Determinacin de la CE50 a travs de un bioensayo de toxicidad en artemia salina.

Gonzlez A. Adriana, Bazn S. Tania Berenice, Ortega G. Cynthia, Torres C. Gerardo Antonio.
Laboratorio L-202 Farmacologa, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM.
Av. Guelatao 66. Ejercito de Oriente, 09230, Mxico DF.
Resumen
Para determinar el bioensayo de toxicidad de la CE
50
en artemias salinas se utilizaron 10 tubos
que contenan 5 artemias para cada uno de los reactivos: Dicromato de Potasio 1 % y Cloruro de
Mercurio 1 %; en concentraciones de: 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 1.8 y 2.0 mL
respectivamente, evitando colocar la menor cantidad de agua posteriormente se dejo transcurrir 2
hr y se observaron las artemias vivas, contndose as solo aquellas que presentaron movimiento.
Abstract
To determine the toxicity bioassay EC50 10 tubes brine shrimp Artemia containing 5 for each of the
reagents were used: 1% Potassium dichromate and mercuric chloride 1%; at concentrations: 0.2,
0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6 1.8 and 2.0 mL, respectively, avoiding placing smaller quantities of
water then allowed to proceed 2 h and live Artemia were observed, and counting only those
showed movement.
Introduccin
Gracias al desarrollo de mtodos de evaluacin ecotoxicolgica basadas en las metodologas
recomendadas por la Agencia de Proteccin Ambiental.
El uso de bioensayos para la evaluacin de toxicidad de sustancias liberadas al medio a travs de
efluentes, ha llevado a la utilizacin de biomonitores propios de los ambientes evaluados.
Los estudios de toxicidad constituyen hoy da una parte muy importante dentro del desarrollo de
un nuevo frmaco y se extienden prcticamente a lo largo de todo el mismo. El objetivo de los
mismos es evaluar el riesgo o peligro potencial que un agente qumico o fsico puede ocasionar
sobre la salud humana cuando es objeto de exposiciones agudas o crnicas".
Y no se limitan slo a los frmacos sino que la mayor parte de las sustancias qumicas industriales
(pesticidas, agroqumicos, cosmticos, plsticos, etc.) son objeto de estudios de toxicidad iguales
o ms complejos que los realizados con los nuevos frmacos.
Marco terico
Ciencia que estudia los efectos de las sustancias txicas sobre los organismos combinando las
tcnicas ecolgicas y tcnicas.
La toxicidad directa sobre los organismos
Las alteraciones del medio ambiente en el cual viven los organismos
Un bioensayo de toxicidad es un bioensayo de toxicidad se puede definir como un experimento en el
cual, un tejido vivo, un organismo o un grupo de ellos, es empleado para determinar y evaluar el potencial
txico de una sustancia cualquiera, de actividad desconocida.
Estos ensayos involucran la exposicin de organismos a una serie de diferentes concentraciones de la
sustancia y as determinar la respuesta del organismo.
Existen dos tipos de toxicidad que se pueden determinar:
Toxicidad aguda
Toxicidad crnica
Toxicidad Aguda: Permite conocer la capacidad de una sustancia para producir un efecto adverso tras
una sola dosis y puede variar desde una irritacin hasta la muerte y se evidencia con la cuantificacin de la
DL
50
(dosis letal media), con la cual se expresa la muerte de un 50% de los individuos de una poblacin y
se expresa en mg de la sustancia por Kg de masa corporal. Es una prueba rpida y tarde entre 48 y 96
horas.

Toxicidad Crnica: Determina la mxima dosis sin efectos nocivos tales como bioacumulacin, depuracin
del txico del cuerpo o del organismo, bioestimulacin o crecimiento corporal. Todo esto como resultado de
la exposicin repetitiva y prolongada de una sustancia toxica.

Los principales organismos que se seleccionan para la ejecucin de bioensayos deben de tener ciertas
caractersticas:
Sensibilidad a la sustancia analizada
Pertenecer al ecosistema acutico que se evala
Distribucin amplia y disponibilidad en cantidades suficientes
Debe de ser econmico, recreativo y ecolgico
Fcil de cultivar en un laboratorio
Compatibilidad con las tcnicas de bioensayos
Los organismos comnmente utilizados en los bioensayos de toxicidad son:
Bacterias
Hongos
Algas
Plantas
Invertebrados: Artemia salina y Cladoceros o pulgas de agua
La artemia salina es un crustceo que vive en los ambientes salinos, soportando varios rangos de
concentracin salina.
La concentracin de sal en el medio donde crecen afecta la tasa de crecimiento. Las larvas de Artemia
salina (crustceo) muy sensibles a un amplio rango de compuestos qumicos con actividad biolgica.
Es reciente su empleo en el campo de la ecotoxicologa, el cual incluye investigaciones de la
toxicidad en mezclas de qumicos y muestras ambientales, evaluacin de riesgos, screening
agudo de sustancias qumicas, productos alimenticios y farmacuticos.
La dosis letal 50 es la dosis que mata al 50% de los animales empleados en el bioensayo y se
determina a partir de la curva dosis-respuesta o mortalidad.
Se calcula por lo general de manera experimental por la administracin de un agente qumico a
ratones o ratas en varias dosis.
La CL50 corresponde a la concentracin de un xenobitico que causa la muerte al 50 % de la
poblacin experimental al cabo de un tiempo determinado, (48-96h).
CE
50
; Concentracin efectiva media corresponde a la concentracin que produce el efecto
deseado 50% de la poblacin.

Objetivo
Realizar el estudio dosis respuesta cuantal a partir de la administracin de Dicromato de Potasio y
Cloruro de Mercurio en artemia salina; para la determinacin de DL50 y Potencia relativa.




0
20
40
60
80
100
120
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
%
E

log Co
Resultados
Tabla 1. Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con Cloruro de Mercurio 1%
Molaridad= (1g/271.5 HgCl2)/0.1 L
Molaridad = 0.0368 M

Sustancia: Cloruro de Mercurio 1% (PM 271.5 HgCl2)
Dosis
administrada
(mL)
Volumen
total (mL)
concentracin
(M)
Concentracin
( mg/mL)
Numero de
artemias
utilizadas (n)
Numero de artemias
que murieron(r) p=r/n %E=p*100
0.2 0.65 0.01132
3.0734
5 1 0.2 20
0.4 0.85 0.01732
4.7023
5 1 0.2 20
0.6 1 0.02208
5.9947
5 2 0.4 40
0.8 1.2 0.02453
6.6599
5 2 0.4 40
1 1.3 0.02831
7.6862
5 3 0.6 60
1.2 1.8 0.02453
6.6599
5 3 0.6 60
1.4 1.7 0.0303
8.2265
5 4 0.8 80
1.6 2 0.02944
7.9930
5 4 0.8 80
1.8 2.4 0.0276
7.4934
5 5 1 100
2 1.8 0.04089
11.1016
5 5 1 100

Grafica 1. Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con Cloruro de Mercurio 1%






log Co.
(M)
%E
-1.9462
20
-1.7615
20
-1.656
40
-1.6103
40
-1.5481
60
-1.6103
60
-1.5186
80
-1.5311
80
-1.5591
100
-1.3883
100
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
U
n
i
d
a
d

P
r
o
b
i
t


log

Grafica 2. Analisis Probit en artemia salina con Cloruro de Mercurio 1%.







Tabla 2. Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con Dicromato de Potasio 1%
Molaridad= (1g/294.21 K
2
Cr
2
O
7
)/0.1 L
Molaridad = 0.0340 M

Sustancia: Dicromato de Potasio 1% (PM 294.21 K
2
Cr
2
O
7
)
Dosis
administrada
(mL)
Volumen
total (mL)
concentracin
(M)
Concentracin
(mg/mL)
Numero de artemias
utilizadas (n)
Numero de artemias
que murieron(r)
p=r/n %E=p*100
0.2 0.8 0.0085
2.5008
5 2 0.4 40
0.4 0.8 0.017
5.0016
5 2 0.4 40
0.6 0.9 0.0227
6.6786
5 3 0.6 60
0.8 1.1 0.0247
7.2670
5 3 0.6 60
1 1.4 0.0243
7.1493
5 4 0.8 80
1.2 1.4 0.0291
8.5615
5 4 0.8 80
1.4 2 0.0238
7.0022
5 4 0.8 80
1.6 1.9 0.0286
8.4144
5 5 1 100
1.8 2.2 0.0278
8.1790
5 5 1 100
2 2.2 0.0309
9.0910
5 5 1 100



log Unidad
Probit
-1.9462 4.16
-1.7615 4.16
-1.656 4.75
-1.6103 4.75
-1.5481 5.25
-1.6103 5.25
-1.5186 5.84
-1.5311 5.84
-1.5591 8.09
-1.3883 8.09
50= -1.7023
DL 50= 0.0198 M
DL50= 5.3757 mg/mL
Ecuacin de la recta
Y= mx + b
Y=6.9189 x+ 16.7778
Dosis letal 50
0
20
40
60
80
100
120
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
%
E

log Co
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
-2.5 -2 -1.5 -1 -0.5 0
U
n
i
d
a
d

P
r
o
b
i
t


log Co
Grafica 3. Curva dosis-respuesta cuantal en artemias salinas con Dicromato de Potasio 1%


Grafica 4. Analisis Probit en artemia salina con Dicromato de Potasio1%.










log Co %E
-2.0706 40
-1.7696 40
-1.644 60
-1.6073 60
-1.6144 80
-1.5361 80
-1.6234 80
-1.5436 100
-1.556 100
-1.51 100
log Co
Unidad
Probit
-2.0706 4.75
-1.7696 4.75
-1.644 5.25
-1.6073 5.25
-1.6144 5.84
-1.5361 5.84
-1.6234 5.84
-1.5436 8.09
-1.556 8.09
-1.51 8.09
50= -1.9071
DL 50= 0.0124 M
DL50= 3.6482 mg/mL
Pr= 0.6786
Dosis letal 50
Ecuacin de la recta
Y= mx + b
Y=5.5814 x+ 15.6444


Analisis de Resultados
En los resultados donde se ocup Cloruro de Mercurio al 1% pudimos observar que a mayor concentracin
esta afecta a mayor parte de la poblacin ya que como podemos observar en los tubos donde se
encontraba una concentracin mayor como en el de 2 ml pudimos observar que todas las artemias del
tubo no sobrevivieron y en cambio en los tubos donde la concentracin es mnima solo se afect al 20%
de la poblacin. Se pudo determinar que la DL50 para el Cloruro de Mercurio al 1% es de 5.3757 mg/ml
con lo cual sabemos que esta es la dosis mximas con la que se puede causar la muerte.
Con los resultados de Dicromato de Potasio al 1% observamos cmo afecta ms a la poblacin en
concentraciones ms bajas desde una concentracin de 8.4144 mg/ml se ve afectada el 100% de la
poblacin. En la DL50 obtuvimos que es de 3.6482 mg/ml
Conclusin
Con estos resultados podemos concluir que el Dicromato de potasio al 1% afecta ms ya que en la dosis
mnima ocupada se da a mayor cantidad de poblacin que con el Cloruro de Mercurio al 1% por lo tanto
la dosis letal DL50 es menor en el Dicromato de Potasio que en Cloruro de Mercurio, esta tiene un intervalo
ms grande. La Potencia Relativa es de 0.6786 efectividad de un factor aplicado a una poblacin.




Referencias
Daz M, Bustos M, Espinoza A. Pruebas de toxicidad acutica: fundamentos y mtodos.
Bogot: Universidad Nacional de Colombia; 2004.
Mendoza N. Farmacologa Mdica. Mxico: Editorial Medica Panamericana; 2008.
http://www.cm.colpos.mx/moodle/file.php/13/BIOENSAYO/EL_BIOENSAYO_EN_ENTOMO
LOGIA.pdf
Katzung, Farmacologa bsica y clnica, 10 Edicin, Editorial
Manual Moderno, 2007