Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.

E-mail: pedropps@hotmail.com. Web personal: www.pelaez-sanchez.com

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
CURSO: BIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS
PRACTICA No 01: Muestreo, Aislamiento

1. Muestreo de materiales que contienen microorganismos

Las muestras en las cuales se pueden encontrar microorganismos se
recolectaron, en lugares y zonas apropiadas, ejemplo: la fbrica, rea agrcola
y zona de desechos de empresas.
Ejemplo: Muestras tomadas en el casero de Monterrico, distrito de
Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de Hunuco. Las
muestras fueron: fruto en deterioro de aguaje expuesto en el suelo. Casero
Monterrico Altitud = 650 msnm; Latitud = 91818,11S; Longitud =
75,5716.44O.

2. Aislamiento de microorganismos

El proceso de aislamiento de microorganismos se realizo siguiendo la
metodologa descrita por CARDENAS (2001 a, b); que consisti en extraer
porciones o alcuotas de materiales muestreadas, (10 g de aguaje o 10 mL si la
muestra es lquida) y una vez molida, diluirlo en 90mL de agua estril (JAY,
1981 y MONZON, 2001) y sembrarlos por mtodo de estra en medios slidos
diferenciales YED y LB (Cuadro 1). La incubacin se realiz en posicin
invertida a 30 C por 24, 48 72 horas, dependiendo del desarrollo microbiano
(JAWETZ et al., 1983).

Despus de incubarlos se procede a discriminar los microorganismos
aislados y a purificar por resiembra.

Finalmente los microorganismos se cultivan en medio BYPO slido
(Cuadro 1), a fin de adaptarlas al medio de seleccin. La incubacin se realiza
en placas en posicin invertida a 30 C promedio por 48 h (JAWETZ et al.,
1983).

3. Recomendaciones

Se deben preparar inicialmente 2 placas mnimo por cada tipo de medio
(4 placas por muestra).
Luego de la primera siembra, se determinan cuantos microorganismos
pueden ser aislados por resiembra, de acuerdo a ello se deben preparar 2
placas por medio y por cada microorganismo (Ejemplo: si han desarrollado 3
cepas de microrganismos, 1 en YED y 2 en LB, entonces deben prepararse 6
placas, 2 para YED y 4 para LB), luego proceder a la resiembra.
Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.
E-mail: pedropps@hotmail.com. Web personal: www.pelaez-sanchez.com
El clculo de la cantidad de medios se realiza teniendo en cuenta los
criterios indicados, se debe preparar con un ligero exceso, para evitar que falte
por error de medicin de los compuestos que forman el medio.

Cuadro1. Composicin de medios slidos para aislar microorganismos.
Medio Composicin (% v/p) Utilizado para aislar
YED
Glucosa, 2%; Extracto de carne,
1%; Agar, 1.5 %.
Levaduras
LB
Peptona 1%; Extracto de
levadura, 0,5%; cloruro de sodio
0,5%, Agar 1,5%
Bacteria
BYPO
Peptona, 1%; Extracto de carne,
0.8 %; NaCl, 0.5 %; K
2
HPO
4
, 0.7
%; Agar, 1.5 %.
Colonias puras
Fuente: HOLMES Y CUNDLIFFE, (1991) y FRENKEN et al., (1992)
Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.
E-mail: pedropps@hotmail.com. Web personal: www.pelaez-sanchez.com

YED
Incubacin
Discriminar
Resiembra
BYPO solido
Incubacin
CEPAS
GLICEROL
CONGELACION
LB
Incubacin
Discriminar
Resiembra
BYPO solido
Incubacin
CEPAS
GLICEROL
CONGELACION
ENSAYOS
MUESTREO
Obtenido del casero de
Monterrico (Altitud =
650m; Latitud =
91818,11S; Longitud
= 75,5716.44O
Muestra 10gr
AISLAMIENTOS
Agua estril
Profesor Dr. Pedro Pelez Snchez.
E-mail: pedropps@hotmail.com. Web personal: www.pelaez-sanchez.com
Referencias Bibliogrficas
1. CRDENAS F. 1999. Bsqueda, seleccin y caracterizacin de nuevas lipasas de
origen microbiano. Tesis Doctoral. Facultad de Farmacia Universidad Complutense de
Madrid.
2. JAY J.M. 1981. Microbiologa Moderna de los Alimentos. 2da ed. Edit. Acribia.
Espaa. pp 441.
3. JAWETZ, E; MELNICK, J; ADELBERG, E. 1983. Manual de Microbiologa Mdica.
Novena edicin. Editorial El Manual Moderno S.A. Mxico. 595 pp.
4. MONZON, Arnulfo. 2001. Produccin, uso y control de calidad de hongos
entomopatgenos en Nicaragua. Universidad Nacional Agraria de Nicaragua. Manejo
integrado de plagas. 63: 95 103.
5. CRDENAS F. 1999. Bsqueda, seleccin y caracterizacin de nuevas lipasas de
origen microbiano. Tesis Doctoral. Facultad de Farmacia Universidad Complutense de
Madrid.
6. CRUEGER, 1993. Biotecnologa. Manual de Microbiologa Industrial. Trad. por
Paloma Liras Padn. 3 ed. Zaragoza Espaa, Acribia S.A. 413 p.
7. HOLMES, D.J. AND . CUNDLIFFE, E. 1991. Analysis of a ribosomal RNA methylase
gene from streptomyces tenebrarius which confers resistence to gentamicin. Journal
Mol. Gen.( Genetic ). 229 (2): 229 -237.
8. ARIAS, EDINSON, LASTRA, JORGE 1997. Biotecnologa, cintica de crecimiento,
Mxico, Sinexi S.A. [En lnea] Biotecnologa. www.monogra
fias.com/trabajos10/10cincrec/10cincrec,cineticadecrecimiento,20 mayo 2005).
9. TORTORA, J. 1993. Introduccin a la Microbiologa. 3 ed. Zaragoza Espaa.
Editorial Acribia. 289 p.