Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
SantAnna.
1- Reparo e replicao
1. REPLICAO DO DNA
O processo biolgico da reproduo requer a transmisso fiel da informao gentica dos pais para os
filhos. Portanto, a replicao do DNA genmico essencial para a existncia de todas as clulas e
organismos.
Todas as clulas, em algum momento tero que se dividir. Algumas fazem a vida toda, outras, param
em algum momento. Toda vez que daro origem a clulas-filhas em que o material gentico ter que ser
duplicado para que todas informaes sejam passadas. Todo o seu genoma duplicado, sendo necessria
uma maquinaria enzimtica para copiar grandes molculas de DNA que constituem os cromossomos de
procariotos e eucariotos. Na fase S do ciclo que ocorre a duplicao. Esta fase controlada, fiel e bastante
rigorosa onde existe uma maquinaria complexa em que as enzimas funcionam para diminuir ao mximo o
erro e que este erro no seja passado a diante. Havendo erro durante a replicao do DNA existir outro
mecanismo para tentar reparar. Ao de agentes ambientais tambm pode ser reparadas, tais como
radiaes. Anormalidades neste processo de reparo podem ter consequncias desastrosas como o
desenvolvimento do cncer.
Consideraes sobre replicao: um processo semiconservativo no qual cada fita parental serve de
molde para sntese de uma nova fita-filha (duas fitas antiparalelas onde uma fita complementar a
outra e cada uma serve como molde para duas fitas novas as duas molculas de DNA restantes
tero sempre uma fita antiga e outra nova). A enzima central envolvida nesse processo a DNA
polimerase que catalisa a juno de desoxirribonucleosdeos 5 trifosfatados (dNTPs) para formar a
cadeia crescente de DNA. Outras protenas esto envolvidas e mecanismos de correo de erros so
necessrios para garantir que a exatido da replicao seja compatvel com a baixa frequncia de
erros exigida para reproduo celular.
semiconservativa: uma
das
fitas
originais
DNA polimerases em eucariotos: As clulas eucariticas contm cinco DNA polimerases (alpha - ,
beta - , gama - , delta - e psilon - ). A polimerase gama est localizada na mitocndria e responsvel
pela replicao do DNA mitocondrial. As outras esto no ncleo e esto envolvidas na replicao nuclear. As
polimerases alpha, delta e psilon apresentam maior atividade em clulas em diviso, o que sugere um
envolvimento na replicao. J a beta ativa tanto em clulas em diviso quanto naquelas que no esto o
que consistente com a sua funo no reparo de danos no DNA. O papel da psilon ainda permanece
confuso, embora essa enzima provavelmente funcione de maneira semelhante polimerase delta que
suficiente para replicao na ausncia da psilon tanto em sistemas livres de clulas quanto em leveduras.
Propriedades das DNA polimerases: Todas as polimerases sintetizam DNA na direo 5 3,
adicionando um dNTP no grupamento 3 hidroxil da cadeia nascente. As DNA polimerases s podem
adicionar um novo desoxirribonucleotdeo a uma fita de DNA (primer) que esteja ligado por pontes de
hidrognio a uma fita-molde complementar (fazem sntese da fita a partir de um pedao j pronto (outra
enzima que polimeriza esses pequenos fragmentos primer, ribonucleotdeos) adicionando nucleotdeos
complementares, todas as DNA polimerases precisam de um modelo para ir inserindo e pareando). Assim,
diferem das RNA polimerases em que iniciam a sntese de uma nova fita de RNA sem necessitar de um
primer. Esta propriedade parece ser essencial para manuteno da alta fidelidade de replicao do DNA.
Qumica da sntese de DNA:
(adio
do
desoxirribonucleotideo
trifosfatado): sempre adicionada
da extremidade 5 para 3.A
quebra
desse
fosfato
(pirofosfato) serve como energia
para a ligao fosfodister entre
as bases da mesma fita. Para
isso, j tem que haver as pontes
de hidrognio entre bases de
fitas diferentes.
Origem de replicao: existem vrias origens em todo o genoma e elas so ativadas
simultaneamente. Essa variedade de origens possibilita a rapidez da replicao nos eucariotos. A replicao
comea em nesses pontos especficos do DNA. A replicao tanto em procariotos quanto em eucariotos se
inicia em uma sequncia chamada de origem de replicao. Este lugar especfico para as protenas que
iniciam o processo de replicao. A etapa essencial desse processo a ligao de uma protena iniciadora em
sequncias especficas de DNA na origem de replicao. Essa protena iniciadora comea desenrolando as
fitas e recruta outras protenas envolvidas na sntese de DNA. A helicase e a protena SBB, ento, atuam na
continuidade do desenrolamento da dupla fita e exposio da fita-molde, e as primases iniciam a sntese das
fitas contnuas. Assim, duas forquilhas de replicao so formadas e movem-se em direes opostas. Em
genomas bacterianos ou virais existe uma nica origem, porm em genomas maiores existem vrias origens
de replicao. A velocidade da replicao em procariotos muito mais rpida do que em eucariotos
(empacotamento do DNA na cromatina). Apesar disso, os genomas de mamferos so replicados em poucas
horas devido s milhares de origens de replicao.
Eucariotos: Nos eucariotos a replicao inicia em vrias origens de replicao (Ori ou OriC) em um
mesmo cromossomo. Essa replicao rpida, mas como o DNA do eucarioto bem maior do que o do
procarioto ela vai demorar horas para se completar. Regies ricas em adenina (A) e timina (T) duas pontes
de hidrognio, mais fcil de romper a ligao. Elas so ativadas, protenas iniciadoras se ligam ao DNA e
abrem as duas fitas para formar a forquilha (duas, de cima e de baixo) de replicao bidirecional (nos dois
sentidos) e simultnea. Quando o sentido 5 3 de forma contnua. No outro sentido a polimerase vai
para trs e corre, mas sempre no sentido 5 3 (fragmentos de Okazaki). Para sntese da fita continua s
necessrio 1 primer, para a descontinua necessita de vrios primers. As origens de replicao so espaadas
por intervalos de 50 a 300 Kb indicando mais ou menos 30000 origens de replicao no genoma humano.
Parece que as sequncias que definem as origens de replicao variam amplamente entre os eucariotos,
embora o papel das protenas do ORC (ARS - Sequncia de replicao autnoma; uma origem de replicao;
100 pares de bases e umnncleo central de 11 pares de bases comuns a vrios ARS diferentes um stio de
ligao de um complexo proteico ORC complexo de origem de replicao - que necessrio para
replicao do DNA e recruta protenas iniciadoras para iniciar a replicao) como iniciadoras da replicao
seja altamente conservado.
Procarioto: Somente uma origem. Nos procariotos a replicao comea numa regio chamada de Ori
ou Ori C que so regies ricas em adenina e timina que so ligaes mais fracas (nestas regies os pares de
bases variam de 100 a 245 pares). Nela uma protena iniciadora vai se ligar para comear o processo de
replicao. Ela vai comear o processo de desenrolamento das fitas e recruta outras que esto envolvias no
processo de sntese de DNA. A primeira delas a helicase que vai quebrar as ligaes ponte de hidrognio
entre as bases. Depois da separao das fitas a protena primase ir sintetizar os primers de RNA que so
uma sequncia de 15 a 20 nucleotdeos que vo servir para ancorar a protena DNA polimerase. Estas vo
replicar as fitas do DNA em direes opostas. Assim, formam-se duas forquilhas de replicao.
OBS: Aps a protena iniciadora comear a desenrolar as fitas do DNA na regio OriC vo ser formadas fases
de abertura de leitura que vo permitir a insero das enzimas do processo de replicao. A Escherichia coli
para replicar todo o seu genoma leva em torno de 30 minutos.
Sntese do RNA iniciador (Primer): Ao invs de timina usa uracila. realizado
pela enzima primase e polimerase alpha. um pedao de RNA essencial para
iniciar a sntese de DNA. Ele complementar ao molde. Depois que comea a
sntese de DNA ele removido por uma endonuclease. A polimerase delta
substitui o primer e inicia a sntese. Existe uma DNA ligase que liga os
fragmentos de DNA (uma vez na continua e inmeras vezes na descontinua).
Portanto, o primer degradado, substitudo por um fragmento de DNA e depois
esse fragmento ligado pela DNA ligase.
A
forquilha
assimtrica
estende a extremidade 3 da fita contnua uma unidade de repetio a mais do seu tamanho original para
que assim a fita complementar seja sintetizada pelo complexo polimerase alpha + primase usando o primer
convencional de RNA. A remoo do rpimer pode deixar uma extremidade 3 protuberante no DNA o que
pode formar alas nas extremidades dos cromossomos eucariticos. Como no tem onde colocar primer no
final dos cromossomos, sempre um pedao do DNA iria diminuir. No telmero no tem gene, mas eles esto
entre os telmeros, se houvesse encurtamento ia acabar atingindo o gene e eliminando-os o que poderia ser
prejudicial para o desenvolvimento da clula. A telomerase no fica ativa em todas as clulas somticas, com
o tempo ela vai sendo perdida.
CONCLUSO: Cada uma das fitas de DNA atua como molde para sntese de outra fita (replicao) ocorre a
transmisso de informao gentica. medida que a molcula de DNA vai sendo sintetizada, suas fitas so
afastadas, formando uma ou mais forquilhas de replicao em forma de Y. A enzima DNA polimerase,
localizada na forquilha, sintetiza a nova fita de DNA complementar em cada fita original. A enzima remove
seus prprios erros de polimerizao. Somente uma das fitas na forquilha de replicao replicada de modo
contnuo. A DNA ligase junta os pequenos segmentos de DNA. A sntese de DNA iniciada por uma RNA
polimerase, a primase que sintetiza os primers de RNA, os iniciadores, que sero removidos e substitudos
com o DNA. ENTO COMO OCORRE A REPLICAO A DNA polimerase leva o nucleotdeo correto e pareia,
percebendo se a distncia e o ngulo entre as bases so corretos, com a fita-molde. Antes de levar o
seguinte ela checa se o que ela colocou est certo (elimina a capacidade de crescimento da fita, se no
fizesse isso inmeros erros no DNA iam ser gerados e isto no seria compatvel para vida da clula). Se no
tiver correto ela j faz a troca do nucleotdeo para garantir a auto fidelidade requer essa correo pela
DNA polimerase e isso s pode ser feito se ele for adicionado da extremidade 3 . Em bactria a polimerase
que faz replicao a DNA polimerase III, a remoo do primer a polimerase I e quem faz o reparo a
polimerase II. Em eucarioto (delta sntese; psilon trabalha com a delta, mas no est bem definido
embora as duas sejam importantes porque se remover a ultima a primeira dar conta; reparo gama; alfa
produo de primer + primase)
2. REPARO DO DNA
A fidelidade da replicao: a exatido da replicao do DNA essencial para a reproduo celular,
sendo que estimativas para frequncias de mutaes de diferentes genes indicam que os erros durante a
replicao correspondem a somente uma nica base incorreta a cada 10 a nona ou 10 a dcima nucleotdeos
incorporados. A DNA polimerase aumenta a fidelidade de replicao e se d pela seleo da base correta
para inserir na fita sendo sintetizada. Ela no catalisa simplesmente a incorporao de qualquer nucleotdeo
que esteja pareado por pontes de hidrognio. Ao invs disto, ela evita ativamente a incorporao de uma
base malpareada pela adaptao conformao da base correta. Estudos dizem que a ligao correta de
dNTPs induz mudana conformacional na polimerase o que leva a incorporao deste nucleotdeo ao DNA.
Isto aumenta a exatido da replicao em 1000 vezes, reduzindo a frequncia de erros. Outro mecanismo
a correo de erros feita pela DNA polimerase. A exonuclease 35 atua na correo dos erros que
porventura ocorram na fita recm-sintetizada. Portanto, quando uma base incorreta incorporada ela ser
preferencialmente removida pela atividade da exonuclease 35, a qual requer um primer unido por pontes
de hidrognio fita-molde para que a sntese continue, em vez de ser usada para continuar a sntese
(aumenta a exatido da replicao em 100 a 1000 vezes). A atividade de correo de erros da DNA
polimerase combinada com a habilidade em evitar a introduo de bases incorreta suficiente para reduzir
frequncia de erros na replicao em 10 a nona. Portanto, h uma seleo dos nucleotdeos, uma reviso
se eles foram colocados errado, e, se ainda houver erro, as enzimas que atuam no mau pareamento trocam
esse que foi colocado errado por outro certo.
OBS: A importncia do mecanismo de correo de erros pode explicar o fato de que as DNAS polimerases
exigirem a presena de um primer e catalisarem somente na direo 53. Quando o DNA sintetizado na
direo 53 a energia necessria para a polimerizao deriva da hidrlise do grupo 5-trifosfato de um dNTP
livre e ele adicionado a um grupo 3 hidroxil da cadeia nascente. Se a DNA fosse sintetizado na direo 35
a energia da polimerizao deveria ser derivada da hidrlise de um grupo 5-trisfosfato do nucleotdeo
terminal j incorporado ao DNA. Com isso, ficaria eliminada a possibilidade da edio de erros, j que a
remoo do nucleotdeo erroneamente pareado tambm removeria o grupo 5 trifosfato necessrio como
fonte de energia para extenso da cadeia.
Alteraes espontneas no DNA: depurinao (perda de 5000 bases pricas por dia); desaminao
(100 bases por clula por dia); bases danificadas por metabolitos reativos ou produtos qumicos; formao
de dmeros de pirimidinas (radiao UV).
10
REAO
DE
AGENTES
ALQUILANTES/AGENTES
QUMICOS:
agentes alquilantes so reativos capazes
de transferir grupos metila ou etila para
base do DNA, modificando quimicamente
essa base. Um tipo importante a
metilao na posio O6 da guanina, uma
vez que o produto resultante, O6metilguanina, forma pareamento com a
timina em vez de citosina. Esta leso pode
ser reparada por uma enzima chamada de
O6-metilguanina metiltransferase que
transfere o grupo metil para um resduo
de cistena em seu centro ativo. Assim, a
guanina original restaurada. Essas
enzimas esto disseminadas tanto em
procariotos quanto em eucariotos,
incluindo humanos.
11
Exciso de base: reparo de DNA contendo uracil. Uma nica base lesada identificada
e removida da molcula de DNA. O uracil pode aparecer no DNA por 2 formas: pode ser
incorporado no lugar da timina durante a sntese do DNA ou pode ser formado no DNA
pela desaminao da citosina. O segundo mecanismo mais importante porque altera
o padro normal de complementaridade do pareamento de bases, representando um
evento mutagnico. A exciso do uracil feita pela enzima DNA glicosilase que cliva a
ligao entre a uracil e a desoxirribose. Esta reao produz um acar+fosfato sem a
base correspondente ligada. Essa enzima tambm removem outras bases anormais
incluindo a hipoxantina formada pela desaminao da adenima, dmeros de primidina,
purinas alquiladas e bases lesadas por oxidao ou radiaes ionizantes. Stios AP
(apurnico) so formados como resultado de perdas espontneas das bases pricas o
que ocorre com grande frequncia em clulas normais. Esses stios so reparados por
uma endonuclease que cliva regies adjacentes ao stio AP. A poro desoxirribose
restante removida (desoxirribose fosfodiesterase) e a falha de uma base preenchida
pela ao da DNA polimerase e da ligase.
Exciso de nucleotdeo: Identifica uma variedade maior de bases lesadas que
distorcem a molcula de DNA, incluindo dmeros de pirimidina induzidos por UV e
grupos volumosos adicionados s bases como resultado da reao de muitos
carcingenos com o DNA. Neste tipo de reparo as bases lesadas so removidas como
parte de um oligonucleotdeo contendo a leso. Este reparo catalisado por enzimas.
Primeiro h a identificao da leso e clivagem por uma nuclease 35 adjacentes ao
stio lesado, respectivamente, excisando um nucleotdeo que consiste em 12 ou 13
bases (excinuclease). Depois a helicase vai entrar em ao para desenrolar a fita e
posterior remoo do oligonucleotdeo contendo a leso da estrutura de fita dupla do
DNA. Por fim, a DNA polimerase preenche a falha e a selada pela ligase. Quando, em
humanos, existem defeitos nos genes que codificam essas protenas de reparo a
pessoa desenvolve a doena (xeroderma pigmentoso pessoas sensveis a luz UV e
desenvolvem cncer de pele mltiplos nas regies do corpo expostas a luz solar).
OBS: O reparo tambm pode ocorrer ao mesmo tempo em que ocorre a transcrio onde a RNA polimerase
bloqueada e assim protenas de exciso do nucleotdeo so recrutadas para reparar o dano (reparo
acoplado transcrio).
Reparo de malpareamento, de mismatch repair: identifica bases
malpareadas que so incorporadas durante a replicao do DNA.
Muitas dessas bases malpareadas so removidas pela atividade de
correo de erros da DNA polimerase. Aquelas que escapam a este
mecanismo so mais tarde corrigidas pelo sistema de reparo de
malpareamento que faz uma varredura do DNA recm-replicado.
As enzimas deste sistema so capazes de identificar e remover
especificamente a base malpareada da fita recm-sintetizada,
permitindo que o erro seja corrigido e a sequncia original,
restaurada. Em E. coli a habilidade do sistema em distinguir entre
as fitas parental e recm-sintetizada est baseada no fato que o
DNA desta bactria modificado por metilao dos resduos de
adenina presentes na sequncia GATC. Uma vez que a metilao
ocorre aps a replicao, as fitas recm-sintetizadas no esto
metiladas e podem ser identificadas pelas enzimas do sistema de
malpereamento. A protena MutS identifica o malpareamento e
forma um complexo formado por outras duas protenas (MutL e
12
13
2- Transcrio do DNA
INTRODUO:
O DNA genmico no direciona a sntese proteica diretamente, mas utiliza o RNA como uma
molcula intermediria. Quando a clula necessita de uma protena especfica, a sequncia de
nucleotdeos da regio apropriada de uma molcula de DNA em um cromossomo inicialmente
copiada na forma de RNA (transcrio). As cpias de RNA a partir do segmento de DNA so
usadas diretamente como moldes para direcionar a sntese proteica (traduo). Ou seja, DNA
RNA Protena (Dogma Central da Biologia Molecular).
A transcrio e a traduo so os
meios que as clulas leem e
expressam as instrues genticas
dos seus genes.
O QUE O RNA?
14
DNA X RNA:
Apesar da diferena qumica ser pequena, a
diferena estrutural entre o DNA e o RNA
muito grande. O DNA sempre se encontra nas
clulas sob a forma de uma hlice de fita dupla e
longa, j o RNA se apresenta como fita simples e
curta. Essa conformao do RNA lhe confere
liberdade de dobrar- se sob diversas formas. Sendo
assim, essa capacidade forma estruturas
tridimensionais
complexas
que
sero
responsveis por funes estruturais e catalticas.
TRANSCRIO:
A transcrio difere da replicao em vrios aspectos: 1) a fita de RNA no permanece
ligada por ligaes de hidrognio fita de DNA-molde; 2) imediatamente aps a regio onde os
ribonucleotdeos foram adicionados, a cadeia de RNA deslocada e a hlice de DNA se reassocia
e dessa forma, as molculas de RNA produzidas pela transcrio so liberadas do DNA-molde sob a
forma de fita simples; e 3) como esses RNAs so copiados unicamente de uma regio definida do
DNA, as molculas de RNA so muito menores que as molculas de DNA.
15
DNA X RNA-POLIMERASE:
RNA e DNA-polimerase: 1)a RNA-polimerase catalisa ligao de ribonucleotdeos;
2)diferentemente da DNA-polimerase, a RNA-polimerase pode comear a sntese de uma cadeia de
RNA sem precisar de um iniciador (primer). Essas diferenas ocorrem porque o RNA,
diferentemente do DNA, no estoca informao gentica permanentemente nas clulas e as
consequncias de um erro na transcrio do RNA so muito menos significativos do que aquelas
na replicao do DNA. OBS: Embora as RNA-polimerases no sejam to exatas quanto as DNApolimerases, elas tm um pequeno mecanismo de correo Se um ribonucleotdeo for
adicionado incorretamente, a polimerase pode retornar e o stio ativo da enzima pode realizar um
mecanismo de exciso e o ribonucleotdeo liberado.
TIPOS DE RNA:
As clulas produzem diversos tipos de RNA: 1)RNA-mensageiro (mRNA): molculas que
so copiadas a partir dos genes (DNA) e que definem a sntese de protenas; 2)RNA-nuclear
(snRNA): pequenos RNAs que direcionam o splicing (exciso de ntrons) do pr-RNA para formar
o mRNA; 3)RNA-ribossomal (rRNA): forma o cerne dos ribossomos e catalisam a sntese
proteica; 4)RNA-transportador (tRNA): formam os adaptadores que selecionam aminocidos e os
colocam no local adequado nos ribossomos para serem incorporados em protenas; 5)RNAcitoplasmatico (scRNA): participa do transporte intracelular de protenas; 6)RNA-de interferncia
(siRNA): participa na regulao da expresso gnica.
Cada segmento transcrito de DNA chamado de unidade de transcrio. Nos eucariotos,
uma unidade de transcrio carrega apenas a informao de um nico gene, portanto codifica para
uma nica molcula de RNA ou para uma nica protena. J nos procariotos, um conjunto de
genes adjacentes transcrito como uma unidade e a molcula de mRNA resultante carrega
informao para vrias protenas distintas.
Para transcrever um gene com preciso, a RNA-polimerase deve reconhecer onde ela inicia
e termina no genoma. A maneira que isso feito difere nos organismos eucariotos e procariotos.
OBS: A iniciao da transcrio extremamente importante, uma vez que regula quais as protenas
que devem ser produzidas e com que frequncia.
TRANSCRIO EM PROCARIOTOS:
16
17
TRANSCRIO EM EUCARIOTOS:
A transcrio em eucariotos mais complexa e pode ser realizada a partir de 3 enzimas
diferentes: a RNA-polimerase I, RNA-polimerase II e RNA-polimerase III. As 3 so
estruturalmente similares mas transcrevem diferentes tipos de genes. As RNA-polimerases I e III
transcrevem os genes que codificam o tRNA, rRNA e vrios pequenos RNAs. A RNA-polimerase
II transcreve a grande maioria dos genes, inclusive todos aqueles que codificam protenas. Para que
a RNA-polimerase procaritica funcione transcrevendo o DNA, ela necessita apenas do fator
sigma (protena adicional), no entanto a RNA-polimerase eucaritica requer diversas protenas
adicionais (coletivamente denominadas de fatores gerais de transcrio). Alm dessa diferena, a
iniciao da transcrio eucaritica precisa lidar com o DNA empacotado em nucleossomos e sob
outras formas de estruturao da cromatina, caractersticas ausentes dos cromossomos bacterianos.
Os fatores gerais de transcrio ajudam a posicionar a RNA-polimerase eucaritica
corretamente sobre o promotor, auxiliam na separao das duas fitas de DNA para permitir que a
transcrio se inicie e liberam a RNA-polimerase do promotor para deslizar sobre a fita de DNA.
18
19
20
REGULAO DA TRANSCRIO GNICA:
DA
TRANSCRIO
21
SPLICING DO PR-mRNA:
Os genes eucariticos so encontrados sob a forma de pequenos pedaos de sequncias
codificantes (sequncias expressas ou xons) intercaladas por sequncias muito mais longas, as
sequncias intervenientes ou ntrons. Dessa forma, a poro codificante de um gene eucaritico ,
em geral, apenas uma pequena frao de comprimento do gene. Todas as sequncias de ntrons e
xons so transcritas em RNA. As sequncias dos ntrons so removidas do RNA recentemente
sintetizado por meio de um processo denominado de splicing de RNA (splicing do precursor de
mRNA ou pr-mRNA). OBS: Somente aps o splicing e o processamento das extremidades 5 e 3
esse RNA ser denominado mRNA.
22
23
SPLICEOSSOMO:
As etapas-chave do splicing do RNA so realizadas por molculas de RNA e no por
protenas. Molculas especializadas de RNA reconhecem as sequncias nucleotdicas que
especificam onde o splicing deve ocorrer e tambm participam na qumica do splicing. Essas
molculas, conhecidas como snRNAs so relativamente pequenas e existem 5 delas: U1, U2, U4,
U5 e U6, envolvidas na principal forma de splicing do pr-mRNA. OBS: Cada molcula de snRNA
complexada com pelo menos 7 subunidades proteicas para formar uma snRNPs (pequena
ribonucleoprotena nuclear). As snRNPs formam o cerne do spliceossomo.
Mecanismo de splicing do prmRNA.
No primeiro momento a snRNP U1
se liga com a juno 5 do splicing,
posteriormente a snRNP U2 se liga
base nitrogenada adenina (regio do
ponto de forquilha) e logo aps o
complexo U4/U6 e U5 formam o
lao. O complexo U4 e U6 esto
unidos firmemente pelas interaes
de pares de bases. Aps a formao
do lao, o stio 5 clivado e,
posteriormente, o complexo U5 ligase ao stio 3 do splicing e cliva-o. O
ntron removido, restando apenas
os xons, formando o mRNA.
24
PROCESSAMENTO DO RNA:
A polimerase no somente transcreve DNA em
RNA, mas tambm transporta protenas
processadoras do pr-mRNA em sua cauda que
sero transferidas para o RNA no momento
especifico. Quando a cauda da RNA-polimerase for
fosforilada, as protenas de capeamento se ligam
molcula de RNA na extremidade 5 que est sendo
sintetizada. OBS: A cauda da RNA-polimerase
extensivamente fosforilada, fazendo com que
protenas de splicing e de processamento 3 sejam
posicionadas para agir sobre o RNA. OBS: Uma vez
que a polimerase II termina de transcrever, ela
liberada do DNA, seus fosfatos so removidos e ela
pode reiniciar a transcrio. Apenas essa forma
desfosforilada que pode iniciar a transcrio.
3-TRANSCRIO E TRADUO
DNA - DNA: Replicao
DNA - RNA: Transcrio
RNA - Protena: Traduo
Traduo: De RNA Protena Sntese protica:
Traduo o nome utilizado para designar o processo de sntese de protenas. um processo
biolgico no qual a sequncia nucleotdica de uma molcula de mRNA (RNA mensageiro)
utilizada para ordenar (servir como molde p/) a sntese de uma cadeia polipeptdica com sequncia
de aminocidos que determina uma protena. Ocorre no citoplasma. As protenas so os efetores da
maioria dos processos celulares, executando uma grande quantidade de tarefas que so dirigidas pela
informao codificada no DNA genmico. A traduo a etapa final da expresso gnica. Aps a
traduo do DNAm a cadeia polipeptdica dobra-se na conformao tridimensional e sofre varias
etapas de processamento at chegar a sua forma ativa.
Todos os RNAs mensageiros so lidos na direo de 5 para 3 e as cadeias polipeptdicas so
sintetizadas da extremidade amina para a carboxila terminal, cada aminocido especificado por 3
bases nitrogenadas que igual a um Cdon no RNAm, por exemplo as bases Uracila, citosina e
uracila unidas nessa ordem formam um cdon UCU que corresponde ao aminocido serina, a unio
de uma sequncia de aminocidos formar uma protena. A traduo realizada nos ribossomos com
os RNAs transportadores servindo como adaptadores entre o molde de RNAm e os aminocidos que
esto sendo incorporados a protena. Envolve interaes com RNAm, RNAr, RNAt e protenas
necessrias para traduo.
Obs: Existem enzimas como: Aminoacil-RNAt sintetase cujo nome real (esse um nome
genrico) vai depender do aminocido que est associado. (sintetiza) ela funciona como um
adaptador, sua funo inserir e a enzima Peptidil transferase que cliva o aminocido (RNAr)
26
O Cdigo Gentico: cada cdon lido vai determinar um aminocido, o cdon AUG sempre
codifica o aminocido metilamina e sempre vai estar presente em qualquer protena. Os cdons so
universais. O cdon de terminao no codifica nada (UAA, UAG e UGA), s sinaliza a terminao.
de extrema importncia a presena de um cdon iniciador para definir um incio e para definir
como se dar a leitura da protena para que essa no seja traduzida aleatoriamente. Obs: A direo
sempre 5- 3.
O CDIGO GENTICO
O
genoma
mitocondrial humano
CDON
CDIGO
UNIVERSAL
CDIGO
MITOCONDRIAL
HUMANO
UGA
PARADA
Try
AGA
Arg
PARADA
AGG
Arg
PARADA
AUA
Ile
Met
Incio: AUG
Alongamento
Trmino: UAA,
UAG, UGA
1. RNAs transportadores
Neste processo, molculas de RNA transportador (tRNA) operam a traduo reconhecendo as
sequncias nucleotdicas do RNAm e correlacionando-as com a sequncia que corresponde a
determinados aminocidos.
27
Alguns
RNAt
nucleotdeos
incomuns
2. O ribossomo e o RNAr
Estrutura dos ribossomos: So designados de acordo com sua taxa de sedimentao.
Procarioto- 70s e Eucarioto-80s
28
Montagem
das
Unidades
Ribossomais:
RNA
ribossmico
associando-se a
protenas
interagem
formando
o
ribossomo
propriamente
dito. As fitas de
RNAr formaro
os ribossomos,
orgnulos
responsveis pela
leitura
da
mensagem
contida no RNA
mensageiro;
29
processo
descrito
para o RNA
mensageiro.
A organizao de RNAm
A traduo no inicia na extremidade 5 do RNAm, ela comea em stios especficos de
iniciao. As pores terminal 5 de RNAm de procariontes e eucariontes so sequencias no
codificadoras (regies 5 no-traduzida). Os RNAm eucariontes eucariticos usualmente codificam
para uma nica cadeia polipeptdica, mas muitos RNAs mensageiros procariticos codificam para
mltiplos polipeptdeos que so sintetizados a partir de stios de iniciao distintos. Em ambos tipos
celulares a traduo sempre inicia a partir do aminocido metionina (AUG). Algumas bactrias usam
o GUC, que geralmente codifica valina, mas quando se encontram no comeo de uma cadeia
polipeptdica vai direcionar a incorporao de metionina. Na maioria das bactrias e mitocndrias a
sntese proteica iniciada pela metionina modificada, enquanto que nos eucariotos pela no
modificada.
RNAm monocistrnico e policistrnico
Os RNAsm que codificam
mltiplos polipeptdeos so
chamados de policistrnicos.
E os que codificam para uma
nica cadeia polipeptdica so
chamados monocistrnicos.
Sequencias que rodeiam AUG afetam a eficincia da iniciao, de modo que, quando o 1 cdon
AUG desviado a traduo inicia a partir do AUG posterior.
32
assim a cadeia polipeptdica vai crescendo. Na presena de um codo stop, o complexo dissocia-se e
a traduo termina.
A informao contida na molcula de mRNA, ou seja, a sua sequncia de bases, organizada
em codes, isto , cada codo (3 bases) especfico para um aminocido. O cdigo gentico define a
atribuio entre codes e aminocidos. O mecanismo de traduo pode ser dividido em trs passos
principais: iniciao, alongamento e terminao.
Iniciao
Primeiro passo: ligao de iniciador especifico de RNAt metionil e do RNAm subunidade
ribossomal pequena. A subunidade grande liga o complexo, formando um ribossomo funcional.
Para iniciar a traduo em bacterias,
necessria a participao de vrios factores
chamados de factores de iniciao: IF1, IF2 e IF3
que se liga a subunidade ribossomal 30S. Ento o
aminocido o RNAm e o RNAt Nformilmetionina iniciador se unem ao complexo,
com IF2 (ligado a GTP) reconhecendo
especificamente o RNAt iniciador. O IF3
liberado permite associao da subunidade
50S ao complexo hidrolise de GTP ligado ao
IF2 liberao de IF1 e IF2 ligado a GDP
formao de um complexo de iniciao 70S.
33
Alongamento
O crescimento da cadeia polipeptdica ajudado por factores proteicos de alongamento
designados por EF-Tu, EF-Ts e EF-G.
O ribossomo tem 3 stios para ligao do RNAt (P-peptidil, A-aminoacil e E-sada). O tRNA
metionil iniciador ligado ao stio P. Ligao do RNAt aminoacil ao stio A pelo pareamento do
segundo cdon do RNAm. acompanhado at o ribossomo pelo fator de alongamento (EF-tu em
procariotos r eEF-1 em eucariotos) ligado a GTP. A seleo correta do RNAt aminoacil em uma
cadeia em crescimento a etapa crtica que determina a preciso da sntese proteica. A taxa de erro
de, aproximadamente, 0,001 isso se deve tambm por um centro de decodificao (na subunidade
pequena) que identifica os pares de bases corretos no cdon-anticdon e discrimina os pareamentos
incorretos. A insero correta de um aminoacil-RNAt no sitio A desencadeia uma mudana
conformacional induz a hidrolise de GTP ligado ao EF-tu (eEF-1) e a liberao do fator de
alongamento ligado ao GDP. EF-tu (eEF-1) deixa o ribossomo ligao peptdica entreRNAt
metionil iniciador no sitio Pe o segundo RNAt aminoacil no sitio A (reao catalisada pela
subunidade grande e participao do RNAr fazendo a identificao do pareamento correto entre o
cdon-anticdon) transferncia da metionina para o RNAt aminoacil no sitio A formando um
RNAt peptidil nesta posio RNAt iniciador descarregado no sitio P.
Ocorre a translocao que necessita de outro fator de alongamento (EF-G procarioto e eEF-2
em eucarioto) acoplado a hidrlise de GTP. Durante a translocao o ribossomo move-se 3
nucleotdeos sobre o RNAm posicionando o prximo cdon em um siti A vazio translocao do
34
RNAt peptidil do stio A para o P RNAt descarregado vai do sitio P para o E. Novo RNAt
aminoacil ligado ao sitio A liberao do RNAt descarregado do sitio E Ribossomo pronto para
insero do prximo aminocido.
Converso requer outro fator de alongamento EF-Ts (eEF-1) que se une ao complexo EF-Tu
GDP troca de GDP ligado por um GTP resultado da regenerao de EF-Tu GTP (que est
pronto para acompanhar um novo RNAt aminoacil ao sitio A) comeando um novo ciclo de
alongamento.
A regulao de EF-Tu pela ligao e hidrolise de GTP ilustra um modo comum de regulao
das atividades proteicas. (no cai na prova).
O alongamento continua at que um cdon de parada seja translocado no stio A do ribossomo.
As clulas no tem RNAt com anticdons complementares a esses, ao invs disso, elas tem fatores
de liberao que reconhecem os sinais e terminam a sntese proteica.
35
Regenerao do EF-Tu/GTP:
Esse complexo acompanha o RNAt aminoacil
ao ribossomo. O GTP ligado hidrolisado
quando o RNAt correto inserido, sendo que
o EF-Tu/GTP liberado. O complexo EFTu/GDP inativado e incapaz de ligar outro
RNAt. Para que a traduo continue, o
complexo EF-Tu/GTP ativo deve ser
regenerado por outro fator, EF-Ts, que troca
GDP ligado pelo GTP livre.
Terminao
Os codes de terminao so: UAG,
UAA e UGA. Estes tripletos no so
reconhecidos por um tRNA mas sim por
factores proteicos chamados de fatores de
terminao, que abreviando, se designam
de RF-1 (UAA ou UAG) e RF-2 (UAA ou
UGA). Em eucariotas, existe um nico
fator de terminao que reconhece os trs
cdons Stop, UAG, UAA e UGA que o
eRF-1. Tem tambm os fatores de
liberao RF-3 e eRF-3 que no
reconhecem cdons de terminao, mas,
agem juntamente com o RF-1 (eRF-3) e
RF-2. Esses fatores unem-se a cdons de
terminao no sitio A e estimulam a
hidrolise da ligao entre o RNAt e a
cadeia polipeptdica no stio P liberao
do polipeptdeo completo ribossomo
dissocia-se nas subunidades 30S e 50S,
libertando o ltimo RNAt e o RNAm
molde.
Fatores de traduo
36
citoplasma.
No citoplasma, um ribossomo se liga ao RNAm na extremidade correspondente ao incio da
leitura. Dois RNAt, carregando os seus respectivos aminocidos (metionina e alanina), prendem-se
ao ribossomo. Cada RNAt liga-se ao seu trio de bases (anticdon) ao trio de bases correspondentes
ao cdon do RNAm. Uma ligao peptdica une a metionina alanina.
O ribossomo se desloca ao longo do RNAm. O RNAt que carregava a metionina se desliga
do ribossomo. O quarto RNAt, transportando o aminocido leucina, une o seu anticdon ao cdon
correspondente do RNAm. Uma ligao peptdica feita entre a leucina e a alanina.
O ribossomo novamente se desloca. O RNAt que carregava a alanina se desliga do
ribossomo. O quarto RNAt, transportando o aminocido cido glutmico encaixa-se no ribossomo.
Ocorre a unio do anticdon desse RNAt com o cdon correspondente do RNAm. Uma ligao
peptdica une o cido glutmico leucina.
Novo deslocamento do ribossomo. O quinto RNAt, carregando a aminocido glicina, se
encaixa no ribossomo. Ocorre a ligao peptdica da glicina com o cido glutmico.
Continua o deslocamento do ribossomo ao longo do RNAm. O sexto RNAt, carregando o
aminocido serina, se encaixa no ribossomo. Uma ligao peptdica une a serina glicina.
Fim do deslocamento do ribossomo. O ltimo transportador, carregando o aminocido
triptofano, encaixa-se no ribossomo. Ocorre a ligao peptdica do triptofano com a serina. O RNAt
que carrega o triptofano se separa do ribossomo. O mesmo ocorre com o transportador que portava a
serina.
37
O peptdeo contendo sete aminocidos fica livre no citoplasma. Claro que outro ribossomo
pode se ligar ao RNAm, reiniciando o processo de traduo, que resultar em um novo peptdio.
Perceba, assim, que o RNAm contendo sete cdons (21 bases nitrogenadas) conduziu a sntese de um
peptdeo formado por sete aminocidos.
Os polirribossomos e a economia celular
Em algumas clulas, certas protenas
so produzidas em grande quantidade. Por
exemplo, a observao de glndulas
secretoras de certos hormnios de natureza
proteica (que so liberados para o sangue,
indo atuar em outros rgos do mesmo
organismo) mostra, em certos locais, uma
fileira de ribossomos efetuando a leitura do
mesmo RNA mensageiro. Assim, grandes
quantidades da mesma protena so
produzidas.
Ao conjunto de ribossomos, atuando
ao longo se um RNAm, d-se o nome de
polirribossomos.
Possveis destinos das protenas
O RNAm, ao sair do nucleo pode seguir dois
destinos:
Ser traduzido nos ribossomos do retculo
endoplasmtico rugoso - e esta protena ser
exportada para fora da clula passando pelo Golgi e
saindo por exocitose em forma de vesculas,
Ou ser traduzido nos ribossomas livres no
citoplasma - esta protena ento permanecer dentro
da clula, executando alguma importante funo. Ex.
Dentro do Golgi, ou livre no citoplasma.
Antibiticos e Sntese
Protica - Mecanismo
de Ao: Inibio da
Sntese Protica, pois
precisa matar ou inibir o
crescimento da bactria
sem ser toxico para a
clula. Por isso os
antibiticos que atacam
as clulas eucariticas
no
so
uteis
clinicamente,
sendo
usados
apenas
experimentalmente no
estudo
da
sntese
protica.
38
fosforila e ativa a fosforilase quinase, que por sua vez, fosforila e ativa a glicognio fosforilase
catalisa a quebra do glicognio em glicose-1-fosfato. Vias similares (envolvem protenoquinases e
fosfatases) esto envolvidas na regulao de quase todos os aspectos do comportamento de clulas
eucariticas. Aberraes nessas vias (anormalidades proteinoquinases) so tambm responsveis por
doenas associadas com a regulao imprpria do crescimento e diferenciao celular (cncer).
Alm da fosforilao que faz modificao covalente, existem outros tipos de modificaes
proteicas como metilao, acetilao e adio de grupos NO.
40