39 Tecnol. & Cin. Agropec., Joo Pessoa, v.8, n.3, p.39-43, set.

2014
Anlise fngica e pesquisa de aflatoxina na linhaa comercializada
no municpio de Montes Claros-MG
1 2 3
Jefferson Vinicius , Priscila Maria de Andrade Prince , Marden Rene Gonalves e Priscila Maria de
4
Carvalho
1 2
Biomdico, Ps-graduado em hematologia-residente multiprofissional em sade - UFG (silvavinoalves@yahoo.com.br); Biomdica e
3
professora Instituto de Cincias da Sade (Priscila.prince@hotmail.com) Biomdico, Mestre e professor do Instituto de Cincias da
4
............. Biolga, mestre Cincia e tecnologia de alimentos, professora Instituto de Cincias da Sade
Resumo - A linhaa um alimento constitudo por fibras, cidos graxos e compostos fenlicos que contribuem para melhoria
da sade humana. Atualmente o consumo da linhaa vem aumentando devido as suas propriedades benficas, fazendo assim
parte que integra o cotidiano da alimentao da populao brasileira. O objetivo deste trabalho foi realizar a contagem total
de bolores e leveduras, bem como averiguar a presena de aflatoxinas na linhaa comercializada no municpio de Montes
Claros-MG. Foram coletadas 27 amostras de linhaa em supermercados e no mercado municipal de Montes Claros que,
posteriormente, foram transportadas para laboratrio de Microbiologia. Os procedimentos para contagem total de bolores e
leveduras foram baseados na Associao americana de Sade (APHA). Posteriormente, realizou-se uma pesquisa de
aflatoxinas nas linhaas utilizando teste Aflachek para detectar a presena aflatoxinas. No estudo evidenciou-se que 59,27%
3
das amostras de linhaa comercializada no municpio de Montes Claros estavam acima de 1x10 UFC/g. Na pesquisa de
aflatoxinas observou-se que 7,40% amostras industriais de linhaa preta apresentaram toxinas superiores a 10 ppb. Dessa
forma, a linhaa comercializada em Montes Claros esto contaminados com levedura e bolores, sendo que a presena de
toxinas em amostras industriais confirma risco iminente para a sade humana.
Palavras-chave: Aspergillus flavus, micotoxinas, linhaa.

Analysis and research of fungal aflatoxin in linseed marketed city of Montes
Claros, Minas Gerais state
Abstract - Linseed is a food of fiber, fatty acids and phenolic compounds that contribute to improve human health. Nowadays
the consumption of linseed has increased due to its beneficial properties, thus integrating part of the daily diet of Brazilian
population. The objective of this work was to realize the total count of yeasts and molds, verify the presence of aflatoxins in
linseed marketed in Montes Claros municipality, Minas Gerais, Brazil. 27 samples of linseed were collected in supermarkets
and municipal market in Montes Claros, which were after transported to the microbiology laboratory. The procedures for
total count of yeasts and molds had been based on American Association of Health (APHA). Subsequently, we performed a
survey of aflatoxins in linseed using Aflachek for detect the presence of aflatoxins. The study showed that 59.27% of the
3
samples of linseed marketed in Montes Claros city were above of 1x10 UFC/g. In the research of aflatoxins, was observed
that 7.40% industrial samples black linseed present toxins exceeding 10 ppb. The Linseed marketed in Montes Claros city is
contaminated with yeast and mold and the presence of toxins in industrial samples confirms imminent risk to human health.
Keywords: Aspergillus flavus, mycotoxins, linseed.
Introduo
A linhaa (Linum usitatissimum L.) uma semente
proveniente de uma planta cultivada h milhares de anos
pelos diversos povos, sendo uma grande fonte de cido graxo
linolnico que contribui para constituio de diversas clulas
e tambm na preveno de inmeras doenas, incluindo
cardiovasculares (Pinheiro, 2007).
Os derivados da linhaa, como o leo so relatados como
protagonistas da diminuio da inflamao de superfcies
oculares em pacientes com sndrome de Sjgren. J a
semente tida como uma valiosa aliada na preveno do
cncer, uma vez que possui capacidade antioxidante
(Almeida, 2009).
Apesar das suas caractersticas, a constituio oleosa da
linhaa contribui para desenvolvimento de fungos, que em
alta concentrao podem degradar o alimento e prejudicar a
sade humana. Ainda existe o risco de desenvolvimento de
espcies fngicas com risco potencial na produo de
micotoxinas, so produtos metablicos produzidos por
fungos e que se ingeridos por vir a causar doenas em seres
humanos e animais (Kawashuma & Soares, 2006).Os
principais fungos envolvidos na produo de toxinas so os
Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus, que
desenvolvem as aflatoxinas que so produzidos em
condies ambientais adequadas.Os quatro tipos de
metablitos produzidos so B1 e B2 ,bem como G1 e G2,que
causam efeitos txicos agudos ,mutagnicos e induzem ao
cncer, em especial de fgado (Maziero & Bersot, 2010).
Outras micotoxinas so o cido fusrico, fumonisinas (B1 e
B2), ocratoxinas (A, B, C), patulina, citrinina, zearalenoma e
trigotecenos.
Essas micotoxinas potencializam efeito de outras toxinas,

levando pessoa a debilitao rpida da sade (Maziero &
Tecnol. & Cin. Agropec., Joo Pessoa, v.8, n.3, p.39-43, set. 2014 40
Bersot, 2010).O risco de desenvolvimento de patologias
decorrentes da ingesto de micotoxinas em alimentos, como
aponta estudo desenvolvido no distrito federal com
amendoim e derivados, castanhas, milho, produtos de trigo,
arroz e feijo. Evidenciou-se uma concentrao acima de
micotoxinas em amendoins e derivados, que caso
consumido poder levar ao desenvolvimento de doenas
(Caldas et al., 2002).
Logo, o risco tanto de ingesto de alimentos degradados e
imprprios para o consumo devido altas concentraes
fungicas, bem como a presena de toxinas que podem ser
agentes do desenvolvimento de doenas nos seres humanos.
Inevitavelmente, o estudo tem como objetivo evidenciar
a presena de aflatoxinas na linhaa comercializada no
municpio de Montes Claros, bem como realizar a contagem
total de bolores e leveduras em amostras de linhaa
comercializada. Os resultados poderiam vir a auxiliar no
planejamento e preveno da contaminao de fungos na
linhaa, bem como no controle e erradicao do risco de
ingesto de toxinas, mediante aplicao de boas prticas de
produo e conservao do alimento.
Materiais e Mtodos
A metodologia utilizada no presente trabalho foi baseada
no mtodo American Public Health Association (APHA).
Amostras de linhaa branca e preta foram coletadas em
supermercados e no mercado municipal do municpio de
Montes Claros no perodo de agosto a setembro de 2011,
sendo que foram transportadas ao Laboratrio de
Microbiologia de Alimentos/Campus JK das Faculdades
Unidas do Norte de Minas FUNORTE. A origem da
produo da linhaa foi indagada aos comerciantes para
melhor analise epidemiolgica.
Diversas diluies foram realizadas visando o
favorecimento da contagem total de bolores e leveduras.
Para tanto uma alquota de 25,0 g de cada uma das amostras
de mel foi diluda em 225,0 mL de gua peptonada
-1
tamponada 0,1% para obteno da diluio (10 ) as
preparaes das diluies decimais subseqentes foram
realizadas em tubos contendo 9,0 mL do mesmo diluente
2
par a obt eno das concent r aes 10 do mel .
Posteriormente inoculou-se 0,1 mL de cada diluio na
superfcie do meio gar Batata Dextrose (BDA) acidificado
com cido tartrico 10% at pH 3,5 com auxlio de
micropipeta. O inculo foi homogeneizado por toda a
superfcie do meio com ala de drigalski, das placas de maior
para as placas de menor diluio, at que todo o excesso de
lquido fosse absorvido. As placas foram incubadas em
estufa bacteriolgica a 25 C durante 7-10 dias.
Posteriormente realizou-se a contagem de colnias e
clculos dos resultados mediantes seleo de placas com 15
a 150 colnias.
A metodologia utilizada no trabalho foi baseada no
mtodo dos kits aflacheck, teste imunocromatogrfico que
permite detectar a presena aflatoxinas em alimentos.
Pesaram-se cinco gramas da amostra e colocou em tubos de
extrao de 40 mL. Posteriormente mediu-se 20 mL de
metanol a 70% e adicionou esta soluo ao tubo de extrao
de 40 mL. O tubo foi tampado e agitado manualmente por
trs minutos.
Adicionou-se 250 microlitros de gua pura ao tubo de
diluio aflachek com um pipetador e posteriormente
transferiu-se 250 microlitros do extrato da amostra ao tubo
de diluio. A soluo foi misturada e agitada manualmente
visando homogeneizao do extrato. Ainda foi inserido um
tira de prova aflachek dentro do tubo de diluio por 5
minutos e verificou a revelao.
Resultados e Discusso
A linhaa um cereal in natura e no compactado (Borges
et al., 2011). A legislao brasileira ainda no define
especificadamente os limites microbiolgicos para consumo
e comercializao da linhaa. No entanto a presena de
fungos no alimento leva a rpida degradao e deteriorao
dos nutrientes e ainda podendo gerar doenas nos
consumidores (Maziero & Bersot, 2010).
Para tanto, na pesquisa com 27 Amostras de linhaa,
destes 59,27% apresentaram altas contagens de bolores e
3
leveduras acima de 1x10 , sendo que apenas 40,74% do total
de amostras de linhaa estavam com quantidade de bolores e
leveduras inferior a quinze colnias, como aponta Figura 1.
Noutro estudo, as altas contagem de bolores e leveduras
tambm foram detectados na linhaa comercializada no
3
municpio de Uberlndia-MG, com variao de 1x10 a
3
8x10 UFC/g (Borges et al., 2011).
Tais nveis foram tambm verificados e confirmados no
estudo desenvolvido pela Fundao Ezequiel Dias
(FUNED) do Estado de Minas Gerais visando avaliao
microbiolgica da linhaa comercializada em Belo
Horizonte, que constatou 64% das amostras apresentaram
contaminao por fungos (FUNED, 2011).
Figura 1. Contagem total de bolores e leveduras em linhaa.
100% (27)
59,27% (16)
1 2
3
Na Tabela 1, observa-se UFC/g superiores a 1x10 na
linhaa preta 75%(12) e em menor nvel a linhaa branca
25%(4). Quanto a origem, das 14%(4) amostras de
supermercados, 3(11,1%) apresentou UFC/g maior que
41
3
1x10 com valores mximos e mnimos encontrados foram
3 4
respectivamente foram 4x10 e 1,04x10 . Apesar do aspecto
ambiental do fungo, muitas vezes, questes de origem
sanitrias implicam na contagem alta de fungos em
alimentos, como refere um estudo realizado em Fortaleza
(CE), que constatou que metade das amostras apresentaram
3 5
fungos, variando de 6,5x10 a 1,3x10 UFC/G(Castro et
AL.,2010).
O risco torna-se iminente quando alm do crescimento de
fungos, ocorre o desenvolvimento de espcimes bactrias,
como relata estudo que presencia na linhaa coliformes
fecais em 7 das 8 amostras estudadas,sendo que 87,5% do
total apresentavam erros de manipulao segundo a autora
(Queiroz & Silveira, 2012). Logo o crescimento de fungos
quanto de bactrias torna-se risco a sade do consumidor,
como afirma Castro et al. (2010) que encontrou nas amostras
de linhaa de Fortaleza (CE) bactrias aerbias mesfilas

em 67% dos produtos analisados (Castro et al., 2010).
Alm do risco da ingesto de alimentos com alta
concentrao de colnias por grama, tem se o problema das
micotoxinas, principalmente o gnero Aspergillus sp.
(Kawashuma & Soares, 2006). O crescimento dos
Aspergillus sp. favorecido pelas caractersticas qumicas da
linhaa, que o define como um alimento rico em cidos
graxos poli-insaturados e outros lipdios (Marques et al.,
2011).
Tabela 1. Contagem total de bolores e leveduras na linhaa
comercializada no municpio de Montes Claros-MG (2011).
Legenda: Lp-linhaa preta Lb-linhaa branca
Amostra 01
Amostra 02
Amostra 03
Amostra 04
Amostra 05
Amostra 06
Amostra 07
Amostra 08
Amostra 09
Amostra 10
Amostra 11
Amostra 12
Amostra 13
Amostra 14
Amostra 15
Amostra 16
Amostra 17
Amostra 18
Amostra 19
Amostra 20
Amostra 21
Amostra 22
Amostra 23
Amostra 24
Amostra 25
Amostra 26
Amostra 27
UFC/g Origem
3
4x10
3
2x10
4
1,5x10
4
1,45x10
<15
<15
3
8,6x 10
3
2,2x 10
3
6x 10
4
1,4x 10
4
1,3x 10
4
1,8x10
4
2x10
<15
<15
<15
<15
<15
<15
<15
<15
4
1,53x10
3
6,5x10
3
2,7x10
4
1,04x10
<15
3
3x10
Supermercados(So Paulo/Lp)
Supermercados(So Paulo/Lp)
Mercado municipal (So Paulo/Lp)
Mercado municipal (So Paulo/Lp)
Mercado municipal(So Paulo/Lb)
Mercado municipal(So Paulo/Lb)
Mercado municipal (Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lp)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Bahia/Lb)
Mercado municipal(Gias/Lp)
Mercado municipal(Gias/Lp)
Mercado municipal(Gias/Lp)
Mercado municipal (Gias/Lb)
Mercado municipal(Gias/Lb)
Mercado municipal(Gias/Lb)
Supermercados(R.Grande Sul/Lp)
Supermercados(R.Grande Sul/Lp)
Supermercados(R.Grande Sul/Lp)
Amostras
Na Figura 1 so apresentados a identificao de
Aspergillus sp na linhaa comercializada no municpio de
Montes Claros em 40,74% (11) das amostras de linhaa a
espcie Aspergillus flavus e em 44,44% (12) Aspergillus
terreus, 62,96% (17) o Aspergillus niger e finalmente o
Aspergillus glancus com 11,11% (3).
Esses fungos so favorecidos pela capacidade de
produzir esporos e disseminar-se em no ambiente;
alimentos, como refere Guimares (2010) em pesquisa com
arroz e identificao de Aspergillus flavus e Aspergillus
niger no alimento ,sendo que 67% dos A.flavus eram
potenciais toxignicos ou produtores de micotoxinas.
Gnero Aspergillus reconhecidamente um produtor de
toxinas,segundo investigao com 90 amostras de solo e 57
de milho, sendo que 13 cepas fngicas (92,9%) apresentaram
concentrao de 10,5 a 482,6 g/kg para aflatoxina B1 e 2,9 a
132,5 g/kg para aflatoxina B2 (Almeida et al.,2005).
O controle sobre nveis txicos de contaminao dos
alimentos complexo, existncia de centenas de
micotoxinas,cujo grau de deteco das protenas txicas so
com grau relativo de dificuldade, devido a falta aplicao
prtica da fiscalizao dos orgos governamentais (Lino et
al., 2008).
Segundo a FAO (Food and Agriculture Organization of
the United Nations), muitas vezes a deficincia da
regularizao dos limites tolerados de micotoxinas torna-se
empecilho para controle pelos rgos sanitrios e de
agricultura dos prprios pases (FAO, 2011).
De acordo com Agncia Brasileira de Vigilncia Sanitria
(ANVISA), visando a regulamentao dos nveis de
micotoxinas em alimentos, fixou limite tolervel de toxina
nos cereais , grupo ao qual tambm insere-se a linhaa o
valor de 2ppb (BRASIL,2011).
Figura 1. Identificao das espcies do gnero Aspergillus
sp.
0
10
20
30
40
50
60
70
Aspergillus
flavus
Aspergillus
terreus
Aspergillus
glancus
Aspergillus
niger
Espcies
%
Para tanto, foi encontrado no estudo valores de toxinas
superiores a 10 ppb em amostras industriais de linhaa preta
pertencentes ao Rio grande do sul em 7,40% (2/27)
comercializadas no supermercados do municpio de Montes
Claros, como aponta Figura 2.
Os principais fungos produtores dessas toxinas
detectadas no teste imunocromatografico so Aspergillus
flavus ,cuja produo de toxinas so mais significativa ,como
Tecnol. & Cin. Agropec., Joo Pessoa, v.8, n.3, p.39-43, set. 2014
0
20
40
60
80
100
Rs(Lp)Industrial Outras
Origem das amostras
>10ppb
<10ppb
42
as aflatoxinas B1, G1, B2 e G2 (Gonzalez et al., 2005).
Micotoxinas tambm foram detectados tambm no arroz do
suprimento do Exrcito Brasileiro, sendo que das 26
amostras analisadas por cromatografia liquida de alta
eficincia identificou nveis superiores em 6 do total (Silva,
2005).J na regio da Litunia,um estudo permitiu constatar
que dentre os gros estudados, como o gro de cevada
estavam com 68% das amostras contaminadas por
micotoxinas com valores superiores ao desejvel para
consumo (Mankeviciene et al., 2005).
No entanto, a no determinao de valores inferiores a 10
ppb no teste no descarta a possibilidade de ainda estarem
acima dos valores considerados pela Agncia Nacional de
Vigilncia Sanitria que 2 ppb ou 5 LMT (g/kg)
(BRASIL, 2011). O risco de ingesto de alimentos com tais
nveis de micotoxinas representa risco sade do
consumidor, uma vez que registros de neoplasias,
principalmente hepticas, leso renal e depresso
imunolgica vem sendo associadas a espcies produtores de
aflatoxinas.
Figura 2. Pesquisa de aflatoxinas em amostras de linhaa
Ppb:partes por bilho
%
Concluses
1. Neste estudo, 59,27% das amostras de linhaa
apresentaram contagens de bolores e leveduras acima de
3
1x10 , sendo que a totalidade das linhaas estudadas
obtiveram crescimento fngico.
2. Na identificao fngica a presena de Aspergillus
flavus ocorreu em 40,74% das amostras de linhaa,
Aspergillus terreus em 44,44% e respectivamente do
Aspergillus niger com 62,96% e do Aspergillus glancus
11,11%.
3. Na avaliao da produo de toxinas ficou
demonstrado valores de toxinas superiores a 10 ppb em
amostras de linhaa industriais comercializadas em
supermercados do municpio de Montes Claros-MG e
produzidas no Rio Grande do Sul 7,40% das amostras
estudadas.
4. Torna-se necessrio emprego da fiscalizao pelos
rgos competentes visando maior controle sobre nveis
microbiolgicos e txicos.
5. A boa fiscalizao, a capacitao profissional e o
desenvolvimento de cursos de aprimoramento devem ser
empregados como meio preventivo no combate a
contaminao dos alimentos por fungos.
Agradecimentos
A Empresa Sol Campo Imp.Com.Rep. pela participao
efetiva no estudo mediante colaborao com produtos de
anlise de alimentos.
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