P l a n t P h y s i o l .

( 1 9 7 7 ) 6 0 , 4 3 0 - 4 3 2
E f f e c t s o f T e m p e r a t u r e o n t h e H i l l R e a c t i o n a n d
P h o t o p h o s p h o r y l a t i o n i n I s o l a t e d C a c t u s C h l o r o p l a s t s '
R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n A p r i l 5 , 1 9 7 7 a n d i n r e v i s e d f o r m J u n e 1 , 1 9 7 7
B . C L I F F O R D G E R W I C K , G E O R G E J . W I L L I A M S , I I I , A ND E R NE S T G . U R I B E
D e p a r t m e n t o f B o t a n y , W a s h i n g t o n S t a t e U n i v e r s i t y , P u l l m a n , W a s h i n g t o n 9 9 1 6 4
A B S T R A C T
C h l o r o p a s h s i s o l a t e d f r o m O p u n i a p o l y a c a n t h a H a w . ( C a c t a c e a e )
a r e c a p a b l e o f n o n c y d i c e l e c t r o n t r n p o r t a n d A T P s y n t h e s i s . H i l l
r e a c t i o n r a t e s , m e a s u r e d b y 0 2 e v o l u t i o n o r b y f e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n ,
i n c e a s e w i t h i n t e m p e r t r e t o a p p r o x i m a t e l y 4 0 C . T h e t e m -
p e r a t u r e o p t i m u m o f NA D P r e d u c t i o n i s 4 2 C w h i l e t h e o p t i m u m f o r
n o n c y c l i c p h o t o p b o s p h o r y l a t i o n i s 3 5 C . NA D P - l i ke d p h o s p h o r y l a t i o n
e h i b i t s a h i g h e r c o u p l i n g t i o ( P / e 2 ) t h a f e r r i c y a n i d e - l i ke d p h o t o -
p h o s p h o r y l a t i o n . T h e t e m p e r a t u r e o p t i m a f o r p h o t o c h e m i c a l e n e r g y
p r o d u c t i o n c o r r e l a t e w i t h p h o t o s y n t h e t i c p r o p e r t i e s o f C r a s s u l a c e a n a c i d
m e t a b o l i s m ( C A M ) p l a n t s a n d a r e d i s c u s s e d i n r e b t i o n t o t h e o p e r a t i o n
o f C A M a t h i g h t i s s e t e m p e r a t u r e .
C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o l i s m i s c h a r a c t e r i z e d b y a n i n i t i a l .
n o n a u t o t r o p h i c f i x a t i o n o f C O 2 i n t o o r g a n i c a c i d s a t n i g h t ( 1 3 ) .
T h e a c i d s a r e d e c a r b o x y l a t e d d u r i n g t h e d a y a n d t h e C O 2 g e n e r -
a t e d i s r e f i x e d i n t o s u g a r s v i a t h e p e n t o s e p h o s p h a t e p a t h w a y
( 1 1 ) . T h e o p e r a t i o n o f t h i s p a t h w a y i s d e p e n d e n t u p o n t h e
p h o t o c h e m i c a l p r o d u c t i o n o f b o t h NA D P H a n d A T P . T h e r e i s
l i t t l e i n f o r m a t i o n a v a i l a b l e o n p h o t o c h e m i c a l p r o c e s s e s i n C A M 2
p l a n t s a n d i n p a r t i c u l a r h o w t h e s e p r o c e s s e s m a y c o m p l e m e n t
t h i s f o r m o f c a r b o n m e t a b o l i s m . T o i n v e s t i g a t e t h i s r e l a t i o n s h i p
w e h a v e c h o s e n t h e c a c t u s O p u n t i a p o l y a c a n t h a f r o m a p l a n t
c o m m u n i t y c h a r a c t e r i z e d b y w a r m t e m p e r a t u r e s . I n t h i s p a p e r
w e r e p o r t t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e o n t h e a b i l i t y o f c h l o r o p l a s t s
i s o l a t e d f r o m 0 . p o l y a c a n t h a , t o e v o l v e 0 2 , p h o t o r e d u c e f e r r i c y -
a n i d e a n d NA D P , a n d g e n e r a t e A T P .
M A T E R I A L S A ND M E T H O D S
P l a n t M a t e r i a l . P l a n t s o f 0 . p o l y a c a n t h a H a w . w e r e c o l l e c t e d
a t t h e I B P f i e l d s t a t i o n i n C o l o r a d o ( s h o r t g r a s s p r a i r i e ) a n d
t r a n s p o r t e d t o W a s h i n g t o n S t a t e U n i v e r s i t y . P l a n t s w e r e p r e -
t r e a t e d i n a g r o w t h c h a m b e r p r o g r a m m e d f o r a 1 5 - h r p h o t o p e -
r i o d a n d a 2 5 / 1 5 C t h e r m o p e r i o d f o r a m i n i m u m o f 2 w e e ks
p r i o r t o c h l o r o p l a s t e x t r a c t i o n . Qu a n t u m i r r a d i a n c e a t p l a n t
h e i g h t v a r i e d f r o m 3 0 0 t o 6 0 0 , u E
.
m - 2 * s e c - ' . P l a n t s w e r e g r o w n
u n d e r w e l l w a t e r e d c o n d i t i o n s a n d w e r e s u p p l i e d w i t h n u t r i e n t
s o l u t i o n w e e kl y .
I s o l a t i o n o f C h l o r o p l a s t s . Y o u n g , a c t i v e l y e x p a n d i n g s t e m s
w e r e c o l l e c t e d 6 t o 7 h r i n t o t h e l i g h t p e r i o d . A f t e r t h i s m a t e r i a l
w a s o b t a i n e d a l l f u r t h e r o p e r a t i o n s w e r e p e r f o r m e d i n d i m l i g h t
a n d a t 2 C . S t e m s w e r e c u t i n t o s m a l l p i e c e s w h i l e i m m e r s e d i n
i c e - c o l d e x t r a c t i o n m e d i u m ( 5 0 m m T r i c i n e [ p H 8 . 1 ] , 0 . 5 M
I
P a r t i a l f i n a n c i a l s u p p o r t w a s p r o v i d e d b y Na t i o n a l S c i e n c e F o u n d a -
t i o n G r a n t B M S 7 4 - 0 7 8 9 4 .
2
A b b r e v i a t i o n : C A M : C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o l i s m .
s o r b i t o l , 5 0 m m Na C l , 5 m m E D T A , m M M g C l 2 , a n d 0 . 5 m g / m l
B S A ) i n a r a t i o o f 2 0 m l o f e x t r a c t i o n m e d i u m / g o f p l a n t
m a t e r i a l . T h e c u t p i e c e s w e r e i n f i l t r a t e d i n t h i s m e d i u m u n d e r
v a c u u m f o r 5 m i n t o m a x i m i z e c h l o r o p l a s t s t a b i l i t y ( 7 ) , t h e n
g r o u n d f o r 1 2 s e c a t h a l f - l i n e v o l t a g e a n d 8 s e c a t f u l l l i n e v o l t a g e
i n a S o r v a l l O m n i m i x e r . T o r e m o v e w h o l e c e l l s , t h e p r e p a r a t i o n
w a s a c c e l e r a t e d t o 1 , 0 0 0 g a n d a l l o w e d t o d e c e l e r a t e i n a S o r v a l l
R C 2 - B c e n t r i f u g e . T h e s u p e r n a t a n t w a s t r a n s f e r r e d t o n e w t u b e s
a n d c e n t r i f u g e d f o r 5 m i n a t 3 , 0 0 0 g a t 2 C . T h e c h l o r o p l a s t
p e l l e t w a s r e s u s p e n d e d i n e x t r a c t i o n m e d i u m w i t h o u t E D T A .
C h l o r o p l a s t s p r e p a r e d i n t h i s m a n n e r w e r e s t a b l e f o r o v e r 2 h r i n
t h e i r c a p a c i t y f o r b o t h e l e c t r o n t r a n s p o r t a n d p h o t o p h o s p h o r y l a -
t i o n a n d a l l e x p e r i m e n t s w e r e c o m p l e t e d w i t h i n t h i s t i m e p e r i o d .
M e a s u r e m e n t s o f 0 2 e v o l u t i o n , f e r r i c y a n i d e a n d NA D P r e d u c -
t i o n , a n d p h o s p h a t e e s t e r i f i c a t i o n w e r e r e p e a t e d o n t w o t o f o u r
s e p a r a t e c h l o r o p l a s t e x t r a c t i o n s . C h l c o n c e n t r a t i o n s w e r e d e t e r -
m i n e d u s i n g t h e m e t h o d o f A r n o n ( 1 ) .
I s o l a t e d c h l o r o p l a s t s w e r e p r e p a r e d f o r e l e c t r o n m i c r o s c o p y
b y f i x i n g i n 2 % g l u t a r a l d e h y d e b u f f e r e d w i t h 1 0 0 m m K - p h o s -
p h a t e b u f f e r ( p H 7 . 3 ) . T h e y w e r e s u b s e q u e n t l y p o s t f i x e d w i t h
O S 0 4 , d e h y d r a t e d t h r o u g h a s t a n d a r d s e r i e s o f e t h a n o l , a n d
e m b e d d e d i n L a d d P l a s t i c . T h e c h l o r o p l a s t s w e r e s t a i n e d w i t h
u r a n y l a c e t a t e a n d l e a d c i t r a t e a n d e x a m i n e d u s i n g a H i t a c h i
H U - 1 2 5 e l e c t r o n m i c r o s c o p e .
0 2 E v o l u t i o n . 0 2 e v o l u t i o n w a s m o n i t o r e d o v e r a t e m p e r a t u r e
r a n g e o f 1 5 t o 4 5 C b y a C l a r k- t y p e 0 2 e l e c t r o d e . L i g h t , p r o -
v i d e d b y a p r o j e c t o r b u l b , w a s f i l t e r e d t h r o u g h 1 2 c m o f c o p p e r
s u l f a t e s o l u t i o n a n d a n a d d i t i o n a l 8 c m o f w a t e r . T h e r e a c t i o n
m i x t u r e ( 5 . 8 m l ) , c o n t a i n i n g 8 6 m m s o r b i t o l , 5 0 m m T r i c i n e ( p H
8 . 1 ) , 5 0 m m Na C l , 5 m M M g C l 2 , 2 m m f e r r i c y a n i d e , a n d c h l o r o -
p l a s t s ( 2 0 , u g C h l / m l ) , w a s a l l o w e d t o e q u i l i b r a t e f o r 5 m i n a t t h e
d e s i r e d t e m p e r a t u r e p r i o r t o i l l u m i n a t i o n . 0 2 e v o l u t i o n w a s
m o n i t o r e d o n a s t r i p c h a r t r e c o r d e r a n d r a t e s w e r e c a l c u l a t e d
f r o m a n i n i t i a l l i n e a r p o r t i o n o f t h e r e c o r d i n g .
F e r r i c y a n i d e a n d NA D P R e d u c t i o n . F e r r i c y a n i d e a n d NA D P
r e d u c t i o n w e r e d e t e r m i n e d b y t h e s p e c t r o p h o t o m e t r i c m e t h o d s
o f T r e b s t ( 1 8 ) , a n d o v e r s i m i l a r t e m p e r a t u r e r a n g e s a s 0 2 e v o l u -
t i o n . F e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n w a s m e a s u r e d u s i n g a m i x t u r e ( 1 . 4 5
m l ) c o n t a i n i n g c h l o r o p l a s t s ( 8 - 1 2 , u g C h l / m l ) ; 8 6 m m s o r b i t o l ,
5 0 m M T r i c i n e ( p H 8 . 1 ) , 5 0 m M Na C l , 5 m M M g C l 2 , 2 m M
K 2 H P O 4 , 2 m m A D P , a n d 1 m m f e r r i c y a n i d e . I m m e d i a t e l y
f o l l o w i n g 1 m i n o f s a t u r a t i n g i r r a d i a n c e , t r i c h l o r o a c e t i c a c i d w a s
a d d e d t o a f i n a l c o n c e n t r a t i o n o f 2 %. C h l o r o p l a s t s w e r e p e l l e t e d
b y c e n t r i f u g a t i o n a n d t h e a b s o r b a n c e o f t h e s u p e r n a t a n t d e t e r -
m i n e d a t 4 2 0 n m . D a r k c o n t r o l s s h o w e d n o f e r r i c y a n i d e r e d u c -
t i o n .
T h e e x p e r i m e n t a l c o n d i t i o n s f o r m e a s u r i n g NA D P r e d u c t i o n
w e r e i d e n t i c a l e x c e p t f o r t h e d e l e t i o n o f f e r r i c y a n i d e f r o m t h e
r e a c t i o n m e d i u m a n d t h e a d d i t i o n o f 3 u m p u r i f i e d s p i n a c h
f e r r e d o x i n ( S i g m a ) a n d 0 . 6 6 m m NA D P . A f t e r 1 m i n o f i r r a d i -
a n c e t h e r e a c t i o n m i x t u r e w a s c e n t r i f u g e d a n d A d e t e r m i n e d a t
3 4 0 n m .
P h o s p h a t e E s t e r i f i c a t i o n . R a t e s o f A T P f o r m a t i o n w e r e d e t e r -
4 3 0
H I L L R E A C T I O N A ND A T P S Y NT H E S I S I N C A C T I
m i n e d w i t h e i t h e r f e r r i c y a n i d e o r NA D P a s t h e e l e c t r o n a c c e p t o r
b y f o l l o w i n g t h e i n c o r p o r a t i o n O f 3 2 P O 4 i n t o A T P . T h e a m o u n t
o f i n c o r p o r a t i o n w a s d e t e r m i n e d a c c o r d i n g t o A v r o n ( 2 ) . P h o s -
p h o r y l a t i o n d i d n o t p r o c e e d i n t h e a b s e n c e o f l i g h t .
R E S U L T S
E l e c t r o n m i c r o s c o p e e x a m i n a t i o n o f i s o l a t e d c h l o r o p l a s t s c o n -
f i r m e d t h e p r e s e n c e o f a n o r m a l i n t e r n a l m e m b r a n e s t r u c t u r e .
T h e l a c k o f a l i m i t i n g m e m b r a n e i n d i c a t e s t h a t c h l o r o p l a s t s w e r e
c l a s s I I ( 1 6 ) .
E l e c t r o n t r a n s p o r t a s m e a s u r e d b y 0 2 e v o l u t i o n ( F i g . 1 ) a n d
t h e r e d u c t i o n o f e i t h e r f e r r i c y a n i d e ( F i g . 2 ) o r NA D P ( F i g . 3 )
h a s a t e m p e r a t u r e o p t i m u m i n t h e r a n g e o f 3 7 t o 4 2 C . P h o t o -
p h o s p h o r y l a t i o n w i t h e i t h e r f e r r i c y a n i d e o r NA D P a s t h e e l e c -
t r o n a c c e p t o r h a s a l o w e r t e m p e r a t u r e o p t i m u m o f 3 5 C ( F i g s . 2
a n d 3 ) . A l l o f t h e a b o v e r e a c t i o n s s h o w a p p r o x i m a t e l y a 3 - f o l d
i n c r e a s e b e t w e e n t h e l o w e s t a n a l y s i s t e m p e r a t u r e ( a p p r o x i -
m a t e l y 1 5 C ) a n d t h e r e s p e c t i v e t e m p e r a t u r e o p t i m a w i t h t h e
e x c e p t i o n o f f e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n . T h i s l a t t e r p r o c e s s i n c r e a s e s
m o r e t h a n 4 - f o l d b e t w e e n 1 5 a n d 4 0 C .
T h e r a t i o o f p h o s p h a t e e s t e r i f i e d t o e l e c t r o n t r a n s p o r t ( P / e 2 )
d e c l i n e s p r o g r e s s i v e l y w i t h t e m p e r a t u r e w i t h f e r r i c y a n i d e a s t h e
e l e c t r o n a c c e p t o r ( F i g . 2 ) . W i t h NA D P a s t h e e l e c t r o n a c c e p t o r
t h e P / e 2 r e m a i n s c l o s e t o u n i t y u p t o 3 5 C a b o v e w h i c h u n c o u -
p l i n g o c c u r s ( F i g . 3 ) .
D I S C U S S I O N
E l e c t r o n t r a n s p o r t i n 0 . p o l y a c a n t h a i s m a i n t a i n e d a t h i g h e r
t e m p e r a t u r e s t h a n p h o t o p h o s p h o r y l a t i o n . I n o t h e r p l a n t s p h o t o -
p h o s p h o r y l a t i o n s h o w s g r e a t e r s e n s i t i v i t y t o h e a t t h a n e l e c t r o n
t r a n s p o r t ( 8 , 1 0 , 1 5 ) , a n d e n h a n c e d e l e c t r o n t r a n s p o r t a t h i g h
t e m p e r a t u r e s r e f l e c t s t h e r m a l u n c o u p l i n g ( 6 , 8 ) . O u r r e s u l t s a l s o
i n d i c a t e t h a t i s o l a t e d c a c t u s c h l o r o p l a s t s e x h i b i t a d i f f e r e n t i a l
c o u p l i n g o f e l e c t r o n t r a n s p o r t t o p h o s p h o r y l a t i o n d e p e n d e n t
u p o n t h e e l e c t r o n a c c e p t o r . NA D P - l i n ke d p h o s p h o r y l a t i o n e x -
h i b i t s a h i g h e r P / e 2 t h a n f e r r i c y a n i d e - l i n ke d p h o s p h o r y l a t i o n ,
e s p e c i a l l y a t h i g h t e m p e r a t u r e s ( F i g s . 2 a n d 3 ) . T h i s d i f f e r e n c e
c o u l d r e f l e c t a r e l a t i v e i n c r e a s e i n r e d u c t i o n o f f e r r i c y a n i d e a t
P S I I ( 1 9 ) a s m e m b r a n e s b e c o m e h e a t - d a m a g e d .
T h e t e m p e r a t u r e r e s p o n s e o f 0 2 e v o l u t i o n , NA D P r e d u c t i o n ,
a n d f e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n i n d i c a t e s a n o p t i m u m t e m p e r a t u r e
f o r e l e c t r o n t r a n s p o r t i n c a c t u s c h l o r o p l a s t s a t a p p r o x i m a t e l y
4 0 C . T h i s o p t i m u m i s h i g h e r t h a n r e p o r t e d f o r s p e c i f i c p h o t o -
c h e m i c a l p r o c e s s e s i n o t h e r p l a n t s . T e m p e r a t u r e o p t i m a f o r t h e
H i l l r e a c t i o n a m o n g g e o g r a p h i c a l l y d i v e r s e V e r b a s c u m t h a p s u s
p o p u l a t i o n s r a n g e f r o m 1 0 t o 3 5 C ( 2 0 ) . A r c t i c p o p u l a t i o n s o f
~I 0
I . 3
E 1 X 0
r
i s o
0
E
a 1 0 0
0 I r
I
5 0
v
1 0 2 0 3 0 4 0 5 0
T e r a t u r e ( * C )
F I G . 1 . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n 0 2 e v o l u t i o n . D a t a p o i n t s a r e
m e a n s o f t w o r e p l i c a t e s a n d a r e t y p i c a l o f a l l e x p e r i m e n t s .
8 0 0
T
s 0 0
c 4 0 0
!
2 0 0
S 0 M
. -
2 0 0 y
I
g 5 0
5 0 o
2
5 0
l i
A
T e m p e r a t u r e ( * C )
F I G . 2 . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n f e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n a n d p h o t o -
p h o s p h o r y l a t i o n . O - - - - 0 : p h o s p h a t e e s t e r i f i c a t i o n ; * @ * : f e r r i c y a -
n i d e r e d u c t i o n . I n s e t i s r a t i o o f p h o t o p h o s p h o r y l a t i o n t o e l e c t r o n t r a n s -
p o r t ( P / e 2 ) . B o t h f e r r i c y a n i d e r e d u c t i o n a n d p h o s p h a t e e s t e r i f i c a t i o n
d a t a p o i n t s a r e m e a n s o f t w o r e p l i c a t e s a n d a r e t y p i c a l o f a l l e x p e r i -
m e n t s .
2 0 0
c o , 1 5 0 C 5 0
. 2 5
0 3 4 0 9 0 , 0
T U r 9 C E C
c 1 I 0 0
~5 o
0 ~~~~2
F I G . 3 . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n NA D P r e d u c t i o n a n d p h o t o p h o s -
p h o r y l a t i o n . 0 - - - 0 : p h o s p h a t e e s t e r i f i c a t i o n ; * - 4 * : NA D P r e d u c -
t i o n . I n s e t i s r a t i o o f p h o t o p h o s p h o r y l a t i o n t o e l e c t r o n t r a n s p o r t ( P / e 2 ) .
B o t h NA D P r e d u c t i o n a n d p h o s p h a t e e s t e r i f i c a t i o n d a t a p o i n t s a r e
m e a n s o f t w o r e p l i c a t e s a n d a r e t y p i c a l o f a l l e x p e r i m e n t s .
D e s c h a m p s i a c a e s p i t o s a e x h i b i t a 2 0 C o p t i m u m w h i l e a l p i n e
p o p u l a t i o n s s h o w a 3 0 C o p t i m u m ( 1 7 ) . T h e s e s t u d i e s r e p o r t i n g
t e m p e r a t u r e o p t i m a f o r t h e H i l l r e a c t i o n d o n o t a d d r e s s t h e
t e m p e r a t u r e r e s p o n s e o f A T P s y n t h e s i s , l i m i t i n g i n t e r p r e t a t i o n
o f t h e a d a p t i v e s i g n i f i c a n c e . T h e 4 0 C t e m p e r a t u r e o p t i m u m f o r
e l e c t r o n t r a n s p o r t a n d t h e 3 5 C o p t i m u m f o r p h o t o p h o s p h o r y l a -
t i o n i n c a c t u s c h l o r o p l a s t s c l e a r l y i n d i c a t e t h e p o t e n t i a l f o r p h o -
t o c h e m i c a l e n e r g y p r o d u c t i o n n e c e s s a r y f o r C O 2 f i x a t i o n a t h i g h
t e m p e r a t u r e s , a n d a r e c o n s i s t e n t w i t h o p t i m a d e m o n s t r a t e d f o r
p h o t o s y n t h e t i c p r o c e s s e s a s s o c i a t e d w i t h C A M . R o u h a n i e t a l .
( 1 4 ) r e p o r t m a x i m u m C O 2 f i x a t i o n o f S e d u m p r o t o p l a s t s b e -
t w e e n 3 5 a n d 4 0 C . I n A l o e l e a f s l i c e s , 0 2 e v o l u t i o n w a s f o u n d
t o i n c r e a s e w i t h t e m p e r a t u r e t o t h e h i g h e s t a n a l y s i s t e m p e r a t u r e
o f 3 5 C ( 4 ) . I n i n t a c t p l a n t s , m a x i m u m C A M a c t i v i t y , a s d e t e r -
m i n e d f r o m d i u r n a l c h a n g e s i n a c i d i t y , i s f o u n d w h e n d a y s a r e
w a r m a n d n i g h t s a r e c o o l ( 9 ) . O s m o n d e t a l . ( 1 2 ) r e p o r t t h a t i n
I -
I . .
4 3 1
P l a n t
P h y s i o l .
V o l .
6 0 ,
1 9 7 7
4 3 2 G E R W I C K , W I L L I A M S , A ND U R I B E
a d d i t i o n t o t h e l o w n i g h t t i m e t e m p e r a t u r e r e q u i r e m e n t f o r o p t i -
m a l g r o w t h o f K a l a n c h o e d a i g r e m o n t i a n a , h i g h d a y t i m e t e m p e r -
a t u r e s a r e r e q u i r e d . R a t e s o f m a l a t e d e c a r b o x y l a t i o n a n d t h e
c o n c o m i t a n t g e n e r a t i o n o f a C O 2 s o u r c e f o r a u t o t r o p h i c f i x a t i o n
i n C A M p l a n t s h a v e b e e n s h o w n t o i n c r e a s e w i t h t e m p e r a t u r e i n
t h e l i g h t ( 3 , 5 ) . T h e i n c r e a s e i n p h o t o c h e m i c a l e n e r g y p r o d u c -
t i o n t o r e l a t i v e l y h i g h t e m p e r a t u r e s w o u l d h e l p p r o v i d e f o r
m a x i m u m c a r b o n f l o w t h r o u g h t h e e n e r g y - d e p e n d e n t p e n t o s e
p h o s p h a t e p a t h w a y .
A c kn o w l e d g m e n t s - W e g r a t e f u l l y a c kn o w l e d g e R . D a v i s o f t h e E l e c t r o n M i c r o s c o p e C e n t e r
a n d S . F a l l e y f o r t e c h n i c a l a s s i s t a n c e d u r i n g p a r t o f t h i s w o r k. W e w i s h t o t h a n k P . K e m p a n d K .
O u l t o n f o r n u m e r o u s h e l p f u l d i s c u s s i o n s a n d f o r c r i t i c a l l y r e v i e w i n g t h e m a n u s c r i p t .
L f I E R A T U R E C I T E D
1 . A R NO N D I 1 9 4 9 C o p p e r e n z y m e s i n i s o l a t e d c h l o r o p l a s t s . P o l y p h e n o l o x i d a s e i n B e t a
v u l g a r i s . P l a n t P h y s i o l 2 4 : 1 - 1 5
2 . A V R O N M 1 9 6 0 P h o t o p h o s p h o r y l a t i o n b y S w i s s - c h a r d c h l o r o p l a s t s . B i o c h i m B i o p h y s A c t a
4 0 : 3 5 7 - 3 7 4
3 . B w t ND O N P C 1 9 6 7 T e m p e r a t u r e f e a t u r e s o f e n z y m e s a f f e c t i n g C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o -
l i s m . P l a n t P h y s i o l 4 2 : 9 7 7 - 9 8 4
4 . D a I s H R J r , P H H O M A NN 1 9 7 2 T h e r e l a t i o n b e t w e e n p h o t o s y n t h e s i s , r e s p i r a t i o n , a n d
C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o l i s m i n l e a f s l i c e s o f A l o e a r b o r e s c e n s M i l l . P l a n t P h y s i o l 4 9 :
8 7 3 - 8 8 0
5 . D I NG E R B E , D T P A r m N 1 9 7 4 C a r b o n d i o x i d e e x c h a n g e a n d t r a n s p i r a t i o n i n s p e c i e s o f
E c h i n o c e r e u s ( C a c t a c e a e ) a s r e l a t e d t o t h e i r d i s t r i b u t i o n w i t h i n t h e P i n a l e n o m o u n t a i n s ,
A r i z o n a . O e c o l o g i a 1 4 : 3 8 9 - 4 1 1
6 . E m T T J M , D A W A L a 1 9 6 9 T h e r m a l u n c o u p l i n g i n c h l o r o p l a s t s . B i o c h i m B i o p h y s A c t a
1 8 0 : 4 2 4 - 4 2 5
P l a n t P h y s i o l . V o l . 6 0 , 1 9 7 7
7 . H a w NA ND E z - G n . R , M S C H A E D L a 1 9 7 2 P h o t o p h o s p h o r y l a t i o n a n d c a r b o n d i o x i d e f i x a t i o n
b y c h l o r o p l a s t s i s o l a t e d f r o m P o p u l u s d i t o i d e s . P l a n t P h y s i o l 5 0 : 3 7 5 - 3 7 7
8 . K R A U S E G H , K A S A w r A u u s 1 9 7 5 R e l a t i v e t h e r m o s t a b i l i t y o f t h e c h l o r o p l a s t e n v e l o p e .
P l a n t a 1 2 7 : 2 8 5 - 2 9 9
9 . M I L B U R N T R , D J P E A R S O N, NA ND E G W E 1 9 6 8 C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o l i s m u n d e r n a t u r a l
t r o p i c a l c o n d i t i o n s . Ne w P h y t o l 6 7 : 8 8 3 - 8 9 7
1 0 . M U K O H A T A Y , T Y A G I , M H I G A S H I D A , K S H I No z A x a , A M A T s U NO 1 9 7 3 B i o p h y s i c a l s t u d i e s
o n s u b c e l l u l a r p a r t i c l e s . V I . P h o t o s y n t h e t i c a c t i v i t i e s i n i s o l a t e d s p i n a c h c h l o r o p l a s t s a f t e r
t r a n s i e n t w a r m i n g . P l a n t C e l l P h y s i o l 1 4 : 1 1 1 - 1 1 8
1 1 . O S M O ND C B 1 9 7 6 C O 2 a s s i m i l a t i o n a n d d i s s i m i l a t i o n i n t h e l i g h t a n d d a r k i n C A M p l a n t s . I n
R H B u r r i s , C C B l a c k, e d s , C O 2 M e t a b o l i s m a n d P r o d u c t i v i t y o f P l a n t s . U n i v e r s i t y P a r k
P r e s s , B a l t i m o r e p p 2 1 7 - 2 3 3
1 2 . O S M O ND C B , M M B E ND E R , R H B u m s 1 9 7 6 P a t h w a y s o f C O 2 f i x a t i o n i n t h e C A M p l a n t
K a l a n c h o c d a i g r e m o n d a n a . I I I . C o r r e l a t i o n w i t h 2 3 C v a l u e d u r i n g g r o w t h a n d w a t e r s t r e s s .
A u s t J P l a n t P h y s i o l 3 : 7 8 7 - 7 9 9
1 3 . R A NS O N S L , M T H O M A S 1 9 6 0 C r a s s u l a c e a n a c i d m e t a b o l i s m . A n n u R e v P l a n t P h y s i o l 1 1 :
8 1 - 1 1 0
1 4 . R o u A s A m I , H M V I NE s , C C B L A C K , J R 1 9 7 3 I s o l a t i o n o f m e s o p h y l l c e l l s f r o m S e d u m
t e l e p h i u m l e a v e s . P l a n t P h y s i o l 5 1 : 9 7 - 1 0 3
1 5 . S A Nm A u s K A 1 9 7 4 S e a s o n a l c h a n g e s i n p l a n t m e m b r a n e s t a b i l i t y a s e v i d e n c e d b y t h e h e a t
s e n s i t i v i t y o f c h l o r o p l a s t m e m b r a n e r e a c t i o n s . Z P f l a n z e n p h y s i o l 7 3 : 4 4 8 - 4 5 1
1 6 . S P E NC E a D , S G W I L D A N 1 9 6 2 O b s e r v a t i o n s o n t h e s t r u c t u r e o f g r a n a - c o n t a i n i n g c h l o r o -
p l a s t s a n d a p r o p o s e d m o d e l o f c h l o r o p l a s t s t r u c t u r e . A u s t J B i o l S c i 1 5 : 5 9 9 - 6 1 0
1 7 . T I s E ZE N L L , J A H E L G A G E R 1 9 6 8 G e n e t i c a n d p h y s i o l o g i c a l a d a p t a t i o n i n t h e H i l l r e a c t i o n
o f D e s c h a m p s i a c a e s p i t o s a . Na t u r e 2 1 9 : 1 0 6 6 - 1 0 6 7
1 8 . T u a a T A 1 9 7 2 M e a s u r e m e n t o f H i l l r e a c t i o n s a n d p h o t o r e d u c t i o n . M e t h o d s E n z y m o l 2 4 :
1 4 6 - 1 6 5
1 9 . T R a T A 1 9 7 4 E n e r g y c o n s e r v a t i o n i n p h o t o s y n t h e t i c e l e c t r o n t r a n s p o r t o f c h l o r o p l a s t s .
A n n u R e v P l a n t P h y s i o l 2 5 : 4 2 3 - 4 5 8
2 0 . W I L n A S G J I , R L A ZO R , R Y o u a t G A u 1 9 7 5 T e m p e r a t u r e a d a p t a t i o n s i n t h e H i l l
r e a c t i o n o f a l t i t u d i n a l l y a n d l a t i t u d i n a l l y d i v e r s e p o p u l a t i o n s o f V e r b a s c u m t h a p s u s L .
P h o t o s y n t h e t i c a 9 : 3 5 - 3 9