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Introduo

Candida quarta causa de infeco de corrente sangunea USA


Candida albicans
Identificao rpida e precisa crtica no tratamento
Identificao fenotpica laboriosa e demanda tempo.
Testes rpidos de aglutinao ltex
Testes moleculares
Introduo
Matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass espectrometry
(MALDI-TOF MS)
Rpido, confivel e alternativa econmica para identificao bacteriana, micobacteriana
e fngica
A tcnica depende da gerao de impresses digitais proteicas de micro-organismos
que so comparados com espectros de referncia de um biblioteca bem caracterizada

Objetivo
Avaliar o desempenho do MALDI-TOF MS para identificao de leveduras
comuns e incomuns.
Metodologia
Maldi Biotyper 2.0 Microflex LT spectrometer (Brucker Daltonics, Inc., Billerica, MA)
n=261
145 isolados da rotina do laboratrio de diferentes meios seletivos
Mycosel, BHI, SAB, IMA (inhibitory mold agar)
Identificao usual - tubo germinativo
- Rapid assimilation of threalose
- Urease e produo de pigmentos
- API 20C AUX (bioMerieux)
- Morfologia microscpica em agar cornmeal com tween 80
Metodologia
116 amostras estocadas previamente identificadas pelo API e
sequenciamento D2 Maldi-tof MS






Cada corrida foi includa controle de extrao negativo, bactria padro e
ATCC 201148 C. albicans e ATCC 13803 C. tropicalis
A espectrometria de massa foi realizada de acordo com as configuraes do
fabricante. (laser de nitrognio 337 nm e capturado de forma linear com 240
disparos de laser.)
Espectros analisados usando o Flex control 3.0 e Maldi Biotyper automation
control software. Comparados com o banco de dados da Bruker verso 3.0
Todos isolados foram feitos em duplicata
Falhas na identificao foram repetidas usando os mtodos de rotina e o
Maldi-tof.
Resultados discrepantes foram sequenciados pela anlise da regio D2 do
alvo ribossomal 28S

Dos 261 isolados 20 foram excludos ausente na base de dados
Em geral, 6.8% e 1.4% isolados repetido


Hall, L., S. Wohlfiel, and G. D. Roberts. 2003. Experience with
the MicroSeq D2 large-subunit ribosomal DNA sequencing kit for
identification of commonly encountered, clinically important yeast
species. J. Clin. Microbiol. 41:50995102.
Identificao correta
Identificao C. krusei
Identificao C. dubliniensis
Identificao correta
Identificao C. krusei
Identificao C. dubliniensis
Identificao no confivel
Propriedades inerentes ao isolado resulta espectro de baixa
qualidade ou banco de dados insuficiente

Resultados e Discusso
Os resultados corroboram com os de Marklein et al e Stevenson et
al.(92,5% e 87,1% - Score >=2) 99% (score >=1.8)
Qualidade espectral - Diferentes tipos de meio
BHI e IMA.........SAB Mycosel
Qualidade espectral - Tempo de incubao
Diminuio do escore para >=1.8

Marklein, G., et al. 2009. J. Clin. Microbiol. 47:29122917.
Stevenson, L. G., et al.. 2010. J. Clin. Microbiol. 48:34823486.
Identificao nvel de espcie
Identificao no confivel-
Raros - Teste molecular
Cryptococcus neoformans
Custo de reagente
Tempo gasto na execuo.
Tempo do resultado.
Concluses

Maldi-tof MS econmico, rpido e confivel na identificao das levedura
Avanos na tecnologia pode oferecer um futuro promissor no teste direto da
amostra clinica, determinao de resistncia e outros marcadores genotpicos.