0

1
2
3
4
5
6
1 3 5 7 9 11 13 15
a
c
t
i
v
i
d
a
d
e

numero das fraces
Exame de bioqumica experimental I
2010-2011 1Fase

Questo 1 valia 8 valores!
a) Definir gama de fraccionamento e limite de excluso molecular
b) O que o volume morto e como detectaria experimentalmente?
c)
Depois tens um grfico do tipo e uma sds page das fraces 11 a 15 mas no consigo agora
fazer aquii o desenho.. (sorry)









a) Davam-te as massas moleculares do padro usado na sds page e pedia-te para as
escreveres ao lado da banda correspondente. E justificar
b) Ser que a purificao do enzima foi efectuada com sucesso?
c) Sugira uma possvel estrutura para o enzima em estudo


Questo 2 valia 3 valores!
Depois tinhas um grfico GC de fase reversa
a) Dizer que tcninca era esta e porqu.
b) Se aumentssemos a percentagem de acetonitrilo o que aconteceria ao tempo de
reteno? Justifique.
c) Porque que os picos tm reas diferentes j que se ejectou a mesma quantidade de
amostra?



Questo 3 valia 4 valores!
Era para fazer um quadro de purificao (rendimento, grau de purificao, actividade total,
actividade especfica, etc.) Este n m lembro dos valores

Questo 4 valia 5 valores!
Uma amostra contendo uma mistura das protenas X,Y e Z foi fraccionada
cromatograficamente, de modo independente, usando-se as condies:
A- Aplicou-se a amostra numa resina de permuta aninica equilibrada a ph=7.0
A coluna foi eluda utilizando-se um gradiente de gel em que esse parmetro variava
de 7.0 at 4.0
B- Aplicou-se a amostra numa resina de permuta aninica equilibrada a ph=6.0
A coluna foi eluda utilizando-se um gradiente de gel em que esse parmetro variava
de 6.0 at 4.0






Tempo (s)
Abs
(280nm)
PROTEINA PI MASSA MOLECULAR
X 6.0 140kDa
Y 6.9 35 kDa
Z 5.1 139 kDa

4.1 Indique o ponto onde foi aplicado o gradiente de ph nos cromatogramas efectuados. Indique
tambm a que cromatograma a que corresponde cada condio das acima descritas, justifique.
4.2 Esta no me lembro mas eu depois vou l ver a correco do exame e mando-te mensagem!
* Desculpa a demora! Um grande beijinho e bom estudo!