GENTICA E CNCER

Estudos abrangendo inmeras reas possibilitaram uma compreenso fundamental das

bases genticas do cncer. Embora fatores ambientais e dietrios indubitavelmente
contribuem para o cncer, aceita-se que os cnceres se originam atravs de um processo de
passos mltiplos conduzidos por alteraes de genes celulares e seleo clonal da prognie
variante, que vai adquirindo um comportamento progressivamente mais agressivo. Estas
mutaes ocorrem em trs classes de genes celulares: oncogenes, genes supressores de
tumor e genes de reparo de DNA. A grande maioria das mutaes em cncer somtica, e
presente apenas nas clulas tumorais. Uma quantidade relativamente pequena dessas
mutaes pode estar presente na linhagem germinativa dos indivduos e predispo-los a
vrios tipos de cncer.
Considera-se que a proliferao de clulas normais seja regulada por proto-oncogenes
promotores de crescimento contrabalanada por genes supressores de tumor, que
restringem o crescimento. Mutaes que potenciam as atividades dos proto-oncogenes,
convertem-nos em oncogenes, que foram o crescimento de clulas tumorais. Inversamente,
leses genticas que inativam genes supressores, liberam as clulas da represso imposta
por estes genes, permitindo o crescimento irrestrito de clulas cancerosas.
ONCOGENES
Proto-ooncogenes so genes normais no organismo, envolvidos na proliferao celular. Um
proto-oncogene pode ser convertido de um gene celular normal em um oncogene por uma
variedade de eventos submicroscpicos, incluindo mutaes puntuais, pequenas delees e
inseres e justaposio a outras sequncias cromossmicas. Este ltimo evento pode ser
visualizado citogeneticamente como uma translocao ou inverso. Alm disso, a
amplificao gnica tambm pode levar produo exagerada de produtos oncognicos.

QUEBRAS ORIGINANDO FUSES GNICAS

A leucemia mielide crnica (CML) foi a primeira doena neoplsica a ser associada com
uma anormalidade cromossmica, o cromossomo Philadelphia (Ph1), um cromossomo
marcador do grupo G que ocorre na medula ssea de 90% dos pacientes com CML. O
rearranjo especfico desse cromossomo mostrou ser o resultado da translocao t(9;22)
(q34;q11).

A clonagem desses pontos de quebra mostrou que o oncogene Abelson (ABL) estava
translocado de sua localizao normal no cromossomo 9 para o cromossomo 22 (Ph 1). O
gene localizado no ponto de quebra do cromossomo 22, que foi chamado BCR (breakpoint
cluster region), tem pontos de quebra em muitas neoplasias. A justaposio desses genes
leva formao de um RNAm quimrico de 8,5 kb, maior do que o RNAm normal do ABL .
Este RNAm traduzido em uma proteina quimrica ABL (210 kDa), com atividade tirosina
quinase aumentada.

Mapa da fuso gnica BCR-ABL em Leucemia Mielide Crnica. (Forma-se um DNA quimrico que dar origem a
uma protena quimrica de 210 kDa).

Pacientes com leucemia linfoblstica aguda (ALL), cujas clulas tinham um cromossomo Ph 1
resultante da translocao cromossmica tpica foram estudados, com a utilizao das
mesmas sondas. Tanto CML quanto ALL tem o mesmo ponto de quebra ABL entre os exons 1
e 2, mas em BCR, o ponto de quebra para ALL est ao menos 50 kb 5 do ponto de quebra
para CML. O RNAm em ALL menor que em CML (70 kb) e a proteina quimrica ABL
tambm menor (190 kDa) . Nestes casos a protena est alterada.

Mapa da fuso gnica BCR-ABL em Leucemia Linfoblastica Aguda. (Forma-se um DNA quimrico que dar
origem a uma protena quimrica de 190 kDa).

Entre as condies em que a concentrao da protena afetada est o linfoma de Burkitt,

cuja principal alterao a translocao recproca t(8;14) (q24;q32) . O ponto no qual o
cromossomo 14 se quebra est situado entre os genes que codificam as regies varivel e
constante da cadeia pesada da molcula de anticorpo (s vezes a tranlocao envolve os
cromossomos 2 ou 22 em vez do 14, em regies que tambm esto envolvidas na produo
de anticorpos). O oncogene c-MYC se localiza no pequeno segmento do cromossomo 8, que
consistentemente se transloca para o cromossomo 14. A proteina c-MYC qualitativamente a
mesma, tanto nas clulas normais quanto nas do linfoma de Burkitt, porm o rearranjo ativa o
oncogene por causa de sua justaposio a sequncias enhancer que so ativas no tipo
celular do qual o tumor se origina. O oncogene c-MYC ento expresso na mesma
intensidade em que os genes da imunoglobulina so expressos numa clula B normal. Ele se
torna parte da funo especializada da clula e sua protena expressa em nveis
anormalmente altos .

Translocao recproca entre os cromossomos 8 e 14 origina a maior parte dos casos de Linfoma de Burkitt,
uma malignidade das clulas B do sistema imune humano. Um segmento do cromossomo 8 se quebra e se
move para o cromossomo 14 e reciprocamente um segmento do cromossomo 14 se move para o cromossomo 8.
Essa translocao recproca coloca um oncogene do cromossomo 8 prximo a um gene no cromossomo 14 que
codifica parte da produo da molcula de anticorpo. Um mecanismo que ativa a produo de anticorpos em
clulas B normais, ativa ento o oncogene.

Esses rearranjos apresentam duas conseqncias potenciais: 1) ativao de genes chave no

controle da proliferao celular e diferenciao; 2) o rearranjo rompe genes no
relacionados, posicionados em cada um dos pontos de quebra cromossmicos que ento se
fundem num gene quimrico. Pelo menos um dos genes afetados tende a codificar um fator
de transcrio quimrico. Quando expresso, o produto da fuso freqentemente retm a
especificidade de ligao ao DNA de um dos genes parentais, ativando inapropriadamente a
transcrio. Diversos outros casos desses rearranjos j foram descritos detalhadamente,
tanto em anlise citogentica, quanto molecular. Todos os seus produtos quimricos tem
atividade transformante.

ONCOGENES IDENTIFICADOS POR AMPLIFICAO DE DNA

Diversos alelos oncognicos foram identificados porque eles esto contidos em sequncias
de DNA amplificadas em clulas tumorais. Em vrios casos, as sequncias de DNA
amplificadas foram primeiramente reveladas em anlises cariotpicas como elementos
extracromossmicos denominados double-minutes e regies homogeneamente coradas.
Double minutes (dmin) e regies homogeneamente coradas (HSRs), que ocorrem em muitos
tipos tumorais, so amplificaes genicas e correspondem a uma concentrao imprpria de
oncogenes. Double minutes so estruturas extracromossmicas de DNA circular, consistindo
de 1 a 2 milhes de pares de bases que replicam de maneira autonoma, aproximadamente
uma vez por ciclo celular, e segregam ao acaso para as clulas filhas, devido ausncia de
centrmeros. HSRs so estruturas amplificadas intracromossomicas que no esto
necessariamente localizadas no locus nativo do gene. Ambos contm genes que do uma
vantagem seletiva de proliferao s clulas tumorais onde eles ocorrem. H uma hiptese de
que regies de DNA so excisadas do cromossomo como resultado de eventos de
recombinao na forquilha de replicao. Dependendo de seu tamanho, estas estruturas
amplificadas podem conter alguns genes cromossomicos e resultariam numa deleo desses
genes dos loci correspondentes. Este modelo ainda prediz que os epissomos multimerizam
para formar estruturas circulares maiores, os dmin, que podem ser detectados
citologicamente. Subsequentemente sua formao, estes elementos de DNA
extracromossmicos podem se integrar ao cromossomo, resultando em HSR.
Acredita-se que a seleo biolgica para a gerao e manuteno de sequncias amplificadas
de DNA em clulas tumorais seja dirigida pelo nmero de cpias aumentadas e expresso
aumentada de genes alvo ou genes dentro de uma regio maior de DNA amplificado.

GENES SUPRESSORES DE TUMOR

Por uma definio operacional, os genes supressores de tumor so elementos genticos cuja
perda ou inativao permite clula apresentar algum dos vrios fentipos da transformao
neoplsica. Neoplasias como retinoblastoma, tumor de Wilms, meningioma, neurinoma de
acustico etc., podem ter uma perda gentica de ambos os alelos de um dado gene. A ao
recessiva de alelos mutantes de genes supressores de tumor permite que os efeitos
resultantes sejam retardados por longos perodos de tempo aps a concepo. O
retinoblastoma um tumor da infncia e em 20-30% dos casos, ambos os olhos so afetados.
Todos esses casos bilaterais e 15% dos casos unilaterais so herdados como um carter
autossmico dominante. O retinoblastoma forneceu a primeira sugesto de que a inativao
de um gene especfico poderia ser importante para o desenvolvimento do cncer humano; o
gene RB est localizado no brao longo do cromossomo 13 (13q14) e em tecido tumoral, o
RNA mensageiro e o produto proteico deste gene esto ausentes. O envolvimento da regio
13q14 na etiologia de RB foi primeiro inferida pela observao de delees constitucionais
intersticiais de 13q14 em pacientes apresentando retinoblastoma e anomalias congenitas.
Tanto as formas hereditrias quanto as espordicas de retinoblastoma envolvem
anormalidades nesta regio. Utilizando-se retinoblastoma como modelo, postulou -se que ele
desencadeado por 2 leses sucessivas no genoma celular. No retinoblastoma espordico,
ambas as leses ocorreriam na linhagem de clulas da retina como mutaes somticas
ocorrendo de novo, mas bem depois da concepo. No retinoblastoma familial, uma das duas
mutaes seria herdada de um dos pais ou se originaria durante a gametognese; a segunda
mutao requerida ocorreria ento como um evento somtico. O primeiro passo seria a
inativao de um gene supressor de tumor e o segundo passo seria a inativao de seu alelo.
Esta inativao poderia ser qualquer disfuno (ex. metilao) ou ausncia (monossomia,
deleo) do gene.

Modelo do desenvolvimento de retinoblastoma. Na parte superior, esquerda, 2 cromossomos 13 normais so

representados. A formao de um tumor pode resultar de um cromossomo com um nico gene mutado (RB).
(Esta j a constituio de um indivduo com a forma hereditria de retinoblastoma). A segunda alterao a
inativao de seu alelo.

Os produtos dos genes supressores de tumor so componentes das vias de sinalizao

intercelular que permitem clula receber e processar sinais inibidores do seu redor. Quando
a clula perde componentes crticos desta rede de sinalizao, ela perde a capacidade de

responder a certos sinais extracelulares inibidores da proliferao, mesmo que estes sinais
ainda estejam presentes no meio ambiente.
A parada do crescimento geralmente conseguida atravs de trs respostas alternativas.
Uma clula em crescimento exponencial pode parar em diferentes fases de seu ciclo celular.
Uma parada no final da fase G1, justamente antes da sntese de DNA ocorre frequentemente.
Alternativamente, as clulas podem ser induzidas a sofrer um estgio terminal, a
diferenciao ps-mittica. Isto representa um comprometimento irreversvel e serve mais
uma vez para limitar a proliferao celular. Mais drstico o comprometimento da clula para
sofrer senescncia ou apoptose. Juntas, estas respostas definem a rea de ao dos genes
supressores e das protenas por eles codificadas.
A descoberta de que o mesmo tipo de genes est mutado em muitos tumores levou
concluso de que o cncer atingido atravs de mltiplos passos. O nmero de mutaes
requeridas para cada caso determinado de cncer varia de acordo com os diferentes tipos
celulares. Um exemplo de relevncia para o fenmeno de mltiplos passos o dos tumores
colo-retais. Esses tumores parecem ser iniciados por mutaes no gene supressor de tumor
APC (5q). Ainda no est claro se o segundo passo uma mutao no alelo APC
remanescente, resultando na ausncia total do produto gnico funcional ou alguma mutao
em outro gene ainda no identificado. Mutaes no APC podem ocorrer da mesma maneira
que no gene RB, na linhagem somtica ou germinativa. Mutao de APC leva proliferao
anormal de clulas. A hipometilao do DNA ento associada converso de uma das
clulas deste epitlio proliferativo em um pequeno tumor benigno (adenoma). Ativao do
gene RAS (12p) frequentemente ocorre numa dessas clulas do tumor benigno, levando a um
crescimento seletivo, resultando num tumor maior e pior (embora ainda benigno). Em
seguida, uma mutao no gene DCC (18q) pode fornecer a uma das clulas deste adenoma j
em progresso, a capacidade de proliferar ainda mais anormalmente, originando um adenoma
displstico que por sua vez, atinge o estgio carcinomatoso. A transio de adenoma
avanado para carcinoma frequentemente acompanhada, e talvez dirigida, por mutaes no
gene p53 (17p). Isto tambm poderia levar capacidade de invaso, ou outras alteraes
seriam necessrias para o processo metasttico ser atingido
Nenhum estgio da tumorignese esttico, incluindo o estgio maligno; mutaes
adicionais ocorrem, dando origem a pequenas subpopulaes que podem permanecer como
subtipos clonais; estes representam as maiores dificuldades em oncologia clnica, pois so
reservatrios de clulas geneticamente heterogneas com capacidades variadas de
proliferao, diferenciao e metstases, e diferentes sensibilidades a drogas, radiao e
ataque imune.
Em muitos tumores, mutaes em um gene especfico parecem preceder as mutaes em
outros. Pelo fato de os oncogenes e genes supressores de tumor controlarem diferentes
circuitos de crescimento, talvez a ordem na qual os circuitos so interrompidos no seja
importante, mas sim que um nmero suficiente de vias crticas tenha uma disfuno para que
o crescimento do tumor ocorra. Os achados citogenticos em muitos tumores sugerem que
somente um conjunto de vias genticas pode iniciar os processos tumorigenicos em tipos
celulares particulares, e que a mutao em alguns genes confere uma vantagem de
crescimento seletivo somente em estgios tardios do desenvolvimento tumoral.

Modelo de evoluo cromossmica em neoplasias colo-retais

GENES DE REPARO DE DNA

Mutaes que modifiquem a sequncia de nucleotdeos na cadeia original de DNA, como
transio ou transverso, acarretam um pareamento inadequado das bases nucleotdicas,
promovendo distores na configurao da dupla hlice de DNA .
Inativao dos genes de reparo do DNA provavelmente no afeta diretamente os passos
normais do controle do crescimento. Em vez disso, sua inativao parece resultar em uma
taxa aumentada de mutaes numa variedade de genes celulares, incluindo proto-oncogenes
e genes supressores de tumor.

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METILAO
O fenmeno epigentico pode ser definido como mudana no material gentico
(especialmente no DNA e na cromatina) que altera a regulao da expresso gnica de
maneira que esta passada para as clulas filhas dentro das clulas somticas), porm no
caracterizada como mutao, pois no envolve mudana na seqncia de DNA. Tem como
principais mecanismos de represso transcricional a metilao do DNA e a acetilao das
histonas. A modificao no padro de metilao do DNA a alterao epigenmica mais bem
estudada atualmente.
A metilao do DNA corresponde adio de um grupo metil ao carbono na posio 5 da
citosina.

Ocorre quase que exclusivamente nas citosinas que so seguidas imediatamente por uma
guanina (dinucleotdeos CpG). A maior parte do genoma mostra uma clara depleo desses
dinucleotdeos e os que esto presentes esto quase sempre metilados.
Metilao de DNA o mecanismo que permite que determinados genes (e no outros) se
manifestem dentro de clulas normais especializadas, visto que todas as clulas do corpo
trazem a mesma carga gentica. O que as diferencia a manifestao de um ou de outro gene
durante o desenvolvimento e em toda a sua vida para desativar genes desnecessrios.
Em contraste, pequenas pores de DNA, chamadas ilhas CpG, so comparativamente ricas
em nucleotdeos CpG e quase sempre esto livres de metilao. Estas ilhas CpG esto
freqentemente localizadas na regio promotora dos genes humanos e a metilao dentro
das ilhas est associada inativao da transcrio do gene correspondente.
O mecanismo molecular responsvel pela manuteno do estado de metilao livre das ilhas
CpG ainda desconhecido, mas, em clulas embrionrias, parece servir como local de
ligao de protenas especficas que impedem a metilao de novo . Essa associao se faz
necessria uma vez que a metilao do DNA em regies ricas em CG resulta em uma
profunda inibio da expresso gnica.
Em clulas cancergenas, metilao anormal de DNA desativa genes que normalmente
evitariam divises celulares imprprias. Em outras palavras, o processo elimina um dos
melhores mecanismos do corpo para prevenir o dano a uma clula, evitando que a mesma se
torne cancerosa.
Na realidade, mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor so inativados por metilao.
A resistncia quimioterapia est, na maioria dos casos, ligada ao grau de metilaes
anormais em alguns tumores.
As alteraes de metilao do DNA em clulas tumorais incluem a perda da metilao em
sequncias normalmente metiladas (hipometilao) e o ganho de seqncias metiladas em
locais geralmente no metilados (hipermetilao).

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