LINFOCITOS B:

ONTOGENIA Y ACTIVACION

Mdula sea

B1

B1a

B2

B1b

MEDULA OSEA

SANGRE

Repertorio abierto de LB maduros.

Induccin de Tolerancia central

Induccin adicional de Tolerancia.

LB no entran folculos linfoides

LB entran al folculo linfoide

LB tienen una vida media de 3 das

Apoptosis

Clulas B vrgenes maduras y

circulantes de larga vida (3-8
semanas)
Estmulo Agco

Clulas plasmticas
Secretoras de acps
MO e intestino

Clulas B de memoria maduras y

circulantes de vida ms larga.
Expresan IgG, IgA o IgE
de alta afinidad

Uno de los objetivos fundamentales de la ontogenia:

Formacin de receptor antignico funcional en linfocitos B
BCR
Reconocimiento del
antgeno

Anticuerpo de membrana
Cadenas
Subrogadas
Ig, Ig

Sealizacin
intracelular

Porcin transmembranal

Progenitor
Linfoide
Stem Cell
comn
Hematopoytica

Pre-Pro B

Estadios de desarrollo
de la clula B

Pro B

Pre B

Clula B
inmadura

IgM
IgD

Clula B
madura

Desarrollo de clulas B en la mdula sea

Regulacin de la expresin de BCR

Cada clula B adquiere solo una especficidad
Seleccin negativa de clulas B autoreactivas
Aporta clulas B maduras a la periferia
Proporciona un microambiente para la
secrecin de acps por clulas plasmticas

La mdula sea proporciona el microambiente para la

maduracin, diferenciacin y seleccin durante el desarrollo de
las clulas B.

Eventos genticos y expresin de acps durante el desarrollo de LB

Mdula sea
Rearreglos gnicos
de cadena pesada
parciales

Rearreglos gnicos
de cadena pesada
completos

Pre-Pro B

Clula
plasmtica

Intestino

Clula B OL 2
activada

Pro B

Rearreglos gnicos
de cadena liviana
Expresin de
pre-BCR

Pre B

Clula B
madura

Clula B
inmadura

Expresin de
mIgM + mIgD

Expresin de
mIgM

Reconocimiento
De antgeno

Maturing B cells

Bone marrow stromal cell

Citocinas y contacto celular durante la diferenciacin

de la clula B

VLA-4
(Integrina)

Pro B
temprana

Stem
cell

VCAM-1

C-Kit

Stem cell
factor

(Sup Igs)

Mol adhesin
celular
Clula estromal

Citocinas y contacto celular durante la diferenciacin

de la clula B
Receptor
IL-7

IL-7
Factor de
crecimiento

VLA-4
(Integrina)

Pro B
temprana

Pro B
tarda
Pre B

VCAM-1
(Sup Igs)

Mol adhesin
celular
Clula estromal

Receptor pre-BCR

Ig

Ig

Pre B

CH

5
VpreB

Cllula estromal

Cadena pesada
VHDHJH

Se expresa temporalmente cuando los rearreglos VHDHJH CH son productivos

La cadena liviana subrogada VpreB/5 es necesasria para su expresin.
Los ligandos para el pre-BCR se expresan en la clula estromal
(galectina-1, heparan sulfato, otros).

Como ocurren los rearreglos de CH de Ig

V

Constantes

Lnea
germinal

C3

DH - JH

C1

C1

VH - DHJH

C2

C4

VHDHJH

C2

VHDHJH - C

CH

Rearreglos D-->J en ambos alelos

VH

DH JH

Rearreglos V-->DJ en un solo alelo

VHDJH

DNA

RNAm
Si

AAAAAAA
Rearreglo productivo: Codifica un polipptido?

No hay rearreglos en el
segundo alelo

Rearreglo productivo
Si

Asociacin CH - VpreB/l5
Expresin de pre-BCR

No

Segundo alelo rearregla

V-->DJ
No

Muerte por apoptosis

Expresin del pre-BCR y su interaccin con las clulas

estromales
IL-7R (L-7R
y
IL-2 c)

Sealizacin intracelular;
1. Expansin clonal
2. Exclusin allica
3. Rearreglos de genes de
cadena liviana

La interaccin con pre-BCR dispara la

proliferacin celular
Pre B

Estado de LB
Configuracin
Genes IgH

Stem cell

Pro-B
temprana

Lnea
germinal

DH - JH

Pro-B
tarda
VH - DHJH

Pre-B
VHDHJH - CH

Pre B

Proliferacin

Pre B
Pre B

Pre B
Pre B
Pre B
Pre B

Comienzan rearreglos
de cadena liviana

Pre B

Muchas clulas pre-B

con pre-BCR idntico

Interaccin del pre-BCR

Inhibe rearreglos posteriores de genes de cadena pesada

Asegura una nica especificidad por cada LB

EXCLUSION ALLICA

La expresin de un gen en un cromosoma, inhibe la

expresin del alelo en el segundo cromosoma

Genes de cadena liviana CL

VL - JL

VL - JL

VLJL - C

VL - JL

VL - JL

VLJL - C

CL

CL

Rearreglos de CH y CL

LB inmaduro

Segmentos gnicos para genes de Igs

Cadenas
Segmento
Cadenas Livianas Pesadas
H

Variable (V)
40
30
65
Diversidad (D)
0
0
27
Unin (J)
5
4
6

Adquisicin de la especificidad para el antgeno, crea la

necesidad de chequear el reconocimiento de antgenos
propios
Pre B

Clula pre-B

Clula B inmadura

Incapaz de reconocer ags

!!Puede ser autoreactiva!!

IgMm puede reconocer ags

Si es autoreactiva

1. Remocin fsica del clon (apoptosis)

2. Parlisis de la funcin
3. Alteracin de la especificidad

Delecin
Anergia
Edicin del BCR

Mecanismos
Muerte por
Apoptosis

Reconocimiento de ags
Multivalentes
Cross-linking

Delecin clonal

Reconocimiento de ags
Monoo multivalentes
No inducen Cross-linking
Maduracin de LB
IgM+ IgD+
no funcional
Anergia clonal

Edicin del BCR

Un rearreglo que codifica para un receptor que reconoce un ag propio con
suficiente afinidad, puede ser reemplazado
V

D J

Receptor reconoce
ag propio
Arresto en el desarrollo
Reactivacin de
recombinasas
RAG-1 y RAG-2

Apoptosis
or anergia

Nuevo rearreglo VDJC

V

D J

Receptor editado se chequea

Reconocimiento de ag propio
No
Maduracin

Si
Apoptosis

IgD

IgM

Linfocito B maduro

Por qu una clula B madura virgen puede expresar tanto

IgM como IgD de forma simultnea
C

C3

C1

Ausencia de secuencia de seal de

Recombinacin (RSS)
Secuencias de reconocimiento para
productos del gen de activacin
de recombinacin (RAG)

C1

C2

C4

C2

Splicing alternativo del RNAm de IgM e IgD

VD J

VDJ

C1

C2

C3

C3

C1

C4

C1

C2

DNA

C3

pA2

pA1

Se pueden generar dos tipos de RNAm de forma simultnea por el uso

diferencial de sitios de poliadenilacin y splicing del RNA

VD J

C1

C2

C3

C4

AAA C1

V D J C

C2

C3

RNA clivado y
poliadenylado en pA1

IgM mRNA
RNA clivado y
Poliadenilado en pA2

VDJ

C1

C2

C3

C4

C1

C2

C3

AAA

pA1

V D J C

IgD mRNA

Se generan IgM e IgD con la misma especificidad en una sola clula B.

Variaciones fenotpicas durante la maduracin del LB

Variaciones fenotpicas durante la maduracin del LB

Cuales son las seales externas que activan los LB maduros?

Fab anti-mIg

Unin de fregmentos Fab a mIg,

no se genra seal intracelular.

mIg

(Fab)2 anti-mIg

Anti-(Fab)2

Cross-linking de diferentes mIg

permiten que el BCR genere una
seal intracelular dbil.

Fuerte cross linking de (Fab)2 unidos

a mIg usando un anti-(Fab)2, aumenta
la seal intracelular.

Coloracin en anillo

Patching

Ig distribuida al rededor
De la superficie

Ig en agrupamientos
Como resultado
decross-linking
intermedio

Capping
Ig polarizada en la superficie
celular por cross-linking
fuerte

Desarrollo de clulas B en la periferia

Sealizacin en clulas B

Sealizacin en clulas B

Co-receptor del BCR

Interaccin del co-receptor incrementa

la seal de 1000 a 10000 veces.

Sealizacin intracelular del LB

MAP kinasas
Se encuentran en organismos multicelulares y su activacin permite la
fosforilacin de factores de transcripcin de la familia AP-1 como Fos y Jun.
Incremento de calcio intracelular va IP3
IP3, producido por PLC-, une los canales de calcio en el RE y libera el Ca++
al citosol. El incremento intracelular de Ca++ activa la fosfatasa calcineurina,
la cual activa el factor de transcripcin NFAT.
Activacin of miembros de la familia de Protein kinase C va DAG
DAG asociado a la membrana plasmtica recluta miembros de la familia
de proteina kinasa C. The PKC, protenas serin/treonina kinasas, activan
the transcription factor NF
B

Los factores de transcripcin activados AP-1, NFAT and NFB inducen

proliferacin, diferenciacin y mecanismos efectores por la clula B.

La activacin de la clula B vrgen se lleva a cabo

en el rgano linfoide secundario
Ag en tejido
Vaso
sanguneo

Las clulas linfoides ingresan

al OL por las vnulas
endoteliales altas
HEV

Vaso linftico aferente

Seno subcapsular
Macrfagos
Folculo linfoide
primario LB
No activacin
Folculo linfoide
secundario LB
Activacin pasada
o reciente

Corteza: Folculos
Zonas de LB

HEV

HEV

Paracorteza
Zona de LT

Centro
germinal

Las clulas linfoides ingresan

al OL por las vnulas
endoteliales altas
HEV
Vaso linftico aferente

Centro germinal
Proliferacin de LB especficos de
antgeno.
Cambio de isotipo
Maduracin de la afinidad por
hipermutacin somtica.
Seleccin del repertorio de alta
afinidad y regulacin de LB
autoreactivos.
Generacin de clulas B de
memoria
Diferenciacin de clulas
plasmticas secretoras de acps
de alta afinidad.

FDC

Bead formation on dendrites

Asociacin de antigeno con FDC

Antgeno entra al centro germinal
en forma de complejo inmune
con C3b y anticuerpos

El complejo inmune se une a R

C y FcIgR en la FDC

FCIgR

RC

FDC
Las dendtas de las FDC se cubren con
una capa delgada de complejos inmunes
FDC no procesan antgenos

Eventos dependientes de citocinas de LT

ag
ag

Activacin
Cambio de isotipo
Generacin de
LB memoria

Maduran afinidad

Diferencian

Seleccin del
repertorio

Citocinas secretadas
por LT

Cambio de isotipo: Recombinacin somtica

C3

C1

C1

C2

C4

C2

S3
C3

S1

C
C1

VDJ

C3

VDJ

C1

VDJ

C3

VDJ

C1

Cambio de IgM
a IgG3

Cambio de IgM a IgA1

En los genes constantes se

encuentran las regiones S
que son necesarias para
switch de isotipo
(cambio de isotipo)

Maduracin de la afinidad: Hipermutacin somtica

La generacin de LB capaces de producir anticuerpos de alta afinidad ocurre
a travs de la acumulacin de mutaciones en las regiones variables de genes
Igs; y la seleccin de LB cuyos BCRs tienen mutaciones acumuladas que
incrementan la afinidad por al Ag

Seleccin del repertorio de alta afinidad

Clula B y clula plasmtica

Linfocitos B de memoria
Clula B
efectora

Precursor

X
Clula B
memoria

LB de memoria generados en la respuesta secundaria

pueden permanecer en estado proliferativo por largos
periodos de tiempo y sobrevivir de una manera
dependiente o independiente de antgeno

Linfocitos B1 y B2

Que son los antgenos timo dependientes

y timo independientes?