Abordagens... O que e qual a constituio do citoesqueleto Quais funes o citoesqueleto desempenha na clula Tipos de Filamentos do citoesqueleto Aplicaes Biotecnolgicas - uma rede complexa de filamentos de protenas que se estendem por todo citoplasma;
- forma um arcabouo interno para o grande volume do citoplasma, sustentando-o da mesma forma que uma estrutura metlica sustenta um prdio;
- uma estrutura altamente dinmica que se reorganiza rpida e continuamente;
- presente em clulas eucariticas O que o citoesqueleto? Composto por 3 tipos de filamentos proticos 1. Microfilamentos (filamentos de actina) 7 nm 2. Filamentos Intermedirios 10 nm 3. Microtbulos 25 nm
Esses 3 tipos interagem entre si conferido estabilidade e dinmica no citoesqueleto.
Cada tipo de filamento formado pela polimerizao de monmeros especficos Composio - Dar estrutura e forma a clula - permitir que a clula altere sua forma - permitir o movimento celular - fornece a maquinaria necessria para movimentos intracelulares - na diviso celular segregao dos cromossomos - na interao clula-clula - na interao clula-matriz extracelular
Funes do citoesqueleto Microtbulos Microfilamentos Filamentos intermedios
2 5
n m
1 0
n m
7
n m
25m 25m 25m 25nm 25nm 25nm Microfilamentos Principal protena: Actina Estrutura: Polmeros helicoidais, duas cadeias de actina (G-Actina + ATP + Mg e K = Polmero) Estruturas flexveis, com dimetro de 5 a 9 nm, Organizados na forma de feixes lineares, redes bidimensionais e gis tridimensionais. Microfilamentos Filamentos de actina concentrados logo abaixo da membrana plasmtica
Encontra-se nas junes celulares manter clulas unidas
Associam-se com inmeros complexos proticos Microfilamentos em microvilosidades Microfilamentos em protuses temporrias Microfilamentos na contrao muscular Microfilamentos na citocinese Anel contrctil de actina e miosina So polmeros rgidos formados por 13 protofilamentos de tubulina a e b, em forma de filamentos longos e ocos, com 25 nm de dimetro e so muito mais rgidos do que os filamentos de actina. Microtbulos (MT) Polimerizao Tipos: a, b e g Altamente conservadas Possuem aprox. 450 aa (50 kDa) So originados por 5 genes de uma famlia que tem 5 isoformas.
Tubulina Nas clulas em interfase, partem do centrossoma, onde se encontram os centrolos e uma reserva de tubulina.
A polimerizao dos dmeros de tubulina possibilita o alongamento do microtbulo e a despolimerizao seu encurtamento.
O sentido da polimerizao da tubulina vai conferir uma polaridade ao microtbulo: uma extremidade + (positiva) onde continua a polimerizao e outra (-) negativa. Microtbulos (MT) 1. Microtubulos organizam o interior da clula 2. A maioria das clulas diferenciadas so polarizadas Polarizao 1. Microtubulos so responsveis pelo movimento de organelas, vesculas, protenas Polarizao Microtbulos (MT) shows the microtubules in longitudinal sample MET mostrando a distribuio de microtbulos em clulas Microtbulos (MT) Transporte (vesculas, organelas, cromossomos, etc) Formao do fuso mittico Arquitetura celular (junto com FI e Microfilamentos) Movimento axonal Movimento de vesculas e organelas Movimento de clios e Flagelos Funes dos Microtbulos Cillia or Flagella - + + Mitotic spindle Dividing cell Migrating cell Spindle poles Neurones Basal body MICROTUBULOS (organising centres and polarity) MTOC Centrosome Centrioles + + + + Possuem polaridade - essa polaridade que possibilita protenas motoras trafegarem vesculas, organelas ou complexos proticos associados aos microtbulos num ou noutro sentido.
DINENA leva vesculas para o polo (-) CINESINA para o polo (+). Microtbulos MT protenas motoras Transporte Pelos Microtbulos DINENA leva vesculas para o polo (-)
CINESINA leva para o polo (+) MT protenas motoras MT protenas motoras 1. Organelas movem-se pelos microtbulos 2. ER e Golgi so posicionado pelos microtbulos 3. Cria diferenas locais necessrios para a funo celular Tipos Estruturas Localizao Flagelos 9+2 Espermatozides e em protozorios Clios 9+2 Clulas epiteliais do pulmo, deslocamento do vulo Centrolo 3x9 Todas as clulas animais; regio organizadora de microtbulos Corpsculo basal 3x9 Ancoragem e origem dos clios Microtbulos Organizados - Estruturas responsveis pela motilidade celular - Constitudos por pequenos apndices, especialmente diferenciados, que variam em nmero e tamanho. - Se so escassos e longos recebem o nome de flagelos, - Se numerosos e curtos so denominados clios
Cilios Clulas epiteliais do pulmo, deslocamento do vulo, Flagelos Espermatozides e em protozorios Clios e Flagelos Clios Desenho mostrando as diferenas de movimentos entre o clios e o flagelo Clios e Flagelos Dinena gera movimento dos cilios e flagelos Cilio Micrografia eletrnica de seces transversal e vertical de um clio (arranjo em 9+2) corpsculo basal - Estruturas cilndricas, com 0,2 mm de largura e 0,4 mm de comprimento. - 9 grupos de trs microtbulos, fundidos em tripletes, formam a parede do centrolo e cada triplete se incline para dentro como as lminas de uma turbina. Desenho esquemtico do corpsculo basal e Centrolo Centrolo Centrolo 1. formado de um par e dispostos em em um ngulo reto
2. Formam o fuso mittico para segregao dos cromossomos 1) Tanto os microfilamentos como os microtbulos so constituidos por protenas globulares
2) Em ambos casos, ~ 50% da protena constituinte se encontra em forma solvel os 50% restantes em forma de filamentos.
3) Formam estruturas MUITO DINMICAS, com um intercambio rpido de subunidades entre o "pool" solvel e filamentoso.
4) Tanto os microfilamentos como os microtbulos so estruturas "polarizadas (extremos distintos).
5) As estruturas formadas por microtbulos e/ou microfilamentos, possuem a capacidade de transportar e gerar foras, sendo chamadas de citomusculatura
Caractersticas comuns a microfilamentos e microtbulos http://www.youtube.com/watch?v=uGK9CYetCvM&feature=fvwrel Vdeo So polmeros constitudos de polipeptdios fibrosos.
Dimetro entre 8 e 12 nm
Parte mais estvel do Citoesqueleto
Participam: estrutura, estabilidade, sustentao, resistncia, interao celular. Filamentos Intermedirios Grupos heterogneos (+50) de protenas de FI
Citoqueratina - clulas epiteliais, bexiga
Vimentina Clulas de fibroblastos, leuccitos
Neurofilamentos das clulas nervosas
Lamina - forma a lmina fibrosa que se estende sob o envelope nuclear Filamentos Intermedirios 2. Monmeros de FI 2. Versatilidade FI 2. Formao dos FI monmero
Dimero enovelado
Tetramero antiparalelo
dois tetrameros
8 protofilamentos Como o citoesqueleto pode ser usado em biotecnologia? Alvo para drogas Alvo para deteco de cncer Ao de drogas no citoesqueleto Cochicina, Colcemida e Nocadazol inibem a polimerizao de MT inibindo a ligao nas extremidades + Vincristina e a vimblastina se agregam aos MT e levam a despolimerizao dos MT Taxol - acelera a polimerizao e estabiliza os microtbulos, impedindo a despolimerizao Bipsias de tumores
Imunocitoqumica para identificar protenas especficas dos filamentos intermedirios
Identificao da origem do tumor
Auxlio no direcionamento do tratamento Identificao de tumores atravs do citoesqueleto Obrigado pela ateno!!! Vinicius Farias Campos fariascampos@gmail.com vcampos_ib@ufpel.edu.br