PREGLED REKOMBINANTNIH

ZDRAVILNIH UČINKOVIN

Prof. dr. Borut Štrukelj, mag.farm.

 INSULINI
• 1. Prva generacija

• Humani rekombinantni insulin

• Struktura:

• Pridobivanje:

• Lastnosti
Odkritje insulina
Mikro in makroangiopatije
• Pridobivanje:
V E coli ali kvasovkah, kot proprotein ali
ločeno veriga A in veriga B

• Lastnosti:

• Ni glikoziliran, deluje kot monomer, v

telesu se shranjuje kot heksamer
 INSULINI
• Druga generacija

• Lispro, Aspart, Exubera, Detemir, Glargin

• Struktura: zamenjane AK (Lispro: lizin 28-Prolin-29)

• Pridobivanje: insercijska mutageneza, kloniranje,

izražanje

• Lastnosti: hitreje delujoči, boljša aplikativnost (exubera)

Čas delovanja različnih insulinov
 ERITROPOETINI
• 1. Prva generacija

• Humani rekombinantni eritropoetin alfa,

beta, delta
 Osnovne funkcije krvnih celic:

• Prenos kisika
• Skrb za imunski sistem
• Skrb za strjevanje krvi

Kratka življenska doba krvnih elic zahteva kontinuirano nadomeščanje-

hematopoeza (anemije, infekcije, trombocitopenije)
 Poglavitni hematopoetski rastni faktorji

• Faktor, ki spodbuja razvoj • Faktor, ki spodbuja razvoj

granulocitov (G-CSF) makrofagov (M-CSF)

• Faktor, ki spodbuja razvoj • Trombopoetin (TPO)

granulocitov in monocitov
(GM-CSF)
• Faktor, ki vzpodbuja
• Eritropoetin (EPO) razvoj matične celice
(SCF)
• Levkemija-inhibitorni
faktor (LIF) • Razni interlevkini
 Mehanizem delovanja
Celična smrt

Eritrociti
Eritropoezno tkivo

UMC-E Eritroblasti Retikulociti

Potreba po eritrocitih,
pO2 v tkivu
EPO

O2 senzor

Epo gen

Celice ki proizvajajo EPO

 Terapevtska uporaba
• Kronična odpoved ledvic,
• Zdravljanje anemije, ki nastane pri terapiji rakavih obolenj s
kemoterapijo,
• Zdravljenje anemije pri nakaterih kroničnih boleznih (revmatoidni
artritis),
• Zdravljenje anemije pri bolnikih z AIDS-om,
• Zdravljenje anemije pri nedonošenčkih,
• Po avtologni transfuziji pred operacij ali za zmanjšanje transfuzije po
operaciji,
• Preventiva anemije po presaditvi kostnega mozga.

Običajna doza je 50 -150 I.U. EPO/kg

telesne teže 2-3x tedensko.
To zadostuje za vzdrževanje hematokrita
na vrednosti 32-35%
 Biokemija
Gen
• Gen za EPO se pri človeku nahaja na 7
kromosomu (7q11-q22),
• 4kb (vsebuje promotor, 5 eksonov in 4
introne in pospeševalec pod vplivom
hipoksije (hypoxia-inducible enhancer).
Peptidna struktura
• 165 aminokislin dolga polipeptidna veriga
z izračunano molsko maso 18.3 kDa,
• 2 disulfidni vezi:Cys7-Cys161 in Cys29-
Cys33,
• Visoka homologija med človeškim in
mišjim EPO,
• 3D struktura: 4 alfa-vijačne strukture, ki
jih povezujejo različno dolge zanke.
 • Pridobivanje:

Izražanje v CHO ali BHO celicah; šaržni ali

površinski postopek
 ERITROPOETIN
• Druga generacija

• Darbepoetin alfa
Darbepoetin-alfa
 INTERFERONI
• Prva generacija

• Humani rekombinantni interferon alfa,

beta, gama
• Opis:
• interferon -2a (Rofenon A)
• sestavljen iz 165 AA, narejen s pomočjo genskega
inženiringa v E. coli. Ima lizin (Lys) na poziciji 23. Po
ekspresiji in grobi filtraciji čistimo IFN -2a na afinitetni
kromatografski način z mišjimi monoklonskimi protitelesi
• interferon -2b (Intron A)
• sestavljen iz 165 AA, narejen s pomočjo genskega
inženiringa v E. coli. Ima arginin (Arg) na poziciji 23.
Čiščenje: afinitetno, od leta 1998 s His-tag sistemom.
• KLINIČNI VIDIKI
• antivirusno
• antiproliferativno
• Imunomodulatorno (IFN gama)
• Regulatorji diferenciacije
• Inhibitorji angiogeneze
• Modulatorji lipidnega metabolizma
• proti rakavim obolenjem (alfa)
• Uporabljamo pri: levkemijah, condilomatozah, akutnem in
kroničnem hepatitisu C, AIDS-povzročenem Kaposijevem
sarkomu, pri krvnem karcinomu, karcinomu materničnega
vratu, ledvičnem karcinomu, ne-Hodgkinovemu limfomu,
malignem melanomu, proti herpes labialisu…
• INTERFERON 
• izolacija je neekonomična, pridobivamo le po
• rekombinantni poti
• deluje protivirusno in imunoregulatorno
• največ uspeha pri zdravljenju multiple skleroze
• dve rekombinantni zdravilni učinkovini na tržišču:
• interferon–1a (Avonex)
• interferon –1b (Betaseron)
• Betaseron je 165 AA velik protein, pridobljen iz E. coli. cDNA za interferon
beta so izolirali iz človeških fibroblastov in mu cistein na mestu 17 zamenjali
z serinom.
• FARMAKOLOGIJA
• ambulantno zdravljenje multiple skleroze
• subkuana aplikacija 8 milionov IU (o,25 mg) vsak drug dan
• NEŽELENI UČINKI
• Velika verjetnost nastanka protiteles
• INTERFERON 
• naravni interferon  je 143 AA velik protein z molsko
maso od 20-25 kDa.
• izolacija je neekonomična, obstaja rekombinantni
interferon  (Actimmune), ki je 140 AA velik protein,
produciran v E. coli. Čiščenje sestoji iz i.i. kolonske
kromatografije in gelske filtracije.
• FARMAKOLOGIJA
• antivirusno (slabše)
• imunomodulatorno
• Pri zdravljenju kronične granulomatoze (gensko
pogojena bolezen). Pospešuje fagocitozo. Absorbira se
počasi (i.m., c.s.). Hranjenje !
 INTERFERONI
• Druga generacija

• PEG-interferon alfa

Vezava polietilenglikolnih verig na protein:

- Večja stabilnost, topnost, zaščita pred
proteolizo, manjša imunogenost, večja
razpolovna doba
 Interferoni druge generacije:
• PEG-interferoni
 Rastni hormon

• Humani rekombinantni rastni hormon

• Za zdravljenje juvenilne pritlikavosti

Stallone pleads 'guilty'
Leonie Lamont
May 15, 2007 - 10:30AM
 G-CSF

• Humani rekombinantni granulocite stimulirajoči

dejavnik

• Struktura:

• Pridobivanje:

• Lastnosti
 G-CSF in GM-CSF

• Z rekombinantno DNA tehnologijo pridoblejna rastna faktorja:

filgrastim in lenograstim (G-CSF) in molgramostim in
sargramostim (GM-CSF)

filgrastim lenograstim molgramostim sargramostim

Št 175 174 128 127
aminokislin
MW 18,6kD 18,5 kD 14,7 kD 14,6 kD
glikozilacija ne O-glik ne N-glik
Genski vir ca ca monociti Limfociti T
Ekspresijski E. coli CHO E.coli Aspergillus
sistem
• Indikacije: nevtropenija (pri kemoterapiji, febrilnih stanjih,
trasplantaciji organov, obsevanju, AIDS, kirurška profilaksa,
plučnice,
• Neželjeni stranski učinki:

• A) filgrastim: bolečine v kosteh, slabost

• B) molgramostim: slabost, dispnjea, diareja, rigor, bruhanje,
anoreksija, aritmija, hipotenzija, perikarditis, plučni edem,
sindrom kapilarne permeabilnosti

• Odmerki: 1-5 ug/kg/dan

 DNAaza I
• Je endonukleazni glikoziliran encim,
sestavljen iz 260 AK. Rekombinantna
oblika se imenuje alfa dornaza

• DELOVANJE in INDIKACIJA
Ker cepi fosfodiesterske vezi, jo
uporabljamo za razgranjo zunajcelične
DNA, ki se nabira pri cistični fibrozi.