125

INTRODUO
Considerando a validao do processo esterilizante, h vrios as-
pectos de similaridade que independem do procedimento especfico
adotado, sendo sempre fundamental a sua documentao. Sem pro-
tocolos completos, incluindo relatrios de validao com dados acu-
rados e acessveis, virtualmente impossvel substanciar que um
processo tenha sido adequadamente validado.
Em todos os casos, a preocupao inicial deve ser com a qualifi-
cao do equipamento, utilidades e instalaes a ele vinculadas. As
vantagens de documentao adequada do equipamento antes de ini-
ciar a validao so evidentes. Principalmente no que diz respeito
aos tpicos de controle de alterao do equipamento, controle das
alteraes desenvolvidas e documentaes do processo, sendo todos
dependentes do desempenho do equipamento
1
.
4
Validao de Processos
de Esterilizao
SRGIO LUIZ NOGAROTO
THEREZA CHRISTINA VESSONI PENNA
ALZIRA MARIA DA SILVA MARTINS
IVAN PEREIRA DE GODOI
126
Planos de Validao para Processos Esterilizantes
Para que haja coerncia no processo esterilizante, devem ser esta-
belecidos planos de validao, incluindo os seguintes aspectos: quali-
ficao do esterilizador, validao do produto e validao do processo
1
.
Qualificao do Esterilizador
Antes de ser introduzido em uso rotineiro, deve ser avaliado o
correto funcionamento do equipamento.
Qualificao da Instalao
Deve ser avaliada a correta instalao de todas as partes, calibra-
o de todos os instrumentos de medio e conformidade com espe-
cificaes do equipamento a serem demonstradas e certificadas. Isto
normalmente feito pelo fornecedor, em colaborao com o usurio
do equipamento (Figs. 4.1 e 4.2).
A qualificao deve ser refeita, ao menos parcialmente, quando
alteraes tcnicas ocorrerem durante a manuteno ou modificao
do equipamento.
Qualificao de Operao
Para um dado tipo de carga, a condio de confiabilidade do equi-
pamento deve ser demonstrada ao menos trs ciclos consecutivos.
Para autoclaves e outros esterilizadores a calor, devem ser feitos es-
tudos de distribuio do calor em posies adequadas considerando a
cmara e a carga (Fig. 4.3).
O nmero e posio dos termopares so determinados pelo tipo e
configurao da carga, bem como pelo tipo de instrumento e de ciclo
empregados. Para esterilizadores a gs, a umidade relativa e a tempe-
ratura devem ser medidas por sensores fsicos distribudos em posi-
127
Fig. 4.1 Vista lateral da cmara de
esterilizao.
Fig. 4.2 Painel de controle da
cmara de esterilizao.
es adequadas. Indicadores biolgicos ou monitores biolgicos dis-
tribudos na carga devem ser usados para verificar condies esterili-
zantes em todas as posies (Fig. 4.4). A penetrao da radiao
ionizante na carga mais confiavelmente monitorada pela distri-
buio de dosmetros.
Validao do Produto/Compatibilidade do Produto
com o Processo Esterilizante
Para cada produto a ser esterilizado, deve haver cuidadosas consi-
deraes quanto adequao do mtodo de esterilizao proposto.
Para produtos estveis ao calor, o processamento em autoclave no
acondicionamento final usualmente o mtodo de escolha. , po-
rm, necessrio confirmar que todas as partes do material de acondi-
cionamento sejam igualmente resistentes ao processo de autoclavao
e que a estabilidade do produto no seja prejudicada.
128
O tipo de autoclave tambm deve ser considerado. Se gravitacio-
nal, com pr-vcuo ou mistura ar-vapor, compatibilizando a profun-
didade do vcuo ao produto. Alm de se proceder adequao do
processo, durante o desenvolvimento do ciclo devem ser includos
estudos de inativao dos bioindicadores no prprio produto, eluci-
dando possveis interferncias.
Para esterilizao gasosa, deve ser dada ateno a possveis rea-
es do produto com o agente esterilizante, bem como a reteno
de gases txicos e seus derivados de degradao no produto. Os
procedimentos de degaseificao devem ser validados e criteriosa-
mente seguidos.
Na esterilizao por radiao, possveis produtos da radilise, pro-
vocados por reaes com radicais livres, devem ser cuidadosamente
investigados.
Alguns produtos podem apresentar riscos ao consumidor, enquanto
outros, causando descolorao, podem ser meramente estticos, mas ainda
assim, exigir a deciso quanto adequao do processo de esterilizao.
Fig. 4.3 Configurao da carga em Pallets.
129
Fig. 4.4 Indicadores biolgicos distribuidos na unidade de carga,
do produto selecionado.
DEFINIES
Produto Master
2
um produto normal ou simulado que representa a maior densi-
dade de produto e que nunca foi esterilizado.
Especificao de Processo de Esterilizao
o detalhamento da especificao do processo de esterilizao
qualificada para uma determinada famlia de produto.
Produto Inoculado
um produto normal ou simulado que possui um indicador biolgico
(IB) inoculado e que representa a maior dificuldade de esterilizao.
130
Indicador Biolgico entre Caixas
um indicador biolgico colocado dentro de um envelope de pa-
pel, posiocionado entre as caixas do produto.
Nvel de Garantia de Esterilidade (SAL)
Representa a probabilidade de um microrganismo vivel es-
tar presente em um produto aps a sua esterilizao. definido
como o nvel de confiana requerido para operar o sistema de
esterilizao de forma eficiente.
IB Indicador Biolgico
Carreador impregnado com suspenso de microrganismo,
contendo o nmero de esporos viveis de resistncia conhecida
ao processo de esterilizao especificado. Esporos de Bacillus
stearothermophilus ATCC 7953 so recomendados para esterili-
zao por calor mido temperatura 121
o
C. Esporos de Ba-
cillus atrophaeus ATCC 9372, anteriormente denominado Bacillus
subtilis varivel niger ATCC 9372, so recomendados para a este-
rilizao por xido de etileno e para a esterilizao por calor mi-
do temperatura inferior a 121
o
C. Os indicadores de endotoxina
so usados para monitorar esterilizao por calor seco.
QI Qualificao de Instalao
Obteno de evidncias documentadas de que a instalao do equi-
pamento foi realizada em acordo com as intenes do projeto.
QO Qualificao de Operao
Obteno de evidncias documentadas de que a operao do
equipamento est de acordo com as intenes do projeto.
131
QD Qualificao de Desempenho
Obteno de evidncias documentadas de que os operadores es-
to treinados e o equipamento est funcionando de forma confivel,
produzindo produtos aceitveis, e que as variveis de processo crti-
cas so conhecidas e controladas.
rea de Aerao
rea sob condies controladas, onde os produtos permanecem
retidos, aps a esterilizao, para retirada de resduos de gs
3
.
Validao
Exerccio de realizar testes programados e documentados para
demonstrar que um processo trabalha dentro de limites especificados
e ir consistentemente produzir produtos/processo conforme especi-
ficaes pr-determinadas.
Pr-condicionamento
Tratamento do produto antes da realizao do ciclo de esterili-
zao para dar carga a ser esterilizada temperatura e umidade
pr-determinada.
Obs.: todos os parmetros acima referenciados tomaram como
exemplo uma cmara de dupla porta com 11,7m
3
.
PROCESSOS DE ESTERILIZAO
Os planos de validao para processos de esterilizao so aplic-
veis a qualquer tipo de equipamento destinado a esse fim. No entan-
to, neste captulo abordaremos em detalhes trs processos especficos,
por serem os mais utilizados:
132
esterilizao por xido de etileno (EtO) ou outro agente qumi-
co como perxido de hidrognio, formaldedo dentre outros;
esterilizao por vapor mido;
esterilizao por calor seco.
Etapas para Validao do Processo de Esterilizao
por xido de Etileno (EtO)
4-12
Material de Embalagem
Os materiais e o produto de embalagem devem ser compatveis
com o processo de esterilizao por xido de etileno e devem ser
projetados para manter a esterilidade e a qualidade dos produtos con-
tidos em seu interior at o momento de uso.
Todos os materiais de embalagem devem possuir os requisitos de
qualidade detalhados em especificaes escritas. As caractersticas
mais importantes que devem ser consideradas so:
porosidade;
no-absorvente;
resistncia trao;
resistncia selagem;
inerte;
impermeabilidade gua.
A realizao da esterilizao na embalagem final com o produto
selado prefervel com relao esterilizao do produto interme-
dirio, pois no requer um manuseio subseqente. Nestes casos
importante que os materiais sejam escolhidos para permitir a pene-
trao de umidade durante o pr-condicionamento da carga.
Pr-condicionamento
Caso a empresa opte por realizar um pr-condicionamento da
carga a ser esterilizada fora do esterilizador, este procedimento
aceitvel desde que:
133
a rea de pr-condicionamento fique locada prxima ao esterili-
zador para proporcionar uma rpida transferncia dos materiais;
a temperatura e a umidade relativa de rotina da rea sejam ade-
quadas s condies usadas no ciclo de esterilizao;
a rea seja projetada de forma a garantir condies de tem-
peratura e umidade relativa homogneas durante o ciclo de
pr-condicionamento;
a temperatura mnima aceitvel dos produtos antes de os mes-
mos entrarem na rea de pr-condicionamento seja definida;
o tempo mximo para a transferncia da carga do pr-condi-
cionamento para o esterilizador seja definido.
O condicionamento da carga a ser esterilizada tambm pode ser
executado no interior do esterilizador. Para tanto, preciso definir
condies mnimas de temperatura e umidade relativa na carga antes
da injeo de gs nos produtos. A temperatura e a umidade relativa
devem ser monitoradas e mantidas em condies controladas defini-
das em validao.
Qualificao de Instalao do Esterilizador
O projeto de construo da rea de esterilizao e sistemas auxi-
liares devem levar em considerao o seguinte:
a rea de estocagem deve ser segura, ventilada e estar de acordo
com as normas de segurana;
o sistema de entrada de gs deve incluir um vaporizador para
garantir que o gs no seja enviado para o esterilizador na for-
ma de lquido;
o sistema e/ou equipamento de controle de entrada de gs no
esterilizador deve permitir monitorao da quantidade de gs
que entrou no esterilizador;
o esterilizador deve possuir instrumentos para medir e registrar
a temperatura, a presso e a umidade no interior da cmara, a
134
temperatura da jaqueta da cmara e a temperatura do gs na
entrada na cmara.
A qualificao de instalao implica na verificao e obteno de
evidncia documental de que:
os equipamentos e instrumentos foram instalados de acordo com
as instrues dos seus fabricantes;
os instrumentos instalados possuem capacidade de medio
adequada inteno de uso;
os instrumentos instalados foram calibrados e introduzidos em
um programa de calibraes;
haja realizao de ciclo com cmara vazia para observar distri-
buio de calor (pontos frios);
haja realizao de teste de vazamento na cmara (sob vcuo e
sob presso positiva at 1,5 vez a presso normal de operao);
determinao de fatores de desempenho fsico para cmara
vazia, tais como:
vcuo mximo atingido e razo de decaimento da presso;
presso positiva mxima atingida, razo de crescimento da pres-
so durante a injeo do gs e a correlao dos fatores para a
monitorao da concentrao do gs no interior da cmara;
vcuo mximo atingido e razo de decaimento da presso
para a remoo do EtO da cmara;
presso positiva mxima atingida, razo de crescimento
da presso durante a injeo do ar comprimido.
Qualificao de Operao
A qualificao de operao implica na verificao e obteno de
evidncia documental de que:
os equipamentos e instrumentos estejam operando em confor-
midade com o planejado;
135
os procedimentos de operao, manuteno e segurana no ma-
nuseio dos equipamentos estejam implementados;
os operadores foram treinados nos procedimentos de operao,
manuteno e segurana no manuseio de todos equipamentos;
haja realizao de ciclo de esterilizao completo, incluindo
todas as fases da esterilizao (vcuo-injeo de vapor, condi-
cionamento, injeo de gs, exposio ao gs e lavagens com
ar comprimido filtrado).
Qualificao de Desempenho
A qualificao de desempenho implica na verificao e obteno
de evidncia documental de que o ciclo de esterilizao atinge con-
sistentemente parmetros pr-determinados, estabelecidos em
condies operacionais.
Qualificao de Desempenho Fsico
A qualificao de desempenho fsico implica na verificao e ob-
teno de evidncia documental de que:
a configurao da carga de esterilizao foi especificada para
cada esterilizador. Somente configuraes validadas podem ser
usadas nos ciclos de rotina;
os produtos ou famlias de produtos com maior dificuldade de
esterilizao so identificados. Novos produtos devem ser com-
parados com produtos j validados como referncia de confi-
gurao de carga e, se for julgado como pior caso para a
esterilizao, dever ser submetido a uma qualificao comple-
ta de esterilizao;
a distribuio da temperatura, presso e umidade relativa na
carga monitorada. O nmero de sensores de temperatura e de
umidade relativa necessrio para o respectivo monitoramento
136
deve estar relacionado ao volume da cmara esterilizadora e da
configurao da carga.
os sensores de temperatura devem ser distribuidos na cmara,
entre as unidades de carga e no interior das mesmas (Fig. 4.5),
nas posies especificadas por configuraes da carga, previa-
mente validadas.
Fig. 4.5 - Posio dos sensores de temperatura na carga.
Qualificao de Desempenho Microbiolgico
A qualificao de desempenho microbiolgico implica na verifi-
cao e obteno de evidncia documental de que:
137
estudos microbiolgicos so executados. As condies do ciclo
devem ser equivalentes ou levemente inferiores s condies
mnimas aceitveis de operao;
os indicadores biolgicos usados no ciclo de qualificao pos-
suem populao e resistncia conhecidas;
os indicadores biolgicos so inoculados em produtos e distri-
budos pela carga de esterilizao incluindo locais considera-
dos mais difceis de esterilizao.
o nmero mnimo de indicadores biolgicos na carga de 20 para
cmaras de at 5.000 litros e mais dois para cada 1.000 litros;
para qualificaes biolgicas iniciais, um nmero de replicatas
executado para demonstrar a reprodutibilidade do ciclo;
a carga microbiana inicial do produto a ser esterilizado deter-
minada e mantida sob condies controladas (Fig. 4.6).
Fig. 4.6 Posio dos IBs na carga.
Qualificao de Desempenho da rea de Aerao
(Degassing)
O processo/rea de aerao dos produtos deve ser definido, valida-
do e monitorado. A aerao pode ser executada no interior do esterili-
31/9
32/8
28/7 27/6
24/5
25/4
30
Entrada
da cmara
28
21
28
22
23
PALLET 3
01
02 03
VAPOR ETO SENSOR
18/12
18/13
19/14
11/11
X = IBs
Y = SENSOR
20
17
13
12
PALLET 2
X/Y
15/10
PALLET 1
X
X = IBs
1/20
2/19
5/18
6/17
9/16
9/15
10
11
7
3
4
SADA DA
CMARA
138
zador ou em uma rea separada. A temperatura deve ser monitorada e
registrada, e o nmero de trocas de ar da rea estabelecido e controlado.
Para cada produto/configurao de carga devero ser estabeleci-
das curvas de dissipao de resduos de EtO, e devero permanecer
em aerao at que os limites especificados/regulamentados sejam
atingidos.
Liberao de Produtos aps a Esterilizao
Os produtos esterilizados devero ser liberados somente aps a
realizao de:
avaliao dos registros da esterilizao contra os parmetros
especificados;
realizao e aprovao de teste de esterilidade dos indicadores
biolgicos;
realizao e aprovao do teste de pirognio dos produtos;
realizao e aprovao de teste de resduos de EtO;
se aplicvel, realizao e aprovao de inspeo fsica dos pro-
dutos, quanto a possveis defeitos causados pelo processo de
esterilizao.
Freqncia de Requalificaes
Requalificaes devero ser executadas periodicamente para de-
tectar qualquer alterao do processo. Tipicamente, uma requalifica-
o simples anual deve ser executada.
Uma alterao significante no produto, embalagem ou no proces-
so necessita ser validada. Exemplos de alteraes incluem:
embalagem;
projeto do produto;
configurao ou densidade da carga;
139
equipamentos do esterilizador (incluindo manutenes sig-
nificantes);
processo do ciclo de esterilizao.
Qualificao Inicial
Os seguintes estudos devero ser realizados para qualifica-
es iniciais:
trs estudos de distribuio de temperatura com a cmara vazia
e com monitorao de temperatura em 20 posies. Realizar
ciclos completos;
um estudo de condicionamento, para avaliar a umidade relativa
e temperatura durante a fase de umidificao do processo com
20 sensores de temperatura e trs sensores de umidade relativa.
O fornecimento de gs EtO dever estar fechado durante este
estudo. O ciclo dever ser abortado antes da injeo do gs,
pois os sensores de gs e de umidade podem ser danificados.
Usar cmara completa;
uma srie de estudos fracionados em condies mnimas para
concentrao de EtO e temperatura da cmara durante a expo-
sio, usando IBs e sensores de temperatura. O tempo de ex-
posio para os estudos fracionados dever ser definido com
base no desenho do produto a ser esterilizado e em outros pro-
dutos j qualificados, usando cmara completa;
trs estudos de meio-ciclo (half-cycle) usando IBs e senso-
res de temperatura. Estes estudos sero executados em con-
dies mnimas de concentraes de EtO, tempo de exposio
e temperatura da cmara durante a exposio. Usar cmara
completa;
um estudo de distribuio de temperatura completo em condi-
es nominais com monitorao de 20 sensores de temperatura.
Usar cmara completa.
140
Requalificao
Uma reviso da qualificao da cmara vazia e uma avaliao do
desempenho da cmara devem ser documentadas e aprovadas por
pessoal qualificado dentro de um perodo de 12 meses. Esta reviso
deve incluir no mnimo:
comparao das temperaturas da cmara vazia, paredes e ja-
queta atual com as leituras obtidas na ltima qualificao ou
requalificao;
avaliao de qualquer tendncia de alarmes no equipamento;
pesagem do gs e presso do vapor do condicionamento;
comparao da concentrao do gs, baseado na pesagem e no
diferencial de presso de um ciclo completo com uma carga de
produo versus a ltima qualificao/requalificao;
comparao da presso do vapor para uma carga completa ver-
sus a ltima qualificao/requalificao;
resultados de teste de esterilidade dos IBs;
reviso das manutenes realizadas no esterilizador;
teste de vazamento da cmara.
Caso os resultados forem aceitveis e no mostrarem tendncia
adversa, a reviso da qualificao aceita. Qualquer produto esterili-
zado deve ser retido at a reviso da requalificao.
Caso forem observadas diferenas significativas ou tendncias ad-
versas, uma requalificao completa deve ser executada com os mes-
mos parmetros do ciclo validado inicialmente, incluindo no mnimo:
estudo de distribuio de temperatura aceitvel com a cmara
vazia, conforme requisitos deste procedimento;
estudo de meio ciclo aceitvel para cada especificao, usando
IBs inoculados e avaliao de distribuio de temperatura;
anlise da distribuio de temperatura para o ciclo completo.
141
A cmara pode continuar sendo usada para processar e liberar pro-
dutos em outros ciclos se estes estiverem aprovados e validados.
Qualificao de Produtos Novos ou Modificados
Uma qualificao de desempenho microbiolgico dever ser exe-
cutada na introduo de novos produtos, embalagens ou mudanas nas
configuraes das cargas de esterilizao, a menos que essas modifica-
es tenham sido previamente qualificadas em um ciclo equivalente.
A demonstrao dessa equivalncia deve ser documentada.
Caso o novo produto no esteja qualificado para a cmara de este-
rilizao, a qualificao dever ser executada conforme o procedi-
mento de qualificao inicial.
Requalificaes Especiais
Se faz necessria requalificao do esterilizador anterior a sua data
de expirao, caso o equipamento seja alterado de forma significativa.
Controles e Artigos de Teste
Para Cada Estudo Fracionado
Mnimo de 20 indicadores biolgicos (IBs) com esporos de Baci-
llus atrophaeus ATCC 9372 inoculados em fitas de papel, contendo
uma populao mdia de 1 10
6
esporos/fita, so necessrios para
cmara de 5 m
3
a 10 m
3
.
Um IB no esterilizado ser usado como controle positivo.
Para Cada Estudo Meio-Ciclo
Trinta e dois indicadores biolgicos entre caixas (ICBIs) de Ba-
cillus atrophaeus ATCC 9372 em fitas de papel, contendo populao
mdia de 1 10
6
esporos/fitas.
142
Um ICBI no-esterilizado ser usado como controle positivo.
Trinta e dois indicadores biolgicos (IBs) de esporos de Bacillus
atrophaeus inoculados diretamente na unidade de carga. O produto
inoculado para validao deve ser selecionado, baseando-se em ava-
liaes fsicas dos produtos (densidade, peso e desenho).
Um IB no esterilizado ser usado como controle positivo.
Produtos para Composio da Carga de Validao
Cada pallet dever ser constitudo por produtos paletizados con-
forme especificao (Fig. 4.3).
Cada carga de estudo dever ser constituda por trs pallets de
produtos com densidade maior ou igual a do produto a ser validado.
As cargas que forem submetidas ao gs EtO s podero ser utili-
zadas para outro estudo aps atingirem condies iniciais de tempe-
ratura e realizao de inspeo visual em no mnimo cinco caixas por
pallet, verificando a presena de caixas danificadas.
Monitoramento dos Eventos de Cada Estudo
O dia e a hora dos registros grficos da cmara devero ser sincro-
nizados com o registrador (data logger) ligado aos sensores de tem-
peratura e umidade. Caso isto no seja possvel, usar um cronmetro
calibrado e referenci-lo nos documentos.
Os seguintes eventos e seus horrios de acontecimento devero
ser registrados (data logger):
incio do ciclo;
final do condicionamento (umidificao);
final da injeo de gs (incio da exposio);
final da exposio.
143
ESTERILIZAO POR CALOR MIDO
13,14
O procedimento de esterilizao de materiais que oferece maior
segurana o vapor saturado sob presso, realizado em autoclaves.
Neste equipamento, os microrganismos so destrudos pela ao com-
binada da temperatura, presso e umidade que promovem a termocoa-
gulao e a desnaturao das protenas da estrutura gentica celular.
O vapor saturado possui caractersticas vantajosas e outras limi-
tantes como processo de esterilizao. As vantagens consistem no
rpido aquecimento e rpida penetrao em artigos txteis ou tecidos
de algodo, destruio dos esporos microbianos em curto perodo de
exposio, fcil controle de qualidade e letalidade, a no presena de
resduos txicos nos materiais submetidos a este processo e ser eco-
nmico. As limitaes consistem na incompleta remoo do ar da
cmara interna, no permitindo a difuso e a expanso do vapor para
realizar esterilizao e o uso incorreto do equipamento, que pode
levar ao superaquecimento do vapor, com diminuio do poder mi-
crobicida, alm de no esterilizar leos e ps.
A NBR ISO 11134
15
especifica requisitos para o uso do calor mido
no desenvolvimento do processo de esterilizao, na validao do
processo de esterilizao e no controle da rotina de esterilizao.
Envolve todos os processos por calor mido, incluindo vapor satura-
do e mistura ar-vapor, aplicvel a todos os processos de fabricao
industriais e a todos os outros que realizam terceirizao da esterili-
zao por calor mido. Os princpios esquematizados podem ser teis
no uso da esterilizao por calor mido em estabelecimentos que no
sejam indstrias de produtos hospitalares.
Validao de Processo de Esterilizao
por Calor mido
13,15
Esterilizao por Calor mido
O processo de esterilizao por calor mido utiliza vapor satura-
do sob presso, o qual injetado dentro da cmara esterilizadora (au-
144
toclave). O princpio bsico da sua operao consiste na eliminao
do ar contido no interior da autoclave substituindo-o por vapor; este
vapor aquecer todo material at a temperatura especificada, promo-
vendo a reduo microbiolgica desejada.
Qualificao de Instalao
Na qualificao de instalao, o que se busca a garantia de que:
os equipamentos adquiridos/disponveis so adequados;
a instalao do(s) equipamento(s) ser realizada conforme ins-
trues dos fornecedores e de modo a proporcionar o melhor
desempenho possvel;
os instrumentos instalados em todos os equipamentos sero ca-
librados em suas faixas de uso contra padres rastreveis a pa-
dres nacionais/internacionais.
Qualificao de Operao
Na qualificao de operao, o que se busca a garantia de que:
o(s) equipamento(s) instalado(s), como por exemplo bombas
de gua, caldeira, torres de resfriamento, sensores e registrado-
res de presso e temperatura, vlvulas etc., esto funcionando
adequadamente individualmente e em conjunto com os demais
equipamentos do processo;
os equipamentos esto atingindo os parmetros de performan-
ce preestabelecidos em projeto. Por exemplo, a temperatura da
autoclave ser controlada conforme rampa de aquecimento gra-
dativo e atingir os 121C, a entrada do ar comprimido fazer
com que a presso interna da autoclave atinja 1,7 bar de sobre-
presso, o ajuste dos sprays de gua proporcionarem a efi-
cincia do resfriamento dos produtos desejada etc.
145
Qualificao de Desempenho Fsico
Na qualificao de desempenho fsico o que se busca a garan-
tia de que a autoclave atinja de forma consistente os parmetros de
temperatura e presso durante todo o processo. Para tanto, deve-se
realizar um mapeamento da distribuio de calor no interior da au-
toclave (estudo de distribuio de calor) com o acompanhamento
tambm da distribuio de calor no interior do produto (estudo de
penetrao de calor).
Qualificao de Desempenho Microbiolgico
Na qualificao de desempenho microbiolgico o que se busca a
garantia de que os equipamentos em conjunto com os parmetros de
processo definidos sejam capazes de proporcionar o nvel de garantia
de esterilidade desejado. O ndice de letalidade mnimo normalmen-
te utilizado Fo = 8,0 min
7
(para 121
o
C como temperatura refern-
cia). importante lembrar neste ponto que o produto com indicador
biolgico inoculado deve ser posicionado sempre no mesmo ponto
onde foi ou est sendo realizado o mapeamento de temperatura.
Etapas do Processo de Esterilizao por Calor mido
O processo de esterilizao em uma autoclave segundo normas
internacionais de operao ocorre da seguinte forma:
primeiramente, realizado o fechamento das portas da auto-
clave de forma a vedar qualquer ponto de vazamento de gua e/
ou vapor; ou
feita a introduo de gua filtrada no interior da autoclave
aquecida e resfriada atravs de chuveiro de gua com circula-
o contida; o volume de gua a ser introduzido varia em fun-
o do volume da autoclave e deve ser inferior ao nvel dos
produtos a serem esterilizados; ou
146
inicia-se o aquecimento com a injeo de vapor saturado em
autoclave a vapor (Fig. 4.7); o aquecimento realizado de for-
ma controlada permitindo que o ar contido no interior da auto-
clave seja eliminado por uma vlvula localizada na parte superior
da cmara; quando a temperatura da autoclave atinge a tempe-
ratura estabelecida, a vlvula de sada do ar se fecha;
Fig. 4.7 - Entrada de vapor na autoclave.
Entrada de vapor na autoclave
com o fechamento da vlvula em conjunto com a entrada de
vapor saturado, a temperatura e a presso da autoclave aumen-
tam rapidamente at atingir o ponto de ajuste com o auxlio de
termopares (Fig. 4.8);
depois de atingida a temperatura de esterilizao, registrada por
sensores (Fig. 4.8), inicia-se a contagem do tempo de exposi-
o do produto ao vapor mido; este tempo varia em funo do
volume, embalagem e configurao de carregamento do produ-
to a ser esterilizado; ou
147
a gua contida no interior da autoclave passa a ser pulverizada
(Fig. 4.9) sobre os produtos, atravs de vlvulas spray distribu-
das no interior da autoclave de chuveiro de gua; com a pulveri-
zao da gua, a temperatura dos produtos aumenta rapidamente;
na autoclave de chuveiro de gua, aproximadamente 10 minu-
tos aps atingir a temperatura de esterilizao, realizada uma
injeo de ar comprimido filtrado no interior da autoclave at
aproximadamente 1,7 bar; esta injeo de ar causa uma sobre-
presso na autoclave, no permitindo que o produto se infle e
estoure em funo do aumento da temperatura;
na autoclave de chuveiro de gua, terminado o tempo de expo-
sio, inicia-se o resfriamento do produto; a gua contida na
autoclave que usada para o aquecimento do produto, agora
passa por torres de resfriamento e em seguida pulverizada
sobre o produto para proporcionar o resfriamento;
Fig. 4.8 Sensor de temperatura na cmara da autoclave.
Sensor que mede a
temperatura da autoclave
148
Fig 4.9 Pulverizao da gua a 121C. A. Vista interna da autoclave.
B. Detalhe dos sprays.
Spray usado para
pulverizar gua a 121
o
C
A
B
149
depois de atingida a temperatura de resfriamento definida como
aceitvel para o produto, a autoclave despressurizada e o ci-
clo de esterilizao finalizado.
Padronizao da Carga
Para se validar um processo de esterilizao por calor mido, de-
vemos inicialmente padronizar a configurao do carregamento da
autoclave, ou seja, definir a quantidade e a configurao que os pro-
dutos devem ser colocados em cada carro de esterilizao.
Estudo de Distribuio de Calor
Sensores de temperatura (termopares) previamente calibrados
devem ser distribudos na carga configurada a ser esterilizada, em
posies previamente definidas com maior e menor dificuldades de
aquecimento. Esses sensores devem ser acoplados a um registrador
de temperatura, registrado em intervalos de tempo preestabeleci-
dos. A funo dos sensores acompanhar o aquecimento e observar
a distribuio de calor na carga. O nmero de sensores a ser distri-
budo pela carga depende do volume da autoclave. Durante o tem-
po de exposio do produto ao calor mido, a temperatura de todos
os sensores dever atingir entre 119 e 122C e a diferena de tem-
peratura entre todos os sensores de distribuio de calor no dever
exceder 0,5C.
Estudo de Penetrao de Calor
Sensores de temperatura (termopares) previamente calibrados
devem ser introduzidos em produtos que simulem exatamente o vo-
lume e embalagens do produto a ser validado. Novamente, o nmero
de produtos com sensores de penetrao que devem ser utilizados
depende do volume da autoclave. A funo dos sensores de tempera-
tura de penetrao acompanhar o aquecimento dos produtos em
150
vrios pontos da carga de esterilizao, e atravs de clculo de ndice
de letalidade (Fo), definir o ponto ideal para o final do tempo de
esterilizao (exposio) para o produto.
Estudo Microbiolgico
Uma carga microbiana conhecida (indicador biolgico) deve ser
inoculada em produtos simulados constitudos por soluo salina
0,9%, embalados com volume e embalagens similares ao produto a
ser validado. O indicador biolgico recomendado para este tipo de
esterilizao o Bacillus stearothermophilus ATCC 7953, porm, o
Bacillus atrophaeus ATCC 9372 tambm aceito para temperaturas
inferiores a 121
o
C. O nmero de produtos com indicador biolgico
inoculado deve ser igual ao nmero de sensores de penetrao de
calor. A distribuio dos produtos inoculados no interior da carga de
esterilizao deve ser ao lado de cada produto com sensor de tempe-
ratura de penetrao (Fig. 4.10). A funo do estudo microbiolgico
garantir que o processo de esterilizao estabelecido seja capaz de
reduzir uma populao de microrganismos de resistncia e popula-
o conhecidos a nveis aceitveis.
Teste dos Indicadores Biolgicos
Indicadores em Fitas de Papel
Testar os indicadores biolgicos em fitas de papel, transportando-os
para tubos de TSB (tryptic soy broth). Os indicadores biolgicos de-
vero ser incubados dentro de trs horas aps retirados da autoclave,
e mantidos por sete dias temperatura de 35 a 37
o
C para B. atro-
phaeus e de 55 57C para B. stearothermophilus.
Indicadores Biolgicos em Ampolas
Transferir os indicadores biolgicos em ampolas para o ba-
nho-maria. Os indicadores biolgicos devero ser incubados den-
151
tro de trs horas aps retirados da autoclave, e mantidos por sete dias
temperatura de 35 a 37
o
C para B. atrophaeus e de 55 57C
para B. stearothermophilus.
Controle Positivo
Para cada dia em que os indicadores biolgicos so usados na
qualificao, devem ser testados dois indicadores biolgicos, no
esterilizados, do mesmo lote que aqueles usados na qualificao como
controle. Incubar por sete dias temperatura de 35 a 37
o
C para B.
atrophaeus e 55 a 57C para o B. stearothermophilus.
Fig. 4.10 Configurao da carga e posies dos sensores de temperatura e dos
indicadores biolgicos.
10
9
8
7 6
5
4
3
2
1
152
Critrio de Aceitao
Ser considerado aprovado caso:
os controles positivos mostrem-se positivos dentro sete dias de
incubao e,
os indicadores biolgicos esterilizados mostrarem-se negativos
dentro dos sete dias de incubao.
Freqncia de Qualificaes
Qualificao inicial:
realizar um estudo de distribuio de calor com a autoclave vazia;
realizar trs estudos de distribuio de calor com a autoclave
com carga mnima de produtos;
realizar trs estudos de penetrao de calor com a autoclave
com carga mxima de produtos;
realizar no mnimo um estudo microbiolgico em conjunto com
estudos de penetrao de calor.
Requalificao da Autoclave
Realizar um estudo de distribuio de calor com a carga mxi-
ma a cada seis meses.
Realizar um estudo de penetrao de calor com a carga mxima
a cada seis meses.
Requalificao dos Produtos
Realizar um estudo de distribuio de calor com a autoclave
cheia a cada dois anos para cada produto.
Realizar um estudo de penetrao de calor com autoclave cheia
a cada dois anos para cada produto.
153
ESTERILIZAO PELO CALOR SECO
15
Outra forma de destruio de microrganismos a utilizao
do calor seco, gerado em estufas eltricas prprias para esterili-
zao pela conduo trmica. Inicialmente, o calor absorvido
pela superfcie exterior de um material e depois pela prxima
camada. Progressivamente, a temperatura necessria para este-
rilizao alcana todo o artigo. A morte dos microrganismos pelo
calor seco ocorre por meio da oxidao e dessecao. O proces-
so de esterilizao realiza-se com o aquecimento dos artigos por
irradiao do calor das paredes laterais e da base da estufa asso-
ciada conduo.
O uso de estufa limitado, pois o calor seco no to penetrante
quanto o vapor, e a sua distribuio dentro da cmara no ocorre de
maneira uniforme, sendo recomendado que no se utilize o centro
da estufa, pois concentra os chamados pontos frios. A carga dever
ser o mais uniforme possvel, e as caixas devem conter uma quanti-
dade limitada de intrumental. O uso de caixas em ao inoxidvel ou
com paredes espessas dificulta ainda mais a transmisso do calor
na carga.
Em razo dessa limitao e da inexistncia at o momento de uma
soluo, a esterilizao pelo calor seco vem sendo gradativamente
abandonada e substituda por outros processos.
o caso, por exemplo, da esterilizao de instrumentais, que
est sendo realizada em autoclaves com vapor mido saturado,
em recipientes metlicos perfurados ou sem tampa e acondicio-
nados com tecido de algodo ou similar. Outra alternativa o
aumento da temperatura e o tempo de exposio dos artigos ao
calor seco. Contudo, os resultados prticos e os benefcios des-
sas alternativas ainda no esto suficientemente documentados
e divulgados
16
.
154
Validao do Processo de Esterilizao
por Calor Seco
17
A esterilizao por calor seco usada para despirogenizar vidra-
nias e outros materiais no-termosensveis.
A validao deste processo realizada atravs do estudo da distribui-
o do calor dentro da estufa, sendo o desafio dos pontos crticos (pontos
frios) executado utilizando-se indicadores de endotoxinas bacterianas.
Aps estudos da distribuio do calor dentro da estufa, frascos
de endotoxina so colocados nas posies predeterminadas (pontos
frios) (Fig. 4.11).
Notas:
Frente da estufa = nmeros:
1, 2, 6 e 7.
Centro da estufa = nmeros:
5 e 10.
Fundo da estufa = nmeros:
3, 4, 8 e 9.
Efetuar dois ciclos de
despirogenizao, um com a
estufa carregada com vidrarias na
sua capacidade mxima e outro
com a estufa vazia.
Para cada ciclo, sero utilizados
dois indicadores de endotoxina
como controle positivo, ou seja,
os indicadores no sero
expostos ao ciclo de
despirogenizao.
Fig. 4.11 Posies dos frascos com endotoxina na estufa.
7
8
10
9
6
3
2
4
5
1
155
A farmacopia americana
17
recomenda a exposio dos frascos
com indicadores de endotoxina por um perodo mnimo de 30 mi-
nutos a 250
o
C. Para a validao do processo, os nveis de endotoxi-
na presentes nos frascos devem ser reduzidos ao menos em 3 ciclos
logartmicos.
Aps o trmino do ciclo de despirogenizao, a reduo da con-
centrao de endotoxina determinada comparando a concentrao
de endotoxina dos frascos desafio contra um controle no exposto ao
ciclo (250
o
C/30 minutos).
Para quantificar os nveis de endotoxina presentes nos frascos, a
endotoxina dos frascos deve ser recontituda com gua apirognica
e submetida ao teste de deteco de pirognio pelo mtodo LAL
(lisado de ambcitos de lmulus)
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
1. Pinto TJA. Controle Biolgico de Qualidade de Produtos Farmacuticos, Correlatos e Cos-
mticos. Livraria LMC. So Paulo, Atheneu, 2000.
2. ISO 11135 1994 Medical Devices Validation and Routine Control of Ethylene Oxide
Sterilization.
3. Russel AD et al. Gaseous sterilization. In: Principles and pratice of disinfection preservation
and sterilization. pp. 548-568, 1982.
4. Portaria Interministerial n 482 de 16 de abril de 1999, DOU/1999.
5. NBR 18849/97 Esterilizadores a gs de xido de etileno puro e suas misturas.
6. EN 550 Sterilization of Medical Devices Validation and Routine Control of Ethylene
Oxide Sterilization.
7. European Pharmacopeia 1997 3
rd
. Ed Strasbourg: Concil of Europe, 1997, c 1996 Euro-
pean Pharmacopeia / published in accordance with the convention on the elaboration of an
European Pharmacopeia 1997.
8. Portaria conjunta n 01/MS/SVS de 16 de Dezembro de 1997, DOU 17/12/97.
9. British Standard BS EN 866-2:1998 Biological Systems for testing Sterilizers and Sterilizati-
on Processes Part 2: Particular Systems for use in ethylene oxide sterilizers.
10. ISO 11138-1 Sterilization of health care products. Biological indicators Part 1: general.
11. British Standard EN 550: 1994 Sterilization of medical devices. Validation and routine con-
trol of ethylene oxide sterilization.
12. ISO 10993-7 Biological evaluation of medical devices Part 7 Ethylene oxide sterilization
residuals.
13. Vessoni Penna TC. Journal of the Parenteral Drug Association V.50 n.4 p.1-11, 1996.
156
14. Vessoni Penna TC et al. Validao de Processo de esterilizao a vapor mido. Revista con-
trole de Contaminao. Ano 5, n 38, Junho/2002.
15. NBR ISO 11134/2001 Esterilizao de produtos hospitalares. Requisitos para validao e
controle de rotina. Esterilizao por calor mido.
16. Rutala WA. Disinfection, sterilization and waste disposal. In: Wenzel RP, ed. Prevention and
control of nosocomial infections. Baltimore, Williams & Wilkin, 539-594, 1997.
17. The United States Pharmacopeia 24 & National Formulary 19, 1999. The United States Phar-
macopeia (USP24) The national Formulary: NF 19: by authority of the United States Phar-
macopeial Convention Inc., meeting at Washington D.C., march 9-12,1995 Published by
Board of Trustees Rockville, Maryland: United States Pharmacopeial Convention, 1999.