INMUNOHEMATOLOGA

Salvador Camacho Garrido

REACCIONES Ag-Ac
Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el
reconocimiento de determinadas estructuras qumicas
en la superficie de macromolculas extraas, los
antgenos
Las zonas del antgeno que se unen especficamente con
el anticuerpo o con el receptor de un linfocito, se
denominan determinantes antignicos
Cada antgeno puede presentar varios determinantes
antignicos diferentes que estimulan la produccin de
anticuerpos y la repuesta de los linfocitos T
Estas estructuras qumicas, los determinantes
antignicos, son los responsables de la especificidad de
la respuesta inmunitaria
CONTACTO
Cuando se ponen en contacto un antgeno
con el anticuerpo especfico, reaccionan
unindose mediante un enlace no covalente
y se desencadenan una serie de procesos
capaces de neutralizarlo y eliminarlo
La combinacin del anticuerpo con el
antgeno desencadena una serie de procesos
capaces de neutralizar y eliminar a una
sustancia extraa

ANTGENOS
Toda sustancia que, introducida en un organismo que no la
posea, provoca en l la formacin de un anticuerpo
especfico con el cual puede combinarse de forma electiva
Pueden ser cuerpos figurados vivos o muertos (clulas de los
tejidos, elementos de una clula, microbios) o sus productos
de elaboracin (secreciones celulares, toxinas), o compuestos
orgnicos (albminas, nuclenas)
Antgeno eritrocitario. Antgeno presente en los glbulos
rojos y tambin en los leucocitos (ver leucocito) y en
diferentes tejidos del organismo
Existen ms de 130 antgenos eritrocitarios pero en la prctica
slo dos son importantes: el antgeno eritrocitario A y el
antgeno eritrocitario B, cuya presencia o ausencia caracteriza
a los grupos sanguneos y regula las incompatibilidades
sangunea e hstica y el denominado factor Rh
Antgenos eritrocitarios
GEN ENZIMA AZCAR

A 1,3N-acetilgalactosaminiltransferasa N-acetilgalactosamina
B 1,3 Galactosiltransferasa Galactosa
H 1,2 Fucosiltransferasa Fucosa
ANTGENOS ABH
Fenotipo Bombay
Productos codificados por los genes ABO y H
Glucosa
D-Galactosa
N-acetil-glucosamina
NHCOH3
1
2
3
4
6
1
D-Galactosa
6
CADENA PRECURSORA
TIPO 1
1
enlace alfa 1-3
2 3
4
5
Glucosa
D-Galactosa
N-acetil-glucosamina
D-Galactosa
NHCOH3
1
2
3
4
5
6
6
1
2 3
4
5
CADENA PRECURSORA
TIPO 2
enlace 1-4
NHCOH3
1
2
3
4
6
1
6
1
Gal
Gal
NAcGlc
Glu
SUSTANCIA H
TIPO 1
1
Fuc
enlace alfa 1-3
1,2 Fucosiltransferasa
NHCOH3
1
2
3
4
6
1
6
1
Gal
Gal
NAcGlc
Glu
ANTGENO A
(H 1)
1
Fuc
enlace alfa 1-3
NAcGal
1,3 N-acetilgalactosaminiltransferasa
NHCOH3
1
2
3
4
6
1
6
1
Gal
Gal
NAcGlc
Glu
ANTGENO B
(H 1)
1
Fuc
enlace alfa 1-3
l
Gal
1,3 Galactosiltransferasa
NHCOH3
1
2
3
4
5
6
6
1
2 3
4
5
SUSTANCIA H
TIPO 2
enlace alfa 1-4
Fuc
Gal
NAcGlc
Gal
Glu
1,2 Fucosiltransferasa
NHCOH3
1
2
3
4
5
6
6
1
2 3
4
5
ANTGENO A
(H 2)
enlace alfa 1-4
Fuc
Gal
NAcGlc
Gal
Glu
NAcGal
1,3 N-acetilgalactosaminiltransferasa
NHCOH3
1
2
3
4
5
6
6
1
2 3
4
5
ANTGENO B
(H 2)
enlace alfa 1-4
Fuc
Gal
NAcGlc
Gal
Glu
l
Gal
1,3 Galactosiltransferasa
FENOTIPO A1 A2
FRECUENCIA 80% 20%
SUST PRECURSORA H1 H1
(tipo II) H2 H2
H3
H4
SITIOS ANTIGNICOS 850,000 240,000
ANTICUERPOS (SUERO) ANTI-B ANTI-B
ANTI-A1(3 %)
GRUPO O POR MUTACIN
Se han aislado los ADN de las enzimas responsables de
la biosntesis de los antgenos sanguneos.
Dos aminocidos (leucina 266 y glicina 268) hacen a la
enzima A capaz de reconocer la N-acetilgalactosamina.
Dos aminocidos (metionina 266 y alanina 268) hacen a
la enzima capaz de reconocer la galactosa.
Los ADN de las clulas O por mutaciones carecen de la
sntesis de una enzima.
Los grupos O pudieron tener esa prdida por mutacin
de los grupos A y/o B.
Productos codificados por los genes ABO y H
LEWIS
Los grupos sanguneos Lewis a, b, c, d y x, y
derivan respectivamente de las cadenas 1 y 2, por
adicin de una fucosa, o de un cido silico en los
derivados sialilados
Su presencia depende de la naturaleza de la cadena
oligosacrida bsica, de las enzimas presentes en
una clula dada y de otros parmetros genticos del
sujeto
La cadena tipo 1 est presente en mayor parte en los
epitelios secretores
La cadena tipo 2 est presente en los glbulos rojos
y en otras clulas sanguneas y epiteliales
enzima Le
Le(a)
SISTEMA ABO
Y LEWIS
tipo 1
Le(c)
enzima Le
SLe(a)
antgeno H
Le(d)
antgeno A
antgeno B
Le(b)
enzima B
enzima H1
enzima HE
Gen Se
tipo 2
SISTEMA ABO
Y LEWIS
enzima X
enzima ST
enzima Hll
enzima B
enzima X
enzima X
antgeno B
SLe(x)
Le(y)
enzima A
antgeno A
antgeno A2
antgeno A1
enzima A1
GENES SE Y se
75% Excretan antgenos A, B y H en leche, saliva, jugo
gstrico, esperma, etc.. Se les dice Secretores
La secrecin est relacionada con la presencia de un Se,
en secretores y se, en los no secretores
El gen Se dirige la produccin de una fucosiltransferasa
especfica de la cadena tipo 1. Mientras que otro gen H
proporciona la enzima especfica de la cadena de tipo 2
El estado de secrecin y no secrecin influye en la
distribucin de los grupos Lewis
Por ejemplo, los antgenos Le(a) o Le(c) estn en los no
secretores (25 al 30%). Los antgenos Le(b) o Le(d) estn
en los secretores (70 al 75%)
ANTICUERPOS
Los anticuerpos son glucoprotenas secretadas por
las clulas plasmticas, que reciben colectivamente
el nombre de inmunoglobulinas (abreviadamente Ig)
La especificidad de estas protenas ante los
diferentes antgenos es semejante a la de la enzima
con respecto a su sustrato
Los anticuerpos circulan por la sangre y penetran en
los fluidos corporales donde se unen
especficamente al antgeno que provoc su
formacin
ESTRUCTURA
Las inmunoglobulinas son molculas que tienen forma de Y
constituida por cuatro cadenas polipeptdicas iguales dos a
dos. Dos cadenas pesadas o cadenas H (del ingls heavy) y
dos cadenas ligeras o cadenas L (light) de menor peso
molecular. Las uniones entre las cadenas se hacen mediante
puentes disulfuros (-S-S-)
Las zonas amino terminales de las cadenas H y L constituyen
las regiones variables cuya secuencia de aminocidos es
especfica de cada anticuerpo (por ellas se unen a los
antgenos)
La porcin carboxilo terminales corresponden a las regiones
constantes, que varan muy poco dentro de cada tipo de
inmunoglobulina
Alotipos de las inmunoglobulinas (Grupos GM)
ANTICUERPOS
TIPOS
% EN
SUERO
FUNCIN LOCALIZACIN
Ig G 80
Pueden atravesar la placenta y pasar al
embrin. Facilita la fagocitosis.
Sangre y leche
materna
Ig M 5 - 10
Son los primeros que se producen ante
la presencia de antgenos.
Facilita la fagocitosis y la lisis celular.
Suero y membrana
de los linfocitos B
Ig A 10 - 15
Protege las cavidades externas del
cuerpo.
Saliva, lgrimas,
mucus respiratorio,
leche, etc.
Ig D
Su funcin es poco conocida. Se cree
que estimula a los linfocitos B a
producir anticuerpo.
Membranas de los
linfocitos B
Ig E < 1
Interviene en las infecciones
parasitarias y en fenmenos alrgicos.
Piel
Reacciones antgeno-anticuerpo
Tanto la respuesta humoral como la celular suponen el
reconocimiento de determinadas estructuras qumicas en la
superficie de macromolculas extraas, los antgenos. Las zonas
del antgeno que se unen especficamente con el anticuerpo o con
el receptor de un linfocito, se denominan determinantes
antignicos
Cada antgeno puede presentar varios determinantes antignicos
diferentes que estimulan la produccin de anticuerpos y la repuesta
de los linfocitos T. Estas estructuras qumicas, los determinantes
antignicos, son los responsables de la especificidad de la respuesta
inmunitaria
Cuando se ponen en contacto un antgeno con el anticuerpo
especfico, reaccionan unindose mediante un enlace no covalente
y se desencadenan una serie de procesos capaces de neutralizarlo y
eliminarlo
La combinacin del anticuerpo con el antgeno desencadena una
serie de procesos capaces de neutralizar y eliminar a una sustancia
extraa
Reacciones ms importantes
Precipitacin
Aglutinacin
Neutralizacin
Opsonizacin
Precipitacin
Al unirse antgenos y anticuerpos solubles forman agregados
insolubles que precipitan, lo que inactiva a los antgenos.
Aglutinacin
El anticuerpo se une a antgenos situados en la superficie de una clula.
Como los anticuerpos tienen dos puntos de unin, los microorganismos
forman agregados y ya no pueden infectar otras las clulas
La hemoaglutinacin se produce entre los anticuerpos del plasma
sanguneo y los antgenos de los glbulos rojos de la sangre de diferente
grupo sanguneo. Esta prueba es fundamental en la determinacin de los
grupos sanguneos ABO
Neutralizacin
La unin del anticuerpo bloquea la accin de los antgenos
contra la clula. As, los antgenos no se pueden unir a las
clulas y matarlas
Opsonizacin
Producida por unos anticuerpos especiales (opsoninas), que
se fijan sobre la superficie del antgeno facilitando la accin
de clulas fagocitaras y clulas asesinas naturales (NK)
DETERMINACIONES
TRANSFUSIONALES
Los mdicos necesitan conocer el tipo de sangre de una
persona cuando se van a someter a una transfusin de sangre
o a un trasplante, debido a que no todos los tipos de sangre
son compatibles entre s.
Por ejemplo:
Si una persona tiene sangre tipo A, nicamente puede recibir
sangre tipo A y tipo O.
Si una persona tiene sangre tipo B, nicamente puede recibir
sangre tipo B y tipo O.
Si una persona tiene sangre tipo AB, nicamente puede
recibir sangre tipo A, B, AB y O.
Si una persona tiene sangre tipo O, nicamente puede recibir
sangre tipo O.
La sangre tipo O se le puede dar a alguien con cualquier tipo
de sangre, razn por la cual este tipo de personas son
llamadas donantes universales.


GRUPO SANGUNEO AB0
La sangre a menudo se clasifica de acuerdo con el
sistema ABO
Este mtodo separa los tipos de sangre en cuatro
categoras:
Tipo A
Tipo B
Tipo AB
Tipo O
El tipo de sangre (o grupo sanguneo) de una persona
tambin depende de lo que ha heredado de sus
padres.


Donantes: 6 346 Grupo
sanguneo
%
3 096 O 48,79
2 231 A 35,15
774 B 12,20
227 AB 3,58
14 A2B 0,22
2 A2BHw 0,03
1 Ael 0,01
1 Aint 0,01
DETERMINACIN DIRECTA
La sangre se extrae de una vena
El sitio de puncin se limpia con un antisptico
Se coloca una banda elstica
Se introduce una aguja en la vena y se recoge la sangre
Se retira la banda para restablecer la circulacin
La sangre se puede recoger en una pipeta (tubo pequeo de
vidrio), en una lmina portaobjetos, en una tirilla de examen o
en un recipiente pequeo
La sangre de la persona se mezcla con anticuerpos contra
sangre tipo A y tipo B, y la muestra se revisa para ver si los
glbulos sanguneos se pegan o aglutinan.
Si dichos glbulos se aglutinan, eso significa que la sangre
reaccion con uno de los anticuerpos

Valores normales
Si los glbulos sanguneos se pegan o aglutinan al
mezclarse con:
Suero anti-A, la persona posee sangre tipo A.
Suero anti-B, la persona posee sangre tipo B.
Sueros anti-A y anti-B, entonces la persona posee
sangre tipo AB.
Si los glbulos sanguneos no se pegan o aglutinan
cuando se agrega suero anti-A y anti-B, la persona
tiene sangre tipo O.
DETERMINACIN INVERSA
Si la sangre se aglutina cuando se agregan clulas B
a la muestra, la persona tiene sangre tipo A.
Si la sangre se aglutina cuando se agregan clulas A
a la muestra, la persona tiene sangre tipo B.
Si la sangre se aglutina cuando se agregan ambos
tipos de clulas a la muestra, la persona tiene sangre
tipo O.
La falta de aglutinacin de los glbulos sanguneos
cuando la muestra se mezcla con ambos tipos de
sangre indica que la sangre es tipo AB.


Tipificacin del Rh
Si los glbulos sanguneos se pegan o
aglutinan al mezclarlos con suero anti-Rh
(anti-D), el tipo de sangre es Rh positivo

Si la sangre no se coagula al mezclarse con
suero anti-Rh, el tipo de sangre es Rh
negativo


IMPORTANCIA
Si una persona es Rh(+), puede recibir sangre Rh(+) o
Rh(-), pero si es Rh(-), nicamente puede recibir
sangre Rh(-)

La determinacin del grupo sanguneo es
especialmente importante durante el embarazo.
Si la madre posee sangre Rh negativa, entonces el
padre tambin debe ser evaluado

Si el padre tiene sangre Rh positiva, entonces la
madre necesita recibir un tratamiento para ayudar a
prevenir el desarrollo de sustancias que le pueden
hacer dao al feto
R
D
O- O+ B- B+ A- A+ AB- AB+
AB+
X X X X X X X X
AB-
X X X X
A+
X X X X
A-
X X
B+
X X X X
B-
X X
O+
X X
O-
X
CONSIDERACIONES
Muchos antgenos menores no se detectan
rutinariamente durante la determinacin del grupo
sanguneo
Si no se detectan, la persona puede experimentar
una reaccin al recibir ciertos tipos de sangre
Un proceso llamado pruebas cruzadas, seguido de
una prueba de Coombs, puede ayudar a detectar
estos antgenos menores
Adems se puede estudiar el factor D
U
o Rh(+) dbil.

Hemlisis

La hemlisis (eritrocateresis) es el fenmeno de la
desintegracin de los eritrocitos (glbulos rojos o
hemates)
En determinadas situaciones patolgicas hay un
aumento de la destruccin de los eritrocitos intra o
extravascular, como consecuencia de:
unin antgeno-anticuerpo (reaccin transfusional,),
de lesiones mecnicas (como en el fallo de las
prtesis valvular cardiaca)
trastornos osmticos
trastornos enzimticos
trastornos txicos
alteraciones congnitas de los eritrocitos (en
anomalas de la hemoglobina o en infecciones)

Hemoaglutinacin directa

Mientras que el entrecruzamiento de los antgenos proteicos
multivalentes con el anticuerpo produce una precipitacin, la
interrelacin entre clulas o partculas de gran tamao con los
anticuerpos dirigidos contra los antgenos de superficie
conducen a una aglutinacin
Dado que la mayora de las clulas poseen cargas elctricas,
se requiere una cantidad razonable de anticuerpos entre dos
clulas antes de que se supere la repulsin mutua con un
reactivo antiglobulina
La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos
rojos se puede detectar por la hemoaglutinacin producida
cuando se aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos
antgenos
Test directo de aglutinacin
Eritrocitos aglutinados
Test indirecto de Coombs
Anticuerpos
Eritrocitos
Antiglobulina
inconcluyente
COMPATIBLE centrifugar
resuspender
1 GOTA Control Coombs
INCOMPATIBLE
COMPATIBLE
centrifugar
resuspender
2 GOTAS anti IgG-C3d
lavado
2 GOTAS HR
5 % EN SS
2 GOTAS HR
5 % EN SS
lavado
2 GOTAS anti D
centrifugar
resuspender
INCOMPATIBLE
15 minutos 37 C
2-3 GOTAS SR
Hemantgenos
I, II y III
1 GOTA
ALBMINA
2 GOTAS
INCOMPATIBLE
centrifugar
resuspender
Tamb. 30 minutos
centrifugar
resuspender
INCOMPATIBLE
2 GOTAS
ALBMINA
37 C 15 minutos
COOMBS


Test de
Commbs

Determinacin
de Du

Determinacin
de anticuerpos
irregulares.
Test de
Coombs
Indirecto
2 GOTAS SR
centrifugar
resuspender
INCOMPATIBLE
salino inmediato
centrifugar
resuspender
INCOMPATIBLE
albmina inmediata
2 GOTAS albmina
37 C 30 minutos
albmina incubada
INCOMPATIBLE
lavado
2 GOTAS anti IgG-C3d
centrifugar
resuspender
centrifugar
resuspender
COMPATIBLE
INCOMPATIBLE
1 GOTA HD
1 GOTA Control Coombs
centrifugar
resuspender
COMPATIBLE
inconcluyente
PRUEBA CRUZADA
MAYOR EN TUBO