FAINTVISA

DEPARTAMENTO DE FARMCIA
ANLISE ORGNICA
ESPECTROMETRIA DE MASSAS
Introduo
A espectrometria de massas (Mass Spectrometry) uma poderosa ferramenta que foi
usada, no princpio, na determinao de massas atmicas e, vem sendo empregada, na
atualidade, na busca de informaes sobre a estrutura de compostos orgnicos, na anlise de
misturas orgnicas complexas, na anlise elementar e na determinao da composio
isotpica dos elementos. Trata-se do mtodo mais usado para essa ltima finalidade.
Uma tcnica das mais versteis e das mais sensveis, a espectrometria de massas (MS)
atualmente uma das ferramentas analticas valiosas em diversos estudos nas reas de
Qumica, Farmcia, Biologia, Medicina e de Cincias Tecnolgicas.
O espectrmetro de massas um instrumento que separa ons, positivos ou negativos,
produzidos a partir de tomos ou molculas, quer sejam das mais simples s mais complexas,
de acordo com a razo massa/carga (m/z ou q/m).

Por MS possvel determinar a massa molecular e quantificar biomolculas, tais

como protenas, carboidratos, lipdeos e oligonucleotdeos, e tambm fragment-las de forma
a elucidar sua estrutura e confirmar sua identificao.
O potencial de aplicao da MS em estudos biolgicos tem sido bastante estendido,
em razo dos impressionantes avanos observados nos ltimos anos nas reas de genmica,
de transcriptmica, de metabolmica, de protemica, de lipidmica e de outras plataformas
omics, e do desenvolvimento extraordinrio dos equipamentos.
Histria
J. J. Thomson em 1910 foi o primeiro cientista a separar os tomos e molculas de um
gs, de acordo com suas massas, usando o hoje conhecido mtodo de Thomson para anlise
de raios positivos.
Por esse meio, J. J. Thomson foi capaz de mostrar que o elemento nenio apresentava
dois tipos de tomos, alguns com peso relativo 20 e outros com peso 22.
Em 1919, Aston aperfeioou o aparelho de Thomson e produziu um novo tipo de
aparelho de raios positivos, no qual se alcanava maior separao de ons de diferentes
massas, cada uma, correspondendo a um nmero definido de ons, com mesma razo
carga/massa, e por mostrar um espectro de linhas foi chamado de espectrgrafo de massas.
Esse aparelho destinava-se a determinaes de massas atmicas.
Na poca do desenvolvimento do espectrgrafo de massas por Aston, Dempster
construiu um instrumento, basicamente mais simples e apropriado para medidas quantitativas
de istopos, apesar de no poder ser usado para fazer medidas de massas atmicas. O aparelho
de Dempster foi chamado de espectrmetro de massas (Mass Spectrometer-MS), uma vez

que a corrente de ons era medida eletronicamente e no registrada numa chapa fotogrfica
como no de Aston.
A partir do final do primeiro quarto do sculo vinte os espectros de massas dos
elementos foram investigados em detalhes e, como consequncia, foram determinadas a
composio e as abundncias dos istopos dos elementos de ocorrncia natural.
Espectrmetro de massas
Para anlise por MS, as amostras podem ser inseridas diretamente no espectrmetro de
massas, ou o equipamento pode ser acoplado a uma tcnica de separao, como a
cromatografia gasosa (GC), a cromatrografia lquida (LC) ou a eletroforese capilar.
A possibilidade de automao aliada rapidez das anlises permite que grande nmero
de amostras seja analisado em curto perodo de tempo (segundos ou minutos para cada
amostra). Resumidamente, a anlise por MS (Figura 1) consiste na gerao de ons com base
em compostos (orgnicos ou inorgnicos) por meio de um mtodo de ionizao apropriado.

Figura 1. Diagrama de funcionamento de um espectrmetro de massas.

Simplificadamente, o espectro de massa funciona da seguinte maneira: Um feixe de
eltrons de alta energia bombardeia a amostra, em fase gasosa, e o aparelho detecta e registra
os fragmentos gerados pelo impacto dos eltrons. Da, a partir do valor da massa molecular de
cada um dos fragmentos, monta-se a molcula, como um quebra-cabea. Os fragmentos
gerados podem ser ons, radicais ou molculas neutras.
No aparelho so detectados apenas os fragmentos catinicos (ons positivos),
chamados ons moleculares, de carga unitria. Estes ons possuem alta energia e so capazes
de romper ligaes covalentes, fragmentando-se em pedaos menores. A partir de um
fragmento, portanto, podem surgir vrios outros fragmentos menores.
Os espectrmetros de massas constam de quatro partes bsicas: um sistema de
manipulao para introduzir a amostra desconhecida no equipamento; uma fonte de on, na
qual produzido um feixe de partculas proveniente da amostra; um analisador que separa
partculas de acordo com a massa; um detector, no qual os ons separados so recolhidos e
caracterizados.
O espectrmetro requer um percurso de coliso livre para os ons e, por tanto, funciona
a vcuo ou em condies quase a vcuo. O sistema de entrada da amostra est desenhado para
uma mnima perda de vcuo.
A fonte de on cria fragmentos de on gasosos da amostra. Em uma das formas de
produo de ons gasosos, a amostra volatilizada antes de ionizar os componentes gasosos.
A amostra se vaporiza fora da fonte de energia. Os exemplos deste mtodo com a ionizao
qumica, ionizao por impacto de eltrons e ionizao por campo.

Inicialmente a aplicao da MS estava restrita anlise de gases, de substncias

volteis e de substncias termicamente estveis, pois as primeiras tcnicas de ionizao
empregadas (ionizao por eltrons e ionizao qumica) so processos nos quais o analito
primeiramente vaporizado e a ionizao s ocorre quando a molcula est na fase gasosa.
Essa restrio impossibilitava a anlise de biomolculas, como protenas, carboidratos e
lipdeos, as quais no so volteis e se degradam em alta temperatura de vaporizao.
Ionizao por impacto de eltrons
O impacto eletrnico o mtodo de ionizao mais usado. Utiliza-se um feixe de
eltrons gerado pela lmpada de tungstnio ou de filamento rnio para ionizar os tomos de
fase de gs ou molculas. Formam-se ons durante a coliso do feixe com as molculas da
amostra.
M + e-
M + 2eOnde M representa a molcula do analito e M seu on molecular. Os ons positivos
so acelerados por um campo eltrico e transportados ao campo magntico. Ao mudar a
voltagem de acelerao, ou seja, a velocidade da partcula ou a fora do campo magntico, os
ons de diferentes propores massa-carga podem ser recolhidos e medidos.
Em um grfico de espectro de massas aparecem picos de intensidades variveis, cada
pico correspondendo a ons com uma razo m/z. A intensidade do pico sugere a abundncia
relativa de cada on molecular.
Frequentemente aparecem no grfico vrios picos, de intensidade muito baixa. A
grande maioria deles no deve ser considerada na anlise do espectro, pois correspondem a
fragmentos que no conseguimos identificar. S devemos considerar picos de intensidade
relativamente alta.
O pico de maior massa molecular frequentemente corresponde prpria molcula,
porm, sem um eltron, sendo chamado de pico principal. A intensidade do pico depende
da estabilidade do on molecular. So mais estveis aqueles ons que apresentarem um sistema
de ressonncia em sua estrutura.
A Figura 2 mostra o espectro de massa da benzamida registrado como um grfico da
abundncia dos ons (intensidade dos picos, na vertical) contra m\z. Para justificar os
fragmentos obtidos tem-se que propor diversas quebras na molcula, de modo que resultem
ons cuja massa corresponda queles picos.

Figura 2. Espectro de massas da Benzamida.

O
Benzamida
O

NH2
O
-

e
C7H7NO
PM = 121

-2 e-

NH2

-CO

-NH2+
m\z 105
-C6H5

m\z 77

NH2
C
m\z 44

M
m\z 121
Figura 3. Fragmentao do espectro de massas da Benzamida.

O pico do on positivo em m\z 121 corresponde molcula intacta (M) com menos um
eltron, removido pelo impacto do feixe de eltrons. Ele chamado de on molecular M +. A
decomposio do on molecular, que tem energia em excesso, leva a uma srie de fragmentos
inicos, alguns dos quais so explicados na Figura 3.
Bibliografia
- SILVESTEIN, R., BASSLER, G. C., MORRILL,T. C. Espectrometria e identificao de
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