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Art 17 PDF
Art 17 PDF
era dominante sobre lexA (selvagem) e que a clula apresentava caracterstica de lexA
como, por
exemplo, a sensibilidade aos efeitos das radiaes X.
A dominncia de um gene mutante freqentemente indica que ele pode estar relacionado com a
regulao gnica, como ocorre, por exemplo, com alguns mutantes do gene lacI, do operon lactose em E. coli.
Por analogia, imaginou-se que o lexA poderia codificar uma protena repressora que regulasse certas
enzimas envolvidas no reparo do DNA.
Os mutantes lexA
podiam ser sensveis a UV, porque eles fariam molculas repressoras que no
seriam clivadas e manteriam os genes responsveis pelo reparo, totalmente bloqueados.
Os trabalhos subseqentes mostraram que as enzimas de reparo e do sistema SOS so controladas ao
mesmo tempo.
Atravs de tcnicas do DNA recombinante, foi possvel se isolar o gene lexA, inser-lo num
plasmdeo, clon-lo e identificar uma protena feita por ele que tinha um PM: 24.000 dltons.
Ela foi isolada e verificaram que essa protena repressora podia ser clivada pela protease do gene recA.
Mark Ptashne & Roger Brent demonstraram que o gene lexA reprimido pela prpria protena LexA,
que ele fabrica.
Se o lexA um gene repressor, quais genes ele reprime alm dos seus?
Verificaram que lexA atua reprimindo um grupo de genes envolvidos no reparo por exciso, reparo
ps-replicao e na prpria resposta SOS.
Quando as clulas so expostas a UV, ocorre a formao dos dmeros de pirimidinas, que no podendo
ser removidos por algumas poucas molculas presentes no estado no induzido, vo permanecer perto da
forquilha de replicao e vo ocasionar o aparecimento de fitas de DNA com gaps.
Uma protena RecA j presente na clula se liga ao fio de DNA fita simples oposto ao gap, e a
presena do DNA fita simples estimula a atividade de clivagem das protenas RecA, desencadeando a
resposta SOS.
A protena RecA cliva os repressores LexA, liberando outros genes que estavam reprimidos. Grande
quantidade de protena RecA so sintetizadas e passa a se ligar prximas a regio do gap, inclusive ocupando
regies adjacentes de DNA fita dupla.
Sob estas condies, a protena LexA clivada to logo ela sintetizada e os genes recA, uvrA, uvrB,
uvrC ficam liberados para promoverem os reparos: por exciso e ps-replicao.
Enquanto houver DNA fita simples na regio do gap, a atividade protease da RecA mantida e vai
clivando continuadamente os repressores formados pelo gene lexA.
Aps ser executado o reparo ps-replicao, a regio do gap de fita simples restaurada e agora,
nessas condies com todo o DNA na forma de fita dupla, a protena RecA diminui sua atividade protease.
A protena LexA, recm-sintetizada, no mais clivada e volta a funcionar como repressora, e a clula
retorna ao seu estado normal sem resposta SOS induzida.
Claramente, a resposta SOS promove um eficiente reparo do DNA, aumentando a eficincia das
enzimas do reparo por exciso e promovendo condies para o reparo ps-replicao.
No reparo por exciso, as enzimas codificadas pelos genes uvrA, uvrB e uvrC atuam juntas para
reconhecer as bases erradas e iniciam o processo de exciso.
Visto que as clulas podem sobreviver aps a ocorrncia de milhares de leses, necessrio que um
grande nmero dessas molculas sejam sintetizadas para atuar no processo.
Em uma clula normal, sem estar no estado induzido, ocorrem de 10-20 molculas dessas enzimas.
A protena RecA tem duas diferentes funes nesses mecanismos de reparos induzidos: atua como
protease clivando as protenas repressoras LexA, e atua como enzima de recombinao que manipula os fios
de DNA.
Na recombinao, tal como ocorre no reparo ps-replicao, a sua primeira funo a de promover o
pareamento homlogo entre 2 molculas de DNA, isto , posicionar corretamente alinhando regies de
seqncias de bases complementares, para que se efetue uma mudana de fios.
Uma grande quantidade da protena RecA, 1 molcula para cada 5 pares de bases necessria para
promover o pareamento homlogo, e ser suficiente para dar ao fio com o gap uma estrutura fibrosa de
suporte, que aproxima as molculas de DNA, pondo-as em contacto e movendo-se para que seja feito um
contacto complementar.
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O movimento relativo no estilo caterpilhar, o DNA com gap se elonga e se contrai com a RecA
ligada a ele, que depois liberada pelo ATP.
Tendo colocado as molculas de DNA no alinhamento numa regio particular, a RecA inicia a efetiva
mudana dos fios.
A recA efetua uma mudana recproca nas duas regies de dupla fita do DNA e o resultado so 2
heteroduplex, nos quais os 4 fios apresentam segmentos com as informaes corretas. (Figura 3)
Figura 3
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MUTAGNICOS NA NATUREZA E SUA DETECO.
importante identificar mutagnicos aos quais o homem se expe por duas razes:
1. As mudanas genticas ocorridas ao acaso so mais provveis de serem danosas (malficas), do que
benficas para as prximas geraes.
2. Mesmo que as mutaes ocorram nas clulas somticas (linhagens no germinativas) e no passem
para as geraes seguintes, elas podem eventualmente afetar o organismo portador.
Agora j se sabe como h muito se suspeitou, que o cncer freqentemente resultado de mutaes
nas clulas somticas que levam a um crescimento celular desordenado. E um nmero de alteraes
associadas com a idade, como a aterosclerose, pode ser o reflexo do acmulo de erros de DNA que no foram
reparados.
De fato, tem sido sugerido que o processo de envelhecimento global possa ser o reflexo de danos
irreversveis da molcula de DNA em clulas somticas.
A clara demonstrao que a maioria das substncias mutagnicas so carcinognicas (e vice-versa),
significa que h uma maneira de se poder determinar se a substncia provavelmente carcinognica.
Ns determinamos se ela mutagnica em bactrias, as quais apresentam um tempo curto entre
geraes e que permite que o teste possa ser feito em um ou dois dias (Figura 12.2).
Figura 12-2
Small additions and deletions are caused by slippage at the replication growing point.
Este mtodo, agora chamado de Teste de Ames, foi desenvolvido e refinado por Bruce Ames, o qual
usou vrias artimanhas para faz-lo muito sensvel.
A taxa de REVERSO ao tipo selvagem (prototrfico) de uma mutao que causa um crescimento
anormal, tal como o requerimento (auxotrfica) para o aminocido histidina, quantificada. Mesmo entre
aquelas poucas clulas que crescem em meio sem histidina, pode-se desenvolver colnias que podem ser
quantificadas (revertentes espontneos) (Figura 12.12).
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O teste de bactria tem revelado que a mutao faz com que a parede celular fique defeituosa e altere a
sua permeabilidade, permitindo, assim, que a maioria dos compostos a serem testados passem por ela e atuem
sobre o material gentico.
Elas tambm carregam um plasmdeo que expressam uma eficiente variante dos genes umuC e umuD,
os quais so essencialmente mutagnicos.
Uma condio final para carcinognios serem ativos como mutagnicos nos testes com bactrias,
revelou um princpio importante da mutagnese em organismos superiores.
A maioria dos compostos carginognicos, particularmente os produtos naturais, eles no so
mutagnicos se eles so aplicados diretamente no crescimento de bactrias. Primeiro, eles precisam ser
ATIVADOS por incubao com um extrato de fgado de mamfero, um processo que ocorre naturalmente
quando substncias estranhas so metabolizadas no fgado.
A ativao converte os carcinognios para derivados eletroflicos, que podem reagir diretamente com
as bases do DNA.
Quais so os mais importantes mutagnicos revelados pelos testes como provveis carcinognicos?
Est provado, por meio de testes epidemiolgicos, que a fumaa do tabaco um dos mais importantes
carcingenos que os homens utilizam, e a fumaa do tabaco altamente mutagnica para o teste de Ames.
O perigo potencial de certos resduos qumicos industriais serem mutagnicos, como o dicloro etileno
bem conhecido, e alguns outros contaminantes ambientais podem ser significantes carcinognios.
Mas a maior constatao recente, que ns estamos expostos continuadamente aos mutagnicos e aos
carcingenos que entram via alimentao; que no so necessariamente encontrados em comidas exticas,
mas nos mais simples vegetais.
As plantas recebem substncias qumicas, como os defensivos usados contra as pragas, principalmente
insetos, e essas substncias, aps serem metabolizadas no fgado, se constituem em potentes agentes
mutagnicos.
Os reais mutagnicos freqentemente so OXIDANTES, tais como aqueles radicais oxigenados, que
reagem como as bases do DNA.
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Uma outra fonte de mutagnicos que entram via alimentao e so considerados como potenciais
carcingenos so os lipdios, que so metabolizados e produzem oxidantes reativos no fgado.
Uma nota otimista, entretanto, que existem ANTIOXIDANTES naturais como o glutation, que pode
minimizar alguns desses efeitos produzidos pelos alimentos.
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INFORMAES ADICIONAIS SOBRE AS AULAS TERICAS.
DNA MICROSATELLITES: Agents of Evolution
Scientific American, 1999, 280(1):72-77.
slide 1.
CDIGO GENTICO HUMANO: 3 bilhes de bases de
DNA.
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Apenas 10-15% esto relacionadas com PROTENAS DE
MANUTENO,
RGULAO GNICA E EMPACOTAMENTO DOS
CROMOSSOMOS.
E O RESTO? "SUJEIRA EVOLUTIVA" ?
slide 2.
"SUJEIRA EVOLUTIVA" - seqncias altamente
repetitivas
4- at 8 bases: MICROSSATLITES
15 ou mais bases: MINISSATLITES
HOMEM: 100.000 microssatlites
slide 3
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Caractersticas dos microssatlites
- altamente repetitivo
- alteraes de tamanho - DELEO E INSERO
- alta taxa de mutao: 10 mil X > que a taxa de mutao do
gene da anemia falciforme.
slide 4
Hemophilus influenzae - LINHAGEM DO TIPO b -
RESPONSVEL PELA MENINGITE BACTERIANA
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membrana externa: LIPOSSACARDEOS (LPS) -
CONTENDO
COLINA FOSTATADA - que permite a bactria se aderir
em clulas do NARIZ E GARGANTA - sem provocar
sintomas.
Nota: 1/750 crianas menores de 5 anos tinham meningite do
tipo B.
slide 5.
A MEMBRANA EXTERNA (LPS) CODIFICADA POR
TRS GENES - QUE APRESENTAM
MICROSSATLITES DE 4 BASES: CAAT.
Chop + alto nmero de repeties
Chop - pouco nmero de repeties
slide 6.
Chop + ==.> EFICIENTE PARA CONTAMINAR O
HOMEM (NARIZ - GARGANTA)
(TIPO MAIS FREQENTE NO
HOMEM)
Chop - == > MAIS RESISTENTE AOS ATAQUES
IMUNOLGICOS - NO SE ADERE
AS CLULAS.
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slide 7
INFECO VIRAL - PROCESSO INFLAMATRIO
A BACTRIA IR TER QUE SE DEFENDER AO
ATAQUE IMUNOLGICO E A A SITUO Chop-
SER VANTAJOSA.
slide 8
GENES CONTINGENTES - pequena frao do genoma
bacteriano responsveis por estas duas condies.
Se somente 10 dos 2000 genes de uma bactria forem
contingentes, ela poder ter a cada diviso pelo menos um
dos tipos Chop+ ou Chop-
slide 9
DOENA DE HUNTINGTON
DEGENERATIVA CARACTERIZADA POR DEMNCIA,
PERDA DO CONTROLE MOTOR E MORTE RPIDA
APS A SUA EXPRESSO.
MANIFESTAO OCORRE GERALMENTE APS A
IDADE REPRODUTIVA.
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slide 10
DOENA DE HUNTINGTON - DOMINANTE
Alterao em um protena normal chamada HUNTINGTIN -
que tem no seu incio 10-30 GLUTAMINAS (Gln).
Microssatlites - alteram a protena colocando 36 - ou mais
Gln na cadeia.
slide 11
DETECTANDO CNCER
24
MUTAES nos genes p53 e ras
Pode-se detectar 1/10.000 clulas normais.
Mas no ocorrem em todos os tipos de cnceres e nem
mesmo em cnceres do mesmo tipo.
Slide 12
AVANO NO DIAGNSTICO
PELA ALTERAO NO TAMANHO DOS
MICROSSATLITES PODE-SE DETECTAR 1/500
CLULAS NORMAIS.
Nota:
Microssatlites como base evolutiva.
Neisseria gonorrhoeae - uma bactria que causa gonorria
- uma doena sexualmente transmissvel (DST)
12 ou mais genes Opas (formam colnias opacas de
Bactrias) esto relacionados com as protenas da membrana
- que ajudam a bactria aderir e invadir clulas epiteliais
como as do trato respiratrio e sistema imune.
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Genes opas - apresentam microssatlites com 5 bases
CTCTT - com alta frequncia de alteraes no nmero
dessas repeties.
Produzem 1 alterao a cada 100-1000 clulas filhas.
Inseres ou delees - alteram a informao gentica, por
mudana ou cdons de leitura.
-Algumas delees - alteram protenas da bactria que
impedem que elas entrem nas clulas.
- Essas delees podem ser revertidas na gerao segunte.
- Variaes de fase - podem ser adapativas e permitem ou
no a possibilidade de entrar nas clulas e serem fagocitadas.
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UNIDADES DE RADIAO
ROENTGEN = R
DOSE DE EXPOSIO QUE PROMOVE
NUM CM
3
DE AR (0,001293 g) UM
TOTAL DE ONS = 1 STAT-C.
2,082.10
9
rad
= ROENTGEN ABSORVED DOSE - A
QUANTIDADE DE ENERGIA ABSORVIDA POR
UNIDADE DE MASSA DO MATERIAL IRRADIADO.
rad= 100 erg/grama
RELAO = rad=0,877 R
GRAY = Gy - Dose Absorvida
1Gy= 100rad
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RADIAO DIRETAMENTE PROPORCIONAL AO
TEMPO E INVERSAMENTE PROPORCIONAL AO
QUADRADO DA DISTNCIA.
(D1) R2
------------- = ------------
(D2) R1
D =
DISTNCIA
R=
ROENTGEN
FONTE DE CO-60 DA GENTICA
Nvel de Radiao: 2220 R/hora/10 cm
Calcular qual a quantidade de radiao
recebida por um cromossomo de linfcito
humano depois de 20 min, considerando que
o sangue foi irradiado dentro de um tubo,
posicionado a 50 cm da fonte.
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SUNLIGHT AND SKIN CANCER
David J. Leffel and Douglas E. Brash
Scientific American, July 1996, 38-43.
CNCER DE PELE: clulas basais,.clulas escamosas e
melancitos - MELANOMA MALGNO (menos comum)
USA - 38.000 casos em 1995 e apenas 7 000 mortes.
Danos no gene p53 parece ser crucial aos cnceres de
clulas basais e cluas escamosas que tambm esto
associados a radiao UV-B do sol.
O GENE P53 - QUE UM GENE SUPRESSOR
DE TUMOR E QUE EST MUTADO EM
MAIS DA METADE DAS PESSOAS QUE TEM
CNCER.
CONSTATOU-SE UMA INTRIGANTE CONEXO ENTRE
CNCER DE PELE NO MELANOMA (DE CLULAS BASAIS
OU ESCAMOSAS) COM UMA RARA ALTERAO:
EPIDERMODISPLASIA VERRUCIFORMIS
QUE CAUSA O APARECIMENTO E CRESCIMENTO DE
VERRUGAS NA PELE E QUE ELAS APRESENTAVAM DNA DO VRUS DO
PAPILOMA HUMANO - E QUANDO ESSAS VERRUGAS ESTO EXPOSTAS
AO SOL, PODEM EVOLUIR PARA UM CNCER DE CLULAS BASAIS OU DE CLULAS
ESCAMOSAS.
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FOI DEMONSTRADO POSTERIORMENTE QUE UMA DAS PROTENAS FEITAS PELO VRUS DO
PAPILOMA HUMANO INATIVA A PROTENA p53.
ESTUDANDO CARCINOMAS DE CLULAS
ESCAMOSAS, QUE SO INEGAVELMENTE
ASSOCIADOS AO SOL - POIS ACONTECEM NAS
FACES E NAS MOS DE PESSOAS BRANCAS
NOS TRPICOS - DESCOBRIU-SE QUE 90%
DELES TINHAM UMA MUTAO EM ALGUM
PONTO DO GENE SUPRESSOR DE TUMOR P53.
HAVIA A OCORRNCIA DE 9 HOT SPOTS EM STIOS ADJACENTES AOS DMEROS
DE BASES PIRIMDICAS, NOTAMENTE DO TIPO C-C, QUE LEVA A MUTAO DE PONTO C-T,
TPICAS DE EXPOSIO A UV.
COMO TUDO ISTO ACONTECE?
p53 NORMAL E APOPTOSE (MORTE CELULAR PROGRAMADA)- EM CLULAS
INJURIADAS PELO SOL.- SEGUIDAS DE SUBSTITUO.
p53 MUTADO -
RETARDA O MECANISMO DE REPARO DE
CLULAS DIMERIZADAS E COM MUTAES.
IMPEDE QUE ELAS SE DESTRUAM E PERMITE
A MULTIPLICAO DESSAS CLULAS
MUTADAS QUE IRO OCUPAR OS ESPAOS
DEIXADOS PELAS CLULAS NORMAIS
INJURIADAS QUE MORRERAM. - LEVANDO A
UM CRESCIMENTO DESORDENADO E
APARECIMENTO DO TUMOR.
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A LUZ DO SOL ATUA DUAS VEZES PARA CAUSAR
O CNCER:
UMA PARA MUTAR O GENE P53 E OUTRA PARA INJURIAR
AS CLULAS SADIAS PRXIMAS DE CLULA MUTADA -
LEVANDO A SUA MORTE E CONSEQUENTE
SUBSTITUIO POR CLULAS COM O P53 MUTADO.
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RISCOS DE UM BRONZEAMENTO RPIDO - CINCIA
HOJE, 1989 - 9(54):26.
CARMEN BOTO QUEROL & JOO ANTNIO PGAS
HENRIQUES.
CLASSIFICAO:
UV curto UV longa
germicida luz negra
!------------------! !----------------------!
200-------------290-----320----------400 nm
UVC UVB UVA
UVA - luz negra - usada na PUVA terapia.
PUVA -terapia - consiste na associao de UVA longa +
PSORALENOS
PSORALENOS OU FUROCUMARINAS - CONSTITUEM
UM GRUPO DE COMPOSTOS AROMTICOS
TRICCLICOS DE ORIGEM NATURAL OU
SINTTICA..
EM COMBINAO COM O DNA PROPORCIONAM
EFEITOS BIOLGICOS DIVERSOS:
- SENSIBILIZAO DA PELE
- ATIVAO DA PRODUO DE MELANINA
- INATIVAO CELULAR
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- GENOTOXICIDADE - ALTERAM O CONTEDO
INFORMACIONAL DOS GENES.
A PUVA TERAPIA UTILIZADA PARA O
TRATAMENTO:
PSORASE - APARECIMENTO DE PLACAS SPERAS
SALIENTES E FREQUENTEMENTE
AVERMELHADAS, PRINCIPALMENTE NOS
COTOVELOS E JOELHOS.
VITILGO - DESPIGMENTAO DE REAS DA PELE
PELA AUSNCIA DE MELANINA.
PSORASE:
TRATAMENTO CONSISTE EM TOMAR 2 CPSULAS
DE PSORALENOS E VOLTAR CLNICA DEPOIS DE
2 HORAS PARA UM BANHO DE RADIAO UV
LONGA
APS 20 SESSES PELA INIBIO DA DIVISO
CELULAR, COME-SE A VERIFICAR OS EFEITOS
DA PUVA-TERAPIA..
NECESSITA - TERAPIA DE MANUTENO, COM
CONSTANTES DESLOCAMENTOS E POSSIBLIDADES
DE EXPOR O PACIENTE AO SOL, AUMENTANDO OS
RISCOS DE ERITEMA, QUEIMADURAS E LESES
NOS OLHOS.
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USO CONTINUADO QUESTIONADO:
-EFEITO CARGINOGNICO
- ENVELHECIMENTO PRECOCE
- TENDNCIA A APARECIMENTO
DE CATARATAS.
VITILGO: REMDIO VITICROMIN - CONTENDO
BERGAPTENO UMA FUROCUMARINA DE AO
FOTOSSEMBILIZANTE - EMPREGADA NO
TRATAMENTO DA DESPIGMENTAO - E QUE
PODE LEVAR AO APARECIMENTO DE CNCER -
DEPOIS DE 14-20 ANOS DE TRATAMENTO.
TRISORALEM - PSORALENO ENCONTRADO NO
LIMO, LIMA, BERGAMOTA
OXARELEM OU 8-METOXIPSORALENO (8-MOP) -
SUBSTNCIAS QUE REAGE A LUZ UV,
PROVOCANDO, VRIOS EFEITOS INCLUSIVE O
ESCURECIMENTO DA PELE.
CLNICAS ESTTICAS - PASSARAM A FAZER O
BRONZEAMENTO RPIDO - USANDO A UV +
PSORALENO.
CONTRA OS EFEITOS DA UV - SO USADOS
FILTROS SOLARES OU PROTETORES, QUE DEVEM
BLOLQUEAR 98% DA UVB. SEGUNDO LEGISLAO
INTERNACIONAL.
34
PARA EVITAR QUE OS PROTETORES IMPEAM O
BRONZEAMENTO - OS FABRICANTES DE
COSMTICOS PASSARAM A ADICIONAR OS
PSORALENOS, QUE NA PRESENA DE UVA
INTENSIFICAM A PRODUO DE MELANINA.
ISTO PROIBIDO EM PASES DO PRIMEIRO
MUNDO.!!!
Dr.VOLNER KIRCHHOFF - INPE - CRIA UM INDICE
DE EXPOSIO ASSOCIANDO A COR DA PELE COM
O TEMPO, PARA AS DIFERENTES REGIES DO
BRASIL.