UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS DE

RIBEIRO PRETO
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS
FARMACUTICAS

CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

Prof Dr Cristiane Masetto de Gaitani

2012

Evoluo da cromatografia em coluna clssica

tamanho das partculas da FE

maior eficincia e resoluo

maior presso equipamento

CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

Vantagens
Menor tempo de anlise
Quantificao
Detectabilidade
Versatilidade
Automatizao

Desvantagens
Custo
Anlise qualitativa
Detector universal sensvel
Treinamento

Coluna

Cromatograma

Injetor

Sistema de
aquisio
de dados

Reservatrio
de fase
mvel

Amostra
Bomba

Detector
Sistema Isocrtico
Descarte

SEPARAO: depende da distribuio dos componentes

da amostra entre a fase estacionria e mvel

FASE MVEL

Arrasta os componentes da amostra

Participa do processo de separao

FASE MVEL
Pura, livre de partculas e gases

FILTRAO
Eliminao de material particulado
DEGASEIFICAO
Eliminao de gases
Ultra-som + vcuo
Hlio
on line

FASE MVEL
Pura, livre de partculas e gases
Solubilizar a amostra
No degradar e nem dissolver a fase estacionria
Baixa viscosidade
Compatvel com o detector usado

Solventes orgnicos
Hexano
Heptano
Clorofrmio
Isopropanol
Acetonitrila
Metanol

Solues aquosas de sais

Soluo tampo
mistura de dois ou mais solventes
solveis

ISOCRTICA
Composio da fase mvel constante durante a separao
VANTAGENS: simples, repetitivo, baixo custo

GRADIENTE
Composio da fase mvel varia durante a separao
DESVANTAGENS: limitao a alguns tipos de cromatografia,
rudos, incompatibilidade com alguns detectores
APLICAO: compostos com caractersticas qumicas variadas,
interferentes.
Observaes
Solventes puros
Solventes com fora de eluio diferente
Miscibilidade
Retorno s condies iniciais

COLUNA CROMATOGRFICA

Escolha da coluna cromatogrfica?

COLUNA CROMATOGRFICA
CORAO DO PROCESSO CROMATOGRFICO

Slica usada como suporte

Slica modificada (diferentes tipos e
mecanismos de separao)
Condicionamento da coluna
FM em vazo baixa (0,2 mL/min)
4-8 h colunas novas
2 h colunas armazenadas por alguns dias
15 min antes uso dirio