si elles sont aglycones, glycosides, acyls ou mthoxyls,
etc, ce qui pourrait affecter leur polarit et, par consquent leur solubilit dans le solvant
choisi.
Le mthanol et les mlanges mthanol-eau (le plus souvent 50 %, 70% et 80 % de mthanol
aqueux) sont les solvants les plus couramment utiliss. LAlcools provoquent l'instabilit des
membranes cellulaires, ce qui facilite l'extraction des composs phnoliques, d'ailleurs, ils
inactivent les enzymes comme polyphnol oxydase et contribuent ainsi une stabilit accrue
des composs extraits.
L'actone et les mlanges actone - eau ont galement t utiliss pour l'extraction
d'anthocyanes, flavonols , et xanthones , ou flavanols et les proanthocyanidines , ainsi que
d'autres solvants tels que l'actonitrile pour l'extraction d' isoflavones , et l'eau acidifie pour
les anthocyanines , etc
Aprs l'extraction, la sparation de l'chantillon peut tre ralise par filtration ou de
prfrence par centrifugation, suivie par une concentration sous vide basse temprature afin
d'liminer l'excs de solvant.
Aprs ces tapes initiales, en outre lextraction liquide-liquide pourrait suivre, le plus souvent
avec des solvants non polaires tels que l'hexane, le chloroforme, l'actate d'thyle ou l'ther
di-thylique pour liminer les graisses, les pigments, et d'autres composs partir de l'extrait
brut, la partition qui reste peut tre suivie par l'utilisation de plus de solvants polaires tels que
le n-butanol.

Matriels :
- Papier filtre
- Ampoule dcanter
- Becher
- Erlenmeyer
- Eprouvette
- Pipette
- Ballon rod
- Entonnoir
- Tube essai






1- Test rapide des flavonodes
Test 1 : Dans un tube essai, placer 0.5g de poudre vgtale avec 5ml dacide chlorhydrique
dilu 1% et chauffer au bain marie 65C pendant 3min puis filtrer. Ajouter au filtrat 0.5ml
de NaOH 10% une coloration jaune apparait indique la prsence des flavonodes.

Test 2 : Dans un tube essai introduire 0.5g de poudre vgtale avec 5ml mthanol-eau (80 :
20), porter au bain marie 60C pendant 10min puis filtrer
Prlever 2ml de lextrait mthanolique dans un autre tube et ajouter lui 0.5ml HCl concentr
et quelque rognure de magnsium (placer le tube dans un bcher remplis deau froide afin
dviter llvation de la temprature)
La coloration qui apparait lentement indique le type des flavonodes majoritaires
Rouge cerise Flavonoles
Orange Flavones
Rouge violac Flavanone


Produits :
- Fleur de camomille romaine
- Hexane, C
6
H
14

- Mthanol, CH
3
OH
- Dichloromthane, CH
2
Cl
2

- Actate dthyle, CH
3
COOC
2
H
5
(EtOAc)
- Sulfate de sodium anhydre, Na
2
SO
4

- Hydroxyde de sodium, NaOH
- Acide chlorhydrique, HCl
- Rognure de magnsium, Mg
- Trichlorure d'aluminium hexahydrat, AlCl
3
, 6H
2
O

2- Protocole dextraction
Dans un erlernmeyer placer 2g de fleur de camomille romaine, avec 20ml mthanol-
eau (80 : 20) et laisser macrer pendant 24h puis filtrer.
Ajouter 40ml deau distill au filtrat puis commencer lextraction liquide-liquide avec:
20ml dhexane pour limin les huiles fixes, graisses et cires 2 fois successive,
ensuite avec 20ml de dichloromthane 2 fois successive pour rcuprer les composs
aglycones et peu polaire, et finalement avec 20ml dactate dthyle 6 fois successive
jusqu puisement pour rcuprer les composs moyennement polaires
Toutes les phases organiques rcupres au part avant sont sches sur Na
2
SO
4
puis
vapores chaquune sec dans un ballon de 100ml au rotavapeur.




















Extrait aqueux
H
2
O

Phase aqueuse


Plante pulvrise
Marc

Extrait Hydro-
mthanolique


- MeOH 80% (24h)
-Filtration
Hexane

Phase aqueuse


Phase organique
(Graisse, chlorophylle)


CH
2
Cl
2
Phase organique
(Flavonodes
moyennement polaire)


Phase aqueuse


- Schage sur Na
2
SO
4
- Evaporation sous vide

Phase organique
(Flavonodes peu polaire)
EtOAc



3- Identification des Flavonoides par chromatographie sur couche mince (CCM)
Les phases organiques vapores sec sont dissout dans une petite quantit de mthanol
(1ml)
Prendre une plaque CCM (102cm) verticalement et tracer une line droite 1cm du
bord (ligne de Start), marquer 2 points pour les extraits de dichloromthane et actate
dthyle. Spotter chaque extrait au point indiqu puis placer la plaque dans une cuve
contenant comme luant actate dethyle-acide formique-acide actique glacial-eau
( 100 : 11 :11 : 26) et laisser migrais jusquau en haut (trait de Front).
Aprs migration, scher bien la plaque ltuve ou avec un schoir puis pass l sous
la lampe UV 254nm, en suite sous la lampe 365nm et entourer les tache visionns
avec un crayon.
Vaporis la plaque CCM avec solution thanolique de AlCl
3
, 6H
2
O 1%, puis
visionner nouveau sous lUV 365nm















CH2Cl2 EtOAc

TP6 : Extraction des cardnolides des feuilles du Nerium oleander
(Apocynaces)

Laurier rose (Nerium oleander) est lun des nombreuses plantes qui contiennent lhtroside
cardiotonique (cardnolides).
Les cardnolides sont des composs avec un strodes aglycone reli un cycle de lactone
insatur et aussi trois ou quatre molcule de sucre
Le compos le plus caractristique du laurier rose est l'olandrine, un htroside structure
strodique, qui ressemble beaucoup du point de vue chimique et pharmacologique
l'ouabane et la digoxine, deux cardiotoniques trs utiliss en cas d'insuffisance cardiaque.
O
O OH
O
O
H
H
OH
O
O
O
Olandrine

Lextrait hydro-thanolique des feuilles du laurier rose ne contiendra pas seulement que des
cardnolides mais aussi des polyphnoles comme les flavonodes, et dautre pigment comme
la chlorophylle. Ces contaminants peuvent tre prcipits sous forme de complexe de plomb
en utilisant une solution de diactate de plomb et lexcs du plomb est limin sous forme de
sulfate de plomb. Les cardenolides peuvent tre extraites en chloroforme (ou
dichloromthane). Un prtraitement de l'chantillon pour liminer les composs phnoliques
est important car ceux-ci seraient autrement prsents dans l'extrait chloroformique (ou
dichloromthane)















Matriels :

- Plaque chauffante
- Papier filtre
- Ampoule dcanter
- Becher
- Erlenmeyer
- Eprouvette
- Pipette
- Ballon rod
- Entonnoir
- Tube essai


1- Identification rapide des cardnolides et composs phnoliques
Dans un tube essai introduire 1g de poudre vgtale avec 10ml dthanol 70%, chauffer
pendant 5 10min puis filtrer et divis le filtrat en 2 tubes.
- Ajouter au 1er tube quelque goute du ractif de Baljet, une coloration orang
apparaitra indiquant la prsence des cardnolides.
- Ajouter au 2
me
tube deux goutes de solution de FeCl
3
5%, une coloration bleu-vert
ou vert indique la prsence des composs phnolique.

2- Protocole dextraction

Dans un erlenmeyer placer 2g de feuille sche et broye avec 20ml dthanol 70%,
fermer avec un bouchon et chauffer pendant 20 min.
Laisser refroidir le mlange puis filtrer la solution, ensuite ajouter au filtrat 20ml
dactate de plomb 10% (les composs phnoliques doivent prcipiter sous forme de
complexe de plomb insoluble)
Filtrer le mlange et laver le filtrat avec 10ml dacides sulfurique 10% jusqu
larrt de formation de prcipit. Ce traitement et pour liminer lexcs de plomb sous
forme de sulfate de plomb insoluble.
Filtrer une autre fois puis extraire la phase aqueuse 4 fois successive avec 10ml de
dichloromthane.
Laver les phases organiques combines avec 20ml deau pour liminer toute trace
dion.
Finalement scher les extraits organiques rassembls sur Na
2
SO
4
puis filtrer
directement dans un ballon et vaporer sec sous pression rduite





Produits :
- Feuilles du Laurier rose
- Ethanol, C
2
H
5
OH
- Actate de plomb, Pb(CH
3
COO)
2

- Hexane, C
6
H
14

- Dichloromthane, CH
2
Cl
2

- Acide sulfurique, H
2
SO
4

- Sulfate de sodium anhydre, Na
2
SO
4

- Ractif de Baljet
- Trichlorure de fer, FeCl
3

- Ractif de Kedde




















3- Analyse avec CCM
Le rsidu des cardnolides est dissout dans 1ml de mthanol et analys par CCM.
- On utilise comme luant Actate dethyl-mthanol-eau (81 : 11 : 8)
- On utilise comme rvlateur spcifique des cardnolide
le ractif de Kedde : Une coloration violet apparait au visible qui
disparait quelque minute aprs.




Plante pulvrise
Marc

Extrait thanolique


- EtOH 70%
-Chauffage, 20min

-Filtration
Rsidu des cardnolides
-Eau distill
- Pb(CH
3
COO)
2
-Filtration
Filtrat


Prcipit des
polyphnoles


-Lavage avec H
2
SO
4
2%
- Filtration


Phase aqueuse


Phase organique

-Lavage avec H
2
O
- Schage sur Na
2
SO
4
-Evaporation sous vide

Filtrat


Prcipit insoluble
(sulfate de plomb)


CH
2
Cl
2


CH2Cl2




Index

Ractif de Mayer
Solution A : Dissoudre 2.72g de chlorure de mercure dans 120ml deau distill.
Solution B : Dissoudre 10g diodure de potassium dans 40ml deau distill.
Mlanger les deux solutions et port le volume jusqu 200ml avec leau distill

AlCl
3

Dissoudre 1g de trichlorure d'aluminium hexahydrat dans 100ml dthanol 96%.

Ractif de Baljet
Solution A : Dissoudre 1g dacide picrique dans 100ml dethanol 96%
Solution B : Dissoudre 10g dhydroxyde de sodium dans 100ml deau distill.
Mlanger 5ml de la solution A avec 5ml de la solution B immdiatement avant utilisation

FeCl
3
Dissoudre 5g de trichlorure de fer dans 100ml deau distill

Ractif de Kedde
Solution A : Dissoudre 3g de 3,5-dinitro acide benzoque dans 100ml dthanol.
Solution B : Dissoudre 8g dhydroxyde de sodium dans 100ml deau distill.
Mlanger 5ml de la solution A fraiche avec 5ml de la solution B immdiatement avant
utilisation