B r . J . P h a r m a c . ( 1 9 7 1 ) , 4 2 , 3 9 2 - 4 0 2 .

M e d i a t o r s o f t h e i n f l a m m a t i o n i n d u c e d
i n t h e r a t p a w b y c a r r a g e e n i n
P EARL CRUNKHORN AND S . C. R. M EACOCK
Li l l y Re s e a r c h Ce n t r e Li m i t e d , Er l Wo o d M a n o r , Wi n d l e s h a m , S u r r e y
S u m m a r y
1 . T h e t i m e c o u r s e o f o e d e m a f o r m a t i o n i n r a t s c a u s e d b y i n j e c t i o n o f c a r -
r a g e e n i n i n t o t h e p a w w a s f o l l o w e d f o r 5 - 5 h o u r s . I n t a c t o r a d r e n a l e c t o m i z e d
r a t s w h i c h h a d p r e v i o u s l y b e e n i n j e c t e d w i t h e l l a g i c a c i d o r s a l i v a t o r e d u c e
c o n s i d e r a b l y t h e c o n c e n t r a t i o n o f b l o o d k i n i n o g e n s , o r w i t h m e t h y s e r g i d e t o
a n t a g o n i z e 5 - h y d r o x y t r y p t a m i n e ( 5 - HT ) s h o w e d a r e d u c e d i n f l a m m a t o r y
r e s p o n s e . I t w a s c o n c l u d e d t h a t k i n i n s a n d 5 - HT c o n t r i b u t e d s i g n i f i c a n t l y t o
o e d e m a f o r m a t i o n d u r i n g t h i s p e r i o d .
2 . M e p y r a m i n e a l o n e h a d n o e f f e c t o n o e d e m a f o r m a t i o n , b u t i n c o m b i n a t i o n
w i t h e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t , w i t h o r w i t h o u t m e t h y s e r g i d e , i t c a u s e d a r e d u c t i o n
s u g g e s t i n g t h a t h i s t a m i n e p l a y e d a m i n o r r o l e i n o e d e m a f o r m a t i o n d u r i n g t h e
f i r s t 3 h o u r s .
3 . V a s c u l a r p e r m e a b i l i t y s t u d i e s i n d i c a t e d t h a t i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d d i d
n o t i n t e r f e r e w i t h t h e n o r m a l r e s p o n s e s i n s k i n t o i n t r a d e r m a l i n j e c t i o n s o f
h i s t a m i n e , 5 - HT , b r a d y k i n i n o r c o m p o u n d 4 8 / 8 0 . M e p y r a m i n e a n d m e t h y -
s e r g i d e , a t t h e d o s e s u s e d i n t h e c a r r a g e e n i n e x p e r i m e n t s , c o m p l e t e l y
a n t a g o n i z e d h i s t a m i n e a n d 5 - HT , r e s p e c t i v e l y , a n d d i d n o t a f f e c t t h e s k i n
r e s p o n s e s o f b r a d y k i n i n .
4 . T r e a t m e n t i n v i v o w i t h e l l a g i c a c i d o r r a t s a l i v a w a s e q u a l l y e f f e c t i v e i n
r e d u c i n g p l a s m a k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s b y a n a m o u n t e q u i v a l e n t t o m o r e
t h a n 1 0 t i m e s t h e q u a n t i t y o f s u b s t r a t e 1 m e a s u r e d b y G a u t v i k & Ru g s t a d
( 1 9 6 7 ) .
5 . Ra t s a l i v a , b u t n o t e l l a g i c a c i d , l o w e r e d c o m p l e m e n t l e v e l s b y a p p r o x i -
m a t e l y 2 0 % .
I n t r o d u c t i o n
T h e i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o a n i n j e c t i o n o f c a r r a g e e n i n i n t o t h e r a t p a w w a s
i n t r o d u c e d b y Wi n t e r , Ri s l e y & Nu s s ( 1 9 6 2 ) a n d d e v e l o p e d b y t h e s e w o r k e r s ( Wi n t e r ,
Ri s l e y & Nu s s , 1 9 6 3 ; Wi n t e r , 1 9 6 5 ) a s a m o d e l o f i n f l a m m a t i o n i n t h e s e a r c h f o r
a n t i - i n f l a m m a t o r y d r u g s . T h e c o m p o u n d s u s e d i n t h e s e s t u d i e s w e r e c h o s e n f o r
t h e i r a b i l i t y t o s u p p r e s s o e d e m a r a t h e r t h a n f o r s p e c i f i c a n t a g o n i s t a c t i v i t y , a n d
t h e r e f o r e t h e r o l e a n d i m p o r t a n c e o f t h e v a r i o u s m e d i a t o r s r e l e a s e d d u r i n g t h e
i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n h a v e y e t t o b e c l e a r l y d e f i n e d .
Re c e n t l y , D i Ro s a & S o r r e n t i n o ( 1 9 6 8 , 1 9 7 0 ) h a v e s h o w n b o t h b y i n h i b i t i o n o f
p l a s m a k a l l i k r e i n w i t h a p r o t i n i n a n d b y d e p l e t i o n o f , p l a s m a k i n i n o g e n w i t h c e l l u l o s e
s u l p h a t e , t h a t k i n i n s a r e r e l e a s e d i n t h e i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n i n t h e
I n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n
r a t . T h e k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s o f f e m a l e Wi s t a r r a t s w e r e g r e a t l y r e d u c e d b y
i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d ( G a u t v i k & Ru g s t a d , 1 9 6 7 ) o r r a t s a l i v a a n d
t h e s e p r o c e d u r e s h a v e b e e n u s e d i n o u r i n v e s t i g a t i o n . T h e e x t e n t o f t h e c o n t r i b u -
t i o n t o t h e o e d e m a f o r m a t i o n m a d e b y 5 - h y d r o x y t r y p t a m i n e ( 5 - HT ) i s i n d i c a t e d i n
t h e s t u d i e s o f F e k e t e & Ku r t i ( 1 9 7 0 ) i n w h i c h m e t h y s e r g i d e , a n a n t a g o n i s t o f 5 - HT ,
w a s f o u n d t o s u p p r e s s t h e c a r r a g e e n i n r e a c t i o n . I n t h i s s t u d y w e h a v e o b s e r v e d
c h a n g e s i n t h e t i m e c o u r s e o f o e d e m a f o r m a t i o n , i n a n i m a l s h a v i n g l o w c o n c e n t r a -
t i o n s o f p l a s m a k i n i n o g e n a s w e l l a s i n a n i m a l s t r e a t e d w i t h a n t a g o n i s t s o f h i s t a m i n e
a n d 5 - HT i n a n a t t e m p t t o d e t e r m i n e t h e r e l a t i v e i m p o r t a n c e o f k i n i n s , h i s t a m i n e
a n d 5 - HT i n t h e p r o d u c t i o n o f o e d e m a b y c a r r a g e e n i n .
M e t h o d s
Ca r r a g e e n i n i n f l a m m a t i o n
F e m a l e Wi s t a r r a t s ( 1 4 0 - 1 6 0 g ) , m a i n t a i n e d o n u n r e s t r i c t e d s u p p l i e s o f f o o d a n d
w a t e r , w e r e u s e d . Wh i l e i n j e c t i o n s w e r e b e i n g g i v e n t h e a n i m a l s w e r e l i g h t l y a n a e s -
t h e t i z e d w i t h e t h e r e x c e p t i n o n e s e r i e s o f e x p e r i m e n t s a s d e s c r i b e d i n Re s u l t s
w h e n t h e y w e r e a n a e s t h e t i z e d w i t h p e n t o b a r b i t o n e s o d i u m ( Ab b o t ) , ( 4 0 m g / k g i . p . )
3 0 m i n b e f o r e t r e a t m e n t .
El l a g i c a c i d ( Ko c h - Li g h t La b o r a t o r i e s ) w a s u s e d i n a s t a n d a r d s o l u t i o n o f
2 x 1 0 - ' M i n a 0 - 1 5 M T r i s - HCl b u f f e r , p H 7 * 3 5 ( G a u t v i k & Ru g s t a d , 1 9 6 7 ) . M e t h y -
s e r g i d e b i m a l e a t e ( S a n d o z ) a n d m e p y r a m i n e m a l e a t e ( M a y a n d B a k e r ) w e r e d i s -
s o l v e d i n 0 9 % Na Cl . Ra t s a l i v a w a s c o l l e c t e d d u r i n g p e n t o b a r b i t o n e a n a e s t h e s i a
a f t e r s t i m u l a t i o n o f s a l i v a t i o n b y a n i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f p i l o c a r p i n e ( 2
m g / k g ) . I t w a s t h e n c e n t r i f u g e d a n d s t o r e d a t - 2 6 C u n t i l u s e d .
I n f l a m m a t i o n w a s i n d u c e d b y i n j e c t i n g 0 - 1 m l o f 1 % h o m o g e n i z e d s u s p e n s i o n o f
c a r r a g e e n i n ( G e l o z o n e S T 1 , Wh i f f e n , Lo u g h b o r o u g h ) i n 0 9 % Na Cl i n t o t h e p l a n t a r
s u r f a c e o f t h e r i g h t h i n d p a w o f e a c h r a t . T h e v o l u m e o f t h e i n f l a m e d p a w w a s
d e t e r m i n e d u s i n g a m e r c u r y p l e t h y s m o g r a p h ( U. B a s i l e , M i l a n ) . M e a s u r e m e n t s o f
t h e r i g h t h i n d p a w w e r e m a d e a f t e r 1 h , 2 5 h , 3 5 h , 4 - 5 h a n d 5 5 h a n d t h e a m o u n t
o f o e d e m a w a s d e t e r m i n e d b y c o m p a r i s o n w i t h t h e v o l u m e o f t h e l e f t h i n d p a w
m e a s u r e d a t 1 h o u r . At l e a s t f i v e r e a d i n g s w e r e t a k e n f o r e a c h p a w a t a n y o n e
t i m e . El l a g i c a c i d s o l u t i o n ( 0 5 m l ) o r r a t s a l i v a ( 0 5 m l ) w a s i n j e c t e d s l o w l y i n t o a
t a i l v e i n , 3 t i m e s a t 5 m i n i n t e r v a l s , 3 0 m i n b e f o r e t h e i n j e c t i o n o f c a r r a g e e n i n . I n
t h o s e e x p e r i m e n t s w h e r e b o t h r e a g e n t s w e r e i n j e c t e d , a 1 5 m i n i n t e r v a l w a s a l l o w e d
b e t w e e n t h e i n j e c t i o n s o f e l l a g i c a c i d a n d s a l i v a . M e p y r a m i n e a n d m e t h y s e r g i d e ,
b o t h a t d o s e s o f 2 5 m g b a s e / k g , w e r e i n j e c t e d i n t r a v e n o u s l y 1 5 m i n b e f o r e t h e
c a r r a g e e n i n i n j e c t i o n . F u r t h e r i n j e c t i o n s o f m e t h y s e r g i d e w e r e g i v e n 2 h a n d 4 h
a f t e r t h e c a r r a g e e n i n i n j e c t i o n t o m a i n t a i n a n t a g o n i s m t o 5 - HT . I n s o m e e x p e r i -
m e n t s m e t h y s e r g i d e a n d / o r m e p y r a m i n e w e r e g i v e n 1 5 m i n a f t e r e l l a g i c a c i d .
B i l a t e r a l a d r e n a l e c t o m y w a s p e r f o r m e d t h r o u g h t w o d o r s o l a t e r a l i n c i s i o n s w h i l e
u n d e r p e n t o b a r b i t o n e a n a e s t h e s i a . Ea c h a n i m a l w a s i n j e c t e d i n t r a p e r i t o n e a l l y w i t h
0 5 m l b e m i g r i d e ( Ni c h o l a s ) t o h a s t e n r e c o v e r y f r o m a n a e s t h e s i a , a n d m a i n t a i n e d
w i t h 0 4 5 % Na Cl i n t h e d r i n k i n g w a t e r . On l y t h o s e a n i m a l s i n a l i v e l y h e a l t h y
c o n d i t i o n w e r e u s e d 4 d a y s l a t e r .
I n c r e a s e d v a s c u l a r p e r m e a b i l i t y
Ra t s w e r e a n a e s t h e t i z e d w i t h m e t h o h e x i t o n e s o d i u m ( Li l l y , 4 0 m g / k g ) a n d t h e i r
a b d o m e n s w e r e s h a v e d . T h e y w e r e t h e n i n j e c t e d i n t r a v e n o u s l y w i t h s o l u t i o n s o f
3 9 3
P e a r l Cr u n k h o r n a n d S . C. R. M e a c o c k
5 % P o n t a m i n e S k y B l u e d y e ( G u r r , 0 - 2
m l /
1 0 0 g ) a n d m e p y r a m i n e o r m e t h y s e r g i d e .
F i v e m i n u t e s l a t e r i n t r a d e r m a l i n j e c t i o n s w e r e m a d e i n t h e a b d o m i n a l s k i n u s i n g
s e r i a l d i l u t i o n s o f e i t h e r h i s t a m i n e ( B r i t i s h D r u g Ho u s e s ) , 5 - HT ( S a n d o z ) , o r s y n -
t h e t i c b r a d y k i n i n ( S a n d o z ) i n 0 1 m l o f T y r o d e s o l u t i o n , o r w i t h c o m p o u n d 4 8 / 8 0
i n 0 9 9 % Na Cl a d j u s t e d t o p H 7 - 3 . F o r t y - f i v e m i n u t e s l a t e r t h e a n i m a l s w e r e k i l l e d
b y c e r v i c a l d i s l o c a t i o n . T h e i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e w a s d e t e r m i n e d b y m e a s u r i n g
t h e m e a n d i a m e t e r s o f t h e b l u e l e s i o n s o f t h e r e f l e c t e d s k i n a n d b y a s s e s s i n g t h e
d y e i n t e n s i t y o n a n a r b i t r a r y 0 - 1 0 p o i n t s c a l e . Ra t s p r e v i o u s l y t r e a t e d w i t h e l l a g i c
a c i d w e r e n o t s u b j e c t e d t o s k i n r e a c t i o n s u n t i l 3 0 m i n a f t e r e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t ,
t o a l l o w b l o o d p r e s s u r e t o r e t u r n t o n o r m a l ( G a u t v i k & Ru g s t a d , 1 9 6 7 ) .
Ki n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s
Ki n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s w e r e m e a s u r e d u s i n g d e n a t u r e d w h o l e b l o o d a s s u b -
s t r a t e a c c o r d i n g t o t h e m e t h o d o f B r o c k l e h u r s t & Z e i t l i n ( 1 9 6 7 ) , w i t h t h e f o l l o w i n g
s l i g h t m o d i f i c a t i o n s . T h e d e n a t u r e d s u b s t r a t e w a s h o m o g e n i z e d i n 0 - 0 2 M s o d i u m
p h o s p h a t e b u f f e r , p H 7 - 3 5 . Al i q u o t s ( 1 m l ) o f t h i s s u s p e n s i o n , c o n t a i n i n g s u b s t r a t e
f r o m 0 - 3 m l o f f r e s h b l o o d , w e r e i n c u b a t e d a t 3 7 0 C f o r 3 0 m i n w i t h e x c e s s
c r y s t a l l i n e t r y p s i n ( T r y p t a r , Ar m o u r , 1 - 3 m g , a s p r e v i o u s l y d e t e r m i n e d f o r e a c h
b a t c h o f e n z y m e ) i n 4 m l o f p h o s p h a t e b u f f e r . T h e r e l e a s e d k i n i n w a s m e a s u r e d o n
t h e i s o l a t e d g u i n e a - p i g i l e u m b a t h e d i n o x y g e n a t e d T y r o d e s o l u t i o n a t 3 7 0 C, u s i n g
s y n t h e t i c b r a d y k i n i n a s a s t a n d a r d . D i s p o s a b l e p o l y s t y r e n e s y r i n g e s a n d s i l i c o n i z e d
n e e d l e s a n d g l a s s w a r e w e r e u s e d i n t h e c o l l e c t i o n o f a l l b l o o d s a m p l e s , t h e e x t r a c -
t i o n p r o c e s s , a n d t h e a s s a y o f k i n i n .
T o t a l h a e m o l y t i c c o m p l e m e n t d e t e r m i n a t i o n s
S e r u m c o n c e n t r a t i o n s o f t o t a l h a e m o l y t i c c o m p l e m e n t w e r e m e a s u r e d b y t h e
m e t h o d o f Ro s e n b e r g & T a c h i b a n a ( 1 9 6 2 ) e x c e p t t h a t d o u b l e q u a n t i t i e s o f e a c h
r e a g e n t w e r e u s e d a n d t h e d e g r e e o f e r y t h r o c y t e h a e m o l y s i s w a s d e t e r m i n e d f r o m
t h e o p t i c a l d e n s i t y r e a d i n g o f t h e e r y t h r o c y t e s u p e r n a t a n t a t 5 4 1 m , u w i t h a
Un i c a m S P 6 0 0 s p e c t r o p h o t o m e t e r . Co m p l e m e n t t i t r e s w e r e e x p r e s s e d i n t e r m s o f
C' H5 0 u n i t s / m l , w h e r e o n e C' H5 0 u n i t i s d e f i n e d a s t h e a m o u n t o f c o m p l e m e n t i n
t h a t d i l u t i o n o f s e r u m w h i c h c a u s e d 5 0 % l y s i s o f t h e s e n s i t i z e d e r y t h r o c y t e s . B l o o d
s a m p l e s w e r e t a k e n f r o m t h e t a i l o r b y c a r d i a c p u n c t u r e . T h e s e r a w e r e h a r v e s t e d
w i t h i n 2 h , q u i c k - f r o z e n a n d s t o r e d a t - 2 6 C u n t i l u s e d . S t a t i s t i c a l a n a l y s i s w a s
b y S t u d e n t ' s t t e s t .
Re s u l t s
V a r i a t i o n i n a n i m a l r e s p o n s e t o t h e i n j e c t i o n o f c a r r a g e e n i n
T h e t i m e c o u r s e o f o e d e m a f o r m a t i o n i n t h e p a w s o f t e n f e m a l e r a t s i s s h o w n i n
F i g . 1 a n d i s t y p i c a l o f t h e v a r i a t i o n i n a n i m a l b e h a v i o u r s e e n t h r o u g h o u t
t h i s
i n v e s t i g a t i o n . Ex p e r i m e n t s u s i n g m a l e a n i m a l s ( u n p u b l i s h e d o b s e r v a t i o n s ) ,
a d r e n a l e c t o m i z e d f e m a l e a n i m a l s a n d a n i m a l s t r e a t e d w i t h a n t a g o n i s t s o f p o s s i b l e
m e d i a t o r s p r o v i d e d d a t a w i t h s i m i l a r v a r i a t i o n s w i t h i n e a c h g r o u p , a s d i d e x p e r i -
m e n t s u s i n g a n y o n e t y p e o f a n i m a l o n t h e s a m e o r d i f f e r e n t d a y s .
I n o r d e r t o
i n c r e a s e t h e s i g n i f i c a n c e o f r e s u l t s , t h e r e f o r e , l a r g e g r o u p s o f a n i m a l s o f t h e s a m e
s e x a n d s t r a i n h a d t o b e u s e d .
3 9 4
I n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n
Ef f e c t o f e l l a g i c a c i d , s a l i v a a n d m e t h y s e r g i d e
Ra t s w e r e t r e a t e d w i t h e l l a g i c a c i d , s a l i v a o r m e t h y s e r g i d e a n d t h e t i m e c o u r s e
o f f o r m a t i o n o f t h e o e d e m a c a u s e d b y c a r r a g e e n i n w a s f o l l o w e d . Al l t h r e e t r e a t -
m e n t s s u p p r e s s e d o e d e m a b y 4 0 - 6 0 % d u r i n g t h e f i r s t 5 5 h , i n d i c a t i n g a s i g n i f i c a n t
c o n t r i b u t i o n b y k i n i n s a n d 5 - HT t o o e d e m a f o r m a t i o n d u r i n g t h i s t i m e p e r i o d . T h e
r e s u l t s w h i c h a r e i l l u s t r a t e d i n F i g . 2 a l s o i n d i c a t e t h a t m e t h y s e r g i d e o r s a l i v a w e r e
m o r e e f f e c t i v e t h a n e l l a g i c a c i d . T r e a t m e n t w i t h e l l a g i c a c i d a n d s a l i v a t o g e t h e r
w a s m o r e e f f e c t i v e i n t h e f i r s t 3 h t h a n t r e a t m e n t w i t h e a c h s e p a r a t e l y ( P < 0 0 1 a t
2 - 5 h ) . I n F i g . 3 i t c a n b e s e e n t h a t e l l a g i c a c i d a n d m e t h y s e r g i d e s u p p r e s s e d
c a r r a g e e n i n o e d e m a i n a d r e n a l e c t o m i z e d a n i m a l s a n d t h e r e f o r e d i d n o t a c t i n d i r e c t l y
b y a d r e n a l s t i m u l a t i o n .
T h e t i m e c o u r s e o f o e d e m a f o r m a t i o n i n a n i m a l s t r e a t e d w i t h e l l a g i c a c i d ,
m e p y r a m i n e a n d m e t h y s e r g i d e i n v a r i o u s c o m b i n a t i o n s i s g i v e n i n T a b l e 1 . An i m a l s
p r e v i o u s l y a n a e s t h e t i z e d w i t h p e n t o b a r b i t o n e w e r e u s e d i n t h e s e e x p e r i m e n t s .
T r e a t m e n t w i t h e l l a g i c a c i d o r m e t h y s e r g i d e a l o n e p r o d u c e d a s i g n i f i c a n t d e p r e s -
s i o n i n o e d e m a f o r m a t i o n ( 4 5 % ; P < 0 0 0 1 ) . El l a g i c a c i d a n d m e t h y s e r g i d e t o g e t h e r
1 9 0
1 7 0
I S O
E
1 3 0
c
1 1 0
E9 0
0 1 2 3 4 5 6
T i m e ( h )
F I G . 1 . T i m e c o u r s e o f o e d e m a f o r m a t i o n i n d u c e d b y c a r r a g e e n i n i n t e n f e m a l e Wi s t a r r a t s .
3 9 5
P e a r l Cr u n k h o r n a n d S . C. R. M e a c o c k
a p p e a r e d t o b e m o r e e f f e c t i v e t h a n e i t h e r c o m p o u n d a l o n e b u t t h e i n c r e a s e d s u p -
p r e s s i o n w a s s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t o n l y a f t e r 2 5 h ( P < 0 0 5 ) . M e p y r a m i n e w a s
i n e f f e c t i v e a l o n e . Ho w e v e r , w h e n c o m b i n e d w i t h e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t ( b u t n o t
w i t h m e t h y s e r g i d e ) o r w i t h b o t h e l l a g i c a c i d a n d m e t h y s e r g i d e a s i g n i f i c a n t c o n t r i -
b u t i o n t o t h e s u p p r e s s i o n o f o e d e m a f o r m a t i o n w a s o b s e r v e d d u r i n g t h e f i r s t 3 5
h o u r s .
S p e c i f i c i t y o f t r e a t m e n t w i t h e l l a g i c a c i d , m e t h y s e r g i d e a n d m e p y r a m i n e
T h e r e s u l t s i n T a b l e 2 i n d i c a t e t h a t e l l a g i c a c i d d i d n o t a f f e c t t h e s i z e o f t h e s k i n
l e s i o n s c a u s e d b y i n t r a d e r m a l i n j e c t i o n o f 5 - HT , h i s t a m i n e o r b r a d y k i n i n n o r d i d
i t i n h i b i t t h e r e l e a s e o f i n f l a m m a t o r y m e d i a t o r s f r o m m a s t c e l l s b y c o m p o u n d 4 8 / 8 0 .
I t f o l l o w e d , t h e r e f o r e , t - h a t t h e t r e a t m e n t w i t h e l l a g i c a c i d h a d n o t i t s e l f c a u s e d
d e g r a n u l a t i o n o f m a s t c e l l s . T h e r e s u l t s i n T a b l e 3 s h o w t h a t m e t h y s e r g i d e a t t h e
d o s e a b l e t o s u p p r e s s c a r r a g e e n i n o e d e m a d i d n o t a n t a g o n i z e t h e i n c r e a s e i n v a s c u l a r
p e r m e a b i l i t y c a u s e d b y b r a d y k i n i n o r h i s t a m i n e b u t c o m p l e t e l y s u p p r e s s e d t h a t
d u e t o 5 - HT . F u r t h e r e x p e r i m e n t s w i t h 5 - HT e s t a b l i s h e d t h a t t h e a n t a g o n i s t
a c t i v i t y o f m e t h y s e r g i d e h a d b e g u n t o d e c r e a s e a f t e r 3 h a n d c o n s e q u e n t l y 2 h
m a i n t e n a n c e d o s e s o f m e t h y s e r g i d e w e r e g i v e n i n a l l e x p e r i m e n t s r e p o r t e d i n t h i s
s t u d y .
I S O
1 3 0
A
0 V
I 3 5
E
0
9 0
i - 7 0
u
C
5 0
3 0
1 0
T i m e ( h )
F I G . 2 . Oe d e m a f o r m a t i o n i n d u c e d
b y c a r r a g e e n i n
i n r a t s : A, u n t r e a t e d ( t w e n t y ) ; B , t r e a t e d
w i t h e l l a g i c a c i d ( n i n e t e e n ) ; C, w i t h
m e t h y s e r g i d e ( n i n e t e e n ) ; D , w i t h s a l i v a ( s i x t e e n ) ; E, w i t h
e l l a g i c a c i d a n d s a l i v a ( t w e l v e ) . V e r t i c a l b a r s s h o w + S . E.
3 9 6
I n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n 3
B e c k e r , M o t a & Wo n g ( 1 9 6 8 ) h a v e r e p o r t e d t h a t m e p y r a m i n e g i v e n i n t r a v e n o u s l y
a t a c o n c e n t r a t i o n o f e i t h e r 5 o r 0 5 m g / k g p a r t i a l l y s u p p r e s s e s t h e c u t a n e o u s
p e r m e a b i l i t y c h a n g e s i n d u c e d b y b r a d y k i n i n . T h e r e s u l t s i n T a b l e 4 s h o w t h a t w e
f o u n d t h i s e f f e c t t o b e m a r g i n a l o r a b s e n t , a n d i t w a s t h u s u n l i k e l y t h a t m e p y r a m i n e
h a d a n t a g o n i z e d k i n i n s r e l e a s e d i n t h e c a r r a g e e n i n r e a c t i o n . F u r t h e r e x p e r i m e n t s
e s t a b l i s h e d t h a t a s i n g l e i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n o f 2 - 5
m g / k g m e p y r a m i n e s u p p r e s s e d
t h e i n f l a m m a t o r y a c t i v i t y o f h i s t a m i n e f o r a t l e a s t 6 h o u r s .
1 6 0
1 4 0
1 2 0
E
. 2
0
>
1 0 0
6 6
' 6
L.
C
4 ,
U- -
O.
0
4 0
2 0
T i m e ( h )
F I G . 3 . Oe d e m a f o r m a t i o n ( S . E. ) i n d u c e d b y c a r r a g e e n i n i n a d r e n a l e c t o m i z e d r a t s : A, u n -
t r e a t e d
( f o u r t e e n ) ; B , t r e a t e d w i t h e l l a g i c a c i d ( t w e n t y ) ; C, w i t h m e t h y s e r g i d e ( t w e n t y ) .
T AB LE 1 . Ef f e c t o f e l l a g i c a c i d ( A) , m e p y r a m i n e ( B ) a n d m e t h y s e r g i d e ( C) , a l o n e a n d i n c o m b i n a t i o n ,
o n t h e i n f l a m m a t o r y r e s p o n s e o f c a r r a g e e n i n i n p a w s o f a n a e s t h e t i z e d r a t s
No . o f
T r e a t m e n t r a t s
A
B
C
A+ B
A+ C
B + C
A+ B + C
2 9
2 6
1 9
1 9
2 0
1 5
2 0
1 6
1 - 0 h
9 3 - 9 5 * 4
5 5 5 5 - 3
9 3 - 8 5 2
5 0 2 3 - 3
4 7 - 3 4 - 2
4 4 - 8 4 - 3
5 6 - 1 3 - 2
3 3 - 7 3 - 0
Av e r a g e % i n c r e a s e i n v o l u m e ( S . E. ) a t
2 - 5 h 3 5 h 4 5 h
1 0 5 6 4 - 9
5 3 9 4 - 2
1 0 7 - 2 5 - 5
6 2 - 5 3 - 6
4 2 - 4 3 - 1
4 9 - 1 5 8
6 2 - 7 2 - 9
4 6 - 0 4 - 2
1 1 2 - 8 5 - 0
6 4 - 9 4 - 3
1 1 0 - 2 5 - 0
7 4 5 + 3 5
5 1 - 5 3 - 7
5 2 1 6 - 4
7 4 * 2 4 - 0
4 8 &9 3 5
1 1 8 - 8 4 * 4
7 6 - 3 4 t 5
1 1 1 - 0 + 4 - 6
6 9 - 6 2 t 9
6 3 - 6 + 4 - 3
6 0 - 0 : 6 - 0
7 4 - 7 5 * 7
5 1 - 9 4 - 2
5 . 5 h
1 2 0 - 7 4 - 5
8 0 - 9 3 - 8
1 0 8 - 1 5 2
7 0 A4 3 - 9
7 5 - 1 4 0
5 4 5 5 6
7 3 - 6 4 - 1
5 4 - 2 5 2
3 9 7
w V
3 9 8 P e a r l Cr u n k h o r n a n d S . C. R. M e a o o c k
T AB LE 2 . Ef f e c t o f e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t o n t h e i n c r e a s e i n v a s c u l a r p e r m e a b i l i t y c a u s e d b y h i s t a m i n e ,
5 - HT , c o m p o u n d 4 8 / 8 0 a n d b r a d y k i n i n i n r a t s k i n
M e a n d i a m e t e r o f l e s i o n s ( m m s . E. )
a n d d y e i n t e n s i t y *
I n f l a m m a t o r y a g e n t
( j u g f r e e b a s e ) Wi t h o u t t r e a t m e n t Af t e r t r e a t m e n t
5 - HT 0 - 2 1 6 - 0 + 1 * 3 ( 9 ) 1 7 - 6 0 - 7 ( 8 )
0 . 1 1 4 0 0 5 ( 8 ) 1 4 - 8 0 - 2 ( 6 )
0 - 0 5 1 2 - 8 0 - 5 ( 7 ) 1 3 - 6 0 - 6 ( 6 )
0 - 0 2 5 1 1 - 0 0 - 5 ( 6 ) 9 - 8 0 - 7 ( 5 )
Hi s t a m i n e 2 - 0 1 3 A4 0 5 ( 8 ) 1 4 - 4 A0 - 7 ( 8 )
1 - 0 1 1 - 4 0 - 5 ( 7 ) 1 1 - 4 0 - 3 ( 7 )
0 5 9 - 2 + 0 - 3 ( 6 ) 9 - 2 0 - 6 ( 6 )
0 2 5 8 - 2 0 - 3 ( 4 ) 8 - 0 0 - 3 ( 4 )
Co m p o u n d 4 8 / 8 0 0 . 1 1 6 - 0 0 - 3 ( 8 ) 1 6 - 0 0 - 8
( 8 )
0 - 0 2 5 1 4 - 5 0 - 2 ( 6 ) 1 3 - 0 1 - 0 ( 6 )
0 0 0 6 1 3 - 2 0 - 3 ( 5 ) 1 0 - 8 1 0 ( 5 )
B r a d y k i n i n 2 - 0 1 4 - 6 0 - 2 ( 8 ) 1 5 - 0 0 - 0 ( 8 )
1 . 0 1 3 - 6 0 - 2 ( 6 ) 1 3 - 2 0 . 3 ( 6 )
0 - 5 1 2 - 0 0 - 5 ( 4 ) 1 2 - 8 0 t 5 ( 5 )
0 2 5 1 0 - 8 0 - 3 ( 4 ) 1 1 - 2 0 - 3 ( 4 )
*
I n t e n s i t y ( i n p a r e n t h e s e s ) i s e x p r e s s e d i n a r b i t r a r y u n i t s o n a 0 - 1 0 s c a l e .
T AB LE 3 . Ef f e c t o f m e t h y s e r g i d e b i m a l e a t e o n t h e i n c r e a s e i n v a s c u l a r p e r m e a b i l i t y c a u s e d b y b r a d y -
k i n i n , h i s t a m i n e a n d 5 - HT i n r a t s k i n
M e a n d i a m e t e r o f l e s i o n s ( m m S . E. ) a n d d y e
i n t e n s i t y *
I n f l a m m a t o r y a g e n t Wi t h o u t Af t e r m e t h y s e r g i d e Af t e r m e t h y s e r g i d e
( j g ) t r e a t m e n t ( 2 - 5 m g / k g ) ( 5 - 0 m g / k g )
B r a d y k i n i n 2 - 0 1 5 0 0 3 ( 8 ) 1 3 - 8 + 0 i 3 ( 8 ) 1 4 - 2 0 - 5 ( 8 )
1 - 0 1 2 - 6 0 - 3 ( 7 ) 1 3 - 3 0 - 5 ( 7 ) 1 2 2 0 0 7 ( 7 )
0 5 1 1 - 8 + 0 - 2 ( 6 ) 1 2 3 0 3 ( 6 ) 1 1 - 4 0 - 5 ( 7 )
0 - 2 5 1 0 - 8 + 0 - 3 ( 5 ) 1 0 5 + 0 3 ( 6 ) 1 0 - 2 + 0 - 3 ( 5 )
Hi s t a m i n e 2 - 0 1 3 - 0 0 3 ( 8 ) 1 2 2 0 7 ( 8 ) 1 2 - 4 0 - 8 ( 7 )
1 . 0 1 1 - 6 0 - 3 ( 7 ) 1 1 - 6 0 - 5 ( 6 ) 1 0 - 8 + 0 - 5 ( 7 )
0 - 5 1 0 - 2 0 - 5 ( 6 ) 1 0 - 8 0 - 8 ( 5 ) 7 T 4 0 - 2 ( 5 )
0 2 5 6 - 8 0 - 5 ( 4 ) 7 - 8 0 - 2 ( 3 ) 6 - 4 0 - 6 ( 4 )
5 - HT 0 - 2 1 8 - 4 0 - 2 ( 8 ) 0 0 ( 0 ) 0 . 0 ( 0 )
*
I n t e n s i t y ( i n p a r e n t h e s e s ) i s e x p r e s s e d i n a r b i t r a r y u n i t s o n a 0 - 1 0 s c a l e .
T AB LE 4 . Ef f e c t o f m e p y r a m i n e m a l e a t e ( 2 - 5 m g / k g ; i . v . ) o n t h e i n c r e a s e i n v a s c u l a r p e r m e a b i l i t y
c a u s e d b y b r a d y k i n i n a n d h i s t a m i n e i n r a t s k i n
M e a n d i a m e t e r o f l e s i o n s ( m m s . E. )
a n d d y e i n t e n s i t y *
I n f l a m m a t o r y a g e n t
( , g ) Wi t h o u t t r e a t m e n t Af t e r m e p y r a m i n e
B r a d y k i n i n 2 0 1 4 ' 6 0 t 2 ( 8 ) 1 3 - 8 + 0 - 3 ( 8 )
1 0 1 3 - 6 0 - 2 ( 6 ) 1 2 - 5 0 - 3 ( 6 )
0 - 5 1 2 - 0 0 - 5 ( 4 ) 1 1 - 5 0 - 3 ( 5 )
0 - 2 5 1 0 - 8 0 - 3 ( 4 )
9 - 8 0 - 5 ( 4 )
Hi s t a m i n e 2 - 0 1 3 - 0 0 - 3 ( 8 ) 0 0 ( 0 )
*
I n t e n s i t y ( i n p a r e n t h e s e s ) i s e x p r e s s e d i n a r b i t r a r y u n i t s o n a 0 - 1 0 s c a l e .
I n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n
Ki n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s
Ki n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s o f b l o o d w e r e m e a s u r e d e i t h e r 0 5 h o r 2 5 h a f t e r t h e
f i n a l i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d a n d / o r r a t s a l i v a . F r o m t h e r e s u l t s g i v e n i n T a b l e 5
i t w a s c o n c l u d e d t h a t ( a ) b o t h e l l a g i c a c i d ( 3 x 0 5 m l , 0 - 2 m M ) a n d s a l i v a ( 3 x 0 5
m l ) c a u s e d a p a r t i a l d e p l e t i o n o f k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s , ( b ) t h e r e w a s n o s i g -
n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n t h e e f f e c t s o f e i t h e r t r e a t m e n t , ( c ) t h e e f f e c t s o f e a c h w e r e
n o t a d d i t i v e a n d d i d n o t l e a d t o a t o t a l d e p l e t i o n o f b l o o d k i n i n o g e n a n d ( d )
k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s h a d n o t b e g u n t o r e c o v e r 2 - 5 h l a t e r . I n j e c t i o n o f t w i c e
t h e q u a n t i t y o f e l l a g i c a c i d i n t o t w o a n i m a l s h a d n o a d d i t i o n a l e f f e c t o n k i n i n o g e n
c o n c e n t r a t i o n s 3 0 m i n l a t e r .
Co m p l e m e n t c o n c e n t r a t i o n s
T h e e f f e c t s o n t o t a l h a e m o l y t i c c o m p l e m e n t c o n c e n t r a t i o n s o f i n t r a v e n o u s i n j e c -
t i o n s o f e i t h e r e l l a g i c a c i d o r s a l i v a , o r o f s u b c u t a n e o u s i n j e c t i o n s i n t o t h e r a t p a w
o f 1 % c a r r a g e e n i n ( 0 1 m l ) a r e i l l u s t r a t e d i n F i g . 4 . El l a g i c a c i d t r e a t m e n t c a u s e d
a t e m p o r a r y i n c r e a s e i n c o m p l e m e n t c o n c e n t r a t i o n s w h i c h w a s s i g n i f i c a n t a t 3 0
m i n u t e s . On t h e o t h e r h a n d , s a l i v a c a u s e d a 2 0 % d e c r e a s e i n c o m p l e m e n t c o n -
c e n t r a t i o n s w h i c h h a d o n l y r e c o v e r e d b y 5 % a t 2 - 5 h o u r s . Lo c a l a c t i v a t i o n o f
c o m p l e m e n t i n t h e r a t p a w b y c a r r a g e e n i n , i f i t o c c u r r e d , d i d n o t l e a d t o a d e c r e a s e
i n s e r u m c o m p l e m e n t c o n c e n t r a t i o n s . I n f a c t a t e m p o r a r y i n c r e a s e w a s o b s e r v e d
T AB LE 5 . Re s i d u a l k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s o f r a t p l a s m a a f t e r i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d a n d / o r r a t s a l i v a
T i m e o f P l a s m a k i n i n o g e n l e v e l s
T r e a t m e n t s a m p l i n g ( h ) No . o f r a t s ( B k u n i t s / m l + s . E. )
No t r e a t m e n t 0 1 0
3 - 5 1 0 - 2 3
El l a g i c a c i d 0 5 5 1 - 0 5 O0 - 0 5
El l a g i c a c i d 2 5 5
1 - 2 0 + 0 0 8
S a l i v a 0 5 7 1 - 3 5 0 - 1 2
S a l i v a 2 5 7 1 - 3 7 0 - 2 4
El l a g i c a c i d , s a l i v a 0 5 7 1 - 2 3 0 - 2 7
El l a g i c a c i d , s a l i v a 2 5 4 1 - 1 3 0 - 3 5
3 4 0 _ l
2 6 0
1 4 0 ,
0 1 2 3 4 5 6
T i m e ( h )
F I G . 4 . Co n c e n t r a t i o n s o f s e r u m
c o m p l e m e n t a f t e r s u b c u t a n e o u s i n j e c t i o n i n t o t h e p a w o f
c a r r a g e e n i n ( - ) , i n t r a v e n o u s
i n j e c t i o n
o f
e l l a g i c a c i d - - - ) a n d i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n o f
r a t s a l i v a (
3 9 9
P e a r l Cr u n k h o r n a n d S . C. R. M e a c o c k
w h i c h w a s s i g n i f i c a n t a t 2 h ; v a l u e s a t 4 h a n d 6 h w e r e n o t s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t
f r o m c o n c e n t r a t i o n s b e f o r e c a r r a g e e n i n i n j e c t i o n .
D i s c u s s i o n
G a u t v i k & Ru g s t a d ( 1 9 6 7 ) f o u n d t h a t i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d i n r a t s
l e d t o t h e e l i m i n a t i o n o f k i n i n o g e n s u b s t r a t e 1 ( J a c o b s e n , 1 9 6 6 ) f r o m t h e c i r c u l a t i o n
f o r a t l e a s t 6 h o u r s . T h e y r e p o r t e d t h a t b l o o d p r e s s u r e r e t u r n e d t o n o r m a l w i t h i n
1 0 m i n a n d t h a t e l l a g i c a c i d i t s e l f c o u l d n o l o n g e r b e d e t e c t e d i n t h e c i r c u l a t i o n
a f t e r 1 5 m i n u t e s . T r e a t m e n t w i t h e l l a g i c a c i d w a s t h e r e f o r e e x p e c t e d t o p r o v i d e a
p e r i o d o f a l m o s t 6 h i n w h i c h t o a s s e s s t h e c o n t r i b u t i o n o f k i n i n s t o t h e i n f l a m -
m a t o r y r e a c t i o n c a u s e d b y a n i n j e c t i o n o f c a r r a g e e n i n . F u r t h e r m o r e , t h i s p e r i o d o f
k i n i n o g e n d e p l e t i o n c o v e r e d t h e d u r a t i o n o f t h e t e s t s m o s t w i d e l y u s e d t o a s s e s s
t h e a c t i v i t y o f p o t e n t i a l a n t i - i n f l a m m a t o r y d r u g s .
Oe d e m a f o r m a t i o n i n r a t s d e p l e t e d o f k i n i n o g e n b y e l l a g i c a c i d , a n d a l s o b y r a t
s a l i v a , w a s c o n s i d e r a b l y l e s s t h a n t h a t f o u n d i n u n t r e a t e d r a t s ( F i g . 2 ) . T h e s e
r e s u l t s s u p p o r t t h e c o n c l u s i o n s o f D i Ro s a & S o r r e n t i n o ( 1 9 6 8 ; 1 9 7 0 ) t h a t k i n i n s
r e l e a s e d d u r i n g t h e i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n h a d a n i m p o r t a n t r o l e i n o e d e m a f o r m a -
t i o n . T h e l a r g e r e f f e c t o f s a l i v a w a s a t f i r s t a t t r i b u t e d t o g l a n d u l a r k a l l i k r e i n w h i c h
w o u l d a t t a c k k i n i n o g e n s u b s t r a t e 2 , s i n c e G a u t v i k & Ru g s t a d ( 1 9 6 7 ) s t a t e t h a t t h i s
s u b s t r a t e i s n o t a f f e c t e d b y e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t . Ho w e v e r , m e a s u r e m e n t o f p l a s m a
k i n i n o g e n c o n c e n t r a t i o n s a f t e r t r e a t m e n t i n v i v o w i t h e l l a g i c a c i d o r s a l i v a ( T a b l e
5 ) s h o w e d t h a t e i t h e r o f t h e s e r e a g e n t s d e p l e t e d t h e k i n i n o g e n b y a n a m o u n t
e q u i v a l e n t t o m o r e t h a n 1 0 t i m e s t h e q u a n t i t y o f s u b s t r a t e 1 ( 2 0 0 n g b r a d y k i n i n
e q . / m l p l a s m a ) m e a s u r e d b y G a u t v i k a n d Ru g s t a d . T h e s e r e s u l t s c l e a r l y i n d i c a t e
t h a t t r e a t m e n t i n v i v o w i t h e l l a g i c a c i d c a u s e s a l o s s o f m o r e t h a n s u b s t r a t e 1 .
P r o b a b l y t h e c o n c e n t r a t i o n s o f s u b s t r a t e 2 w e r e a l s o d i m i n i s h e d s i n c e t h e e f f e c t s o f
e l l a g i c a c i d a n d s a l i v a w e r e n o t a d d i t i v e , a c o n c l u s i o n w h i c h i s c o n t r a r y t o t h a t o f
G a u t v i k a n d Ru g s t a d . I t i s i n t e r e s t i n g t h a t a f t e r a l l o f t h e s e t r e a t m e n t s a c o n -
s i d e r a b l e a m o u n t o f k i n i n o g e n r e m a i n e d , w h i c h w a s p r e s u m a b l y n e i t h e r s u b s t r a t e
1 n o r 2 .
I n o t h e r s t u d i e s ( M a r s d e n , Cr u n k h o r n & M e a c o c k , u n p u b l i s h e d r e s u l t s ) i t h a s
b e e n s h o w n t h a t m a l e o p i m a r i c a c i d , a n i n h i b i t o r o f c o m p l e m e n t a c t i v a t i o n ( G l o v s k y ,
B e c k e r & Ha l b r o o k , 1 9 6 8 ) , c a n s u p p r e s s t h e c a r r a g e e n i n r e a c t i o n . Ca r r a g e e n i n
a c t i v a t e s t h e c o m p l e m e n t s y s t e m ( D a v i e s , 1 9 6 5 ; B o r s o s , Ra p p & Cr i s l e r , 1 9 6 5 ;
Wi l l o u g h b y , Co o t e & T u r k , 1 9 6 9 ) a n d t h e r e f o r e a r e d u c t i o n o f c o m p l e m e n t c o n -
c e n t r a t i o n s b y e l l a g i c a c i d o r s a l i v a , i f i t o c c u r r e d , m i g h t b e e x p e c t e d
t o h a v e a n
a n t i - i n f l a m m a t o r y e f f e c t . M e a s u r e m e n t s o f s e r u m c o n c e n t r a t i o n s o f c o m p l e m e n t
( F i g . 4 ) d i d n o t i n d i c a t e c o m p l e m e n t a c t i v a t i o n b y t h e s u b c u t a n e o u s i n j e c t i o n o f
c a r r a g e e n i n , b u t t h i s c a n n o t b e t a k e n a s e v i d e n c e t h a t c o m p l e m e n t a c t i v a t i o n d i d
n o t o c c u r l o c a l l y a t t h e s i t e o f i n f l a m m a t i o n . El l a g i c
a c i d a p p e a r e d
t o c a u s e a
t e m p o r a r y i n c r e a s e i n c o m p l e m e n t
c o n c e n t r a t i o n s a n d t h e r e f o r e i t s a n t i - i n f l a m m a t o r y
a c t i v i t y c o u l d n o t b e a t t r i b u t e d t o t h e s e e f f e c t s . Ra t s a l i v a l o w e r e d c o m p l e m e n t
c o n c e n t r a t i o n s b y a p p r o x i m a t e l y 2 0 % a n d t h i s d i f f e r e n c e i n b e h a v i o u r o f
e l l a g i c
a c i d a n d s a l i v a m a y h a v e c o n t r i b u t e d t o t h e i r d i f f e r i n g a n t i - i n f l a m m a t o r y a c t i v i t y .
I t s t i l l r e m a i n s t o b e e x p l a i n e d
h o w t r e a t m e n t w i t h b o t h
e l l a g i c
a c i d a n d s a l i v a
w a s m o r e e f f e c t i v e i n t h e f i r s t 3 h t h a n t r e a t m e n t w i t h s a l i v a a l o n e . T h e a n i m a l s
r e m a i n e d e q u a l l y a l e r t a n d a p p a r e n t l y
n o r m a l a f t e r a l l o f t h e t r e a t m e n t s , b u t i t i s
4 0 0
I n f l a m m a t o r y r e s p o n s e t o c a r r a g e e n i n 4 0 1
p o s s i b l e t h a t d u e t o e f f e c t s o t h e r t h a n t h o s e o n t h e k i n i n s y s t e m , t h e c o m b i n e d
s u b s t a n c e s p r o d u c e d a g r e a t e r c a r d i o v a s c u l a r r e s p o n s e t h a n e i t h e r g i v e n s i n g l y .
M e t h y s e r g i d e h a d m a r k e d a n t i - i n f l a m m a t o r y a c t i v i t y ( F i g . 2 a n d T a b l e 1 ) , f r o m
w h i c h i t w a s c o n c l u d e d t h a t 5 - HT c o n t r i b u t e d s u b s t a n t i a l l y t o o e d e m a f o r m a t i o n
i n t h e f i r s t f e w h o u r s . T h e s e f i n d i n g s a r e c o n t r a r y t o t h o s e r e p o r t e d b y Wi n t e r
( 1 9 6 5 ) w h o u s e d c y p r o h e p t a d i n e a n d m e t h d i l a z i n e , b o t h o f w h i c h a n t a g o n i z e 5 - HT ,
b u t a r e i n a g r e e m e n t w i t h t h e r e s u l t s o f F e k e t e & Ku r t i ( 1 9 7 0 ) w h o u s e d m e t h y -
s e r g i d e , a n d t h e r e s u l t s o f B h a l l a & T a n g r i ( 1 9 7 0 ) w h o u s e d b r o m o l y s e r g i c a c i d .
Ex p e r i m e n t s i n a d r e n a l e c t o m i z e d a n i m a l s ( F i g . 3 ) s h o w e d t h a t t h e a n t i - i n f l a m m a t o r y
a c t i v i t y o f e l l a g i c a c i d a n d m e t h y s e r g i d e c a n n o t b e a t t r i b u t e d t o a d r e n a l s t i m u l a t i o n .
M e p y r a m i n e a l o n e h a d n o e f f e c t o n o e d e m a f o r m a t i o n ( T a b l e 1 ) , b u t i n c o m -
b i n a t i o n w i t h e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t , w i t h o r w i t h o u t m e t h y s e r g i d e , i t r e v e a l e d t h a t
h i s t a m i n e p l a y e d a m i n o r r o l e i n o e d e m a f o r m a t i o n d u r i n g t h e f i r s t 3 h o u r s .
I t w a s i m p o r t a n t t o e s t a b l i s h t h e d e g r e e o f s p e c i f i c a c t i v i t y o f t h e v a r i o u s t r e a t -
m e n t s g i v e n t o t h e r a t s b e f o r e t h e i n d u c t i o n o f c a r r a g e e n i n i n f l a m m a t i o n . V a s c u l a r
p e r m e a b i l i t y s t u d i e s i n d i c a t e d t h a t e l l a g i c a c i d t r e a t m e n t d i d n o t i n t e r f e r e w i t h t h e
n o r m a l r e s p o n s e s i n s k i n o f h i s t a m i n e , 5 - HT , b r a d y k i n i n o r c o m p o u n d 4 8 / 8 0 ( T a b l e
2 ) . Al s o , m e p y r a m i n e a n d m e t h y s e r g i d e , a t t h e d o s e s u s e d i n t h e c a r r a g e e n i n
e x p e r i m e n t s , c o m p l e t e l y a n t a g o n i z e d h i s t a m i n e a n d 5 - HT , r e s p e c t i v e l y , a n d d i d n o t
a f f e c t t h e s k i n r e s p o n s e s o f b r a d y k i n i n ( T a b l e s 3 a n d 4 ) .
Af t e r a l l o w i n g f o r t h e c o n t r i b u t i o n s o f k i n i n s , 5 - HT , h i s t a m i n e a n d a c t i v a t e d
c o m p l e m e n t t h e r e r e m a i n s a c o n s i d e r a b l e i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n n o t a c c o u n t e d f o r ,
e s p e c i a l l y a f t e r t h e f i r s t 4 h o u r s . T h e d i r e c t e f f e c t s o f t h e m e d i a t o r s s t u d i e d a r e
l i k e l y t o b e l e s s i m p o r t a n t a f t e r t h e f i r s t 3 - 4 h , w h e n l e u c o c y t e s e m i g r a t e i n t o t h e
t i s s u e ( D . A. Wi l l o u g h b y , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . I t i s p o s s i b l e t h a t t h e s e c e l l s
r e l e a s e p r o t e o l y t i c e n z y m e s a n d a l s o i n i t i a t e t h e l o c a l g e n e r a t i o n o f p r o s t a g l a n d i n s
( Wi l l i s , 1 9 6 9 ; An d e r s o n , B r o c k l e h u r s t & Wi l l i s , 1 9 7 1 ) . T h e y m i g h t t h u s m a i n t a i n
t h e i n c r e a s e d v a s c u l a r p e r m e a b i l i t y a n d c o u l d c a u s e d a m a g e t o c o n n e c t i v e t i s s u e
w i t h t h e r e l e a s e o r f o r m a t i o n o f a d d i t i o n a l u n k n o w n m e d i a t o r s .
We w i s h t o a c k n o w l e d g e t h e h e l p f u l a d v i c e a n d c r i t i c i s m o f D r . W. E. B r o c k l e h u r s t . Co m -
p o u n d 4 8 / 8 0 w a s g e n e r o u s l y s u p p l i e d b y t h e We l l c o m e Re s e a r c h La b o r a t o r i e s , B e c k e n h a m .
REF ERENCES
AND ERS ON, A. J . , B ROCKLEHURS T , W. E. & WI LLI S , A. L. ( 1 9 7 1 ) . Ev i d e n c e f o r t h e r o l e o f l y s o s o m e s
i n t h e f o r m a t i o n o f p r o s t a g l a n d i n s d u r i n g c a r r a g e e n i n - i n d u c e d i n f l a m m a t i o n i n t h e r a t . P h a r m a c .
Re s . Co m m . , i n t h e P r e s s .
B ECKER, E. L. , M OT A, I . & WONG , D . ( 1 9 6 8 ) . I n h i b i t i o n b y a n t i h i s t a m i n e s o f t h e v a s c u l a r p e r m e -
a b i l i t y i n c r e a s e i n d u c e d b y b r a d y k i n i n . B r . J . P h a r m a c . , 3 4 , 3 3 0 - 3 3 6 .
B HALLA, T . N. & T ANG Ri , K. K. ( 1 9 7 0 ) . T h e t i m e c o u r s e o f t h e c a r r a g e e n a n - i n d u c e d o e d e m a o f t h e
p a w o f t h e r a t . J . P h a r m . P h a r m a c . , 2 2 , 7 2 1 .
B ORS OS , T . , RAP P , H. J . & CRI S LER, C. ( 1 9 6 5 ) . T h e i n t e r a c t i o n b e t w e e n c a r r a g e e n a n a n d t h e f i r s t
c o m p o n e n t o f c o m p l e m e n t . J . I m m u n o l . , 9 4 , 6 6 2 - 6 6 6 .
B ROCKLEHURS T , W. E. & Z Er r u N, I . J . ( 1 9 6 7 ) . D e t e r m i n a t i o n o f p l a s m a k i n i n a n d k i n i n o g e n l e v e l s
i n m a n . J . P h y s i o l . , Lo n d . , 1 9 1 , 4 1 7 - 4 2 6 .
D AV I ES , G . E. ( 1 9 6 5 ) . I n h i b i t i o n o f c o m p l e m e n t b y c a r r a g e e n i n . M o d e o f a c t i o n , e f f e c t o n a l l e r g i c
r e a c t i o n s a n d o n c o m p l e m e n t o f v a r i o u s s p e c i e s . I m m u n o l o g y , 8 , 2 9 1 - 3 0 3 .
D i ROS A, M . & S ORRENT I NO, L. ( 1 9 6 8 ) . T h e m e c h a n i s m o f t h e i n f l a m m a t o r y e f f e c t o f c a r r a g e e n i n .
Eu r . J . P h a r m a c . , 4 , 3 4 0 - 3 4 2 .
D i Ro S A, M . & S ORRENT I NO, L. ( 1 9 7 0 ) . S o m e
p h a r m a c o d y n a m i c p r o p e r t i e s o f c a r r a g e e n i n i n t h e
r a t . B r . J . P h a r m a c . , 3 8 , 2 1 4 - 2 2 0 .
F EKET E, M . & KURT I , A. M . ( 1 9 7 0 ) . Ef f e c t o f m o n o a m i n e o x i d a s e i n h i b i t o r s o n r a t p a w o e d e m a
i n d u c e d b y v a r i o u s p h l o g i s t i c a g e n t s . Eu r . J .
P h a r m a c . , 1 0 , 2 6 8 - 2 7 6 .
G LOV S KY , M . M . , B ECKER, E. L. & HALB ROOK, N. J . ( 1 9 6 8 ) . I n h i b i t i o n o f g u i n e a p i g c o m p l e m e n t
b y m a l e o p i m a r i c a c i d a n d o t h e r d e r i v a t i v e s o f
l e v o p i m a r i c a c i d . J . I m m u n o l . , 1 0 0 , 9 7 9 - 9 9 0 .
4 0 2 P e a r l Cr u n k h o r n a n d S . C. R. M e a c o c k
G AUT V I K, K. M . & RUG S T AD , H. E. ( 1 9 6 7 ) . Ki n i n f o r m a t i o n a n d k i n i n o g e n d e p l e t i o n i n r a t s a f t e r
i n t r a v e n o u s i n j e c t i o n o f e l l a g i c a c i d . B r . J . P h a r m a c . Ch e m o t h e r . , 3 1 , 3 9 0 - 4 0 0 .
J ACOB S EN, S . ( 1 9 6 6 ) . S u b s t r a t e s f o r p l a s m a k i n i n - f o r m i n g e n z y m e s i n r a t a n d g u i n e a p i g p l a s m a .
B r . J . P h a r m a c . Ch e m o t h e r . , 2 8 , 6 4 - 7 2 .
ROS ENB ERG , L. T . & T ACHI B ANA, D . K. ( 1 9 6 2 ) . Ac t i v i t y o f m o u s e c o m p l e m e n t . J . I m m u n o l . , 8 9 ,
8 6 1 - 8 6 7 .
WI LLI S , A. L. ( 1 9 6 9 ) . P a r a l l e l a s s a y o f p r o s t a g l a n d i n - l i k e a c t i v i t y i n r a t i n f l a m m a t o r y e x u d a t e b y
m e a n s o f c a s c a d e s u p e r f u s i o n . J . P h a r m . P h a r m a c . , 2 1 , 1 2 6 - 1 2 8 .
WI LLOUG HB Y , D . A. , COOT E, E. & T URK, J . L. ( 1 9 6 9 ) . Co m p l e m e n t i n a c u t e i n f l a m m a t i o n . J . P a t h .
9 7 , 2 9 5 - 3 0 5 .
WI NT ER, C. A. , RI S LEY , E. A. & Nu s s , G . W. ( 1 9 6 2 ) . Ca r r a g e e n i n - i n d u c e d o e d e m a i n h i n d p a w o f
t h e r a t a s a n a s s a y f o r a n t i - i n f l a m m a t o r y d r u g s . P r o c . S o c . e x p . B i o l . M e d . , 1 1 1 , 5 4 4 - 5 4 7 .
WI NT ER, C. A. , RI S LEY , E. A. & Nu s s , G . W. ( 1 9 6 3 ) . An t i - i n f l a m m a t o r y a n d a n t i p y r e t i c a c t i v i t i e s
o f i n d o m e t h a c i n , l ( p - c h l o r o b e n z o y l ) - 5 - m e t h o x y - 2 - m e t h y l - i n d o l e - 3 - a c e t i c a c i d . J . P h a r m a c . , 1 4 1 ,
3 6 9 - 3 7 6 .
WI NT ER, C. A. ( 1 9 6 5 ) . An t i - i n f l a m m a t o r y t e s t i n g m e t h o d s : c o m p a r a t i v e e v a l u a t i o n o f i n d o m e t h a c i n
a n d o t h e r a g e n t s . I n : No n - s t e r o i d a l An t i - i n f l a m m a t o r y D r u g s , e d . G a r a t t i n i , S . & D u k e s , M . N. G . ,
p p . 1 9 0 - 2 0 2 . Am s t e r d a m : Ex c e p t a M e d i c a F o u n d a t i o n .
( Re c e i v e d M a r c h 1 0 , 1 9 7 1 )