Avaliao da qualidade microbiolgica de um sumo de fruta

Avaliao da qualidade microbiolgica de

um sumo de fruta
Mdulo 9 Microbiologia Alimentar

Avaliao da qualidade microbiolgica de um sumo de fruta

ndice

Avaliao da qualidade microbiolgica de um sumo de fruta

1. Resumo
Este trabalho prtico foi realizado no mbito da disciplina de Qumica Aplicada,
inserido no mdulo 9 - Microbiologia Alimentar, como tal foi realizado este projecto
que consistiu na avaliao da qualidade microbiolgica de um sumo de fruta, mais
concretamente um nctar de pra.
Este sumo foi utilizado como amostra para as respetivas anlises microbiolgicas, e
para a efetuao destas anlises o sumo foi contaminado propositadamente, mais
precisamente com a bactria coliformes.
Procedeu-se higienizao da bancada no incio das aulas prticas para garantir a
assepsia do local de trabalho e seguidamente preparao dos meios de cultura
necessrios so eles a gua triptonada, PCA, YEGA (meio para bolores e leveduras),
Endo-Agar e CVB (Caldo Verde Brilhante), e sua devida esterilizao.
Preparao de diluies decimais sucessivas com 9ml gua triptonada em cada tubo
de ensaio, utilizao do sumo previamente contaminado, utilizao de tomas de 1ml
da amostra anteriormente referida.
Efetuao de enchimento de placas o respetivo espalhamento e incorporao, aps
estas fases procedeu-se contagem de UFC existentes e analisou-se os resultados
obtidos. Por fim realizou-se um relatrio e um boletim de anlise.

2. Objetivo
O objectivo desta prtica experimental avaliar a qualidade microbiolgica de um
sumo de fruta e para tal foi proporcionada a essa amostra uma contaminao
desconhecida para os operadores. Aps a preparao desta amostra foram realizadas
as seguintes anlises microbiolgicas:

Contagem de microrganismos mesfilos aerbios totais a 30C;

Contagem de bolores e leveduras;

Contagem de Enterobactrias totais (teste presuntivo);

Pesquisa e confirmao de coliformes fecais (teste confirmativo).

Os sub-objetivos so treinar tcnicas anteriormente executadas durante as aulas de

microbiologia, proceder contagem de UFC e sua respetiva anlise e desenvolver as
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Qumica Aplicada

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capacidades enquanto tcnico de Anlise Laboratorial procedendo assim elaborao

do projeto em questo.

3. Introduo

4. Material/ equipamento utilizado

Balana Digital

Bico de Bunsen/ Lamparina

Caixas de Petri descartveis (10)

Caixas de Petri de vidro esterilizadas (12)

Espalhador de vidro

Fracos de vidro (5)

Gobel

Papel de alumnio

Pipeta volumtrica esterilizada de 10ml (2)

Pipeta Pasteur descartvel de 1ml (8)

Placa de aquecimento

Suporte para tubos de ensaio

Tubos de ensaio esterilizados (8)

Autoclave

Tabela 1 Material/ equipamento utilizado

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5. Compostos
PCA ( Plate Count Agar)
Nome do fabricante: HIMEDIA
Validade: abril 2016
pH final: 7,0 0,2 a 25C

Composio (gramas/ litro):

Casein enzymic hidrolysate

5,00

Yeast extract

2,50

Dextrose

1,00

Agar

15,00

Glucose
Nome do fabricante: Scharlau
Validade: 03/2017 (aberto a 28/11/2012)

Yeast Extract Agar

Nome do fabricante: Liofilchem diagnostic
Validade: 21/01/2013 (fora de prazo)

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Endo Agar Base

Nome do fabricante: Scharlau
Validade: setembro 2016
pH final: 7,2 0,2 a 25C

Composio (gramas/ litro):

Peptone

10,0

Lactose

10,0

Sodium sulfite

2,5

Di-potassium hidrogen phosphate

3,5

Agar

15,0

Peptone from casein (tryptone)

Nome do fabricante: Scharlau
Validade: maio 2016
pH 2% solution: 6,8 7,2

D (+) glucose anhydrous

Nome do fabricante: Scharlau
Validade: maro 2017

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Caldo Verde Brilhante

pH final: 7,2 0,2 a 25C

Composio (gramas/ litro):

Bile

20,000

Lactose

10,000

Peptone

10,000

Brilliant green

0,013

6. Protocolo experimental
Para comear este projeto, foi-nos cedido um protocolo de forma a orientar-nos
durante a execuo do mesmo. Inicialmente os seguintes passos descritos so
realizados todas as aulas de forma a assegurar a assepsia e segurana do local de
trabalho e do operador.
1 - Higienizao da bancada de trabalho e lavagem das mos;
2 - Uso do bico de Bunsen ou lamparina durante o trabalho experimental de forma a
assegurar um ambiente no contaminado;
3 - Aps findar o trabalho, proceder higienizao do local de trabalho.

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6.1. Preparao da amostra de sumo

Propriedades do sumo (Nctar de Pra)
Amanhecer

Marca

200ml

Volume
Sabor/ Aroma

Pra

Data de validade

6.2. Preparao de meios de cultura

6.2.1.

Preparao dos meios PCA e YEGA

1. Inicialmente preparou-se 11 placas de Petri de vidro e esterilizou-se
esse material.
2. Seguidamente procedeu-se realizao das contas e respetiva
pesagem dos meios PCA (m=4g/ V=200ml) e YEGA (Yeast Extract
1g/ Peptona 2g/ Glucose 4g/ Agar 4g) e sua devida
preparao. Estes foram colocados na autoclave a 121C durante
40 minutos para devida esterilizao.
3. Posteriormente realizao do passo anterior, encheu-se as placas
6 placas de Petri com PCA e as restantes 5 com YEGA e deixou-se
solidificar.

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6.2.2.

Preparao do meio CVB (Caldo Verde Brilhante)

1. Preparao do meio de caldo verde brilhante seguinte modo:
Dissolveu-se uma saqueta com 20g do composto em gua
destilada, num balo volumtrico de 500ml.
A partir do meio preparado anteriormente, prepararam-se 5
tubos de ensaio onde se colocou inicialmente um tubo de Duran
e seguidamente 9ml do CVB. Rotulou-se devidamente os tubos
de ensaio.
Para finalizar recorreu-se autoclavagem dos mesmos, mais
precisamente, a 115C, durante 15minutos.

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6.3. Contagem de microrganismos mesfilos aerbios

totais (a 30C)
Inoculao por incorporao
1. Preparou-se 6 caixas de Petri para proceder ento ao processo.
2. Inocularam-se cada caixa com 1ml das diluies decimais sucessivas
anteriormente preparadas.
3. Seguidamente, colocou-se na estufa de incubao a 30C, entre 48h a
72h.
4. Procedeu-se contagem de UFC.

6.4. Contagem de bolores e leveduras

Inoculao por espalhamento superfcie
1. Preparam-se 5 caixas de Petri, amostra me, controlo negativo e
diluies decimais sucessivas at 10-3.
2. Inocularam-se placas de Petri com tomas de 1ml por espalhamento
superfcie.
3. Colocaram-se na estufa de incubao a 25C, durante 5 dias.
4. Procedeu-se contagem de UFC.

6.5. Enterobactrias: Teste presuntivo

Inoculao por espalhamento superfcie
1. Preparou-se as placas de Petri necessrias para inicial o processo, mais
precisamente as caixas foram referentes s seguintes denominaes:

Controlo negativo (-);

Diluies decimais 100; 10-1; 10-2 e 10-3.

2. Incubou-se as placas durante 18 a 24 horas, a 37C em aerobiose.

3. Procedeu-se contagem de UFC.

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6.6. Enterobactrias: Teste confirmativo de coliformes

fecais
Teste confirmativo de coliformes fecais
1. Preparam-se cinco tubos de ensaio, estes tubos foram devidamente
identificados do seguinte modo:

Controlo negativo (-);

Controlo positivo (100);

Diluies decimais sucessivas 10-1; 10-2 e 10-3.

2. Colocou-se tomas de 9ml do meio Caldo de Verde Brilhante em cada tubo de

ensaio,

estes

continham

um

tubo

de

Duran*

*auxilia na visualizao de resultados como na presena de turbidez e

produo de gs;
3. Inoculou--se com 1 ml da menor diluio decimal sucessiva em 9ml do meio
lquido Caldo verde brilhante;
4. Colocou-se na estufa durante 48h, a 44,5C;
5. Procedeu-se anlise dos tubos e anotou-se os resultados obtidos.

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Qumica Aplicada

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7. Clculos
Meio para bolores
Yeast Extract Agar (5g/ L)
5g

1000ml

200ml

X=

= 1g

Peptona
10g

1000ml

200ml

X=

= 2g

Agar (20g/ L)
20g

1000ml

200ml

X=

= 4g

Glucose
20g

1000ml

200ml

X=

= 4g

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Endo-Agar
41,5g

1000ml

200ml

X=

= 8,3ml

8. Resultados obtidos e sua discusso

Controlo
negativo (-)
Meios

Endo - Agar

Bolores e

PCA

leveduras

UFC
Brancas

10

Amarelas

Vermelhas/

10

alaranjadas
Total

12
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Ambiente
Meios

Endo - Agar

Bolores e

PCA

leveduras

UFC
Brancas

20

Amarelas

19

Vermelhas/

45

Bolores e

PCA

alaranjadas
Total

100
Meios

Endo - Agar

leveduras

UFC
Brancas

Inc.

Inc.

Inc.

Amarelas

Vermelhas/

Incontvel

Incontvel

Incontvel

alaranjadas
Total

13
Qumica Aplicada

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10-1
Meios

Endo - Agar

Bolores e

PCA

leveduras

UFC

Brancas

Inc.

Inc.

Amarelas

Inc.

Vermelhas/

Incontvel

Incontvel

Incontvel

Bolores e

PCA

alaranjadas
Total

10-2
Meios

Endo - Agar

leveduras

UFC

Brancas

Inc.

Inc.

Amarelas

Inc.

Vermelhas/

alaranjadas
Total

14
Qumica Aplicada

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10-3
Meios

Endo - Agar

Bolores e

PCA

leveduras

UFC

Brancas

74

268

Amarelas

Vermelhas/

74

268

alaranjadas
Total

9. Concluso
Estas aulas prticas, nas quais iniciamos, desenvolvemos e terminmos todo o
projeto, correram normalmente e houve uma boa interaco entre o grupo.
Foram atingidos todos os objetivos apesar de termos obtido resultados no to bons
como o esperado, provavelmente a erros por parte do operador na efetuao dos
mtodos e tcnicas e devido ao uso da lamparina ao invs do Bico de Bunsen originou
ento a m assepsia do local e consequentemente a contaminao de meios de
controlo supostamente negativos e controlo ambiente muito contaminado.

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10.

Bibliografia/ Sitegrafia

Apontamentos obtidos no decorrer da aula (caderno de laboratrio)

Protocolo cedido pela docente da disciplina

http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S010120612006000100017&script=sci_arttext

http://www.bento.ifrs.edu.br/site/midias/arquivos/2012424102432265tcc[15]_co
mpleto_kelimar_levis_de_pariz.pdf

11.

Auto e Hetero Avaliao

Auto Avaliao
Andreia
Luzio

Andreia Catarina

Joana

Vnia

Luzio

Mota

Miranda

Cabete

12

16

16

16

15

16

16

15

15

16

16

16

Catarina
Mota
Joana
Miranda
Vnia
Cabete

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Qumica Aplicada