CRITRIOS PARA ESCOLHA DE TESTES

DE IMUNODIAGNSTICO:
NA BANCADA E NO LABORATRIO
CLNICO
RICARDO WAGNER DIAS PORTELA, DVM PhD
LABORATRIO DE IMUNOLOGIA E BIOLOGIA
MOLECULAR
INSTITUTO DE CINCIAS DA SADE
UFBA
COM TANTAS TCNICAS DIFERENTES, E COM
MUITAS DELAS DESTINADAS A DIAGNOSTICAR
AS MESMAS PATOLOGIAS, QUAIS ESCOLHER?
EM QUE SE BASEAR NA HORA DE RECEITAR OU
UTILIAR NA ROTINA LABORATORIAL?
1- INTRODUO
1.1- Principais caractersticas das Respostas
Imunes Adquiridas:
-
speci!icidade
-
Di"ersidade
-
#em$ria
-
specia%i&a'(o
-
Auto%imita'(o
-
N(o reati"idade ao pr$prio
1- INTRODUO
1.1- Principais caractersticas das Respostas
Imunes Adquiridas:
-
speci!icidade ) con!erida por duas mo%*cu%as
principais:
- T+R ) presente na mem,rana de
%in!$citos-
- Anticorpos ) produ&idos por %in!$citos ./
presentes na mem,rana de %in!$citos . e na
!orma secretada/ so%u,i%i&ados em di"ersos
!%uidos corporais.
1- INTRODUO
1.0- Principais isotipos de anticorpos
-
I1#
-
I12
-
I1A
-
I1
-
I1D
1- INTRODUO
1.0- Principais isotipos de anticorpos:
-
I1#
I1#
-
I12 ) encontrado em maior concentra'(o no
soro/ de o,ten'(o mais !3ci%/ so!re matura'(o de
a!inidade
-
I1A
I1A
-
I1
I1
-
I1D
I1D
1- INTRODUO
1.0- Principais isotipos de anticorpos:
-
I1#
I1#
-
I12 ) #AR+ADOR D +ONTATO DO INDI45DUO
+O# O A2NT IN6++IO7O
-
I1A
I1A
-
I1
I1
-
I1D
I1D
Testes sorolgicos

Deteco de anticorpos especficos
no soro, produzidos por um
indivduo aps contato com agente infeccioso
Anticorpo marcador de infeco
Somente produzido aps contato com o
Antgeno RI Adaptativa
strutura dos Isotipos de Anticorpos!
"s diferentes isotipos de Acs apresentam estruturas variadas
Ig#
$ %eutralizam to&inas
-
'i&am o complemento
-
Receptor de antgenos na superfcie dos (inf) *
-
#arcador de fase aguda de doenas infecciosas
Ig+
$ ,uatro su-classes! Ig+., Ig+/, Ig+0 e Ig+1
-
neutralizam to&inas 2todos3
-
fazem opsonizao 2Ig+. e Ig+03
-
fi&am complemento 2Ig+., Ig+/ e Ig+03
-
so os 4nicos 5ue podem atravessar a placenta 2Ig+/3
IgA
$ neutralizam to&inas
-
-lo5ueiam a ligao de antgenos nas mucosas
-
Apresentam$se na forma dim6rica
Ig
-
(evam a degranulao de mastcitos e -asfilos)
-
7articipam da imunidade contra 8elmintos
-
7articipam das rea9es de :ipersensi-ilidades
;aractersticas dos Isotipos de Anticorpos!
;aractersticas dos Isotipos de Anticorpos!
;aractersticas dos Isotipos de Anticorpos!
7rincipais ;aractersticas dos nsaios de
Imunodiagnstico!
-
speci!icidade
-
7ensi,i%idade
-
Repetiti"idade
-
Reproduti,i%idade
-
8imite de Detec'(o
-
8inearidade
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-speci!icidade: +aracterstica que indica que o teste em quest(o
identi!icar3 somente o ant1eno ou o anticorpo dese;ado.
-
<uanto #AIOR a especi!icidade/ #NOR a ocorr=ncia de
resu%tados !a%sos-positi"os/ #NOR a ocorr=ncia de rea'>es
cru&adas.
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-speci!icidade: Importante principa%mente quando ap%icada a
doen'as in!ecciosas.
Doen'as de noti!ica'(o o,ri1at$ria ) con!ere a certe&a so,re o
status in!eccioso do paciente ou/ no caso anima%/ e"itando
sacri!cios desnecess3rios e pre;u&os.
Importante para um correto contro%e sanit3rio de re,an?o/
e"itando a introdu'(o de animais in!ectados e a dissemina'(o
da doen'a.
O.RI2AT@RIA A8TA 7P+I6I+IDAD # T7T7
+ON6IR#AT@RIO7
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-7ensi,i%idade: +aracterstica inerente ao m*todo estreitamente
re%acionada com a quantidade mnima de ant1eno ou anticorpo
que poder3 ser detectada
-<uanto #AIOR a sensi,i%idade/ #NOR a ocorr=ncia de
resu%tados !a%sos-ne1ati"os/ #AIOR a possi,i%idade de detec'(o
precoce de doen'as.
-
#*todos en&im3ticos/ radioati"os/ !%uorescentes/
quimio%uminescentes.
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-7ensi,i%idade: Importante caracterstica que se ap%ica
principa%mente a doen'as in!ecciosas/ marcadores
tumorais e ?ormAnios encontrados em ,aiBa concentra'(o.
Um Cit de a%ta sensi,i%idade permite a detec'(o precoce de
pato%o1ias/ %e"ando a um tratamento mais e!eti"o e mais
r3pido/ me%?orando o pro1n$stico do paciente.
A8TA 7N7I.I8IDAD O.RI2AT@RIA #
T7T7 D TRIA2#
;urso do 7rocesso Infeccioso!
7arasitemia < =iremia < *acteremia
;urso da Infeco!
;oncentrao de Anticorpos e %4mero de
(infcitos T fetores
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-Bemp%os Pr3ticos:
nsaio com ,oa especi!icidade e ,aiBa sensi,i%idade
Interpreta'(o dos Resu%tados:
Resu%tado 9 - +on!i3"e%
Resu%tado - - A con!irmar
7P+I6I+IDAD 9 7N7I.I8IDAD : +ON6IA.I8IDAD
-Bemp%os Pr3ticos:
nsaio com a%ta sensi,i%idade e m*dia especi!icidade
Interpreta'(o dos Resu%tados:
Resu%tado 9 - A con!irmar
Resu%tado - - +on!i3"e%
+U7TO DO N7AIO
9
7N7I.I8IDAD D 7P+I6I+IDAD
:
R8AO +U7TO D .N65+IO
AD<UAO DA A#O7TRA
-
As amostras dispon"eis s(o compat"eis com a
metodo%o1ia a ser empre1adaDproposta
-
A#O7TRA NO E 7@ 7ORO:
Urina
6e&es
8quido +*!a%o-raquidiano
7=men
831rima
7a%i"a
-
O per!i% dos componentes das amostras podem inter!erir
nos testes/ p. eB. as en&imas da sa%i"a/ as ,act*rias das
!e&es...
>m teste sorolgico pode ser 5ualitativo,
semi$5uantitativo ou 5uantitativo!
$ 5ualitativo, se os seus resultados informam apenas se
houve ou no reao / deteco (positivo ou negativo).
Veja um laudo imaginrio:
Teste deteco por ELISA de anticorpos IgM contra rubola
Resultado: positivo
- semi$5uantitativo, se a amostra testada (soro) foi diluda !
a maior diluio a apresentar reao " o seu ttulo)
Veja um laudo imaginrio:
Teste deteco por imunoluoresc!ncia de anticorpos Ig" contra o T# cru$i
Resultado: positivo at a diluio de %:&'(
- 5uantitativo, se " capa# de informar a $uantidade a%soluta do material detectado.
Veja um laudo imaginrio:
Teste deteco por ELISA de anticorpos IgM contra o T# gondii
Resultado: )& *I+ml
;ont) negativo
;ut$off
;ont)
positivo
Resultado de um teste (ISA
&sta placa ser lida por um fotocolormetro, $ue informar os valores de den-
sidade 'tica.
(odos a$ueles $ue apresentarem resultados a%ai)o do
*cut-off+ sero considerados negativos, en$uanto $ue os $ue mos-
trarem valores maiores, sero positivos.
Trata$se portanto de um teste 5ualitativo
:emoaglutinao 7assiva
Teste semi$5uantitativo
,oros
testes
controle positivo
controle negativo
dilui-es seriadas dos soros testes
de .: / a .................. .:.0/1
2a primeira fileira (de cima para %ai)o), a reao foi positiva at" a
diluio de .:3/ . 4 na segunda fileira o resultado foi negativo em todas as
dilui-es.
5 resultado do primeiro soro teste acima referido ": reagente at6 a
diluio de .!0/ (ou ttulo!.!0/). 5 segundo soro teste " no reagente.
A maior ou menor sensi,i%idade e especi!icidade de um teste
soro%$1ico depende de qua% * a sua !ina%idade.
- Para dia1n$stico - necessrio a utilizao de testes
mais especficos. Nestes casos, importante que sejam evitados
os testes falso-positivos.
- Para tria1em em .anco de 7an1ue Fou outras
!ina%idades simi%aresG) os testes so usados com fins preventivos,
ou seja, a funo prevenir a contaminao do receptor. Aqui
usca-se evitar os testes falso-ne!ativos "a repetio de um teste
com resultado falso-positivo custa pouco, entretanto, a
disseminao da doena em conseq#$ncia de um resultado falso-
ne!ativo, tem que ser impedida a todo custo%.
O <U 84AR # +ONTA NA HORA D
7+O8HR O #ETODO D DIA2N@7TI+OI
-7ensi,i%idade-
-
speci!icidade Fcon!ia,i%idade de resu%tadosG-
-
+usto FPRI#ORDIA8 NA #D. 4TRINJRIAG-
-
Disponi,i%idade de materia%-
-
7e1uran'a-
-
Ap%ica,i%idade K amostra dispon"e%/ A1DAc a ser
detectado e esp*cie anima% a ser ana%isada-
-
Tempo de rea%i&a'(o do m*todo.
Uti%i&a'(o de ensaios soro%$1icos:

De!ini'(o da suspeita c%nica

Di!erencia'(o de !ases da doen'a

Dia1n$stico de doen'a con1=nita

Tria1em soro%$1ica em ,anco de san1ue

7e%e'(o de doadores e receptores de $r1(os para transp%ante

Pro1n$stico da doen'a

A"a%ia'(o D monitoramento da terap=utica

Di!erencia'(o da imunidade natura%mente adquirida ou arti!icia%mente

indu&ida

sta,e%ecimento da pre"a%=ncia da doen'a

4eri!ica'(o de erradica'(o da doen'a

4eri!ica'(o de reintrodu'(o de no"os casos em 3reas conso%idadas

0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
HI7T@RI+O
+ARA+TR57TI+A7 2RAI7 DO7 PRIN+IPAI7
#ETODO7 8A.ORATORIAI7 <U #PR2A#
ANTI+ORPO7
4ANTA2N7 D74ANTA2N7 DO7 #ETODO7
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.1- Imunodi!us(o: Intera'(o A1DAc rea%i&ada em meio
s$%ido F1*% de 31arG
-
Di"ersos tipos:
-
Imunodi!us(o Radia% 7imp%es - A1 ou Ac imo,i%i&ado
no 1e% ) #i1ra'(o do A1 ou Ac da so%u'(o teste no
1e%/ at* atin1ir re1i(o de concentra'(o equi"a%ente-
- Imunodi!us(o Dup%a e Outc?er%onL ) Am,os A1 e Ac
mi1ram no 1e%/ !orma'(o de ,anda na re1i(o de
equi"a%=ncia.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
&todo qualitativo empre!ado para doenas infecciosas e
autoimunes ' (ai)a *ensiilidade, oa especificidade
+sado anti!amente para dia!n,stico sorol,!ico de
(rucelose, e al!umas doenas virais
-& .-*+*/
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
&todo quantitativo empre!ado para dosa!em de
molculas presentes em alta quantidade em amostras, por
e)emplo, dosa!em de 0muno!loulinas 1otais.
(ai)a Preciso, ai)a sensiilidade
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
0.0- Imunodi!us(o:
-
4anta1ens ) #*todo de !3ci% eBecu'(o/ tempo curto de
rea%i&a'(o/ ,aiBo custo/ n(o necessita de aparato
so!isticado
-
Des"anta1ens ) .aiBa sensi,i%idade/ especi!icidade/
di!ci% preser"a'(o do 1e%/ n(o ap%ic3"e% a a%1uns
isotipos de imuno1%o,u%inas.
-
- Pouco uti%i&ado atua%mente como !erramenta de
imunodia1n$stico. mpre1ado como contro%e em
produ'(o de po%ic%onais.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.M- Hemoa1%utina'(o ) Uti%i&a ?em3cias sensi,i%i&adas
com A1s na mem,rana/ que !ormam comp%eBos de a%to
peso mo%ecu%ar quando incu,adas com Acs espec!icos
para os ant1enos.
- Permite maior di%ui'(o da so%u'(o teste que a
Imunodi!us(o. 6orma comp%eBos mais pesados/ que
precipitam com maior "e%ocidade e !aci%idade: #e%?oria
da detec'(o da intera'(o entre A1-Ac-
-
4aria'>es no m*todo: Ini,i'(o da A1%utina'(o.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
&todo qualitativo e semi-quantitativo empre!ado para
deteco de anticorpos especficos e molculas
aundantes em memranas de clulas.
+tilizado ainda em &ed. 2eterinria, apesar de impreciso.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.M- Hemoa1%utina'(o:
-
4anta1ens: #*todo simp%es/ de !3ci% eBecu'(o/ ,aiBo
custo/ r3pido-
-
Des"anta1ens: .aiBa sensi,i%idade e m*dia
especi!icidade/ de"ido a mau arma&enamento das
?em3cias/ pode-se o,ter resu%tados !a%so-ne1ati"os.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.N- 6iBa'(o do +omp%emento: 4aria'(o da
t*cnica de Hemoa1%utina'(o/ onde uti%i&a-se a
capacidade cito%ca do 7istema de +omp%emento
para amp%i!icar a detec'(o da intera'(o A1DAc.
-
4aria'>es da t*cnica: Ini,i'(o da 6iBa'(o do
+omp%emento.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.N- 6iBa'(o do +omp%emento:
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.N- 6iBa'(o do +omp%emento:
-
4anta1ens: #aior sensi,i%idade do que a
Hemoa1%utina'(o/ r3pida eBecu'(o/ ,aiBo custo-
-
Des"anta1ens: De"ido a pro,%emas na preser"a'(o
do +omp%emento/ e na sua esta,i%idade/ pro,%emas
de !a%so ne1ati"os podem ocorrer.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.O- 8I7A Fn&Lme-8inCed Immuno7or,ent AssaLG )
T*cnica que uti%i&a A1DAc imo,i%i&ado em p%aca de
po%mero de car,ono/ e anticorpo con;u1ado a uma
en&ima/ a qua%/ ap$s a1ir so,re seu su,strato em
presen'a de su,stPncia crom$1ena/ amp%i!icar3 a
detec'(o da intera'(o A1DAc atra"*s da !orma'(o de cor-
-
4aria'>es da T*cnica: 8I7A <uimio%uminescente/ 8I7A
6%uorescente/ 8I7A Radioati"o
/utros componentes do soro
8I7A Q7ANDRI+HS
Ant!eno a ser dosado Anticorpo primrio
Anticorpo conju!ado
1&(
-nzima Pero)idase
8I7A D +O#PTIO
/utros componentes do soro
Ant!eno a ser dosado Anticorpo primrio
Ant!eno iotinilado
1&(
*1-A2- Pero)idase
8I7A D +APTURA
Anticorpo anti-0!&
0!& a ser detectada
0!& inespecfica
Ant!eno iotinilado
1&(
*1-A2- Pero)idase
8I7A INDIRTA
Ant!eno purificado
0!& a ser detectada
0!& inespecfica
Anticorpo conju!ado
1&(
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.O- 8I7A:
-
4anta1ens: #*todo a%tamente sens"e% e espec!ico/
com a%to 1rau de con!ia,i%idade como ensaio
quantitati"o/ custo ,aiBo a m*dio.
-
Des"anta1ens: De"ido a a%ta sensi,i%idade/ pequenas
"aria'>es de pipeta1em e tempo de incu,a'(o podem
ocasionar resu%tados a%terados- em eBtratos de
ant1enos/ n(o se pode precisar a qua% ant1eno ?ou"e
a resposta- 8I7A de competi'(o muito suscept"e% a
erros de manipu%a'(o.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.O- 8I7A:
-
4anta1ens: #*todo a%tamente sens"e% e espec!ico/
com a%to 1rau de con!ia,i%idade como ensaio
quantitati"o/ custo ,aiBo a m*dio.
-
Des"anta1ens: De"ido a a%ta sensi,i%idade/ pequenas
"aria'>es de pipeta1em e tempo de incu,a'(o podem
ocasionar resu%tados a%terados- em eBtratos de
ant1enos/ n(o se pode precisar a qua% ant1eno ?ou"e
a resposta- 8I7A de competi'(o muito suscept"e% a
erros de manipu%a'(o.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.O- 8I7A:
-
#*todo <uantitati"o de me%?or re%a'(o
custoD,ene!cio em "eterin3ria/ para quanti!ica'(o de
?ormAnios FseBuais/ tireoidianos/ ?ipo!is3rios/
meta,$%icos...G
-
#*todo de tria1em para detec'(o de doen'as
in!ecciosas/ a%ta sensi,i%idade/ a%ta especi!icidade/ mas
podendo apresentar resu%tados !a%so-positi"os/ que
de"em ser con!irmados por outros ensaios.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.T- Imuno!%uoresc=ncia D Imuno?istoqumica:
Uti%i&ados para detec'(o e %oca%i&a'(o de ant1enos em
c*%u%as e tecidos FI6 DiretaG e para detec'(o de
anticorpos espec!icos em !%uidos ,io%$1icos FI6
IndiretaG
-
#*todos de a%ta especi!icidade e ,oa especi!icidade
-
Uti%i&a'(o de anticorpos con;u1ados com
su,stPncias !%uorescentes F6IT+/ 6A+G
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.T- Imuno!%uoresc=ncia D Imuno?istoqumica:
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.T- Imuno!%uoresc=ncia D Imuno?istoqumica:
-
4anta1ens: A%ta especi!icidade e ,oa sensi,i%idade-
possi,i%idade de detec'(o de protenas intrace%u%ares e
de sua %oca%i&a'(o/ ,em como do tr3!ico intrace%u%ar.
-
Des"anta1ens: Q"aria'(o indi"idua%S na %eitura de
resu%tados de I6A- a%to custo de microsc$pio de
!%uoresc=ncia- t*cnicas especiais de !iBa'(o e inc%us(o
de tecidos para Imuno?istoqumica nem sempre
dispon"eis.
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
0.U- Restern-.%ot: Associa'(o de t*cnica de
%etro!orese em 2e% de 7D7-PA2 com t*cnicas
imuno%$1icas
-
Permite a identi!ica'(o do recon?ecimento de
ant1enos com peso mo%ecu%ar de!inido
-
Identi!ica'(o de anticorpos que recon?ecem
determinado ant1eno em so%u'(o contendo di"ersos
ant1enos
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
0.U- Restern-.%ot:
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7
8A.ORATORIAI7
0.U- Restern-.%ot:
6ode au)iliar na diferenciao de esp"cies de 7eishmania
$ue infectam o animal
8iferenciao do animal infectado do vacinado
(dependendo do tipo de vacina)
0.U- Restern-.%ot:
-
4anta1ens: a%ta sensi,i%idade e especi!icidade-
recon?ecimento de ant1enos indi"iduais em um eBtrato-
rea%i&a'(o de per!i% de recon?ecimento de ant1enos e
determina'(o de protenas imunodominantes-
-
Des"anta1ens: +usto m*dio a a%to- procedimento %on1o e
propenso a erros em di"ersos pontos- dependendo do
sistema de re"e%a'(o/ pode-se ter pro,%emas de se1uran'a.
POU+O DI7PON548 AINDA PARA 4TRINJRIA
0- PRIN+IPAI7 #ETODO7 8A.ORATORIAI7
#*todos de Dia1n$stico uti%i&ando
A"an'os .iotecno%$1icos no .rasi%
-
8eis?maniose canina ) P+R/ R68P.
-
Babesia canis, Ehrlichia canis ) R68P/ RAPD.
-
8eis?maniose ) +itometria de 6%uBo/ A1s espec!icos
-
Animais de Produ'(o ) .usca de dia1n$stico r3pido e
preciso/ podendo ser rea%i&ado a campo.
SITUA!"O DA BIOTECNOLOGIA
ANIMAL NO BRASIL:
MERCADO BIOTECNOLGICO ANIMAL:
M#$%&'( )$&*+,#+$( '# -&%+.&*: US/ 001
2+,h3#* 405567
P$+.%+8&,2#.9# &.+2&+* '# 8$(':;<(, %(2
8&$9+%+8&;<( '# &.+2&+* '# %(28&.h+&
MERCADO EM FRANCA E=PANS"O
N<( h> '&'(* '+*8(.?-#+* @:&.9( &(
'+&A.B*9+%( -#9#$+.>$+(
+o%a,oradores:
Prof. 2asco Azevedo ' 03(4+5&6
Profa. &aria de 5tima 3osta ' 03*4+5(A
Prof. 7uis Pita ' -&-24+5(A
.r. 8odri!o *oares ' 3Pq88450/38+9-&6
.r. 7ain Pontes-3arval:o ' 3Pq6&450/38+9-(A
Prof. ;oaquin Patarro<o ' .214+52
Doutorandos:
(runo (astos
*ora<a 3orrea
#estrandos:
.aniele .antas
&iriam 8eouas
6arielle 8odri!ues
=tala 5e:ler!
0nara 8odri!ues
&arcos *ilva
Andrea &a!al:aes
/sman *ilva ;r.
Patrcia 3isneiros
Inicia'(o +ient!ica:
Ana Paula Portela
&arilia &arques
;ose 1adeu 8a<nal
7udmila *ena
Aret:a Alves
8ejane 8odri!ues
Pesquisadores:
Prof. 8oerto &e<er
.ra. *on!eli 5reire
Profa. 7ilia &oura 3osta
Profa. 2era 2ale
Prof. 8icardo Portela
.r. -dson 8odri!ues
Profa. ><io?o Ae-*andes
Profa. 0vana Nascimento
@@@.laimuno.or!.r